JPH0322586B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0322586B2 JPH0322586B2 JP56001607A JP160781A JPH0322586B2 JP H0322586 B2 JPH0322586 B2 JP H0322586B2 JP 56001607 A JP56001607 A JP 56001607A JP 160781 A JP160781 A JP 160781A JP H0322586 B2 JPH0322586 B2 JP H0322586B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dye
- pigment
- sol
- hcg
- component
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 79
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 50
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 139
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 31
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 30
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 29
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 23
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 18
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 7
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 4
- 239000003999 initiator Substances 0.000 claims description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 3
- 239000012860 organic pigment Substances 0.000 claims description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 239000000446 fuel Substances 0.000 claims description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 73
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 68
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 52
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 52
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 52
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 40
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 40
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 40
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 40
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 39
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 22
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 22
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 20
- 239000000986 disperse dye Substances 0.000 description 19
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 14
- 102000004576 Placental Lactogen Human genes 0.000 description 13
- 108010003044 Placental Lactogen Proteins 0.000 description 13
- 239000000381 Placental Lactogen Substances 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 12
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 12
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 11
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 11
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 6
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000984 vat dye Substances 0.000 description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 4
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 3
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000533867 Fordia Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L persulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])OOS(=O)(=O)[O-] JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 108700003414 solulin Proteins 0.000 description 2
- 239000000992 solvent dye Substances 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000979 synthetic dye Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical group C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000073 Achillea millefolium Species 0.000 description 1
- 235000007754 Achillea millefolium Nutrition 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101000687438 Homo sapiens Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 244000147568 Laurus nobilis Species 0.000 description 1
- 235000017858 Laurus nobilis Nutrition 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 235000005212 Terminalia tomentosa Nutrition 0.000 description 1
- 244000195452 Wasabia japonica Species 0.000 description 1
- 235000000760 Wasabia japonica Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007748 combinatorial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001446 dark-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical group C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000012812 general test Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 150000005694 halopyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000434 metal complex dye Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000983 mordant dye Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000004812 organic fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 239000000985 reactive dye Substances 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- XUXNAKZDHHEHPC-UHFFFAOYSA-M sodium bromate Chemical class [Na+].[O-]Br(=O)=O XUXNAKZDHHEHPC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007785 strong electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 239000000988 sulfur dye Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003515 testosterones Chemical class 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000007651 thermal printing Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000010023 transfer printing Methods 0.000 description 1
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 238000010947 wet-dispersion method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Devices For Use In Laboratory Experiments (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は、たとえば水性試験媒体中の附着体
（ハプテン）、抗原または抗体のような免疫化学的
反応性の成分を、この種の免疫化学的反応成分間
における特異的相互作用の原理を利用しながら、
定性的かつ定量的に測定する方法に関するもので
ある。 特異的な免疫複合体の生成に基づいて物質を定
性的および／または定量的に測定しうる多くの方
法が知られている。最終的に生成された免疫複合
体を直接的または間接的に検出するには、各種の
分析技術を使用することができる。肉眼により読
み取る他、たとえば分光測定法、螢光分析法、比
濁分析法および電子−／暗視野鏡検法のような物
理的方法がしばしば広く使用される。これらの方
法は、標識（ラベルもしくはトレーサー）の使用
と組合せることができる。実際の免疫複合体の代
りに、標識を複合体の成分の一つに結合させ次い
でこれを検出することにより、著しく低い検出限
界を達成することができる。 定性的な免疫科学技術の例として、古典的な沈
降素反応（ハイデルベルガーおよびケンダール、
1930）ならびに免疫拡散（同様に免疫沈降に基づ
く、ウーチタロニー、1948）に続いて1953年にお
けるグラバーにより開発された免疫電気泳動を挙
げることができる。後者の２種の方法において
は、抗原と抗体とが寒天ゲル中の拡散を介して互
いに遭遇する。生じた沈降線は、事前に着色を施
こしたかどうかに拘らず、肉眼により感知するこ
とができる。このような簡単な方法の一つの欠点
は、拡散にかなり長時間を必要としかつ検出限界
が比較的高いことである。 免疫沈降の原理に基づく定量的測定方法は、マ
ンシニ（1965、放射方向免疫拡散）およびローレ
ル（1966、ロケツト電気泳動）により開発され
た。これら方法の欠点も同様に、かなり長い測定
時間および／または比較的高い検出限界である。 これらの非標識免疫化学技術の他、永年の間に
多くの標識化技術が開発され、それらのうち血液
凝集試験、すなわち成分の一つを赤血球の表面に
付着させる試験；免疫螢光の技術、すなわち成分
の一つを螢光性化合物（螢光団）で標識する技
術；1959年頃ヤロウおよびベルソンにより開発さ
れた放射線免疫分析、すなわち螢光団の代りに放
射性原子もしくは放射性基をトレーサーとして使
用する技術；ならびに極く最近の酸素免疫分析の
技術〔これについてはそれぞれ独立した研究した
２つのグループにより1971年に発表された最初の
文献があり、これらはスエーデン研究者エングバ
ールおよびパールマンならびにオランダ人シユー
ルスおよびバン・ウエーメンによるものである〕
を挙げることができる。原理的には、後者の分析
法は公知の放射性免疫分析と類似しているが、放
射性標識の代りに酵素を標識として使用する点に
おいて相違する。 広汎に使用される放射性免疫分析は疑いもなく
大きな価値を示すが、多くの顕著な欠点、たとえ
ば放射性物質を使用して操作するための危険要
因、試薬および装置の高価格、放射能標識された
試薬の短かい安定性ならびに資格を有する人のみ
がこの種の分析を行ないうるという要件により悩
まされる。 酵素免疫分析法はこのような欠点を持たない
が、より一層感度が大であり、より迅速に行なう
ことができ、より容易に自動化できおよび／また
は数種の免疫成分の同時測定を可能にするような
新規な分析技術を開発することが望ましい。 本発明は、免疫複合体の最終的検出に関し、免
疫化学的反応性成分を疎水性染料もしくは顔料ま
たはこの種の染料もしくは顔料で被覆された重合
体該の水性分散物の粒子に直接的または間接的に
結合させて得られる１種もしくはそれ以上の標識
された免疫化学的反応性の成分を使用し、それに
より免疫化学反応に対する所定の反応時間の際ま
たはその後に、必要に応じ遊離のおよび結合した
標識成分を分離した後、染料の性質および／また
は量を試験媒体中でまたは公知方法を用いて分離
した後に得られるフラクシヨンの一つにおいて測
定し、この測定値は測定すべき免疫化学的反応成
分の定性的もしくは定量的指示を与えることを特
徴とする免疫分析に関するものである。 本発明により開発された「分散染料免疫分析」
（DIA）は、最終検出の際肉眼による簡単な読み
および／または簡単な比色計を使用しうるので、
「放射性免疫分析」（RIA）よりも著しく簡単であ
る。「酵素免疫分析」（ETA、ELISAR、EMITR）
と比較して、酵素／基質の培養を省略しうるの
で、測定はより簡単かつより迅速である。さら
に、分光光度分析的に明瞭に識別しうるような発
色団を標識として使用することにより２種もしく
はそれ以上の成分を同時に測定することができ
る。最後に、再現自在に合成することができ、正
確に分析的／化学的方法により特性化することが
でき、かつ安定（コロイド粒子の形態において）
である標識としての染料の利点は、限られた安定
性および／または変動の多いバツチ品質を有する
放射性および酵素的標識と比較して明白であり、
それにも拘らず検出限界は少なくとも同等であ
る。分散染料のゾルは比色分析において金属ゾル
（たとえば金）よりも有利である。何故なら、染
料ゾルのモル吸光度は、金属ゾルと比較して著し
く高いからであり、たとえば金ゾル（粒子寸法
50nｍ）は3300ｍol-1・cm-1であるのに対し、
分散染料は5000〜80000ｍol-1・cm-1である
〔ケー・ベンハタラマン、「合成染料の分析化学」、
ウイリー・アンド・サンズ出版、1977参照〕。 さらに、染料標識の最終検出の際、染料ゾル粒
子を有機溶剤（たとえばエタノール、メタノー
ル、イソプロパノール）中に溶解させて、色を増
強させることができる（吸光度における増大）。
たとえば、
（ハプテン）、抗原または抗体のような免疫化学的
反応性の成分を、この種の免疫化学的反応成分間
における特異的相互作用の原理を利用しながら、
定性的かつ定量的に測定する方法に関するもので
ある。 特異的な免疫複合体の生成に基づいて物質を定
性的および／または定量的に測定しうる多くの方
法が知られている。最終的に生成された免疫複合
体を直接的または間接的に検出するには、各種の
分析技術を使用することができる。肉眼により読
み取る他、たとえば分光測定法、螢光分析法、比
濁分析法および電子−／暗視野鏡検法のような物
理的方法がしばしば広く使用される。これらの方
法は、標識（ラベルもしくはトレーサー）の使用
と組合せることができる。実際の免疫複合体の代
りに、標識を複合体の成分の一つに結合させ次い
でこれを検出することにより、著しく低い検出限
界を達成することができる。 定性的な免疫科学技術の例として、古典的な沈
降素反応（ハイデルベルガーおよびケンダール、
1930）ならびに免疫拡散（同様に免疫沈降に基づ
く、ウーチタロニー、1948）に続いて1953年にお
けるグラバーにより開発された免疫電気泳動を挙
げることができる。後者の２種の方法において
は、抗原と抗体とが寒天ゲル中の拡散を介して互
いに遭遇する。生じた沈降線は、事前に着色を施
こしたかどうかに拘らず、肉眼により感知するこ
とができる。このような簡単な方法の一つの欠点
は、拡散にかなり長時間を必要としかつ検出限界
が比較的高いことである。 免疫沈降の原理に基づく定量的測定方法は、マ
ンシニ（1965、放射方向免疫拡散）およびローレ
ル（1966、ロケツト電気泳動）により開発され
た。これら方法の欠点も同様に、かなり長い測定
時間および／または比較的高い検出限界である。 これらの非標識免疫化学技術の他、永年の間に
多くの標識化技術が開発され、それらのうち血液
凝集試験、すなわち成分の一つを赤血球の表面に
付着させる試験；免疫螢光の技術、すなわち成分
の一つを螢光性化合物（螢光団）で標識する技
術；1959年頃ヤロウおよびベルソンにより開発さ
れた放射線免疫分析、すなわち螢光団の代りに放
射性原子もしくは放射性基をトレーサーとして使
用する技術；ならびに極く最近の酸素免疫分析の
技術〔これについてはそれぞれ独立した研究した
２つのグループにより1971年に発表された最初の
文献があり、これらはスエーデン研究者エングバ
ールおよびパールマンならびにオランダ人シユー
ルスおよびバン・ウエーメンによるものである〕
を挙げることができる。原理的には、後者の分析
法は公知の放射性免疫分析と類似しているが、放
射性標識の代りに酵素を標識として使用する点に
おいて相違する。 広汎に使用される放射性免疫分析は疑いもなく
大きな価値を示すが、多くの顕著な欠点、たとえ
ば放射性物質を使用して操作するための危険要
因、試薬および装置の高価格、放射能標識された
試薬の短かい安定性ならびに資格を有する人のみ
がこの種の分析を行ないうるという要件により悩
まされる。 酵素免疫分析法はこのような欠点を持たない
が、より一層感度が大であり、より迅速に行なう
ことができ、より容易に自動化できおよび／また
は数種の免疫成分の同時測定を可能にするような
新規な分析技術を開発することが望ましい。 本発明は、免疫複合体の最終的検出に関し、免
疫化学的反応性成分を疎水性染料もしくは顔料ま
たはこの種の染料もしくは顔料で被覆された重合
体該の水性分散物の粒子に直接的または間接的に
結合させて得られる１種もしくはそれ以上の標識
された免疫化学的反応性の成分を使用し、それに
より免疫化学反応に対する所定の反応時間の際ま
たはその後に、必要に応じ遊離のおよび結合した
標識成分を分離した後、染料の性質および／また
は量を試験媒体中でまたは公知方法を用いて分離
した後に得られるフラクシヨンの一つにおいて測
定し、この測定値は測定すべき免疫化学的反応成
分の定性的もしくは定量的指示を与えることを特
徴とする免疫分析に関するものである。 本発明により開発された「分散染料免疫分析」
（DIA）は、最終検出の際肉眼による簡単な読み
および／または簡単な比色計を使用しうるので、
「放射性免疫分析」（RIA）よりも著しく簡単であ
る。「酵素免疫分析」（ETA、ELISAR、EMITR）
と比較して、酵素／基質の培養を省略しうるの
で、測定はより簡単かつより迅速である。さら
に、分光光度分析的に明瞭に識別しうるような発
色団を標識として使用することにより２種もしく
はそれ以上の成分を同時に測定することができ
る。最後に、再現自在に合成することができ、正
確に分析的／化学的方法により特性化することが
でき、かつ安定（コロイド粒子の形態において）
である標識としての染料の利点は、限られた安定
性および／または変動の多いバツチ品質を有する
放射性および酵素的標識と比較して明白であり、
それにも拘らず検出限界は少なくとも同等であ
る。分散染料のゾルは比色分析において金属ゾル
（たとえば金）よりも有利である。何故なら、染
料ゾルのモル吸光度は、金属ゾルと比較して著し
く高いからであり、たとえば金ゾル（粒子寸法
50nｍ）は3300ｍol-1・cm-1であるのに対し、
分散染料は5000〜80000ｍol-1・cm-1である
〔ケー・ベンハタラマン、「合成染料の分析化学」、
ウイリー・アンド・サンズ出版、1977参照〕。 さらに、染料標識の最終検出の際、染料ゾル粒
子を有機溶剤（たとえばエタノール、メタノー
ル、イソプロパノール）中に溶解させて、色を増
強させることができる（吸光度における増大）。
たとえば、
【表】
ここに記載する本発明において疎水性ゾルとし
て使用しうる着色有機化合物の群には、水に不溶
性または極めて限られた程度にのみ可能性である
全ての疎水性有機染料ならびに顔料が属する。 これらにはまた、事前に架橋させたかどうかに
拘らず、安定化しうる会合コロイドを適当な濃度
において形成する限り、水溶性の有機染料も包含
される。さらに、アルカリ性の水性媒体中に可溶
性でありかつ酸化により初期の着色した水不溶性
型に変化させうるロイコ建染め染料を使用するこ
ともでき、さらにこれらは硫酸半エステル型とし
て水溶性かつ安定化されるロイコ建染め染料をも
包含する。他の有用な群は、それ自体水溶性であ
つて着色されているかどうかに拘らず、たとえば
酸化またはジアゾ結合を介してその場で互いに結
合すると水不溶性染料に変化しうるような染料成
分の群である。上記した染料の例として次の群を
挙げることができ、この目的で公式のカラーイン
デツクス命名法を使用すれば：「分散染料、溶剤
染料、顔料、建染め染料、硫化染料、媒染染料、
可溶性（ロイコ）建染め染料、可溶性（ロイコ）
硫化染料、アゾイツク染料、酸化ベース、イング
レーン染料」およびまだ公式に命名されていない
「トランスフアー染料」がある。 標識として使用すべきコロイド染料粒子は、既
に公知の多くの方法により製造することができ
る：たとえばクルイト編（1952）、「コロイド・サ
イエンス」、第Ｉ巻、エルセビール、アムステル
ダム；ベンカタラマン編、「合成染料の化学」、第
Ｉ巻（1952）、第巻（1952）、第巻（1970）、
第巻（1971）、第巻（1971）、第（1972）、
第巻（1974）、第巻（1978）アカデミツクプ
レス、ニユーヨーク；ドルメツチ（1976）、「着色
の際の染料助剤により分散染料の凝集の原因に関
する研究」、フオルシユンクスベリヒト・ノイ
エ・シリエ第２号、インスチチユート・フユル・
ヘミー フアーゼルン・デル・インスチチユー
ト・フユル・テキスチルー・ウント・フアーゼル
ホルシユンク、ストツトガルト；ロイベ（1978）、
テキスチル・プラクシス・インターナシヨナル、
第６号、第733〜737頁、同第７号、第823〜831頁
参照。 本発明による方法は、水性試験媒体中に存在す
る附着体、抗原または抗体のような免疫化学的反
応性成分の定性的および／または定量的測定に特
に適しているが、これら成分の組織学的または細
胞学的測定にも使用することができる。 この理由で、本発明は同様に、通常有機の性質
の疎水性染料もしくは顔料の粒子またはこの種の
染料もしくは顔料で被覆した高分子核の水性分散
物からなり、これに直接的もしくは間接的に免疫
化学的反応性成分を付着させた新規な免疫化学的
試薬にも関するものである。 さらに本発明は、この種の免疫化学的試薬を含
有する新規な試験キツトにも関するものである。 免疫化学的反応成分を粒子に直接的もしくは間
接的に結合されるとは、たとえば水素橋、極性吸
引または生物特異的吸着を含む吸着を介する化学
的共有結合のような全ての化学的、物理的または
物理−化学的結合を意味する。 疎水性染料もしくは顔料のまたはこの種の染料
もしくは顔料で被覆された高分子核の水性分散物
の粒子は、少なくとも5nｍ、好ましくは10〜
500nｍの粒子寸法を有する。これらの分散物は
通常ゾルであるが、他の型の分散物も生ぜしめる
ことができる。 染料ゾル粒子は電荷を有して、相互排析により
安定化作用を与える。主として強力な電解質を加
えることにより、凝結および凝集が生ずるよう電
荷パターンが変化される。これは、たとえば蛋白
質、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリビニ
ルアルコールなどのような極性基を有する巨大分
子で粒子を被覆することにより防止することがで
きる。 保護蛋白質としては抗原、抗体またはまだ免疫
化学的に活性であるそのポリペプチド断片を使用
することができる。さらに、適切な免疫分析の際
他の成分に対し何らの阻害反応をも生じないよう
な巨大分子（たとえば蛋白質、多糖類）に付着し
た附着体をも使用することもできる。この際、染
料ゾル標識された免疫化学的に活性に成分が同時
に得られる。 染料ゾルを安定化させるには、この不動化蛋白
質の有効免疫化学的活性がたとえば立体障害によ
り影響を受けるような高濃度の、たとえば抗体を
コロイド粒子の表面上に必要とすることがある。
このような場合、被覆を次のような２段階で行な
うことができる： (1) たとえば抗体の、測定すべき最適量で被覆
し、次いで (2) 適切な免疫分析の際他の成分に体し阻害反応
を起こさない巨大分子化合物（たとえば蛋白
質、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリビ
ニルアルコール）で被覆する。この、たとえば
牛血清アルブミンによる「後の被覆」は、起こ
りうる非特異的吸着作用を低下させるにも同時
に役立つ。 保護蛋白質の他の可能性は蛋白質Ａすなわちレ
クチンの群（たとえばコンＡ）とすることができ
る。これら蛋白質によりゾル粒子を最初に被覆し
た後、この蛋白質の特異的親和性に基づき、免疫
グロブリン（Fc部分を介し）および存在する糖
残基を介するグリコ蛋白質（免疫グロブリンも含
む）の吸着により第二の層を選択的に施こすこと
ができる。 他の可能性は染料ゾル粒子を最終免疫分析に対
し不活性な重合体または共重合体によつて先ず最
初に被覆し、その後続いて吸着および／または共
有結合により免疫化学的活性成分を被覆物質の層
に付着させることができる。不活性重合体もしく
は共重合体によるゾル粒子の被覆の際、各粒子を
別々に包封することもできるが、数個のコロイド
粒子を一種類の同一重合体層の内部に包入させる
こともできる。 不活性重合体による染料ゾル粒子の被覆は２つ
の方法で行なうことができる。すなわち、染料ゾ
ルを重合体と接触させ、次いでゾル粒子に吸着お
よび／または供有結合させるか、或いはゾルを一
種の単量体または異なる複数単量体の環境中に入
れてこれをその場で重合もしくは共重合させる。
重合は、たとえば放射線によりまたは過硫酸塩の
ような適当な開始剤の添加により行なうことがで
きる。たとえば過硫酸塩のような無機開始剤の作
用下に、粒子が存在する単量体溶液をその場で重
合させて染料ゾル粒子を包封することは、このよ
うな開始剤を添加するとゾルが凝集してしまうた
め、実際上の困難性を伴なう。しかしながら、こ
のような被覆は、先ず最初にゾル粒子を保護し、
次いで保護粒子を単量体溶液中に入れ、その後に
のみ重合を開始させても行ないうることが確認さ
れた。上記した化合物は、この目的に対する保護
剤として使用することができる。 次の目的：ゾルの安定化、免疫化学的反応性成
分の使用、非特異的吸着作用の除去、および／ま
たはそれぞれ中間的重合体もしくは共重合体層の
使用という目的を有するコロイド染料粒子の被覆
は、コロイド染料粒子における直接的／間接的吸
着を介して行なうことができるが、共有化学結合
によつても行なうことができる。後者は、被覆物
質中および染料中における適当な官能基の存在に
より支配される。たとえば、芳香族アミノ基のジ
アゾ化に次いで活性化芳香族環系に対するジアゾ
結合を実現化することができ、カルボキシル基を
カルボジイミドにより活性化させ、次いで活性エ
ステルを介して第一級アミノ成分に接合させるこ
とができる。脂肪族第一級アミノ基およびヒドロ
キシル基を、たとえば臭化シアンまたはハロゲン
置換ジーもしくはトリーアジンにより活性化さ
せ、その後第一級アミノ成分との、または−SH、
−OHもしくはイミダゾリル基を含有する成分と
の結合を行なうことができる。二官能性反応化合
物を使用することもできる。たとえば、第一級ア
ミノ成分の相互結合に対しグルタルアルデヒドを
使用することができる一方、チオール基を含有す
る成分に対して第一級アミノ成分を結合させるに
はたとえばＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリ
ジルジチオ）プロピオネートを使用することがで
きる。 本明細書においては、さらに反応性かつ分散性
の染料ならびに水に可溶でないその他の反応性染
料を挙げることもでき、ここで染料はそれ自体す
でに反応性でだる基、たとえばハロゲン置換ジー
およびトリーアジン、エポキシ基、ビニルスルホ
ン基およびジハロキノキサリン、に対し共有結合
した発色団からなつている〔シーゲル（1972）：
ベンカタラマン編、「合成染料の化学」、第巻、
アカデミツクプレス、ニユーヨーク；ハルムス
（1979）：バンクス編、「有機弗素薬品およびその
工業的使用」、第188〜204頁、エリス・ホルウツ
ド社、チチエスター参照〕。 通常、たとえば附着体（ハプテン）、抗原およ
び抗体を検出および／または定量測定するには、
コロイド染料粒子で標識された免疫化学的反応成
分が他の試薬と組合せた試薬として使用され、こ
のためたとえばRIAおよびEIAについて使用され
るようなあらゆる種類の免疫化学的技術を考慮す
ることができる。 したがつて、さらに本発明はこの種の免疫化学
的技術に使用するための「試験用キツト」にも関
するものであり、これはその最も重要な成分とし
て染料ゾルで標識した免疫化学的反応成分を含有
し、これは染料ゾルからなりその粒子は直接にま
たは間接的に免疫化学的反応成分により吸着的に
および／または共有結合的に被覆されている。 通常の免疫化学的技術の一つは競合的免疫分析
であり、これは任意の免疫化学的反応成分の証明
および／または測定に使用することができる。た
とえば或る種の抗原の証明には、この方法は未知
量の抗原を含有する試験試料を、染料ゾルで標識
された対応抗原の所定量およびこの抗原に向けら
れた不溶性担体に付着された抗体と、或いは不溶
性担体に付着された抗原の所定量およびこの抗原
に向けられた燃料ゾル標識した抗体と接触させる
ことからなつている。 反応が終了した後、染料の性質および／または
量を結合および／または遊離フラクシヨンにおい
て測定し、これは測定すべき抗原に体する定性的
および／または定量的な指示を与える。必要に応
じた変更を加えて、同様な手順を他の免疫化学的
反応成分にも適用することができる。 コロイド染料粒子で標識した免疫化学的反応成
分と共に使用するのに適した「サンドイツチ技
術」も広汎に使用される。この技術を用いて、た
とえば抗原を測定すべき場合における抗体のよう
なこの種の成分を不溶性担体物質上で不動化させ
る。この担体物質は、たとえば免疫化学反応が行
なわれる反応容器の内表面とすることができ、ま
たビーズもしくは小棒の形態の担体物質を使用す
ることもできる。抗原を含有する試料と共に先ず
培養し、次いで必要に応じ洗浄工程を行なつた
後、染料ゾルで標識した抗体と共に第二の培養を
行ない、その後に染料を結合および／または遊離
相において測定する。 この目的で上記した技術の他、多くの他の免疫
化学的技術も存在し、染料ゾルで標識された免疫
化学的反応成分を試薬として使用することができ
る。ここで、特に凝集原理に基づく免疫化学的試
験が考えられる。ここでは、たとえば染料ゾルで
標識された抗体を、測定すべき抗原を含有する液
体の試料に加える。標識成分の結合および遊離フ
ラクシヨンの分離は省略することができる。何故
なら、検出は染料ゾルの肉眼評価または分光光
度／比色測定に基づくからである。 さらに本発明は、試験試料中におけるたとえば
附着体、抗原および抗体またはその組合せのよう
な異なる免疫化学的反応成分の存在を証明するこ
とも可能にし、これには証明すべき成分の各々に
対しその成分に特性的なコロイド染料粒子で標識
された対応する免疫化学的反応成分を同時に使用
する。 試験の最終における染料の性質および／または
濃度の測定は、種々の公知技術を用いて行なうこ
とができる。これらの例として肉眼評価を挙げる
ことができ、これは染料を用いる場合定性的測定
を正確に行なうのに極めて適している。定量測定
にはたとえば比色分析／分光分析を使用すること
ができる。これらの方法は凝集試験における最終
的検出にも適しており、ここでは染料の濃度は大
して重要でなく、寧ろ染料ゾルの外観が重要であ
る（これにより多かれ少なかれ或る程度の凝結、
恐らく凝集、スペクトル変化がひき起こされる）。
さらに染料（または同時測定の際の複合染料）の
定量測定には、螢光分析を行なうこともでき、ま
た金属錯体染料および／または顔料の場合には
「標準的」および／または無炎原子吸収分光分析
も使用できる。以下、本発明を下記の実施例によ
り一層詳細に説明する。 実施例 １ DIA原理によるひと絨毛膜ゴナドトロピン
（HCG）の比色および／または肉眼測定につき説
明する（「サンドイツチ試験」）。 1.1 染料ゾルの調整 パラニルRレツドBF（バスフ社、７ｇ）を蒸
留水（140ml）中に分散させた。この分散物を
温室で45分間撹拌し、次いで遠心分離した（30
分間、125ｇ＝1225N／Kg）。上澄液を他の遠況
管に移して遠心分離した（30分間、7500ｇ＝
73500N／Kg）。上澄液を除去し、ペレツトを蒸
留水で３回洗浄した（３×140ml、遠心分離：
30分間、7500ｇ＝73500N／Kg）。ペレツトを蒸
留水（70ml）中に再懸濁させ、次いで液体レベ
ルがビーズのレベルと同じになるように多数の
ガラスビーズ（直径３mmおよび直径４mm、１：
２混合物）を加えた。次いで、ローラ台上にて
室温で５日間転動を行なつた。液体をデカント
しそして遠心分離した（30分間、300ｇ＝
2940N／Kg）。次いで上澄液を他の遠沈管に移
し、再び遠心分離した（30分間、1000ｇ＝
9800N／Kg）。これから最後の上澄液の3/4
（52.5ml）を注意して吸引し、この濃厚染料ゾ
ルを室温で貯蔵した。このゾルの20倍希釈試料
の533（＝λ最大）ｎｍにおける吸光度は1.57で
あつた。 1.2 兎抗−HCG免疫グロブリン／染料ゾル複合
体の調製 上記1.1項に記載した染料ゾルの試料（0.8
ml）を蒸留水（4.2ml）で希釈し、0.1モル／
のNaOHもしくはHClを用いてPHを7.0に調整
した。このゾルの吸光度は533nｍ（＝λ最大）
において5.0であつた。次いで、兎抗−HCG免
疫グロブリン溶液（0.1ml）を加えた。〔兎抗−
HCG免疫グロブリンは次のようにして調製し
た：兎抗−HCG血清の免疫グロブリン部分を
公知のNa2SO4沈殿法により単離した。沈殿を
溶解させ、固体Na2CO3にてPHが7.0に調整され
た５ミリモル／NaClの水溶液に対し透析し
た。この透析溶液を最後に蛋白質濃度１mg／ml
（ワールブルグ−カルカー式によれば、蛋白質
濃度（mg／ml）＝1.45×Ａ1cm 280−0.75×Ａ1cm 260で
ある）または0.65mg／ml（IgGに対し Ａ1cm，１％ 280＝14.5による）に希釈した〕。こ
の反応混合物を室温にて１時間にわたり15分毎
に振とうさせ、その後牛血清アルブミン
（BSA）を加えた（１ml、307.2ｇBSA＋0.1ｇ
ナトリウムマーシオレート＋５ミリモル
NaCl／、PH7.0）。分散物を室温にて１時間
にわたり15分毎に振とうし、次いで遠心分離し
た（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。上澄液を
除去し、ペレツトを次の組成の溶液中に５mlの
容量まで再懸濁させた：51.2ｇBSA＋0.1ｇナ
トリウムマーシオレート＋５ミリモルNaCl／
（PHを0.1モル／NaOHにて7.0に調整）。 1.3 兎抗−HCG免疫グロブリンによるミクロエ
リサR板「被覆」 燐酸塩緩衝液： 0.04モル／のNa2HPO4と0.04モル／の
NaH2PO4とを混合してPH7.4の溶液を得、次い
でNaClを0.15モル／の濃度まで加えた。 溶液Ａ： 兎抗−HCG免疫グロブリン（1.2.項参照）を
FFB中に30mg／の濃度まで溶解させた。 溶液Ｂ： 20ｇBSA＋0.1ｇナトリウムマーシオレー
ト／FFB。 溶液Ａ（0.11ml）をミクロエリサR板の穴にピ
ペツトで入れ、その後これらの板を０〜４℃に
て16時間培養した。吸引の後、溶液Ｂ（0.11ml）
を全ての穴に加え、その後これらの板を室温に
て30分間培養した。最後に、これらの穴を吸引
して蒸留水により３回洗浄し、その後板を乾燥
させ（予備乾燥シリカゲル上にて室温で16時
間）、アルミニウムラミネート袋中に包装し
（シリカゲル小袋と共に）、４℃で貯蔵した。 1.4 燐酸塩緩衝液および盲険尿におけるHCGに
対する標準曲線の決定 燐酸塩緩衝液（FFB）： 1.3項に記載した通りであるが、１ｇの
BSA／と１ｇのナトリウムマーシオレート
とを用いた。 洗浄用緩衝液Ｉ： 燐酸塩緩衝液。 洗浄用緩衝液： 0.1モルとトリス〔（HOCH2）3CNH2〕＋0.1モ
ルNaCl＋0.5ｇトウイーンR−20＋0.1ｇナトリ
ウムマーシオレート／、４モル／のHClに
てPH7.4に調整。 エタノール： P.A.、96％（Ｖ／Ｖ）。 HCG： 1000IU（免疫分析）／mlFFBの含量のひと絨
毛膜ゴナドトロピンの溶液。 盲検尿： ハイフロRにて過し、次いで凍結させた非
妊娠婦人の尿；使用前に折つた紙で過し
た。 複合体（Conjugate） 1.2項に記載したように調製した染料ゾル／
抗−HCG複合体（９ml）を濃厚燐酸塩緩衝液
（１ml、10倍濃縮FFB）と混合した。 手順： １ 次の希釈系列のHCG溶液をそれぞれFFB
と尿とにおいて作成した：4000、1000、250、
62.5、15.6、3.9ｍIU（免疫分析）／ml。 ２ これらの溶液ならびに盲検FFBおよび尿
の0.1mlを、予め1.3項に記載したように兎抗
−HCG免疫グロブリン（1.3項参照）にて
「被覆」したミクロエリサR板の穴にピペツト
で入れた。この全てを重複して行なつた。 ３ 適当な蓋で板を閉鎖し、水蒸気で飽和させ
た雰囲気中37℃にて3.5時間培養した。 ４ 穴を吸引し、各穴に洗浄緩衝液Ｉ（0.3ml）
をピペツトで入れ、再び吸引した。 ５ 各穴に複合体（0.1ml）をピペツトで入れ
た。 ６ 上記３項に記載したように培養したが、今
回は18時間行なつた。 ７ 穴を吸引し、穴中の色を肉眼的に評価しお
よび／または各穴に洗浄緩衝液（0.3ml）
をピペツトで入れた。吸引を行ないかつこの
手順をさらに２回繰返した。 ８ 全ての乾燥した穴にエタノール（0.12ml）
を加え、静かに振とうさせそして色を肉眼で
評価しかつ／または516nｍ（＝λ最大）に
て吸光度を測定した。 上記の手順を用いて、未知HCG含量を有す
る試料をも包含させれば、HCG濃度を肉眼に
より容易に推定することができ；必要に応じよ
り正確な測定を吸光度測定および標準曲線との
比較によつて行なうことができる。このように
して測定した尿およびFFBにおけるHCGの標
準曲線を第１図に示す。 （盲険＋２×標準偏差）として定義される検
出限界は、FFBについては3.9ｍIU（免疫分
析）／mlであり、尿については15.6IU（免疫分
析）／mlである。 1.5 妊娠を検知するための婦人の尿における
HCGの測定 試薬：1.4項参照。 手順： 1.4項に記載した通りであるが、今回は対応
する尿試料を包含させ、これは希釈しても、し
なくてもよい。結果を次表に示す。
て使用しうる着色有機化合物の群には、水に不溶
性または極めて限られた程度にのみ可能性である
全ての疎水性有機染料ならびに顔料が属する。 これらにはまた、事前に架橋させたかどうかに
拘らず、安定化しうる会合コロイドを適当な濃度
において形成する限り、水溶性の有機染料も包含
される。さらに、アルカリ性の水性媒体中に可溶
性でありかつ酸化により初期の着色した水不溶性
型に変化させうるロイコ建染め染料を使用するこ
ともでき、さらにこれらは硫酸半エステル型とし
て水溶性かつ安定化されるロイコ建染め染料をも
包含する。他の有用な群は、それ自体水溶性であ
つて着色されているかどうかに拘らず、たとえば
酸化またはジアゾ結合を介してその場で互いに結
合すると水不溶性染料に変化しうるような染料成
分の群である。上記した染料の例として次の群を
挙げることができ、この目的で公式のカラーイン
デツクス命名法を使用すれば：「分散染料、溶剤
染料、顔料、建染め染料、硫化染料、媒染染料、
可溶性（ロイコ）建染め染料、可溶性（ロイコ）
硫化染料、アゾイツク染料、酸化ベース、イング
レーン染料」およびまだ公式に命名されていない
「トランスフアー染料」がある。 標識として使用すべきコロイド染料粒子は、既
に公知の多くの方法により製造することができ
る：たとえばクルイト編（1952）、「コロイド・サ
イエンス」、第Ｉ巻、エルセビール、アムステル
ダム；ベンカタラマン編、「合成染料の化学」、第
Ｉ巻（1952）、第巻（1952）、第巻（1970）、
第巻（1971）、第巻（1971）、第（1972）、
第巻（1974）、第巻（1978）アカデミツクプ
レス、ニユーヨーク；ドルメツチ（1976）、「着色
の際の染料助剤により分散染料の凝集の原因に関
する研究」、フオルシユンクスベリヒト・ノイ
エ・シリエ第２号、インスチチユート・フユル・
ヘミー フアーゼルン・デル・インスチチユー
ト・フユル・テキスチルー・ウント・フアーゼル
ホルシユンク、ストツトガルト；ロイベ（1978）、
テキスチル・プラクシス・インターナシヨナル、
第６号、第733〜737頁、同第７号、第823〜831頁
参照。 本発明による方法は、水性試験媒体中に存在す
る附着体、抗原または抗体のような免疫化学的反
応性成分の定性的および／または定量的測定に特
に適しているが、これら成分の組織学的または細
胞学的測定にも使用することができる。 この理由で、本発明は同様に、通常有機の性質
の疎水性染料もしくは顔料の粒子またはこの種の
染料もしくは顔料で被覆した高分子核の水性分散
物からなり、これに直接的もしくは間接的に免疫
化学的反応性成分を付着させた新規な免疫化学的
試薬にも関するものである。 さらに本発明は、この種の免疫化学的試薬を含
有する新規な試験キツトにも関するものである。 免疫化学的反応成分を粒子に直接的もしくは間
接的に結合されるとは、たとえば水素橋、極性吸
引または生物特異的吸着を含む吸着を介する化学
的共有結合のような全ての化学的、物理的または
物理−化学的結合を意味する。 疎水性染料もしくは顔料のまたはこの種の染料
もしくは顔料で被覆された高分子核の水性分散物
の粒子は、少なくとも5nｍ、好ましくは10〜
500nｍの粒子寸法を有する。これらの分散物は
通常ゾルであるが、他の型の分散物も生ぜしめる
ことができる。 染料ゾル粒子は電荷を有して、相互排析により
安定化作用を与える。主として強力な電解質を加
えることにより、凝結および凝集が生ずるよう電
荷パターンが変化される。これは、たとえば蛋白
質、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリビニ
ルアルコールなどのような極性基を有する巨大分
子で粒子を被覆することにより防止することがで
きる。 保護蛋白質としては抗原、抗体またはまだ免疫
化学的に活性であるそのポリペプチド断片を使用
することができる。さらに、適切な免疫分析の際
他の成分に対し何らの阻害反応をも生じないよう
な巨大分子（たとえば蛋白質、多糖類）に付着し
た附着体をも使用することもできる。この際、染
料ゾル標識された免疫化学的に活性に成分が同時
に得られる。 染料ゾルを安定化させるには、この不動化蛋白
質の有効免疫化学的活性がたとえば立体障害によ
り影響を受けるような高濃度の、たとえば抗体を
コロイド粒子の表面上に必要とすることがある。
このような場合、被覆を次のような２段階で行な
うことができる： (1) たとえば抗体の、測定すべき最適量で被覆
し、次いで (2) 適切な免疫分析の際他の成分に体し阻害反応
を起こさない巨大分子化合物（たとえば蛋白
質、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリビ
ニルアルコール）で被覆する。この、たとえば
牛血清アルブミンによる「後の被覆」は、起こ
りうる非特異的吸着作用を低下させるにも同時
に役立つ。 保護蛋白質の他の可能性は蛋白質Ａすなわちレ
クチンの群（たとえばコンＡ）とすることができ
る。これら蛋白質によりゾル粒子を最初に被覆し
た後、この蛋白質の特異的親和性に基づき、免疫
グロブリン（Fc部分を介し）および存在する糖
残基を介するグリコ蛋白質（免疫グロブリンも含
む）の吸着により第二の層を選択的に施こすこと
ができる。 他の可能性は染料ゾル粒子を最終免疫分析に対
し不活性な重合体または共重合体によつて先ず最
初に被覆し、その後続いて吸着および／または共
有結合により免疫化学的活性成分を被覆物質の層
に付着させることができる。不活性重合体もしく
は共重合体によるゾル粒子の被覆の際、各粒子を
別々に包封することもできるが、数個のコロイド
粒子を一種類の同一重合体層の内部に包入させる
こともできる。 不活性重合体による染料ゾル粒子の被覆は２つ
の方法で行なうことができる。すなわち、染料ゾ
ルを重合体と接触させ、次いでゾル粒子に吸着お
よび／または供有結合させるか、或いはゾルを一
種の単量体または異なる複数単量体の環境中に入
れてこれをその場で重合もしくは共重合させる。
重合は、たとえば放射線によりまたは過硫酸塩の
ような適当な開始剤の添加により行なうことがで
きる。たとえば過硫酸塩のような無機開始剤の作
用下に、粒子が存在する単量体溶液をその場で重
合させて染料ゾル粒子を包封することは、このよ
うな開始剤を添加するとゾルが凝集してしまうた
め、実際上の困難性を伴なう。しかしながら、こ
のような被覆は、先ず最初にゾル粒子を保護し、
次いで保護粒子を単量体溶液中に入れ、その後に
のみ重合を開始させても行ないうることが確認さ
れた。上記した化合物は、この目的に対する保護
剤として使用することができる。 次の目的：ゾルの安定化、免疫化学的反応性成
分の使用、非特異的吸着作用の除去、および／ま
たはそれぞれ中間的重合体もしくは共重合体層の
使用という目的を有するコロイド染料粒子の被覆
は、コロイド染料粒子における直接的／間接的吸
着を介して行なうことができるが、共有化学結合
によつても行なうことができる。後者は、被覆物
質中および染料中における適当な官能基の存在に
より支配される。たとえば、芳香族アミノ基のジ
アゾ化に次いで活性化芳香族環系に対するジアゾ
結合を実現化することができ、カルボキシル基を
カルボジイミドにより活性化させ、次いで活性エ
ステルを介して第一級アミノ成分に接合させるこ
とができる。脂肪族第一級アミノ基およびヒドロ
キシル基を、たとえば臭化シアンまたはハロゲン
置換ジーもしくはトリーアジンにより活性化さ
せ、その後第一級アミノ成分との、または−SH、
−OHもしくはイミダゾリル基を含有する成分と
の結合を行なうことができる。二官能性反応化合
物を使用することもできる。たとえば、第一級ア
ミノ成分の相互結合に対しグルタルアルデヒドを
使用することができる一方、チオール基を含有す
る成分に対して第一級アミノ成分を結合させるに
はたとえばＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリ
ジルジチオ）プロピオネートを使用することがで
きる。 本明細書においては、さらに反応性かつ分散性
の染料ならびに水に可溶でないその他の反応性染
料を挙げることもでき、ここで染料はそれ自体す
でに反応性でだる基、たとえばハロゲン置換ジー
およびトリーアジン、エポキシ基、ビニルスルホ
ン基およびジハロキノキサリン、に対し共有結合
した発色団からなつている〔シーゲル（1972）：
ベンカタラマン編、「合成染料の化学」、第巻、
アカデミツクプレス、ニユーヨーク；ハルムス
（1979）：バンクス編、「有機弗素薬品およびその
工業的使用」、第188〜204頁、エリス・ホルウツ
ド社、チチエスター参照〕。 通常、たとえば附着体（ハプテン）、抗原およ
び抗体を検出および／または定量測定するには、
コロイド染料粒子で標識された免疫化学的反応成
分が他の試薬と組合せた試薬として使用され、こ
のためたとえばRIAおよびEIAについて使用され
るようなあらゆる種類の免疫化学的技術を考慮す
ることができる。 したがつて、さらに本発明はこの種の免疫化学
的技術に使用するための「試験用キツト」にも関
するものであり、これはその最も重要な成分とし
て染料ゾルで標識した免疫化学的反応成分を含有
し、これは染料ゾルからなりその粒子は直接にま
たは間接的に免疫化学的反応成分により吸着的に
および／または共有結合的に被覆されている。 通常の免疫化学的技術の一つは競合的免疫分析
であり、これは任意の免疫化学的反応成分の証明
および／または測定に使用することができる。た
とえば或る種の抗原の証明には、この方法は未知
量の抗原を含有する試験試料を、染料ゾルで標識
された対応抗原の所定量およびこの抗原に向けら
れた不溶性担体に付着された抗体と、或いは不溶
性担体に付着された抗原の所定量およびこの抗原
に向けられた燃料ゾル標識した抗体と接触させる
ことからなつている。 反応が終了した後、染料の性質および／または
量を結合および／または遊離フラクシヨンにおい
て測定し、これは測定すべき抗原に体する定性的
および／または定量的な指示を与える。必要に応
じた変更を加えて、同様な手順を他の免疫化学的
反応成分にも適用することができる。 コロイド染料粒子で標識した免疫化学的反応成
分と共に使用するのに適した「サンドイツチ技
術」も広汎に使用される。この技術を用いて、た
とえば抗原を測定すべき場合における抗体のよう
なこの種の成分を不溶性担体物質上で不動化させ
る。この担体物質は、たとえば免疫化学反応が行
なわれる反応容器の内表面とすることができ、ま
たビーズもしくは小棒の形態の担体物質を使用す
ることもできる。抗原を含有する試料と共に先ず
培養し、次いで必要に応じ洗浄工程を行なつた
後、染料ゾルで標識した抗体と共に第二の培養を
行ない、その後に染料を結合および／または遊離
相において測定する。 この目的で上記した技術の他、多くの他の免疫
化学的技術も存在し、染料ゾルで標識された免疫
化学的反応成分を試薬として使用することができ
る。ここで、特に凝集原理に基づく免疫化学的試
験が考えられる。ここでは、たとえば染料ゾルで
標識された抗体を、測定すべき抗原を含有する液
体の試料に加える。標識成分の結合および遊離フ
ラクシヨンの分離は省略することができる。何故
なら、検出は染料ゾルの肉眼評価または分光光
度／比色測定に基づくからである。 さらに本発明は、試験試料中におけるたとえば
附着体、抗原および抗体またはその組合せのよう
な異なる免疫化学的反応成分の存在を証明するこ
とも可能にし、これには証明すべき成分の各々に
対しその成分に特性的なコロイド染料粒子で標識
された対応する免疫化学的反応成分を同時に使用
する。 試験の最終における染料の性質および／または
濃度の測定は、種々の公知技術を用いて行なうこ
とができる。これらの例として肉眼評価を挙げる
ことができ、これは染料を用いる場合定性的測定
を正確に行なうのに極めて適している。定量測定
にはたとえば比色分析／分光分析を使用すること
ができる。これらの方法は凝集試験における最終
的検出にも適しており、ここでは染料の濃度は大
して重要でなく、寧ろ染料ゾルの外観が重要であ
る（これにより多かれ少なかれ或る程度の凝結、
恐らく凝集、スペクトル変化がひき起こされる）。
さらに染料（または同時測定の際の複合染料）の
定量測定には、螢光分析を行なうこともでき、ま
た金属錯体染料および／または顔料の場合には
「標準的」および／または無炎原子吸収分光分析
も使用できる。以下、本発明を下記の実施例によ
り一層詳細に説明する。 実施例 １ DIA原理によるひと絨毛膜ゴナドトロピン
（HCG）の比色および／または肉眼測定につき説
明する（「サンドイツチ試験」）。 1.1 染料ゾルの調整 パラニルRレツドBF（バスフ社、７ｇ）を蒸
留水（140ml）中に分散させた。この分散物を
温室で45分間撹拌し、次いで遠心分離した（30
分間、125ｇ＝1225N／Kg）。上澄液を他の遠況
管に移して遠心分離した（30分間、7500ｇ＝
73500N／Kg）。上澄液を除去し、ペレツトを蒸
留水で３回洗浄した（３×140ml、遠心分離：
30分間、7500ｇ＝73500N／Kg）。ペレツトを蒸
留水（70ml）中に再懸濁させ、次いで液体レベ
ルがビーズのレベルと同じになるように多数の
ガラスビーズ（直径３mmおよび直径４mm、１：
２混合物）を加えた。次いで、ローラ台上にて
室温で５日間転動を行なつた。液体をデカント
しそして遠心分離した（30分間、300ｇ＝
2940N／Kg）。次いで上澄液を他の遠沈管に移
し、再び遠心分離した（30分間、1000ｇ＝
9800N／Kg）。これから最後の上澄液の3/4
（52.5ml）を注意して吸引し、この濃厚染料ゾ
ルを室温で貯蔵した。このゾルの20倍希釈試料
の533（＝λ最大）ｎｍにおける吸光度は1.57で
あつた。 1.2 兎抗−HCG免疫グロブリン／染料ゾル複合
体の調製 上記1.1項に記載した染料ゾルの試料（0.8
ml）を蒸留水（4.2ml）で希釈し、0.1モル／
のNaOHもしくはHClを用いてPHを7.0に調整
した。このゾルの吸光度は533nｍ（＝λ最大）
において5.0であつた。次いで、兎抗−HCG免
疫グロブリン溶液（0.1ml）を加えた。〔兎抗−
HCG免疫グロブリンは次のようにして調製し
た：兎抗−HCG血清の免疫グロブリン部分を
公知のNa2SO4沈殿法により単離した。沈殿を
溶解させ、固体Na2CO3にてPHが7.0に調整され
た５ミリモル／NaClの水溶液に対し透析し
た。この透析溶液を最後に蛋白質濃度１mg／ml
（ワールブルグ−カルカー式によれば、蛋白質
濃度（mg／ml）＝1.45×Ａ1cm 280−0.75×Ａ1cm 260で
ある）または0.65mg／ml（IgGに対し Ａ1cm，１％ 280＝14.5による）に希釈した〕。こ
の反応混合物を室温にて１時間にわたり15分毎
に振とうさせ、その後牛血清アルブミン
（BSA）を加えた（１ml、307.2ｇBSA＋0.1ｇ
ナトリウムマーシオレート＋５ミリモル
NaCl／、PH7.0）。分散物を室温にて１時間
にわたり15分毎に振とうし、次いで遠心分離し
た（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。上澄液を
除去し、ペレツトを次の組成の溶液中に５mlの
容量まで再懸濁させた：51.2ｇBSA＋0.1ｇナ
トリウムマーシオレート＋５ミリモルNaCl／
（PHを0.1モル／NaOHにて7.0に調整）。 1.3 兎抗−HCG免疫グロブリンによるミクロエ
リサR板「被覆」 燐酸塩緩衝液： 0.04モル／のNa2HPO4と0.04モル／の
NaH2PO4とを混合してPH7.4の溶液を得、次い
でNaClを0.15モル／の濃度まで加えた。 溶液Ａ： 兎抗−HCG免疫グロブリン（1.2.項参照）を
FFB中に30mg／の濃度まで溶解させた。 溶液Ｂ： 20ｇBSA＋0.1ｇナトリウムマーシオレー
ト／FFB。 溶液Ａ（0.11ml）をミクロエリサR板の穴にピ
ペツトで入れ、その後これらの板を０〜４℃に
て16時間培養した。吸引の後、溶液Ｂ（0.11ml）
を全ての穴に加え、その後これらの板を室温に
て30分間培養した。最後に、これらの穴を吸引
して蒸留水により３回洗浄し、その後板を乾燥
させ（予備乾燥シリカゲル上にて室温で16時
間）、アルミニウムラミネート袋中に包装し
（シリカゲル小袋と共に）、４℃で貯蔵した。 1.4 燐酸塩緩衝液および盲険尿におけるHCGに
対する標準曲線の決定 燐酸塩緩衝液（FFB）： 1.3項に記載した通りであるが、１ｇの
BSA／と１ｇのナトリウムマーシオレート
とを用いた。 洗浄用緩衝液Ｉ： 燐酸塩緩衝液。 洗浄用緩衝液： 0.1モルとトリス〔（HOCH2）3CNH2〕＋0.1モ
ルNaCl＋0.5ｇトウイーンR−20＋0.1ｇナトリ
ウムマーシオレート／、４モル／のHClに
てPH7.4に調整。 エタノール： P.A.、96％（Ｖ／Ｖ）。 HCG： 1000IU（免疫分析）／mlFFBの含量のひと絨
毛膜ゴナドトロピンの溶液。 盲検尿： ハイフロRにて過し、次いで凍結させた非
妊娠婦人の尿；使用前に折つた紙で過し
た。 複合体（Conjugate） 1.2項に記載したように調製した染料ゾル／
抗−HCG複合体（９ml）を濃厚燐酸塩緩衝液
（１ml、10倍濃縮FFB）と混合した。 手順： １ 次の希釈系列のHCG溶液をそれぞれFFB
と尿とにおいて作成した：4000、1000、250、
62.5、15.6、3.9ｍIU（免疫分析）／ml。 ２ これらの溶液ならびに盲検FFBおよび尿
の0.1mlを、予め1.3項に記載したように兎抗
−HCG免疫グロブリン（1.3項参照）にて
「被覆」したミクロエリサR板の穴にピペツト
で入れた。この全てを重複して行なつた。 ３ 適当な蓋で板を閉鎖し、水蒸気で飽和させ
た雰囲気中37℃にて3.5時間培養した。 ４ 穴を吸引し、各穴に洗浄緩衝液Ｉ（0.3ml）
をピペツトで入れ、再び吸引した。 ５ 各穴に複合体（0.1ml）をピペツトで入れ
た。 ６ 上記３項に記載したように培養したが、今
回は18時間行なつた。 ７ 穴を吸引し、穴中の色を肉眼的に評価しお
よび／または各穴に洗浄緩衝液（0.3ml）
をピペツトで入れた。吸引を行ないかつこの
手順をさらに２回繰返した。 ８ 全ての乾燥した穴にエタノール（0.12ml）
を加え、静かに振とうさせそして色を肉眼で
評価しかつ／または516nｍ（＝λ最大）に
て吸光度を測定した。 上記の手順を用いて、未知HCG含量を有す
る試料をも包含させれば、HCG濃度を肉眼に
より容易に推定することができ；必要に応じよ
り正確な測定を吸光度測定および標準曲線との
比較によつて行なうことができる。このように
して測定した尿およびFFBにおけるHCGの標
準曲線を第１図に示す。 （盲険＋２×標準偏差）として定義される検
出限界は、FFBについては3.9ｍIU（免疫分
析）／mlであり、尿については15.6IU（免疫分
析）／mlである。 1.5 妊娠を検知するための婦人の尿における
HCGの測定 試薬：1.4項参照。 手順： 1.4項に記載した通りであるが、今回は対応
する尿試料を包含させ、これは希釈しても、し
なくてもよい。結果を次表に示す。
【表】
＊ 未希釈試料において
妊娠しているかどうかに関する結論は、プレ
グノスチコンR「オール・イン」の妊娠試験の
結果と一致する。この試験において、「＋」＝
1000IU／mlであり、「−」＝500IU／であ
る。 実施例 ２ 実施例１の通りであるが、ただし分散染料／抗
−HCG複合体は、レソリンRブリリアント・ブル
−RRLおよび螢光分散染料サマロンRブリリアン
ト・レツドH6GF、サマロンRブリリアント・イ
エローH10GF、パラニルRルミナス・レツドＧお
よびパラニルRルミナス・イエローＧをコロイド
標識として使用して調製した。（対応するλ最大
値については実施例９を参照）。 HCGの希釈系列を緩衝液で作成した。標準法
と比較した培養時間の短縮を検討した。HCG培
養2.5時間および複合体培養2.5時間をそれぞれ6.5
時間および18時間の代りに用いた。0.02〜0.25ｍ
IU HCG／mlの検出限界が得られた。これは、
他の試験系に極めてよく匹敵した。 −RIA：２ｍIU HCG／ml〔（90％結合＋２×
SD）におけるDL：HCG濃度〕 −EIA：20ｍIU HCG／ml（DL：RIAについて
と同様） −SPIA：0.25〜１ｍIU／ml（DL：盲検＋２×
SD）（比色検出） −rev−HAI：10〜20ｍIU HCG／ml（DL：パ
ターンにおいて顕著な変化を示すHCG濃度）。 さらに、全試験時間を24.5時間から５時間まで
短縮したが、検出限界に対し僅かの制限効果した
与えなかつた（サマロン・ブリリアント・レツド
H6GFの場合）。 吸光度の代りに螢光度を測定することにより検
出限界を改善するため、螢光分散染料を検討し
た。サマロンRブリリアント・イエローH10GFお
よびパラニルRルミナス・イエローＧの場合に顕
著な改善が得られ、これに対しサマロンRブリリ
アント・レツドH6GFおよびパラニルRルミナ
ス・レツドＧの場合は何らの効果も見られなかつ
た。 実施例 ３ Ｂ型肝炎表面抗原（HBsAg）：サンドイツチ系 3.1 染料ゾルの調製 1.1項参照：分散染料パラニルR・レツドBF
およびサマロンRブリリアント・レツドH6GF
をコロイド標識として使用した（対応するλ最
大値については、実施例９を参照）。 3.2 羊−（抗−HBsAg）IgG／染料複合体の調
製。 1.2項参照；ただし兎抗−HCG IgGの代りに
羊−（抗−HBsAg）免疫グロブリンを使用し
た。 3.3 羊−（抗−HBsAg）IgGによるミクロエリサ
Ｒ板の被覆。 1.3項参照；兎免疫グロブリンの代りに羊を
使用した。 3.4 HBsAg（亜型adおよびay）に対する標準曲
線の決定。 HBsAg（adおよびay）の希釈系列を、ひと
陰性比較血清を希釈剤として４〜1000nｇ／ml
の範囲で使用して作成した。これら希釈液およ
び陰性比較血清の試料（0.1ml）を、1.4項（工
程３〜８）に記載した手順により分析した：λ
最大（エタノール）については実施例９を参
照。 サマロンR染料／複合体については、16〜23n
ｇ／ml（ad）および24〜38nｇ／ml（ay）の検
出限界が得られた。比較のため： −EIA（ヘパノスチカR）：3nｇ／ml −EIA（ヘパノスチカ−TR）：0.7nｇ／ml
（DL：平均陰性値＋５×SD） −SPIA：20〜40nｇ／ml（DL：盲検＋２×
SD）（比色検出）。 単一種（monoclonal）抗体の数種の試料を
異質の羊抗−HBsAgIgGの標準調製物と比較
するため、DIA／サンドイツチ系をも使用し
た。３種の試料は標準と同様な投与応答曲線を
示したのに対し、他の調製物は明らかにより貧
弱な品質であつた。 実施例 ４ ひと胎盤ラクトゲン（HPL）に対するDIA；
サンドイツチ系。 4.1 染料ゾルの調製。 1.1項参照；分散染料パラニルRレツド・BF
とパラニルRイエロー3Gとをコロイド標識とし
て使用した（対応するλ最大値については実施
例９を参照）。 4.2 兎（抗−HPL）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；ただし抗−HCGの代りに抗−
HPLを使用した。 4.3 兎抗−HPL IgGによるミクロエリサR板の
被覆。 1.3項参照；ただし抗−HCGの代りに抗−
HPLを使用した。 4.4 HPLに対する標準曲線の決定。 HPLの希釈系列をFFB（1.4項参照）におい
て0.4〜100nｇ／mlの範囲で作成した。これら
希釈液およびFFBの試料（0.1ml）を1.4.項（工
程３〜８）に記載した手順によつて分析した；
λ最大（エタノール）については実施例９を参
照。 1.2〜1.7nｇHPL／mlの検出限界が得られた。 比較のため： −RIA：0.03〜0.14nｇ／ml −EIA：2nｇ／ml −SPIA：0.12nｇ／ml（比色分析）。 実施例 ５ 抗−風疹に対するDIA、サンドイツチ系。 5.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料パラニルRレツドBFお
よびレソリンRブリリアント・ブルーRRLをコ
ロイド標識として使用した（対応するλ最大値
については実施例９を参照）。 5.2 羊抗−（ひとIgG）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；ただし兎材料の代りに羊免疫グ
ロブリンを使用した。 5.3 失活風疹ビールス抗原（組織培養から得た
もの）によるミクロエリサR板の被覆。 1.3項参照；ただし免疫グロブリンの代りに
風疹抗原を使用した。 5.4 ひと抗−風疹に対する標準曲線の決定。 ひと抗−風疹の希釈系列を、羊陰性比較血清
を希釈剤として使用して0.4〜320IU／mlの範囲
で作成した。これら希釈液および陰性比較血清
の試料（0.1ml）を1.4項（工程３〜８）に記載
した手順により分析した；λ最大（エタノー
ル）については実施例９を参照。 （BL＋２×SD）として定義される検出限界
は2.5IU／mlであり、これは〜10IU／mlのルベ
ノスチカの検出限界の推定値に比べて優るとも
劣らない。 実施例 ６ ひとプロラクチン（PRL）に対するDIA、サ
ンドイツチ系。 6.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料パラニルRルミナル・レ
ツドＧおよびパラニルRルミナス・イエローＧ
をコロイド標識として使用した（対応するλ最
大値については実施例９を参照）。 6.2 単一種（抗−PRL）IgG／染料複合体の製。 1.2項参照；ただし兎材料の代りに単一種IgG
を使用した。 6.3 単一種（抗−PRL）IgGによるミクロエリ
サR板／ストリツプの被覆。 1.3項参照；ただし兎材料の代りに単一種IgG
を使用した。 註：複合体の調製（6.2）および板／ストリツ
プの被覆のため、異なるクローンからの免疫
グロブリンを使用した。 6.4 PRL用の標準曲線の決定。 PRLの希釈系列をFFB（1.4項参照）中におい
て0.4〜100nｇ／mlの範囲で作成した。これら
希釈液およびFFBの試料（0.2ml）を、次の変
更を伴なう1.4項（工程３〜８）に記載した手
順により分析した。 −抗原（PRL）の培養：20時間、室温 −複合体の培養：20時間、室温。 λ最大（エタノール）については実施例９を
参照。 １〜4nｇ／mlの検出限界が得られた。比較
のため： −EIA：１〜4nｇ／ml −SPIA：６〜10nｇ／ml。 実施例 ７ DIA原理によるHCGおよびHPLの同時測定：
サンドイツチ系。 7.1 染料ゾルの調製。 1.1項参照；分散染料レソリンRブリリアン
ト・ブルーRRLおよびパラニルRイエロー3Gを
コロイド標識として使用した（対応するλ最大
値については実施例９を参照）。 7.2 兎（抗−HCG）IgG／染料および兎（抗−
HPL）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；次の組合せを調製した： −レソリンRブリリアント・ブルーRRL／抗
−HCG、 −パラニルRイエロー3G／抗−HPL。 組合せ複合体は、等容量の２種の複合体を混
合して調製し、各染料複合体に対し最終吸光度
５（λ最大にて）を与えた。 7.3 兎抗−HCG、兎抗−HPLおよび両者の混合
物によるミクロエリサR板の被覆。 1.3項参照；次の被覆混合物を用いて、同時
分析用の板を調製した： 兎抗−HCG 15nｇ／、 兎抗−HPL 15nｇ／。 7.4 HCGとHPLとの同時測定。 通常、1.4項に記載された分析手順を使用し
た（エタノールにおけるλ最大値については実
施例９を参照）。 (a) 単一および組合せ複合体を、兎抗−HCG
もしくは抗−HPLのみで被覆されたミクロ
測定板において試験した。組合せ複合体およ
び抗−HCG複合体はFFB（1.4項参照）にお
けるHCGの希釈系列にて等しい応答を示し、
これに対し抗−HPL複合体は反応しなかつ
た。抗−HPL複合体はFFBにおけるHPLの
希釈系列にて組合せ複合体よりも高い応答を
示したのに対し、抗−HCG複合体は反応し
なかつた。 (b) 最後に、FFBにおけるHCG、HPLおよび
（HCG＋HPL）の試料を、兎抗−HCGおよ
び抗−HPLで同時に被覆したミクロ測定板
の穴において培養した。組合せ複合体を用い
て第二の培養を行なつた。結果を第２図に示
し、この図は同時DIA／サンドイツチの可能
性を示している。 実施例 ８ テストステロンに対するDIA。 8.1 方法１ この方法は、テストステロン含有試料と共に
培養した後、固体相上の遊離した抗−テストス
テロンの検出に基づくものである。 8.1.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 8.1.2 テストステロン−11α−ヘミスクシニル
BSA／染料ゾル複合体の調製 テストステロン−11α−ヘミスクシネート
を２mlのジメチルホルムアミド（DMF）中
に溶解させ、次いで溶液を−15℃に冷却し
た。 牛血清アルブミン（BSA、140mg）を蒸留
水（３ml）中に溶解させ、その後40μの４
モル／のNaOHと２mlのDMFとを加え
た。次いで、溶液を−15℃に冷却した。 次いで、12.5μのＮ−メチルモルホリン
と12.5μのイソブチルクロルホルミエート
とをテストステロン誘導体の溶液に加えた。
３分間後、この反応混合物をBSA溶液に加
えた。反応混合物を撹拌しながら−15℃に１
時間保ち、次いで０℃にて３時間保つた。次
いで反応混合物を蒸留水に対し４℃にて16時
間透析し、蒸留水を定期的に更新した。透析
溶液を次いで遠心分離しそして透明上澄液を
凍結乾燥させた。 テストステロン−11α−ヘミスクシニル−
BSA／染料ゾル複合体は、パラニルRレツド
BFゾル上への兎抗−HCG免疫グロブリンの
不動化について記載した方法を使用すると共
に、兎抗−HCG免疫グロブリンについて同
じ濃度をテストステロン−BSA誘導体につ
き使用して調製した。 8.1.3 兎抗−テストステロン免疫グロブリンに
よるミクロエリサRの「被覆」。 テストステロン−11α−ヘミスクシニル−
BSAでの免疫化により得られた兎抗血清か
ら単離された免疫グロブリンフラクシヨンを
使用し、被覆を1.3項に記載されているよう
に行なつた。 8.1.4 テストステロンの測定 1.4項においてHCGにつき記載したような
試薬と試験手順とを使用して、テストステロ
ンに対する標準曲線を決定し、次いでそれに
より未知試料のテストステロン濃度を、上記
試験手順により得られた試料のA516を介して
算出した。この測定の検出限界は1nｇ／ml
であつた。肉眼での読み（反応を停止させた
後、標準と未知試料との色強度の比較）によ
りテストステロン含量を推定することは容易
である。 8.2 方法２。 この方法は、固相（たとえばポリスチレン管
またはミクロ測定板）上に不動化させた抗−
（T11−BSA）に対するテストステロン(T)とT3
−BSAとの競合的結合に基づいている。検出
に次いで抗−（T11−BSA）／染料複合体との
第二の培養を行なう。 註： T3−BSA：BSAのNH2−機能に共有結
合（アミド結合）されたテストステロン−３
−０−カルポキシメチルオキシム、−T11−
BSA：BSAのNH2−機能に共有結合（アミ
ド結合）されたテストステロン−11−ヘミス
クシネート。 8.2.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料サマロンRブリリアン
ト・レツドH6GFおよびサマロンRブリリア
ント・イエローH10GFをコロイド標識とし
て使用した（対応するλ最大値については実
施例９を参照）。 8.2.2 兎（抗−T11−BSA）IgG／染料複合体の
調製。 1.2項参照：ただし抗−HCGの代りに兎抗
−T11−BSAを使用した。 8.2.3 兎（抗−T11−BSA）IgGによるミクロエ
リサR板およびポリスチレン管の被覆。 1.3項参照；ただし抗−HCGの代りに兎
（抗−T11−BSA）を使用した。 註：管を被覆する場合は、溶液ＡおよびＢの
１mlを使用した。 8.2.4 テストステロンに対する標準曲線の決定。
ＴおよびT3−BSAの溶液をFFBにおいて作
成した（1.4項参照）。 (a) 競合分析に使用すべぎT3−BSAの濃度
をT3−BSAを希釈系列の培養により検討
し、次いで複合体について検討した：管１
本当り１ml容量またはミクロ測定板の穴１
個当り0.1ml容量。手順は1.4項（工程３〜
８）に記載されている通り；λ最大（エタ
ノール）については実施例９を参照。全て
の競合分析については、全試験容量１ml当
り２および16PモルＴに対応するT3−
BSAの濃度を選択した。 (b) 競合分析は、全試験容量／ml当り２およ
び16PモルＴに相当するT3−BSAの一定
濃度ならびに０〜64PモルＴ／ml試料の希
釈系列を使用して行ない；管については、
0.9mlのテストステロン含有試料と0.1mlの
T3−BSA溶液（それぞれ20および160Pモ
ルＴ／mlに対応する）とを使用し、ミクロ
測定板については各容量を0.09および0.01
mlに変化させた。さらに、手順は1.4項
（工程３〜８）に記載された通りであり、
λ最大（エタノール）については実施例９
を参照。 （BL−２×SD）と定義される検出限界
は、 全試験容量１ml当り2PモルＴに相当す
るT3−BSA濃度を使用して、0.2〜0.4Pモ
ルＴ／ml試料であつた。全検出範囲は約０
〜8PモルＴ／ml試料であつた。RIAおよ
びEIAの場合、それぞれ1PモルＴ／mlお
よび0.7Pモル／mlにおいて50％結合に到達
した。 実施例 ９ 染料ゾルの調製に対する代替方法。 9.1 分散染料 1.1項に記載したパラニルRレツドBF（バスフ
社）の代りに、たとえば次表に示すような他の
分散染料をも使用して、染料ゾルを調製した。
妊娠しているかどうかに関する結論は、プレ
グノスチコンR「オール・イン」の妊娠試験の
結果と一致する。この試験において、「＋」＝
1000IU／mlであり、「−」＝500IU／であ
る。 実施例 ２ 実施例１の通りであるが、ただし分散染料／抗
−HCG複合体は、レソリンRブリリアント・ブル
−RRLおよび螢光分散染料サマロンRブリリアン
ト・レツドH6GF、サマロンRブリリアント・イ
エローH10GF、パラニルRルミナス・レツドＧお
よびパラニルRルミナス・イエローＧをコロイド
標識として使用して調製した。（対応するλ最大
値については実施例９を参照）。 HCGの希釈系列を緩衝液で作成した。標準法
と比較した培養時間の短縮を検討した。HCG培
養2.5時間および複合体培養2.5時間をそれぞれ6.5
時間および18時間の代りに用いた。0.02〜0.25ｍ
IU HCG／mlの検出限界が得られた。これは、
他の試験系に極めてよく匹敵した。 −RIA：２ｍIU HCG／ml〔（90％結合＋２×
SD）におけるDL：HCG濃度〕 −EIA：20ｍIU HCG／ml（DL：RIAについて
と同様） −SPIA：0.25〜１ｍIU／ml（DL：盲検＋２×
SD）（比色検出） −rev−HAI：10〜20ｍIU HCG／ml（DL：パ
ターンにおいて顕著な変化を示すHCG濃度）。 さらに、全試験時間を24.5時間から５時間まで
短縮したが、検出限界に対し僅かの制限効果した
与えなかつた（サマロン・ブリリアント・レツド
H6GFの場合）。 吸光度の代りに螢光度を測定することにより検
出限界を改善するため、螢光分散染料を検討し
た。サマロンRブリリアント・イエローH10GFお
よびパラニルRルミナス・イエローＧの場合に顕
著な改善が得られ、これに対しサマロンRブリリ
アント・レツドH6GFおよびパラニルRルミナ
ス・レツドＧの場合は何らの効果も見られなかつ
た。 実施例 ３ Ｂ型肝炎表面抗原（HBsAg）：サンドイツチ系 3.1 染料ゾルの調製 1.1項参照：分散染料パラニルR・レツドBF
およびサマロンRブリリアント・レツドH6GF
をコロイド標識として使用した（対応するλ最
大値については、実施例９を参照）。 3.2 羊−（抗−HBsAg）IgG／染料複合体の調
製。 1.2項参照；ただし兎抗−HCG IgGの代りに
羊−（抗−HBsAg）免疫グロブリンを使用し
た。 3.3 羊−（抗−HBsAg）IgGによるミクロエリサ
Ｒ板の被覆。 1.3項参照；兎免疫グロブリンの代りに羊を
使用した。 3.4 HBsAg（亜型adおよびay）に対する標準曲
線の決定。 HBsAg（adおよびay）の希釈系列を、ひと
陰性比較血清を希釈剤として４〜1000nｇ／ml
の範囲で使用して作成した。これら希釈液およ
び陰性比較血清の試料（0.1ml）を、1.4項（工
程３〜８）に記載した手順により分析した：λ
最大（エタノール）については実施例９を参
照。 サマロンR染料／複合体については、16〜23n
ｇ／ml（ad）および24〜38nｇ／ml（ay）の検
出限界が得られた。比較のため： −EIA（ヘパノスチカR）：3nｇ／ml −EIA（ヘパノスチカ−TR）：0.7nｇ／ml
（DL：平均陰性値＋５×SD） −SPIA：20〜40nｇ／ml（DL：盲検＋２×
SD）（比色検出）。 単一種（monoclonal）抗体の数種の試料を
異質の羊抗−HBsAgIgGの標準調製物と比較
するため、DIA／サンドイツチ系をも使用し
た。３種の試料は標準と同様な投与応答曲線を
示したのに対し、他の調製物は明らかにより貧
弱な品質であつた。 実施例 ４ ひと胎盤ラクトゲン（HPL）に対するDIA；
サンドイツチ系。 4.1 染料ゾルの調製。 1.1項参照；分散染料パラニルRレツド・BF
とパラニルRイエロー3Gとをコロイド標識とし
て使用した（対応するλ最大値については実施
例９を参照）。 4.2 兎（抗−HPL）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；ただし抗−HCGの代りに抗−
HPLを使用した。 4.3 兎抗−HPL IgGによるミクロエリサR板の
被覆。 1.3項参照；ただし抗−HCGの代りに抗−
HPLを使用した。 4.4 HPLに対する標準曲線の決定。 HPLの希釈系列をFFB（1.4項参照）におい
て0.4〜100nｇ／mlの範囲で作成した。これら
希釈液およびFFBの試料（0.1ml）を1.4.項（工
程３〜８）に記載した手順によつて分析した；
λ最大（エタノール）については実施例９を参
照。 1.2〜1.7nｇHPL／mlの検出限界が得られた。 比較のため： −RIA：0.03〜0.14nｇ／ml −EIA：2nｇ／ml −SPIA：0.12nｇ／ml（比色分析）。 実施例 ５ 抗−風疹に対するDIA、サンドイツチ系。 5.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料パラニルRレツドBFお
よびレソリンRブリリアント・ブルーRRLをコ
ロイド標識として使用した（対応するλ最大値
については実施例９を参照）。 5.2 羊抗−（ひとIgG）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；ただし兎材料の代りに羊免疫グ
ロブリンを使用した。 5.3 失活風疹ビールス抗原（組織培養から得た
もの）によるミクロエリサR板の被覆。 1.3項参照；ただし免疫グロブリンの代りに
風疹抗原を使用した。 5.4 ひと抗−風疹に対する標準曲線の決定。 ひと抗−風疹の希釈系列を、羊陰性比較血清
を希釈剤として使用して0.4〜320IU／mlの範囲
で作成した。これら希釈液および陰性比較血清
の試料（0.1ml）を1.4項（工程３〜８）に記載
した手順により分析した；λ最大（エタノー
ル）については実施例９を参照。 （BL＋２×SD）として定義される検出限界
は2.5IU／mlであり、これは〜10IU／mlのルベ
ノスチカの検出限界の推定値に比べて優るとも
劣らない。 実施例 ６ ひとプロラクチン（PRL）に対するDIA、サ
ンドイツチ系。 6.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料パラニルRルミナル・レ
ツドＧおよびパラニルRルミナス・イエローＧ
をコロイド標識として使用した（対応するλ最
大値については実施例９を参照）。 6.2 単一種（抗−PRL）IgG／染料複合体の製。 1.2項参照；ただし兎材料の代りに単一種IgG
を使用した。 6.3 単一種（抗−PRL）IgGによるミクロエリ
サR板／ストリツプの被覆。 1.3項参照；ただし兎材料の代りに単一種IgG
を使用した。 註：複合体の調製（6.2）および板／ストリツ
プの被覆のため、異なるクローンからの免疫
グロブリンを使用した。 6.4 PRL用の標準曲線の決定。 PRLの希釈系列をFFB（1.4項参照）中におい
て0.4〜100nｇ／mlの範囲で作成した。これら
希釈液およびFFBの試料（0.2ml）を、次の変
更を伴なう1.4項（工程３〜８）に記載した手
順により分析した。 −抗原（PRL）の培養：20時間、室温 −複合体の培養：20時間、室温。 λ最大（エタノール）については実施例９を
参照。 １〜4nｇ／mlの検出限界が得られた。比較
のため： −EIA：１〜4nｇ／ml −SPIA：６〜10nｇ／ml。 実施例 ７ DIA原理によるHCGおよびHPLの同時測定：
サンドイツチ系。 7.1 染料ゾルの調製。 1.1項参照；分散染料レソリンRブリリアン
ト・ブルーRRLおよびパラニルRイエロー3Gを
コロイド標識として使用した（対応するλ最大
値については実施例９を参照）。 7.2 兎（抗−HCG）IgG／染料および兎（抗−
HPL）IgG／染料複合体の調製。 1.2項参照；次の組合せを調製した： −レソリンRブリリアント・ブルーRRL／抗
−HCG、 −パラニルRイエロー3G／抗−HPL。 組合せ複合体は、等容量の２種の複合体を混
合して調製し、各染料複合体に対し最終吸光度
５（λ最大にて）を与えた。 7.3 兎抗−HCG、兎抗−HPLおよび両者の混合
物によるミクロエリサR板の被覆。 1.3項参照；次の被覆混合物を用いて、同時
分析用の板を調製した： 兎抗−HCG 15nｇ／、 兎抗−HPL 15nｇ／。 7.4 HCGとHPLとの同時測定。 通常、1.4項に記載された分析手順を使用し
た（エタノールにおけるλ最大値については実
施例９を参照）。 (a) 単一および組合せ複合体を、兎抗−HCG
もしくは抗−HPLのみで被覆されたミクロ
測定板において試験した。組合せ複合体およ
び抗−HCG複合体はFFB（1.4項参照）にお
けるHCGの希釈系列にて等しい応答を示し、
これに対し抗−HPL複合体は反応しなかつ
た。抗−HPL複合体はFFBにおけるHPLの
希釈系列にて組合せ複合体よりも高い応答を
示したのに対し、抗−HCG複合体は反応し
なかつた。 (b) 最後に、FFBにおけるHCG、HPLおよび
（HCG＋HPL）の試料を、兎抗−HCGおよ
び抗−HPLで同時に被覆したミクロ測定板
の穴において培養した。組合せ複合体を用い
て第二の培養を行なつた。結果を第２図に示
し、この図は同時DIA／サンドイツチの可能
性を示している。 実施例 ８ テストステロンに対するDIA。 8.1 方法１ この方法は、テストステロン含有試料と共に
培養した後、固体相上の遊離した抗−テストス
テロンの検出に基づくものである。 8.1.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 8.1.2 テストステロン−11α−ヘミスクシニル
BSA／染料ゾル複合体の調製 テストステロン−11α−ヘミスクシネート
を２mlのジメチルホルムアミド（DMF）中
に溶解させ、次いで溶液を−15℃に冷却し
た。 牛血清アルブミン（BSA、140mg）を蒸留
水（３ml）中に溶解させ、その後40μの４
モル／のNaOHと２mlのDMFとを加え
た。次いで、溶液を−15℃に冷却した。 次いで、12.5μのＮ−メチルモルホリン
と12.5μのイソブチルクロルホルミエート
とをテストステロン誘導体の溶液に加えた。
３分間後、この反応混合物をBSA溶液に加
えた。反応混合物を撹拌しながら−15℃に１
時間保ち、次いで０℃にて３時間保つた。次
いで反応混合物を蒸留水に対し４℃にて16時
間透析し、蒸留水を定期的に更新した。透析
溶液を次いで遠心分離しそして透明上澄液を
凍結乾燥させた。 テストステロン−11α−ヘミスクシニル−
BSA／染料ゾル複合体は、パラニルRレツド
BFゾル上への兎抗−HCG免疫グロブリンの
不動化について記載した方法を使用すると共
に、兎抗−HCG免疫グロブリンについて同
じ濃度をテストステロン−BSA誘導体につ
き使用して調製した。 8.1.3 兎抗−テストステロン免疫グロブリンに
よるミクロエリサRの「被覆」。 テストステロン−11α−ヘミスクシニル−
BSAでの免疫化により得られた兎抗血清か
ら単離された免疫グロブリンフラクシヨンを
使用し、被覆を1.3項に記載されているよう
に行なつた。 8.1.4 テストステロンの測定 1.4項においてHCGにつき記載したような
試薬と試験手順とを使用して、テストステロ
ンに対する標準曲線を決定し、次いでそれに
より未知試料のテストステロン濃度を、上記
試験手順により得られた試料のA516を介して
算出した。この測定の検出限界は1nｇ／ml
であつた。肉眼での読み（反応を停止させた
後、標準と未知試料との色強度の比較）によ
りテストステロン含量を推定することは容易
である。 8.2 方法２。 この方法は、固相（たとえばポリスチレン管
またはミクロ測定板）上に不動化させた抗−
（T11−BSA）に対するテストステロン(T)とT3
−BSAとの競合的結合に基づいている。検出
に次いで抗−（T11−BSA）／染料複合体との
第二の培養を行なう。 註： T3−BSA：BSAのNH2−機能に共有結
合（アミド結合）されたテストステロン−３
−０−カルポキシメチルオキシム、−T11−
BSA：BSAのNH2−機能に共有結合（アミ
ド結合）されたテストステロン−11−ヘミス
クシネート。 8.2.1 染料ゾルの調製 1.1項参照；分散染料サマロンRブリリアン
ト・レツドH6GFおよびサマロンRブリリア
ント・イエローH10GFをコロイド標識とし
て使用した（対応するλ最大値については実
施例９を参照）。 8.2.2 兎（抗−T11−BSA）IgG／染料複合体の
調製。 1.2項参照：ただし抗−HCGの代りに兎抗
−T11−BSAを使用した。 8.2.3 兎（抗−T11−BSA）IgGによるミクロエ
リサR板およびポリスチレン管の被覆。 1.3項参照；ただし抗−HCGの代りに兎
（抗−T11−BSA）を使用した。 註：管を被覆する場合は、溶液ＡおよびＢの
１mlを使用した。 8.2.4 テストステロンに対する標準曲線の決定。
ＴおよびT3−BSAの溶液をFFBにおいて作
成した（1.4項参照）。 (a) 競合分析に使用すべぎT3−BSAの濃度
をT3−BSAを希釈系列の培養により検討
し、次いで複合体について検討した：管１
本当り１ml容量またはミクロ測定板の穴１
個当り0.1ml容量。手順は1.4項（工程３〜
８）に記載されている通り；λ最大（エタ
ノール）については実施例９を参照。全て
の競合分析については、全試験容量１ml当
り２および16PモルＴに対応するT3−
BSAの濃度を選択した。 (b) 競合分析は、全試験容量／ml当り２およ
び16PモルＴに相当するT3−BSAの一定
濃度ならびに０〜64PモルＴ／ml試料の希
釈系列を使用して行ない；管については、
0.9mlのテストステロン含有試料と0.1mlの
T3−BSA溶液（それぞれ20および160Pモ
ルＴ／mlに対応する）とを使用し、ミクロ
測定板については各容量を0.09および0.01
mlに変化させた。さらに、手順は1.4項
（工程３〜８）に記載された通りであり、
λ最大（エタノール）については実施例９
を参照。 （BL−２×SD）と定義される検出限界
は、 全試験容量１ml当り2PモルＴに相当す
るT3−BSA濃度を使用して、0.2〜0.4Pモ
ルＴ／ml試料であつた。全検出範囲は約０
〜8PモルＴ／ml試料であつた。RIAおよ
びEIAの場合、それぞれ1PモルＴ／mlお
よび0.7Pモル／mlにおいて50％結合に到達
した。 実施例 ９ 染料ゾルの調製に対する代替方法。 9.1 分散染料 1.1項に記載したパラニルRレツドBF（バスフ
社）の代りに、たとえば次表に示すような他の
分散染料をも使用して、染料ゾルを調製した。
【表】
【表】
ゾルは、乾燥粉末製品の場合は蒸留水中にお
ける染料の５％（Ｗ／Ｖ）分散物から出発し
て、市販染料により調製し、液体調製物の場合
は実験を蒸留水中における５％（Ｖ／Ｖ）分散
物から出発した。 水中の染料分散物の分別は、1.1項に記載した
ように遠心分離によつて行なつた。粒子寸法の
分別も、規定孔寸法を有するフイルターを用い
て行ない；このようにして使用しうるゾルが得
られるが、染料の収率は遠心分離によるよりも
著しく低く、さらにこの方法は極めて時間のか
かるものである。 流体力学的クロマトグラフイーおよび遠心分
離の際の濃度勾配の使用は、上記した方法に対
し有用な補助手段を構成する。 9.2 トランスフアー染料 トランスフアー染料はトランスフアープリン
トの際使用される染料であり、この場合着色さ
れた模様は一つの表面から他の表面へと、一般
的には紙から繊維布へと転写される。「静電昇
華（sublisitatic）、昇華、乾式加熱または熱プ
リント法」は、一般に水中に不溶性かつ有機環
境中に可溶性である昇華性の有機染料を使用す
る。この種の染料のゾルは、また、「凝縮法」
により、水中で作成されている〔ジエー・テイ
ーエツチ・ジー・オーバービーク、：エツチ・
アール・クルイト編、「コロイドサイエンス」、
第Ｉ巻、第59〜60頁、1952、エルセビール、ア
ムステルダム参照〕。 9.2.1 ルラフイツクスRブルーFFR（バスフ） 次の濃度：２、１、５、1.0、0.8、0.6、
0.4および0.2ｇ／を有するアセトン中のル
ラフイツクスRブレーFFRの溶液（１ml）を、
激しく撹拌しながら全て49mlの蒸留水に加え
た。得られた懸濁物を遠心分離し（30分間、
1000ｇ＝9800N／Kg）、ペレツトを蒸留水
（50ml）で洗浄しそして再び上記の条件下で
遠心分離した。次いで、ペレツトを最終濃度
が0.1mg／mlとなるような容量の蒸留水に懸
濁させた。各種の懸濁物を超音波処理（ブラ
ンソン・ソニフアイヤーＢ−12型、２分間、
70ワツト）にかけて最終染料ゾルを得た。こ
れら染料ゾルの吸収スペクトルを750〜360n
ｍの領域で記録した。λ最大値は、初期染
料／アセトン濃度２ｇ／に対応するゾルか
ら出発して0.2ｇ／に到るまで、716nｍか
ら617nｍまで低下した。これらのスペクト
ル変化は、粒子寸法の減少を示している〔エ
ツチ・アール・クルイト、「コロイド」、第
132頁、1930、ウイリー社、ニユーヨーク；
ジー・エツチ・ジヨンカー：エツチ・アー
ル・クルイト編、「コロイドサイエンス」、第
Ｉ巻、第102頁、1952、エルセビール、アム
ステルダム；エフ・ビー・グリブノー、学位
論文、ユトレヒト、1935、参照〕。 9.2.2 ルラフイツクスRレツドBF（バスフ） a. アセトン中のルラフイツクスRレツドHF
の溶液（１ml、0.5ｇ／）を、激しく撹
拌しながら蒸留水（24ml）に加えた。次い
で、減圧下かつ室温にてアセトンを静かに
蒸発させた。初期に安定なゾルから、最終
的に沈殿を得た。懸濁物を遠心分離し（30
分間、1000ｇ＝9800N／Kg）、そしてペレ
ツトを蒸留水（25ml）に再懸濁させ、次い
で超音波処理した（ブランソン・ソニフア
イヤーＢ−12、２分間、70ワツト）。 b. アセトン中のルラフイツクスRレツドBF
の溶液（１ml、５ｇ／）を、激しく撹拌
しながら蒸留水（249ml、50℃）に加えた。
50℃にて１分間後、混合物を温室まで冷却
させた。室温にて１日間放置すると、初期
の安定なゾルが部分的に凝集し始めた。 走査電子顕微鏡により、新たに調製した
両ゾルの写真を撮つた；第５図および第６
図を参照。 9.3 油脂染料（溶剤染料） 水に不溶性であるが、有機溶剤またはその混
合物に可能性である疎水性有機染料の群。9.2
項に記載したように凝縮法を使用して、水性媒
体中でこれら染料からゾルを作ることができ
る。 9.4 建染め染料 これらの水不溶性アントラキノン系もしくは
インジゴー系染料は、アルカリ性媒体中での還
元により、対応する水溶性ロイコ化合物に変え
ることができる。次いでこれらから、制御酸化
により染料ゾルを調製することができる。硫酸
エステルとして安定化されたロイコ化合物（可
溶性建染め染料）をもこの目的で使用すること
ができる。 9.5 有機顔料 定義によれば水および有機媒体に不溶性であ
るこれら化合物を分散法〔ピー・ナイレンおよ
びイー・サンダーランド：「近代的表面被覆」、
インターサイエンス・パブリツシヤース、ロン
ドン、1965〕によりコロイド「溶液」に変える
ことができる。 実施例 10 実施例１（1.2項）に記載したような、染料ゾ
ル／免疫グロブリン複合体の調製に関する変化 10.1 コロイド染料粒子上への免疫グロブリンの
不動化 10.1.1 ルラフイツクスRブルーFFR（バスフ）ア
セント中のルラフイツクスRブルーFFRの溶
液（５ml、１ｇ／）を激しい撹拌下に蒸留
水（245ml）に加えた。遠心分離（30分間、
1000ｇ＝9800N／Kg）の後、上澄液を除去し
そしてペレツトを蒸留水（50ml）で洗浄し
た。このペレツトを蒸留水（50mlまで）中に
再懸濁させそして懸濁物を超音波的に処理し
た（ブランソン・ソニフアイヤーＢ−12、２
分間、70ワツト）。得られたゾルを希釈して
1.0のA1cm 617を与えた。 兎抗−HCG免疫グロブリン溶液（0.2ml、
５ミリモルNaCl／の溶液中１mg／ml、PH
7.0）をこのゾルの10mlに加えそして混合物
を温室で16時間貯蔵した。次いで、カルボワ
ツクスR−20Mの溶液（0.2ml、５ミリモル
NaCl／の溶液中10ｇ／、PH7.0）を加
え、室温で30分間保つた後、ゾルを遠心分離
した（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。ペレ
ツトをカルボワツクスR−20M溶液（５ミリ
モルNaCl／の溶液中0.2ｇ／、PH7.0）で
２回洗浄し、次いでそこに再懸濁させて最終
容量５mlにした。 上記の手順を反復したが、今回は正常の兎
免疫グロブリンを使用した。複合体の免疫活
性は次のようにして確認した。 上記したカルボワツクスR−20M溶液を使
用して、各複合体の試料（２ml）を希釈し
た。これに、ワサビペルオキシダーゼHRP
で標識したHCGの溶液0.1mlを加え、そして
反応混合物を室温で２時間培養した。次い
で、これを遠心分離し（30分間、4000ｇ＝
39200N／Kg）、ペレツトを上記のカルボワツ
クスR−20M溶液で２回洗浄しそして色素
源／基質（ｏ−フエニレン−ジアミン／過酸
化尿素）の溶液に再懸濁させた。室温にて１
時間の後、４モル／硫酸を用いて酵素反応
を停止させ、そして遠心分離（30分間、4000
ｇ＝39200N／Kg）の後に上澄液のA492を測
定した。 染料／抗−HCGIg複合体：A492＝0.556、 染料／正常Ig複合体：A492＝0.275。 10.1.2 パラニルRレツドBF（バスフ） 固体キヤリヤ材料に対するたとえば蛋白質
の不動化を、吸着および直接的もしくは間接
的共有結合によつて得ることができる。後者
は、染料の化学構造における適当な官能基を
存在に依存する。たとえば芳香族アミノ基を
ジアゾ結合に使用できる一方、カルボキシル
基はカルボジイミドによつて活性化すること
ができる。脂肪族第一級アミノ基およびヒド
ロキシル基は、臭化シアンにより活性化する
ことができる。二官能性化合物をも使用する
ことができ、したがつてアミノ成分の結合の
ためグルタルアルデヒドを使用することがで
きる。 本発明においては反応性分散染料を使用す
ることもでき、これら染料は既にそれ自体反
応性である基、たとえばハロトリアジンおよ
びハロピリミジンに発色団が付着しているよ
うな染料である。 以下の例は、下記のようにして単離したフ
ラクシヨンを使用して、分散染料パラニルR
レツドBF（バスフ）によつて行なつた。 水中のこの染料の分散物（62.5ｇ／）を
遠心分離した（30分間、750ｇ＝７，350N／
Kg）。ペレツトを蒸留水で５回洗浄し、水中
のポリビニルアルコール（PVA）の溶液
（１ｇPVA／、PVA：モビオールR28〜
99、ヘキスト）にて２回洗浄した。最後に、
ペレツトをPVA溶液（５ミリモルNaCl／
の溶液における0.1ｇPVA／、PH7.0）中の
２の最終容量まで再懸濁させた。この染料
ゾルの試料（25ml）を、必要に応じ下記に詳
細に記載するように処理した後、羊抗−
HCG免疫グロブリンの溶液（0.65ml、５ミ
リモルNaCl／の溶液中40mg／ml、PH7.0）
と混合した。 コロイド染料粒子に対するこの蛋白質の吸
着および／または付着を、特定条件下で16時
間行なつた。 10.1.2.1 吸着 ａ PH4.0かつ０モルNaCl／における吸
着、 ｂ PH4.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、 ｃ PH7.0かつ０モルNaCl／における吸
着、 ｄ PH7.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、 ｅ PH6.0かつ０モルNaCl／における吸
着、（ゾルと蛋白質とはPH4.0にて混合し
た） ｆ PH6.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、（ゾルと蛋白質とはPH4.0にて混合し
た）。 10.1.2.2 ジアゾ結合 染料をNaNO2／HClにより４℃でジア
ゾ化させ、次いで反応混合物のPHを固体
Na2CO3により8.6に調整した。最後に、蛋
白質を加え、結合を４℃で行なつた。 ａ NaNO2：0.1モル／ HCl：0.1モ
ル／ ｂ NaNO2：0.05モル／ HCl：0.05モ
ル／ ｃ NaNO2：0.01モル／ HCl：0.01モ
ル／ 10.1.2.3 グルタルアルデヒドによる架
橋 染料ゾルのグルタルアルデヒド濃度をそ
れぞれ１および10ミリモル／に設定し、
その後PHをそれぞれ7.4および10.0に調整
した。室温で１時間の後、PH10を9.0まで
低下させた。最後に、蛋白質を加え、反応
を室温で行なつた。 ａ グルタルアルデヒド：１ミリモル／
PH7.4 ｂ 〃 ：10ミリモル／
PH7.4 ｃ 〃 ：１ミリモル／
PH10.0 10.1.2.4 CNBr活性化 染料ゾルを遠心分離し、ペレツトを５ミ
リモルNaCl／、PH7.0の溶液で洗浄し
た。これを、次いで同じ溶液中に或いは
PVAを溶液（５ミリモルNaCl／の溶液
中10ｇ／、PH7.0）中に再懸濁させた。
各種ゾルのCNBr濃度をそれぞれ0.045お
よび0.005モル／に調整し、その後４モ
ル／NaPHを用いてPHを11.0に調整し
た。室温で12.5分間の後、反応混合物を遠
心分離しそしてペレツトを0.1モル／
NaHCO3、PH8.5（４℃）で２回洗浄した。
これを、次いで0.025モル／NaHCO3、
PH8.5の中に初期容量まで再懸濁させた。
蛋白質結合は４℃にて行なつた。 ａ PVA濃度：０ｇ／ CNBr濃
度：0.045モル／、 ｂ PVA濃度：10ｇ／ CNBr濃度：
0.045モル／ ｃ 〃 ：
10ｇ／ 〃 ：0.005モル／
。 16時間後、各種の反応混合物を遠心分離
した（30分間、1000ｇ＝9800N／Kg）。上
澄液を除去し、ペレツトを５ミリモル
NaCl／、PH7.0の溶液で２回洗浄しそし
て同じ溶液中に20mlの最終容量まで再懸濁
させた。 各種複合体の免疫活性を、５mlの各複合
体をワサビペルオキシダーゼ（HRP）で
標識されたHCGと共に培養（暗所中４℃
にて16時間）することにより測定した。次
いで、反応混合物を遠心分離した（30分
間、1000ｇ＝9800N／Kg）。ペレツトを、
５ミリモルNaCl／、PH7.0の溶液３mlに
て２回洗浄し、次いで色素源／基質（０−
フエニレン−ジアミン／過酸化尿素）の溶
液中に再懸濁させた。室温で１時間の反応
時間（暗所中）の後、４モル／硫酸にて
酵素反応を停止させ、そして遠心分離（30
分間、1000ｇ＝9800N／Kg）の後に上澄液
のA492を測定した。 特異性をチエツクするため、HRPのみ
を用いてさらに上記の手順を行なつた。
ける染料の５％（Ｗ／Ｖ）分散物から出発し
て、市販染料により調製し、液体調製物の場合
は実験を蒸留水中における５％（Ｖ／Ｖ）分散
物から出発した。 水中の染料分散物の分別は、1.1項に記載した
ように遠心分離によつて行なつた。粒子寸法の
分別も、規定孔寸法を有するフイルターを用い
て行ない；このようにして使用しうるゾルが得
られるが、染料の収率は遠心分離によるよりも
著しく低く、さらにこの方法は極めて時間のか
かるものである。 流体力学的クロマトグラフイーおよび遠心分
離の際の濃度勾配の使用は、上記した方法に対
し有用な補助手段を構成する。 9.2 トランスフアー染料 トランスフアー染料はトランスフアープリン
トの際使用される染料であり、この場合着色さ
れた模様は一つの表面から他の表面へと、一般
的には紙から繊維布へと転写される。「静電昇
華（sublisitatic）、昇華、乾式加熱または熱プ
リント法」は、一般に水中に不溶性かつ有機環
境中に可溶性である昇華性の有機染料を使用す
る。この種の染料のゾルは、また、「凝縮法」
により、水中で作成されている〔ジエー・テイ
ーエツチ・ジー・オーバービーク、：エツチ・
アール・クルイト編、「コロイドサイエンス」、
第Ｉ巻、第59〜60頁、1952、エルセビール、ア
ムステルダム参照〕。 9.2.1 ルラフイツクスRブルーFFR（バスフ） 次の濃度：２、１、５、1.0、0.8、0.6、
0.4および0.2ｇ／を有するアセトン中のル
ラフイツクスRブレーFFRの溶液（１ml）を、
激しく撹拌しながら全て49mlの蒸留水に加え
た。得られた懸濁物を遠心分離し（30分間、
1000ｇ＝9800N／Kg）、ペレツトを蒸留水
（50ml）で洗浄しそして再び上記の条件下で
遠心分離した。次いで、ペレツトを最終濃度
が0.1mg／mlとなるような容量の蒸留水に懸
濁させた。各種の懸濁物を超音波処理（ブラ
ンソン・ソニフアイヤーＢ−12型、２分間、
70ワツト）にかけて最終染料ゾルを得た。こ
れら染料ゾルの吸収スペクトルを750〜360n
ｍの領域で記録した。λ最大値は、初期染
料／アセトン濃度２ｇ／に対応するゾルか
ら出発して0.2ｇ／に到るまで、716nｍか
ら617nｍまで低下した。これらのスペクト
ル変化は、粒子寸法の減少を示している〔エ
ツチ・アール・クルイト、「コロイド」、第
132頁、1930、ウイリー社、ニユーヨーク；
ジー・エツチ・ジヨンカー：エツチ・アー
ル・クルイト編、「コロイドサイエンス」、第
Ｉ巻、第102頁、1952、エルセビール、アム
ステルダム；エフ・ビー・グリブノー、学位
論文、ユトレヒト、1935、参照〕。 9.2.2 ルラフイツクスRレツドBF（バスフ） a. アセトン中のルラフイツクスRレツドHF
の溶液（１ml、0.5ｇ／）を、激しく撹
拌しながら蒸留水（24ml）に加えた。次い
で、減圧下かつ室温にてアセトンを静かに
蒸発させた。初期に安定なゾルから、最終
的に沈殿を得た。懸濁物を遠心分離し（30
分間、1000ｇ＝9800N／Kg）、そしてペレ
ツトを蒸留水（25ml）に再懸濁させ、次い
で超音波処理した（ブランソン・ソニフア
イヤーＢ−12、２分間、70ワツト）。 b. アセトン中のルラフイツクスRレツドBF
の溶液（１ml、５ｇ／）を、激しく撹拌
しながら蒸留水（249ml、50℃）に加えた。
50℃にて１分間後、混合物を温室まで冷却
させた。室温にて１日間放置すると、初期
の安定なゾルが部分的に凝集し始めた。 走査電子顕微鏡により、新たに調製した
両ゾルの写真を撮つた；第５図および第６
図を参照。 9.3 油脂染料（溶剤染料） 水に不溶性であるが、有機溶剤またはその混
合物に可能性である疎水性有機染料の群。9.2
項に記載したように凝縮法を使用して、水性媒
体中でこれら染料からゾルを作ることができ
る。 9.4 建染め染料 これらの水不溶性アントラキノン系もしくは
インジゴー系染料は、アルカリ性媒体中での還
元により、対応する水溶性ロイコ化合物に変え
ることができる。次いでこれらから、制御酸化
により染料ゾルを調製することができる。硫酸
エステルとして安定化されたロイコ化合物（可
溶性建染め染料）をもこの目的で使用すること
ができる。 9.5 有機顔料 定義によれば水および有機媒体に不溶性であ
るこれら化合物を分散法〔ピー・ナイレンおよ
びイー・サンダーランド：「近代的表面被覆」、
インターサイエンス・パブリツシヤース、ロン
ドン、1965〕によりコロイド「溶液」に変える
ことができる。 実施例 10 実施例１（1.2項）に記載したような、染料ゾ
ル／免疫グロブリン複合体の調製に関する変化 10.1 コロイド染料粒子上への免疫グロブリンの
不動化 10.1.1 ルラフイツクスRブルーFFR（バスフ）ア
セント中のルラフイツクスRブルーFFRの溶
液（５ml、１ｇ／）を激しい撹拌下に蒸留
水（245ml）に加えた。遠心分離（30分間、
1000ｇ＝9800N／Kg）の後、上澄液を除去し
そしてペレツトを蒸留水（50ml）で洗浄し
た。このペレツトを蒸留水（50mlまで）中に
再懸濁させそして懸濁物を超音波的に処理し
た（ブランソン・ソニフアイヤーＢ−12、２
分間、70ワツト）。得られたゾルを希釈して
1.0のA1cm 617を与えた。 兎抗−HCG免疫グロブリン溶液（0.2ml、
５ミリモルNaCl／の溶液中１mg／ml、PH
7.0）をこのゾルの10mlに加えそして混合物
を温室で16時間貯蔵した。次いで、カルボワ
ツクスR−20Mの溶液（0.2ml、５ミリモル
NaCl／の溶液中10ｇ／、PH7.0）を加
え、室温で30分間保つた後、ゾルを遠心分離
した（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。ペレ
ツトをカルボワツクスR−20M溶液（５ミリ
モルNaCl／の溶液中0.2ｇ／、PH7.0）で
２回洗浄し、次いでそこに再懸濁させて最終
容量５mlにした。 上記の手順を反復したが、今回は正常の兎
免疫グロブリンを使用した。複合体の免疫活
性は次のようにして確認した。 上記したカルボワツクスR−20M溶液を使
用して、各複合体の試料（２ml）を希釈し
た。これに、ワサビペルオキシダーゼHRP
で標識したHCGの溶液0.1mlを加え、そして
反応混合物を室温で２時間培養した。次い
で、これを遠心分離し（30分間、4000ｇ＝
39200N／Kg）、ペレツトを上記のカルボワツ
クスR−20M溶液で２回洗浄しそして色素
源／基質（ｏ−フエニレン−ジアミン／過酸
化尿素）の溶液に再懸濁させた。室温にて１
時間の後、４モル／硫酸を用いて酵素反応
を停止させ、そして遠心分離（30分間、4000
ｇ＝39200N／Kg）の後に上澄液のA492を測
定した。 染料／抗−HCGIg複合体：A492＝0.556、 染料／正常Ig複合体：A492＝0.275。 10.1.2 パラニルRレツドBF（バスフ） 固体キヤリヤ材料に対するたとえば蛋白質
の不動化を、吸着および直接的もしくは間接
的共有結合によつて得ることができる。後者
は、染料の化学構造における適当な官能基を
存在に依存する。たとえば芳香族アミノ基を
ジアゾ結合に使用できる一方、カルボキシル
基はカルボジイミドによつて活性化すること
ができる。脂肪族第一級アミノ基およびヒド
ロキシル基は、臭化シアンにより活性化する
ことができる。二官能性化合物をも使用する
ことができ、したがつてアミノ成分の結合の
ためグルタルアルデヒドを使用することがで
きる。 本発明においては反応性分散染料を使用す
ることもでき、これら染料は既にそれ自体反
応性である基、たとえばハロトリアジンおよ
びハロピリミジンに発色団が付着しているよ
うな染料である。 以下の例は、下記のようにして単離したフ
ラクシヨンを使用して、分散染料パラニルR
レツドBF（バスフ）によつて行なつた。 水中のこの染料の分散物（62.5ｇ／）を
遠心分離した（30分間、750ｇ＝７，350N／
Kg）。ペレツトを蒸留水で５回洗浄し、水中
のポリビニルアルコール（PVA）の溶液
（１ｇPVA／、PVA：モビオールR28〜
99、ヘキスト）にて２回洗浄した。最後に、
ペレツトをPVA溶液（５ミリモルNaCl／
の溶液における0.1ｇPVA／、PH7.0）中の
２の最終容量まで再懸濁させた。この染料
ゾルの試料（25ml）を、必要に応じ下記に詳
細に記載するように処理した後、羊抗−
HCG免疫グロブリンの溶液（0.65ml、５ミ
リモルNaCl／の溶液中40mg／ml、PH7.0）
と混合した。 コロイド染料粒子に対するこの蛋白質の吸
着および／または付着を、特定条件下で16時
間行なつた。 10.1.2.1 吸着 ａ PH4.0かつ０モルNaCl／における吸
着、 ｂ PH4.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、 ｃ PH7.0かつ０モルNaCl／における吸
着、 ｄ PH7.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、 ｅ PH6.0かつ０モルNaCl／における吸
着、（ゾルと蛋白質とはPH4.0にて混合し
た） ｆ PH6.0かつ0.1モルNaCl／における吸
着、（ゾルと蛋白質とはPH4.0にて混合し
た）。 10.1.2.2 ジアゾ結合 染料をNaNO2／HClにより４℃でジア
ゾ化させ、次いで反応混合物のPHを固体
Na2CO3により8.6に調整した。最後に、蛋
白質を加え、結合を４℃で行なつた。 ａ NaNO2：0.1モル／ HCl：0.1モ
ル／ ｂ NaNO2：0.05モル／ HCl：0.05モ
ル／ ｃ NaNO2：0.01モル／ HCl：0.01モ
ル／ 10.1.2.3 グルタルアルデヒドによる架
橋 染料ゾルのグルタルアルデヒド濃度をそ
れぞれ１および10ミリモル／に設定し、
その後PHをそれぞれ7.4および10.0に調整
した。室温で１時間の後、PH10を9.0まで
低下させた。最後に、蛋白質を加え、反応
を室温で行なつた。 ａ グルタルアルデヒド：１ミリモル／
PH7.4 ｂ 〃 ：10ミリモル／
PH7.4 ｃ 〃 ：１ミリモル／
PH10.0 10.1.2.4 CNBr活性化 染料ゾルを遠心分離し、ペレツトを５ミ
リモルNaCl／、PH7.0の溶液で洗浄し
た。これを、次いで同じ溶液中に或いは
PVAを溶液（５ミリモルNaCl／の溶液
中10ｇ／、PH7.0）中に再懸濁させた。
各種ゾルのCNBr濃度をそれぞれ0.045お
よび0.005モル／に調整し、その後４モ
ル／NaPHを用いてPHを11.0に調整し
た。室温で12.5分間の後、反応混合物を遠
心分離しそしてペレツトを0.1モル／
NaHCO3、PH8.5（４℃）で２回洗浄した。
これを、次いで0.025モル／NaHCO3、
PH8.5の中に初期容量まで再懸濁させた。
蛋白質結合は４℃にて行なつた。 ａ PVA濃度：０ｇ／ CNBr濃
度：0.045モル／、 ｂ PVA濃度：10ｇ／ CNBr濃度：
0.045モル／ ｃ 〃 ：
10ｇ／ 〃 ：0.005モル／
。 16時間後、各種の反応混合物を遠心分離
した（30分間、1000ｇ＝9800N／Kg）。上
澄液を除去し、ペレツトを５ミリモル
NaCl／、PH7.0の溶液で２回洗浄しそし
て同じ溶液中に20mlの最終容量まで再懸濁
させた。 各種複合体の免疫活性を、５mlの各複合
体をワサビペルオキシダーゼ（HRP）で
標識されたHCGと共に培養（暗所中４℃
にて16時間）することにより測定した。次
いで、反応混合物を遠心分離した（30分
間、1000ｇ＝9800N／Kg）。ペレツトを、
５ミリモルNaCl／、PH7.0の溶液３mlに
て２回洗浄し、次いで色素源／基質（０−
フエニレン−ジアミン／過酸化尿素）の溶
液中に再懸濁させた。室温で１時間の反応
時間（暗所中）の後、４モル／硫酸にて
酵素反応を停止させ、そして遠心分離（30
分間、1000ｇ＝9800N／Kg）の後に上澄液
のA492を測定した。 特異性をチエツクするため、HRPのみ
を用いてさらに上記の手順を行なつた。
【表】
10.2 免疫活性に対する染料ゾル／免疫グロブリ
ン複合体の「後被覆」の効果 例としてパラニルRレツドBF（バスフ）を使
用し、上記1.1項に記載した方法により既に調
製した種類のゾルを使用して実験を行なつた。
このゾルを、0.1モル／NaOHまたはHClに
よりPH7.0に調整し、吸光度（533nｍにて）を
5.0に設定した。 このゾルの試料（37ml）を兎抗−HCG免疫
グロブリンの溶液（0.74ml、５ミリモル
NaCl／の溶液中１ｇ／、PH7.0）と混合し
た。次いで、反応混合物におけるIg濃度を20
mg／にした。室温で１時間培養した後、次の
ものをゾルに加えた： ａ なし ｂ 濃度0.2ｇ／までのカルボワツクスR−
20M ｃ 濃度0.2ｇ／までのBSA。 室温でさらに１時間培養した後、ゾルを遠心
分離した（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。ペ
レツトを５ミリモルNaCl／の溶液中37mlの
最終容量まで再懸濁させ、さらに他の添加物を
加えないか、0.2ｇカルボワツクスR−20M／
または0.2ｇBSA／のいずれかを加えた。 各種の複合体と盲検染料ゾルとを、1.4項に
記載した手順を用いてDIA（「サンドイツチ試
験」）で試験した。用いたHCGの希釈系列は
０、250、1000および4000IU（免疫分析）／
燐酸塩緩衝液であつた。
ン複合体の「後被覆」の効果 例としてパラニルRレツドBF（バスフ）を使
用し、上記1.1項に記載した方法により既に調
製した種類のゾルを使用して実験を行なつた。
このゾルを、0.1モル／NaOHまたはHClに
よりPH7.0に調整し、吸光度（533nｍにて）を
5.0に設定した。 このゾルの試料（37ml）を兎抗−HCG免疫
グロブリンの溶液（0.74ml、５ミリモル
NaCl／の溶液中１ｇ／、PH7.0）と混合し
た。次いで、反応混合物におけるIg濃度を20
mg／にした。室温で１時間培養した後、次の
ものをゾルに加えた： ａ なし ｂ 濃度0.2ｇ／までのカルボワツクスR−
20M ｃ 濃度0.2ｇ／までのBSA。 室温でさらに１時間培養した後、ゾルを遠心
分離した（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）。ペ
レツトを５ミリモルNaCl／の溶液中37mlの
最終容量まで再懸濁させ、さらに他の添加物を
加えないか、0.2ｇカルボワツクスR−20M／
または0.2ｇBSA／のいずれかを加えた。 各種の複合体と盲検染料ゾルとを、1.4項に
記載した手順を用いてDIA（「サンドイツチ試
験」）で試験した。用いたHCGの希釈系列は
０、250、1000および4000IU（免疫分析）／
燐酸塩緩衝液であつた。
【表】
10.3 調製後における複合体の単離のための精製
方法 精製の方法として、特に次の技術を考慮する
ことができる。 −遠心分離、 −ゲルクロマトグラフイー、 −親和クロマトグラフイー、 −膜過、 −部分沈殿（凝集、次いで洗浄およびゾルの再
編成）。 遠心分離およびゲルクロマトグラフイーを詳
細に検討し、その結果を、精製されていないが
その他は同一に調製された複合体のそれと比較
した。 この目的で、末精製複合体10.2−ｃを使用し
た。 10.3−ａ ゲルクロマトグラフイー ４mlの複合体（Ａ１cm 533＝5.0）をセフアロ
ースRCL2Bカラム（フアルマシアK16／20、
床容積35ml；５ミリモルNaCl＋0.2ｇBSA＋
1.0ｇNaN3／、PH7.0の溶液で平衡化）に
通した。このカラムを平衡化緩衝液（室温、
30ml／時間）で溶出し、A280を測定して溶出
物を検出した。1.3mlのフラクシヨンを集め、
染料ピークの主フラクシヨンを混合した。 10.3−ｂ 遠心分離 ４mlの複合体（Ａ１cm 533＝5.0）遠心分離し
（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）、そして５
ミリモルNaCl＋0.2ｇBSA＋1.0ｇNaN3／
、PH7.0の溶液を使用して最終容量４mlを
与えるよう再懸濁させた。 10.3−ｃ 精製なし この目的で未精製複合体10.2−ｃを使用し
た。 ３種の複合体を、1.4項に記載した手順を
用いてDIA（サンドイツチ試験）で試験した。
10.2項におけるHCG希釈系列を使用した。
方法 精製の方法として、特に次の技術を考慮する
ことができる。 −遠心分離、 −ゲルクロマトグラフイー、 −親和クロマトグラフイー、 −膜過、 −部分沈殿（凝集、次いで洗浄およびゾルの再
編成）。 遠心分離およびゲルクロマトグラフイーを詳
細に検討し、その結果を、精製されていないが
その他は同一に調製された複合体のそれと比較
した。 この目的で、末精製複合体10.2−ｃを使用し
た。 10.3−ａ ゲルクロマトグラフイー ４mlの複合体（Ａ１cm 533＝5.0）をセフアロ
ースRCL2Bカラム（フアルマシアK16／20、
床容積35ml；５ミリモルNaCl＋0.2ｇBSA＋
1.0ｇNaN3／、PH7.0の溶液で平衡化）に
通した。このカラムを平衡化緩衝液（室温、
30ml／時間）で溶出し、A280を測定して溶出
物を検出した。1.3mlのフラクシヨンを集め、
染料ピークの主フラクシヨンを混合した。 10.3−ｂ 遠心分離 ４mlの複合体（Ａ１cm 533＝5.0）遠心分離し
（30分間、4000ｇ＝39200N／Kg）、そして５
ミリモルNaCl＋0.2ｇBSA＋1.0ｇNaN3／
、PH7.0の溶液を使用して最終容量４mlを
与えるよう再懸濁させた。 10.3−ｃ 精製なし この目的で未精製複合体10.2−ｃを使用し
た。 ３種の複合体を、1.4項に記載した手順を
用いてDIA（サンドイツチ試験）で試験した。
10.2項におけるHCG希釈系列を使用した。
【表】
10.4 最終免疫活性に対する、複合体の調製の際
使用された免疫グロブリン濃度の効果1.1項に
記載した方法によりパラニルRレツドBF（バス
フ）から調製された染料ゾルの試料（５ml）を
0.1mlの兎抗−HCG免疫グロブリン溶液（５ミ
リモルNaCl／、PH7.0）と混合して次の最終
濃度を得た： 10.4−ａ 10mg／ ｂ 20mg／ ｃ 40mg／ ｄ 80mg／ 室温で１時間培養した後、0.1モルのBSA溶
液（５ミリモルNaCl＋20ｇBSA／、PH7.0）
を加えて0.4ｇBSA／の最終濃度を得た。室
温で１時間培養した後、ゾルを遠心分離し（30
分間、4000ｇ＝39200N／Kg）、上澄液を除去し
そしてペレツトを５ミリモルNaCl＋0.4ｇBSA
＋0.1ｇナトリウムマーシオレート／、PH7.0
の溶液により５mlの最終容量まで再懸濁させ
た。 複合体の免疫活性を、1.4項に記載した手順
に従いDIA（サンドイツチ試験）によつて確認
し、10.2項からのHCG希釈系列を使用した。
使用された免疫グロブリン濃度の効果1.1項に
記載した方法によりパラニルRレツドBF（バス
フ）から調製された染料ゾルの試料（５ml）を
0.1mlの兎抗−HCG免疫グロブリン溶液（５ミ
リモルNaCl／、PH7.0）と混合して次の最終
濃度を得た： 10.4−ａ 10mg／ ｂ 20mg／ ｃ 40mg／ ｄ 80mg／ 室温で１時間培養した後、0.1モルのBSA溶
液（５ミリモルNaCl＋20ｇBSA／、PH7.0）
を加えて0.4ｇBSA／の最終濃度を得た。室
温で１時間培養した後、ゾルを遠心分離し（30
分間、4000ｇ＝39200N／Kg）、上澄液を除去し
そしてペレツトを５ミリモルNaCl＋0.4ｇBSA
＋0.1ｇナトリウムマーシオレート／、PH7.0
の溶液により５mlの最終容量まで再懸濁させ
た。 複合体の免疫活性を、1.4項に記載した手順
に従いDIA（サンドイツチ試験）によつて確認
し、10.2項からのHCG希釈系列を使用した。
【表】
10.5 複合体の免疫活性に対する抗−HCG免疫
グロブリンの種類の効果：羊および兎抗−
HCG血清から単離された抗−HCG免疫グロブ
リンならびに単一種ねずみ抗−HCG免疫グロ
ブリンの使用 1.1項に記載した方法により調製したパラニ
ルRレツドBFゾルの試料（５ml、Ａ１cm 533＝5.0）
を次のように被覆することにより、抗−HCG
免疫グロブリン／染料ゾル複合体を調製した。 10.5−ａ 羊抗−HCG免疫グロブリン 蛋白質溶液（0.1ml、５ミリモルNaCl／
の溶液中１ｇ／、PH7.0をゾルに加え、そ
して反応混合物を室温にて１時間培養した。
次いでBSA溶液（0.1ml、５ミリモルNaClの
溶液中20ｇ／、PH7.0）を加え、室温にて
１時間培養した後ゾルを遠心分離した（30分
間、4000ｇ＝39200N／Kg）。上澄液を除去
し、ペレツトを５ミリモルNaCl＋0.4ｇBSA
＋0.1ｇ＋ナトリウムマーシオレート／、
PH7.0の溶液中５mlの最終容量まで再懸濁さ
せた。 10.5−ｂ 兎抗−HCG免疫グロブリン 10.5−ａと同じであるが、ただし兎免疫グ
ロブリンを使用した。 10.5−ｃ 単一種ねずみ抗−HCG免疫グロブリ
ン。 10.5−ａと同様であるが、ねずみ免疫グロ
ブリンを使用しかつ次の量を使用した： 10.5−ｃ−１：0.1ml免疫グロブリン溶液 （１ｇ／、５ミリモルNaCl／、PH
7.0） 10.5−ｃ−２：0.1ml免疫グロブリン溶液 （0.25ｇ／、５ミリモルNaCl／、PH
7.0） 複合体の免疫活性は、1.4項に記載した手順
に従いDIA（サンドイツチ試験）を用いて確認
した。次のHCG希釈系列を使用した：０、
15.6、62.5、250、1000および4000IU（免疫分
析）／。
グロブリンの種類の効果：羊および兎抗−
HCG血清から単離された抗−HCG免疫グロブ
リンならびに単一種ねずみ抗−HCG免疫グロ
ブリンの使用 1.1項に記載した方法により調製したパラニ
ルRレツドBFゾルの試料（５ml、Ａ１cm 533＝5.0）
を次のように被覆することにより、抗−HCG
免疫グロブリン／染料ゾル複合体を調製した。 10.5−ａ 羊抗−HCG免疫グロブリン 蛋白質溶液（0.1ml、５ミリモルNaCl／
の溶液中１ｇ／、PH7.0をゾルに加え、そ
して反応混合物を室温にて１時間培養した。
次いでBSA溶液（0.1ml、５ミリモルNaClの
溶液中20ｇ／、PH7.0）を加え、室温にて
１時間培養した後ゾルを遠心分離した（30分
間、4000ｇ＝39200N／Kg）。上澄液を除去
し、ペレツトを５ミリモルNaCl＋0.4ｇBSA
＋0.1ｇ＋ナトリウムマーシオレート／、
PH7.0の溶液中５mlの最終容量まで再懸濁さ
せた。 10.5−ｂ 兎抗−HCG免疫グロブリン 10.5−ａと同じであるが、ただし兎免疫グ
ロブリンを使用した。 10.5−ｃ 単一種ねずみ抗−HCG免疫グロブリ
ン。 10.5−ａと同様であるが、ねずみ免疫グロ
ブリンを使用しかつ次の量を使用した： 10.5−ｃ−１：0.1ml免疫グロブリン溶液 （１ｇ／、５ミリモルNaCl／、PH
7.0） 10.5−ｃ−２：0.1ml免疫グロブリン溶液 （0.25ｇ／、５ミリモルNaCl／、PH
7.0） 複合体の免疫活性は、1.4項に記載した手順
に従いDIA（サンドイツチ試験）を用いて確認
した。次のHCG希釈系列を使用した：０、
15.6、62.5、250、1000および4000IU（免疫分
析）／。
【表】
10.6 複合体の免疫活性に対する「後被覆」の際
与えられたBSA濃度の効果 分散染料パラニルRレツドBF（バスフ）の複
合体を、1.1項および1.2項に記載した手順に従
つて作成したが、ただしBSA濃度を次のよう
に変化させた：
与えられたBSA濃度の効果 分散染料パラニルRレツドBF（バスフ）の複
合体を、1.1項および1.2項に記載した手順に従
つて作成したが、ただしBSA濃度を次のよう
に変化させた：
【表】
複合体を1.2項に記載したように単離しそし
て最後に次の組成を有する溶液に再懸濁させ
た：５ミリモルNaCl＋0.1ｇナトリウムマーシ
オレート＋XgBSA／（0.1モル／NaOHに
よりPHを7.0に調製）。BSA濃度は「後被覆」の
際のものと常に等しく、したがつてそれぞれＸ
＝1.6、3.2、………、51.2ｇ／（上表参照）
であつた。 複合体の免疫活性は、1.4項に記載した手順
に従いDIA（「サンドイツチ試験」）によつて確
認した。この場合、次のHCG希釈系列を使用
した：０、3.9、15.6、62.5、250、1000、4000、
16000IU免疫分析／。
て最後に次の組成を有する溶液に再懸濁させ
た：５ミリモルNaCl＋0.1ｇナトリウムマーシ
オレート＋XgBSA／（0.1モル／NaOHに
よりPHを7.0に調製）。BSA濃度は「後被覆」の
際のものと常に等しく、したがつてそれぞれＸ
＝1.6、3.2、………、51.2ｇ／（上表参照）
であつた。 複合体の免疫活性は、1.4項に記載した手順
に従いDIA（「サンドイツチ試験」）によつて確
認した。この場合、次のHCG希釈系列を使用
した：０、3.9、15.6、62.5、250、1000、4000、
16000IU免疫分析／。
【表】
実施例 11
DIA原理による、ひと絨手膜ゴナドトロピン
（HCG）の比色および／または肉眼測定（凝集試
験；方法１）。 11.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 11.2 兎抗−HCG免疫グロブリン／染料ゾル複
合体の調製 1.2項参照：ただしこの場合、上記した組成
を有する溶液にペレツトを0.4ｇBSA／と共
に再懸濁させたのでBSA溶液は2.4ｇ／を含
有した。この複合体を最終的にＡ１cm 533＝2.2の
値までさらに希釈した。 11.3 燐酸塩緩衝液または尿におけるHCGの測
定 トリス緩衝液 １モルトリス＋１モルNaCl＋10ｇBSA／
、４モル／HClにてPH7.4に調整。 HCG 1.4項参照。 尿 1.4項参照。 燐酸塩緩衝液（FFB） 1.4項参照。 11.2項参照。 手 順 １ 標準HCG溶液をFFBまたは尿で希釈する
ことにより、5000および1000IU（免疫分
析）／のHCG溶液を作成した。 ２ セル（１cm光路）中に、複合体（１ml）と
トリス緩衝液（0.1ml）とHCG溶液（0.11ml）
とをピペツトで入れた。充分に混合し、直ち
に比較としてFFBおよび尿を用いて750〜
360nｍの領域で吸収スペクトルを走査した。 ３ セルを室温で20時間静置させた。次いで肉
眼によつて内容を評価し、セルを振とうし、
次いで再度750〜360nｍの領域にて吸収スペ
クトルを確認した。 代表的スペクトルを第３図に示し、数値デ
ータを次表に示す。
（HCG）の比色および／または肉眼測定（凝集試
験；方法１）。 11.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 11.2 兎抗−HCG免疫グロブリン／染料ゾル複
合体の調製 1.2項参照：ただしこの場合、上記した組成
を有する溶液にペレツトを0.4ｇBSA／と共
に再懸濁させたのでBSA溶液は2.4ｇ／を含
有した。この複合体を最終的にＡ１cm 533＝2.2の
値までさらに希釈した。 11.3 燐酸塩緩衝液または尿におけるHCGの測
定 トリス緩衝液 １モルトリス＋１モルNaCl＋10ｇBSA／
、４モル／HClにてPH7.4に調整。 HCG 1.4項参照。 尿 1.4項参照。 燐酸塩緩衝液（FFB） 1.4項参照。 11.2項参照。 手 順 １ 標準HCG溶液をFFBまたは尿で希釈する
ことにより、5000および1000IU（免疫分
析）／のHCG溶液を作成した。 ２ セル（１cm光路）中に、複合体（１ml）と
トリス緩衝液（0.1ml）とHCG溶液（0.11ml）
とをピペツトで入れた。充分に混合し、直ち
に比較としてFFBおよび尿を用いて750〜
360nｍの領域で吸収スペクトルを走査した。 ３ セルを室温で20時間静置させた。次いで肉
眼によつて内容を評価し、セルを振とうし、
次いで再度750〜360nｍの領域にて吸収スペ
クトルを確認した。 代表的スペクトルを第３図に示し、数値デ
ータを次表に示す。
【表】
実施例 12
DIA原理によるひと絨毛膜ゴナドトロピン
（HCG）の比色測定（凝集試験；方法２）。 12.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 12.2 DIA／凝集に対する一般的試験手順 染料−免疫グロブリン複合体（２ml）をガラ
ス製もしくはポリスチレン製キユベツト中にピ
ペツトで入れ、FFB（1.4項参照）中に溶解させ
た抗原試料0.2mlまたはFFBのみ0.2mlおよび蒸
留水0.2mlまたは蒸留水中MgSO4の溶液0.2mlと
混合した。キユベツトを室温に保ち（撹拌な
し）、一定時間間隔の後に吸光度を測定した
（事前撹拌なし）。抗原は染料ゾル粒子の凝集を
ひき起こし、これは有効粒子寸法自身の増大と
同時的な凝集物の沈降とに基づき吸光度の減少
をもたらした。その他の実験は全てHCGの測
定に関するものである。 12.3 兎（抗−HCG）IgG／染料複合体の調製 標準的手順：11.2項参照。 最適化は、次のパラメータを検討して行なつ
た。 12.3.1 BSAによる複合体の二次的被覆 DIA／サンドイツチのための複合体を、非
特異的効果を減少させるために、BSAによ
り二次的に被覆した。複合体のこの余分の被
覆はその安定性を確実に改善し、したがつて
複合体をDIA／凝集に使用するには不利であ
ろう。種々異なる量のBSAで被覆した或い
はBSAを含まない複合体を凝集分析におい
て比較した。BSAを含まない複合体は最短
試験時間において最も高い感度と最も低い検
出限界とをもたらし、一定の盲検値を与える
にはまだ充分に安定であつた。 12.3.2 複合体調製の際の最適IgG濃度 被覆の際異なるIgG濃度を用いてパラニル
ＲレツトBF／抗−HCG複合体を調製し、
5IU／ml試料（または0.42IU／ml全試料容
量）の一定HCG濃度を用いて凝集分析で選
別した。複合対調製の際の最適IgG濃度は、
Ａ１cm 530＝５に相当するゾル濃度において
0.033mg／ml反応混合物であることが判つた。 12.3.3 複合体調製に先立ちIgGをPH2.0で培養す
る効果 兎抗−HCGIgGの溶液（５ミリモル
NaCl／PH7.0中４〜５mg／ml）をPH2.0に調
整して４℃で１時間培養し；PHを7.4に再調
整してIgG溶液を複合体調製のため使用し
た。複合体合成の際「PH２処理IgG」の濃度
を変化させ、そして各種の複合体を12.3.2項
に記載したように選別した。Ａ１cm 530＝５に相
当するゾル濃度において0.033mg「PH２処理
IgG」／mlの濃度が最適値であると判明し
た。原IgGと「PH２処理IgG」とに基づく複
合体を比較すると凝集試験における反応性に
関し後者の利点が明瞭に示された。
（HCG）の比色測定（凝集試験；方法２）。 12.1 染料ゾルの調製 1.1項参照。 12.2 DIA／凝集に対する一般的試験手順 染料−免疫グロブリン複合体（２ml）をガラ
ス製もしくはポリスチレン製キユベツト中にピ
ペツトで入れ、FFB（1.4項参照）中に溶解させ
た抗原試料0.2mlまたはFFBのみ0.2mlおよび蒸
留水0.2mlまたは蒸留水中MgSO4の溶液0.2mlと
混合した。キユベツトを室温に保ち（撹拌な
し）、一定時間間隔の後に吸光度を測定した
（事前撹拌なし）。抗原は染料ゾル粒子の凝集を
ひき起こし、これは有効粒子寸法自身の増大と
同時的な凝集物の沈降とに基づき吸光度の減少
をもたらした。その他の実験は全てHCGの測
定に関するものである。 12.3 兎（抗−HCG）IgG／染料複合体の調製 標準的手順：11.2項参照。 最適化は、次のパラメータを検討して行なつ
た。 12.3.1 BSAによる複合体の二次的被覆 DIA／サンドイツチのための複合体を、非
特異的効果を減少させるために、BSAによ
り二次的に被覆した。複合体のこの余分の被
覆はその安定性を確実に改善し、したがつて
複合体をDIA／凝集に使用するには不利であ
ろう。種々異なる量のBSAで被覆した或い
はBSAを含まない複合体を凝集分析におい
て比較した。BSAを含まない複合体は最短
試験時間において最も高い感度と最も低い検
出限界とをもたらし、一定の盲検値を与える
にはまだ充分に安定であつた。 12.3.2 複合体調製の際の最適IgG濃度 被覆の際異なるIgG濃度を用いてパラニル
ＲレツトBF／抗−HCG複合体を調製し、
5IU／ml試料（または0.42IU／ml全試料容
量）の一定HCG濃度を用いて凝集分析で選
別した。複合対調製の際の最適IgG濃度は、
Ａ１cm 530＝５に相当するゾル濃度において
0.033mg／ml反応混合物であることが判つた。 12.3.3 複合体調製に先立ちIgGをPH2.0で培養す
る効果 兎抗−HCGIgGの溶液（５ミリモル
NaCl／PH7.0中４〜５mg／ml）をPH2.0に調
整して４℃で１時間培養し；PHを7.4に再調
整してIgG溶液を複合体調製のため使用し
た。複合体合成の際「PH２処理IgG」の濃度
を変化させ、そして各種の複合体を12.3.2項
に記載したように選別した。Ａ１cm 530＝５に相
当するゾル濃度において0.033mg「PH２処理
IgG」／mlの濃度が最適値であると判明し
た。原IgGと「PH２処理IgG」とに基づく複
合体を比較すると凝集試験における反応性に
関し後者の利点が明瞭に示された。
【表】
12.3.4 複合体の反応性に対する添加物の効果試
料の添加に先立つて複合体に脱安定化剤（た
とえばMgSO4）を添加すれば、特にそれ自
身高度に安定な複合体の場合、反応時間にお
ける減少および／または凝集分析の検出限界
における低下がもたらされる。染料バツチ
5228513（粉末）および4742893（湿潤分散物）
に基づく抗−HCG／パラニルRレツドBF複
合体を、０〜20ミリモルMgSO4／全試験
混合物の最終濃度範囲を与えるMgSO4の希
釈系列と共に培養し、一定時間間隔でＡ１cm 530
の値を測定した。それぞれ1.2および9.5ミリ
モルMgSO4／全試験混合物の濃度は、複
合体の適当な安定性に反しないことが見出さ
れた（２時間後における0.1〜0.2未満のＡ１cm 530の減少）。FFBにおけるHCGの希釈系列
（1.4項参照；０〜5IU／ml試料）を抗−
HCG／パラニルRレツドBF（4742893）複合
体と共に、9.5ミリモル／全試験混合物を
用いてまたは用いずに培養した。MgSO4を
用いない複合体は盲検と比較してＡ１cm 530にお
いて極く僅かの減少を与えたのに対し、
MgSO4が存在すれば盲検とは著しく異なる
吸光度の減少が観察される。
料の添加に先立つて複合体に脱安定化剤（た
とえばMgSO4）を添加すれば、特にそれ自
身高度に安定な複合体の場合、反応時間にお
ける減少および／または凝集分析の検出限界
における低下がもたらされる。染料バツチ
5228513（粉末）および4742893（湿潤分散物）
に基づく抗−HCG／パラニルRレツドBF複
合体を、０〜20ミリモルMgSO4／全試験
混合物の最終濃度範囲を与えるMgSO4の希
釈系列と共に培養し、一定時間間隔でＡ１cm 530
の値を測定した。それぞれ1.2および9.5ミリ
モルMgSO4／全試験混合物の濃度は、複
合体の適当な安定性に反しないことが見出さ
れた（２時間後における0.1〜0.2未満のＡ１cm 530の減少）。FFBにおけるHCGの希釈系列
（1.4項参照；０〜5IU／ml試料）を抗−
HCG／パラニルRレツドBF（4742893）複合
体と共に、9.5ミリモル／全試験混合物を
用いてまたは用いずに培養した。MgSO4を
用いない複合体は盲検と比較してＡ１cm 530にお
いて極く僅かの減少を与えたのに対し、
MgSO4が存在すれば盲検とは著しく異なる
吸光度の減少が観察される。
【表】
12.3.5 「PH２処理IgG」に基づきかつMgSO4の
存在下における抗−HCG／パラニルRレツド
BF複合体の反応性 12.3.3／12.3.4に記載した組合せ効果を、
パラニルRレツドBF複合体（湿潤および乾燥
市販調製物に基づく）およびFFBにおける
HCG希釈系列（０〜4IU／ml試料）につい
て検討した。得られた検出限界〔（BL−２×
SD）に等しい応答を与えるHCGの濃度とし
て定義される〕は次のように要約される： −パラニルRレツドBF120IU／（20時間）
5228513（粉末）400IU／（４時間） −パラニルRレツドBF280IU／（20時間）
4742893（分散物）1300IU／（４時間）
SPIA／凝集の検出限界は100IU／であ
つ（２時間後の比色検出）。 12.3.6 複合体反応性に対する粒子寸法の効果 これまでの実験は全て、全染料分散物の一
つのフラクシヨンのみ、すなわち上澄液中に
1000〜1100ｇ（9800〜10800N／Kg）にて残
存する物質を用いて行ない、この物質は大凡
直径0.2μｍの粒子寸法に相当する。粒子寸
法の効果を、パラニルRレツドBFの異なる
「ｇ−フラクシヨン」の抗−HCG複合体を調
製しかつこれらをHCG凝集分析で試験する
ことにより検討した。顕著な効果が観察され
（第４図参照）、1500ｇと2500ｇとの間で単離
された染料フラクシヨンについて最適結果が
得らえた。 実施例 13 分散染料／免疫グロブリン複合体の凍結乾燥；
安定性。 パラニルRレツドBF／兎抗−HCG複合体を、
次の成分を含有する水性分散物（Ａ１cm 530５）か
ら凍結乾燥させた： ５ミリモルNaCl ５ｇBSA １ｇナトリウムマーシオレート１当り 2.5ｇデキストラン（分子量40000ダルトン）PH
7.0 5.0ｇ乳糖 再編した乾燥複合体は、初期湿潤調製物と比較
して、何らの反応性損失を示さなかつた。この複
合体は、−20℃、４℃および室温において少なく
とも2.5ケ月の間、その免疫反応性を保持した。
2.5ケ月／37℃の後には活性における若干の損失
が見られ、2.5ケ月／45℃の後には著しい損失が
見られた。
存在下における抗−HCG／パラニルRレツド
BF複合体の反応性 12.3.3／12.3.4に記載した組合せ効果を、
パラニルRレツドBF複合体（湿潤および乾燥
市販調製物に基づく）およびFFBにおける
HCG希釈系列（０〜4IU／ml試料）につい
て検討した。得られた検出限界〔（BL−２×
SD）に等しい応答を与えるHCGの濃度とし
て定義される〕は次のように要約される： −パラニルRレツドBF120IU／（20時間）
5228513（粉末）400IU／（４時間） −パラニルRレツドBF280IU／（20時間）
4742893（分散物）1300IU／（４時間）
SPIA／凝集の検出限界は100IU／であ
つ（２時間後の比色検出）。 12.3.6 複合体反応性に対する粒子寸法の効果 これまでの実験は全て、全染料分散物の一
つのフラクシヨンのみ、すなわち上澄液中に
1000〜1100ｇ（9800〜10800N／Kg）にて残
存する物質を用いて行ない、この物質は大凡
直径0.2μｍの粒子寸法に相当する。粒子寸
法の効果を、パラニルRレツドBFの異なる
「ｇ−フラクシヨン」の抗−HCG複合体を調
製しかつこれらをHCG凝集分析で試験する
ことにより検討した。顕著な効果が観察され
（第４図参照）、1500ｇと2500ｇとの間で単離
された染料フラクシヨンについて最適結果が
得らえた。 実施例 13 分散染料／免疫グロブリン複合体の凍結乾燥；
安定性。 パラニルRレツドBF／兎抗−HCG複合体を、
次の成分を含有する水性分散物（Ａ１cm 530５）か
ら凍結乾燥させた： ５ミリモルNaCl ５ｇBSA １ｇナトリウムマーシオレート１当り 2.5ｇデキストラン（分子量40000ダルトン）PH
7.0 5.0ｇ乳糖 再編した乾燥複合体は、初期湿潤調製物と比較
して、何らの反応性損失を示さなかつた。この複
合体は、−20℃、４℃および室温において少なく
とも2.5ケ月の間、その免疫反応性を保持した。
2.5ケ月／37℃の後には活性における若干の損失
が見られ、2.5ケ月／45℃の後には著しい損失が
見られた。
第１図は燐酸塩緩衝液および尿におけるDIA−
サンドイツチに従うHCGの標準曲線を示すグラ
フ、第２図はHCG−HPL組合せ複合体に対する
同時的DIA／サンドイツチを示すグラフ、第３図
はそれぞれ0.1および5IU HCG／mlの存在下に室
温で20時間培養した後の、パラニルRレツドBFゾ
ル／兎抗−HCG免疫グロブリン複合体のスペク
トルを示すグラフ、第４図は複合体反応性（パラ
ニル・レツドBFバツチ8722293）に対する粒子寸
法の効果を示すグラフ〔HCGに対するDIA／凝
集〕、第５図は本発明の実施例（9.2.2.a）に記載
された方法により調製したトランスフアー染料ル
ラフイツクス・レツドBFのゾルの走査電子顕微
鏡写真（倍率：15000倍）、第６図は本発明の実施
例（9.2.2.b）に記載された方法により調製したト
ランスフアー染料ルラフイツクス・レツドBFの
ゾルの走査電子顕微鏡写真（倍率：15000倍であ
る）。
サンドイツチに従うHCGの標準曲線を示すグラ
フ、第２図はHCG−HPL組合せ複合体に対する
同時的DIA／サンドイツチを示すグラフ、第３図
はそれぞれ0.1および5IU HCG／mlの存在下に室
温で20時間培養した後の、パラニルRレツドBFゾ
ル／兎抗−HCG免疫グロブリン複合体のスペク
トルを示すグラフ、第４図は複合体反応性（パラ
ニル・レツドBFバツチ8722293）に対する粒子寸
法の効果を示すグラフ〔HCGに対するDIA／凝
集〕、第５図は本発明の実施例（9.2.2.a）に記載
された方法により調製したトランスフアー染料ル
ラフイツクス・レツドBFのゾルの走査電子顕微
鏡写真（倍率：15000倍）、第６図は本発明の実施
例（9.2.2.b）に記載された方法により調製したト
ランスフアー染料ルラフイツクス・レツドBFの
ゾルの走査電子顕微鏡写真（倍率：15000倍であ
る）。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 免疫化学的反応成分の免疫化学的反応性を使
用して水性試験媒体中における該免疫化学的反応
成分を定性的および／または定量的に測定するに
際し、疎水性染料もしくは顔料または該染料もし
くは顔料で被覆された重合体核の水性分散物のゾ
ル粒子に前記成分をそれぞれ直接にまたは間接的
に付着させて得られる一種もしくはそれ以上の標
識された該免疫化学的反応成分を使用し、それに
より免疫化学反応の所定反応時間の際またはその
後、必要に応じて遊離および結合標識成分を分離
した後、試験媒体中でまたは分離後に得られるフ
ラクシヨンの一つにおいて染料の性質および／ま
たは量を測定し、この測定は測定すべき免疫化学
的反応成分の定性的および／または定量的指示を
与えることを特徴とする、免疫化学的反応成分の
定性的および／または定量的測定方法。 ２ 肉眼的にまたは測定により、染料ゾルの物理
化学的変化を確定することによつて検出を行なう
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３ ２種もしくはそれ以上の免疫化学的反応成分
を同時に測定し、指示すべきまたは測定すべき各
成分につき対応する免疫化学的反応成分を使用
し、この成分を、分光的におよび／または肉眼的
に互いに明確に区別しうる発色団を用いることに
より、前記成分に特性的な染料ゾル粒子で標識す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項または
第２項記載の方法。 ４ 染料もしくは顔料の分散物に所定量の標識す
べき免疫化学的反応成分を加えることにより標識
成分を得、前記成分は分散粒子を完全にまたは部
分的に包封し、その後必要に応じ対応の測定に対
し免疫化学的に不活性である極性巨大分子によつ
て補助的被覆を行なうことを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の方法。 ５ 染料もしくは顔料の分散物に、対応の測定に
対し免疫化学的に不活性であると共にゾル粒子を
被覆する１種もしくはそれ以上の巨大分子を加え
ることにより標識成分を得、その後できれば生物
特異的な吸着によりまたは共有結合を介して免疫
化学的反応成分を被覆材料に付着させることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６ 染料および／または有機顔料ゾルを単量体の
環境中に入れ、これをその場で重合もしくは共重
合させてゾル粒子を包封し、次いで免疫化学的反
応成分を重合体物質に吸着または共有結合させる
ことにより標識成分を得ることを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載の方法。 ７ 燃料および／または免疫化学的反応成分にお
ける適当な官能基の事前の化学的活性化による
か、または反応性（分散）染料として公知の有機
疎水性発色団と反応性基ととの合体を使用するこ
とにより免疫化学的反応成分をコロイド染料粒子
に共有結合させて標識成分を得ることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８ 染料および／または有機顔料のゾル粒子を先
ず親水性巨大分子によつて保護し、その後無機開
始剤の作用下に（共）重合を行なわせることを特
徴とする特許請求の範囲第５項記載の方法。 ９ 免疫化学的反応成分を疎水性染料もしくは顔
料のまたは該染料もしくは顔料で被覆された重合
体核の水性分散物のゾル粒子に直接または間接的
に付着させることを特徴とする測定方法に使用し
うる新規な免疫化学的試薬の製造方法。 １０ 直接にまたは間接的に免疫化学的反応成分
を付着させた、疎水性染料もしくは顔料または該
染料もしくは顔料で被覆された重合体核の水性分
散物のゾル粒子からなることを特徴とする新規な
免疫化学的試薬。 １１ 免疫化学的反応成分を疎水性染料もしくは
顔料または該染料もしくは顔料で被覆された重合
体核の水性分散物のゾル粒子に直接にまたは間接
的に付着させて得られた一種もしくはそれ以上の
標識された免疫化学的反応成分を含有することを
特徴とする凍結乾燥もしくは噴霧乾燥された試
薬。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8000173A NL8000173A (nl) | 1980-01-11 | 1980-01-11 | Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56160655A JPS56160655A (en) | 1981-12-10 |
| JPH0322586B2 true JPH0322586B2 (ja) | 1991-03-27 |
Family
ID=19834655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP160781A Granted JPS56160655A (en) | 1980-01-11 | 1981-01-08 | Method of measuring immunochemical reactant and kit and reagent therefor |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4373932A (ja) |
| EP (1) | EP0032270B1 (ja) |
| JP (1) | JPS56160655A (ja) |
| AT (1) | ATE13098T1 (ja) |
| AU (1) | AU534775B2 (ja) |
| CA (1) | CA1143654A (ja) |
| DE (1) | DE3070604D1 (ja) |
| DK (1) | DK155968C (ja) |
| ES (1) | ES498430A0 (ja) |
| FI (1) | FI74820C (ja) |
| GR (1) | GR73163B (ja) |
| HU (1) | HU183283B (ja) |
| IE (1) | IE50655B1 (ja) |
| IL (1) | IL61864A (ja) |
| MX (1) | MX161039A (ja) |
| NL (1) | NL8000173A (ja) |
| PT (1) | PT72329B (ja) |
| ZA (1) | ZA8174B (ja) |
Families Citing this family (154)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5622871A (en) * | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
| DE2915309A1 (de) * | 1979-04-14 | 1980-10-30 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von anti-hyaluronidase und hierfuer verwendbares mittel |
| DK256581A (da) * | 1980-06-13 | 1981-12-14 | Nat Res Dev | Bindingsanalyse |
| US4419453A (en) * | 1981-09-28 | 1983-12-06 | The Dow Chemical Company | Immunological agglutination assays with dyed or colored latex and kits |
| USRE32011E (en) * | 1981-12-14 | 1985-10-22 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| AU580263B2 (en) * | 1983-06-10 | 1989-01-12 | Yale University | Novel visualization polymers and their application to diagnostic medicine |
| US4687732A (en) * | 1983-06-10 | 1987-08-18 | Yale University | Visualization polymers and their application to diagnostic medicine |
| US4500788A (en) * | 1983-08-19 | 1985-02-19 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Device for providing antibacterial radiation |
| US4703017C1 (en) * | 1984-02-14 | 2001-12-04 | Becton Dickinson Co | Solid phase assay with visual readout |
| JPH0634014B2 (ja) * | 1984-05-17 | 1994-05-02 | 日本合成ゴム株式会社 | 免疫診断用着色粒子 |
| GB8415998D0 (en) * | 1984-06-22 | 1984-07-25 | Janssen Pharmaceutica Nv | Staining method |
| US4745075A (en) * | 1984-09-06 | 1988-05-17 | Burroughs Wellcome Co. | Diagnostic test methods |
| US4735907A (en) * | 1985-03-18 | 1988-04-05 | Eastman Kodak Company | Stabilized fluorescent rare earth labels and labeled physiologically reactive species |
| JPS61292556A (ja) * | 1985-06-20 | 1986-12-23 | Green Cross Corp:The | 酵素免疫測定方法およびキツト |
| US5501949A (en) * | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
| DE3545252A1 (de) * | 1985-12-20 | 1987-08-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von testosteron sowie hierzu geeignete monoklonale antikoerper |
| CA1291031C (en) * | 1985-12-23 | 1991-10-22 | Nikolaas C.J. De Jaeger | Method for the detection of specific binding agents and their correspondingbindable substances |
| FR2592717B1 (fr) * | 1986-01-07 | 1989-06-02 | Robert Raymond | Reactif et procede nouveau pour la detection d'un element contenu dans un milieu biologique mettant en jeu la production d'un complexe agglutinable, tel qu'un complexe antigene-anticorps |
| US4780421A (en) * | 1986-04-03 | 1988-10-25 | Sclavo Inc. | Cleavable labels for use in binding assays |
| JPH0611870B2 (ja) | 1986-06-27 | 1994-02-16 | 徳山曹達株式会社 | 無機化合物／染料複合体粒子 |
| US4786589A (en) * | 1986-08-18 | 1988-11-22 | Huntington Medical Research Institute | Immunoassay utilizing formazan-prelabeled reactants |
| US4891324A (en) * | 1987-01-07 | 1990-01-02 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle with luminescer for assays |
| USRE38430E1 (en) | 1987-03-27 | 2004-02-17 | Becton, Dickinson And Company | Solid phase chromatographic immunoassay |
| EP0560410B1 (en) | 1987-04-27 | 2002-10-02 | Inverness Medical Switzerland GmbH | A test device for performing specific binding assays |
| US4962023A (en) * | 1987-06-22 | 1990-10-09 | Louisiana State University, Agricultural And Mechanical College | Single incubation immuno sorbent assay method using particle labels to detect test antigen specific antibodies in presence of other antibodies |
| US4954452A (en) * | 1987-07-09 | 1990-09-04 | Abbott Laboratories | Non-metal colloidal particle immunoassay |
| US5120643A (en) * | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
| US4853335A (en) * | 1987-09-28 | 1989-08-01 | Olsen Duane A | Colloidal gold particle concentration immunoassay |
| US4978625A (en) * | 1987-10-19 | 1990-12-18 | Becton, Dickinson And Company | Fluorescence immunoassay using water insoluble dyes |
| NL8702769A (nl) * | 1987-11-19 | 1989-06-16 | Holland Biotechnology | Werkwijze voor het bepalen in een testmonster van componenten van de reactie tussen een specifiek bindend eiwit en de bijbehorende bindbare stof onder toepassing van ten minste een gemerkte component, werkwijze voor het bereiden van de gemerkte component, en testkit voor de bepaling van immunocomponenten. |
| US5620845A (en) * | 1988-06-06 | 1997-04-15 | Ampcor, Inc. | Immunoassay diagnostic kit |
| AU2684488A (en) | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
| US4963478A (en) * | 1988-07-05 | 1990-10-16 | Immucor, Inc. | Article for preforming immunological assays utilizing organic dyes and method for producing and utilizing same |
| US5252459A (en) * | 1988-09-23 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles |
| EP0369515B1 (en) * | 1988-11-14 | 1995-10-11 | Akzo Nobel N.V. | Aqueous suspension for diagnostic tests |
| US6352862B1 (en) | 1989-02-17 | 2002-03-05 | Unilever Patent Holdings B.V. | Analytical test device for imuno assays and methods of using same |
| US5075078A (en) * | 1989-10-05 | 1991-12-24 | Abbott Laboratories | Self-performing immunochromatographic device |
| US5252496A (en) * | 1989-12-18 | 1993-10-12 | Princeton Biomeditech Corporation | Carbon black immunochemical label |
| KR910014706A (ko) * | 1990-01-10 | 1991-08-31 | 원본미기재 | 세척이 필요없는 개량된 이뮤노어세이(immunoassay)장치 |
| US5141850A (en) * | 1990-02-07 | 1992-08-25 | Hygeia Sciences, Inc. | Porous strip form assay device method |
| US5096837A (en) * | 1990-02-08 | 1992-03-17 | Pacific Biotech, Inc. | Immunochromatographic assay and method of using same |
| US5223220A (en) * | 1990-03-27 | 1993-06-29 | Pacific Biotech, Inc. | Solid phase immunoassay device and method of making same |
| US6168956B1 (en) | 1991-05-29 | 2001-01-02 | Beckman Coulter, Inc. | Multiple component chromatographic assay device |
| US5998220A (en) | 1991-05-29 | 1999-12-07 | Beckman Coulter, Inc. | Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them |
| US5877028A (en) | 1991-05-29 | 1999-03-02 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Immunochromatographic assay device |
| DE69229960T2 (de) * | 1991-12-13 | 2000-01-05 | Bion Diagnostic Sciences Inc | Agglutierungsassays und kolloide farbstoffe verwendende testsätze |
| US5518887A (en) * | 1992-03-30 | 1996-05-21 | Abbott Laboratories | Immunoassays empolying generic anti-hapten antibodies and materials for use therein |
| US5395754A (en) * | 1992-07-31 | 1995-03-07 | Hybritech Incorporated | Membrane-based immunoassay method |
| US5354692A (en) * | 1992-09-08 | 1994-10-11 | Pacific Biotech, Inc. | Analyte detection device including a hydrophobic barrier for improved fluid flow |
| JPH06227955A (ja) * | 1992-12-08 | 1994-08-16 | Kanebo Ltd | 染毛剤又は化粧料及び前処理剤並びに染毛方法 |
| FI92882C (fi) * | 1992-12-29 | 1995-01-10 | Medix Biochemica Ab Oy | Kertakäyttöinen testiliuska ja menetelmä sen valmistamiseksi |
| US5424193A (en) * | 1993-02-25 | 1995-06-13 | Quidel Corporation | Assays employing dyed microorganism labels |
| US5837546A (en) | 1993-08-24 | 1998-11-17 | Metrika, Inc. | Electronic assay device and method |
| US5561045A (en) * | 1994-01-04 | 1996-10-01 | Intracel Corporation | Detection reagent, article, and immunoassay method |
| US5547833A (en) * | 1994-01-04 | 1996-08-20 | Intracel Corporation | Radial flow assay, delivering member, test kit, and methods |
| EP0724909A1 (en) | 1994-11-28 | 1996-08-07 | Akzo Nobel N.V. | Sample collection device |
| US5712172A (en) | 1995-05-18 | 1998-01-27 | Wyntek Diagnostics, Inc. | One step immunochromatographic device and method of use |
| US6319676B1 (en) | 1995-05-02 | 2001-11-20 | Carter Wallace, Inc. | Diagnostic detection device and method |
| US7635597B2 (en) | 1995-08-09 | 2009-12-22 | Bayer Healthcare Llc | Dry reagent particle assay and device having multiple test zones and method therefor |
| US5968839A (en) * | 1996-05-13 | 1999-10-19 | Metrika, Inc. | Method and device producing a predetermined distribution of detectable change in assays |
| US5945345A (en) * | 1996-08-27 | 1999-08-31 | Metrika, Inc. | Device for preventing assay interference using silver or lead to remove the interferant |
| US6001658A (en) * | 1996-09-13 | 1999-12-14 | Diagnostic Chemicals Limited | Test strip apparatus and method for determining presence of analyte in a fluid sample |
| US6194221B1 (en) * | 1996-11-19 | 2001-02-27 | Wyntek Diagnostics, Inc. | Hybrid one-step immunochromatographic device and method of use |
| US6979576B1 (en) * | 1997-07-25 | 2005-12-27 | Shu-Ching Cheng | Methods of use of one step immunochromatographic device for Streptococcus A antigen |
| US20050101032A1 (en) * | 1997-02-10 | 2005-05-12 | Metrika, Inc. | Assay device, composition, and method of optimizing assay sensitivity |
| US5969102A (en) | 1997-03-03 | 1999-10-19 | St. Jude Children's Research Hospital | Lymphocyte surface receptor that binds CAML, nucleic acids encoding the same and methods of use thereof |
| US6103536A (en) | 1997-05-02 | 2000-08-15 | Silver Lake Research Corporation | Internally referenced competitive assays |
| JP2001514388A (ja) * | 1997-08-29 | 2001-09-11 | ファーティリティー・アコースティックス・インコーポレーテッド | 生物学的試料中の分析物を迅速に分析する方法及び装置 |
| US6394952B1 (en) * | 1998-02-03 | 2002-05-28 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
| US6267722B1 (en) | 1998-02-03 | 2001-07-31 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
| EP1062508A1 (en) * | 1998-03-20 | 2000-12-27 | The Rockefeller University | Assays for screening compounds which interact with cation channel proteins, mutant prokaryotic cation channel proteins, and uses thereof |
| US20060019404A1 (en) * | 1998-05-06 | 2006-01-26 | Blatt Joel M | Quantitative assay with extended dynamic range |
| US6824997B1 (en) | 1998-09-18 | 2004-11-30 | Binax, Inc. | Process and materials for the rapid detection of streptococcus pneumoniae employing purified antigen-specific antibodies |
| US20080096236A1 (en) * | 1998-08-25 | 2008-04-24 | Binax, Inc. | Method for Detecting the Presence of Target Bacteria or a Target Component Carbohydrate Antigen Thereof |
| US9134303B1 (en) | 1998-08-25 | 2015-09-15 | Alere Scarborough, Inc. | ICT immunoassay for Legionella pneumophila serogroup 1 antigen employing affinity purified antibodies thereto |
| US6699722B2 (en) | 2000-04-14 | 2004-03-02 | A-Fem Medical Corporation | Positive detection lateral-flow apparatus and method for small and large analytes |
| EP1302770A4 (en) * | 2000-07-14 | 2004-09-15 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | PARTICLE MARKING PROTEIN AND IMMUNO-CHROMATOGRAPHER USING THE SAME |
| DE60138953D1 (de) * | 2000-08-10 | 2009-07-23 | Biomerieux Bv | Diagnostischer test auf basis von bewegenden tropfen |
| US6777198B2 (en) | 2000-10-11 | 2004-08-17 | Pharmacia Diagnostics Ab | Assay method and kit therefor |
| ES2545526T3 (es) * | 2001-02-01 | 2015-09-11 | Sigma-Aldrich Co. Llc | Matrices de afinidad mejorada con visibilidad mejorada para aplicaciones de arrastre molecular e inmunoprecipitación |
| US7291477B2 (en) | 2001-07-03 | 2007-11-06 | Xenotope Diagnostics, Inc. | Method and device for trichomonas detection |
| IL160307A0 (en) | 2001-08-31 | 2004-07-25 | Univ Rockefeller | Phosphodiesterase activity and regulation of phosphodiesterase 1-b-mediated signaling in brain |
| US6855561B2 (en) * | 2001-09-10 | 2005-02-15 | Quidel Corporation | Method for adding an apparent non-signal line to a lateral flow assay |
| US6867005B2 (en) | 2001-10-24 | 2005-03-15 | Beckman Coulter, Inc. | Method and apparatus for increasing the dynamic range and accuracy of binding assays |
| WO2003057165A2 (en) | 2002-01-04 | 2003-07-17 | The Rockefeller University | COMPOSITIONS AND METHODS FOR PREVENTION AND TREATMENT OF AMYLOID-β PEPTIDE-RELATED DISORDERS |
| JP2004069677A (ja) * | 2002-06-13 | 2004-03-04 | Canon Inc | 免疫学的測定方法、免疫学的測定用試薬及びその製造方法 |
| PT1535068E (pt) | 2002-08-13 | 2010-07-01 | N Dia Inc | DISPOSITIVOS E MéTODOS PARA DETECTAR FLUIDO AMNIËTICO EM SECREÃES VAGINAIS |
| WO2004033101A1 (en) * | 2002-10-11 | 2004-04-22 | Zbx Corporation | Diagnostic devices |
| US6900058B2 (en) * | 2003-03-11 | 2005-05-31 | Bionostics, Inc. | Control solution for photometric analysis |
| EP1664781B1 (en) | 2003-09-22 | 2013-05-08 | Quidel Corporation | Devices for the detection of multiple analytes in a sample |
| US20050148005A1 (en) * | 2003-12-12 | 2005-07-07 | Pasha Emadi-Konjin | Dye solubilization binding assay |
| US7150995B2 (en) * | 2004-01-16 | 2006-12-19 | Metrika, Inc. | Methods and systems for point of care bodily fluid analysis |
| US20050255533A1 (en) * | 2004-02-10 | 2005-11-17 | Brendan Bioscience, Llc | Comprehensive food allergy test |
| US20050227370A1 (en) * | 2004-03-08 | 2005-10-13 | Ramel Urs A | Body fluid analyte meter & cartridge system for performing combined general chemical and specific binding assays |
| US7632687B2 (en) * | 2004-03-23 | 2009-12-15 | Quidel Corporation | Hybrid phase lateral flow assay |
| FR2870139B1 (fr) * | 2004-05-14 | 2006-07-07 | Luc Doublet | Moyens pour la coloration de supports |
| US20060040258A1 (en) * | 2004-08-23 | 2006-02-23 | Huiyan Guo | Water-soluble conjugates and methods of preparation |
| EP2295973A1 (en) | 2004-09-08 | 2011-03-16 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Compositions and methods for the detection of HIV-1/HIV-2 infection. |
| US7709208B2 (en) * | 2004-11-08 | 2010-05-04 | New York University | Methods for diagnosis of major depressive disorder |
| EP2395109A1 (en) | 2004-12-08 | 2011-12-14 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Method for measuring resistance or sensitivity to docetaxel |
| US7387890B2 (en) * | 2004-12-16 | 2008-06-17 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay devices and use thereof |
| WO2006098804A2 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-21 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| US7189522B2 (en) * | 2005-03-11 | 2007-03-13 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| US20060205090A1 (en) * | 2005-03-14 | 2006-09-14 | Newton Michael W | Water-soluble conjugates for electrochemical detection |
| BRPI0618713B8 (pt) | 2005-11-18 | 2021-07-27 | The Government Of The United State Of America Representado Por The Secretary Of The Dept Of Health A | cardiolipina modificada e seus usos |
| US9056291B2 (en) | 2005-11-30 | 2015-06-16 | Micronics, Inc. | Microfluidic reactor system |
| US7763453B2 (en) | 2005-11-30 | 2010-07-27 | Micronics, Inc. | Microfluidic mixing and analytic apparatus |
| US20090053694A1 (en) * | 2005-12-26 | 2009-02-26 | Kriksunov Leo B | Photochemically Amplified Bioassay |
| US7794656B2 (en) * | 2006-01-23 | 2010-09-14 | Quidel Corporation | Device for handling and analysis of a biological sample |
| US7871568B2 (en) * | 2006-01-23 | 2011-01-18 | Quidel Corporation | Rapid test apparatus |
| EP2041573B1 (en) * | 2006-06-23 | 2019-09-04 | PerkinElmer Health Sciences, Inc. | Methods and devices for microfluidic point-of-care immunoassays |
| US7569396B1 (en) | 2006-09-08 | 2009-08-04 | Purplecow Llc | Caffeine detection using internally referenced competitive assays |
| US7919331B2 (en) * | 2006-12-21 | 2011-04-05 | Silver Lake Research Corporation | Chromatographic test strips for one or more analytes |
| US8603467B2 (en) | 2007-06-15 | 2013-12-10 | Xiamen University | Monoclonal antibodies binding to avian influenza virus subtype H5 haemagglutinin and uses thereof |
| US20090196852A1 (en) * | 2008-02-04 | 2009-08-06 | Watkinson D Tobin | Compositions and methods for diagnosing and treating immune disorders |
| DE102009010563A1 (de) | 2009-02-16 | 2010-08-26 | Matthias W. Engel | Vorrichtung zum Nachweis von Analyten in Körperflüssigkeiten |
| ES2495367T3 (es) | 2009-04-29 | 2014-09-17 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Anticuerpos monoclonales de ERG |
| US8168396B2 (en) | 2009-05-11 | 2012-05-01 | Diabetomics, Llc | Methods for detecting pre-diabetes and diabetes using differential protein glycosylation |
| US8980546B2 (en) | 2009-05-21 | 2015-03-17 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Method for the detection of HIV-1-specific antibodies utilizing a Vpu polypeptide |
| US20120225496A1 (en) * | 2009-11-17 | 2012-09-06 | Satoru Yoshida | Organic colored microparticles, diagnostic reagent kit containing the same, and in vitro diagnosis method |
| CN102740976B (zh) | 2010-01-29 | 2016-04-20 | 精密公司 | 取样-应答微流体盒 |
| WO2012012500A1 (en) | 2010-07-20 | 2012-01-26 | Nurx Pharmaceuticals, Inc. | Optical reader systems and lateral flow assays |
| WO2012012499A1 (en) | 2010-07-20 | 2012-01-26 | Nurx Pharmaceuticals, Inc. | Optical reader system |
| US8956859B1 (en) | 2010-08-13 | 2015-02-17 | Aviex Technologies Llc | Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines |
| US8486717B2 (en) | 2011-01-18 | 2013-07-16 | Symbolics, Llc | Lateral flow assays using two dimensional features |
| US8703439B1 (en) | 2011-01-31 | 2014-04-22 | Linda Lester | Point of care iodine sensor |
| US8603835B2 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-10 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Reduced step dual path immunoassay device and method |
| EP2492279A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-08-29 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Rapid immunogen selection method using lentiviral display |
| EP2606897A1 (en) | 2011-12-22 | 2013-06-26 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Methods and compositions for the treatment of diseases caused by enveloped viruses |
| JP6190822B2 (ja) | 2012-01-09 | 2017-08-30 | マイクロニクス， インコーポレイテッド | マイクロ流体リアクタシステム |
| EP2812704A4 (en) | 2012-02-07 | 2016-03-23 | Intuitive Biosciences Inc | KOCH BACILLUS SPECIFIC PEPTIDES FOR THE DETECTION OF INFECTION OR IMMUNIZATION IN NON-HUMAN PRIMATES |
| US9874556B2 (en) | 2012-07-18 | 2018-01-23 | Symbolics, Llc | Lateral flow assays using two dimensional features |
| EP2698377A1 (en) | 2012-08-17 | 2014-02-19 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Enhanced rapid immunogen selection method for HIV gp120 variants |
| EP2935908B1 (en) | 2012-12-21 | 2019-08-14 | PerkinElmer Health Sciences, Inc. | Fluidic circuits and related manufacturing methods |
| KR20150097764A (ko) | 2012-12-21 | 2015-08-26 | 마이크로닉스 인코포레이티드. | 휴대형 형광 검출 시스템 및 미량분석 카트리지 |
| KR20150096788A (ko) | 2012-12-21 | 2015-08-25 | 마이크로닉스 인코포레이티드. | 마이크로 유체공학 용도를 위한 저탄성 막 |
| US20140234987A1 (en) | 2013-01-02 | 2014-08-21 | N-Dia, Inc. | Methods for predicting time-to-delivery in pregnant women |
| EP4079760A3 (en) | 2013-03-15 | 2023-01-25 | Sanofi Pasteur Inc. | Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same |
| AU2014262726B2 (en) | 2013-05-07 | 2019-09-19 | Perkinelmer Health Sciences, Inc. | Device for preparation and analysis of nucleic acids |
| AU2014262710B2 (en) | 2013-05-07 | 2019-09-12 | Perkinelmer Health Sciences, Inc. | Methods for preparation of nucleic acid-containing samples using clay minerals and alkaline solutions |
| US10386377B2 (en) | 2013-05-07 | 2019-08-20 | Micronics, Inc. | Microfluidic devices and methods for performing serum separation and blood cross-matching |
| CN108051590B (zh) | 2013-09-13 | 2020-12-11 | Symbolics有限责任公司 | 运用二维试验和对照信号读出模式的侧向层析检测 |
| WO2015153018A2 (en) | 2014-04-02 | 2015-10-08 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay utilizing trapping conjugate |
| US10534004B2 (en) | 2014-05-02 | 2020-01-14 | Uab Research Foundation | Methods and compositions for diagnosis and treatment of meningitis |
| US20160116466A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-04-28 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses |
| US20180011088A1 (en) | 2015-01-29 | 2018-01-11 | Neogen Corporation | Methods for Immuno Chromatographic Assay Desensitization |
| FI3785799T3 (fi) | 2015-08-06 | 2023-03-23 | Lia Diagnostics Inc | Veteen dispergoituvien määritysten valmistusmenetelmiä |
| US10935555B2 (en) | 2016-12-22 | 2021-03-02 | Qiagen Sciences, Llc | Determining candidate for induction of labor |
| US10656164B2 (en) | 2016-12-22 | 2020-05-19 | Qiagen Sciences, Llc | Screening asymptomatic pregnant woman for preterm birth |
| AU2018223316A1 (en) | 2017-02-21 | 2019-07-25 | Medicortex Finland Oy | Non-invasive brain injury diagnostic device |
| AU2021369448A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-06-22 | Merck Patent Gmbh | Proteins for the detection of schistosoma infection |
| DE102020007953A1 (de) | 2020-12-29 | 2022-06-30 | Wasiliki Tsalastra-Greul | Verfahren zur Bestimmung des Kunststoffpartikelgehalts mit hydrophobem Farbstoff |
| WO2023242155A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Compositions and methods for the diagnosis of hiv infection |
| NL2032668B1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-07 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Means for detecting schistosoma infection |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50160423A (ja) * | 1974-05-29 | 1975-12-25 | ||
| JPS52104591A (en) * | 1975-11-13 | 1977-09-02 | Inst Nat Sante Rech Med | Carrier for organic compounds* process for preparing the same* biological reagent and catalyst containing the same |
Family Cites Families (108)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3449488A (en) * | 1965-10-22 | 1969-06-10 | Bionetics Research Lab Inc | Immunology |
| US3720760A (en) * | 1968-09-06 | 1973-03-13 | Pharmacia Ab | Method for determining the presence of reagin-immunoglobulins(reagin-ig)directed against certain allergens,in aqueous samples |
| US3641235A (en) * | 1968-11-01 | 1972-02-08 | Miles Lab | Immunological reagent and process for making same |
| US4097586A (en) * | 1970-06-11 | 1978-06-27 | Biological Developments, Inc. | Immunochemical assay method |
| US3789116A (en) * | 1970-12-09 | 1974-01-29 | Abbott Lab | Fluorescent labeled antibody reagent |
| SE374686B (ja) * | 1971-01-26 | 1975-03-17 | B O Heger | |
| US3773625A (en) * | 1971-04-08 | 1973-11-20 | Us Army | Soluble antigen-antibody complexes |
| US3900558A (en) * | 1971-06-23 | 1975-08-19 | Richardson Merrell Inc | Method of measuring histamine release from mast cells |
| US3853987A (en) * | 1971-09-01 | 1974-12-10 | W Dreyer | Immunological reagent and radioimmuno assay |
| US3996344A (en) * | 1972-05-15 | 1976-12-07 | Biological Developments, Inc. | Phenethylamine antigenic conjugates, their preparation, antibodies and use |
| US4211766A (en) * | 1972-07-10 | 1980-07-08 | Ab Bonnierforetagen | Cancer associated polypeptide antigen compositions |
| US3941876A (en) * | 1973-04-25 | 1976-03-02 | Gte New Ventures Corporation | In vitro method for determining allergic hypersensitivity |
| US4160019A (en) * | 1973-06-25 | 1979-07-03 | Bjorklund Knut B | Detection of cancer associated polypeptide antigen and preparation of antibodies thereto |
| US4166105A (en) * | 1973-07-30 | 1979-08-28 | Block Engineering, Inc. | Dye tagged reagent |
| US3998943A (en) * | 1973-10-02 | 1976-12-21 | Syva Company | Double receptor fluorescent immunoassay |
| US4161515A (en) * | 1973-10-02 | 1979-07-17 | Syva Company | Double receptor fluorescent immunoassay |
| US3997657A (en) * | 1973-10-15 | 1976-12-14 | American Cyanamid Company | Dry slide reagent employed in immunofluorescent test for detection of human antinuclear factor |
| US3935074A (en) * | 1973-12-17 | 1976-01-27 | Syva Company | Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies |
| GB1451669A (en) * | 1974-01-02 | 1976-10-06 | Radiochemical Centre Ltd | Protein staining |
| US4011308A (en) * | 1974-01-04 | 1977-03-08 | General Electric Company | Method for surface immunological detection of biological particles by the use of tagged antibodies |
| US4108972A (en) * | 1974-03-15 | 1978-08-22 | Dreyer William J | Immunological reagent employing radioactive and other tracers |
| US4016250A (en) * | 1974-03-22 | 1977-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for testing for pregnancy |
| US3939350A (en) * | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
| US3996345A (en) * | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4006360A (en) * | 1974-08-21 | 1977-02-01 | Block Engineering, Inc. | Method of discriminating between dyed particles and background fluorescence of the dye |
| US3992516A (en) * | 1974-10-30 | 1976-11-16 | Sook Kyung Lim | Direct fluorescent antibody composition and method for P. Pneumocystis carinii |
| US3951748A (en) * | 1974-11-11 | 1976-04-20 | Medical Products, Inc. | Sensitized matrix for detection of disease |
| US4169137A (en) * | 1974-12-20 | 1979-09-25 | Block Engineering, Inc. | Antigen detecting reagents |
| GB1533410A (en) | 1974-12-20 | 1978-11-22 | Block Engineering | Antigen detecting reagents |
| SE388694B (sv) * | 1975-01-27 | 1976-10-11 | Kabi Ab | Sett att pavisa ett antigen exv i prov av kroppvetskor, med utnyttjande av till porost berarmaterial bundna eller adsorberande antikroppar |
| US4056724A (en) * | 1975-02-27 | 1977-11-01 | International Diagnostic Technology | Fluorometric system, method and test article |
| US3992631A (en) * | 1975-02-27 | 1976-11-16 | International Diagnostic Technology, Inc. | Fluorometric system, method and test article |
| US4011219A (en) * | 1975-03-28 | 1977-03-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Phthalazine derivatives and salts thereof |
| US4187075A (en) * | 1975-05-26 | 1980-02-05 | Noller Hans G | Method of analyzing biological, liquid specimens for antigens or antibodies |
| US4018884A (en) * | 1975-06-26 | 1977-04-19 | Hoffmann-La Roche Inc. | Fluorogenic materials and labeling techniques |
| US4058732A (en) * | 1975-06-30 | 1977-11-15 | Analytical Radiation Corporation | Method and apparatus for improved analytical fluorescent spectroscopy |
| US4174384A (en) * | 1975-06-30 | 1979-11-13 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4181650A (en) * | 1975-08-25 | 1980-01-01 | Maier Charles L Jr | Procedure for the assay of pharmacologically immunologically and biochemically active compounds in biological fluids |
| US4201763A (en) * | 1975-10-09 | 1980-05-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Solid phase immunofluorescent assay method |
| US4036946A (en) * | 1975-10-20 | 1977-07-19 | Marcos Kleinerman | Immunofluorometric method for measuring minute quantities of antigens, antibodies and other substances |
| US3999948A (en) * | 1975-11-03 | 1976-12-28 | International Diagnostic Technology | Diagnostic reagent holder and method |
| US4020151A (en) * | 1976-02-17 | 1977-04-26 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method for quantitation of antigens or antibodies on a solid surface |
| AR215459A1 (es) * | 1976-04-02 | 1979-10-15 | Brewer J | Metodo para producir un agente terapeutico capaz de proporcionar una marca en un animal no humano para indicar la administracion del agente al animal y para proporcionar tambien un repositorio del agente a ser libeberado durante un espacio de tiempo |
| US4160818A (en) * | 1976-04-15 | 1979-07-10 | Technicon Instruments Corporation | Fluorimetric immunoassay for diphenylhydantoin |
| US4067959A (en) * | 1976-05-10 | 1978-01-10 | International Diagnostic Technology, Inc. | Indirect solid surface test for antigens or antibodies |
| US4025310A (en) * | 1976-05-28 | 1977-05-24 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method for reading a wet fluorescent surface |
| US4069352A (en) * | 1976-07-02 | 1978-01-17 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Immunoadsorbent polymeric material and method of making same |
| GB1582956A (en) * | 1976-07-30 | 1981-01-21 | Ici Ltd | Composite magnetic particles |
| GB1583869A (en) * | 1977-08-19 | 1981-02-04 | Technicon Instr | Competitive binding analysis by fluorescence |
| JPS5344622A (en) * | 1976-09-30 | 1978-04-21 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
| GB1572220A (en) * | 1976-10-07 | 1980-07-30 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemical process of measuring physiologically active substances |
| US4098876A (en) * | 1976-10-26 | 1978-07-04 | Corning Glass Works | Reverse sandwich immunoassay |
| US4203716A (en) * | 1976-11-24 | 1980-05-20 | Eastman Kodak Company | Photographic elements having hydrophilic colloid layers containing hydrophobic addenda uniformly loaded in latex polymer particles |
| GB1566423A (en) | 1976-11-29 | 1980-04-30 | Block Engineering | Photometric system |
| US4130462A (en) * | 1976-12-16 | 1978-12-19 | Syva Company | Receptor steric hindrance immunoassay for receptor determination |
| IL51668A (en) * | 1977-03-16 | 1981-12-31 | Israel State | Analytical method for the quantitative determination of immunogens and antibodies and a kit therefor |
| GB1598254A (en) * | 1977-03-21 | 1981-09-16 | Rohner Ag | Process for the preparation of concentrated formulations which can be dispersed in aqueous media |
| IT1079045B (it) * | 1977-05-16 | 1985-05-08 | Syva Co | Analisi imuunologica fluorescente a doppio ricettore |
| US4115535A (en) * | 1977-06-22 | 1978-09-19 | General Electric Company | Diagnostic method employing a mixture of normally separable protein-coated particles |
| DE2728922C3 (de) * | 1977-06-27 | 1982-02-25 | Dragoco Gerberding & Co Gmbh, 3450 Holzminden | Glycerintri-3,5,5-trimethylhexanoat |
| US4208479A (en) * | 1977-07-14 | 1980-06-17 | Syva Company | Label modified immunoassays |
| US4152411A (en) * | 1977-07-27 | 1979-05-01 | Akzona Incorporated | High specific activity labeled substances |
| US4197361A (en) * | 1977-08-23 | 1980-04-08 | Warner-Lambert | Fluorescent immunoassay sandwich technique for HBs Ag |
| US4223002A (en) * | 1978-08-28 | 1980-09-16 | Hoffmann-La Roche Inc. | Isolation of alpha1 -fetoprotein |
| US4294817A (en) * | 1977-11-25 | 1981-10-13 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method of fluoro immunoassay |
| US4194877A (en) * | 1977-11-28 | 1980-03-25 | United States Of America | Dye-containing polymer composition |
| US4258130A (en) * | 1977-12-12 | 1981-03-24 | Hunt-Wesson Foods, Inc. | Method for detection of antigens |
| US4231750A (en) * | 1977-12-13 | 1980-11-04 | Diagnostic Reagents, Inc. | Methods for performing chemical assays using fluorescence and photon counting |
| US4283382A (en) * | 1977-12-28 | 1981-08-11 | Eastman Kodak Company | Fluorescent labels comprising rare earth chelates |
| US4163779A (en) * | 1978-01-09 | 1979-08-07 | International Diagnostic Technology, Inc. | Test for quantitation of immunoglobulin and identification of abnormal immunoglobulin |
| US4215102A (en) * | 1979-01-05 | 1980-07-29 | Lee Sin H | Cytochemical agents and methods for the detection of steroid hormone receptors in human tissues |
| US4279992A (en) * | 1978-03-13 | 1981-07-21 | Miles Laboratories, Inc. | Specific binding assay employing an enzyme-cleavable substrate as label |
| DE2812307A1 (de) * | 1978-03-21 | 1979-10-04 | Basf Ag | Zubereitungen von dispersionsfarbstoffen |
| US4277437A (en) * | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
| US4220450A (en) * | 1978-04-05 | 1980-09-02 | Syva Company | Chemically induced fluorescence immunoassay |
| US4193983A (en) * | 1978-05-16 | 1980-03-18 | Syva Company | Labeled liposome particle compositions and immunoassays therewith |
| US4235869A (en) * | 1978-05-16 | 1980-11-25 | Syva Company | Assay employing a labeled Fab-fragment ligand complex |
| US4234563A (en) * | 1978-06-02 | 1980-11-18 | American Hospital Supply Corporation | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) |
| NL7807532A (nl) * | 1978-07-13 | 1980-01-15 | Akzo Nv | Metaal-immunotest. |
| US4222743A (en) * | 1978-07-20 | 1980-09-16 | Wang Wei Kung | Method and apparatus for detecting biological particles by fluorescent stain |
| US4225783A (en) * | 1978-07-24 | 1980-09-30 | Abbott Laboratories | Determination of microbial cells in aqueous samples |
| US4297273A (en) * | 1978-07-24 | 1981-10-27 | Miles Laboratories, Inc. | Chemiluminescent phthalhydrazide-labeled protein and polypeptide conjugates |
| US4225485A (en) * | 1978-07-24 | 1980-09-30 | Miles Laboratories, Inc. | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled polypeptides and proteins |
| US4238395A (en) * | 1978-07-24 | 1980-12-09 | Miles Laboratories, Inc. | Dimethyl 7-[ω-N-(phthalimido)alkyl]aminonaphthalene-1,2-dicarboxylates |
| US4207075A (en) * | 1978-08-08 | 1980-06-10 | Liburdy Robert P | Rabbit immunoglobulin-N-(3-pyrene)-maleimide conjugate for fluorescent immunoassay |
| US4302536A (en) * | 1978-08-15 | 1981-11-24 | Longenecker Robert W | Colorimetric immunoassay process |
| DE2836362A1 (de) * | 1978-08-19 | 1980-03-06 | Behringwerke Ag | Diagnostisches mittel |
| US4222744A (en) * | 1978-09-27 | 1980-09-16 | Becton Dickinson & Company | Assay for ligands |
| US4259313A (en) * | 1978-10-18 | 1981-03-31 | Eastman Kodak Company | Fluorescent labels |
| FR2440555A1 (fr) * | 1978-10-31 | 1980-05-30 | Maes Roland | Perfectionnements aux procedes de determination de substances montrant entre elles des affinites de liaison specifiques, par des tests faisant intervenir une phase solide |
| US4318707A (en) * | 1978-11-24 | 1982-03-09 | Syva Company | Macromolecular fluorescent quencher particle in specific receptor assays |
| US4238195A (en) * | 1979-01-18 | 1980-12-09 | Miles Laboratories, Inc. | Fluorescer-labeled specific binding assays |
| US4278653A (en) * | 1979-02-01 | 1981-07-14 | New England Nuclear Corporation | Methods and kits for double antibody immunoassay providing a colored pellet for easy visualization |
| JPS55116258A (en) * | 1979-03-01 | 1980-09-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | Microimmunoassay method |
| JPS55116259A (en) * | 1979-03-01 | 1980-09-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | Microimmunoassay method |
| US4256834A (en) * | 1979-04-09 | 1981-03-17 | Syva Company | Fluorescent scavenger particle immunoassay |
| US4261968A (en) * | 1979-05-10 | 1981-04-14 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4252783A (en) * | 1979-06-18 | 1981-02-24 | Syva Company | Reducing fluorescent background in fluorescent immunoassays |
| US4284412A (en) * | 1979-07-13 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses |
| US4248854A (en) * | 1979-08-27 | 1981-02-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Production of antibody toward asbestos and immunoassay therewith |
| US4272506A (en) * | 1979-08-31 | 1981-06-09 | Syva Company | Purification of reagents by disulfide immobilization |
| US4318846A (en) * | 1979-09-07 | 1982-03-09 | Syva Company | Novel ether substituted fluorescein polyamino acid compounds as fluorescers and quenchers |
| US4254219A (en) * | 1979-09-21 | 1981-03-03 | Merck & Co., Inc. | Process for recording data in the leucocyte migration inhibition assay |
| US4254096A (en) * | 1979-10-04 | 1981-03-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Reagent combination for solid phase immunofluorescent assay |
| US4251514A (en) * | 1979-11-05 | 1981-02-17 | American Hospital Supply Corporation | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) |
| US4254097A (en) * | 1979-11-05 | 1981-03-03 | American Hospital Supply Corporation | Method of detecting antibodies to human thyroglobulin |
| US4314026A (en) * | 1980-03-31 | 1982-02-02 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Process for determining the complement-dependent cytotoxicity mediated by anti-HLA antibodies by means of ATP determination and device for ATP determination |
| US4323647A (en) * | 1980-10-15 | 1982-04-06 | University Of Miami | Steric hindrance enzyme immunoassay |
-
1980
- 1980-01-11 NL NL8000173A patent/NL8000173A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-12-29 DE DE8080201241T patent/DE3070604D1/de not_active Expired
- 1980-12-29 EP EP80201241A patent/EP0032270B1/en not_active Expired
- 1980-12-29 AT AT80201241T patent/ATE13098T1/de active
-
1981
- 1981-01-02 US US06/222,263 patent/US4373932A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-01-02 IE IE2/81A patent/IE50655B1/en not_active IP Right Cessation
- 1981-01-06 IL IL61864A patent/IL61864A/xx unknown
- 1981-01-06 ZA ZA00810074A patent/ZA8174B/xx unknown
- 1981-01-07 DK DK004681A patent/DK155968C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-01-08 PT PT72329A patent/PT72329B/pt unknown
- 1981-01-08 JP JP160781A patent/JPS56160655A/ja active Granted
- 1981-01-09 ES ES498430A patent/ES498430A0/es active Granted
- 1981-01-09 HU HU8154A patent/HU183283B/hu unknown
- 1981-01-09 MX MX185494A patent/MX161039A/es unknown
- 1981-01-09 FI FI810054A patent/FI74820C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-01-09 GR GR63833A patent/GR73163B/el unknown
- 1981-01-09 AU AU66111/81A patent/AU534775B2/en not_active Expired
- 1981-01-12 CA CA000368406A patent/CA1143654A/en not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50160423A (ja) * | 1974-05-29 | 1975-12-25 | ||
| JPS52104591A (en) * | 1975-11-13 | 1977-09-02 | Inst Nat Sante Rech Med | Carrier for organic compounds* process for preparing the same* biological reagent and catalyst containing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GR73163B (ja) | 1984-02-14 |
| AU534775B2 (en) | 1984-02-16 |
| US4373932A (en) | 1983-02-15 |
| EP0032270A1 (en) | 1981-07-22 |
| NL8000173A (nl) | 1981-08-03 |
| HU183283B (en) | 1984-04-28 |
| FI810054L (fi) | 1981-07-12 |
| FI74820B (fi) | 1987-11-30 |
| PT72329B (en) | 1981-12-18 |
| ES8204175A1 (es) | 1982-04-16 |
| ZA8174B (en) | 1982-01-27 |
| IE50655B1 (en) | 1986-06-11 |
| DK155968C (da) | 1989-10-16 |
| ES498430A0 (es) | 1982-04-16 |
| ATE13098T1 (de) | 1985-05-15 |
| IL61864A0 (en) | 1981-02-27 |
| AU6611181A (en) | 1981-07-16 |
| IE810002L (en) | 1981-07-11 |
| IL61864A (en) | 1984-09-30 |
| DK4681A (da) | 1981-07-12 |
| DE3070604D1 (en) | 1985-06-05 |
| JPS56160655A (en) | 1981-12-10 |
| PT72329A (en) | 1981-02-01 |
| EP0032270B1 (en) | 1985-05-02 |
| MX161039A (es) | 1990-07-13 |
| FI74820C (fi) | 1988-03-10 |
| CA1143654A (en) | 1983-03-29 |
| DK155968B (da) | 1989-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0032270B1 (en) | The application of water-dispersible hydrophobic dyes as labels in immunoassays | |
| US4313734A (en) | Metal sol particle immunoassay | |
| US5556756A (en) | Gold sol of less than 5 nm test method and reagent kit therefor | |
| Gribnau et al. | Particle-labelled immunoassays: a review | |
| JPH09506172A (ja) | 汎用的な抗ハプテン抗体を使用するイムノアッセイ及び該イムノアッセイで使用される材料 | |
| JPH02116751A (ja) | 指示試薬およびそれを用いたアッセイ法 | |
| US5270166A (en) | Immunoassays employing generic anti-hapten antibodies and materials for use therein | |
| FI106984B (fi) | Testimenetelmä ja siihen tarkoitettu reagenssipakkaus | |
| JPS62191765A (ja) | 凝集性結合試薬を用いた不均一系特異的結合試験方法及び不均一系イムノアツセイ法並びにその試験キツト | |
| KR101057918B1 (ko) | 분석 장치에서 후크 효과의 감소 | |
| US6444261B1 (en) | Storage-stable particle, in particular carrier for carrier-bound reactions, and methods of producing said particle | |
| DE68918504T2 (de) | Analyseelement vom Trockentyp für einen Immuntest. | |
| JPH05223820A (ja) | 抽出組成物として界面活性剤混合物を使用する歯周病に随伴する微生物検出用キットおよびその検出方法 | |
| JP2833624B2 (ja) | 診断試薬用ラテックス | |
| CN113504365A (zh) | 一种彩色乳胶颗粒、复合物、免疫层析试纸及其制备方法 | |
| JPH03233358A (ja) | 抗原または抗体の高感度測定法 | |
| JP2000206114A (ja) | 免疫学的測定方法 | |
| MXPA98004040A (en) | A particle resistant to storage, in particular a carrier for united reactions to carrier and the processes for the production of the |