JPH03103499A - 高度不飽和脂肪酸モノグリセリドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ．産業上の利用分野 本発明は、体調節機能等の作用を発現する高度不飽和脂
肪酸の残基を含有する高度不飽和脂肪酸モノグリセリド
の製造方法に関するものである。

口．従来技術 高度不飽和脂肪酸（以下、ＰＵＦＡと略すことがある。

）は、主として、３個以上の２重粘合を含む炭素原子数
２０以上の脂肪酸である。特に、アラキドン酸（２重結
合４個、炭素原子数２０）、エイコサペンタエン酸（２
重結合５個、炭素原子数２０）、ドコサヘキサエン酸（
２重結合６個、炭素原子数２２）等のＰＵＦＡは人体内
では合成できない必須脂肋酸であり、プロスタグランジ
ン前駆体や、抗血栓作用、中性脂質やコレステロール低
下作用、制癌作用等の体調節機能に関与する脂肪酸とし
て注目されている（Ｊ．　Ｄｙｅｒｂｅｒｇ　らの”Ｔ
ｈｅ　ＬａｎｃｅＬ’Ｊｕｎｅ　５．１１４３（１９７
１）ｊ．Ｄｙｅｒｂｅｒｇらの“Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ
”Ｊａｎ．２６．　１９９（１９８０）、成沢らのＩＩ
医学のあゆみ゛゜１４５　（１３），９１Ｎ１９８Ｂ）
）。そして、こうしたＰＵＦＡを主要な構成脂肪酸とす
る（脂肪酸残基として含む）モノグリセリドは、高度不
飽和脂肪酸モノグリセリド（以下、ＰＵＦＭＧと略すこ
とがある。）としてｎ用である。

ＰＵＦＡは二重結合を多く有し、熱による重合や酸化、
分解を受け易い不安定な物質である。このようなＰＵＦ
Ａを浦脂より分離、式縮する方唐に関しては、従来、混
合脂肪酸分解物よりク口マトグラフィー、尿素付加物に
よる方法、低温溶剤分別結晶化法、分子蒸留による方法
、等が知られている。しかしながら、これらの方法は、
経済的な方法でないとか、ＰＵＦＡの変性を伴う方法で
あるため、常温、常圧で変性の恐れのない濃縮方法が望
まれていた。

その結果として、油脂と水に酸性〜中性条件下でＭ素を
作用させてＰＵＦＡをｅＡ縮する方法が特開昭５８　−
　１６５７９６号、特開昭６１−１５６９２号に提案さ
れている。しかしながら、これらの方法によっても、Ｐ
ＵＦＡの濃縮を効率的かつ安定に行うことはなお不十分
であることが分かった。

ハ．発明の目的 本発明の目的は、Ｐ　Ｕ　Ｆ　ＡをＰＵＦＭＧとして高
濃度に蓄積させて、工業的かつ経済的に取出すことので
きる方法を提供することにある。

二．発明の構戒及びその作用効果 即ち、本発明は、高度不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）残基を
含有する柚脂と、置換基を有していてもよい一級又は二
級アルコールとをアルカリ性リバーゼの作用下で反応さ
せることによって、前記油脂を前記高度不飽和脂肪酸残
基に冨むモノグリセリドと脂肪酸エステルとに分解する
高度不飽和脂肪酸モノグリセリド（ＰＵＦＭＧ）の製造
方法に係るものである。

本発明者は、油脂の分解方法として、特にアルコールの
存在下でアルカリ性リバーゼ（特にｌ，３一位置特異性
アルカリ性リパーゼ）を用いた抽脂の分解方法について
検討を重ねた結果、魚浦等の如＜ＰＵＦＡ残基を含有す
る柚脂とアルコールとの存在下に反応させると、アルコ
リシス反応によって、油脂を構成する脂肪酸は迅速に分
解し、分解率が特に約５０％以上に達した時点で、反応
を停止すると、反応系に蓄積される未分解のモノグリセ
リド中にＰＵＦＡが極めて高濃度に蓄栢することを見出
した。特に、１．　　３＝位置特異性アルカリ性リバー
ゼを用いる場合、浦脂の１．３−位置の脂肪酸エステル
結合が選択的に分解されて脂肪酸が分離され、かつ、未
分解の脂肪酸はＰ　ｔＪ　ＦＡとしてモノグリセリド中
の２＝位置に効率よく残すことができる。なお、上記の
「分解率Ｊとは、生成するエステル、モノグリセリド、
ジグリセリド等に対するエステルの割合（％）を指す（
以下間柱）。この「分解率」を検知若しくはコントロー
ルする方法としては、後述の実施例ｌに示す如く、イヤ
トロスキャンにより柚脂分解率を測定し、口的の分解率
に達した時点で反応を停止する。又は、反応速度を反応
塔に汰す火質空塔速度（基質流量／酵素の体４１１）を
変化させて調整することができる。

本発明の方法において酸性リパーゼを用いた場合には、
後述する比較例に示す如く反応そのものが殆ど進行せず
、ＰＵＦＭＧの蓄積が見られないことが判明している。

従って、本発明の方法では、アルカリ性リパーゼを用い
ることが必須不可欠であり、このアルカリ性リパーゼを
上記のアルコリシス反応系に作用させることによって、
浦脂中のＰＵＦＡをＰＵＦＭＧとして高濃度に蓄積させ
、簡単に取出す、工業的で経済的な方法を提供すること
ができるのである。

？発明の方法において、アルコールの春在下では油脂は
ほぼ均一相となり、分解された脂肪酸は直ちにアルコー
ルエステルとなるため、水系での反応に比べて分解は迅
速に進み、かつ、脂肪酸の分子内転移も起こり難く、主
として２一位置に結合しているＰＵＦＡはほとんど分解
されずにモノグリセリドとして蓄積されることが見出さ
れた。

この反応は次のように表すことができる。

ＣＩｌ■ＯＣＯＩ’ｌ　’ （但し、ＲＩＳＲ！、Ｒ３、Ｒ４はアルキル基等であり
、そのうちＲ２はＰＵＦＡを構成ずる基）不飽和脂肪酸
の自動酸化速度はモノグリセリド、ジグリセリド、トリ
グリセリドの存在形態のうちでモノグリセリドとして存
在する時が最も遅く、安定であることが知られている〔
高木らの報告（ＪＡＯＣＳ，Ｖｏｌ．６５　Ｎｏ．７　
ｐ−１１５６（１９８８））　）ので、高度不飽和脂肪
酸（ＰＵＦＡ）は、モノグリセリド（ＰＵＦＭＧ）の形
が最も安定性が良いものと考えられる。従って、本発明
の方法で得られるＰＵＦＭＧは有用なＰＵＦＡを最も安
定に保持することのできるものである。しかも、モノグ
リセリドは医薬、食品に用いると、消化吸収の点でも優
れている。また、ＰＵＦＭＧは既述した機能性（体Ａｇ
１節機能）を持つＰＵＦＡのモノグリセリドとして、食
品乳化剤や機能性油脂製造の中間体としても応用できる
。

本発明に用いるアルカリ性リパーゼとは、至適ｐ　Ｈが
８．０以上にあるリパーゼである。

こうしたアルカリ性リパーゼは特に、１．３一位置特異
性のあるアルカリ性リパーゼであれば何でもよく、この
ようなリパーゼとして例えば、バンクレアチックリバー
ゼ（パンクレアチン、和光純薬社製）、アク口モバクタ
ー属の生産するリパーゼとしての名ＩＩ！Ａ　Ｌ　−　
８６５号菌（微工研菌寄第１２ｌ３号、名糖産業社製）
、アルカリゲネス属の生産するリパーゼとしての名１！
　Ｐ　Ｌ　−　２６６号菌（微工研菌寄第３１８７号、
名糖産業社製）或いはＰＬ−６７９号菌（微工研菌寄第
３７８３　’７４、名糖産業社！！）、シュードモナス
属の生産するリパーゼとしてのシュードモナスフラギー
２２　−　３９　Ｂリバーゼ、リバーゼＡ（サッポロビ
ール社製）、ノボ社製のアルカリ性リパーゼＳ　Ｐ−３
９８等が例示できる。但し、同じアルカリ性リパーゼで
あっても１．　　３一位置特異性の比較的低いリパーゼ
、例えばシュードモナス属のリパーゼ（シグマ社製）に
比べて、ｌ，３一位置特異性の高いアルカリ性リバーゼ
はＰＵＦＡのモノグリセリドへの蓄積量が多く、望まし
いものである。但し、使用するリバーゼは必ずしも１．
　　３一位置特異性がなくてもよく、要はＰｔＪＦＡを
残すようにアルコリシス反応が生じればよい。

本発明に用いるアルカリ性リバーゼはそのままの形（溶
液）で用いてよいが、固定化酵素や粉末、粒状の乾燥酵
素として使用するのが好ましい。固定化法としてはイオ
ン交換体、吸着樹脂、セライト、ベントナイト、キ１・
−サン等に固定化して使用すれば良く、特にＤＥＡＥ−
｝ヨパールは良い担体となる。この様な固体状態での酵
素又は固定化酵素は連続して繰り返し反応に使用できる
。

本発明で用いられる油脂としては例えば、イワシ、サバ
、タラ、イカ、アジ等の魚柚の他、オキアミ、藻類、菌
類の油脂を挙げることができる。

これらの抽脂には、約１％〜４０％のＰＵＦＡが主に２
−位置に多く含まれる。

上記のＰＵＦＡとしては、アラキドン酸（２０：４）（
炭素原子数２０、二重結合４個二以下同様）、エイコサ
ペンタエン酸（ＥＰＡ）　（２０：５）、ｌ’コサペン
クエン酸（２２：５）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）
（２２：６）等が挙げられる。

また、二のＰＵＦＡ以外に油脂の構成分としての脂肪酸
としては、パルミチン酸（１６：０）、オレイン酸（１
８：１）、リノール酸（１８：２）等が挙げられる。

本発明において油脂と反応させるアルコールとしては、
置ｆ！！！基を有していてもよい炭素原子数が好ましく
は１〜３０の飽和若しくは不飽和の一級又は二級のアル
コールが用いられる。アルコールの炭素原子数は１〜１
０とするのが望ましく、１〜５が一層望ましい。なお、
三級アルコールは反応系の溶媒として用いられても、ア
ルコリシス反応の基質とはならない。

上記の一級アルコールの具体例としては、メタノール、
エタノール、ｌ−プロパノール、ｌ　−フタノール、イ
ソブタノール、■−ペンタノール、ｌ−ヘキサノール、
１−オクタノール、ｌ一デカノール、ゲラニオーノレ、
■−ウンデカノーノレ、ｌドデカノール、ファルネソー
ル、フィ１・−ル、ヘキサデカノール、オレイルアルコ
ール、１−オる一級アルコールでは、置換凸としてフェ
ニル基を有するアルコールとしての例えばベンジルアル
コール、クロロベンジルアルコール、ｐ−アミノフエネ
チルアルコール、置段基としてナフチル法を有するアル
コールとしての例えば２−ナフタリンエタノール、置換
基としてフルフリル基を有するアルコールとしての例え
ばフルフリルアルコール、置換基としてヒドロキシ基を
有するアルコールとしての例えばエチレングリコール、
１．４−ブタンジオール、ｌ、６−ヘキサンジオール、
１．１０−デカンジオール、１，ｌ６−ヘキサデカンジ
オール、ペンタエリスリトール、ポリエチレングリコー
ル、置換基としてアミノ基を有するアルコールとしての
例えば２−アミノエタノール、２（ジエチルアミノ）エ
タノール、置換基としてハロゲンを有するアルコールと
しての例えば３−クロロ−１．２−７’ロパンジオール
、６−クロロ−１−ヘキサノール、置換基としてチェニ
ル基を有するアルコールとしての例えば２−チェニルエ
タノール、置換基としてピリジル基を有するアルコール
としての例えば２−ビリジンエタノール、２一ピリジン
ブロバノール、置換基としてのピペラジル基を有するア
ルコールとしての例えば１−ビベラジンエタノール、置
換基としてピラン基を有するアルコールとしての例えば
ピペロニルアルコール、置換基としてフタルイミド基を
有するアルコールとしての例えばフタルイミドエタノー
ル、置換基としてモルホリル基を有するアルコールとし
ての例えば１−モルホリンエタノール、置換基としてピ
ロルジル基を有するアルコールとしての例えばｌ−ビロ
リジンエタノール、１−ピロリドンエタノール、置換基
としてイミダゾール基を有するアルコールとしての例え
ばチアミンなどが使用可能である。

次に、上記の二級アルコールの具体例としては、例えば
２−プロパノール、２−ブタノール、２ペ−ンタノール
、２−ヘキサノール、３−ヘキザノール、２−ヘプタノ
ール、２−オクタノール、２ノナノール、２−デカノー
ル、２−ウンデカノール、２−トリデカノール、２−テ
【ラデカノール、４−メヂルー２−ペンタノールなどが
挙げられる。また、置換基を有する二級アルコールでは
、置換基としてシクロ環を有するアルコールとし゛ζの
例えばシクロブタノール、シクロヘキサノール、シクロ
オクタノール、置換基としてステロール基を有するアル
コールとしての例えばコレステロール、エルゴステロー
ル、置換基としてフェニル基を有するアルコールとして
の例えばｌ−フエニルエタノールなどが挙げられる。

反応溶媒としては、反応に用いる上記アルコールが同時
に反応系溶媒としても使用できる場合が最も理想的であ
るが、基質や生成物がアルコールに不溶仕で均一相が得
られない場合にはアルコール（但し、三級アルコールを
除く。）以外の有機溶媒を反応溶媒として用いてもよい
。この際には、反応を阻古しない有機溶媒を選んで使用
する限り何を用いてもよいが、例えばｎ−へキサン、イ
ソオクタン、等のごとき脂肪族炭素水素類；アセトンな
どのごときヶトン類などを例示できる。また、三級ブチ
ルアルコールのごとき三級アルコール類を溶媒として使
用することができる。溶媒は単独、又は２神以上混合し
て使用してもよい。使用債は、用いる溶媒、基質の神頚
や濃度によっても左右されるが、反応温度で流動性のあ
る均一相を保ち、反応が良く進む程度に添加するのが望
ましく、添加星に制限はないが、例えば反応系の１０〜
９０％（Ｖ／Ｖ）の範囲で使用することができる。基質
によっては、上記した様な溶媒の添加によって無添加よ
りも反応が促進されることもある。

本発明において、反応系に存在させる水の星は、反応を
迅速に進め、２一位置の脂肪酸の分子内転移を最少に止
めるために、ｏ．ｏｏｔ％〜１５％とするのがよく、よ
り好ましくは０．００１％〜１０％、特に０．００１％
〜５．０％であるのが好ましい。なお、この水分量はカ
ールフィッシャー水分測定装置、メトラー社製ＤＬ１８
で測定可能である。

また、使用するアルカリ性リパーゼの使川鼠に制限はな
いが、例えば、固定化もしくは乾燥酵素として使用する
場合は油脂１ｇ当たり約ｉ，ｏｏｏ〜３００　，　００
０単位程度の醒素量とすることができる。

上記油脂とアルコールとをアルカリ性リパーゼと接触さ
せ、アルコリシス反応を行う態様は、回分式反応でも充
填糟型等の連続反応によっても行うことができるが、高
度不飽和脂肪酸（ＰＵＦΔ）は空気酸化を受け易いので
、窒素充填若しくは脱気状態にして反応を行うことが望
ましい。

反応において、基質となる柚脂とアルコールとの混合比
や基質濃度についても適宜選択できるが、油脂１モルに
対するアルコールの添加モル数は例えば１〜３０００モ
ル、好ましくは１〜３００モル程度とすればよい。その
時の７．Ｃ　′ｉｆｉ度は１００％以下の任意の濃度で
あればよく、またこの際、用いる油脂、アルコールは夫
ｈ２種又はそれ以上混合して反応しても差支えない。

反応は低温でも進行するが、用いる基質や溶媒の融点、
沸点、酵素の作用温度を考慮し、適当な温度で行うのが
好ましく、例えば０〜９０゜Ｃ、好ましくは２０〜６０
″Ｃで行えばよい。反応時間も反応条件次第で数十分か
ら数十時間の範囲とすることができる。

アルコリシス反応により生或した脂肪酸エステルと高度
不飽和脂肪酸モノグリセリド（ＰＵＦＭＧ）とは溶媒分
別、カラムクロマトグラフィー等の方法により分離精製
できる。但し、ＰＵＦＭＧを安定して高効率に得るには
、アルコリシス反応において上記したリバーゼ及びアル
コールの使用星をはしめ、反応時間等をコントロールし
ておく。

ホ．実施例 次に、本発明の実施例を比較例と共に具体的に説明する
。

夫施員土 イカ油（理研ビタミン社製）３５ｇ、イソブタノール１
２．２ｇ及び固定化Ｐ　Ｌ−６７９リパーゼ（担体Ｄ　
Ｅ　Ａ　Ｅ　−　｝　：？　ハ−ル６５０　、１０万加
水分解単位／柚脂１ｇ）３．５ｇを密閉容器に採取し、
３５゜Ｃ　テ２時間撹拌反応した。１０００Ｘｇ、５分
の遠心分離により酵素を除去し、上清部分に含まれるＭ
Ｇ　（モノグリセリド）の生成量と、ＭＧへのＰＵＦＡ
の蓄積程度を分析した。

ＭＧの生ｒｌｉ．量はイアトロスキャンにより次の方法
で調べた。即ち、クロマロッドＳ一■に上消０．１　μ
ｅを塗布し、ベンゼンで８　ｃｍ展開した後、イアトロ
スキャンＴＨＩＯでエステル、ＴＧ（’｝リグリセリド
）、ＤＣ（ジグリセリド）、ＭＧの剖合を測定した。ま
た、エステルの％を分解率とした。ＭＧの分離のために
、上清１０ａ７！をシリカゲル蒲層（メルク社、Ｎｏ．
１３８９５　）に塗布し、石油エーテルーエーテルー酢
酸混合液（７０：３０：　１，　Ｖ／Ｖ　）で９ｃｍ展
開し、紫外線照射下にＭＧ等のスポットを検出し、共通
栓付き試験管にそれぞれをかきとった。口木柚化学協会
編の基準油脂分析法に従って、ケン化分解、メチル化を
行い、ガスクロマトグラフィーにより脂肪酸組成を分析
した。生或されたＭＧ、エステルの脂肪酸Ｍｉ戒を第１
表に、また反応七情の組或を第２表を示した。

第１表　生成されたＭＧの脂肪＃組成（重量％）第１表
から明らかなように、ＭＧには、炭素数２０以上の不飽
和酸（ＰＵＦＡ）が約８０％が含まれ、ＰＵＦＡが極め
て高濃度に濃縮されている。一方、エステルには、炭素
原子数１８以下の脂肪酸が７５％含まれ、ＰＵＦＡの大
部分がＭＧに濃縮されていることが分かる。

第２表　生成物の組成（面禎％） 注）ＦＦＡは’ｉｆｉ’Ａ’ｄ脂肪酸を表す。

第２表から分かるように、１７．３％（而積甲：以下同
様）のＭＧが生或された。

次に、上？＋’ｔの全量にｎ−ヘキサン２００　ｍｌｌ
、エタノール２００　ｍｌ、蒸留水１０成を加え、十分
に潰１′ドシた後に静置、分離してエタノール層をｉ｝
た。このエタノール層にｎ−へキサン２００　ｍｌと萬
留水５　ｒｔｄｌを加え、同様の操作によりエタノール
ＩＭを１１た。

さらに１回同じ操作を行い、得られたエタノール層をロ
ータリーエバボレーターで濃縮し、Ｐ　Ｕ　Ｆ（以　ｆ
ｆｌ　＋＝’Ｊ　＋，Ｒノ　。

Ａ−ＭＧ　（ＰＵＦＭＧ）を５．２ｇ得た．このＭＧの
純度をイアトロスキャンで、脂肪酸組成をＧＣ（ガスク
ロマトグラフィー）で分析した．その結果を第３表に示
した。

第３表　ＰＵＦＡ−ＭＧの組戒 第３表の結果は、簡単な精製操作で高純度のＰＵＦＡを
含むＭＧが得られることを示している。

尖胤明主 イカ油（理研ビタミン社製）０．５ｇ、リパーゼＡ　Ｌ
　−８６５　５０＋ａｇ及びｎ−デカノール５ＩＩ１を
密閉容器に採取し、３５゜Ｃで２４時間撹拌反応した。

反応中の水分は０．３７％（カールフィッシャー水分測
定装置、メトラー社製ＤＬ１８で測定：以下同様）であ
を行い、ＰＵＦＡ−ＭＧ４．７　ｇ得た．そのＭＧ純度
と脂肪酸組成を第５表に示した。なお、分解率は７３％
、ＭＧは１４．３％生威された。

第５表　ＭＧ純度と脂肪Ｍ組成 アルコールと抽脂のモル比が、柚脂を全てエステル化で
きる理論星に近くても、ＰＵＦＡのＭＧへの効果的な濃
縮が可能であることが、第５表の結果から明らかである
。

尖施田土 イカ油（理研ビタミン社製）０．５ｇ、リパーゼＰＬ−
２６６　　（１．６万単位／油脂１　ｇ　）　５０＋ｎ
ｇ、イソプタノール４ｇを密閉容器に採取し、３ｋｇの
蒸留水を添加した後、３５゜Ｃで８時間攪拌反応した。

反応中の水分は０．９５％であった。実施例ｌと同様に
してＭＧ生成量と脂肪酸組戒を調べた。その結果った。

実施例ｌと同様にＭＧＯ生威程度を測定すると１８．７
％であり、分解率は７４％であった。また、ＭＧの脂肪
酸組成を分析した結果を第４表に示した。

第４表　ＭＧの脂肪酸組成（重量％） 第４表から明らかなように、リバーゼＡＬを使用しても
効果的にＰＵＦＡがＭＧに濃縮される。

また、デカノールのような比較的炭素数の大きいアルコ
ールを使用しても、良好な結果となる。

尖施桝主 イカ油（理研ビタミン社製）３５ｇ、固定化リパーゼＰ
Ｌ−６７９　　（１０万単位／柚脂１ｇ）３．５ｇ及び
イソプタノール９．０ｇを密閉容器に採取し、３５゜Ｃ
で１時間攪拌反応した。浦脂とアルコールのモル比は約
ｌ：３である。反応中の水分は０．２４％であった。実
施例ｌと同様にして上清を得て、桔製を第６表に示した
． 第６表　ＭＧ生戒量と脂肪酸組戒 第６表から分かるように、Ｉ’ＵＦＡのｉ４縮はリパー
ゼＰＬ２６６でも可能である．また、反応中の水分が１
％程度あっても良いし、アルコールを油脂の１７０倍（
モル比）と過剰に使用しても良好な結果が得られる． 尖施皿ｉ イワシ抽（理研ビタミン社製）７．０ｇ、メタノール１
．２ｇ，三級ブタノール５成をｎ−ヘキサンに溶解して
４０Ｉｄとし、モレキュラーシプス３Ａ５ｇを加え、１
２時間脱水処理をした（水分は３９ｐｐ＋＊になった）
。本溶液２０戚を採取し、リパーゼＰＬ−２６６粉末４
０ｎ＋ｇを添加し、５０゛Ｃで２４時間攪拌反応した。

反応物中で１２．２％のＭＧが生成され、分解率は６８
％であった。ＭＧの脂肪酸組威を第７表に示した。

第７表　ＭＧの脂肪酸組成（重量％） 加し、３５゜Ｃで２４時間攪拌反応した。反応物中でＴ
Ｇは２．９％に減少し、ＭＧが３１．１％生成された。

ＭＧの脂肪酸組成を第８表に示した。

第８表　ＭＧの脂肪酸組或（重量％） 反応の基質となる一級、二級アルコールのほかに、ヘキ
サンや三級プタノールのような反応に関与しない溶剤を
混合しても、ＰＵＦＡのＭＧへの濃縮が可能なことが第
７表の結果から分かる。また、炭素原子数１のメタノー
ルのようなアルコールの使用も可能なことが分かる。

夫益１ イワシ油（理研ビタミン社製）７．０ｇ、エタノール２
．０ｇをｎ−へキサンに溶解して４０ｍｌとし、モレキ
ュラーシブス３Ａ５ｇを加え、ｌ２時間脱水処理をした
（水分は３４ｐｐｍになった）。本溶液２０一を採取し
、リパーゼＰＬ−２６６粉末１００　ｍｇを添反応の基
質となるエタノールのほかに、ヘキサンのような反応に
関４しない溶剤を混合しても、ＰＵＦＡのＭＣへの濃縮
が可能なことが第８表の結果から分かる。

尖胤拠エ イカ油（理研ビタミン社製）０．５ｇ、２−プロバノー
ル５．０ｇ、リパーゼＰ　Ｌ−６７９粉末２０ｍｇを密
閉容器に採取し、３０゜Ｃで２４時間攪拌反応した。

反応中の水分は０．　１５％であった。反応物中のＭＧ
の割合は１２．７％であった。ＭＧの脂肪酸組成を第９
表に示した。

第９表　ＭＧの脂肪酸組戒　（重量％）第９表の結果か
ら、２−プロパノールの様な二級アルコールを使用でき
ることが分かる．工施斑１ イワシ油（理研ビタミン社製）７．０ｇ、オレイルアル
コール１０．０　ｇをｎ−ヘキサンに溶解して４０一と
し、モレキュラーシーブス３Ａ５ｇを添加し、■２時間
脱水処理をした。水溶液２０Ｈ１にリパーゼＰＬ−２６
６粉末１００ｎ＋ｇを加え、３５゜Ｃで２４時間攪拌反
応した。反応物をＴＬＣ　（薄層，クロマトグラフイー
）で分析すると、ＴＧは全て分解され、エステル、ＤＣ
，アルコール及びＭＧのスポットが認められた。ＭＧの
脂肪酸組成を第１０表に示した．第ｌＯ表　ＭＧの脂肪
Ｍ組戒　（重量％）オレイルアルコールの様な長鎖アル
コールでも使用できることが第ｌＯ表の結果から分かる
。

尖益班エ イカ油（理研ビタミン社製）０．５ｇ，ｎ一デカノール
５　ｍｌ、リパーゼＡ（サッポロビール社製）２０Ｂを
密閉容器に揉取し、３５゜Ｃで２４時間撹拌反応した。

ＴＬＣで反応物の組威を分析すると、ＴＧは全て分解さ
れ、エステル、ＤＣ，ＭＧＯ生威が認められた。ＭＧの
脂肪酸を分析すると、ＥＰＡ（エイコサペンクエン酸）
　　（２０：５）　２２．５％、Ｄ　ｔｌＡ（ドコサヘ
キサエン酸）　　（２２：６）　３３．３％などＰＵＦ
Ａが高濃度に濃縮されていた。

尖施拠則 イカ柚（理研ビタミン社！！）０．５ｇ、イソブタノー
ル５　ｍｌ、リパーゼＢ（サッポロビール社製）２０ｍ
ｇを密閉容器に採取し、２０″Ｃで２４時間ＰＡＩ↑反
応した。反応物中のＭＧの生成量は１６．１％であった
。

また、ＭＧの脂肪酸組成を分析すると、ＥＰＡ２８．６
％、Ｄ　１１　Ａ４１．１％などＰＵＦＡが高ｂ＝度に
濫縮されていた。

，！Ｊｆ！ＪｆｉＬＬ 固定化リパーゼＰＬ−６７９　　（担体ＤＥＡＥ−｝ヨ
パール、ｉｏ万単位／油脂１ｇ）３．０ｇをイソブタノ
ールに懸濁し、内径１１　ｍｍ　，長さ１５０　ｍｍの
カラムに充填した。イワシ油（理研ビタごン社製）３５
０ｇとイソブタノール１２．２ｇの混合液をガラスフィ
ルターで濾過した後、上記のカラムに下向流で送液した
。カラム温度は３５゜Ｃ、流速は１５ｄ／特とした。な
お、カラムに供給した混合液の水分は２２００ｐｐｍ　
、固定化酵素の水分は２．４％であった。

反応開始６日後に、基質をタラ油（油蝋薬品社！！！）
とｎ−プタノールの混合液に変更して、引続き同じ条件
で送液した。

第１１表にＭＧの生成量とＰＵＦＡ含有率を示した。

（以下余白） 第１１表　連続反応によるＰＵＦＡの濃縮注）基質ｌは
イワシ油、基質２はタラ油。

このように、連続反応でもＰＵＦＡをＭＧに効率良く濃
縮できることが第１１表から分かる。

裏施班坐 タラ油（油蝋薬品社製）０．５ｇ、リパーゼＡＬ８６５
粉末２００　ｍｇ及びベンジルアルコール３．１ｇ又は
フルフリルアルコール３．４　ｇ或いはｌ−（２ヒドロ
キシエチル）−２−ピロリトン３．４ｇを採取し、３５
゜Ｃで４８時間攪拌反応した。

ベンジルアルコールを使用した場合のＭＧ生戒量は８．
３％であった。その他の２種のアルコールの場合はＴＬ
Ｃ上（石油エーテル：アセトン：酢酸＝７０：３０：１
の混合液で展開した。）でＴＧのスポットがほぼ消滅し
、ＭＧのスポットが明瞭に認められた。ＭＧの脂肪酸組
或を第１２表に示した。

第１２表　ＭＧの脂肪酸組或（重量％）採取し、３５℃
で７２時間攪拌反応した。分解率は６８．５％で１６．
４％のＭＧが生成された。ＭＧの脂肪酸組成を第ｌ３表
に示した。

第１３表　ＭＧの脂肪酸組或（重量％）この結果から、
アルカノール類のほか、様々な置１！！！基を持ったア
ルコールもＭＧへのＰＵＦＡ濃縮を目的として使用でき
ることが分かる。

実迦津川 タラ柚（油蝋薬晶社！）　０．５　ｇ，　ｎ−ヘキサノ
ール３減及びパンクレアチン０．５ｇを密閉容器にオキ
アミ油（日本水産一社製）１０ｇ、エタノール０．７ｇ
及び固定化リパーゼｒ’Ｌ−６７９　　（担体ＤＥＡＥ
｝ヨパール）０．５ｇを密閉容器に採取し、５５℃で５
時間攪拌反応した。ＭＧの生成量は１２．３％、分解率
は７３％であった。オキアミ柚に含まれるＥＰＡ，ＤＨ
Ａが夫々１３．５％、７．７％であるのに対し、ＭＧ中
は夫々３４．２％、１９．６％と濃縮された。

して４０１ｒｄｌとし、モレキュラーシブス３Ａ５　ｇ
を加え、１２時間脱水処理をした（水分は３９ｐｐｍに
なった）。本溶液２０−を採取し、リバーゼＰ　Ｌ　−
２６６粉末４００　ｍｇを添加し、５０゜Ｃで２４時間
攪拌反応した。

反応物中で１２．２％のＭＧが生戒され、分解率は６８
％であった。ＭＧの脂肪酸組成を第１４表に示した。

第１４表　ＭＧの脂肪酸組或（重量％）イカ油（理研ビ
タミン社製）０．５ｇ、イソブタノール５　ｍｆｌ及び
リパーゼＰ　Ｌ−２６６粉末を３ｍｇ’−５ｍｇ、１０
ｎ＋ｇ又は２０ｍｇ採取し、密閉容器中で３５゜Ｃにて
ｌ２時間撹拌反応した。分解率は夫々４０％、４９％、
５３％、６３％となるようにした。ＭＧの生戒量は分解
率４０％のときは６．８％、分解率が４９％のときは８
．１％、分解率が５３％のときは１８．１％、分解率が
６３％のときは２３．２％であり、分解率が５０％未満
ではＭＧの生成量は小さく、低収率となることが分かる
。

実ＩＨ片型 シグマ社製リパーゼ（シュードモナス属の生産するリパ
ーゼ）　１００単位にイカ油（理研ビタミン社製）０．
１ｇ、イソブタノール１成を加え、３５゜Ｃで２４時間
攪拌反応した。ＭＧＯ生威量は７．６％、分解率６４％
であった。また、上記に代えてリバーゼＰＬ２６６粉末
４ｍｇ（８０単位）を使用し、同様の条件で１３時間反
応したとき、ＭＧｏ生戒量は１７．６％、分解率６３％
であり、シグマ社製リパーゼに比べてより多量のＭＧを
生威したことが明らかである。更に、ＭＧの脂肪酸組成
は第１５表に示したように、１．３−位置特異性のある
アルカリ性リパーゼ（ＰＬ２６６）は、位置特異性のな
いリパーゼ（シグマ社製リパーゼ）により生威されたＭ
Ｇに比べてＰＵＦＡの含有率が高くなっている。

（以下余白） 第１５表　位置特異性の有無による差 タノールｌｄを加え、十分に撹拌抽出を行った。

石油エーテル層を回収し、窒素気流下に濃縮し、イアト
ロスキャンにより１．３−ＤＣと１，　　２ＤＧの比率
を測定した。結果を第ｌ６表に示した。

第１６表　リパーゼの種類によるＤＣ生戒比率なお、１
．３−位置特異性のあるリパーゼによってＴＧを加水分
解した時、生或されるＤＧは主に１．２−ＤＧであり、
ｌ，３−ＤＣは生戊されず、また位置特異性のないリパ
ーゼでは１．２一〇’Ｇは１．３−ＤＧの約２倍を生或
すると考えられる。

オリーブ油を０．２ｇ、２．２％塩化カルシウムを０．
６　ｒｔｔｌ．，　０．１％コール酸ナトリウムを１．
５　ｄ、５０ｍＭＴｒｉｓ（ｌリスヒドロキシアミノメ
タン）−ＭＣＩ緩衝液（Ｐ　Ｈ８．０　）　５ｄ及び各
種のリパーゼ５０μを１１３　ｍｌ共栓付試験管に採取
し、４０’Ｃにて３分間振とう反応を行った。６Ｎ−塩
酸２　ｍ（ｌを添加して反応を停止した後、石油エーテ
ル１０ｍｌとエリパーゼＰ　Ｌ−６７９粉末０．０５ｇ
、タラ浦（油蝉薬品社製）０．５ｇ及び蒸留水０．２５
ｍｌ、０．５ｍｌ，０．７５ｍＪ！を夫々溶解したｎ−
プロパノール５　ｍｌｌを密閉容器に採取し、３５゜Ｃ
で１２時間攪拌反応した。水分は夫々５．８％、１１％
、１６．４％であった。

ＭＧの生或量は水分１５％以下（即ち、５．８％、１１
％）で夫々３９．１％、３７．３％であったが、水分ｌ
５％を超える（即ち、■６．４％）と６．８％とかなり
低くなった。また、第１７表に示したように、水分１５
％以下ではＭＧへＰＵＦＡが効果的に濃縮されているこ
とが分かる（水分量が０．００９％、０．２％、３％の
場合も併せて示した）。

第１７表　水分存在下でのＰＵＦＡの濃縮（重量％）且
Ｍｊｌ！ＬＬ イワシ油（理研ビタミン社製）７．０ｇ、三級ブタノー
ル５　ｒｔｄｌをｎ−ヘキサンに溶解して４０ｍｌｌと
し、モレキュラーシブス３Ａ５　ｇを加え、■２時間脱
水処理をした（水分は１８０ｐｐｍになった）。本溶液
２０ｍｌを採取し、リパーゼＰ　Ｌ−２６６粉末４００
　ｍｇを添加し、５０″Ｃで２４時間攪拌反応した。反
応物中で１．８％のＭＧが生成され、分解率は０％であ
った。

ＭＧの脂肪酸組成を第ｌ９表に示した。

第１９表　ＭＧの脂肪酸組或（重徴％）このように、使
用するアルコールが三級アルコールでは、反応が進行し
ないことが分かる。

比較拠主 タリパーゼ（田辺製薬社製）０．１ｇ、イカ油（理研ビ
タミン社製）０．５ｇ及びｎ−ヘキサノール５　ｔｎｌ
を密閉容器に採取し、３５゛Ｃで２４時間攪拌反応した
が、エステルの生或及びＴＧの分解は全く起こらず、従
ってＭＧを得ることは出来なかった．次いでリパーゼＭ
−ＡＰ　（天野製薬社製）　５０ｌＷｇを使用して同様
に反応したが、エステルの生成及びＴＧの分解は全く起
こらず、ＭＧを得ることは出来なかった。

更に、リパーゼＯＦ（名糖産業社製）粉末２０ｍｇを使
用し、同様の反応を２４時間行ったが、分解は全く起こ
らず、ＭＧを得ることは出来なかった。

これらの結果から、酸性側に至適ｐ　Ｈを持つリパーゼ
はアルコリシス反応を触媒する能力を持たず、ＭＧにＰ
ＵＦＡを濃縮することに利用することは出来ないことが
分かる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、高度不飽和脂肪酸残基を含有する油脂と、置換基を
   有していてもよい一級又は二級アルコールとをアルカリ
   性リパーゼの作用下で反応させることによって、前記油
   脂を前記高度不飽和脂肪酸残基に富むモノグリセリドと
   脂肪酸エステルとに分解する高度不飽和脂肪酸モノグリ
   セリドの製造方法。