JP3340182B2 - ドコサヘキサエン酸含有トリグリセリドの製造法 - Google Patents

ドコサヘキサエン酸含有トリグリセリドの製造法

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、構成脂肪酸として１，
３位に任意に選択される１種類の脂肪酸を含有し、かつ
２位にドコサヘキサエン酸を含有しているトリグリセリ
ドを製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、ドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨ
Ａと略記する）には、学習機能向上作用、制癌作用、あ
るいは血中脂質低下作用など多くの生理活性を有するこ
とが明かになりつつある。ヒトにおいては、脳灰白質
部、網膜、神経、心臓、精子、母乳などにＤＨＡが多く
含まれている。そして、老齢になるにつれて脳内のＤＨ
Ａ含量が減少することなどから、神経系において何らか
の重要な役割を担っていると推測されている。そこで、
乳幼児食、特に未熟児用の食品にはＤＨＡの添加が必要
であると考えられている。また、食品へＤＨＡを添加す
ることにより、高年齢層の脳機能向上に役立つとの期待
も持たれるに至っている。
【０００３】海産魚の魚油中には、多くのＤＨＡが含有
されていることが知られている。また、エイコサペンタ
エン酸（以下、ＥＰＡと略記する）やＤＨＡなどの高度
不飽和脂肪酸は、イワシ油をはじめとする魚油、あるい
は高度不飽和脂肪酸生成微生物から分離、精製されてい
る。特にＤＨＡの場合、ＤＨＡを産生する微生物は見出
されておらず、価格やイメージの面から魚油の使用が重
要視されている。そこで、複雑な脂肪酸組成を有する魚
油からＤＨＡを選択的に分離、精製する方法が種々試み
られている。魚油から高度不飽和脂肪酸を分離、精製す
るに際しては、その複雑な脂肪酸構成のために、予め化
学的な処理あるいは酵素的な処理を行う必要があると考
えられる。通常、化学的な方法あるいは酵素的な方法に
より魚油を加水分解し、遊離脂肪酸あるいはエステル化
物として得られるＤＨＡを尿素付加法、塩形成法、超臨
界二酸化炭素抽出法、カラムクロマトグラフィーなどに
供することでＤＨＡの精製を行っている。なお、酵素的
な方法は化学的な方法に比べて温和な条件で処理するこ
とができるので、不安定な高度不飽和脂肪酸を含有する
油脂の前処理としては、酵素的な方法を行うことが好ま
しいと考えられ、酵素の基質特異性あるいは位置特異性
を利用してＤＨＡを得る方法として、Ｃａｎｄｉｄａ
ｃｙｌｉｄｒａｃｅａ由来のリパーゼを用いて選択的に
加水分解を行う方法（特開昭５８−１６５７９６号公
報、特開平３−１９６９３号公報）などが提案されてい
る。
【０００４】また、グリセリドを低級アルコールのエス
テルにした後、蒸留や尿素包接処理して濃縮分離を行う
方法（特開昭５８−８０３７号公報）、逆相クロマトグ
ラフィーを用いる方法（特開５８−８８３３９号公報、
特開昭５８−１０９４４４号公報）などが知られている
が、酸化安定性が弱く極めて不安定な物質であるため多
段階の工程が必要であり、精製に多大なコストもかかる
という問題があり、供給量は十分ではない。その結果、
実際にはＤＨＡのエチルエステルが医薬品として上市さ
れているに過ぎない。一般に、エチルエステル体やメチ
ルエステル体の油脂はトリグリセリド体と比較して、小
腸での消化吸収性において劣るといわれている。したが
って、医薬品分野や食品分野においては、トリグリセリ
ドの形態でのＤＨＡの供給が強く望まれている。特に、
食品分野でＤＨＡを利用するためには、トリグリセリド
の形態のＤＨＡを安価に、かつ大量に供給する必要があ
るので、効率が良く、しかも酸化安定性を考慮したＤＨ
Ａの製造法の開発が望まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、魚油か
らＤＨＡ含量の高い油脂を分離する方法について、鋭意
検討を行ったところ、トリグリセリドの１，３位に特異
的に作用するリパーゼのエステル交換反応で、構成脂肪
酸として２位に高度不飽和脂肪酸を含有し、１，３位に
任意に選択された１種類の脂肪酸を含有するトリグリセ
リドを生成させることにより、通常の分離、精製方法で
容易にＤＨＡ含量の高いトリグリセリドを得ることがで
きることを見出し、本発明を成すに至った。したがっ
て、本発明は、構成脂肪酸として２位にＤＨＡを含有
し、かつ１，３位に任意に選択される１種類の脂肪酸を
含有しているトリグリセリドを製造する方法を提供する
ことを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】以下、本発明のＤＨＡ含
有トリグリセリドの製造法について説明する。本発明で
原料として用いることのできる構成脂肪酸としてトリグ
リセリドの２位にＤＨＡを含有している油脂としては、
ＤＨＡが２位に結合しているトリグリセリドであれば、
その含量も含めて、どのような種類の油脂でも用いるこ
とができ、例えば、ＤＨＡ含量が１０％未満の油脂であ
っても構わない。また、トリグリセリドとして純粋であ
れば前段階での更なる精製処理は必要ではない。但し、
２位のＤＨＡ含量が少ない油脂ほど処理に時間を要する
ので原料として用いることは不利である。
【０００７】また、任意に選択される１種類の脂肪酸あ
るいは脂肪酸エステルとしては、ミリスチン酸、パルミ
チン酸、ステアリン酸などの飽和酸やオレイン酸、リノ
ール酸、ＥＰＡ、ＤＨＡなどの不飽和酸、あるいは、そ
れらの脂肪酸とエチルアルコールやメチルアルコールと
のエステルなどを例示することができる。さらには、高
オレイン酸含有油であるオリーブ油などの加水分解物や
ケン化物なども用いることができる。
【０００８】本発明では、まず、構成脂肪酸としてトリ
グリセリドの２位にＤＨＡを含有している油脂と、任意
に選択される１種類の脂肪酸あるいは脂肪酸エステルと
を原料とし、１，３位に特異的に作用するリパーゼを作
用させることによりエステル交換反応を行って、構成脂
肪酸として２位にＤＨＡを含有し、かつ１，３位に任意
に選択される１種類の脂肪酸を含有しているトリグリセ
リドを生成させる。なお、本発明で用いることのできる
１，３位に特異的に作用するリパーゼとしては、ブタ膵
臓リパーゼやＲｈｉｚｏｐｕｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ属などの微生物が生産するものを例示することがで
きる。これらのリパーゼの使用形態については、特に限
定されるものではないが、固定化酵素あるいは化学修飾
酵素を用いることが望ましい。リパーゼの使用量は、反
応条件や用いる原料油脂の性質により適宜決定すれば良
く、特に制限されるものではない。
【０００９】本発明は、特に、ＤＨＡが構成脂肪酸とし
て魚油中のトリグリセリドの２位に集中していることを
利用したものであって、トリグリセリドの１，３位に特
異的に作用するリパーゼを用い、トリグリセリドの２位
にＤＨＡを残したまま１，３位の脂肪酸のみを置換し、
構成脂肪酸として２位にＤＨＡを含有し、かつ１，３位
に任意に選択される１種類の脂肪酸を含有しているトリ
グリセリドを生成させる。つまり、トリグリセリドと脂
肪酸とのアシドリシス反応、あるいはトリグリセリドと
低級アルコール脂肪酸エステルとのエステル交換反応に
より、油脂中の１，３位の脂肪酸が任意に選択された１
種類の脂肪酸と置換される。なお、生成した遊離脂肪
酸、遊離脂肪酸エステル、モノグリセリド、ジグリセリ
ドなどは、アルカリ洗浄、水蒸気蒸留、分子蒸留、溶剤
抽出などの処理を行うことにより除去することができ
る。このようにして、トリグリセリドの２位のＤＨＡを
残したまま、魚油の複雑な脂肪酸構成よりなる多くの分
子種を整理し、単純化することができる。
【００１０】次に、このようにして得られる１，３位に
任意に選択される１種類の脂肪酸を含有しているトリグ
リセリドから、構成脂肪酸として２位にＤＨＡを含有
し、かつ１，３位に任意に選択される１種類の脂肪酸を
含有しているトリグリセリドを分離する。この分離に
は、通常、行われている晶析、抽出、吸着、クロマトグ
ラフィー、膜分離などの技術を用いることが可能である
が、作業効率などを考えるとクロマトグラフィーを用い
ることが有利である。従来より行われているカラムクロ
マトグラフィーには、回分式、循環式、移動床式、擬似
移動床式など幾つかの操作形式が知られているが、特に
擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用いること
が好ましい。
【００１１】例えば、魚油とオレイン酸とを原料として
用いた場合、まず、生成した１，３位にオレイン酸を含
有しているトリグリセリドから、カラムクロマトグラフ
ィーにより、１，３−ジオレオ−２−エイコサペンタエ
ン及び１，３−ジオレオ−２−ドコサヘキサエンの２種
のトリグリセリドを分離する。そして、この２種類のト
リグリセリドを擬似移動床式クロマト分離装置で精製す
ることができる。このようにして得られたトリグリセリ
ドは、３３％のＤＨＡを含有することとなる。
【００１２】なお、疑似移動床クロマト分離装置の溶出
条件を変えることにより、ＥＰＡなどの高度不飽和脂肪
酸を２位に含有するトリグセリドを含む組成物を調製す
ることができるので、必要に応じてＤＨＡ／ＥＰＡ比を
制御したトリグリセリドを提供することも可能である。
また、原料として用いる脂肪酸を適宜選択することによ
り、飽和脂肪酸（Ｓ）／不飽和脂肪酸（Ｕ）比やｎ−３
系脂肪酸／ｎ−６系脂肪酸比を自在に制御することもで
きる。次に本発明の実施例を挙げて具体的に説明する。
【００１３】
【実施例１】イワシ油（ＤＨＡ含量６．５１％）１００
ｇとオレイン酸（純度９５％）１，０００ｇとを原料と
し、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ由来のリパーゼ
を脂肪酸で化学修飾したリパーゼ４０ｇを用いて、ｎ−
ヘキサン中で、４０℃、２４時間酵素反応を行った。反
応終了後、エタノール：水（９：１）の溶媒を用いて脂
肪酸を抽出し、生成したトリグリセリド８０ｇ（ＤＨＡ
含量５．４８％）を得た。このトリグリセリドを１２．
５ｇ／ｌ濃度でアセトン：アセトニトリル（１：１）の
溶媒に溶解した後、ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０（ＹＭ
Ｃ社製）を充填したカラム（直径２５ｍｍ、長さ４６０
ｍｍ）で精製を行い、１，３−ジオレオ−２−エイコサ
ペンタエン及び１，３−ジオレオ−２−ドコサヘキサエ
ンを含む画分をＵＶ２０６ｎｍ及びガスクロマトグラフ
ィーで確認して回収した。次に、１，３−ジオレオ−２
−エイコサペンタエン及び１，３−ジオレオ−２−ドコ
サヘキサエンを含む画分１２ｇを１２．５ｇ／ｌ濃度で
アセトン：アセトニトリル（２：１）の溶媒に溶解し、
ＳＭＢ処理液とした。ＳＭＢは、カラムの直径２５ｍｍ
長さ４６０ｍｍの８塔型で、各々ＯＤＳ−ＡＭ１２０−
Ｓ５０（ＹＭＣ社製）を充填し、移動相としてアセト
ン：アセトニトリル（１：１）の溶媒を用いた。ＳＭＢ
の運転条件は、処理液供給量０．８９ｍｌ／分、溶離液
供給量２．５３ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量
１．７１ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量１．７１ｍ
ｌ／分とし、カラム温度４０℃、ステップ時間１１４．
８９分とした。その結果、エキストラクトに目的画分
１，８４４ｍｌを得た。このエキストラクトを濃縮乾固
して１，３−ジオレオ−２−ドコサヘキサエン５．４ｇ
（純度９２．３％）を得た。
【００１４】
【実施例２】カツオ油（ＤＨＡ含量７．９１％）５００
ｇとオレイン酸（純度９５％）６００ｇを原料とし、Ｍ
ｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ由来の固定化酵素リポザイム
（ノボ社製）６０ｇを用いて、ｎ−ヘキサン中で、６０
℃、６時間酵素反応を行った。反応終了後、リポザイム
を濾別し、アルカリ脱酸法で脂肪酸部分を除去して、生
成したトリグリセリド４３２ｇ（ＤＨＡ含量１１．２０
％）を得た。このトリグリセリドを１２．５ｇ／ｌ濃度
でアセトン：アセトニトリル（１：１）の溶媒に溶解し
た後、ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０（ＹＭＣ社製）を充
填したカラム（直径２５ｍｍ、長さ４６０ｍｍ）で精製
を行い、１，３−ジオレオ−２−エイコサペンタエン及
び１，３−ジオレオ−２−ドコサヘキサエンを含む画分
をＵＶ２０６ｎｍ及びガスクロマトグラフィーで確認し
て回収した。次に、１，３−ジオレオ−２−エイコサペ
ンタエン及び１，３−ジオレオ−２−ドコサヘキサエン
を含む画分８６．４ｇを１２．５ｇ／ｌ濃度でアセト
ン：アセトニトリル（２：１）の溶媒に溶解し、ＳＭＢ
処理液とした。ＳＭＢは、カラムの直径２５ｍｍ長さ４
６０ｍｍの８塔型で、各々ＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０
（ＹＭＣ社製）を充填し、移動相としてアセトン：アセ
トニトリル（２：１）の溶媒を用いた。ＳＭＢの運転条
件は、処理液供給量０．８９ｍｌ／分、溶離液供給量
２．５３ｍｌ／分、エキストラクト抜き出し量１．７１
ｍｌ／分、ラフィネート抜き出し量１．７１ｍｌ／分と
し、カラム温度４０℃、ステップ時間６０．８４分とし
た。その結果、エキストラクトに目的画分１３，２８０
ｍｌを得た。このエキストラクトを濃縮乾固して１，３
−ジオレオ−２−ドコサヘキサエン４０．１ｇ（純度９
５．１％）を得た。
【００１５】
【発明の効果】本発明の方法により、魚油などのＤＨＡ
を高度に含有する油脂から、医薬及び食品の素材として
有用なＤＨＡ含有トリグリセリドを容易に分離、回収す
ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−273485（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−215286（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−132490（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−168434（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−171177（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−218091（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−334504（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−41507（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C11C 3/10 C07C 69/587 C12P 7/64 ＣＡ（ＳＴＮ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ) 食品関連文献情報（食ネット)

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】構成脂肪酸としてトリグリセリドの２位に
    ドコサヘキサエン酸を含有している油脂と、任意に選択
    される１種類の脂肪酸あるいは脂肪酸エステルとを原料
    とし、トリグリセリドの１,３位に特異的に作用するリ
    パーゼを作用させてエステル交換反応を行わせ、構成脂
    肪酸として２位にドコサヘキサエン酸を含有し、かつ
    １,３位に任意に選択される１種類の脂肪酸を含有して
    いるトリグリセリドを生成させた後、このドコサヘキサ
    エン酸含有トリグリセリドを擬似移動床式クロマト分離
    装置を用いて採取することを特徴とするドコサヘキサエ
    ン酸含有トリグリセリドの製造法。
  2. 【請求項２】構成脂肪酸としてトリグリセリドの２位に
    ドコサヘキサエン酸を含有している油脂が、魚油である
    請求項１に記載のドコサヘキサエン酸含有トリグリセリ
    ドの製造法。
  3. 【請求項３】任意に選択される１種類の脂肪酸が、オレ
    イン酸である請求項１または２に記載のドコサヘキサエ
    ン酸含有トリグリセリドの製造法。
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GB201300354D0 (en) * 2013-01-09 2013-02-20 Basf Pharma Callanish Ltd Multi-step separation process
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