JPH029796B2

JPH029796B2 -

Info

Publication number: JPH029796B2
Application number: JP59108547A
Authority: JP
Inventors: Osamu Ozawa; Akira Tano; Kotaro Ootsuka; Shuichi Ooki
Original assignee: Nissin Sugar Manufacturing Co Ltd
Current assignee: Nissin Sugar Manufacturing Co Ltd
Priority date: 1984-05-30
Filing date: 1984-05-30
Publication date: 1990-03-05
Also published as: JPS60251896A

Description

【発明の詳細な説明】本発明はガラクトオリゴ糖の製造方法に関す
る。更に詳しくは、下記(A)(B)の両方またはいずれ
か一方を含むガラクトオリゴ糖をクリプトコツカ
ス属に属する微生物を利用して製造する方法に関
する。

(A) Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｏ−β−Ｄ−グルコース (B) Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｏ−β−Ｄ−グルコース近年ガラクトース残基を含むオリゴ糖がビフイ
ズス菌増殖因子として注目されており、乳糖また
は乳糖含有物にアスペルギリス・オリーゼの生産
したβ−ガラクトシダーゼを作用させることによ
つて得られる一般式Gal−（Gal）ｎ−Glc（式中、
Galはガラクトース残基、Glcはグルコース残基、
ｎは１〜４の整数を表わす）で示されるオリゴ糖
や一般式Ｏ−β−Ｄ−Gal−（１→４）−［Ｏ−β
−Ｄ−Gal−（１→６）］−Ｄ−Glc（式中Galはガラ
クトース残基、Glcはグルコース残基）で示され
るオリゴ糖をビフイズス菌増殖因子として用いる
ことが提案されている（特公昭58−20266、特開
昭58−99497）。

これら従来の方法は、乳糖にβ−ガラクトシダ
ーゼを作用させる時に起きるガラクトース転移反
応（ガラクトシド結合の転移）によつてガラクト
ース残基を含むオリゴ糖を生成させるものであつ
て、この方法では使用するβ−ガラクトシダーゼ
を製造する必要があり、加えて反応生成物中に乳
糖の分解物生成物であるグルコースやガラクトー
スなどの単糖類がかなりの量含まれており、ガラ
クトース残基を含むオリゴ糖のみを精製するのが
困難である。またこの方法ではガラクトース残基
を含むオリゴ糖が10数種程度生成してくるので、
単位物質としてのガラクトース残基を含むオリゴ
糖を分離することは極めて難しく、実用性に乏し
い。

一方、ガラクトース残基を含むオリゴ糖を生成
する微生物を培養して、その培養物からガラクト
ース残基を含むオリゴ糖を製造する公知の方法と
しては、 Penicillium ChrysogenumによるＯ−β−
Ｄ−Gal−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−Gal−（１→
４）−Ｄ−Glc（Tetrahedron、1960、vol.9、
p125〜129） Sporobolomyces SingularisによるＯ−β−
Ｄ−Gal−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−Gal−（１→
４）−Ｄ−Glc、Ｏ−β−Ｄ−Gal−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−Gal−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−
Gal−（１→４）−Ｄ−Glc（Can.J.Chemistry、
1964、vol.42、p1341〜1344） Bacillus sp.No177−８によるガラクトース、
グルコース（β−Ｄ−結合）からなる三糖類
（特開昭56−115796）（以上、Galはガラクトース残基、Glcはグルコ
ース残基を表わす）などの微生物による方法が報告されているが、こ
れらの方法はオリゴ糖の収率が低いか、培養条件
が限定されているなど、実用化の要請に応じられ
ないものである。

本発明者らは、ビフイズス因子として有用であ
ると考えられているガラクトース残基を含むオリ
ゴ糖の生産能の強い微生物を求めて、広く自然界
より微生物の検索を行なつた結果、クリプトコツ
カス（Cryptococcus）属の微生物が培養物中に
ガラクトース残基を含むオリゴ糖であるガラクト
オリゴ糖を大量に蓄積することを認め本発明にい
たつた。

本発明は下記式（）（）で示されるガラク
トオリゴ糖の(A)及び(B)の両方またはいずれか一方
を含むガラクトオリゴ糖の製造方法であつて、ク
リプトコツカス属に属し、上記ガラクトオリゴ糖
を生産する能力を有する微生物を培養し、培養物
中に上記ガラクトオリゴ糖を蓄積せしめ、次いで
培養物中より上記ガラクトオリゴ糖を分離、採取
するものである。

(A) 式を有するＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース。

(B) 式を有するＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース。

本発明に使用する微生物と前記従来の製造方法
に用いる微生物とは、微生物の分類学上明らかに
異なる属に属するものであつて、本発明に使用す
る微生物を用いたガラクトオリゴ糖の製造方法は
過去に報告された例がなく全く新規な製造方法で
ある。

本発明によるガラクトオリゴ糖の製造方法は、
ガラクトオリゴ糖を大量に培養液中に蓄積させる
ばかりか、ガラクトオリゴ糖以外の単糖類、オリ
ゴ糖の生成が極めて少ない製造方法であり、ガラ
クトオリゴ糖の分離、精製、固形化、結晶化が非
常に容易である点からも、従来の欠点を全てカバ
ーした優れたガラクトオリゴ糖の製造方法であ
る。

更に本発明による製造方法においては、培養条
件を適宜コントロールすることにより、前記(A)(B)
のガラクトオリゴ糖を単独または混合物として任
意に生成せしめることが可能である。

以下、本発明のガラクトオリゴ糖の製造方法に
ついて詳述する。

本発明において用いる微生物は、ガラクトオリ
ゴ糖生産能を有するものであり、クリプトコツカ
ス（Cryptococcus）属に属する菌種である。そ
の一例としてクリプトコツカス・ローレンテイ・
バラエテイ・ローレンテイ（Cryptococcus
laurentii var.laurentii）OKN−４（以下OKN−
４という）は上記の特性を有し、ガラクトオリゴ
糖を生産するものであつて、本発明者らにより栃
木県那須群の土壌中より発見された菌種であり、
工業技術院微生物工業技術研究所へ微工研菌寄第
7629号として寄託されている。

OKN−４は次の菌学的性質を有する。

なお、以下に記載の菌学的諸性質の試験は、 J.Lodder；The Yeast（1970）飯塚広、後藤昭二；酵母の分類同定法
（1969）長谷川武治；微生物の分類と同定（1975）に準拠し、また分類方法はJ.Lodder；The
Yeast（1970）に準拠して行なつた。

＜OKN−４の菌学的性質＞ (a) 各培地における生育状態 MY液体培地：25℃３日間培養で、細胞の形態
は球、楕円形、伸長形大きさは（3.0〜5.3）×（4.0〜5.3）μ 多極出芽、islet状の皮膜形成培地はにごり沈澱を形成 MY寒天培地：25℃１か月培養で、コロニーは
淡いオレンジ色から黄褐色光沢があり、軟質で、粘稠である。

スライド培養：ポテト・デキスローズ培地で菌
糸、偽菌糸は形成しない。

(b) 子のう胞子の形成：通常の胞子形成培地上では認められない。

(c) 射出胞子の形成： MY寒天平面培養で認められない。

(d) 生理的性質 (1) 最適生育条件：PH６〜７、温度30℃ (2) 生育の範囲：PH３〜９、温度20〜40℃ (3) 硝酸塩の同化：同化しない (4) 指肪の分解：分解しない (5) 尿素の分解：分解する (6) ゼラチンの液化：液化しない (7) カロチノイドの生成：生成しないか生成し
てもごく僅か (8) 有機酸の生成：生成しない (9) デンプン様多糖類の生成：生成する (10) ビタミンの要求性：ビタミン欠培地で生育
しない (11) アルブチンの分解：分解する (12) シクロヘキシミド耐性：生育しない (13) 37℃での生育：生育する (14) 50％グルコース酵母エキス培地での生
育：生育しない (e) 各炭素源に対する同化性 (1) Ｄ−アラビノース＋ (2) Ｌ−アラビノース＋ (3) Ｄ−リボース＋ (4) Ｄ−キシロース＋ (5) Ｄ−グルコース＋ (6) Ｄ−ガラクトース＋ (7) Ｌ−ラムノース＋ (8) Ｌ−ソルボース＋ (9) 麦芽糖＋ (10) シヨ糖＋ (11) 乳糖＋ (12) メリビオース＋ (13) セロビオース＋ (14) トレハロース＋ (15) ラフイノース＋ (16) メレジトース＋ (17) α−メチル−Ｄ−グルコシド＋ (18) 可溶性デンプン ± (19) イヌリン − (20) エタノール＋ (21) アドニツト＋ (22) エリトツクス＋ (23) イノシツト＋ (24) Ｄ−マンニツト＋ (25) Ｄ−ソルビツト＋ (26) ズルシツト＋ (27) グリセリン＋ (28) DL−乳酸塩 − (29) コハク酸塩＋ (30) クエン酸塩 − (31) サリシン＋（＋：よく同化する±：同化が疑わしい−：同
化しない）なお、糖類に対する発酵性はない。

以上の菌学的性質により本菌株はクリプトコツ
カス・ローレンテイ・バラエテイ・ローレンテイ
に属するものと同定された。

本発明における使用微生物としてはOKN−４
はその一例であり、その自然的及び人工的変異株
は勿論、クリプトコツカス属に属する菌種でガラ
クトオリゴ糖生産能を有する微生物は総て本発明
方法において使用することができる。

本発明方法によるガラクトオリゴ糖生産菌の培
養は、通常用いられる固体培地または液体培地が
使用される。本発明に使用される培地は、本倍養
としては炭素源として乳糖若しくは全乳、脱脂乳
のように乳糖を一成分として含有する物質を含む
が、前培養、保存培養としては微生物が同化し得
る炭素源及び消化し得る窒素源、無機塩類、栄養
源などを適宜に含有した培地を用いることができ
る。例えば、炭素源として、ブドウ糖、ソルビト
ール、蔗糖、麦芽糖などを用い、使用菌を充分生
育せしめた後、乳糖及び乳糖含有物質を加えて培
養することも可能である。窒素源としては、酵母
エキス、カゼイン、コーンスチープリカー、大豆
粉、綿実粉、小麦グルテン、ペプトン、肉エキス
などの窒素化合物や（NH₄）₂SO₄、NH₄Cl、尿素
などの無機窒素化合物を、無機塩類としてナトリ
ウム塩類、カリウム塩類、マグネシウム塩類、リ
ン酸塩類などを適宜に用いることができる。更に
ビタミン類や微量金属塩を追加して使用菌の生育
を良好ならしめることができる。

炭素源としての乳糖の濃度は１〜40％の範囲
で、好ましくは３〜30％であり、培養温度はガラ
クトオリゴ糖を生産する範囲内で適宜変更し得る
が、20〜40℃、最適温度としては30℃付近にあ
る。培養液のPHはPH２〜９の範囲内で、好ましく
はPH３〜６であり、培養時間は条件によつて異な
るが１日から６日間程度である。静置培養または
通気攪拌、振とう培養のいずれの方法でも行なう
ことができる。

このようにして得られたガラクトオリゴ糖を含
有する培養物は第１図及び第３図に示すように原
料である乳糖と生成物である前記(A)及び(B)のガラ
クトオリゴ糖が高濃度に蓄積された組成の培養物
であつて、単糖類や上記ガラクトオリゴ糖以外の
オリゴ糖の生成が極めて少ない。

このため、次に述べる通常の分離、分画、精
製、固形化、結晶化手段を容易ならしめ、単位物
質としてのガラクトオリゴ糖を効率よく得ること
ができる。

培養が終了した培養物は菌体を除去してガラク
トオリゴ糖を分離採取する。即ち、培養物中の生
成されたガラクトオリゴ糖の大部分は、菌体外培
養物中に含まれているので、まず培養液を遠心分
離またはケイ藻土濾過などの手段によつて固形物
を除去し、得られる上澄液または濾液よりガラク
トオリゴ糖を採取する。ガラクトオリゴ糖の分
画、精製方法は公知の手段を適宜に利用して行な
うことができる。例えば上記の上澄液または濾液
をイオン交換樹脂で処理して、不純物質を交換体
に吸着させて除去した後、これを減圧濃縮し、濃
縮物を活性炭粉末１：セライト１の混合物をカラ
ムに充填してこれを吸着させ、水で十分に洗浄し
て乳糖及び不純物を除去し、次にエタノールを10
％含む溶出液にてガラクトオリゴ糖の第１溶出物
（以下GO−１という）を溶出させる。次いでエ
タノールを25％含む溶出液にてガラクトオリゴ糖
の第２溶出物（以下GO−２という）を溶出させ
る。

また、上記培養物または上澄液、濾液に乳糖を
同化する微生物を接種し培養して乳糖を消費させ
れば、ガラクトオリゴ糖を容易に高純度にまです
ることもできる。

かくして得られたGO−１の溶出液とGO−２
の溶出液は、常法により、例えば混合したものを
減圧濃縮した後、真空乾燥法、凍結乾燥法により
ガラクトオリゴ糖を固形化することができる。

なお、イオン交換樹脂処理後の液を濃縮して、
シラツプ状となすか、更にこれを真空乾燥法、ス
プレードライ法、凍結乾燥法などにより固形化
し、ガラクトオリゴ糖含有糖混合物とすることも
できる。

GO−１の溶出液を減圧濃縮し、これに含水メ
タノール、アセトンを加えることにより、GO−
１を結晶化することができる。このようにして得
られた結晶は白色の針状結晶で、薄層クロマト法
により単位物質である。

一方、GO−２の溶出液を減圧濃縮し、これを
凍結乾燥すると白色の粉末が得られる。この粉末
は薄層クロマト法により単位物質である。

これらのGO−１（結晶）、GO−２（凍結乾燥粉
末）の理化学的性質は下記の通りである。

＜ガラクトオリゴ糖の理化学的性質＞ (1) 元素分析値： GO−１Ｃ：42.47％Ｈ：6.30％ GO−２Ｃ：42.81％Ｈ：6.40％ (2) 分子量： GO−１ 504 GO−２ 666 分子量はGO−１、GO−２の完全メチル化
体及び完全アセチル化体のマススペクトルより
求めた。

(3) 構成糖の比率： GO−１グルコース：ガラクトース＝１：２ GO−２グルコース：ガラクトース＝１：３ 1NHClを用いて加水分解し、生成する単糖
をグルコースはGlucoseB−Test wako（和光
純薬製）法にて、ガラクトースはＦ−キツト乳
糖／ガラクトース（ベーリングマンハイム山の
内製薬製）にて定量し、その比を求めた。

(4) 全糖に対する還元糖の比率： GO−１全糖：還元糖＝３：１ GO−２全糖：還元糖＝４：１全糖はフエノール硫酸法にて測定し、還元糖
はソモギー・ネルソン（Somogyi−Nelson）
法にて測定した。

(5) 融点： GO−１ 229.5〜230.5℃ (6) 比旋光度： GO−１［α］²⁵ _D＋61゜→＋39゜ GO−２［α］²⁵ _D＋36゜ (7) 紫外線吸収スペクトル： GO−１、GO−２とも特異な吸収はない。

(8) 赤外線吸収スペクトル： KBr法によるGO−１の赤外線吸収スペクト
ルは第２図に示す通りである。

(9) 溶媒に対する溶解性： GO−１、GO−２とも水に易溶、アセトン、
アルコール、クロロホルム、ベンゼンに不溶
で、含水アルコールに難溶である。

(10) 呈色反応： GO−１、GO−２ともアニリン、フタル酸
反応及びアンモア、硝酸銀反応は陽性でニンヒ
ドリン反応及び塩化第二鉄反応は陰性である。

(11) 塩基性、酸性、中性の区別： GO−１、GO−２とも中性である。

(12) 結合様式： (イ) GO−１、GO−２の水素化ホウ素ナトリ
ウム還元物を1NHClを用いて加水分解し、
この加水分解物を薄層クロマトグラフイーで
分析したところ、ガラクトースとソルビツト
が検出された。これにより還元末端はグルコ
ースである。

(ロ) GO−１、GO−２をメチル化分析するこ
とによつて２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチル−
１，５−ジ−Ｏ−アセチルガラクチトール２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−１，
４，５−トリ−Ｏ−アセチルガラクチトー
ル２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−１，
４，５−トリ−Ｏ−アセチルグルシトール
の３種のアルジトールアセテートが検出さ
れた。

(ハ) GO−１の完全メチル化体の核磁気共鳴ス
ペクトルを分析したところ α−アノマー： δ4.77（1H、Ｊ＝3.60Hz、Ｈ−１（α）） δ4.29（1H、Ｊ＝6.90Hz、Ｈ−1′（β）） δ4.58（1H、Ｊ＝6.75Hz、Ｈ−1″（β）） β−アノマー： δ4.14（1H、Ｊ＝7.50Hz、Ｈ−１（β）） δ4.34（1H、Ｊ＝6.90Hz、Ｈ−1′（β）） δ4.59（1H、Ｊ＝6.75Hz、Ｈ−1″（β）） (ニ) GO−２にβ−ガラクトシダーゼ（ホラ貝
由来、生化学工業製）を作用させると、ガラ
クトース、グルコースに分解された。

一方、α−ガラクトシダーゼ（Morti
erella vinacea由来、生化学工業製）を作用
させても、変化はなかつた。

以上(ロ)、(ハ)、(ニ)の結果より、GO−１、GO
−２の糖−糖間の結合様式はβであることが判
つた。

(13) 物質の色： GO−１白色の針状結晶 GO−２白色の紛末上記の理化学性質からGO−１は前記（）式
で示されるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１
→４）−Ｄ−グルコース、GO−２は前記（）
式で示されるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコースであることが確認され
た。

以下に本発明を実施例によつて具体的に説明す
るが、本発明はこれに何ら限定されるものでな
い。実施例における、全糖量はフエノール硫酸法
によりグルコース換算で示し、乳糖及びガラクト
オリゴ糖の定量は高速液体クロマトグラフイー
（ポンプは日立製作所製655型、検出器は昭和電工
製SE−31、カラムはLichrosorb−NH₂（5μｍ）
CicaMerk製、溶媒はアセトニトリル：水＝65：
35を用い、流速は0.7ml／min）を実施し、ピー
ク面積値より求めた。

実施例１ 500ml容坂口フラスコに滅菌した下記組成Ａの
培地80mlを入れたもの10本に、MY寒天斜面培地
に予め２〜３日前培養した前記OKN−４（微工研
菌寄第7629号）を各々一白金耳ずつ植菌し、30℃
で４日間ロータリー振とう培養器で培養した。

培地の組成Ａラクトース 50ｇ NH₄Cl ２ｇ酵母エキス 0.2ｇ KH₂PO₄ 0.8ｇ Na₂HPO₄・12H₂O 0.3ｇ MgSO₄・7H₂O 0.02ｇ水１ PH 6.0 得られた培養液800mlを遠心分離機（8000rpm）
により遠心分離を行ない、菌体等の固形物と上澄
液とに分ける。同様にして得たこの上澄液の高速
液体クロマトグラフを第１図に示した。次いで上
澄液を0.45ミクロンのフイルターで濾過した後、
減圧濃縮し、濃縮液100mlを得た。この濃縮液中
には全糖約33ｇ中、乳糖約13ｇ、GO−１約20ｇ
が含まれていた。この濃縮液を直径50mm×高さ
740mmの活性炭カラム（クロマト用活性炭とセラ
イトを１：１に混合し、水でスラリー形態にした
もの）へ300ml／時間の流速で通液した。次いで
4.5の水を500ml／時間の流速で通液し、乳糖及
び不純物を溶出させた後、10％濃度のエタノール
液７を1000ml／時間の流速で通液し、上記活性
炭に吸着されているGO−１を溶出させた。得ら
れた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥して白色の粉
末15.3ｇを得た。この粉末にはGO−１であるＯ
−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ−グ
ルコースが約99重量％含まれていた。

実施例２実施例１と同様にして得たガラクトオリゴ糖を
含む10％エタノール溶出液を減圧濃縮後、これに
含水メタノール及びアセトンを加えて、約５日間
冷蔵庫に保存すると、白色の針状結晶が得られ、
更に濾過後に結晶を採集してガラクトオリゴ糖の
結晶を約7.8ｇ得た。このものは薄層クロマト法
にて単位物質であつた。得られたGO−１の結晶
のKBr法による赤外線吸収スペクトルを第２図
に示した。

実施例３ 500ml容坂口フラスコに滅菌した下記組成Ｂの
培地を入れたもの10本にMY寒天斜面培地に予め
３日前培養した前記OKN−４（微工研菌寄第7629
号）を各々一白金耳ずつ植菌し、30℃で６日間ロ
ータリー振とう培養器で培養した。

培地の組成Ｂラクトース 50ｇ NH₄Cl ２ｇ酵母エキス３ｇ KH₂PO₄ 0.8ｇ Na₂HPO₄・12H₂O 0.3ｇ MgSO₄・7H₂O 0.02ｇ水１ PH 6.0 得られた培養液をケイ藻土真空濾過により、菌
体等の固形物と濾過液に分けた。同様にして得た
濾過液の高速液体クロマトグラフを第３図に示し
た。濾過液を減圧濃縮し、濃縮液100mlを得た。
この濃縮液中には全糖約30ｇ中、乳糖約９ｇ、
GO−１約13ｇ、GO−２約８ｇが含まれていた。
この濃縮液を直径50mm×高さ740mmの活性炭カラ
ム（クロマト用活性炭とセライトを１：１に混合
し、水でスラリー形態にしたもの）へ300ml／時
間の流速で通液した。次いで、4.5の水を500
ml／時間の流速で通液し、乳糖及び不純物を溶出
させた後、10％濃度のエタノール液７を1000
ml／時間の流速で通液し、上記活性炭に吸着され
ているGO−１を溶出させた。次いで25％濃度の
エタノール液５を1000ml／時間の流速で通液
し、活性炭に吸着されているGO−２を溶出させ
た。得られたGO−１を含む溶出液とGO−２を
含む溶出液を一緒に減圧濃縮後、凍結乾燥して白
色の粉末15.8ｇを得た。

実施例４実施例３と同様にして得たGO−２を含む25％
エタノール溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥して、
GO−２の白色粉末約４ｇを得た。このものは薄
層クロマト法にてワンスポツトを示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得た培養液中の糖組成を示
す高速液体クロマトグラフ、第２図は実施例２で
得られた結晶GO−１の赤外線吸収スペクトルを
示すグラフ、第３図は、実施例３で得た培養液中
の糖組成を示す高速液体クロマトグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】１下記式（）（）で示されるガラクトオリ
ゴ糖の(A)及び(B)の両方またはいずれか一方を含む
ガラクトオリゴ糖の製造方法であつて、クリプトコツカス属に属し、上記ガラクトオリ
ゴ糖を生産する能力を有する微生物を培養し、培
養物中に上記ガラクトオリゴ糖を蓄積せしめ、次
いで培養中より上記ガラクトオリゴ糖を分離、採
取することを特徴とするガラクトオリゴ糖の製造
方法。 (A) 式を有するＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース。 (B) 式を有するＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース。２前記微生物が、クリプトコツカス・ローレン
テイ・バラエテイ・ローレンテイ
（Cryptococcus laurentii var.laurentii）OKN−
４である特許請求の範囲第１項に記載のガラクト
オリゴ糖の製造方法。