JPS6384486A - ビフイドバクテリウム菌の増殖促進剤の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ビフィドバクテリウム菌（以下ビフィズス菌
という。）の増殖促進剤の製造法に関するものである。

（従来の技術） ビフィズス菌は１人間の腸内に生育する有用菌であり、
腸管内にビフィズス菌叢が形成されると、これが乳酸、
酢酸及び蟻酸を産生じ、腸管内のｐＨを低下させ、有害
菌の腸管内定着を防止することが知られている。このよ
うに有用なビフィズス菌の増殖を促進する活性をもつ化
合物は、粉乳、ドリンク剤の他、各種の食品に添加して
利用されている。

従来、このビフィズス菌の増殖促進剤（以下ビフィズス
因子という。）については多くの研究がなされており、
ラクチュロース、フラクトオリゴ糖、一般式：　Ｇａ　
１−（Ｇａ　ｊり、−Ｇｌ　ｃ（式中。

Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基、
ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるガラクトオリゴ
糖２人参エキス、Ｎ−アセチルラクトサミン等のビフィ
ズス因子が報告されている。

乳糖とＮ−アセチルグルコサミン又はその誘導体を原料
とするビフィズス因子の合成法に関しては、乳酸菌ラク
トバチルス・ブルガリス培養菌体破砕液に乳糖とＮ−ア
セチルグルコサミン又はその誘導体を加えて反応させる
もの（特公昭４９−４０９５６号公報参照。）、ラクト
バチルス・ビフィズス・ペン株から抽出した粗酵素液を
用いて乳糖とＮ−アセチルグルコサミンとを反応させる
もの〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ、　ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）　　２０８．　２
９９（１９５４））、　　ラクトバチルス・ビフィズス
・ペン株の菌体を用いて乳糖とＮ−アセチルグルコサミ
ンとを反応させるもの〔ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ｊ、　ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）
２１７、　７９　　（１９５５））が知られている。

（発明が解決しようとする問題点） 上記の乳糖とＮ−アセチルグルコサミン又はその誘導体
を原料とするビフィズス因子の製造法は。

いずれも乳酸菌菌体抽出液又は乳酸菌国体を反応の触媒
として用いており、この乳酸菌は１周知のように、その
生育に複雑な栄養要求性を示し、培養条件が限定され、
培養管理が難しいことなど。

工業的規模で大量に培養することは極めて困難である。

また、従来知られている反応では、乳糖中のガラクトシ
ル基の転移と同時に乳糖の分解反応も並行して起こり９
反応の基質である乳糖を無駄に消費し、目的物の収率が
低下するという欠点があった。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、このような問題点を解決するために鋭意
研究の結果、乳糖とＮ−アセチルグルコサミン又はその
誘導体を原料とするビフィズス因子の製造に、乳糖資化
能を有する酵母の静止菌体が利用できることを見出し１
本発明に到達した。

すなわち１本発明は、乳糖とＮ−アセチルグルコサミン
又はその誘導体を原料としてビフィドバクテリウム菌の
増殖促進剤を製造するに際し、乳糖とＮ−アセチルグル
コサミン又はその誘導体とを乳Ｗ！資化能を有する酵母
の静止菌体で処理することを特徴とするビフィドバクテ
リウム菌の増殖促進剤の製造法を要旨とするものである
。

本発明に用いられる酵母は、乳糖資化能を有し。

転移活性をもつものならばいかなる菌株でもよく。

その中でも、ロドトルラ属、ピヒャ属、スポロボロミセ
ス属、クルイベロミセス属、デバリオミセス属、キャン
ディダ属、トルロプシス属、クリプトコツカス属、トリ
コスポロン属、リボマイセス属、ブレラ属、ブレタノミ
セス属に属する乳糖資化能を有する酵母を使用すること
が好ましい。

そのような具体例としては、ロドトルラ・ラクトーザ　
（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　１ａｃｔｏｓａ）　　Ｉ　
Ｆ　Ｏ１４２３。

ＴＦＯ１４２４，クリプトコツカス・ローレンテイ　　
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　１ａｕｒｅｎｔｉｉ）
　　　Ｉ　　Ｆ　　Ｏ０３７２。

ＩＦＯＯ３８４，ＩＦＯＯ９３０，ＩＦＯ１３７６、Ｉ
ＦＯ１４８７，ピヒヤ・ポリモルファ（Ｐｉｃｈｉａ　
ｐｏｔ　ｍｏｒｐｈａ）　　Ｉ　ＦＯ１１６６，Ｉ　Ｆ
Ｏｌ　３５７、スポロボロミセス・シンギュラリス（Ｓ
ｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎｇｕｌａｒｉｓ）
　Ａ　Ｔ　ＣＣ２４１９３、クルイベＶミセス・ラクテ
ィス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏ−ｍｙｃｅｓ　Ｉａｃｔｉｓ）
ＩＦＯＯ４３３，ＩＦＯＯ６４Ｂ。

ＩＦＯ１０９０，ＩＦＯ１２６７、ＩＦＯ１９０３、デ
バリオミセス・カンタレリイ　（Ｄｅｂａｒｙｏ−ｍｙ
ｃｅｓ　ｃａｎｔａｒｅｌｌｉｉ）Ｉ　ＦＯＩ　１８９
．　　Ｉ　ＦＯＩ　３６３、ＩＦＯ１７１６，ＩＦＯ１
７１７，キャンディダ・キュルバータ（Ｃａｎｄｉｄａ
　ｃｕｒｖａｔａ）　　Ｉ　Ｆ　００７３２．１ＦＯ１
１５９，リポマイＪ！　、７．　、　ＩＪポーファー（
Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ　１ｉｐｏｆｅｒ）　　Ｉ　Ｆ　Ｏ
０６７３。

ＩＦＯ１２８８，）ルロプシス・キャンディダ（Ｔｏｒ
ｕｌｏｐｓｉｓ　ｃａｎｄｉｄａ）　　Ｉ　Ｆ　ＯＯ３
８０，Ｉ　Ｆ００６６４、ＩＦＯＯ７６８，トリコスポ
ロン・プルランス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｐｕｌ
ｌｕｌａｎｓ）　　Ｉ　Ｆ００１１４、ブレラ・アルバ
（Ｂｕｌｌｅｒａ　ａｌｂａ）ＩＦＯ１１９２，ブレラ
ノミセス・アノマラス（Ｂｒｅｔｔａｎｏｍ　ｃｅｓ　
ａｎｏｍａｌｕｓ）　　Ｉ　Ｆ　Ｏ０６４２があげられ
る。

これらの菌体を得るための条件としては、何ら限定され
るものではなく、乳糖を含む培地で培養することにより
、β−ガラクトシダーゼ活性が強く、乳糖とＮ−アセチ
ルグルコサミン又はその誘導体を原料とするビフィズス
因子の合成活性の高い静止菌体を得ることができる。ま
た、炭素源としてグルコース、ソルビトール、マルトー
ス、ショ糖、廃糖蜜などを用い、菌体を充分増殖させた
のちに乳糖を添加し、さらに培養を続け、β−ガラクト
シダーゼが充分誘導されたのちに菌体を遠心、濾過など
の通常用いられる方法により回収することもできる。培
養に用いる窒素源としては。

例えばペプトン、カゼイン、コーンステイープリカー、
肉エキス、酵母エキスなどの有機窒素源や。

硫安、塩化アンモニラ１１．尿素などの無機窒素源を用
いることができる。

また、培養の方法としては９通常用いられる液体培地、
固体培地で、静置培養１通気攪拌培養。

振盪培養のいずれの方法でもよい。培養液から遠心、濾
過などの通常の方法により回収した菌体は。

何ら処理を施すことなく、菌体のまま反応の触媒として
用いることができる。さらに、菌体を各種の固定化法に
より固定化することにより用いることもできる。

その固定化方法は、特に限定されるものではな（、アル
ギン酸カルシウムゲル、アクリルアミドゲルなどによる
包括法、グルタルアルデヒド、トルエンジイソシアナー
トなどによる菌体量架橋法。

ＤｏｗｅＸ　５０　（ダウ・ケミカル社製）、ＣＭ−セ
ルロース、Ｐ−セルロース、ＤＥＡＥ−セルロース。

ＥＣＴＥＯＬＡ−セルロース（ワットマン社製）などに
結合させて固定化する方法、おがくずなどに吸着させる
方法などがあげられる。また、模型反応器内部に酵母菌
体又は固定化した酵母凹体を浮遊させ９反応生成物のみ
を反応器外へ連続的に取り出すことも可能である。

本発明において、上記の菌体で処理するときの乳糖の濃
度としては、０．２％（ｗ／ｖ）〜５０％（ｗ／ｖ）が
適当であり、０．５％（ｗ／ｖ）〜５％（ｉｖ／ｖ）が
好ましく、特に１％（ｗ／ｖ）〜２％（ｗ／ｖ）が好ま
しい。また。

Ｎ−アセチルグルコサミン又はその誘導体の濃度として
は、０．１％（ｗ／ｖ）　〜５０％（ｗ／ｖ）が適当で
あり、０．２５％（ｗ／ｖ）　〜５％（ｗ／ｖ）が好ま
しく、特に０．５％（鰹ν）〜１％（ｗ／ｖ）が好まし
い。

本発明に用いられるＮ−アセチルグルコサミンの誘導体
としては１例えばＮ−メチルグルコサミン、Ｎ−エチル
グルコサミン、Ｎ−フェニルグルコサミンなどがあげら
れる。

本発明において、上記の菌体で処理するときのｐＨとし
ては、３〜９が適当であり、５〜７が好ましく、使用す
る酵母菌体の溶菌が起こりにりく。

しかも目的とするビフィズス因子の合成能が最も高くな
るｐＨが望ましいことは言うまでもない。

また、必要に応じて緩衝液を使用することもできる。さ
らに、そのときの温度としては、１０℃〜４０℃が適当
であり、２０“０〜３０°Ｃが好ましい。

（実施例） 次に１本発明を実施例により具体的に説明する。

参考例１ ５００ｍｌ容三角フラスコに下記組成の培地１００ｍｊ
！を入れたものを、１０本オートクレーブした。

乳糖　　　　　５ｇ 硫安　　　　　０．２　ｇ 酵母エキス　　　　　　　　０．０２　　ｇＫＨｚＰＯ
４０，０８ｇ ＮａｚＨＰＯａ・１２ＨｚＯＯ，０３ｇＭ　ｇ　Ｓ　０
４・７　Ｈ２Ｏ０，００２ｇ水　　　　　　　　　　　
　　　　１００ｍ１ｐＨ５，６ 次に、この培地にロドトルラ・ラクトーザ（Ｒｈｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ　１ａｃｔｏｓａ）　　Ｉ　Ｆ　０１４２
３株を一白金耳接種し、３０℃で３日間ロータリーシェ
ーカーで培養を行った。培養終了後、遠心により菌体を
回収し、５．２ｇの湿菌体を得た。

参考例２ ５００ｍｊ！容三角フラスコに下記組成の培地１００ｍ
Ｊを入れたものを、１０本オートクレーブした。

乳糖　　　５ｇ ポリペプトン　　　　０．５　ｇ 酵母エキス　　　　　０．３ｇ 水　　　　　　　　　　１００ｍｊ！ ｐＨ５，６ 次に、この培地にクリプトコツカス・ローレンテイ　（
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎｔｉｉ）　　
Ｉ　Ｆ　ＯＯ３７２株を一白金耳接種し、３０℃で２日
間ロータリーシェーカーで培養を行った。培養終了後、
遠心により菌体を回収し、７．５ｇの湿菌体を得た。

参考例３ 参考例１に記載した培地に、ピヒヤ・ポリモルファ−建
お１口」想ｈ！虹可咀）ＩＦ０１１６６株を一白金耳接
種し、３０℃で３日間ロータリーシェーカーで培養を行
った。培養終了後、遠心分離して５．５ｇの湿菌体を得
た。

参考例４ 参考例２に記載した培地に、スポロボロミセス・シンギ
ュラリス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎ　ｕ
ｌａｒｉｓ）ＡＴＣ：Ｃ２４１９３株を一白金耳接種し
、３０℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行った
。

培養終了後、遠心分離して３．２ｇの湿菌体を得た。

参考例５ 参考例２に記載した培地に、タルイベロミセス・ラクテ
イス（Ｋｌｕ　ｖｅｒｏｍ　ｃｅｓ　Ｉａｃｔｉｓ）　
　Ｉ　Ｆ００４３３株を一白金耳接種し、３０℃で２日
間ロータリーシェーカーで培養を行った。培養終了後。

遠心分離して５．３ｇの湿菌体を得た。

参考例６ 参考例２に記載した培地に、デバリオミセス・カンタレ
リイ　（Ｄｅｂａｒ　ｏｍ　ｃｅｓ　ｃａｎｔａｒｅｌ
ｌｉｉ）　　ｒ　Ｆ０１１８９株を一白金耳接種し、３
０℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行った。培
養終了後、遠心分離して３ｇの湿菌体を得た。

参考例７ 参考例２に記載した培地に、キャンディダ・キュルバー
タ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｕｒｖａｔａ）　　Ｉ　Ｆ　Ｏ
Ｏ７３２株を一白金耳接種し、３０℃で３日間ロータリ
ーシェーカーで培養を行った。培養終了後、遠心分離し
て２．５ｇの湿菌体を得た。

参考例８ 参考例２に記載した培地に、トルロプシス・キャンディ
ダ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｃａｎｄｉｄａ）　Ｉ　Ｆ
　Ｏ０３８０株を一白金耳接種し、３０℃で２日間ロー
タリーシェーカーで培養を行った。培養終了後、遠心分
離して３．２ｇの湿菌体を得た。

参考例９ 参考例２に記載した培地に、トリコスポロン・プルラン
ス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）
　　Ｉ　Ｆ　００１１４株を一白金耳接種し、３０℃で
２日間ロータリーシェーカーで培養を行った。培養終了
後。

遠心分離して３．１ｇの湿菌体を得た。

参考例１０ 参考例２に記載した培地に、ブレラ・アルバ（Ｂｕｌｌ
ｅｒａ　ａｌｈａ）　　Ｉ　Ｆ　０１１９２株を一白金
耳接種し、３０℃で３日間ロータリーシェーカーで培養
を行った。培養終了後、遠心分離して２．８ｇの湿凹体
を得た。

参考例１１ ５００ｍｌ容三角フラスコに下記組成の培地１００ｍｌ
を入れたものを、１０本オートクレーブした。

グルコース　　　　　２ｇ ポリペプトン　　　　０．２ｇ 酵母エキス　　　　　０．１　ｇ 水　　　　　　　　　　１００ｍＡ ｐＨ５，６ 次に、この培地にブレラノミセス・アノマラス（Ｂｒｅ
ｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ　ａｎｏｍａｌｕｓ）　　Ｉ　Ｆ
　００６４２株を一白金耳接種し、３０℃で２日間ロー
タリーシェーカーで培養を行ったのち、滅菌した乳糖を
２％になるように添加し、さらに１日間培養を行った。

培養終了後、遠心分離して３．９ｇの湿菌体を得た。

参考例１２ 参考例２に記載した培地に、リボマイセス・リポ−ファ
ー（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ　１ｉｐｏｆｅｒ）　　Ｉ　Ｆ
　ＯＯ６７３株を一白金耳接種し、３０℃で２日間ロー
タリーシェーカーで培養を行った。培養終了後、遠心分
離して３．５ｇの湿菌体を得た。

実施例１．比較例１ 参考例１で得られたロドトルラ・ラクトーザ（Ｒｈｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ　Ｉａｃｔｏｓａ）　　Ｉ　Ｆ　０１４
２３株の湿菌体５．２ｇに乳糖２ｇとＮ−アセチルグル
コサミン１ｇとを加え、液の全容量を１００ｍｌとした
。

液のｐＨを６．５としたのち、３０℃で２４時間放置し
た。

放置後の液を、ウォーターズ社製高速液体りロマトグラ
フィー用カラムマイクロボンダパック／ＮＨ，（移動相
アセトニトリル／水＝７／３）で分析したところ、ビフ
ィズス因子であるＮ−アセチルラクトサミンと同一保持
時間を示すピークが検出された。

一方、乳糖の加水分解物であるグルコース及びガラクト
ースは検出されなかった。このときのＮ−アセチルグル
コサミンに対するＮ−アセチルラクトサミンの収率は２
０％であった。

また、比較のため、乳糖２ｇ、Ｎ−アセチルグルコサミ
ン１ｇを１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５，５）１００ｍｌ
に溶解し、市販のアスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ　ｏｒ　ｚａｅ）由来のβ−ガラクトシダ
ーゼ（シグマ社製）２００ユニツトを加えたのち、３０
℃で２４時間放置した。

次に、放置後の混合物を実施例１と同じ方法で分析した
ところ、ビフィズス因子であるＮ−アセチルラクトサミ
ンと同一保持時間を示すピークが検出されたが１反応の
基質である乳糖の一部が加水分解を受け、グルコースと
ガラクトースに変化していた。このときのＮ−アセチル
グルコサミンに対するＮ−アセチルラクトサミンの収率
は５％であった。

実施例２ 参考例２で得られたクリプトコツカス・ローレンテイ　
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎｔｉｉ）　
　Ｉ　Ｆ　ＯＯ３７２株の湿菌体５ｇに乳糖１ｇとＮ−
アセチルグルコサミン０．５ｇとを加え、液の全容量を
１００ｍ１とした。

次に、この液のｐＨを７．５としたのち、３０℃で２日
間放置した。放置後の混合物を遠心分離後。

上澄みをオートクレーブで殺菌したのち、凍結乾燥した
もののビフィズス活性を調べた。

なお、対照区としては、クリプトコツカス・ローレンテ
イ　（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎｔｉｉ
）　　Ｉ　Ｆ　００３７２株の湿菌体５ｇに乳糖１ｇと
Ｎ−アセチルグルコサミン０．５ｇとを加え、全容量を
１００ｍｊ２とし、ｐＨを７．５にして、３０℃で２日
間放置せずに直ちに遠心分離後、その上澄みをオートク
レーブで殺菌したのち、凍結乾燥したもの（未処理混合
物という。）を用いた。

ビフィズス活性の比較試験は、上記試料の凍結乾燥物を
各々ギョルギー（Ｇｙ６ｒｇｙ）のビフィズス・ペン株
の標準培地（小児科臨床第９巻、８３９頁、昭和３１年
）に５％の量で添加し、各々に同量のビフィズス・ペン
株を接種し、流動パラフィンを重層し、嫌気的に３７℃
で４８時間培養し。

ビフィズス菌の増殖度を酸度、ｐＨを測定することによ
り求めた。

その結果を表１に示す。

表１より２本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例３ 参考例３で得られたピヒヤ・ポリモルファ（Ｐｉｃｈｉ
ａ　　ｏｌｙｍｏｒｐｈａ）　　Ｉ　Ｆ　０１１６６株
の湿菌体５ｇを用いること及びＮ−アセチルグルコサミ
ンの代わりにＮ−メチルグルコサミンを用いること以外
は、実施例２と同様にしてビフィズス活性を調べた。

その結果を表２に示す。

表２より９本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

表　　　２ 実施例４ 参考例４で得られたスポロボロミセス・シンギュラリス
（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎｇｕｌａｒｉ
ｓ）　　Ａ　Ｔ　ＣＣ２４１９３株を３ｇ用いる以外は
、実施例２と同様にしてビフィズス活性を調べた。

その結果を表３に示す。

表　　　３ 表３より９本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例５ 参考例５で得られたタルイベロミセス・ラクテイス（Ｋ
ｌｕ　ｖｅｒｏ＋ｆ＋　ｃｅｓ　Ｉａｃｔｉｓ）　Ｉ　
Ｆ　ＯＯ４３３株を５ｇ用いる以外は、実施例２と同様
にしてビフィズス活性を調べた。

その結果を表４に示す。

表　　　４ 表４より１本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例６ 参考例６で得られたデバリオミセス・カンタレリイ　（
Ｄｅｂａｒｙｏｍ　ｃｅｓ　ｃａｎｔａｒｅｌｌｉｉ）
　　Ｉ　Ｆ　０１１８９株を２ｇ用いる以外は、実施例
２と同様に行ってビフィズス活性を調べた。

その結果を表５に示す。

表　　　５ 表５より２本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例７ 参考例７で得られたキャンデインダ・キュルバータ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｃｕｒｖａｔａ）　　Ｉ　Ｆ　ＯＯ７３
２株を２ｇ用いる以外は、実施例２と同様にしてビフィ
ズス活性を調べた。

その結果を表６に示す。

表　　　６ 表６より２本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例８ 参考例８で得られたトルロプシス・キャンデイイダ（Ｔ
ｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｃａｎｄｉｄａ）　　Ｉ　Ｆ　Ｏ
Ｏ３８０株を２ｇ用いる以外は、実施例２と同様にして
ビフィズス活性を調べた。

その結果を表７に示す。

表　　　７ 表７より１本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例９ 参考例９で得られたトリコスポロン・プルランス（Ｔｒ
ｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）　Ｉ　Ｆ
　ＯＯ１１４株を３ｇ用いる以外は、実施例２と同様に
してビフィズス活性を調べた。

その結果を表８に示す。

表８より２本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例１０ 参考例１０で得られたブレラ・アルバ（Ｂｕｌｌｅｒａ
虱閃）ＩＦ０１１９２株を２．５ｇ用いる以外は。

実施例２と同様にしてビフィズス活性を調べた。

その結果を表９に示す。

表９より１本発明品にビフィズス活性があることが明ら
かである。

実施例１１ 参考例１１で得られたブレラノミセス・アノマラス（Ｂ
ｒｅｔｔａｎｏｍ　ｃｅｓ　ａｎｏｍａｌｕｓ）　　Ｉ
　Ｆ　００６４２株を３ｇ用いる以外は、実施例２と同
様にしてビフィズス活性を調べた。

その結果を表１０に示す。

表　　１０ 表１０より９本発明品にビフィズス活性があることが明
らかである。

実施例１２ 参考例１２で得られたりポマイセス・リボ−ファー（Ｌ
ｉｐｏｍｙｃｅｓ　１ｉｐｏｆｅｒ）　　Ｉ　Ｆ　００
６７３株の湿菌体１ｇを４ｍｌの生理食塩水に懸濁し、
この懸濁液にアクリルアミド７５０■、架橋剤としてＮ
。

Ｎ′−メチレンビスアクリルアミド４０■を加え。

さらに２重合促進剤として５％β−ジメチルアミノプロ
ピオニトリル０．５　ｍ　ｌ　、重合開始剤として２．
５％ベルオクソニ硫酸カリウム０．５ｍｆｌｌＯえ。

よく混合して３０℃で３０分間放置した。得られたゲル
を生理食塩水で洗浄して、固定化酵母菌体を得た。

次に、この固定化酵母菌体に乳Ｐｉ１ｇとＮ−アセチル
グルコサミン０．５ｇとを加え、液の全容量を１００ｍ
ｌとし、ｐＨを７．５として、３０℃で２４時間放置し
たのち、遠心分離して固定化酵母菌体を含まない上澄み
を得た。この上澄みをオートクレーブによる殺菌ののち
、凍結乾燥した。

なお、対照区として、３０℃で２４時間放置しなかった
以外は、上記と同様に遠心分離して上澄みをオートクレ
ーブで殺菌したのち、凍結乾燥したもの（未処理混合物
）を用いた。

これらの凍結乾燥品を各々５％の量でギョルギ−（Ｇｙ
ｉ５ｒｇｙ）のビフィズス・ペン株の標準培地に添加し
、各々に同量のビフィズス・ペン株を接種し、流動パラ
フィンを重層し、嫌気的に３７℃で４８時間培養し、ビ
フィズス菌の増殖度を酸度。

ｐＨを測定することにより求めた。

その結果を表１１に示す。

表　　　１１ 表１１より２本発明品にビフィズス活性があることが明
らかである。

（発明の効果） 本発明によれば、触媒として用いる酵母が栄養要求性が
単純であり、好気性であることから１通気攪拌培養が可
能であり、大量の菌体を容易に得ることができ、また、
酵母の菌体の大きさはバクテリアに比べて大きく２反応
後の分離操作が簡略化され、さらに２反応の基質である
乳糖の無駄な分解が抑えられ、転移反応のみが効率よく
起こるので、ビフィズス因子を効率よく生産することが
できる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）乳糖とＮ−アセチルグルコサミン又はその誘導体
   を原料としてビフィドバクテリウム菌の増殖促進剤を製
   造するに際し、乳糖とＮ−アセチルグルコサミン又はそ
   の誘導体とを乳糖資化能を有する酵母の静止菌体で処理
   することを特徴とするビフィドバクテリウム菌の増殖促
   進剤の製造法。
2. （２）乳糖資化能を有する酵母が、ロドトルラ属、ピヒ
   ヤ属、スポロボロミセス属、クルイベロミセス属、デバ
   リオミセス属、キャンディダ属、トルロプシス属、クリ
   プトコッカス属、トリコスポロン属、リポマイセス属、
   ブレラ属、ブレタノミセス属からなる群から選ばれた酵
   母である特許請求の範囲第１項記載の製造法。
3. （３）乳糖資化能を有する酵母の静止菌体が、担体によ
   り固定化された固定化酵母菌体である特許請求の範囲第
   １項記載の製造法。