JP2806969B2 - ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法 - Google Patents
ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法Info
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- JP2806969B2 JP2806969B2 JP1106329A JP10632989A JP2806969B2 JP 2806969 B2 JP2806969 B2 JP 2806969B2 JP 1106329 A JP1106329 A JP 1106329A JP 10632989 A JP10632989 A JP 10632989A JP 2806969 B2 JP2806969 B2 JP 2806969B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ビフィドバクテリウム菌（以下ビフィズス
菌という。）の増殖促進性組成物及びその製造法に関す
るものである。
菌という。）の増殖促進性組成物及びその製造法に関す
るものである。
（従来の技術） ビフィズス菌は、人間の腸内に生育する有用菌であ
り、腸管内にビフィズス菌叢が形成されると、これが乳
酸、酢酸及び蟻酸を産生し、腸管内のpHを低下させ、有
害菌の腸管内定着を防止することが知られている。この
ように有用なビフィズス菌の増殖を促進する活性をもつ
化合物は、粉乳、ドリンク剤の他、各種の食品に添加し
て利用されている。
り、腸管内にビフィズス菌叢が形成されると、これが乳
酸、酢酸及び蟻酸を産生し、腸管内のpHを低下させ、有
害菌の腸管内定着を防止することが知られている。この
ように有用なビフィズス菌の増殖を促進する活性をもつ
化合物は、粉乳、ドリンク剤の他、各種の食品に添加し
て利用されている。
従来、このビフィズス菌の増殖促進剤（以下ビフィズ
ス因子という。）については多くの研究がなされてお
り、ラクチュロース（特公昭49−40957号公報参照）、
フラクトオリゴ糖（Bifidobacteria and Microflora,vo
l.5（１）,37−50,1986）、一般式:Gal−（Gal）ｎ−Gl
c（式中、Galはガラクトース残基、Glcはグルコース残
基、ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるガラクトオ
リゴ糖（特開昭63−185373号公報参照）、人参エキス
（お茶の水医学雑誌、８−88、1960）、Ｎ−アセチルラ
クトサミン（特開昭59−11190号公報参照）、イソマル
トオリゴ糖（特開昭61−212296号公報参照）、大豆オリ
ゴ糖（特開昭62−155082号公報参照）などのビフィズス
因子が報告されている。
ス因子という。）については多くの研究がなされてお
り、ラクチュロース（特公昭49−40957号公報参照）、
フラクトオリゴ糖（Bifidobacteria and Microflora,vo
l.5（１）,37−50,1986）、一般式:Gal−（Gal）ｎ−Gl
c（式中、Galはガラクトース残基、Glcはグルコース残
基、ｎは１〜４の整数を表す。）で示されるガラクトオ
リゴ糖（特開昭63−185373号公報参照）、人参エキス
（お茶の水医学雑誌、８−88、1960）、Ｎ−アセチルラ
クトサミン（特開昭59−11190号公報参照）、イソマル
トオリゴ糖（特開昭61−212296号公報参照）、大豆オリ
ゴ糖（特開昭62−155082号公報参照）などのビフィズス
因子が報告されている。
（発明が解決しようとする課題） しかし、上記のオリゴ糖は何れもビフィズス菌の増殖
促進剤としては、その選択性が十分でなかったり、ある
いは安定性に問題があったりして十分なものでなく、
又、その製造過程においても反応温度が低いために、雑
菌が混入し易かったり、反応速度が低かったりして問題
があった。更に酵素を抽出する必要があるなど、製造工
程が繁雑であるという問題があった。
促進剤としては、その選択性が十分でなかったり、ある
いは安定性に問題があったりして十分なものでなく、
又、その製造過程においても反応温度が低いために、雑
菌が混入し易かったり、反応速度が低かったりして問題
があった。更に酵素を抽出する必要があるなど、製造工
程が繁雑であるという問題があった。
ビフィズス菌の増殖促進剤として十分な活性を有し、
安定性に優れたビフィズス因子と、雑菌の混入なしにそ
れを簡便に素早く製造できる製造法を提供することを目
的とするものである。
安定性に優れたビフィズス因子と、雑菌の混入なしにそ
れを簡便に素早く製造できる製造法を提供することを目
的とするものである。
（課題を解決するための手段） 本発明者らはこのような課題を解決するために鋭意検
討した結果、Ｏ−β−Ｄ−ガラストピラノシル−（１→
３）−Ｄ−グルコースがビフィズス増殖因子としてより
効果のあることを見い出し、この知見に基づいて本発明
を成すに至った。
討した結果、Ｏ−β−Ｄ−ガラストピラノシル−（１→
３）−Ｄ−グルコースがビフィズス増殖因子としてより
効果のあることを見い出し、この知見に基づいて本発明
を成すに至った。
すなわち、第一の発明は式： で示されるＯ−β−Ｄ−ガラストピラノシル−（１→
３）−Ｄ−グルコースを含有するビフィドバクテリウム
菌の増殖促進性組成物を要旨とするものである。
３）−Ｄ−グルコースを含有するビフィドバクテリウム
菌の増殖促進性組成物を要旨とするものである。
また、第二の発明は、乳糖資化能を有するロドトルラ
属、スポロボロミセス属、クリプトコッカス属、リポマ
イセス属及びブレラ属からなる群から選ばれる酵母の静
止菌体で、乳糖を50〜70℃の温度条件下で処理すること
を特徴とするビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成
物の製造法を要旨とするものである。
属、スポロボロミセス属、クリプトコッカス属、リポマ
イセス属及びブレラ属からなる群から選ばれる酵母の静
止菌体で、乳糖を50〜70℃の温度条件下で処理すること
を特徴とするビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成
物の製造法を要旨とするものである。
本発明に用いられる酵母はロドトルラ属、スポロボロ
ミセス属、クリプトコッカス属、リポマイセス属及びブ
レラ属に属する乳糖資化能を有する酵母である。
ミセス属、クリプトコッカス属、リポマイセス属及びブ
レラ属に属する乳糖資化能を有する酵母である。
そのような具体例としては、ロドトルラ・ラクトーザ
（Rhodotorula lactosa）IFO1423、IFO1424、クルプト
コッカス・ローレンテイ（Cryptococcus laurentii）IF
O0372、IFO0384、IFO0930、IFO1376、IFO1487、スポロ
ボロミセス・シンギュラリス（Sporobolomyces singulu
ris）ATCC24193、リポマイセス・リポーファー（Lipomy
ces lipofer）IFO0673、IFO1288、ブレラ・アルバ（Bul
lera alba）IFO1192及びリポマイセス・スターキィー
（Lipomyces starkeyi）等が挙げられる。リポマイセス
・スターキィーは好ましく、その中でもリポマイセス
（Lipomyces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）が、反応
の基質である乳糖の無駄な分解が生じることなく、転移
反応のみが起こり、目的物を高収率で得ることができる
ので特に好ましい。
（Rhodotorula lactosa）IFO1423、IFO1424、クルプト
コッカス・ローレンテイ（Cryptococcus laurentii）IF
O0372、IFO0384、IFO0930、IFO1376、IFO1487、スポロ
ボロミセス・シンギュラリス（Sporobolomyces singulu
ris）ATCC24193、リポマイセス・リポーファー（Lipomy
ces lipofer）IFO0673、IFO1288、ブレラ・アルバ（Bul
lera alba）IFO1192及びリポマイセス・スターキィー
（Lipomyces starkeyi）等が挙げられる。リポマイセス
・スターキィーは好ましく、その中でもリポマイセス
（Lipomyces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）が、反応
の基質である乳糖の無駄な分解が生じることなく、転移
反応のみが起こり、目的物を高収率で得ることができる
ので特に好ましい。
この菌株は、静岡県熱川温泉の土壌中から採取したも
ので、バージイのマニュアル・オブ・デターミネーティ
ブ・バクテリオロジー（Bergey's Manual of Determina
tive Bacteriology）第８版に基づき検索した結果、リ
ポマイセス・スターキィー（Lipomyces starkeyi）に属
する新菌株と判定できた。そこで、リポマイセスNKD−1
4と命名し、昭和61年９月１日に通産省工業技術院微生
物工業技術研究所へ寄託した。尚、この微生物受託番号
は、微工研菌寄第8948号である。
ので、バージイのマニュアル・オブ・デターミネーティ
ブ・バクテリオロジー（Bergey's Manual of Determina
tive Bacteriology）第８版に基づき検索した結果、リ
ポマイセス・スターキィー（Lipomyces starkeyi）に属
する新菌株と判定できた。そこで、リポマイセスNKD−1
4と命名し、昭和61年９月１日に通産省工業技術院微生
物工業技術研究所へ寄託した。尚、この微生物受託番号
は、微工研菌寄第8948号である。
上記の静止菌体を得るための方法としては、何ら限定
されるものではなく、例えば乳糖を含む培地で培養する
か、又は炭素源としてグルコース、ソルビトール、マル
トース、ショ糖、廃糖蜜などを用いて菌体を十分増殖さ
せた後に乳糖を添加し、更に培養を続けβ−ガラクトシ
ダーゼが十分誘導された後に、遠心分離、濾過などの通
常用いられる方法によって分裂能力を保持するが一時的
に分裂しない静止菌体を得ることができる。上記乳糖を
含む培地の組成において、乳糖は0.1〜30重量％、好ま
しくは５〜20重量％、培養に用いる窒素源、例えばペプ
トン、カゼイン、コーンステイ−プリカー、肉エキス、
酵母エキスなどの有機窒素源や、硫安、塩化アンモニウ
ム、尿素などの無機窒素源は0.01〜10重量％、好ましく
は0.5〜５重量％、ミネラル源として用いるリン酸塩化
合物、例えばリン酸カリウム第１塩（KH2PO4）、リン酸
ナトリウム第２塩水和物（Na2HPO4・12H2O）は0.05〜５
重量％、好ましくは0.1〜１重量％、又、その他の成分
としてビタミンなどを必要に応じて添加してもよい。
されるものではなく、例えば乳糖を含む培地で培養する
か、又は炭素源としてグルコース、ソルビトール、マル
トース、ショ糖、廃糖蜜などを用いて菌体を十分増殖さ
せた後に乳糖を添加し、更に培養を続けβ−ガラクトシ
ダーゼが十分誘導された後に、遠心分離、濾過などの通
常用いられる方法によって分裂能力を保持するが一時的
に分裂しない静止菌体を得ることができる。上記乳糖を
含む培地の組成において、乳糖は0.1〜30重量％、好ま
しくは５〜20重量％、培養に用いる窒素源、例えばペプ
トン、カゼイン、コーンステイ−プリカー、肉エキス、
酵母エキスなどの有機窒素源や、硫安、塩化アンモニウ
ム、尿素などの無機窒素源は0.01〜10重量％、好ましく
は0.5〜５重量％、ミネラル源として用いるリン酸塩化
合物、例えばリン酸カリウム第１塩（KH2PO4）、リン酸
ナトリウム第２塩水和物（Na2HPO4・12H2O）は0.05〜５
重量％、好ましくは0.1〜１重量％、又、その他の成分
としてビタミンなどを必要に応じて添加してもよい。
また、培養の方法としては、通常用いられる液体培地
もしくは固体培地で、静置培養、通気撹拌培養、振盪培
養のいずれの方法でもよい。培養温度、培養時間は、培
養する菌種により変わるが、通常10〜35℃で15〜100時
間である。その後、培養液から遠心分離、濾過などの通
常の方法により回収した菌体は、何ら処理を施すことな
く、菌体のまま反応の触媒として用いることができる。
更に、菌体を各種の固定化法により固定化することによ
り用いることもできる。
もしくは固体培地で、静置培養、通気撹拌培養、振盪培
養のいずれの方法でもよい。培養温度、培養時間は、培
養する菌種により変わるが、通常10〜35℃で15〜100時
間である。その後、培養液から遠心分離、濾過などの通
常の方法により回収した菌体は、何ら処理を施すことな
く、菌体のまま反応の触媒として用いることができる。
更に、菌体を各種の固定化法により固定化することによ
り用いることもできる。
その固定化方法は、特に限定されるものではなく、公
知のアクリルアミドゲル、アルギン酸カルシウムゲルな
どによる包括法、グルタルアルデヒド、トリレンジイソ
シアナートなどによる菌体間架橋法、Dowex50（ダウ・
ケミカル社製）、CM−セルロース、Ｐ−セルロース、DE
AE−セルロース、ECTEOLA−セルロース（ワットマン社
製）などに結合させて固定化する方法、おがくずなどに
吸着させる方法などが挙げられる。この固定化された酵
母菌体は、カラム型反応器として用いることができる。
又、膜型反応器内部に酵母菌体又は固定化した酵母菌体
を浮遊させ、反応生成物のみを反応器外へ連続的に取り
出すことも可能である。
知のアクリルアミドゲル、アルギン酸カルシウムゲルな
どによる包括法、グルタルアルデヒド、トリレンジイソ
シアナートなどによる菌体間架橋法、Dowex50（ダウ・
ケミカル社製）、CM−セルロース、Ｐ−セルロース、DE
AE−セルロース、ECTEOLA−セルロース（ワットマン社
製）などに結合させて固定化する方法、おがくずなどに
吸着させる方法などが挙げられる。この固定化された酵
母菌体は、カラム型反応器として用いることができる。
又、膜型反応器内部に酵母菌体又は固定化した酵母菌体
を浮遊させ、反応生成物のみを反応器外へ連続的に取り
出すことも可能である。
本発明の増殖促進性組成物は、上記のようにして得ら
れる酵母菌体で乳糖を処理することにより得られる。そ
の処理法において、乳糖の濃度は１％（w/v）以上が適
当であり、５％（w/v）以上が好ましく、特に10％（w/
v）以上が好ましい。１％（w/v）より低いと乳糖の加水
分解反応がオリゴ糖生成反応より優勢となり好ましくな
い。また、そのときのpHは使用する酵母菌体の溶菌が起
こりにくく、しかも、目的とするビフィズス因子が最も
多く合成されるようなpHであり、具体的には３〜９、好
ましくは５〜７である。又、必要に応じてリン酸、酢
酸、クエン酸等の緩衝液を使用することもできる。反応
温度は50℃〜70℃であることが必要であり、特に55℃〜
60℃が好ましい。50℃より低いとＯ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→４）−Ｄ−グルコースが生成し、本発明の
ビフィズス因子であるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−（１→３）−Ｄ−グルコースは生成しなくなる。又、
70℃より高いと反応の触媒として用いる菌体中の酵素活
性が失活し、反応が進まなくなる。反応時間は通常10〜
100時間、好ましくは30〜70時間である。10時間より短
いと基質である乳糖の反応率が低下し、目的であるＯ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコ
ースの収率が低くなり、又、100時間より長いとＯ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコー
スにさらに乳糖のガラクトースが転移した三糖以上の糖
が生成し、目的であるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−（１→３）−Ｄ−グルコースの収率が低くなり好まし
くない。反応終了後、必要に応じて濾過、遠心分離、デ
カンテーションなどにより酵母菌体を除去して、本発明
の増殖促進性組成物を得る。
れる酵母菌体で乳糖を処理することにより得られる。そ
の処理法において、乳糖の濃度は１％（w/v）以上が適
当であり、５％（w/v）以上が好ましく、特に10％（w/
v）以上が好ましい。１％（w/v）より低いと乳糖の加水
分解反応がオリゴ糖生成反応より優勢となり好ましくな
い。また、そのときのpHは使用する酵母菌体の溶菌が起
こりにくく、しかも、目的とするビフィズス因子が最も
多く合成されるようなpHであり、具体的には３〜９、好
ましくは５〜７である。又、必要に応じてリン酸、酢
酸、クエン酸等の緩衝液を使用することもできる。反応
温度は50℃〜70℃であることが必要であり、特に55℃〜
60℃が好ましい。50℃より低いとＯ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→４）−Ｄ−グルコースが生成し、本発明の
ビフィズス因子であるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−（１→３）−Ｄ−グルコースは生成しなくなる。又、
70℃より高いと反応の触媒として用いる菌体中の酵素活
性が失活し、反応が進まなくなる。反応時間は通常10〜
100時間、好ましくは30〜70時間である。10時間より短
いと基質である乳糖の反応率が低下し、目的であるＯ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコ
ースの収率が低くなり、又、100時間より長いとＯ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコー
スにさらに乳糖のガラクトースが転移した三糖以上の糖
が生成し、目的であるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−（１→３）−Ｄ−グルコースの収率が低くなり好まし
くない。反応終了後、必要に応じて濾過、遠心分離、デ
カンテーションなどにより酵母菌体を除去して、本発明
の増殖促進性組成物を得る。
（実施例） 次に、本発明を実施例により具体的に説明する。
参考例１ 下記組成の培地を30容ジャーファーメンターに入
れ、殺菌した。
れ、殺菌した。
乳糖 400g 硫安 40g KH2PO4 10g Na2HPO4・12H2O 10g MgSO4・7H2O 10g 酵母エキス 20g 水道水 20 次に、同組成の培地で30℃で24時間前培養したリポマ
イセス（Lipomyces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）１
を接種し、pH6.5、30℃、通気量20/min、インペラ
ー回転数40r.p.mで18時間培養を行った。培養終了後、
α−ラバル社製遠心機LAPX202型で遠心分離を行なって
湿菌体2.8kgを得た。
イセス（Lipomyces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）１
を接種し、pH6.5、30℃、通気量20/min、インペラ
ー回転数40r.p.mで18時間培養を行った。培養終了後、
α−ラバル社製遠心機LAPX202型で遠心分離を行なって
湿菌体2.8kgを得た。
参考例 500ml容三角フラスコに下記組成の培地100mlを入れた
ものを、10本オートクレーブした。
ものを、10本オートクレーブした。
乳糖 5g 硫安 0.2g 酵母エキス 0.3g KH2PO4 0.08g Na2HPO4・12H2O 0.03g MgSO4・7H2O 0.002g 水 100ml pH 5.6 次に、この培地にロドトルラ・ラクトーザ（Rhodotor
ula lactosa）IFO1423株を一白金耳接種し、30℃で３日
間ロータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了
後、遠心分離により菌体を回収し、5.2gの湿菌体を得
た。
ula lactosa）IFO1423株を一白金耳接種し、30℃で３日
間ロータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了
後、遠心分離により菌体を回収し、5.2gの湿菌体を得
た。
参考例３ 500ml容三角フラスコに下記組成の培地100mlを入れた
ものを、10本オートクレーブした。
ものを、10本オートクレーブした。
乳糖 5g ポリペプトン 0.5g 酵母エキス 0.3g 水 100ml pH 5.6 次に、この培地にクリプトコッカス・ローレンティ
（Cryptococcus laurentii）IFO0372株を一白金耳接種
し、30℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行なっ
た。培養終了後、遠心分離により菌体を回収し、7.5gの
湿菌体を得た。
（Cryptococcus laurentii）IFO0372株を一白金耳接種
し、30℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行なっ
た。培養終了後、遠心分離により菌体を回収し、7.5gの
湿菌体を得た。
参考例４ 参考例３に記載した培地に、スポロボロミセス・シン
ギュラリス（Sporobolomyces singularis）ATCC24193株
を一白金耳接種し、10℃で２日間ロータリーシェーカー
で培養を行なった。培養終了後、遠心分離して3.2gの湿
菌体を得た。
ギュラリス（Sporobolomyces singularis）ATCC24193株
を一白金耳接種し、10℃で２日間ロータリーシェーカー
で培養を行なった。培養終了後、遠心分離して3.2gの湿
菌体を得た。
参考例５ 参考例３に記載した培地に、ブレラ・アルバ（Buller
a alba）IFO1192株を一白金耳接種し、30℃で３日間ロ
ータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了後、遠
心分離して2.8gの湿菌体を得た。
a alba）IFO1192株を一白金耳接種し、30℃で３日間ロ
ータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了後、遠
心分離して2.8gの湿菌体を得た。
参考例６ 参考例３に記載した培地に、リポマイセス・リポーフ
ァー（Lipomyces lipofer）IFO0673株を一白金耳接種
し、30℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行なっ
た。培養終了後、遠心分離して3.5gの湿菌体を得た。
ァー（Lipomyces lipofer）IFO0673株を一白金耳接種
し、30℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行なっ
た。培養終了後、遠心分離して3.5gの湿菌体を得た。
参考例７ 参考例１と同様にして得られた湿菌体50gに5gのアル
ギン酸ナトリウムを加え、更に200mlの水道水を加え、
均一になるまでミキサーで撹拌した。次に、これを注射
針の先から0.2Mの塩化カルシウム溶液に滴下し、ビーズ
状のアルギン酸カルシウム固定化菌体110gを得た。
ギン酸ナトリウムを加え、更に200mlの水道水を加え、
均一になるまでミキサーで撹拌した。次に、これを注射
針の先から0.2Mの塩化カルシウム溶液に滴下し、ビーズ
状のアルギン酸カルシウム固定化菌体110gを得た。
参考例８ 参考例１と同組成の培地を500ml容の坂口フラスコ10m
lずつ分注し、殺菌したものを10本作成した。坂口フラ
スコ１本当り一白金耳のリポマイセス（Lipomyces）NKD
−14（微工研菌寄第8948号）を接種し、30℃で３日間振
盪培養した。培養終了後、遠心分離して2.5gの湿菌体を
得た。
lずつ分注し、殺菌したものを10本作成した。坂口フラ
スコ１本当り一白金耳のリポマイセス（Lipomyces）NKD
−14（微工研菌寄第8948号）を接種し、30℃で３日間振
盪培養した。培養終了後、遠心分離して2.5gの湿菌体を
得た。
実施例１ 200gの乳糖に、参考例１で得たリポマイセス（Lipomy
ces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）株の湿菌体を乾燥
重量で10g加え、更に水道水を加えて１とした。この
反応液を55℃に保温し、pH6.5で３日間反応を行った。
反応後の液の遠心上澄み液をウォーターズ社製高速液体
クロマトグラフィー用カラムマイクロボンダパック/NH2
（移動相アセトニトリル／水＝7/3）で分析したとこ
ろ、２糖類溶出位置に反応基質である乳糖のピークとそ
の直前のピーク（以下、この化合物をG2′と呼ぶ）が検
出された。このときの乳糖の濃度は2.4％（w/v）、G2′
の濃度は7.6％であった。
ces）NKD−14（微工研菌寄第8948号）株の湿菌体を乾燥
重量で10g加え、更に水道水を加えて１とした。この
反応液を55℃に保温し、pH6.5で３日間反応を行った。
反応後の液の遠心上澄み液をウォーターズ社製高速液体
クロマトグラフィー用カラムマイクロボンダパック/NH2
（移動相アセトニトリル／水＝7/3）で分析したとこ
ろ、２糖類溶出位置に反応基質である乳糖のピークとそ
の直前のピーク（以下、この化合物をG2′と呼ぶ）が検
出された。このときの乳糖の濃度は2.4％（w/v）、G2′
の濃度は7.6％であった。
G2′の構造決定 G2′の構造を決定するために、先ず実施例１で得た上
澄み液100mlを５リットルの活性炭カラムにかけ、エタ
ノールを留出溶媒としてG2′4.6gを単離した。単離した
G2′は前述の高速液体クロマトグラフィーによる分析で
単一ピークを与え、従って、単一物質であることが判っ
た。次いで、これを酸加水分解を行ない、水素化ホウ素
ナトリウム還元をし、次いで、酸加水分解を再び行なっ
て分析した結果、G2′はガラクトース：グルコース−1:
1で構成され、還元末端がグルコースである２糖類であ
ることが判明した。更に、これの13C−NMR測定を行な
い、ラクトース（即ち、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｄ−グルコース）と比較して、構造を
調べた。その結果、ラクトースのガラクトース構造に由
来する炭素の吸収ピークは全てG2′の吸収ピークと一致
し、従って、G2′のガラクトース構造はラクトースのそ
れと同じものであることが判った。一方、G2′のグルコ
ース構造については、ラクトースのα体及びβ体グルコ
ース構造における３位炭素の吸収ピーク値がそれぞれδ
（α）73.0及びδ（β）76.4であるのに対し、G2′の相
当するピーク値はそれぞれδ（α）84.1及びδ（β）8
6.4と約10ppm低磁場シフトしており、又、４位炭素の吸
収ピーク値もδ（α）80.0及びδ（β）79.9であるのに
対し、G2′の相当する吸収ピーク値はα体及びβ体とも
β69.9と約10ppm高磁場シフトしていた。これらの13C−
NMRの結果から、G2′のグルコース構造においては３位
の炭素原子に酸素原子がエーテル結合していることが判
った。
澄み液100mlを５リットルの活性炭カラムにかけ、エタ
ノールを留出溶媒としてG2′4.6gを単離した。単離した
G2′は前述の高速液体クロマトグラフィーによる分析で
単一ピークを与え、従って、単一物質であることが判っ
た。次いで、これを酸加水分解を行ない、水素化ホウ素
ナトリウム還元をし、次いで、酸加水分解を再び行なっ
て分析した結果、G2′はガラクトース：グルコース−1:
1で構成され、還元末端がグルコースである２糖類であ
ることが判明した。更に、これの13C−NMR測定を行な
い、ラクトース（即ち、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｄ−グルコース）と比較して、構造を
調べた。その結果、ラクトースのガラクトース構造に由
来する炭素の吸収ピークは全てG2′の吸収ピークと一致
し、従って、G2′のガラクトース構造はラクトースのそ
れと同じものであることが判った。一方、G2′のグルコ
ース構造については、ラクトースのα体及びβ体グルコ
ース構造における３位炭素の吸収ピーク値がそれぞれδ
（α）73.0及びδ（β）76.4であるのに対し、G2′の相
当するピーク値はそれぞれδ（α）84.1及びδ（β）8
6.4と約10ppm低磁場シフトしており、又、４位炭素の吸
収ピーク値もδ（α）80.0及びδ（β）79.9であるのに
対し、G2′の相当する吸収ピーク値はα体及びβ体とも
β69.9と約10ppm高磁場シフトしていた。これらの13C−
NMRの結果から、G2′のグルコース構造においては３位
の炭素原子に酸素原子がエーテル結合していることが判
った。
以上の解析よりG2′はガラクトースとグルコースが
β,1→３結合したＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→３）−Ｄ−グルコースであることが判明した。
β,1→３結合したＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→３）−Ｄ−グルコースであることが判明した。
ビフィドバクテリウム菌の培養及び資化性 単離したG2′の凍結乾燥物をPYF半流動寒天培地に最
終濃度0.5％になるように添加した後、腸内細菌を接種
し、37℃で４日間（96時間）嫌気培養を行なった。培養
後、pHを測定することにより資化性を調べた。その結果
を表−１に、又、PYF培地の組成を表−２に示す。
終濃度0.5％になるように添加した後、腸内細菌を接種
し、37℃で４日間（96時間）嫌気培養を行なった。培養
後、pHを測定することにより資化性を調べた。その結果
を表−１に、又、PYF培地の組成を表−２に示す。
表−２において、G2′はビフィドバクテリウム及び外
来菌増殖防止機能をもつラクトバチィルスによく資化さ
れるが、その他の菌種にはフラクトオリゴ糖と同程度あ
まり資化されない。更に、ビフィズス菌について比較す
ると、あらゆる年齢層に共通に認められるビフィドバク
テリウム、ビフィダスにはフラクトオリゴ糖は資化され
ないが、G2′はよく資化される。又、乳児において優勢
に出現するビフィドバクテリウムブレーブ及びロングア
ムにもG2′はフラクトオリゴ糖より良く資化される。
来菌増殖防止機能をもつラクトバチィルスによく資化さ
れるが、その他の菌種にはフラクトオリゴ糖と同程度あ
まり資化されない。更に、ビフィズス菌について比較す
ると、あらゆる年齢層に共通に認められるビフィドバク
テリウム、ビフィダスにはフラクトオリゴ糖は資化され
ないが、G2′はよく資化される。又、乳児において優勢
に出現するビフィドバクテリウムブレーブ及びロングア
ムにもG2′はフラクトオリゴ糖より良く資化される。
実施例２ 参考例２で得られたロドトルラ・ラクトーザ（Rhodot
orula lactosa）IFO1423株の湿菌体5.2gに乳糖10gを加
え、液の全量を100mlとした。この液のpHを6.5とした
後、55℃で２日間放置した。放置後の液の遠心上澄み液
を、実施例１と同様にして分析したところ、実施例１と
同様のG2′のピークが現われた。このときのG2′の乳糖
に対する収率は34％（w/v）であった。
orula lactosa）IFO1423株の湿菌体5.2gに乳糖10gを加
え、液の全量を100mlとした。この液のpHを6.5とした
後、55℃で２日間放置した。放置後の液の遠心上澄み液
を、実施例１と同様にして分析したところ、実施例１と
同様のG2′のピークが現われた。このときのG2′の乳糖
に対する収率は34％（w/v）であった。
実施例３ 参考例３で得られたクリプトコッカス・ローレンティ
（Cryptococcus laurentii）IFO0372株の湿菌体5gに乳
糖10gを加え、液の全容量を100mlとした。この液のpHを
7.5とした後、55℃で２日間放置した。放置後の混合物
の遠心上澄みを実施例１と同様にして分析したところ、
実施例１と同様のG2′のピークが現れた。このG2′の収
率は26％（w/v）であった。
（Cryptococcus laurentii）IFO0372株の湿菌体5gに乳
糖10gを加え、液の全容量を100mlとした。この液のpHを
7.5とした後、55℃で２日間放置した。放置後の混合物
の遠心上澄みを実施例１と同様にして分析したところ、
実施例１と同様のG2′のピークが現れた。このG2′の収
率は26％（w/v）であった。
実施例４ 参考例４で得られたスポロボロミセス・シンギュラス
（Sporobolomyces singularis）ATCC24193株の湿菌体3g
を用いること及び反応温度を60℃としたこと以外は実施
例１と同様に行ない分析した。分析の結果、実施例１と
同様のG2′のピークが現れ、その収率は21％（w/v）で
あった。
（Sporobolomyces singularis）ATCC24193株の湿菌体3g
を用いること及び反応温度を60℃としたこと以外は実施
例１と同様に行ない分析した。分析の結果、実施例１と
同様のG2′のピークが現れ、その収率は21％（w/v）で
あった。
実施例５ 参考例５で得られたブレラ・アルバ（Bullera alba）
IFO1192株の湿菌体2.5gを用いる以外は、実施例１と同
様に分析した。その結果、実施例１と同様のG2′のピー
クが現れ、その収率は22％（w/v）であった。
IFO1192株の湿菌体2.5gを用いる以外は、実施例１と同
様に分析した。その結果、実施例１と同様のG2′のピー
クが現れ、その収率は22％（w/v）であった。
実施例６ 参考例６で得られたリポマイセス・リポーファー（Li
pomyces lipofer）IFO0673株の湿菌体1gを4mlの生理食
塩水に懸濁し、この懸濁液にアクリルアミド750mg、架
橋剤としてN,N′−メチレンビスアクリルアミド40mgを
加え、更に、重合促進剤として５％β−ジメチルアミノ
プロピオニトリル0.5ml、重合開始剤として2.5％ペルオ
キソ二硫酸カリウム0.5mlを加え、よく混合して30℃で3
0分間放置した。得られたゲルを生理食塩水で洗浄し
て、固定化酵母菌体を得た。
pomyces lipofer）IFO0673株の湿菌体1gを4mlの生理食
塩水に懸濁し、この懸濁液にアクリルアミド750mg、架
橋剤としてN,N′−メチレンビスアクリルアミド40mgを
加え、更に、重合促進剤として５％β−ジメチルアミノ
プロピオニトリル0.5ml、重合開始剤として2.5％ペルオ
キソ二硫酸カリウム0.5mlを加え、よく混合して30℃で3
0分間放置した。得られたゲルを生理食塩水で洗浄し
て、固定化酵母菌体を得た。
次に、この固定化酵母菌体に乳糖10gを加え、液の全
容量を100mlとし、pHを7.5として、55℃で24時間放置し
た後、遠心分離して固定化酵母菌体を含まない上澄みを
得た。この上澄みを実施例１と同様にして分析したとこ
ろ、実施例１と同様のG2′のピークが現れ、その収率は
26％（w/v）であった。
容量を100mlとし、pHを7.5として、55℃で24時間放置し
た後、遠心分離して固定化酵母菌体を含まない上澄みを
得た。この上澄みを実施例１と同様にして分析したとこ
ろ、実施例１と同様のG2′のピークが現れ、その収率は
26％（w/v）であった。
又、上記で得た固定化酵母菌体は、反応を同条件下で
10回繰り返して行っても、G2′の合成活性の低下は認め
られず、固定化酵母菌体の繰り返し使用が可能であるこ
とが判った。
10回繰り返して行っても、G2′の合成活性の低下は認め
られず、固定化酵母菌体の繰り返し使用が可能であるこ
とが判った。
実施例７ 参考例７で得られた固定化菌体80gをカラムにつめ、
このカラムに200mlの30％乳糖を循環させた。pH6.5、55
℃で５日間反応させた後、実施例１と同様に分析してG
2′が10.2％（w/v）生成していることが判った。又、５
日間を１バッチとする反応を10回繰り返しても活性の低
下は認められなかった。
このカラムに200mlの30％乳糖を循環させた。pH6.5、55
℃で５日間反応させた後、実施例１と同様に分析してG
2′が10.2％（w/v）生成していることが判った。又、５
日間を１バッチとする反応を10回繰り返しても活性の低
下は認められなかった。
実施例８ 参考例８で得られたリポマイセス（Lipomysce）NKD−
14（微工研菌寄第8948号）株の湿菌体1gを4mlの生理食
塩水に懸濁し、この懸濁液にアクリルアミド750mg、架
橋剤としてN,N′−メチレンビスアクリルアミド40mgを
加え、更に、重合促進剤として５％β−ジメチルアミノ
プロピオニトリル0.5ml、重合開始剤として2.5％ペルオ
キソ二硫酸カリウム0.5mlを加え、よく混合して30℃で3
0分間放置した。得られたゲルを生理食塩水で洗浄し
て、固定化酵母菌体を得た。
14（微工研菌寄第8948号）株の湿菌体1gを4mlの生理食
塩水に懸濁し、この懸濁液にアクリルアミド750mg、架
橋剤としてN,N′−メチレンビスアクリルアミド40mgを
加え、更に、重合促進剤として５％β−ジメチルアミノ
プロピオニトリル0.5ml、重合開始剤として2.5％ペルオ
キソ二硫酸カリウム0.5mlを加え、よく混合して30℃で3
0分間放置した。得られたゲルを生理食塩水で洗浄し
て、固定化酵母菌体を得た。
次に、この固定化酵母菌体に乳糖1gを加え、液の全容
量を10mlとし、pH6.0、55℃で３日間反応させた。
量を10mlとし、pH6.0、55℃で３日間反応させた。
反応後の上澄み液を、実施例１と同様にして分析した
ところG2′が4.1％（w/v）生成していた。
ところG2′が4.1％（w/v）生成していた。
（発明の効果） 本発明の組成物は、雑菌の混入を防げる55℃以上で反
応を行なうため、これまでよりビフィズス活性が高く安
定性に優れたものである。本発明によれば反応温度を高
くできることで、反応速度が速くなるとともに、反応基
質である乳糖の濃度も高くできる。
応を行なうため、これまでよりビフィズス活性が高く安
定性に優れたものである。本発明によれば反応温度を高
くできることで、反応速度が速くなるとともに、反応基
質である乳糖の濃度も高くできる。
更に、本発明によれば、酵母菌体から酵素を抽出する
必要もなく、使用する酵母菌体を繰り返し使用すること
ができ、ビフィズス因子を効率よく生産することができ
る。
必要もなく、使用する酵母菌体を繰り返し使用すること
ができ、ビフィズス因子を効率よく生産することができ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (2)
- 【請求項１】式： で示されるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
３）−Ｄ−グルコースを含有するビフィドバクテリウム
菌の増殖促進性組成物。 - 【請求項２】乳糖資化能を有するロドトルラ属、スポロ
ボロミセス属、クリプトコッカス属、リポマイセス属及
びブレラ属からなる群から選ばれる酵母の静止菌体で、
乳糖を50〜70℃の温度条件下で処理することを特徴とす
る請求項１記載の組成物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1106329A JP2806969B2 (ja) | 1989-04-26 | 1989-04-26 | ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1106329A JP2806969B2 (ja) | 1989-04-26 | 1989-04-26 | ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02286079A JPH02286079A (ja) | 1990-11-26 |
| JP2806969B2 true JP2806969B2 (ja) | 1998-09-30 |
Family
ID=14430865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1106329A Expired - Lifetime JP2806969B2 (ja) | 1989-04-26 | 1989-04-26 | ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2806969B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2722110B2 (ja) * | 1989-05-12 | 1998-03-04 | 株式会社ヤクルト本社 | 増殖促進剤およびその製造法 |
-
1989
- 1989-04-26 JP JP1106329A patent/JP2806969B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02286079A (ja) | 1990-11-26 |
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