JPH02286079A - ビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組成物及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ビフィドバクテリウム菌（以下ビフィズス菌
という。）の増殖促進性組成物及びその製造法に関する
ものである。

（従来の技術） ビフィズス菌は、人間の腸内に生育する有用菌であり、
腸管内にビフィズス菌叢が形成されると、これが乳酸、
酢酸及び蟻酸を産生じ、腸管内のｐＨを低下させ、有害
菌の腸管内定着を防止することが知られている。このよ
うに有用なビフィズス菌の増殖を促進する活性をもつ化
合物は、粉乳、ドリンク剤の他、各種の食品に添加して
利用されている。

従来、このビフィズス菌の増殖促進剤（以下ビフィズス
因子という。）については多くの研究がなされており、
ラクチュロース（特公昭４９−４０９５７号公報参照）
、フラクトオリゴ糖（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ　
ａｎｄ　Ｍ　１ｃｒｏｆｌｏｒａ、　ｖｏｌ、　５　（
１）、　３７−５０．１９８６）、一般式：　ＧａＱ　
　（Ｇａ１２）ｎ−Ｇ（ｃ（式中、ＧａＱはガラクトー
ス残基、Ｇ（ｌｃはグルコース残基、ｎは１〜４の整数
を表す。）で示されるガラクトオリゴ糖（特開昭６３−
１８５３７３号公報参照）、人参エキス（お茶の水医学
雑誌、８−８８．１９６０）、Ｎ−アセチルラクトサミ
ン（特開昭５９−１１１９０号公報参照）、イソマルト
オリゴ糖（特開昭６１−２１２２９６号公報参照）、大
豆オリゴ糖（特開昭６２−１５５０８２号公報参照）な
どのビフィズス因子が報告されている。

（発明が解決しようとする課題） しかし、上記のオリゴ糖は何れもビフィズス閑の増殖促
進剤としては、その選択性が十分でなかったり、あるい
は安定性に問題があったりして十分なものでなく、又、
その製造過程１こおいても反応温度が低いために、雑菌
が混入し易かったり、反応速度が低かったりして問題が
あった。更に酵素を抽出する必要があるなど、製造工程
が繁雑であるという問題があった。

ビフィズス閑の増殖促進剤として十分な活性を有し、安
定性に優れたビフィズス因子と、雑菌の混入なしにそれ
を簡便に素早く製造できる製造法を提供することを目的
とするものである。

（課題を解決するだめの手段） 本発明者らはこのような課題を解決するために鋭意検討
した結果、〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１→３
）−〇−グルコースがビフィズス増殖因子としてより効
果のあることを見い出し、この知見に基づいて本発明を
成すに至った。

すなわち、第一の発明は式； で示される〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（ｌ→３
）−Ｄ−グルコースを含有するビフィドバクテリウム菌
の増殖促進性組成物を要旨とするものである。

また、第二の発明は、乳糖資化能を有するロドトルラ属
、スポロボロミセス属、クリプトコツカス属、リポマイ
セス属及びブレラ属からなる群から選ばれる酵母の静止
菌体で、乳糖を５０〜７０℃の温度条件下で処理するこ
とを特徴とするビフィドバクテリウム菌の増殖促進性組
成物の製造法を要旨とするものである。

本発明に用いられる酵母はロドトルラ属、スポロボロミ
セス属、クリプトコツカス属、リポマイセス属及びブレ
ラ属に属する乳糖資化能を有する酵母である。

そのような具体例としては、ロドトルラ・ラクトーザ（
ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌａ　１ａｃｔｏｓａ）　Ｉ　Ｆ　
０１４２３、ＩＦＯ１４２４、クリプトコツカス・ロー
レンテイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎｔ
ｉｉ）　Ｉ　Ｐ　００８７２、ＩＦ’００３８４　、　
ＩＦＯＯ９３０、夏　ＦＯｌ　　３　７６、［ＦＯ！４
８７、スポロボロミセス・シンギュラリス（Ｓ　ｐｏｒ
ｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎｇｕｌｕｒｉｓ）Ａ　Ｔ
　ＣＣ２４１９３、リボマイセス・リボーフ７　　（Ｌ
ｉｐｏｍｙｃｅｓ　１ｉｐｏｆｅｒ）　Ｉ　Ｆ　００６
７３、ＩＦＯ１２８８、ブレラ・アルバ（Ｂｕｌｌｅｒ
ａ　ａｌｂａ）　Ｉ　Ｆ　Ｏ１１９２及びリボマイセス
・スターキイー（Ｌ　１ｐｏａｙｃｅｓ　ｓＬ肛神杜）
等が挙げられる。リボマイセス・スターキイーは好まし
く、その中でもリボマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）Ｎ
　Ｋ　Ｄ　−１４（微工研閑寄第８９４８号）が、反応
の基質である乳糖の無駄な分解が生じることなく、転移
反応のみが起こり、目的物を高収率で得ることができる
ので特に好ましい。

この菌株は、静岡集熱用温泉の土壌中から採取したもの
で、バーシイのマニュアル・才ブ・デターミネーティブ
・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ　ｓＭａｎｕａｌ　
ｏｆ　Ｄｅｔｅｒ＋＋＋１ｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ）第８版に基づき検索した結果、リボマイ
セス・スターキイー（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ　５ｔａｒｋ
ｅｙｉ）に属する新閑味と判定できた。そこで、リボマ
イセスＮＫＤ−１４と命名し、昭和６１年９月１日に通
産省工業技術院微生物工業技術研究所へ寄託した。尚、
この微生物受託番号は、微工研菌寄第８９４８号である
。

上記の静止菌体を得るための方法としては、何ら限定さ
れるものではなく、例えば乳糖を含む培地で培養するか
、又は炭素源としてグルコース、ソルビトール、マルト
ース、ショ糖、廃糖蜜などを用いて菌体を十分増殖させ
た後に乳糖を添加し、更に培養を続けβ−ガラクトシダ
ーゼが十分誘導された後に、遠心分離、濾過などの通常
用いられる方法によって分裂能力を保持するが一時的に
分裂しない静止菌体を得ることができる。上記乳糖を含
む培地の組成において、乳糖は０．１〜３０重量％、好
ましくは５〜２０重量％、培養に用いる窒素源、例えば
ペプトン、カゼイン、コーンステイープリカー、肉エキ
ス、酵母エキスなどの有機窒素源や、硫安、塩化アンモ
ニウム、尿素などの無機窒素源は０．０１〜１０重量％
、好ましくは０．５〜５重量％、ミネラル源として用い
るリン酸塩化合物、例えばリン酸カリウム第１塩（ＫＨ
，ＰＯ，）、リン酸ナトリウム第２塩水和物（Ｎａｔｌ
（Ｐ　０４・１２０．０）は０．０５〜５重量％、好ま
しくは０，１〜璽重量％、又、その他の成分としてビタ
ミンなどを必要に応じて添加してもよい。

また、培養の方法としては、通常用いられる液体培地も
しくは固体培地で、静置培養、通気撹拌培養、振盪培養
のいずれの方法でもよい。培養温度、培養時間は、培養
する菌種により変わるが、通常１０〜３５℃で１５〜１
００時間である。その後、培養液から遠心分離、濾過な
どの通常の方法により回収した菌体は、何ら処理を施す
ことなく、菌体のまま反応の触媒として用いることがで
きる。更に、菌体を各種の固定化法により固定化するこ
とにより用いることもできる。

その固定化方法は、特に限定されるものではなく、公知
のアクリルアミドゲル、アルギン酸カルシウムゲルなど
による包括法、グルタルアルデヒド、トリレンジイソシ
アナートなどによ４菌体間架橋法、Ｄｏｗｅｘ５０（ダ
ウ・ケミカル社製）、ＣＭ−セルロース、Ｐ−セルロー
ス、ＤＥＡＥ−セルロース、ＥＣＴＥＯＬＡ−セルロー
ス（ワットマン社製）などに結合させて固定化する方法
、おがくずなどに吸着させる方法などが挙げられる。こ
の固定化された酵母菌体は、カラム型反応器として用い
ることができる。又、模型反応器内部に酵母菌体又は固
定化した酵母菌体を浮遊させ、反応生成物のみを反応器
外へ連続的に取り出すことも可能である。

本発明の増殖促進性組成物は、上記のようにして得られ
る酵母菌体で乳糖を処理することにより得られる。その
処理法において、乳糖の濃度は１％（ｗ／ｖ）以上が適
当であり、５％（ｗ／ｖ）以上が好ましく、特にｌ０％
（ｗ／ｖ）以上が好ましい。１％（ｗ／ｖ）より低いと
乳糖の加水分解反応がオリゴ糖生成反応より優勢となり
好ましくない。また、そのときのｐ）Ｉは使用する酵母
菌体の溶菌が起こりにくく、しかも、目的とするビフィ
ズス因子が最ら多く合成されるようなｐＨであり、具体
的には３〜９、好ましくは５〜７である。又、必要に応
じてリン酸、酢酸、クエン酸等の緩衝液を使用すること
もできる。反応温度は５０℃〜７０℃であることが必要
であり、特に５５℃〜６０℃が好ましい。５０℃より低
いとＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノンルー（ｌ→４）−〇
−β−Ｄ−ガラクトピラノンルー（１→４）−Ｄ−グル
コースが生成し、本発明のビフィズス因子であるＯ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコー
スは生成しなくなる。又、７０℃より高いと反応の触媒
として用いる菌体中の酵素活性が失活し、反応が進まな
くなる。反応時間は通常１０〜１００時間、好ましくは
３０〜７０時間である。１０時間より短いと基質である
乳糖の反応率が低下し、目的である〇−β−Ｄ−ガラク
トピラノシルー（１−３）Ｄ−グルコースの収率が低く
なり、又、１００時間より長いと〇−β−Ｄ−ガラクト
ピラノンル（１→３）−Ｄ−グルコースにさらに乳糖の
ガラクトースが転移した三糖以上の糖が生成し、目的で
ある０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→３）−Ｄ
−グルコースの収率が低くなり好ましくない。反応終了
後、必要に応じて濾過、遠心分離、デカンテーションな
どにより酵母菌体を除去して、本発明の増殖促進性組成
物を得る。

（実施例） 次に、本発明を実施例により具体的に説明する。

参考例１ 下記組成の培地を３０＆容ジャーファーメンタ−に入れ
、殺菌した。

乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　４００ｇ硫安　
　　　　　　　　　　　　　　　４０９ＫＨ，Ｐｏ、　
　　　　　　　　　　　　　　１０９Ｎａ、ＨＰＯ，−
１２）１ｔＯｌ　　０９Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７１−１．
０　　　　　　　　　　　１０９酵母エキス　　　　　
　　　　　　　　２０ｇ水道水　　　　　　　　　　　
　　　　２０℃２次に、同組成の培地で３０℃で２４時
間前培養したりポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）　Ｎ
　Ｋ　Ｄ−璽４（微工研菌寄第８９４８号）１１２を接
種し、ｐＨ６，５，３０℃、通気量２ＯＬ／ｌｌ１ｎ、
インペラー回転数４０Ｏｒ、ｐ、ｍで１８時間培養を行
った。培養終了後、α−ラバル社製遠心機ＬＡＰＸ２０
２型で遠心分離を行なって湿菌体２　、８　ｋｇを得た
。

参考例２ ５００ｍ１２容三角フラスコに下記組成の培地１００ｘ
（ｌを入れたものを、１０本オートクレーブした。

乳糖　　　　　　　　　　　　　　　５ｇ硫安　　　　
　　　　　　　　　　　０．２９酵母エキス　　　　　
　　　　　　０．３９ＫＨ＊Ｐ０４　　　　　　　　　
　　０．０８９ＮａｔＨ，Ｐ　Ｏ，−１２１（＊０　　
　　　０．０３９ＭｇＳＯ４・７１−１ｔＯＯ，００２
９水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００
ｇ＋！ｐＨ５，６ 次に、この培地にロドトルラ・ラクトーザ（Ｒｈｏｄｏ
ｔｏｒｕｌａ　１ａｃｔｏｓａ）　Ｉ　Ｆ　０１４２３
株を一白金耳接種し、３０℃で３日間ロータリーシェー
カーで培養を行なった。培養終了後、遠心分離により菌
体を回収し、５．２９の湿菌体を得た。

参考例３ ５００ｘｆｆ容三角フラスコに下記組成の培地１００ｙ
（ｌを入れたものを、ｌＯ零オートクレーブした。

乳糖　　　　　　　　　　　　　　　５９ポリペプトン
　　　　　　　　　　０．５９酵母エキス　　　　　　
　　　　　０．３９水　　　　　　　　　　　　　　　
　　１００１１２ｐＨ５，６ 次に、この培地にクリプトコツカス・ローレンテイ（Ｃ
ｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　１ａｕｒｅｎｔｉｉ）　Ｉ
　Ｆ　００３７２株を一白金耳接種し、３０℃で２日間
ロータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了後、
遠心分離により菌体を回収し、７．５９の湿菌体を得た
。

参考例４ 参考例３に記載した培地に、スｆロボロミセス・シンギ
ュラリス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏ＊ｙｃｅｓ　ｇｉｎｇｕ
ｌａｒｉｓ）ＡＴＣ０２４１９３株を一白金耳接種し、
１０℃で２日間ロータリーシェーカーで培養を行なった
。

培養終了後、遠心分離して３，２ｇの湿菌体を得た。

参考例５ 参考例３に記載した培地に、ブレラ・アルバ（Ｂｕｌｌ
ｅｒａ　ａｌｂａ）　［Ｐ　ＯＩ　１９２株を一白金耳
接種し、３０℃で３日間ロータリーシェーカーで培養を
行なった。培養終了後、遠心分離して２．８ｇの湿菌体
を得た。

参考例６ 参考例３に記載した培地に、リポマイセス・リボーフｙ
−（Ｌ　ｉｐｏｍｙｃｅｓ　Ｉｉ、ｐｏｒｅｒ）　Ｉ　
Ｐ’　００６７３株を一白金耳接種し、３０℃で２日間
ロータリーシェーカーで培養を行なった。培養終了後、
遠心分離して３．５９の湿菌体を得た。

参考例７ 参考例！と同様にして得られた湿菌体５０ｇに５９のア
ルギン酸ナトリウムを加え、更に２００ｘ（ｌの水道水
を加え、均一になるまでミキサーで撹拌した。次に、こ
れを注射針の先から０．２Ｍの塩化カルシウム溶液に滴
下し、ビーズ状のアルギン酸カルシウム固定化菌体１１
０ｇを得た。

参考例８ 参考例１と同組成の培地を５００ｍ１！容の坂ロフラス
コに１００＋１２ずつ分注し、殺菌したしのを１０本作
成した。坂ロフラスコ１本当り一白金耳のりボマイセス
（ＬｉｐｏＩｌｙｃｅｓ）Ｎ　Ｋ　Ｄ　−１４（微工研
菌寄第８９４８号）を接種し、３０℃で３日間振盪培養
した。培養終了後、遠心分離して２．５９の湿菌体を得
た。

実施例１ ２００ｇの乳糖に、参考例！で得たりボマイセス（Ｌｉ
ｐｏｍｙｃｅｓ）　Ｎ　Ｋ　Ｄ　−１４（微工研菌寄第
８９４８号）株の湿菌体を乾燥重量で１０９加え、更に
水道水を加えてＩＱとした。この反応液を５５℃に保温
し、ｐｔ−ｔ６．５で３日間反応を行った。反応後の液
の遠心上澄み液をウォーターズ社製高速液体りロマトグ
ラフィー用カラムマイクロボンダパック／ＮＨ１（移動
相アセトニトリル／水−７／３）で分析したところ、２
糖類溶出位置に反応基質である乳糖のピークとその直前
のピーク（以下、この化合物をＧ２゛と呼ぶ）が検出さ
れた。このときの乳糖の濃度は２．４％（ｗ／ｖ）、Ｇ
２’の濃度は７゜６％であった。

６２′の構造決定 Ｇ２゛の構造を決定するために、先ず実施例１で得た上
澄み液１００ｘｊを５ｅび活性炭カラムにかけ、エタノ
ールを留出溶媒としてＧ２“４ｅｇを単離した。単離し
たＧ２’は前述の高速液体クロマトグラフィーによる分
析で単一ピークを与え、従って、単一物質であることが
判った。次いで、これを酸加水分解を行ない、水素化ホ
ウ素ナトリウム還元をし、次いで、酸加水分解を再び行
なって分析した結果、Ｇ２゛はガラクトース：グルコー
ス〜ｔｉｔで構成され、還元末端がグルコースである２
糖類であることが判明した。更に、これのＩ３０−ＮＭ
Ｒ測定を行ない、ラフ）・−ス（即ち、０−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−（１→４）−〇−グルコース）と比
較して、構造を調べた。その結果、ラクトースのガラク
トース構造に由来する炭素の吸収ピークは全て０２’の
吸収ピークと−致し、従って、Ｇ２’のガラクトース構
造はラクトースのそれと同じものであることが判った。

方、Ｇ２゛のグルコース構造については、ラクトースの
α体及びβ体グルコース構造における３位炭素の吸収ピ
ーク値がそれぞれδ（α）７３．０及びδ（β）７６．
４であるのに対し、６２°の相当するピーク値はそれぞ
れδ（α）８４」及びδ（β）８６．４と約１０ｐｐｍ
低磁場シフトしており、又、４位炭素の吸収ピーク値も
δ（α）８０．０及びδ（β）７９．９であるのに対し
、Ｇ２゛の相当する吸収ピーク値はα体及びβ体とも６
６９．９と約１０ｐｐｍ高磁場シフトしていた。これら
の１３ＯＮＭＨの結果から、Ｇ２゛のグルコース構造に
おいては３位の炭素原子に酸素原子がエーテル結合して
いることが判った。

以上の解析よりＧ２’はガラクトースとグルコースがβ
、１→３結合した０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（
ｌ→３）−Ｄ−グルコースであることが判明した。

ビフィドバクテリウム閑の培養及び資化性単離したＧ２
゛の凍結乾燥物をＰＹＦ半流動寒天培地に最終濃度０．
５％になるように添加した後、腸内細菌を接種し、３７
℃で４日間（９６時間）嫌気培養を行なった。培養後、
ｐＨを測定することにより資化性を調べた。その結果を
表−■こ、又、ＰＹＦ’培地の組成を表−２に示す。

表−２において、Ｇ２゛はビフィドバクテリウム及び外
来菌増殖防止機能をもつラクトバヂイルスによく資化さ
れるが、その他の菌種にはフラクトオリゴ糖と同程度あ
まり資化されない。更に、ビフィズス閑について比較す
ると、あらゆる年齢層に共通に認められるビフィドバク
テリウム　ビフィダスにはフラクトオリゴ糖は資化され
ないが、０２°はよく資化される。又、乳児において優
勢に出現するビフィドバクテリウムブレーブ及びロング
アムにもＧ２’はフラクトオリゴ糖より良く資化される
。

表−２ １）二組酸　ＣａＣ（Ｌ（無水） １ｇ　５Ｏ４ Ｋｄ（ＰＯ。

ＫＨ，ＰＯ。

ＮａＨＣ０３ ａＣＱ 精製水 ０．２９ ０．２９ １ｇ １０ｇ １０００１１（！ 実施例２ 参考例２で得られたロドトルラ・ラクトーザ（Ｒｈｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ　１ａｃｔｏｓａ）　Ｉ　Ｆ　０１４２
３株の湿菌体５．２ｇに乳糖１０９を加え、液の全量を
１００蛙とした。この液のＤＨを６．５とした後、５５
℃で２日間放置した。放置後の液の遠心上澄み液を、実
施例！と同様にして分析したところ、実施例１と同様の
Ｇ２°のピークが現われた。このときのＧ２°の乳糖に
対する収率は３４％（Ｗ／Ｖ）であった。

実施例３ 参考例３で得られたクリプトコツカス・ローレンテイ（
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎＬｉｉ）　Ｉ
　Ｆ　００３７２株の湿菌体５９に乳糖１０９を加え、
液の全容量を１ｏｏｊＩＱとした。この液のｐｉ（を７
．５とした後、５５℃で２日間放置した。放置後の混合
物の遠心上澄みを実施例１と同様にして分析したところ
、実施例１と同様の０２°のビークが現れた。このＧ２
°の収率は２６％（ｗ／ｖ）であった。

実施例４ 参考例４で得られたスポロボロミセス・シンギュラス（
Ｓ　　ｒｏｂｏｌｏｍ　ｃｅｓ　ｓｉｎｇｕｌａｒｉｓ
）Ａ　Ｔ　ＣＣ２４１９３株の湿菌体３９を用いること
及び反応温度を６０℃としたこと以外は実施例！と同様
に行ない分析した。分析の結果、実施例１と同様のＧ２
゜のピークが現れ、その収率は２１％（Ｗ／Ｖ）であっ
た。

実施例５ 参考例５で得られたブレラ・アルバ（［３ｕｌｌｅｒａ
ａ１１＋ａ）ＩＦＯ１１９２株の湿菌体２．５９を用い
る以外は、実施例ｉと同様に分析した。その結果、実施
鉤目と同様の０２°のピークが現れ、その収率は２２％
（ｗ／ｖ）であった。

実施例６ 参考例６で得られたりボマイセス・リボ−ファー（Ｌ　
ｉｐｏｍｙｃ’ｅｓ　１ｉｐｏｆｅｒ）　Ｉ　Ｆ　００
６７３株の湿菌体１ｇを４＊Ｑの生理食塩水に懸濁し、
この懸濁液にアクリルアミド７５０Ｒｇ、架橋剤として
Ｎ、Ｎ’メチレンビスアクリルアミド４０すを加え、更
に、重合促進剤として５％β−ジメチルアミノプロピオ
ニトリル０　、５　ｍＱ、重合開始剤として２．５％ベ
ルオキソニ硫酸カリウム０．５村を加え、よく混合して
３０℃で３０分間放置した。得られたゲルを生理食塩水
で洗浄して、固定化酵母菌体を得た。

次に、この固定化酵母菌体に乳糖！０９を加え、液の全
容量を１００ｊｌＱとし、ｐＨを７．５として、５５℃
で２４時間放置した後、遠心分離して固定化酵母菌体を
含まない上澄みを得た。この上澄みを実施例１と同様に
して分析したところ、実施例１と同様のＧ２°のピーク
が現れ、その収率は２６％（ｗ／　ｖ）であった。

又、上記で得た固定化酵母菌体は、反応を同条件下でｌ
０回繰り返し行っても、Ｇ２°の合成活性の低下は認め
られず、固定化酵母菌体の繰り返し使用が可能であるこ
とが判った。

実施例７ 参考例７で得られた固定化菌体８０９をカラムにつめ、
このカラムに２００１１２の３０％乳糖を循環させた。

ｐｔｉｅ、ｓ、５５℃で５日間反応させた後、実施例１
と同様に分析して０２°が■０，２％（ｗ／ｖ）生成し
ていることが判った。又、５日間を１バツチとする反応
を１０回繰り返しても活性の低下は認められなかった。

実施例８ 参考例８で得られたりボマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ
）ＮＫＤ−１４（微工研閑寄第８９４８号）株の湿菌体
１ｇを４ｍｇの生理食塩水に懸濁し、この懸濁液にアク
リルアミド７５０ｍｇ、架橋剤としてＮ、Ｎ’メチレン
ビスアクリルアミド４０贋９を加え、更に、重合促進剤
として５％β−ジメチルアミノプロピオニトリル０　、
５　ｍＧ、重合開始剤として２．５％ベルオキソニ硫酸
カリウム０　、５　ｙｔ（ｌを加え、よく混合して３０
℃で３０分間放置した。得られたゲルを生理食塩水で洗
浄して、固定化酵母菌体を得た。

次に、この固定化酵母菌体に乳糖１ｇを加え、液の全容
量をＬＯｙ、Ｑとし、ｐＨ６，０，５５℃で３日間反応
させた。

反応後の上澄み液を、実施例１と同様にして分析したと
ころ０２′が４．１％（ｗ／ｖ）生成していた。

（発明の効果） 本発明の組成物は、雑菌の混入を防げる５５℃以上で反
応を行なうため、これまでよりビフィズス活性が高く安
定性に優れたものである。本発明によれば反応温度を高
くできることで、反応速度が速くなるとともに、反応基
質である乳糖の濃度も高くできる。

更に、本発明によれば、酵母菌体から酵素を抽出する必
要もなく、使用する酵母菌体を繰り返し使用することが
でき、ビフィズス因子を効率よく生産することができる
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で示されるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３
   ）−Ｄ−グルコースを含有するビフィドバクテリウム菌
   の増殖促進性組成物。 ２、乳糖資化能を有するロドトルラ属、スポロボロミセ
   ス属、クリプトコッカス属、リボマイセス属及びブレラ
   属からなる群から選ばれる酵母の静止菌体で、乳糖を５
   ０〜７０℃の温度条件下で処理することを特徴とする請
   求項１記載の組成物の製造法。