JPH0240395A - 新規なサイコサポニンおよび該化合物を有効成分とするＮａ‖‐Ｋ‖ＡＴＰａｓｅ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、Ｎ１−Ｋ”　ＡＴＰａｓｅ阻害作用を有し、
心不全や心房性不整脈の治療に有用なサイコサポニンお
よび該化合物を有効成分とするＮ１−Ｋ”　ＡＴＰａｓ
ｅ阻害剤に関するものである。

［従来の技術および課題］ 近年、高年齢化にともない心不全や心房性不整脈などの
心臓疾患の患者が増加し、大きな社会問題となっている
。また、これらの疾患に広く用いられているジギタリス
系の強心配糖体の安全域は極めて狭く、臨床的には使用
しにくい薬物であるとされており、これらの薬物以外の
開発が望まれていた。

Ｎａ−に７　ＡＴＰａｓｅはＮａｑＫ＋の能動輸送に関
ワル酵素で、この酵素を阻害すると心筋細胞内のＮ５が
上昇したままになる。その舵かＣａ″０と置換し、アク
トミオシンを収縮させ、心筋細胞収縮が増強するとされ
ている。

そのため、Ｎ１−Ｋ”　ＡＴＰａｓｅ阻害作用を指標と
する強心薬物の検索および開発が行われてきた。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、優れたＮｉ−に＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤を
提供すべく、鋭意研究を重ねた結果、ミシマサイコ（Ｂ
ｕｐｌｅｕｒｕｍ　ｆａｌｃａｔｕｍ　Ｌ、）またはそ
の他同属植物の根に含まれるサイコサポニンに阻害作用
を見いだし本発明を完成した。

すなわち本発明は （式中Ｒは＜０１１またはｕｍ　Ｑ　Ｉ−Ｉを示す。）
で表されるサイコサポニン（以下、本発明の化合物とい
う。）および該化合物を有効成分とするＮｉ−に＋ＡＴ
Ｐａｓｅ阻害剤である。

なお、ミシマサイコまたはその変種の根は生薬柴胡とし
て漢方薬に用いられている。

本発明の化合物を得るには例えば次のような方法が挙げ
られる。

柴胡をジエチルエーテルで抽出し、抽出残渣を酢酸エチ
ル、アセトン、メタノール、エタノール、水より選ばれ
る少なくとも一つの溶媒で抽出し、得られた抽出液から
溶媒を除去して得たエキスを、水飽和ｎ−ブタノールと
水で分配を行い、ｎ−ブタノールエキスを得、これをヘ
キサン、ジエチルエーテル、石油エーテル、酢酸エチル
、クロロホルム、アセトン、メタノール、エタノール、
アセトニトリル、水より遣ばれる少なくとら一つの溶媒
を溶出溶媒として、ダイヤイオンＨＰ−２０、ＭＣＩゲ
ルＣＨＰ　２０　Ｐなどのポーラスポリマーセファデッ
クスＬ［（−２０などのセファデックス、逆相系シリカ
ゲル、シリカゲル、ポリアミドまたはセルロース等を担
体に用いたカラムクロマトグラフィーまたは高速液体ク
ロマトグラフィーに１回または数回付し、ＦＪＢクロマ
トグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィーで目的
成分を確認しながら分画することにより本発明の化合物
を得ることができる。

次に本発明の化合物が優れた准−に＋ＡＴＰａｇｅ阻害
作用を有し、心不全や心房性不整脈の治療剤として有効
であることについて実験例を挙げて説明する。

実験例 試験管にｌ　２５　ｉＭ　イミダゾール−塩酸緩衝液（
ｐＨ７，２）２００成、ＩＭ　塩化ナトリウム５０７、
Ｊ、２００朋塩化カリウム　５０辺、１００１！Ｍ　ｋ
ｊｒ化マグネシウム　２５通、１０．、Ｍエチレンジア
ミン四酢酸２カリウム（Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ・２Ｋ）２５通
、後記実施例で得た化合物の溶液５０Ｉｉ！、酵素溶液
５０ｄ（０，５Ｑ、Ｓｉｇｍａ、　ｒｒＯｍ　Ｄｏｇ　
Ｋｉｄｎｅｙ）をとり、３７℃で２０分間インキュベー
トした。

次に、基質であるアデノシン三リン酸２ナトリウム（Ａ
ＴＰ・２Ｎａ）５０ｍ（１，３７８Ｑ、Ｓｉｇｍａ。

ｒｒｏｍ　Ｅｑｕｉｎｅ　Ｍｕｓｃｌｅ）を加え、反応
を開始した。

３７℃で２０分間インキュベートした後、２０％トリク
ロロ酢酸（ＴＣＡ）２−を加え、反応を停止し水中で１
０分間放置後、Ｆｉｓｋｅ−８ｕｂｂａｒｏｗ法により
発色させ、無機リンを定量した。

すなわち、反応溶液に３％モリブデン酸アンモニウム溶
液０．５７と０．２５％　Ｉ−アミノ−２−ナフトール
−４−スルホン酸（１，２，４−ＡＮＳ）溶液０．５ｄ
を加え室温で１５分放置し、３０００回転で５分間遠心
した後、６６０　ｎ、における吸光度を測定した。

阻害率は次式より求めた。

−Ｂ 阻害率（％）＝　　　　　　ｘ　Ｉ　００Δ ただし、 八−後記実施例で得た化合物を含まない場合の吸光度 Ｂ＝後記実施例で得た化合物を添加した場合の吸光度 後記実施例で得た化合物の５０％阻害濃度を第１表に示
す。

第１表 以上の結果より本発明の化合物のＮＭ−に＋ＡＴＰａｓ
ｅ阻害作用が確認された。

本発明の化合物の急性毒性試験の結果は、経口投与で３
．０９／ｋＷ、静脈注射の場合は’３５１１９／に９で
死亡例はなく、安全性の高い薬物であった。

次に、本発明の化合物の投与量および製剤化について説
明する。

本発明の化合物はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と
共に動物および人に投与することができる。投与形態と
しては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用
され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経
口剤、注射剤、平削等の非経口剤が挙げられる。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年
令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で本発
明の化合物の重量として５０ｑ〜５ｇを、１日数回に分
けての服用が適当と思われる。

経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、
カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩
類等を用いて常法に従って製造される。

この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体
例は以下に示す如くである。

［結合剤コ デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、マクロゴール。

［崩壊剤］ デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキシプロピルセルロース。

［界面活性剤］ ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート　８０゜［滑沢剤］ タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル。

［流動性促進剤］ 軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。

また、本発明の化合物は、懸濁液、エマルジョン剤、シ
ロップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、
これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有して
もよい。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の
年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で本
発明の化合物の重量として１日０　、１　Ｑ〜１ｇまで
の静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当と思われ
る。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射
用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロ
コシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル等を用いることかできる。さらに必要に応じて、殺菌
剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口
剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常
の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾
燥物から液剤を再調製することもできる。さらに、必要
に応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等
を加えても良い。

その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤
、直腸内投与のための平削等が挙げられ、常法に従って
製造される。

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するか、
本発明はこれによりなんら制限されるものではない。

実施例１ 粉砕した柴胡９ｋｇをジエチルエーテルで抽出し、抽出
残渣をさらにメタノールで抽出し、得られた抽出液より
溶媒を除去してメタノールエキス１４０５ｇを得た。こ
のメタノールエキスを水飽和ｎ−ブタノールと水で分配
を行い、ｎ−ブタノール居より溶媒を除去してｎ−ブタ
ノールエキス６４５９を得た。このｎ−ブタノールエキ
スを少量のメタノールに溶解し、エーテル中に滴下し、
生じた沈ｊｌ１０３ｙを得た。この沈澱をシリカゲルを
用いたカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−
エタノール−水（１０：８：Ｊ）で溶出し、目的成分を
含む両分を得た。

この両分をさらにＭｌｌゲルＣＨＰ　２０　Ｐを用いた
カラムクロマトグラフィーに付し、最初は水、逐次メタ
ノールを増やして溶出し、最後にメタノールで溶出し、
溶媒を除去してメタノールエキスを得た。メタノールエ
キスをさらにＫｉｅｓｅ１ｇｅ１６０　５ｊｌａｎｉｓ
ｉｅｒｔカラムクロマトグラフイーに付し、最初は酢酸
エチル、逐次エタノール及び水を増やして溶出し、最後
にメタノールで溶出し、溶媒を除去してメタノールエキ
スを得た。メタノールエキスをさらに数回に分け、逆相
系シリカゲルを担体にもつＹＭＣ−９−３４３（山村化
学研究所製）を用いた高速液体クロマトグラフィーに付
し、アセトニトリル−メタノール−水（４：４：３）で
溶出し、フラクションΔ、Ｂを得た。

さらにフラクションＡを数回に分け、ＹＭＣ−Ｓ−３４
３を用いた高速液体クロマトグラフィーに付し、アセト
ニトリル−メタノール−水（４：４　：３）で溶出し、
無色粉末状物質０．５９を得た。

この無色粉末状物質の、下記に示す理化学的性質により
本発明の化合物すなわち１３β、２８ｅｐｏｘｙｏｌｅ
ａｎ−１１−ｅｎｅ−３β、　Ｉ　６　ａ　、２３−ｔ
ｒｉｏｌ−３−ｏ−（６−ｏ−ｍａｌｏｎｙｌ）−β−
Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｉ（１→３）〜β−Ｄ
−ｒｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅであると決定した。

比旋光度：［α］晶５　＝＋２９．６゜（ｃ＝０．１．
メタノール） マススペクトル １１１１−ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／ｚ　：計算値　　　Ｃ
４ｓＨＷｏｏ　＋５Ｋ 実測値　　　９０５．４２６８ ＦＡＢ−ＭＳ　　　ｍ／ｚ： ９０、５　（Ｍ”＋　Ｋ）、　８８９　（Ｍ”＋　Ｎａ
）赤外線吸収スペクトル　シ’：ａａＫＣＭ−’　：３
４１６．２９４８，１７３０．１５９６紫外線吸収スペ
クトルλ＝会”　　７１ｆｆｉ（ｌｏｇε）＝２０１（
４，０３） プロトン核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）： ０．７０（３１（、ｓ）。

０．９２　（３Ｉ−１，ｓ　） ０．９４　（３Ｈ，ｓ）。

０．９５　（３１−１，ｓ　）。

１．０４（３Ｈ，ｓ）。

１．２７（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ） １．３０（３Ｈ，ｓ）。

４．２２　（Ｉ　Ｈ、ｄｄ、Ｊ　＝　１２．６　Ｈｚ）
。

４．４６　（Ｉ　Ｈ、ｄｄ、Ｊ　＝　１２．２　Ｈｚ）
。

１．１０〜４．６０（４５Ｈ，ｍ）。

５　．３　６　　（１１−１、ｄｄ、Ｊ　　＝　　１　
０　．３　　ｌ−１ｚ）。

５．９４（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝ｌＯＨｚ） １３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＣＤ５ＯＤ）： １２．８（ｑ）、１６．９（ｑ）。

１８．２（ｔ）、１８．５（ｑ）。

１９．０（ｑ）、１９．７（ｑ）。

２４．６　（ｑ）、２６．１　（ｔ　）。

３１．６（ｔ）、３２．１（ｔ）。

３２．５（ｓ）、３３．９（ｑ）。

３５．５（ｔ）、３７．１　（ｔ）。

３７．４’（ｓ）、３９．２（２Ｃ，ｔ）。

４２．６（ｓ）、４４．１（ｓ）。

４４．３（ｓ）、４６．１（ｓ）。

４８．２（ｄ）、５２．１（ｄ）。

５３．９　（ｄ　）、６５．０　（２Ｃ，ｔ　）。

７　１．４（ｄ）、７　１．５（ｄ）。

７　１．９（ｄ）、７　２．４（ｄ）。

７　５．３（ｄ）、７　５．４（ｄ）。

７　７．５（ｄ）、７　８．０（ｄ）。

７　８．５（ｔ）、８　３．４（ｄ）。

８　５．３（ｄ）、８　６．７（ｓ）。

１　０　５．３（ｄ）、１　０　５．６（ｄ）。

１　３　１．４（ｄ）、１　３　４．０（ｄ）実施例２ 実施例！の高速液体クロマトグラフィーで得たフラクシ
ョンＢを数回に分け、ＹＭＣ−９−３４３を用いた高速
液体クロマトグラフィーに付し、アセトニトリル−メタ
ノール−水（４：４：３）で溶出し、無色粉末状物質０
．４９を得た。

この無色粉末状物質の下記に示す理化学的性質により本
発明の化合物、すなわち１３β、２８ｅｐｏｘｙｏｌｅ
ａｎ−１１−ｅｎｅ−３β、１６β、　２３−ｔｒｉｏ
ト３−０７（６−ｏ−ｍａｌｏｎｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌ
ｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−β−Ｄ−ｒｕ
ｃｏｐｙｒａｎｏｓ　ｉｄｅであると決定した・比旋光
度：［α］”３　　＝＋４２゜８゜（ｃ＝０．１．メタ
ノール） マススペクトル １１Ｒ−ＦＡＢ−ＭＳ　　　ｍ／ｚ　　：計算値　Ｃ４
５Ｈ７００ＩｏＫ ９０５．４３０１ 実測値　９０５．４３１６ ＦＡＢ−ＭＳ　　　ｍ／ｙ、： ９０５（Ｍ”＋Ｋ）、８８９（Ｍ”＋Ｎａ）。

赤外線吸収スペクトル　νｍｉｘ　　（２７１１−’　
：３４１６．２９４４，１７３０．１５９２紫外線吸収
スペクトルλ：：：’　　ｎｆｆｉ（ｌｏｇε）：２０
１（４，００） プロトン核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｎ＋　ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）：０．７０（３Ｈ
，ｓ）。

０．９２　（３Ｈｌｓ　）。

０．９５（３１−１，ｓ）。

０．９８（３Ｈ，ｓ）。

１　．０　４　（３１−１，ｓ　）。

１．０９（３１−１，ｓ）。

１　．２　８　（３■、ｄ　、Ｊ　＝　５　Ｈｚ）。

４．２５（Ｉ　　Ｉ−１，ｄｄ、Ｊ　＝　１　２゜６Ｈ
２）。

４．４　７　（Ｉ　Ｉ−Ｉ　、ｄｄ、Ｊ　＝　１　２．
２　Ｈｚ）。

１．１　０〜４．６０（４５１−１，ｍ）。

５．３　８　（ｌ　　Ｈ、ｄｄ、Ｊ　＝　Ｉ　　Ｏ，３
Ｈｚ）。

５．９　５　（Ｉ　　Ｉ−１，ｄ　、Ｊ　＝　　１　０
　Ｈｚ）３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル （δ　ｐｐｍ　ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）： １２．８（ｑ）、Ｉ　７．１（ｑ）。

１８．３（ｔ）、１９．０（Ｑ）。

２０．２（ｑ）、２１．３（ｑ）。

２４．１（ｑ）、２６．１（２Ｃ，ｔ）。

３２．２（ｔ）、３２．３（ｓ）。

３４．０　（ｑ）、３５．３　（ｔ　）。

３６．０（ｔ）、３７．１（ｓ）。

３８．６（ｔ）、３９．３（１：）。

４３．０（ｓ）、４４．１（ｓ）。

４６．６（ｓ）、４７．６（ｓ）。

４　８．１（ｄ）、５３．１（ｄ）。

５４．０（ｄ）、６４．９（ｔ）。

６５．０（ｔ）、６５．４（ｄ）。

７１．４（ｄ）、７１．６（ｄ）。

７２．０（ｄ）、７２．４（ｄ）。

７３．４　（ｔ）、７５．３（ｄ）。

７５．４（ｄ）、７７．６（ｄ）。

８３．２（ｄ）、８４．９（ｄ）。

８５．７（ｓ）、Ｉ　　０５．３（ｄ）。

１　０５．６（ｄ）、ｌ　３　ｏ、６（ｄ）。

１３４．２（ｄ） 実施例３ ■コーンスターチ ■結晶セルロース ■カルボキシメチル セルロースカルシウム ■軽質無水ケイ酸 ■ステアリン酸マグネシウム　０．５９０．５ｇ 計 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打鍵機にて
圧縮成型して一部２００１１９の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２０Ｍ９が含有されており、
成人１日１０〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例４ ■結晶セルロース　　　　　８４．５９■ステアリン酸
マグネシウム　０．５ｇ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　　５９ 上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に混合
し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を加え
て混合し、打錠機にて圧縮成型して一部２００１１１９
の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２０１１ｇが含有されており
、成人１日１０〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例５ ■結晶セルロース　　　　　３４．５９■１０％ヒドロ
キシプロピル セルロースエタノール溶液　５０９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５２ ■ステアリン酸マグネシウム　０．５９上記の処方に従
って■、■および■を均一に混合し、常法によりねつ和
し、押し出し造粒機により造粒し、乾燥・解砕した後、
■および■を混合し、打鍵機にて圧縮成型して一部２０
０　Ｑの錠剤を得た。

この錠剤−錠には、化合物２０πｔが含有されており、
成人１日ｌＯ〜２５錠を数回にわけて服用する。

実施例６ ■コーンスターチ　　　　　　８４ｇ ■ステアリン酸マグネシウム　０．５９■カルボキシメ
ヂル セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５９計　　　　　１
００ｆ！ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成型機
にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆粒剤
を得た。

この顆粒剤１９には、化合物１００　Ｍ９か含有されて
おり、成人１日２〜５ｇを数回にわけて服用する。

実施例７ ■結晶セルロース　　　　　　５５９ ■１０％ヒドロキシプロピル が含有されており、成人夏日ｌＯ〜２５カプセルを数回
にわけて服用する。

実施例９ セルロースエタノール溶液　３５９ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねつ和した
。押し出し造粒機に上り造粒後、乾燥し、篩別して顆粒
剤を得た。

この顆粒剤ＮＦには、化合物１００　ｍｔｉが含有され
ており、成人１日２〜５９を数回にわけて服用する。

実施例８ ■大豆油　　　　　　　　　　　　５９■注射用蒸留水
　　　　　　　８９．５ｇ■大豆リン脂質　　　　　　
　　２．５ｇ■グリセリン　　　　　　　　　　２９■
実施例１で得た化合物　　　　　１９計　　　　　　　
１００９ 上記の処方に従って■を■および■に溶解し、これに■
と■の溶液を加えて乳化し、注射剤を得た。

■コーンスターチ　　　　　８９．５９■軽質無水ケイ
酸　　　　　　０．５ｇ■実施例２で得た化合物　　　
１０ｇ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００１１
ｇを２号カプセルに充填した。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは■ＯＨまたは■ＯＨを示す。） で表されるサイコサポニン。
2. （２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは■ＯＨまたは■ＯＨを示す。） で表されるサイコサポニンを有効成分とするＮａ＾＋−
   Ｋ＾＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤。