JPH02276968A - Ｆ（ａｂ′）↓２断片を使う免疫検定 - Google Patents
Ｆ（ａｂ′）↓２断片を使う免疫検定Info
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/44—Antibodies bound to carriers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/563—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving antibody fragments
-
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- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
- G01N33/6857—Antibody fragments
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は免疫検定に関するものでありそしてさらに詳し
くいえば、免疫グロブリンの結合の性質による免疫検定
法およびこの検定に有用な試薬に関するものである。
くいえば、免疫グロブリンの結合の性質による免疫検定
法およびこの検定に有用な試薬に関するものである。
免疫グロブリン抗体が対応する特定の抗原またはハプテ
ン（Ａｇ＞に結合すること、そしてこれが多くの免疫検
定法に利用されていることはよく知られている。例えば
人間の血清はその中に存在するある特定のＡｇによって
対応する抗体を使って、例えば選択的結合法あるいはラ
テックス′ａ隼法によって検定される。これらの方法お
よび他の方法は当業者には公知である。
ン（Ａｇ＞に結合すること、そしてこれが多くの免疫検
定法に利用されていることはよく知られている。例えば
人間の血清はその中に存在するある特定のＡｇによって
対応する抗体を使って、例えば選択的結合法あるいはラ
テックス′ａ隼法によって検定される。これらの方法お
よび他の方法は当業者には公知である。
このような検定方法において起こり得る問題の１つけ、
検定する血清中の他のタンパク質による干渉である。特
に人間の血清にはりウマトイド因子（ＲＦ）およびＣｌ
ｑ（補体成分）が含まれていて、これらの物質も免疫グ
ロブリン抗体と結合する。さらに、人間の血清中のＲＦ
と０１９の量は広範囲に変化するので、血清の検定の前
に内生のＲＦと０１ｑを不活性にするかまたは収り除く
処理が通常必要である。これをしなければ検定の結果、
特に定量の結果は著しく誤っているであろう。
検定する血清中の他のタンパク質による干渉である。特
に人間の血清にはりウマトイド因子（ＲＦ）およびＣｌ
ｑ（補体成分）が含まれていて、これらの物質も免疫グ
ロブリン抗体と結合する。さらに、人間の血清中のＲＦ
と０１９の量は広範囲に変化するので、血清の検定の前
に内生のＲＦと０１ｑを不活性にするかまたは収り除く
処理が通常必要である。これをしなければ検定の結果、
特に定量の結果は著しく誤っているであろう。
本発明者は、ＲＦまたはＣｌｑ９が存在してもその干渉
を受けずに行なえる、免疫グロブリンの抗原（本明細書
においてはハプテンを含むものとする）に対する結合性
を利用した免疫検定法を提供する。
を受けずに行なえる、免疫グロブリンの抗原（本明細書
においてはハプテンを含むものとする）に対する結合性
を利用した免疫検定法を提供する。
特に、本発明による方法は免疫グロブリン全体よりもむ
しろ免疫グロブリンのＦ（ａｂｉ２断片を使う免疫検定
法である。例えば免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦ （
ａｂ’ ＞２断片は抗原と特別な結合をする性質を持っ
ているがＲＦまたはＣｌｑとは結合しない。（免疫グロ
ブリンのＦ （ｃ）断片は免疫グロブリンのＲＦまなは
Ｃｌｑとの結合反応の原因となるが、特定な抗原との結
合反応の原因とはならない。）本発明方法によれば、Ｒ
ＦまたはＣｌｑとの結合性なしに特定のＡｇに対する免
疫グロブリンの結合性を保つことができる。
しろ免疫グロブリンのＦ（ａｂｉ２断片を使う免疫検定
法である。例えば免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦ （
ａｂ’ ＞２断片は抗原と特別な結合をする性質を持っ
ているがＲＦまたはＣｌｑとは結合しない。（免疫グロ
ブリンのＦ （ｃ）断片は免疫グロブリンのＲＦまなは
Ｃｌｑとの結合反応の原因となるが、特定な抗原との結
合反応の原因とはならない。）本発明方法によれば、Ｒ
ＦまたはＣｌｑとの結合性なしに特定のＡｇに対する免
疫グロブリンの結合性を保つことができる。
本発明は流体中のある抗原とこの抗原に対して特別な免
疫グロブリンのＦ （ａｂ’ ＞２断片との、免疫グロ
ブリン全体およびそのＦ （ｃ）断片の実質的な不存在
下での反応から成る免疫検定法を提供する。
疫グロブリンのＦ （ａｂ’ ＞２断片との、免疫グロ
ブリン全体およびそのＦ （ｃ）断片の実質的な不存在
下での反応から成る免疫検定法を提供する。
本発明はまた
（ａ）流体の試料をある抗原に対して特異性を示す免疫
グロブリンのＦ（ａｂ′）２断片と混合し、免疫グロブ
リン全体およびそのＦ （ｃ）断片を実質的に含まない
反応混合物をつくり、 （ｂ）Ｆ （ａｂ’ ）２断片と存在する抗原とが反応
するように、反応混合物をインキュベートし、（ｃ）反
応混合物中に起こった前記反応の程度（もしあれば）を
測定し、それによって前記試料中の前記抗原の存在また
は量を検定する、 各工程から成る、流体中の抗原の存在または量の分析方
法を提供するものである。
グロブリンのＦ（ａｂ′）２断片と混合し、免疫グロブ
リン全体およびそのＦ （ｃ）断片を実質的に含まない
反応混合物をつくり、 （ｂ）Ｆ （ａｂ’ ）２断片と存在する抗原とが反応
するように、反応混合物をインキュベートし、（ｃ）反
応混合物中に起こった前記反応の程度（もしあれば）を
測定し、それによって前記試料中の前記抗原の存在また
は量を検定する、 各工程から成る、流体中の抗原の存在または量の分析方
法を提供するものである。
ＩｇＧのような免疫グロブリンは当業者に公知の方法、
例えばペプシンを使った酵素消化によって成分のＦ（ａ
ｂ’）２およびＦ（ｃ）断片に分裂できる。そしてＦ（
ａｂ′）２断片をＦ （ｃ）断片と分離し、本発明の方
法に使用する。Ｆ（ａｂ′）２の調製の例を次に示す。
例えばペプシンを使った酵素消化によって成分のＦ（ａ
ｂ’）２およびＦ（ｃ）断片に分裂できる。そしてＦ（
ａｂ′）２断片をＦ （ｃ）断片と分離し、本発明の方
法に使用する。Ｆ（ａｂ′）２の調製の例を次に示す。
全Ｉｇ０１００■当りペプシン２■の割合でＩｇＧとペ
プシンとをｐＨ４，５の０．１Ｍ酢酸緩衝液中で混合す
る。この混合物を３７°Ｃで２４時間インキュベートす
る。形成したＦ（ａｂ”）２をウルトロゲル（ｔＪｌｔ
ｒｏｇｅｌ ） Ａ ＣＡ４．４カラム上で分離すると
Ｆ （ａｂ’ ）２の理論値の８０〜９０％の収量を得
る。
プシンとをｐＨ４，５の０．１Ｍ酢酸緩衝液中で混合す
る。この混合物を３７°Ｃで２４時間インキュベートす
る。形成したＦ（ａｂ”）２をウルトロゲル（ｔＪｌｔ
ｒｏｇｅｌ ） Ａ ＣＡ４．４カラム上で分離すると
Ｆ （ａｂ’ ）２の理論値の８０〜９０％の収量を得
る。
本発明によれば、ある抗原と免疫グロブリンとの間の特
定な反応は起こすがＲＦまたはＣｌｑと免疫グロブリン
との間の反応は要求されない免疫検定法において、全免
疫グロブリンの代りにＦ（ａｂ’）２断片を広く使うこ
とができる。（免疫グロブリンと反応する試薬としてＲ
ＦまたはＣｌｑを加える検定法が知られている。このよ
うな検定においてはＦ （ａｂ’ ）２断片を単純に全
免疫グロブリンの代りに使うことはできない。）Ｆ（ａ
ｂｉ２Ｕｒ片は例えばある競争結合検定において溶液状
で使える。このような検定および他の検定において放射
活性原子または他の標識を使うのは有利であり、Ｆ（ａ
ｂｉ２断片はそのような標識を持つことができる。（こ
の標識を使って抗原と断片との反応の程度を決定する。
定な反応は起こすがＲＦまたはＣｌｑと免疫グロブリン
との間の反応は要求されない免疫検定法において、全免
疫グロブリンの代りにＦ（ａｂ’）２断片を広く使うこ
とができる。（免疫グロブリンと反応する試薬としてＲ
ＦまたはＣｌｑを加える検定法が知られている。このよ
うな検定においてはＦ （ａｂ’ ）２断片を単純に全
免疫グロブリンの代りに使うことはできない。）Ｆ（ａ
ｂｉ２Ｕｒ片は例えばある競争結合検定において溶液状
で使える。このような検定および他の検定において放射
活性原子または他の標識を使うのは有利であり、Ｆ（ａ
ｂｉ２断片はそのような標識を持つことができる。（こ
の標識を使って抗原と断片との反応の程度を決定する。
）本発明の競争結合検定の１つの例においては、抗原含
有流体を標識化したＦ（ａｂ′）２断片および標識化し
ないＦ（ａｂ′）２断片と混合するとこれらの断片と抗
原との間で競争結合が起こり、ここで標識化した断片の
抗原と反応した量あるいは混合物中に未反応で残つてい
る量を検定し、これによって流体中の抗原の存在および
（または）量を決定する。
有流体を標識化したＦ（ａｂ′）２断片および標識化し
ないＦ（ａｂ′）２断片と混合するとこれらの断片と抗
原との間で競争結合が起こり、ここで標識化した断片の
抗原と反応した量あるいは混合物中に未反応で残つてい
る量を検定し、これによって流体中の抗原の存在および
（または）量を決定する。
Ｆ （ａｂ’ ＞２断片は、不溶性の状態、つまり水に
不溶性の基質に結合（この場合、吸収および共有結合の
両方を含む）した状態で使う。基質の性質は幅広く異な
っていることができる。例えばシート状または中空のチ
ューブ状または粒子状であることができる。粒子状物質
の好ましい形は磁気的に引き付けられるものであり、検
定する抗原と断片との反応の後に磁場によって粒子状物
質を分離できるものである。この型の検定は本発明者ら
、の特開昭５２−１４１６９７号に記載されているので
詳細にはそれを参照されたい。
不溶性の基質に結合（この場合、吸収および共有結合の
両方を含む）した状態で使う。基質の性質は幅広く異な
っていることができる。例えばシート状または中空のチ
ューブ状または粒子状であることができる。粒子状物質
の好ましい形は磁気的に引き付けられるものであり、検
定する抗原と断片との反応の後に磁場によって粒子状物
質を分離できるものである。この型の検定は本発明者ら
、の特開昭５２−１４１６９７号に記載されているので
詳細にはそれを参照されたい。
他の不溶性Ｆ （ａｂ’ ）２断片の好ましい形はラテ
ックス懸濁体であり、この懸濁体は抗体のラテックス凝
集試験において、全免疫グロブリンの代りに使うことが
できる。このような試験において、抗原（例えば人間の
血清）の試験をする流体の試料をその抗原に対する抗体
で覆われたラテックス粒子と混合する。本発明の方法に
よれば、被覆する免疫グロブリン抗体全体の代りにＦ（
ａｂｉ２断片を使う。
ックス懸濁体であり、この懸濁体は抗体のラテックス凝
集試験において、全免疫グロブリンの代りに使うことが
できる。このような試験において、抗原（例えば人間の
血清）の試験をする流体の試料をその抗原に対する抗体
で覆われたラテックス粒子と混合する。本発明の方法に
よれば、被覆する免疫グロブリン抗体全体の代りにＦ（
ａｂｉ２断片を使う。
被覆物と抗原との特定の結合はラテックス粒子の凝集を
起こす。定性的結果のためには、凝集の程度は視覚的に
観察できる。また計数好ましくは凝集したもののまたは
さらに好ましくは未凝集の粒子の自動的計数によって定
量することができる。
起こす。定性的結果のためには、凝集の程度は視覚的に
観察できる。また計数好ましくは凝集したもののまたは
さらに好ましくは未凝集の粒子の自動的計数によって定
量することができる。
他の見地では、本発明は流体中のＡｇの定量分析の方法
も含んでいる。ここで検定する流体の試料をこれに結合
するＦ（ａｂｉ２断片をもつラテックス粒子と混合して
反応混合物をつくり、この抗原とＦ（ａｂ’）２断片と
の反応によってラテックスの凝集を起こし、そこで凝集
の程度（もしあれば）を混合物の観察により決定し、流
体試料中の抗原の存在または量を決定する。
も含んでいる。ここで検定する流体の試料をこれに結合
するＦ（ａｂｉ２断片をもつラテックス粒子と混合して
反応混合物をつくり、この抗原とＦ（ａｂ’）２断片と
の反応によってラテックスの凝集を起こし、そこで凝集
の程度（もしあれば）を混合物の観察により決定し、流
体試料中の抗原の存在または量を決定する。
Ｆ （ａｂ’ ）２断片を使ったラテックス凝集試験に
おいては、凝集を抑制するので少しのジチオトレイトー
ル（ＤＴＴ＞もあってはいけない。ＤＴＴは過酸化水素
による酸化によって不活性にすることができる。
おいては、凝集を抑制するので少しのジチオトレイトー
ル（ＤＴＴ＞もあってはいけない。ＤＴＴは過酸化水素
による酸化によって不活性にすることができる。
本発明による検定方法は、連続流動法（当事者には知ら
れている）によるのが適切であり１、反応混合物の個々
の部分は導管に沿って通過し、不活性部分（例えば空気
）によって分離され、所望によっては洗浄液体部分によ
って分離される。これは、米国特許番号第２７９７１４
９号明細書に記載されているので詳細にはそれを参照さ
れたい。
れている）によるのが適切であり１、反応混合物の個々
の部分は導管に沿って通過し、不活性部分（例えば空気
）によって分離され、所望によっては洗浄液体部分によ
って分離される。これは、米国特許番号第２７９７１４
９号明細書に記載されているので詳細にはそれを参照さ
れたい。
不活性化されたＦ（ａｂ′）２断片は色々な方法で調製
できる。例えば適切な基質上に断片を吸収させる。また
は、免疫グロブリン（例えばＩｇＧ）全体を基質上に共
有結合させ、そしてＦ（ａｂ”＞２断片を基質上に共有
結合で残しておいてＦ （ｃ）断片を分裂してしまう。
できる。例えば適切な基質上に断片を吸収させる。また
は、免疫グロブリン（例えばＩｇＧ）全体を基質上に共
有結合させ、そしてＦ（ａｂ”＞２断片を基質上に共有
結合で残しておいてＦ （ｃ）断片を分裂してしまう。
こうして吸収性の被覆をもつラテックスとＦ （ａｂ’
＞２断片とをＭ街液中で混合するか、またはラテック
スに免疫グロブリン抗体全体を結合しＦ（ａｂｉ２断片
はラテックスに結合させたままＦ （ｃ）断片を分裂し
て離しこれを混合物中から除去する方法によってＦ（ａ
ｂ′）２で被覆したラテックスを調製できる。この方法
の１つの例においては、本発明者らの特開昭５２−１１
９２９３号明細書に記載された方法によって免疫グロブ
リンをラテックスに結合する。さらに詳細には前記明細
書を参照のこと。簡単には、ラテックスに強く固着しタ
ンパク分解に対してかなり抵抗力のあるタンパク質でま
ずラテックスを被覆する。
＞２断片とをＭ街液中で混合するか、またはラテック
スに免疫グロブリン抗体全体を結合しＦ（ａｂｉ２断片
はラテックスに結合させたままＦ （ｃ）断片を分裂し
て離しこれを混合物中から除去する方法によってＦ（ａ
ｂ′）２で被覆したラテックスを調製できる。この方法
の１つの例においては、本発明者らの特開昭５２−１１
９２９３号明細書に記載された方法によって免疫グロブ
リンをラテックスに結合する。さらに詳細には前記明細
書を参照のこと。簡単には、ラテックスに強く固着しタ
ンパク分解に対してかなり抵抗力のあるタンパク質でま
ずラテックスを被覆する。
このようなタンパク質は例えばラクトフェリンである。
そして免疫グロブリン抗体を結合試薬として例えばＮ−
ε−クロルアセチルリジン（ＮＣＡ）のＬｅ（ＪＣｈＳ
無水物を使ってラクトフェリンに共有結合させる。ラテ
ックス−ラクトフェリン−ＮＣＡ−抗体を例えば次に示
す条件下で消化する。１）Ｈ３，２の０．２Ｍ酢酸緩衝
液、ペプシン／免疫グロブリン比＝１／１０．０．５％
ラテックス懸濁液、３７℃で６０分のインキュベート。
ε−クロルアセチルリジン（ＮＣＡ）のＬｅ（ＪＣｈＳ
無水物を使ってラクトフェリンに共有結合させる。ラテ
ックス−ラクトフェリン−ＮＣＡ−抗体を例えば次に示
す条件下で消化する。１）Ｈ３，２の０．２Ｍ酢酸緩衝
液、ペプシン／免疫グロブリン比＝１／１０．０．５％
ラテックス懸濁液、３７℃で６０分のインキュベート。
このようにして免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）２断片を
担持するラテックス粒子が得られる。
担持するラテックス粒子が得られる。
この方法および吸収法によって得られたラテックス粒子
または他のＦ（ａｂ’）２担持基質はＲＦに富む血清中
で起こるようにはＲＦによって凝集することはない。こ
のラテックス粒子はＡｇのラテ・ツクス凝集試験におい
てＲＦまたはＣｌｑが存在していても良好に使用できる
。
または他のＦ（ａｂ’）２担持基質はＲＦに富む血清中
で起こるようにはＲＦによって凝集することはない。こ
のラテックス粒子はＡｇのラテ・ツクス凝集試験におい
てＲＦまたはＣｌｑが存在していても良好に使用できる
。
本発明はまた、免疫グロブリン全体およびそのＦ （ｃ
）断片を実質的に含まず、免疫グロブリンのＦ（ａｂ’
）２断片の結合した粒子状物質が微細に分散している懸
濁液から成る免疫検定に使う試薬を提供する。このよう
な試薬においては、Ｆ（ａｂ′）２断片は例えば共有結
合または吸収によって粒子上に結合している。その粒子
は磁気的に引き付けられる物質から成り、断片は同定標
識をもっている。粒子は都合のよい大きさでよいが通常
約１〜２０μである。特に連続液法において使用する場
合は（これに限らないが）、反応混合物中の粒子の不適
当な浮遊または沈殿を避けるために、粒子の比重は約１
．４〜３．２であるのがよい。
）断片を実質的に含まず、免疫グロブリンのＦ（ａｂ’
）２断片の結合した粒子状物質が微細に分散している懸
濁液から成る免疫検定に使う試薬を提供する。このよう
な試薬においては、Ｆ（ａｂ′）２断片は例えば共有結
合または吸収によって粒子上に結合している。その粒子
は磁気的に引き付けられる物質から成り、断片は同定標
識をもっている。粒子は都合のよい大きさでよいが通常
約１〜２０μである。特に連続液法において使用する場
合は（これに限らないが）、反応混合物中の粒子の不適
当な浮遊または沈殿を避けるために、粒子の比重は約１
．４〜３．２であるのがよい。
本発明のよりよい理解のために、次に説明として実施例
を挙げる。
を挙げる。
例１
吸収によるＦ （ａｂ’ ＞２ラテックス粒子の調製ラ
テックス粒子（Ｄｏｗ、直径０．７９４ミクロン、Ｓ、
Ｄ、０．４４ミクロン、Ｎα４１９４３、セルバファイ
ンバイオケミ力社、Ｄ−６９００ハイデルベルグ１．ド
イツ）の１０％懸濁液をｐＨ９，１の０．０２Ｍグリシ
ン１０．０３５Ｍ ＮａＣ，ｕ緩衝液で２０倍に希釈
し、この緩衝液で１度洗浄する。
テックス粒子（Ｄｏｗ、直径０．７９４ミクロン、Ｓ、
Ｄ、０．４４ミクロン、Ｎα４１９４３、セルバファイ
ンバイオケミ力社、Ｄ−６９００ハイデルベルグ１．ド
イツ）の１０％懸濁液をｐＨ９，１の０．０２Ｍグリシ
ン１０．０３５Ｍ ＮａＣ，ｕ緩衝液で２０倍に希釈
し、この緩衝液で１度洗浄する。
１ｍｌ当り２〜３■のＦ（ａｂｉ２溶液を前記のように
調製された懸濁液の１／１０体績加え、室温で１０〜１
５分間インキュベートした後、前記緩衝液中の人間の血
清アルブミン（Ｈ８Ａ）の１０％溶液１／１０体積を加
えタンパク質の飽和を確かめる。
調製された懸濁液の１／１０体績加え、室温で１０〜１
５分間インキュベートした後、前記緩衝液中の人間の血
清アルブミン（Ｈ８Ａ）の１０％溶液１／１０体積を加
えタンパク質の飽和を確かめる。
さらに２０〜３０分間インキュベートした後、最初の緩
衝液で２度洗浄し、次にＨ３Ａを１％含む０．１０Ｍグ
リシン１０．１７Ｍ ＮａＣ，Ｑ Ｆｔ、街液１）ｔ
１９．１の最初の体積量中に再び懸濁し、０．５％つま
り初濃度に比べ２０倍に希釈されているラテックス懸濁
液をつくる。
衝液で２度洗浄し、次にＨ３Ａを１％含む０．１０Ｍグ
リシン１０．１７Ｍ ＮａＣ，Ｑ Ｆｔ、街液１）ｔ
１９．１の最初の体積量中に再び懸濁し、０．５％つま
り初濃度に比べ２０倍に希釈されているラテックス懸濁
液をつくる。
抗血清
ＩｇＥの抗血清をフロイドの完全補助薬を使ってラビッ
ト中て・生じさせ、Ｈ当り”Ｔｗ ｅ ｅ ｎ ２０
”を３滴含むグリシン緩衝液で１０倍に希釈し、使用前
に０，２２ミクロンミリボー（ＧＷＳＰ０６７００）フ
ィルターを通してろ過する。
ト中て・生じさせ、Ｈ当り”Ｔｗ ｅ ｅ ｎ ２０
”を３滴含むグリシン緩衝液で１０倍に希釈し、使用前
に０，２２ミクロンミリボー（ＧＷＳＰ０６７００）フ
ィルターを通してろ過する。
自動的に操作される検定
患者の血清を１秒間に０．１ｍｌの割合で、ぜん動ポン
プ、多岐管、粒子計数器および記録計から成る連続流動
系に吸引する。血清をグリシンで緩衝されたラテックス
粒子１．０ｍｌと混合し、インキュベトコイルを１０分
間通過する。この溶液を次にセル計数器に流し、ここで
未凝集の粒子を数え、凝集した粒子は電気的にふるい落
される。血清中のＩｇＥ濃度の減少は特にＩｇＥの６〜
１００ＩＵ（国際単位）の範囲では直接比例する。１３
人の患者の試料は、中間範囲で２％の係数偏差をくり返
し示し、放射性免疫検定試験との比較の相関係数は０．
９５を示した。
プ、多岐管、粒子計数器および記録計から成る連続流動
系に吸引する。血清をグリシンで緩衝されたラテックス
粒子１．０ｍｌと混合し、インキュベトコイルを１０分
間通過する。この溶液を次にセル計数器に流し、ここで
未凝集の粒子を数え、凝集した粒子は電気的にふるい落
される。血清中のＩｇＥ濃度の減少は特にＩｇＥの６〜
１００ＩＵ（国際単位）の範囲では直接比例する。１３
人の患者の試料は、中間範囲で２％の係数偏差をくり返
し示し、放射性免疫検定試験との比較の相関係数は０．
９５を示した。
例２
ラテックスに共有結合しているＦ（ａｂ’）２の調製
ジオキサン１００μρ中に溶解したＮ−ε−クロルアセ
チルリジン−Ｎ−力ルボキシ無水物（ＮＣＡ）１２■を
ｐＨ７，２のリン酸緩衝された塩類（ＰＢＳ）１ｍｌ中
の鉄飽和ラクトフェリン５０■に加える。暗所で４℃で
２４時間インキュベートした後、生成物は保存のなめに
凍結乾燥する。ポリスチレンラテックス粒子（直径０．
８μ、１０％懸濁液）を、ＮＣＡ−ラクトフェリン５０
０ｔｔｇとＰＢＳｏ、４ｍｌと１０％ラテックス５０μ
ｇとを混合することによって被覆する。室温で４５分間
インキュベートした後、ｐＨ９，６の０．２Ｍ炭酸緩衝
液１ｍｌで２度洗浄する。
チルリジン−Ｎ−力ルボキシ無水物（ＮＣＡ）１２■を
ｐＨ７，２のリン酸緩衝された塩類（ＰＢＳ）１ｍｌ中
の鉄飽和ラクトフェリン５０■に加える。暗所で４℃で
２４時間インキュベートした後、生成物は保存のなめに
凍結乾燥する。ポリスチレンラテックス粒子（直径０．
８μ、１０％懸濁液）を、ＮＣＡ−ラクトフェリン５０
０ｔｔｇとＰＢＳｏ、４ｍｌと１０％ラテックス５０μ
ｇとを混合することによって被覆する。室温で４５分間
インキュベートした後、ｐＨ９，６の０．２Ｍ炭酸緩衝
液１ｍｌで２度洗浄する。
アルカリ性のｐＨにおけるクロルアセチル基の加水分解
を避ける７≧めに、ただちに還元しなＩｇＧＡｂを加え
る。ＩｇＧはラビットの抗馬牌臓フェリチンからリン酸
アンモニウム沈殿、続いてＤＥＡＥ−セルロースクロマ
トグラフィーにより得られる。
を避ける７≧めに、ただちに還元しなＩｇＧＡｂを加え
る。ＩｇＧはラビットの抗馬牌臓フェリチンからリン酸
アンモニウム沈殿、続いてＤＥＡＥ−セルロースクロマ
トグラフィーにより得られる。
Claims (14)
- （１）（ａ）流体の試料をある抗原に対して特異性を示
す免疫グロブリンのＦ（ａｂ′）＿２断片と混合し、免
疫グロブリン全体およびそのＦ（ｃ）断片を実質的に含
まない反応混合物をつくり、 （ｂ）Ｆ（ａｂ′）＿２断片とそこに存在する抗原とが
非凝集反応するように、反応混合物をインキュベートし
、 （ｃ）反応混合物中に起きた前記反応の程度（もしあれ
ば）を測定し、それによつて試料中の抗原の存在または
量を検定する、 各工程から成る、流体中の抗原の存在または量の検定方
法。 - （２）Ｆ（ａｂ′）＿２断片が溶液中である前項（１）
に記載の方法。 - （３）Ｆ（ａｂ′）＿２断片の少くとも一部が同定標識
を持ち、そして抗原と前記断片の反応の程度を前記標識
を使って測定する前項（２）に記載の方法。 - （４）抗原含有流体を標識付けしたＦ（ａｂ′）＿２断
片および標識付けしないＦ（ａｂ′）＿２断片と混合し
、これらの断片と抗原の間に競争結合反応を起こし、抗
原と反応したまたは混合物中に未反応で残っている、標
識付けした断片の量を分析し、これによつて流体中の抗
原の存在または量を検定する前項（３）に記載の方法。 - （５）Ｆ（ａｂ′）＿２断片が水に不溶性の基質と結合
したものである前項（１）に記載の方法。 - （６）基質がシート状の形またはチューブの形をしてい
る前項（５）に記載の方法。 - （７）断片が水に不溶性の特定な物質に結合したもので
ある前項（５）に記載の方法。 - （８）磁気吸引可能な水に不溶性の特定の物質に断片が
結合し、抗原と断片との反応後に磁場を使って前記の特
定物質を分離する前項（７）に記載の方法。 - （９）検定する試料が前記抗原以外にＲＦおよびＣｌ＿
ｑを含む前項（１）〜（８）のいずれかに記載の方法。 - （１０）検定する試料が人間の血清である前項（１）〜
（９）のいずれかに記載の方法。 - （１１）連続流動法によつて行う前項（１）〜（１０）
のいずれかに記載の方法。 - （１２）不連続手動法によつて行う前項（１）〜（１０
）のいずれかに記載の方法。 - （１３）免疫グロブリンのＦ（ａｂ′）＿２断片が結合
している特定な物質が微細に分散した懸濁液から成り、
免疫グロブリン全体およびそのＦ（ｃ）断片は実質的に
含まない、免疫検定に使用するための試薬。 - （１４）前記の特定な物質が磁気吸引可能な物質である
前項（１３）に記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB3237/78 | 1978-01-26 | ||
| GB323778 | 1978-01-26 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP730379A Division JPS54119292A (en) | 1978-01-26 | 1979-01-26 | Immunity examination by f*ab**2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02276968A true JPH02276968A (ja) | 1990-11-13 |
| JPH0521186B2 JPH0521186B2 (ja) | 1993-03-23 |
Family
ID=9754542
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP730379A Granted JPS54119292A (en) | 1978-01-26 | 1979-01-26 | Immunity examination by f*ab**2 |
| JP1280006A Granted JPH02276968A (ja) | 1978-01-26 | 1989-10-30 | Ｆ（ａｂ′）↓２断片を使う免疫検定 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP730379A Granted JPS54119292A (en) | 1978-01-26 | 1979-01-26 | Immunity examination by f*ab**2 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4397960A (ja) |
| JP (2) | JPS54119292A (ja) |
| AU (1) | AU524656B2 (ja) |
| BE (1) | BE873673A (ja) |
| CA (1) | CA1118345A (ja) |
| CH (1) | CH639208A5 (ja) |
| DE (1) | DE2902676C2 (ja) |
| FR (1) | FR2415809B1 (ja) |
| GB (1) | GB2013211B (ja) |
| IT (1) | IT1119257B (ja) |
| NL (1) | NL7900586A (ja) |
| SE (1) | SE445393B (ja) |
Families Citing this family (42)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2013211B (en) * | 1978-01-26 | 1982-06-30 | Technicon Instr | Immunoassays using f(ab')2 fragments |
| JPS54139595A (en) * | 1978-04-20 | 1979-10-30 | Mitsubishi Chem Ind | Reagent for detecting antigen |
| US4342566A (en) * | 1980-02-22 | 1982-08-03 | Scripps Clinic & Research Foundation | Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
| JPS56162055A (en) * | 1980-05-19 | 1981-12-12 | Eiken Kagaku Kk | Method for determining immunity using immunoglobulin fragment mixture sensitizing latex particles |
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