JPH02249483A

JPH02249483A - 顆粒球系前駆体細胞のコロニー形成物質

Info

Publication number: JPH02249483A
Application number: JP63227504A
Authority: JP
Inventors: Shuichi Oka; 修一岡; Makiko Sugie; 杉江　牧子; Hideoki Tanaka; 田中　秀興; Noboru Tomizuka; 冨塚　登; Takuji Owa; 応和　卓治
Original assignee: Agency of Industrial Science and Technology; Ube Industries Ltd
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST; Ube Corp
Priority date: 1988-09-13
Filing date: 1988-09-13
Publication date: 1990-10-05
Anticipated expiration: 2010-11-01
Also published as: JPH07100030B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の目的］本発明は、顆粒球系前駆細胞（Ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍ
ｉｎｇｕｎｔｔｓ　ｔｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　、以下、Ｃ
ＦｔＪ−Ｃと略記する。）のコロニー形成物質に関する
ものである。

造血因子であるＣ３Ｆ（コロニー刺激因子）は、マウス
などのｉｎ　ｖｉｖｏの系で、血液幹細胞を顆粒球・単
球系血液細胞へと分化・増殖・成熟させる生体由来の物
質として知られており、また、軟寒天あるいはメチルセ
ルロースなどを用いた１ｎ−ＶｉｔｒＯ培養系でも、血
液幹細胞からＣＦＬＪ−Ｃの分化・増殖を刺激し、顆粒
球・単球系血液細胞のコロニーを形成させる作用のある
物質として知られている。そして、Ｃ３Ｆはその生物作
用の面がら、癌化学療法及び放射線治療等の副作用とし
て現われる顆粒球減少等の治療薬として、また、細菌・
ウィルス等積々の感染症の予防または治療薬として臨床
的に期待されている物質である。

従来のＣ８Ｆの生産方法としては、生体からの分離精製
などが認められるが、本発明者らは単に通常の微生物培
養用培地で微生物を培養することによって、Ｃ３Ｆと同
様にＣＦＵ−Ｃのコロニー形成作用を有する物質を容易
で、かつ大量に得るために、微生物培養ろ液及び菌体中
にＣＦＬＪ−Ｃコロニー形成を指標としてＣＦｕ−ｃコ
ロニー形成物質を探索した結果、放線菌ストレプトベル
ティシリウム・プラストマイセティカム（ｓｔｒｅｐｔ
ｏ−ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｂｆａｓｔｍｙｃｅｔ
ｉｃｕａ＋、ＩＦＯ１２７４７）の培養ろ液及び菌体中
にＣＦＵ−Ｃコロニー形成物質を認め、この物質を単離
・精製し、構造を決定した結果１、テレオシジンである
ことを認め、本発明を完成した。

即ち、本発明は、テレオシジンを有効成分とするＣＦＵ
−Ｃコロニー形成物質に関するものである。従来、本物
質がＣＦＬＪ−Ｃコロニー形成活性を有するという報告
は知られていない。

なお、本物質の理化学的性質は次に示すとおりである。

［１］化合物Ａ１）分子量：（高分解能マススペクトル）実験値ｍ／ｚ
　：　　４３７．３０４２理論値　　：　　４３７．３
０４２（Ｍ、Ｃ２□Ｈ３９Ｎ３０２　）２）分子ｍ　　：　　４３７（ＦＡＢ−８３ｍ／ｚ　：
　４３８（Ｈ＋Ｈ）　　＞３）分子式　”　　Ｃ２７Ｈ
３９Ｎ３　Ｃ２４）融点　：　　７７−８２℃ ５）溶解性　：　ジメチルスルホキシド、クロロホルム
、メタノールに易溶６）定色反応：　エーリツヒ反応が陽性７）紫外吸収ス
ペクトル：Ｈｅ’ｌ＋ λＨａｘ　　　　ｎ１１１（ε）　３０１（８７００）
　、２３１（２５６００）８）赤外吸収スペクトルニジＨａＸ　ＫＢ’　ｃｍ’ ３４４０．２９３０．２Ｂ７０，１６５０，１５９０゜
１５５０、１５１０．１４５０．１４１５．１３Ｂ０゜
１３００．１２４０，１０４０．　９２０．　８００９
）旋光度　：［α］。−−１１３，０°　（０，５，Ｅ
ｔＯＨ）［２］化合物Ｂ１）分子ｍ　：　（高分解能マススペクトル）実験値ｍ
／ｚ　：　　４５１．３１８１理論値　　：　４５１．
３１９９（Ｍ　、Ｃ２８Ｈ４１Ｎ３０２）２）分子１　　：　　４５１（ＦＡＢ−８３ｍ／ｚ　：
　４５２（Ｈ＋旧　）３）分子式　”　　Ｃ２１３Ｈ４
１Ｎ３０２４）融点：　１２３−１２９℃ ５）溶解性　：　ジメチルスルホキシド、クロロホルム
、メタノールに易溶６）定色反応：　エーリツヒ反応が陽性７）紫外吸収ス
ペクトル：ｅＯＨ λＨａｘ　　　　ｎｍ（ε）　２８７（８１４０）　、
２３３（２６８００）８）赤外吸収スペクトルニジＨａｘＫＢｒＣ［ｌｌ−１３４４０、２９４０，２８７０，１６５０，１６００゜
１５５０、１５１０．１４５０．１４１０．１３７０゜
１０５５、　９２０９）旋光度　：［α］　、　＝　−１６４，５°　（１
，０，ＥｔＯＨ）以上の性質により、化合物Ａはテレオ
シジン八−１に、また化合物ＢはテレオシジンＢ−４に
それぞれ一致することが確認された。

（参考文献、［１］　５ｃｉｅｎｃｅ、２０４．１９３　（１９７９
）［Ｉｔ　］　Ｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕ１１．、３
２．４２３３　（１９８４）［発明の構成］本発明のテレオシジンを有効成分とするＣＦＵ−Ｃコロ
ニー形成物質は、ストレプトミセス属菌、ストレプトベ
ルティシリウム属菌などの放線菌、例えば、ストレプト
ベルティシリウム・プラストマイセテイカム株（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｂｌａｓｔ−ｍｙ
ｃｅｔｉｃｕｍ、ＩＦＯ１２７４７。以下Ｆ−１８６株
と略称する。）、ストレプトベルティシリウム・オリボ
レテイキュリ（５ｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ　ｉｃ　ｉ　ｌ
　Ｉ　ｉｕｍ　ｏｆ　１ｖｏｒｅｔ　１−ｃｕｌｉ）な
どを通常の放線菌培地で培養して、菌体中に産生させ、
通常の分離精製方法により得ることができる。

即ち、本発明における前記の放線菌の培養は、例えば、
炭素源としてはグルコース、シュークロース、マルトー
ス、デキストリン、グリセリン、でんぷん等を、窒素源
としてはペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス
、カゼイン等を用い、更に無機塩としてはＮ　ａ　Ｃ１
、Ｋ２　ＨＰ　０４、ＭＱ３０４　、ＣｕＳＯ４等を用
いた中性液体培地で通気、攪拌することによって行うこ
とができる。

この時、培地のＥ）Ｈは、５〜８、好ましくは６〜７付
近がよい。また、培養温度は、通常２０〜３５℃、好ま
しくは３０℃がよい。

該菌体からのテレオシジンの採取は、アンバーライトＸ
ＡＤ−２を用いた吸・脱着、メタノール抽出、アセトン
抽出、酢酸エチル抽出等の操作、Ｃ−８逆相カラムクロ
マトグラフイー（炭素鎖８の直鎮をシリカゲルに結合さ
せた疎水性樹脂）、Ｃ−１８逆相カラムクロマトグラフ
イー（炭素鎖１８の直鎖をシリカゲルに結合させた疎水
性樹脂）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を用いた操作に
よって行うことができる。

本発明のテレオシジンを有効成分とするＣＦＵ−Ｃのコ
ロニー形成物質は、例えば、培養菌体にアセトンを加え
て４℃、１６時間静置した後、菌体除去溶液を得、この
溶液を濃縮して水を加えた後、酢酸エチルで抽出を行う
と、本物質は酢酸エチル層に移行する。この抽出液を減
圧濃縮した後、トルエンに溶解し、トルエンで平衡化し
たシリカゲルカラムクロマトを行い、２０％アセトン／
トルエンで溶出する。活性画分を濃縮した後Ｃ−８逆相
カラムクロマト（メルク社製のＬｉＣｈｒＯＤｒｅｐＲ
Ｐ−８使用）にかけ、６５％アセトニトリル／水で溶出
を行うと、それぞれ化合物Ａ（テレオシジンＡ−１）及
び化合物Ｂ（テレオシジンＢ−４）が順次溶出される。

本物質を減圧乾固すると、白色の単一標品を得ることが
できる。

以下、本発明を参考例及び実施例によって具体的に示す
。なお、これらの実施例は、本発明を例示するためのも
のであ２て、本発明の範囲を限定するものではない。

参考例１グルコース１．５％、ペプトン０．５％、肉エキス０．
５％、酵母エキス０．５％、ＮａＣ１）０．５％を含む
ｐＨ７，４の液体培地１００ｄを５００ｄの坂ロフラス
コに分注し、１２０℃、２０分間滅菌した。この培地に
放線菌Ｆ−１８６株の斜面培地より一白菌耳量を接種し
、３０℃、３日間往復振とう培養を行った。この培養液
と同組成の培地２ＯＮを３０ｊ！容ジャーファーメンタ
−に仕込み、３０℃、１５０回転／分、通気■毎分１０
ｊ！で４８時間培養を行った。培養終了後、７０００回
転／回転速続遠心分離を行うことによって菌体を採取し
、約８００ｇの菌体を得た。

このようにして得られた培養菌体（４００ｇ＞にアセト
ン１１を加えて４℃、１６時間静置した俊、更に１Ｊ２
で２回抽出した。ろ紙で国体を除去した後、この濾液を
濃縮し、５０％酢酸エチル／水混液１１を加えて抽出す
る操作を反復することによって得られた酢酸エチル層の
液を濃縮した後、トルエン−アセトン（９：１）溶液に
溶解し、トルエンで平衡化したシリカゲルカラムクロマ
ト（１、８ｃｍＸ　２５ｃｒｎ’）を行い５０％アセト
ン／トルエンで溶出した。活性画分を減圧濃縮後再びト
ルエンに溶解し、トルエンで平衡化したシリカゲルカラ
ムクロマト（４，６ｃｍ×３０ｃｍ＞を行い２０％アセ
トン／トルエンで溶出した。活性画分を濃縮した後、Ｃ
−８逆相カラムクロマト（２，５ｃ！！ｔｘ３１ｃｍ＞
にかけ、６５％アセトニトリル／水で溶出を行うと、そ
れぞれ化合物Ａ（テレオシジンＡ−１）及び化合物Ｂ（
テレオシジンＢ−４）が順次溶出された。本物質を減圧
乾固すると、それぞれ２８Ｊｆｆｇ（テレオシジンＡ−
１）及び３３Ｉｒｔｇ（テレオシジンＢ−４）の白色単
一標品を得ることができた。

実施例１本物質のＣＦＵ−Ｃコロニー形成活性の測定は、以下に
示す方法により行った。

Ｉ６Ｒマウス骨゛髄細胞（１Ｘ　１０５ｃｅｌ　Ｉｓ／
ｄｉｓｈ）に牛胎児血清（３０％）、ウシ血清アルブミ
ン（１％）、２−メルカプトエタノール（ＩＸｌｏ−’
Ｈ）及び被験化合物を添加し、０．８％メチルセルロー
ス中、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で７日間培養し、５
０個以上からなる細胞集団を１コロニー数として算定し
た。

表１に示す通り、被験化合物の濃度を種々変えて測定を
行なった結果、本物質は強いＣＦＵ−Ｃ；コロニー形成
活性を持つことが認められた。

表　　　１化合物　　　　　　濃度（、Ｍ）ＣＦＵ−（コ／ｄｉｓ
ｈ）テレオシジンＡ−１１ＸＩＯ−５３２゛−６１Ｘ１０　　　　　３Ｂ１Ｘ１０　　　　　１７１Ｘ’ｌ０−８　　　６１Ｘ１０’　　　　　０テレオシジンＢ−４１Ｘ１０”　　　　４０１Ｘ１０　
　　　３６ ’１Ｘ１０　　　　２０１Ｘ１０−８　　１１Ｘ１０”９　　５実施例２ＩＣＲマウス（６退会）骨髄より骨髄細胞（１ｘ　１０
５ｃｃｌｌｓ／ｄｉｓｈ　）　ヲ採取し、牛胎児血清（
３０％）、ウシ血清アルブミン（１％）、２−メルカプ
トエタノール（１ｘ１０　　Ｍ）、テレオシジンＡ−１
（１Ｘ１０”６Ｍ＞　、テレオシジンＢ−４（Ｉ　Ｘ　
１０”６Ｍ）　ｔタハｃｓ　Ｆ−ＣＩＩＵＧＡＩ　（中
外製薬製）の被験物質を添加し、０．８％メチルセルロ
ース中、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で７日間培養し、
コロニー数を算定した。その結果を表２に示す。

表　　　２化合物　　　　　　濃度（Ｍ）ＣＦｔｌ−（＋／ｄｉｓｈ）テレオシジント４　　１ＸＩＯ’　　　　３６［発明の
効果］本発明のテレオシジンを有効成分とするコロニー形成物
質は、顆粒球減少等の治療薬、細菌・ウィルス等の感染
症の予防・治療薬としての利用を期待できるものである
。

Claims

【特許請求の範囲】

テレオシジンを有効成分とする顆粒球系前駆細胞のコロ
ニー形成物質