JP3103883B2 - Ｅｂ−１６２物質およびその製造法 - Google Patents
Ｅｂ−１６２物質およびその製造法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は界面活性を有する新
規サーファクチン類縁体ＥＢ−１６２物質およびその製
造法に関する。
規サーファクチン類縁体ＥＢ−１６２物質およびその製
造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】バイオサーファクタントと呼ばれる一群
の生体系界面活性剤は新機能素材であり、その概要、応
用、および最近の研究開発動向について多くの報告があ
る（油化学，４３，３２２（１９９６），フレグランス
ジャーナル，１９９５／４，７３（１９９５），表面，
３５，５１５（１９９７））。これらに示されるように
バイオサーファクタントは糖脂質系、脂肪酸系、リン脂
質系、アシルペプチド系、高分子系に大きく分類されて
おり、それぞれに特徴のある構造を有する物質が知られ
ている。
の生体系界面活性剤は新機能素材であり、その概要、応
用、および最近の研究開発動向について多くの報告があ
る（油化学，４３，３２２（１９９６），フレグランス
ジャーナル，１９９５／４，７３（１９９５），表面，
３５，５１５（１９９７））。これらに示されるように
バイオサーファクタントは糖脂質系、脂肪酸系、リン脂
質系、アシルペプチド系、高分子系に大きく分類されて
おり、それぞれに特徴のある構造を有する物質が知られ
ている。
【０００３】中でも枯草菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓの産生する界面活性能を有するアシルペプチド
系バイオサーファクタントであるサーファクチンは１９
６８年に発見され（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３１，４８８（１９６８）、
武田研究所報告，２８，１４０（１９６９））、抗菌、
溶血、血液凝固反応阻害、蛋白変性阻害および強力な界
面活性などの作用が報告されている。その後、化学構造
の類似したサーファクチン類縁体が見出され（Ａｄｖａ
ｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２
６， ２２９（１９８０）、Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ ａｎ
ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ．，２０４，１（１９
９８））、またサーファクチンのイオノフォア作用、カ
ルシウムイオン等金属イオンの捕捉作用、生体膜へのチ
ャンネル形成作用、抗コレステロール蓄積作用、ｃ−Ａ
ＭＰホスホジエステラーゼに対する作用阻害などが明ら
かにされてきた。このように、サーファクチン類は多彩
な作用のために利用され、また、応用が試みられてい
る。
ｉｌｉｓの産生する界面活性能を有するアシルペプチド
系バイオサーファクタントであるサーファクチンは１９
６８年に発見され（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３１，４８８（１９６８）、
武田研究所報告，２８，１４０（１９６９））、抗菌、
溶血、血液凝固反応阻害、蛋白変性阻害および強力な界
面活性などの作用が報告されている。その後、化学構造
の類似したサーファクチン類縁体が見出され（Ａｄｖａ
ｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２
６， ２２９（１９８０）、Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ ａｎ
ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ．，２０４，１（１９
９８））、またサーファクチンのイオノフォア作用、カ
ルシウムイオン等金属イオンの捕捉作用、生体膜へのチ
ャンネル形成作用、抗コレステロール蓄積作用、ｃ−Ａ
ＭＰホスホジエステラーゼに対する作用阻害などが明ら
かにされてきた。このように、サーファクチン類は多彩
な作用のために利用され、また、応用が試みられてい
る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
従来の界面活性に基づくバイオサーファクタントは未だ
十分に満足できるものではなく、さらに新たなバイオサ
ーファクタントが求められている。
従来の界面活性に基づくバイオサーファクタントは未だ
十分に満足できるものではなく、さらに新たなバイオサ
ーファクタントが求められている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、種
々の微生物の培養物の中から表面張力低下作用を有する
物質（バイオサーファクタント）を探索してきたとこ
ろ、バチルス・ズブチリスに属する微生物がサーファク
チン類縁化合物群を生産しており、その中に新規化合物
ＥＢ−１６２物質が存在することを見出し、本発明を完
成するに至った。
々の微生物の培養物の中から表面張力低下作用を有する
物質（バイオサーファクタント）を探索してきたとこ
ろ、バチルス・ズブチリスに属する微生物がサーファク
チン類縁化合物群を生産しており、その中に新規化合物
ＥＢ−１６２物質が存在することを見出し、本発明を完
成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は下記式（１）で表され
るＥＢ−１６２物質またはその塩の製造法を提供するも
のである。
るＥＢ−１６２物質またはその塩の製造法を提供するも
のである。
【０００７】
【化２】
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明のＥＢ−１６２物質は、例
えばバチルス属に属し、ＥＢ−１６２物質を生産する能
力を有する微生物を培養し、その培養物から採取するこ
とにより製造される。本発明者らの検討によれば、ＥＢ
−１６２物質の製造においては、培養時にエタノールを
含む培地を用いれば、含まない場合に比べて、生産性が
飛躍的に向上することを見出した。従って、本方法にお
いてはエタノールを含む培地を用いるのが好ましい。Ｅ
Ｂ−１６２物質の生産菌としては、バチルス属に属し、
ＥＢ−１６２物質生産能を有すれば特に限定されない
が、バチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６２ （Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＥＢ−１６２）が好まし
い。
えばバチルス属に属し、ＥＢ−１６２物質を生産する能
力を有する微生物を培養し、その培養物から採取するこ
とにより製造される。本発明者らの検討によれば、ＥＢ
−１６２物質の製造においては、培養時にエタノールを
含む培地を用いれば、含まない場合に比べて、生産性が
飛躍的に向上することを見出した。従って、本方法にお
いてはエタノールを含む培地を用いるのが好ましい。Ｅ
Ｂ−１６２物質の生産菌としては、バチルス属に属し、
ＥＢ−１６２物質生産能を有すれば特に限定されない
が、バチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６２ （Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＥＢ−１６２）が好まし
い。
【０００９】バチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６２菌株
（以下、単に「ＥＢ−１６２菌株」ということがある）
は千葉県柏市十余二で採集した土壌試料から分離された
ものであり、以下に示すような菌学的性質を有する。
（以下、単に「ＥＢ−１６２菌株」ということがある）
は千葉県柏市十余二で採集した土壌試料から分離された
ものであり、以下に示すような菌学的性質を有する。
【００１０】ＥＢ−１６２菌株についての形態観察、生
理的性状試験およびＤＮＡのＧＣ含量の測定結果を表１
に示す。
理的性状試験およびＤＮＡのＧＣ含量の測定結果を表１
に示す。
【００１１】
【表１】
【００１２】上記諸性状を有する菌種を各種文献（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２，（１９８
６），Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ（１９７
３）等）により検索すると、本菌株はグラム陽性桿菌
で、耐熱性の胞子を形成するバチルス・ズブチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）と同定された。従
って、本菌株をバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６２
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＥＢ−１６
２）と命名した。このバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１
６２菌株は、通産省工業技術院生命工学工業技術研究所
にＦＥＲＭ Ｐ−１７３１９として平成１１年３月１８
日に寄託した。
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２，（１９８
６），Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ（１９７
３）等）により検索すると、本菌株はグラム陽性桿菌
で、耐熱性の胞子を形成するバチルス・ズブチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）と同定された。従
って、本菌株をバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６２
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＥＢ−１６
２）と命名した。このバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１
６２菌株は、通産省工業技術院生命工学工業技術研究所
にＦＥＲＭ Ｐ−１７３１９として平成１１年３月１８
日に寄託した。
【００１３】ＥＢ−１６２物質生産菌の培養にあたって
は、バチルス属菌が生育する培地を用い、常法に従って
行えばよいが、前記の如くエタノールを含有する培地を
用いるのが生産性の点で好ましい。特に、ＥＢ−１６２
菌株は、エタノールを含有する培地で培養するとエタノ
ールを含有しない培地を用いた場合に比べてＥＢ−１６
２物質を含むサーファクチン類縁体群の生産性が全般的
に向上するので、エタノールを含む培地で培養するのが
好ましい。培地中のエタノール濃度は、特に制限されな
いが、０．０１〜５（ｖ／ｖ）％が好ましい。特に好ま
しい培地としてはエタノール３％（ｖ／ｖ）、グルコー
ス３％、尿素０．１５％、硫安０．１５％、硝酸アンモ
ニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．１５％、
リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫酸マグネ
シウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２水和物
０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、硫酸第
一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和物０．
０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地（ｐＨ
７．０）が挙げられる。
は、バチルス属菌が生育する培地を用い、常法に従って
行えばよいが、前記の如くエタノールを含有する培地を
用いるのが生産性の点で好ましい。特に、ＥＢ−１６２
菌株は、エタノールを含有する培地で培養するとエタノ
ールを含有しない培地を用いた場合に比べてＥＢ−１６
２物質を含むサーファクチン類縁体群の生産性が全般的
に向上するので、エタノールを含む培地で培養するのが
好ましい。培地中のエタノール濃度は、特に制限されな
いが、０．０１〜５（ｖ／ｖ）％が好ましい。特に好ま
しい培地としてはエタノール３％（ｖ／ｖ）、グルコー
ス３％、尿素０．１５％、硫安０．１５％、硝酸アンモ
ニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．１５％、
リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫酸マグネ
シウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２水和物
０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、硫酸第
一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和物０．
０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地（ｐＨ
７．０）が挙げられる。
【００１４】ＥＢ−１６２物質は前記培養によってＥＢ
−１６２物質を培地中に生成蓄積せしめ、その培養上清
から回収することができる。回収はクロマトグラフィー
や限外濾過膜等を用いる常法により行うことができる。
例えば上記ＥＢＳ−３培地にてＥＢ−１６２菌株を３０
℃で７２時間培養し、その培養上清からＥＢ−１６２物
質を回収することができる。回収は培養液を遠心分離ま
たは濾過により菌体を除去した後、濾過液から有効成分
の抽出を行う。すなわち適当な溶剤に対する溶解性およ
び溶解度の差、種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、
２種の液相間における分配の差などを利用する一般の低
分子有機化合物製造に用いられる手段によって、分離・
精製される。これらの方法は必要に応じて単独に用いら
れ、あるいは任意の順序で組み合わせ、また反復し適用
できる。
−１６２物質を培地中に生成蓄積せしめ、その培養上清
から回収することができる。回収はクロマトグラフィー
や限外濾過膜等を用いる常法により行うことができる。
例えば上記ＥＢＳ−３培地にてＥＢ−１６２菌株を３０
℃で７２時間培養し、その培養上清からＥＢ−１６２物
質を回収することができる。回収は培養液を遠心分離ま
たは濾過により菌体を除去した後、濾過液から有効成分
の抽出を行う。すなわち適当な溶剤に対する溶解性およ
び溶解度の差、種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、
２種の液相間における分配の差などを利用する一般の低
分子有機化合物製造に用いられる手段によって、分離・
精製される。これらの方法は必要に応じて単独に用いら
れ、あるいは任意の順序で組み合わせ、また反復し適用
できる。
【００１５】得られたＥＢ−１６２物質は微生物により
生産され、優れた界面活性を有するのでバイオサーファ
クタントであり、広い分野における界面活性剤として有
用である。
生産され、優れた界面活性を有するのでバイオサーファ
クタントであり、広い分野における界面活性剤として有
用である。
【００１６】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説
明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明は
これらによって何ら限定されるものではない。
明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明は
これらによって何ら限定されるものではない。
【００１７】実施例１（培養生産、精製） グルコース３％、尿素０．１５％、硫安０．１５％、硝
酸アンモニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．
１５％、リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫
酸マグネシウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２
水和物０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、
硫酸第一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和
物０．０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地
（ｐＨ７．０）を作成し、これを５００ｍＬの三角フラ
スコに各１００ｍＬずつ分注し、１２０℃で１５分間滅
菌したものにブレイン・ハート・インフュージョン寒天
培地によく生育させたバチルス・スブチリス・ＥＢ−１
６２菌株の菌塊をかき取って接種し、３０℃で４８時間
ロータリーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養を行
い、第一段種培養液とした。次に同様の培地を５０００
ｍＬの三角フラスコ９本に各９００ｍＬずつ分注し、１
２０℃で１５分間滅菌したものに無菌濾過した３０％エ
タノールを１００ｍＬずつ加えた培地を調製し、上で得
た培養物を１０ｍＬずつ接種し、３０℃、４日間ロータ
リーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養した。得ら
れた培養液９リットル分を遠心分離し、菌体を除去した
後、得られた培養上清をｎ−ブタノールで抽出し、濃
縮、乾固した。得られた乾固物をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーに供し、クロロホルム：メタノール＝
９：１から８：２のステップワイズで溶出した。溶出液
を１００ｍＬずつ分取し、表面張力低下活性を指標に活
性画分を集めて溶媒を減圧下に留去し、さらにシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム：メ
タノール＝８：２で溶出した。溶出液を２０ｍＬずつ分
取し、同様に表面張力低下活性を指標に活性画分を集め
て溶媒を減圧下に留去し、残渣を溶出液メタノールでセ
ファデックスＬＨ２０のゲル濾過カラムクロマトグラフ
ィーに供した。溶出液を２０ｍＬずつ分取し、同様に表
面張力低下活性を指標に活性画分を集めて溶媒を減圧下
に留去し、少量のメタノールに溶解後溶出液メタノー
ル：０．１％トリフルオロ酢酸溶液＝９０：１０で逆相
の高速液体クロマトグラフィーに供し、ＥＢ−１６２物
質３０ｍｇを得た。
酸アンモニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．
１５％、リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫
酸マグネシウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２
水和物０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、
硫酸第一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和
物０．０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地
（ｐＨ７．０）を作成し、これを５００ｍＬの三角フラ
スコに各１００ｍＬずつ分注し、１２０℃で１５分間滅
菌したものにブレイン・ハート・インフュージョン寒天
培地によく生育させたバチルス・スブチリス・ＥＢ−１
６２菌株の菌塊をかき取って接種し、３０℃で４８時間
ロータリーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養を行
い、第一段種培養液とした。次に同様の培地を５０００
ｍＬの三角フラスコ９本に各９００ｍＬずつ分注し、１
２０℃で１５分間滅菌したものに無菌濾過した３０％エ
タノールを１００ｍＬずつ加えた培地を調製し、上で得
た培養物を１０ｍＬずつ接種し、３０℃、４日間ロータ
リーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養した。得ら
れた培養液９リットル分を遠心分離し、菌体を除去した
後、得られた培養上清をｎ−ブタノールで抽出し、濃
縮、乾固した。得られた乾固物をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーに供し、クロロホルム：メタノール＝
９：１から８：２のステップワイズで溶出した。溶出液
を１００ｍＬずつ分取し、表面張力低下活性を指標に活
性画分を集めて溶媒を減圧下に留去し、さらにシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム：メ
タノール＝８：２で溶出した。溶出液を２０ｍＬずつ分
取し、同様に表面張力低下活性を指標に活性画分を集め
て溶媒を減圧下に留去し、残渣を溶出液メタノールでセ
ファデックスＬＨ２０のゲル濾過カラムクロマトグラフ
ィーに供した。溶出液を２０ｍＬずつ分取し、同様に表
面張力低下活性を指標に活性画分を集めて溶媒を減圧下
に留去し、少量のメタノールに溶解後溶出液メタノー
ル：０．１％トリフルオロ酢酸溶液＝９０：１０で逆相
の高速液体クロマトグラフィーに供し、ＥＢ−１６２物
質３０ｍｇを得た。
【００１８】以下にＥＢ−１６２物質の理化学的性状を
示す。 赤外部吸収スペクトル：図１（ＫＢｒ錠）１ Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：図２ （４００ＭＨｚ，重クロロホルム，内部標準ＴＭＳ） 分子量 ９３３（ｐｏｓｉｔｉｖｅ／ｎｅｇａｔｉｖｅ
ＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる） ＭＨ＋＝９９４．６４５３（高分解能ＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルによる） 分子式（Ｃ５０Ｈ８７Ｏ１３Ｎ７誤差＋１．３ｍｍｕ
（高分解能ＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる） 紫外部吸収スペクトル：末端吸収 アミノ酸分析 Ｇｌｕ／Ａｓｐ／Ｖａｌ／Ｌｅｕ・１／
１／１／４
示す。 赤外部吸収スペクトル：図１（ＫＢｒ錠）１ Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：図２ （４００ＭＨｚ，重クロロホルム，内部標準ＴＭＳ） 分子量 ９３３（ｐｏｓｉｔｉｖｅ／ｎｅｇａｔｉｖｅ
ＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる） ＭＨ＋＝９９４．６４５３（高分解能ＦＡＢ−ＭＳスペ
クトルによる） 分子式（Ｃ５０Ｈ８７Ｏ１３Ｎ７誤差＋１．３ｍｍｕ
（高分解能ＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる） 紫外部吸収スペクトル：末端吸収 アミノ酸分析 Ｇｌｕ／Ａｓｐ／Ｖａｌ／Ｌｅｕ・１／
１／１／４
【００１９】以上の結果とＦＡＢ−ＭＳによりフラグメ
ントイオン６８５．４４８４はＣ３３Ｈ６１Ｏ９Ｎ
６（誤差−１．６ｍｍｕ）、ＭＳ／ＭＳによりＨ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＯＨ、
フラグメントイオン１８１，３１０，４２３，５３６は
Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ＋、Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ
−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯ＋、Ｃ
９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｇｌｕ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２
ＣＨ（ＣＨ３）２）ＣＯ＋、Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ
Ｏ−Ｇｌｕ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）ＣＯ
＋であり、これらを総合してＥＢ−１６２物質の構造を
前記式（１）のように決定した。
ントイオン６８５．４４８４はＣ３３Ｈ６１Ｏ９Ｎ
６（誤差−１．６ｍｍｕ）、ＭＳ／ＭＳによりＨ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＯＨ、
フラグメントイオン１８１，３１０，４２３，５３６は
Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ＋、Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ
−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯ＋、Ｃ
９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｇｌｕ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２
ＣＨ（ＣＨ３）２）ＣＯ＋、Ｃ９Ｈ１９ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ
Ｏ−Ｇｌｕ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）ＣＯ
＋であり、これらを総合してＥＢ−１６２物質の構造を
前記式（１）のように決定した。
【００２０】実施例２（エタノール添加培養による生産
性） グルコース３％、尿素０．１５％、硫安０．１５％、硝
酸アンモニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．
１５％、リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫
酸マグネシウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２
水和物０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、
硫酸第一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和
物０．０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地
（ｐＨ７．０）を作成し、これを１００ｍＬの三角フラ
スコに各２０ｍＬずつ分注し、１２０℃で１５分間滅菌
したものにブレイン・ハート・インフュージョン寒天培
地によく生育させたバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６
２菌株の菌塊をかき取って接種し、３０℃で４８時間ロ
ータリーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養を行
い、第一段種培養液とした。次に上記培地組成からグル
コースを除いた組成のものを調製し、５００ｍＬ三角フ
ラスコに分注後１２０℃で１５分間滅菌したものにそれ
ぞれ滅菌したグルコース溶液を加え０、１、２、３％の
ものを調製し、これら培地にさらに滅菌エタノールがそ
れぞれ０、１、２、３％になるように調製し、液量を１
００ｍＬに調製する。上記第一段種培養液を１ｍＬずつ
これら培地に接種し、３０℃、４日間ロータリーシェイ
カーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養した。培養液を遠心分
離により菌体を除去し、上清を適時希釈して後記実施例
３と同様の方法で表面張力を測定し、表面張力が４０ｍ
Ｎ／ｍを示すような界面活性を１ユニットとして定義し
て希釈倍率からその界面活性剤の生産量を換算して算出
した。その結果を図３に示す。この結果、本発明ＥＢ−
１６２物質を含むサーファクチン類はエタノールの添加
培養により約１０倍の生産性の増大が認められた。高速
液体クロマトグラフィーによる分析からもＥＢ−１６２
物質のピークおよびその他のサーファクチン類縁体の生
産性の増大が確認された。
性） グルコース３％、尿素０．１５％、硫安０．１５％、硝
酸アンモニウム０．１５％、リン酸二水素カリウム０．
１５％、リン酸一水素ナトリウム水和物０．１５％、硫
酸マグネシウム７水和物０．０３％、塩化カルシウム２
水和物０．００１％、硫酸亜鉛７水和物０．００１％、
硫酸第一鉄７水和物０．００１％、硫酸マンガン７水和
物０．０００１％、酵母エキス０．１％からなる培地
（ｐＨ７．０）を作成し、これを１００ｍＬの三角フラ
スコに各２０ｍＬずつ分注し、１２０℃で１５分間滅菌
したものにブレイン・ハート・インフュージョン寒天培
地によく生育させたバチルス・ズブチリス・ＥＢ−１６
２菌株の菌塊をかき取って接種し、３０℃で４８時間ロ
ータリーシェイカーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養を行
い、第一段種培養液とした。次に上記培地組成からグル
コースを除いた組成のものを調製し、５００ｍＬ三角フ
ラスコに分注後１２０℃で１５分間滅菌したものにそれ
ぞれ滅菌したグルコース溶液を加え０、１、２、３％の
ものを調製し、これら培地にさらに滅菌エタノールがそ
れぞれ０、１、２、３％になるように調製し、液量を１
００ｍＬに調製する。上記第一段種培養液を１ｍＬずつ
これら培地に接種し、３０℃、４日間ロータリーシェイ
カーにて２１０ｒｐｍで攪拌培養した。培養液を遠心分
離により菌体を除去し、上清を適時希釈して後記実施例
３と同様の方法で表面張力を測定し、表面張力が４０ｍ
Ｎ／ｍを示すような界面活性を１ユニットとして定義し
て希釈倍率からその界面活性剤の生産量を換算して算出
した。その結果を図３に示す。この結果、本発明ＥＢ−
１６２物質を含むサーファクチン類はエタノールの添加
培養により約１０倍の生産性の増大が認められた。高速
液体クロマトグラフィーによる分析からもＥＢ−１６２
物質のピークおよびその他のサーファクチン類縁体の生
産性の増大が確認された。
【００２１】実施例３（表面張力の測定） 表面張力は自動表面張力計ＣＢＶＰ−Ｚ型（協和界面科
学株式会社製）を用いてプレート法により測定した。測
定サンプルは直径５０ｍｍ前後、深さ１５ｍｍ前後のガ
ラスシャーレに水溶液として入れ、ＥＢ−１６２の表面
張力を濃度を変えて測定した。その結果を図４に示す。
図４より臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を求めたところ、Ｅ
Ｂ−１６２物質のＣＭＣは２０μｇ／ｍＬであり、この
濃度での表面張力は３０ｍＮ／ｍであった。
学株式会社製）を用いてプレート法により測定した。測
定サンプルは直径５０ｍｍ前後、深さ１５ｍｍ前後のガ
ラスシャーレに水溶液として入れ、ＥＢ−１６２の表面
張力を濃度を変えて測定した。その結果を図４に示す。
図４より臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を求めたところ、Ｅ
Ｂ−１６２物質のＣＭＣは２０μｇ／ｍＬであり、この
濃度での表面張力は３０ｍＮ／ｍであった。
【００２２】
【発明の効果】本発明により、高い界面活性を有するバ
イオサーファクタントである新規な化合物ＥＢ−１６２
およびその生産方法が提供された。本発明の化合物は１
分子当たりの界面活性が従来知られているバイオサーフ
ァクタントのなかでも、極めて高く、界面活性剤一般の
用途はもちろんのこと、バイオサーファクタント特有の
その生分解性の良さおよび界面活性の強さに起因する機
能性界面活性剤として有用である。
イオサーファクタントである新規な化合物ＥＢ−１６２
およびその生産方法が提供された。本発明の化合物は１
分子当たりの界面活性が従来知られているバイオサーフ
ァクタントのなかでも、極めて高く、界面活性剤一般の
用途はもちろんのこと、バイオサーファクタント特有の
その生分解性の良さおよび界面活性の強さに起因する機
能性界面活性剤として有用である。
【図１】本発明の化合物の赤外線吸収スペクトルを示す
図である。
図である。
【図２】本発明の化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示
す図である。
す図である。
【図３】本発明のＥＢ−１６２物質を含むサーファクチ
ン類縁体のエタノール添加培養による生産性の増大を示
す図である。
ン類縁体のエタノール添加培養による生産性の増大を示
す図である。
【図４】本発明の化合物の各濃度における表面張力を示
す図である。
す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き 審査官 本間 夏子 (56)参考文献 特開 平３−261799（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−92279（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ．Ｉｎｔｅｒｆａ ｃｅ Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．204，Ｎｏ. １，ｐ．１−８（1998) ＦＯＯＤ ＥＭＵＬＳＩＯＮＳ ＡＮ Ｄ ＦＯＡＭＳ，Ｎｏ．227，ｐ．296− 304（1999) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 21/02 C07K 7/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属
し、下記式（１） 【化１】 で表されるＥＢ−１６２物質を生産する能力を有する微
生物を培養し、その培養物からＥＢ−１６２物質を採取
することを特徴とするＥＢ−１６２物質又はその塩の製
造法。 - 【請求項２】 バチルス属に属する微生物がバチルス・
ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｅ
Ｂ−１６２（ＦＥＲＭ Ｐ−１７３１９）である請求項
１記載の製造法。 - 【請求項３】 バチルス属に属する微生物がバチルス・
スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｅ
Ｂ−１６２（ＦＥＲＭ Ｐ−１７３１９）であり、培養
をエタノール含有培地で行うものである請求項１記載の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531399A JP3103883B2 (ja) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Ｅｂ−１６２物質およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531399A JP3103883B2 (ja) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Ｅｂ−１６２物質およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000273100A JP2000273100A (ja) | 2000-10-03 |
| JP3103883B2 true JP3103883B2 (ja) | 2000-10-30 |
Family
ID=14659535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11531399A Expired - Lifetime JP3103883B2 (ja) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Ｅｂ−１６２物質およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3103883B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107124933B (zh) * | 2017-05-18 | 2020-07-07 | 安徽省农业科学院园艺研究所 | 一种无籽西瓜免破壳批量播种育苗方法 |
-
1999
- 1999-03-19 JP JP11531399A patent/JP3103883B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ＦＯＯＤ ＥＭＵＬＳＩＯＮＳ ＡＮＤ ＦＯＡＭＳ，Ｎｏ．２２７，ｐ．２９６−３０４（１９９９） |
| Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．２０４，Ｎｏ．１，ｐ．１−８（１９９８） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000273100A (ja) | 2000-10-03 |
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