JPH02188597A - 新抗生物質ｎ―アセチルベナノマイシンｂならびにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新しい抗かび性抗ウィルス性抗生物質Ｎ−ア
セチルベナノマイシンＢ （Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｂｅｎａｎｏｍｉｃｉｎ　Ｂ）なら
びにその製造法に関する。

（従来の技術） 本発明による抗かび性抗ウィルス性抗生物質Ｎ−アセチ
ルベナノマイシンＢと構造上の特徴が類似する化合物と
しては、本発明者らが先に新規化合物として取得したベ
ナノマイシンＡおよびＢ（本出願人らの出願に係る特願
昭６２−２７７．６９２号）とデキシロシルベナノマイ
シンＢ（本出願人らの出願に係る特願昭６２−３２７１
６３号）があり、またＫＳ−６１９−１（Ｍａｔｓｕｄ
ａら：ｒＪ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ」４０．１１０
４−１１１４（Ｉ９８７）　）、Ｇ−２ＮおよびＧ−２
Ａ（Ｇａｒｂｅｒら：　ｒＣａｎａｄａ、　Ｊ。

Ｃｈｅｍ、Ｊ　６２．２８１８−２８２１Ｊ（Ｉ９８４
））およびプラジマイシンＡ（Ｏｋｉら：　ｒＪ、　Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＪ　４１．１７０１−１７０４（
Ｉ９８８））などが知られている。

（発明が解決しようとする課題） 従来、微生物が生産する多くの抗生物質が知られている
が、毒性が低く、優れた効果を示す抗かび抗生物質は少
く、かびに起因する各種感染症の治療において、新しい
抗かび抗生物質の出現が常に要望されている。さらに、
ヒト後天性免疫不全症候群ウィルス（以下ＨＩＶと略す
）の感染によるヒト後天性免疫不全症候群（以下エイズ
と略す）に対する治療薬も未だ満足するものがなく、現
在毒性が低くＨＩＶ不活性化活性の強い新しい薬剤を提
供することが要望されている。

本発明者らは、先に、抗かび活性ならびにＨＩＶ不活性
化活性を有する抗生物質ベナノマイシンＡおよびＢ、な
らびに放線菌ＭＨ１９３−１６Ｆ４株（微工研条寄第２
０５１号）の培養によるベナノマイシンＡおよびＢの製
造及びその医薬的用途について発明した（特願昭６２−
２７７．６９２号および特願昭６３−２０６３４６号）
。本発明の原料となるベナノマイシンＢの構にアセチル
化することにより、ベナノマイシンＢに比べて低毒性の
Ｎ−アセチルベナノマイシンＢが得られることを発見し
た。しかも、Ｎ−アセチルベナノマイシンＢは抗かび活
性及び抗ウィルス活性を有すること及び上記の公知の物
質とは理化学的および生物学的性質が異なり、明確に区
別されることを確認して本発明を完成した。

９Ｈ・ 即ち１本発明の目的は、低毒性で新規の抗かび性抗ウィ
ルス性抗生物貿Ｎ−アセチルベナノマイシンＢ、ならび
にその製造法を提供することにある。

（課題を解決するための手段） 第１の本発明の要旨とするところは、前記の式（Ｉ）で
表わされぬ新規な抗かび性抗ウィルス性抗生物質Ｎ−ア
セチルベナノマイシンＢまたはその塩、またはエステル
である。

本発明のＮ−アセチルベナノマイシンＢは下記の特性を
有する。

１、Ｎ−アセチルベナノマイシンＢの理化学的性状 （Ｉ）色および形状：赤褐色粉末 （２）元素分析：０４１１１４４Ｎ２０工、・２Ｈ，０
として計算値Ｃ５４，４２％、Ｈ５，３５％、　Ｎ　３
．１０％実測値Ｃ５４，０５％、　８５．４３％、Ｎ　
２．８６％（３）マススペクトル（ＳＩＭＳ）：　ｒａ
／ｚ　８６８（Ｍ”）（４）融点：）２００℃ （５）紫外部および可視部吸収スペクトルλｗａｘ□（
Ｅｉξ） ［ＭｅＯ）１１：　２０５（５６４）、　２２９（５１
７）。

２７０（ｓｈ、　３３０）、　　２９０（４０３）、　
　３００（ｓｈ、　３５５）。

４００（ｓｈ、１００）、４６８（Ｉ５６）［０，１Ｎ
　ＨＣＱ−ＭｅＯＨ］：　２０８（４８８）、　２３３
（５２８）。

２７０（ｓｈ、　　３２５）、　　２９４（４４６）、
　　４００（ｓｈ、　　１１５）。

［０，ＩＮ　ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ］：　　２１５（Ｌ２
３３）、２４８（５４０）。

３１９（２４５）、４９６（２２７） （６）赤外部吸収スペクトル （ＫＢｒ　ｃ＋ｍ−’）：　３３６０．２９７０．２９
１０．１７２０゜１６２０、１６００．１５４０．１４
９０．１４４０．１３７０゜１３３０、１２９０．１２
５０．１２３０．１２０５．１１６０゜１０７０、１０
４０．１０００．９７０．８７０．８３０．１１１００
゜（７）　”Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、　
ＤＭＳＯ−ｄ、、　４０℃）δ（ｐｐｍ）：　０．９８
（３Ｈ，ｄ）、　１．３５（３８，ｄ）。

１．９２（３８，ｓ）、　２．３３（３Ｂ、　ｓ）。

３．０６（ＩＢ、　ｄｄ）、　３．０８（ｉｌｌ、　ｄ
ｄ）。

３．１５（ＩＨ，ｄｄ）、　３．２９（ＩＨ，ｄｄｄ）
。

３．７０（ＩＨ，ｄｄ）、　３．７１（ＩＨ，ｂｒ　ｑ
）。

３．７４（ＩＨ，ｄｄ）、　３．８１（ＩＨ，ｂｒ）。

３−９５（３）１−　ｓＬ　４−２１（ＩＬ　ｂｒ　ｄ
ｄＬ４．４２（ｔＨ，ｄ）、　４．４３（Ｉ）１．　　
ｄｑ）。

４．５６（ＩＨ，ｂｒ　ｄ）、　４．６１（Ｉ）１．　
ｂｒ　ｄ）。

４．６４（ＩＨ，ｂｒ　ｄ）、　　６．９１（ＬＨ，ｄ
）。

７．２４（ＩＨ，ｂｒ　ｓ）、　７．２８（ＩＨ，ｄ）
。

７．６１（ＩＨ，ｂｒ　ｄ）、　８．０７（ＬＨ，ｓＬ
８．４５（ＬＨ，ｄ）、　　１２．８０（ＩＨ，ｂｒ　
ｓ）。

１３．８２（ＩＨ，ｂｒ） １３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（Ｉ００ＭＨｚ。

℃） δ（ｐｐｍ）：　　１８７．５　ｇ、　　１８４．９　
Ｓ。

１６９．９　ｓ、１６６．９　ｇ、１６６．０１６４．
７　ｓ、１５６．８　Ｓ、１５１．１１３７．９　ｓ、
　　１３７．３　ｓ、　　１３４．３１２７．５　ｓ、
　　１２５．６　ｓ、　　１１８．８１１５．５　ｓ、
１１３．７　ｓ、１１０．０１０６．９　ｄ、　　１０
４．９　ｄ、　　１０４．７８０．２　ｄ、　　７５．
８　ｄ、　　７３．３　ｄ。

７０．５　ｄ、　　６９．９　ｄ、　　６９．３　ｄ。

５６．４　ｑ、　　５２．Ｏｄ、　　４７．６　ｄ。

１９．１　ｑ、　　＋６．９　ｑ、　　１６．４　ｑ１
７３．９　　ｓ。

Ｓ？ ｓ、１４７．８　　ｓ。

ｓ、１３１．３　　ｓ。

ｄ、１１５．５　ｄ。

ｓ、１０７．６　ｄ。

ｄ、８１．８　ｄ。

７１．７　ｄ。

６５．４　　ｔ。

２２．５　（Ｉ゜ ＤＭＳＯ−ｄ、。

（９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに
僅かに溶け、アルカリ水、メタノール、ジメチルスルホ
キシド、ジメチルホルムアミドに溶ける。

（Ｉ０）塩基性、酸性、中性の区別二弱酸性物質２、　
　Ｎ−アセチルベナノマイシンＢの抗かび活性本発明に
よるＮ−アセチルベナノマイシンＢの各種かびに対する
最小発育阻止濃度を第１表に示した。

３、　Ｎ−アセチルベナノマイシンＢのＨＩＶ不活性化
活性試験法＝２４穴トレーにヒトのＴ細胞の一種である
ＭＴ−４細胞の約５万個／ｍΩを入れ、さらにＮ−アセ
チルベナノマイシンＢの一定量を含む溶液１００μＱを
加え、３７℃で５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスフ卵器中にて２
時間ＭＴ−４細胞を培養シタ後、ＨＩ　Ｖ　（７）１０
”　〜ｔｏ’感染単位を加え、４日間培養した。培養液
の一部を試料として取り、スライドグラスに塗抹し、ア
セトン固定をした後、蛍光抗体法にて培養液中に。

ＨＩＶウィルス抗原が発現するか否かをみた。なお、蛍
光抗体法の一次抗体にはエイズ患者の血清を用い、また
二次抗体にはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩ
ＴＣ）をラベルした抗ヒ１〜ＩｇＧを用いた。

なお、ＭＴ−４細胞に対する細胞毒性の測定は上記のＨ
ＩＶ不活性化試験法と同じ要領で行われ、但しウィルス
を加えずに行った。試験結果を第２表に示す。

第２表 ４．　　Ｎ−アセチルベナノマイシンＢの急性毒性Ｎ−
アセチルベナノマイシンＢのマウス（Ｉ群３匹）の静脈
内投与による急性毒性試験で、　３００ｍｇ／ｋｇの投
与量で死亡例はなかった。なお、ベナノマイシンＢは１
００ｍｇ／ｋｇの投与量では死亡例がなかった。

第２の本発明の要旨とするところは、抗生物質ベナノマ
イシンＢを化学的に変換することにより抗かび性抗ウィ
ルス性抗生物質Ｎ−アセチルベナノマイシンＢを生成す
る該抗生物質Ｎ−アセチルベナノマイシンＢの製造法に
ある。

ここで「化学的に変換する」とは、ベナノマイシンＢを
酢酸またはそれらの反応誘導体でアシル化、特にアセチ
ル化することを包含する。原料のベナノマイシンＢの製
造法は本出願人の出願に係る特願昭６２−２７７．６９
２号明細書に記載されるが、その製造例は後記の参考例
１〜３に示す。

ベナノマイシンＢの４′−アミノ基のアシル化反応は、
ジシクロへキシルカルボジイミド法、混合酸無水物法、
酸塩化物法、アジド法、活性エステル法などあらゆる既
知のアミド合成法により行うことができるが、好ましく
はメタノールなどの低級アルコールまたは水、またはそ
れらの混合溶媒体で無水酢酸と反応させて実施できる。

このベナノマイシンＢのアシル化反応生成物は、必要な
らば通常用いられているダイヤイオンＨＰＩＯ１ＨＰ２
０（三菱化成製）、アンバーライトＸＡＤ−１，ＸＡＤ
−２（米国、ローム・アンド・ハース製）などの巨大網
状樹脂やセファデックスＬＨ−２０（スウェーデン国、
ファルマシア製）などの分子篩を使用するカラムクロマ
トグラフィーによって容易に精製することができる。

このようにして反応液中に生成したＮ−アセチルベナノ
マイシンＢは遊離の形、すなわちＮ−７セチルベナノマ
イシンＢそれ自体として分離することができる。また、
Ｎ−アセチルベナノマイシンＢを含有する溶液またはそ
の濃縮液を塩基、すなわち例えば水酸化ナトリウム、水
酸化カリウム等のアルカリ金属化合物、水酸化カルシウ
ム、水酸化マグネシウム等のアルカリ土類金属化合物。

アンモニウム塩等のような無機塩基、エタノールアミン
、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン等の有機
塩基により、精製の各工程の操作中に処理した場合、Ｎ
−アセチルベナノマイシンＢは、対応するその塩類の形
に変化し分離される。

また別にこのようにして製造されたＮ−アセチルベナノ
マイシンＢの塩類は、常法により遊離の形、Ｎ−アセチ
ルベナノマイシンＢそれ自体に変化させることができる
。さらに遊離の形で得られたＮ−アセチルベナノマイシ
ンＢを前記の塩基により常法で対応するその塩類に変化
させてもよい。

従ってＮ−アセチルベナノマイシンＢと同様に前記のよ
うなその塩類も、この発明の範囲内に包含されるものと
する。また、Ｎ−アセチルベナノマイシンＢは、これを
アルコール類例えばメタノール、エタノールの如き低級
アルカノールと反応させると、そのカルボキシ基におけ
る対応のエステルを生成する。

以下に本発明の参考例および実施例を示すが、Ｎ−アセ
チルベナノマイシンＢの性状が本発明によって明らかに
されたので、それらの性状にもとずきＮ−アセチルベナ
ノマイシンＢの製造法を種々考案することができる。従
って本発明は実施例に限定されるものではなく、実施例
の修飾手段は勿論、本発明によって明らかにされたＮ−
アセチルベナノマイシンＢの性状にもとすいて公知の手
段を施してＮ−７セチルベナノマイシンＢを生成、抽出
、精製する方法をすべて包括する。

見笠粁よ 寒天斜面培地に培養した放線菌Ｍｌ　１９３−１６Ｆ４
株（微工研菌寄第９５２９号よりブダペスト条約の規定
で移行された微工研条寄第２０５１号）をスターチ１．
０％、大豆粉３．０％を含む液体培地（５００ｍＱ容坂
ロフラスコ中８０ｍｆ１．殺菌前Ｐ）Ｉ　７．０）に接
種し、２８℃で３日間振盪培養（Ｉ３５ｒｐｍ）　シて
第１種培養を得た。この種培養の各：３＋＋ｕを上記と
同様の培地に接種し、同様の条件で３日間振盪培養して
第２種培養を得た。この種培養２意を、１２０℃で１５
分間殺菌した上記組成の培地５０ｆｌを含む１００Ｑ容
培養槽に接種し、２８℃で２日間、通気量５０Ｑ／分、
２００ｒＰＩ１１で通気攪拌培養して第３種培養を得た
。予め１２５℃で３０分間殺菌したグリセリン２．０％
、ニスサンミート１．５％、に、ＩＩＰｏ、　　０．０
０２５％、ＫＨ，ＰＯ４０，１１２５％、　Ｃｏ（、Ｑ
、・６）１，００．０００５％、ＫＭ　７２０．０３％
、アデカノール０．０１％からなる３００　ｍの生産培
地を含む５７０Ｑ容培養槽に前記第３種培養ｉｌｌを接
種し、２８℃で７日間、培養初期２４時間の通気量１５
０　Ｑ　／分、２４時間以降３００ｕ／分、３００ｒｐ
ｍで通気攪拌培養した。

培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し、濾
液２５０　Ｑ　（ｐ＋＋　６．０）を得た。

見ム桝主 参考例１で得られた培養濾液２５０ＱをダイヤイオンＨ
Ｐ−，２０のＩｌｌに吸着させ、水１００Ｑおよび５０
％メタノール４５ｆｌで洗浄後、活性物質を７０％メタ
ノール４５Ｑ、ついでメタノール９０Ｑで溶出して第１
分画（５３Ｑ　）、第２分画（３８Ω）および第３分区
（２７Ｑ）を得た。活性物質を含む第１分画を減圧上濃
縮して３Ｑとし、稀塩酸を用いてｐＨを３．５に調整す
ると、赤色沈澱が得られる。この沈澱を濾取し、減圧上
乾燥すると、主としてベナノマイシンＡを含む褐色粗粉
末１５２ｇが得られた。この粗粉末１５０ｇをジメチル
ホルムアミド６００＋ａＱに溶解し、デシケータ中で室
＠３日間水蒸気を飽和させると、結晶性沈澱が析出した
。この沈澱を濾取し、減圧上乾燥するとベナノマイシン
Ａジメチルホルムアミド・ツルベート２９ｇが得られた
。第２分画も第１分画も同様に処理し、ベナノマイシン
Ａジメチルホルムアミド・ツルベート１４ｇを得た。

第１分画より得られたベナノマイシンＡジメチルホルム
アミド・ツルベート１ｇをジメチルスルホキシド（５ｍ
１２）に溶解し、メタノール３００ｍ１２中に攪拌上滴
下して、さらに１０分間攪拌すると、赤褐色沈澱が析出
した。この沈澱を濾取し、減圧上乾燥して純粋なベナノ
マイシンＡの赤褐色粉末９３５ｍｇを得た。

見１鮭主 参考例２で得られた第３分画を減圧上濃縮して１．５Ω
とし、稀塩酸を用いてＰＨを３．５に調整すると、赤色
沈澱が得られた。この沈澱を濾取し、減圧上乾燥すると
ベナノマイシンＢを含む褐色粗粉末９９ｇが得られた。

この粗粉末１ｇをジメチルホルムアミド１０ｍＱに加温
（４０℃）溶解し、ジメチルホルムアミドで充填したＬ
Ｈ−２０のＩＱのカラムにかけ、ジメチルホルムアミド
で展開した。活性物質を含む分画Ｎα６４−７２（Ｉ分
画６　ｍＭ）を集め、減圧上濃縮乾固すると、ベナノマ
イシンＢジメチルホルムアミド・ツルベートを含む褐色
粗粉末６５７Ｂが得られた。この粗粉末３００ｍｇをメ
タノールｌｏＯ＋＋＋Ｉ２に溶解し、ＩＮ塩酸１ｍｆｌ
を加えた後、減圧上濃縮乾固した。得られた褐色粗粉末
をジメチルスルホキシド３ｍＱに溶解し、攪拌下クロロ
ホルム２００＋ｓＱ中に滴下し、さらに２０分間攪拌す
ると赤褐色沈澱が析出した。この沈澱を濾取し、減圧上
乾燥して赤褐色粉末として純粋なベナノマイシンＢの塩
酸塩２５８ｍｇを得た。

失胤鮭よ ベナノマイシンＢ塩酸塩（Ｉ２５＋ｎｇ）を１０ｍＱの
０．１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液に溶解し、これに無水酢
酸（０，１ｍ１２）を加えて室温で２０分間攪拌した。

その後、反応液を１Ｍ塩酸でｐｌ＋　４．０に調整し、
ダイヤイオンＨＰ−２０のカラム（２０ｍ１２）に充填
した。水洗後８０％アセトン水で展開し、溶出した赤色
分画を濃縮乾固した。得られた残渣をセファデックスＬ
ｌ＋−２０のカラムに充填し、メタノールで展開した。

　ＴＬＣ上で単一の赤色分画を濃縮乾固すると、融点２
００℃以上の赤褐色粉末としてＮ−アセチルベナノマイ
シンＢ　（Ｉ１８ｍｇ）が得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表わされる抗かび性抗ウィルス性抗生物質Ｎ−アセチ
   ルベナノマイシンＢ、およびその塩またはエステル。 ２、抗生物質ベナノマイシンＢを化学的に変換すること
   により、抗かび性抗ウィルス性抗生物質Ｎ−アセチルベ
   ナノマイシンＢを生成することを特徴とする抗かび性抗
   ウィルス性抗生物質Ｎ−アセチルベナノマイシンＢの製
   造法。