JPH01273594A - 殺カビ性抗生物質イソボンクレキン酸およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はインポンフレキン酸と呼ばれる新規な殺カビ性
抗生物質ならびに細菌培養株Ｙ−８４，０７００（西ド
イツ微生物収集機関に１９８７年１１月１７日寄託、寄
託番号ＤＳ！Ｊ４３０５）およびその突然変異体および
変種からのその製法に関する。

インボンフレキン酸（Ｉａ）は長鎖脂肪酸の誘導体とし
て記載されうる。インポンフレキン酸は式 で示される３−カルボキシメチル−１７−メドキシー６
．１８．２１−１−リメチルドコサー２Ｅ、４Ｅ、８Ｅ
。

１２Ｅ、１４Ｚ、１８Ｚ、２０Ｅ−へブタエン−１，２
２−ジ酸として化学的に記載されうる。文献中に記載さ
れるこの群のもう一つの抗生物質は対応する△２．３−
Ｚ異性体ポンフレキン酸（ＩＩ　ａ）である。

ポンフレキン酸はＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　２６．５
９９３（１９７０）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　２７．
１８３９（１９７１）、Ｔｅｔｒａ−ｈｅｄｒｏｎ　２
９，１５４１（１９７３）およびＣＲＣＨａｎｄｂｏｏ
ｋ　ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、
　ｖｏｌｕｍｅ　Ｖｌ、　３９３−４０１頁の”ｆａｔ
ｔｙ　ａｃｉｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”の章に記載
されている。ポンフレキン酸を産生する細菌はシュード
モナス・ココベナンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃｏ
ｃｏ−ｖｅｎａｎｓ）と記載されている。

しかしながらそこに記載されるデータから、インポンフ
レキン酸はポンフレキン酸およびすべての他の知られた
長鎖脂肪酸抗生物質とは相異することが明らかである。

インボンフレキン酸の取得に用いられるオイバクテリウ
ム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）培養株ＮＯ，Ｙ−８４，
０７００はインドのマハラシュトラ（Ｍａｈａｒａｓｈ
ｔ−ｒｅ）州、プーナ（Ｐｏｏｎａ）で収集された土壌
試料から単離されそしてオイバクテリウムであることが
判明した。

本発明はさらにこの新規抗生物質であるインボンフレキ
ン酸の製法にも関する。この方法は細菌培養株ＮＯ，Ｙ
−８４，０７００（ＤＳＭ４３０５）　、その突然変異
体または変種を、炭素源および窒素源ならびに無機栄養
塩および痕跡元素を含有する栄養培地上で好気性条件下
に培養しそしてこの抗生物質を培養ブロスから単離し精
製することからなる。

好ましい炭素源の例をあげれば、グルコース、スクロコ
ース、澱粉またはデキストリンである。

グルコースが特に好ましい炭素源である。窒素源として
は大豆ひされり、トリプトン、酵母エキス、牛肉エキス
、麦芽エキス、コーンステイープリカーまたはペプトン
、または無機物質例えばアンモニウム塩が用いられるの
が好ましい。

特に好都合に使用される窒素源は麦芽エキスであるかま
たは麦芽エキスと１種またはそれ以上の他の窒素源との
組み合せである。ありうる無機栄養塩の例をあげれば塩
化ナトリウム、燐酸水素／二水素カリウムまたは炭酸カ
ルシウムである。痕跡元素としては例えば鉄、マンガン
、銅、亜鉛、コバルトの塩または他の重金属の塩が適当
である。

培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００は約２４°Ｃ〜３０°
ＣおよびｐＨ６〜８で培養されるのが好ましい。温度約
２６°Ｃ（±ｌ’ｃりおよびｐＨ約６．５であるのが特
に好ましい。

発酵を約６６〜９６時間後に停止するのが好都合で、そ
の時間後に本発明による抗生物質が最高収率で得られる
。発酵は好ましくは深部発酵として振盪フラスコ中なら
びに実験室発酵基中で約９０時間にわたり実施される。

この発酵器には場合により泡止め剤が添加されうる（例
えばＤｅｓｍｏｐｈｅｎ■、ポリオール、Ｂａｙｅｒ　
ＡＧ、　　Ｌｅｖｅｒ−ｋｕｓｅｎ）。発酵の進行およ
び本発明によるイソボンフレキン酸の形成は知られた寒
天プレート拡散試験を用い、スタフィロコッカス・オー
レウス（Ｓｔａｐｈ、　ａｕｒｅｕｓ）２０９　Ｐ１ア
スペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉ
ｇｅｒ）およびトリコフィトン０メンタグロフイテス（
Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎ−ｔａｇｒｏｈｙｔ
ｅｓ）に対する培養ブロスの抗菌活性を測定することに
より追跡されうる。

かくして形成された培養ブロスにおいてイソポンフレキ
ン酸は培養か液中にのみ存在し、これは例えは遠心分離
により菌糸体から分離される。インポンフレキン酸はポ
リマー性吸着物質例えばダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ）
　ＨＰ　−２００（三菱化成製品）またはアンバーライ
ト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２＠　（Ｒｏｈｍ　
ａｎｄ　Ｈａａｓ　ｃｏ、、　ＵＳＡ）上でのクロマト
グラフィー、または水非混和性溶媒例えば酢酸エチルま
たはクロロホルムでの抽出、または例えばポリスチレン
ポリアミン官能性を有する交換体（例えばアンバーライ
トＩＲＡ　　６８ＣＱ−■）上で好ましくは塩基性ｐＨ
でのアニオン交換クロマトグラフィーによるのような１
種またはそれ以上の知られた方法により培養が液から得
られうる。好都合に用いられるのはダイヤイオンＨＰ−
２０への吸着、続いて例えばメタノール、アセトニトリ
ルのような適当な有機溶媒またはそれら溶媒の水性混合
物を使用しての前記化合物の脱着である。インボンフレ
キン酸を溶離するにの好ましい溶媒はＭｅＯＨ／　Ｈｚ
Ｏ（１：　ｌ　）である。活性溶出液から溶媒を除去す
ることにより粗製インポンフレキン酸が得られる。この
ものは例えばシリカゲル、７性シリカゲル、珪酸マグネ
シウムゲル例えば７０リシル（Ｆｌｏｒｉ−ｓｉｌ＠　
）　（Ｆｌｏｒｉｄｉｎ　Ｃｏ、、　Ｖａ、　ＵＳＡ）
、セルロースまたは親脂性ゲルが過物質例えばセファデ
ックス５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−２００（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉ−ｃａｌｓ　ＡＢ、　Ｓ
ｗｅｄｅｎ）のような物質でのクロマトグラフィーによ
りさらに精製されうる。この目的に好都合に用いられる
方法は溶離にＣＨＣｌ２　ｓ　／　１ＪｅＯＨ混合物を
用いるシリカゲルでの粗製インポンフレキン酸のクロマ
トグラフィーであり、その際ＭｅＯＨ濃度は各段階で約
ｌＯ％ずつ段階的に高められる必要がある。インポンフ
レキン酸を含有する溶出液（バイオアッセイにより測定
）を濃縮しそして例えば沸点４０〜６０°Ｃの石油エー
テルで磨砕するとそれにより半純粋化合物が得られる。

かくして得られた半純粋イソポンクレキン酸は変性シリ
カゲル例えば市販の製品であるＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ＠
　ＲＰ−１８（ジメチルオクタデシルシリル化シリカゲ
ル、　５０μ、　Ｍｅｒｃｋ社、　ｌ）Ｈ−ｍｓｔａｄ
ｔ）上で数回クロマトグラフィーすることによりさらに
精製されうる。Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１８物質
の溶離に適当な例えば１ＪｅＯＨ，アセトニトリル、ア
セトンまたはそれらの水性混合物のような溶媒のうち、
Ｍ　ｅ　ＯＨ／　Ｈ２０混合物が溶媒として使用される
のが好ましく、その場合ＭｅＯＨ濃度は段階的に約２５
％ずつ高められねばならない。有機溶媒は活性溶出液か
ら好ましくは真空下に除去されそして次に水を除去する
ために凍結乾燥するとそれによりインポンフレキン酸が
白色粉末として得られる。

本発明はさらにイソポンフレキン酸を含有スる薬剤にも
関する。薬剤中には前記活性化合物の他に適応症が同じ
かまたは異なる他の活性物質も含有されうる。さらに、
助剤および／または付形剤も薬剤中に含有でき、これら
が活性化合物と共に適当な投与形となされる。投与形態
は薬剤の投与様式例えば外部使用または経口使用、また
は注射により使用の如何による。

本発明による薬剤の使用量はその薬剤の投与形態および
患者の状態ならびに体重のような種々の因子の如何によ
るものであり、そして場合により経験的に計算されるべ
きである。本発明による薬剤は種々の疾患の治療に適し
、特にカビの感染により惹起されるかまたはカビの感染
が関与する疾患の治療に適する。

イソボンフレキン酸は容易に対応するトリアルキルエス
テルに変換でき、この化合物も本発明に包含される。カ
ルボン酸のカルボン酸エステルへの変換は一般に知られ
ておりそして例えばＯｒｇａｎｉｋｕｍ、　ＶＥＢ　Ｄ
ｅｕｔｓｃｈｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ　ｄｅｒ　Ｗｉｓ−ｓ
ｅｎｓｃｈａｆ　ｔｅｎ、第１５版、　Ｂｅｒｌｉｎ　
１９７７、４９６頁以下、に記載されている。エステル
官能基中に１〜４ｆｆｌｌの炭素原子を有するトリアル
キルエステルが好ましく、イソポンフレキン酸のトリメ
チルエステルにか特に好ましい。後者は例えば、インボ
ンフレキン酸をＣＨ２Ｎ２／　ＭｅＯＨ／　ＨｚＯ／ジ
エチルエーテル混合物を用い好ましくは冷却下にエステ
ル化することにより調整されうる。反応生成物は例えば
クロマトグラフィー法により精製されうる。

以下の実施例により本発明を説明する。

実施例　１ 土壌からの培養株Ｙ−８４，０７００の単離ａ）単離栄
養培地の組成 ナトリウムプロピオネート　　　　　　４ｇグリセリン
　　　　　　　　　　　　１０ｍ１ＫＨ２Ｐ０４　　　
　　　　　　　　　　　１ｇＮａ、ＨＰＯ４ｈ ｌＪｇｓｏ、　・ＩＨｚＯ１００ｍｇ Ｎ８４ＮＯ！　　　　　　　　　　　　　　　２ｇ寒天
　　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ脱ミネラル水　
　　　　　　　　　　　ＩＱフクロムフェニコール　　
　　　　　５０ｍｇｐＨ６・５ 上記栄養培地の調整終了時にタロラムフェニコールを９
５％エタノール１０ｍ１２中に溶解して加え、栄養培地
と混合する。この栄養培地を１２１°Ｃで１０分間滅菌
する。滅菌に先立ち、ｐＨを６．５に調整する。

ｂ）土壌の添加および単離 プーナ（Ｐｏｏｎａ）で収集された土壌試料を乾燥しそ
して粉砕し、たもの０．０５ｇを滅菌ペトリ皿（直径７
．６２ｃｍ　（６インチ））の中央に入れそして滅菌蒸
留水１滴で湿らせる。前記栄養培地を４５°Ｃに冷却し
、ペトリ皿に注ぎいれ（約８０ｍ（２）そして充分に撹
拌する。土壌と栄養培地の混合物を落ち着かせそして２
６°Ｃ（±１°Ｃ）で２週間インキュベートする。この
ペトリ皿を規則的間隔で検査して増殖する微生物から培
養株Ｙ−８４，０７００を単離する。

実施例　２ 培地株Ｙ−８４，０７００の培養 培養用培地の組成 培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００を下記組成のサブロー
（５ａｂｏｕｒａｕｄ）グルコース寒天上で培養する。

グルコース　　　　　　　　　　　　　　４ｈペプトン
　　　　　　　　　　　　１０９Ｎａ、ｔ（Ｐｏ、　　
　　　　　　　　　　　　１ｇ寒天　　　　　　　　　
　　　　　　　１５ｇ脱ミネラル水　　　　　　　　　
　　　１１２ｐＨ６，５ 構成分を加温により注意深く溶解させたのち溶流を試験
管に分配しそして次に１２ＦＣで２０分間滅菌する。試
験管を冷却しそして凝固するまで傾斜位置で貯蔵する。

増殖した培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００をワイヤール
ープを用い斜面寒天上に画線塗布し、これを良好な増殖
が観察されるまで２６°Ｃ（±１００）でインキニーベ
ートする。この良好に増殖した培養物を冷蔵庫に貯蔵す
る。

実施例　３ 振盪フラスコ中における培養株Ｙ−８４，０７００の発
酵 接種培地の組成 溶性澱粉　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ大豆ひさ
れり　　　　　　　　　　　　１５ｇグルコース　　　
　　　　　　　　　　　５ｇＣａＣＯ３２ｇ ＮａＣＱ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　２ｇコーンス
テイープリカー　　　　　　　　１ｇＺｎ５Ｏａ　、７
Ｈ２００，２２ｍｇ ＣａＣＱ２０．５５ｍｇ Ｍｎ（４２，４Ｈ２００，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６ｍｇ ＣｏＣ１２２，６ＨｚＯＯ，１６ｍｇ 脱ミネラル水　　　　　　　　　　　　ＩＱ滅菌前の、
）Ｈ６，５ 上記液種用培地を容ｉｔ　５００　ｍ　Ｑの広口三角フ
ラスコ中に１００ｉ（２ずつ分配しそして１２１°Ｃで
２０分間滅菌する。このフラスコを冷却し、次に前記実
施例２の良く増殖した培養物の数ループを接種しそして
２４０ｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１’０）で６０時間振
盪ずろ。それにより下記組成の生産培地を接種するため
の接種用培地が得られる。

生産培地の組成 グルコース　　　　　　　　　　　　　　ｌｈ麦芽エキ
ス　　　　　　　　　　　　　２０ｇペプトン　　　　
　　　　　　　　　１０ｇＮａ２ＨＰＯ＋　　　　　　
　　　　　　　　　Ｉｆ？ＺｎＳＯ４，７Ｈ２００，２
２ｍｇ ＣａＣｆ２２　　　　　　　　　　　　　　０．５５＋
＋＋ｇＭｎＣＱ２．４Ｈ，ＯＯ，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６＋＋＋ｇＣｏＣ４，６Ｈ
２００，１６ｍｇ 脱ミネラル水　　　　　　　　　　　　ＩＱ滅菌前のｐ
Ｈ６，５ 上記生産培地を容量ＩＱの三角フラスコに２００ｍＱず
つ分配し１２ピＣで２０分間滅菌する。フラスコを冷却
しそして前記接種培地・を接種する（１％ｖ／ｖ）。回
転振盪器上２２Ｏｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１°Ｃ）で
９０時間にわたり発酵をさせる。

インポンフレキン酸の形成はスタフィロコッカス・オー
レウス２０９　Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。

培養ブロスを収穫後遠心分離し、そしてイソポンフレキ
ン酸を培養ｊ液から単離し、そして後記のようにして精
製する。

実施例　４ 発酵器中における培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００の培
養工程Ｉ：接種培養物の調整 振盪フラスコ中 実施例３の接種培地（１００ｍ１２）を容量５００ｍＱ
の広口三角フラスコに加え、滅菌に先立ちｐＨ６，５に
調整する。次にこれをオートクレーブ中１２１°０，２
０分滅菌し、冷却し、そして実施例２の良く増殖した培
養物数ループを接種する。フラスコを回転振量器中２６
°Ｃ（土１°Ｃ）および２４Ｏｒｐｍで６０時間インキ
ュベートする。この増殖した培養物を以下に記載される
ような小さな発酵器の接種に用いる。

工程■：接種培養物の調整 小さな発酵器中 滅菌前にｐＨ６−５に調整され、泡止め剤として０．０
３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ　（
ＢａｙｅｒＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）
　１０１２を容量１５Ｑのステンレススチール製発酵器
に入れ、オートクレーブ中１２１　’Ｃで３６分間滅菌
し、冷却しそして前記工程■で得られた接種培養物１０
％（Ｖ／Ｖ）を無菌条件下に接種する。次にこの培養物
を下記パラメーターの下２４時間培養する。

温度　２６°Ｃ（±１’Ｃり 振盪　１８０−２０Ｏｒｐｍ 通気　　毎分６Ｑ ２４時間後に増殖した培養物を工程■の生産培地の接種
に使用する。

工程■：発酵 （ａ）少量 容１ｔ１５ｃのステンレススチール製発酵器中における
、滅菌前にｐＨ６，５に調整され、泡止め剤として０．
０３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ（
Ｂａｙｅｒ　ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載
）ｌｏｇをオートクレーブ中１２１°Ｃで２８分間滅菌
し、冷却しそして前記工程Ｉの振盪フラスコの増殖物か
ら得られた接種培養物ｌＯ％を無菌条件下に接種する。

次にこの培養物を下記パラメーターの下培養する。

温度　２６°Ｃ（±１’Ｃ） 振盪　１８０〜２０Ｏｒｐｍ 通気　　毎分６Ｑ 収穫　　９０時間後 （ｂ）大量 容量１５０１２の発酵器中の滅菌前にｐＨ６，５に調整
され、０．０３％（Ｖ／Ｖ）のデスモフエン（Ｂａｙｅ
ｒ　ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）１００
α、または容１３９０ｆｆの発酵器中の０．０３％デス
モフエン（Ｂａｙｅｒ　ＡＧ）を含有する生産培地２５
０Ｑをその場で１２ピＣに２８分間滅菌し、そして工程
■で得られた接種培養物１０％を接種する。

培地の最終容量： １５０α発酵器中１１０１２ ３９０α発酵器中２７５Ｑ 下記パラメーターが適用される。

温　　度　　　　　　　２６°Ｃ（±　１’Ｃ）振　　
盪　　　　　　　９０ｒｐｍ １５０Ｑの通気　毎分５０１２ ３９０Ｑの通気　毎時８ｍ３ 収　穫　　　　　９０時間後 インポンフレキン酸の形成はスタフィロコッカス・オー
レウス２０９　Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。

培養ブロスを収穫後遠心分離し、そしてインポンフレキ
ン酸を培養炉液から単離しそして以下に記載されるよう
にして精製する。

インポンフレキン酸の単離および精製 収穫したブロス約２５０１２を遠心分離することにより
菌糸体から分離する。得られる炉液（ｐＨ７，３）をダ
イヤイオンＨＰ　−２００８Ｑのカラムに通す。

この方ラムをはじめに脱ミネラル水（４０１２）で洗う
。ＭｅＯＨ／ＨｚＯ１：　ｌ　（４０（２）で溶離する
。インポンフレキン酸を含有する溶出液を、メタノール
を除去するために減圧下に濃縮する。得られる水性物質
を凍結乾燥すると暗褐色の粗製インポンフレキン酸（６
７０ｇ）が得られる。

粗製インポンフレキン酸（６７０９）をシリカゲル（細
孔寸法０．０６２　０．０３７ｍｍ　（２３０−４００
メツシユ、３　＃９）での中圧液体クロマトグラフィー
にかける。このカラムをＣＨＣｌ２ｘ　（１，５Ｑ）　
、ＣＨＣＱｓ中の５％ＭｅＯＨ（１０Ｑ）およびＣｌ１
ＣＱｆｉ中の１０％１ｊｅＯＨ（１８ｆｆ）を用い、流
速毎分１５０ｍ（２で順次溶離する。

イソポンフレキン酸はＣＨＣＱ　、中５％ＭｅＯＨで溶
出される。酸を含有する活性溶出液を減圧下に濃縮する
と暗褐色油状物（１００ｇ）が得られる。この油状物質
を石油エーテル（２Ｑ）で磨砕しそして石油エーテルを
流し去る。石油エーテルを流し去ったのちに固形残留物
（１６ｇ）が残るまでこの操作を７回反復する。この固
形褐色物質（１６ｇ）を逆相担体物質リクロソルブ（Ｌ
ｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−１８での中圧液体クロマト
グラフィーに２回かける。いずれの場合もカラムをＭｅ
ＯＨ／　Ｈ２Ｏ５０：　５０　（１５Ｑ）、　１ＪｅＯ
Ｈ／ＨｚＯ６０：　４０　（１０（２）およびＭｅＯＨ
／　ＨｚＯ７０：　３０（１５ｆｆ）を用い、流速４０
１／分で順次溶離する。７ラクシヨン１１２ずつを集め
る。中圧液体クロマトグラフィーＲＰ−１８カラムを用
いる第１回の精製においてはインボンフレキン酸がＭｅ
ａ！（／　ｕ、ｏ　７０　：３０で溶離され、一方ＲＰ
−１８カラムを用いる第２の精製ではカラムの溶離にＭ
ｅＯＨ／　Ｈ２Ｏ６０：　４０が用いられる。活性溶出
液を減圧下に濃縮して凍結乾燥すると淡褐色粉末が得ら
れる（１．８ｇ）。

かくして得られたイソボンフレキン酸を終りに第３のＲ
Ｐ−１８カラムで精製する。

酸をＭｅａｌ（／　）１２０５０　：　５０を用い流速
毎分２＋Ｊで精製しそして約２０ｍＱずつの７ラクシヨ
ンを集める。活性フラクションを合し、減圧下に濃縮し
そして凍結乾燥すると１ｇの純粋なインポンフレキン酸
が白色粉末として得られる。

インポンフレキン酸の純度はＨＰＬＣで検査するＣ４　
Ｘ　２５０＋＋＋ｍ　Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１
８カラム、溶離剤：　１ＪｅＯＨ／　＋（、ｏ　７０　
：　３０、流速：１ｍＱ／分、２３４ｎｍで検出、チャ
ートスピード：　Ｉ、０ｍｍ１分〕。そのＨＰ　Ｌ　Ｃ
パターンを第１図に示す。

インポンフレキン酸（１００ｍｇ）をＣＨ２Ｎ２／　Ｍ
ｅＯＨ／Ｈ、Ｏ／ジエチルエーテル混合物を用い０℃で
エステル化する。粗製エステルを調整用薄層クロマトグ
ラフィー〔シリカゲルプレート２０Ｘ２０ｃｍＳ厚さ０
．５ｒｎｍ、展開溶媒；　ＣＨＣｌ２３中の１．５％Ｍ
　ｅ　ＯＨ１溶離溶媒：　ＣＨ（：、Ｃ３中の５％Ｍ　
ｅ　ＯＨ’］により精製する。トリメチルエステル（１
ｂ）が無色油状物として得られる（　５９ｍｇ）。

インポンフレキン酸およびそのトリメチルエステルの物
理化学的性質を下記に示す。

外　観　　　　　白色無定形粉末　　　　油状物性　質
　　　　　酸性　　　　　　　　　中性融点　　１９０
°０（ｄ）　　　　− チルおよび石油エーテル 〔α３２０°Ｃ＋９３．７５°（ＣＯ，０１６；　　　
＋２７．７８°（Ｃ１１；　ＣＨＣｆ２３）ＭｅＯＨ／
Ｈ２０６０：　４０ 分子量　　　　　ｍ／ｚ　５５２（ｍ”３Ｎａ−３Ｈ）
”　　　ｍ／ｚ　Ｍ＋５２８（Ｅｌ）（ＦＡＢ） 分子式　　　　　ＣｚａＨｘａＯｙ　　　　　　　　Ｃ
３１Ｈ４４０７ＵＶ：λ、、、、ｎｍ　　　　２３４；
２６８（ＭｅＯＨ／Ｈｚ０　　　２３６，２６８（Ｍｅ
ＯＨ中）６：４＋２滴のＩＮ　Ｎａ０Ｈ ＩＲ：　ｙ　、、、、ｃｍ−’　　　（ＫＢｒ）３４０
０−３２００　　　　１７４５（狭い、Ｃ００ＣＨ，か
らの６．３８（ｄｄ、　Ｊ＝１６．１ｌＨｚ、　　６．
０９（ｄ、　Ｊ＝１６Ｈｚ、　ＩＨ）、１１（）、６．
０９（ｔ、　Ｊ’１ｌＨｚ、　　６．０１（ｄｄ、　Ｊ
−１６，７，５Ｈｚ。

ＬＨ）、ｓ、５９ｃｄｄ、Ｊ＝　　　　ＩＨ）、５．９
９（ｔ、　Ｊ＝ｌＩＨｚ。

１６、７．５Ｈｚ、　ＩＨ）、　　　　ＬＨ）、５．８
８（ｓ、　ＬＨ）、５．８１（ｄｔ、　Ｊ　＝１６．７
）（ｚ）、　５．６７（ｄｔ、　Ｊ＝１４．８．７Ｈｚ
。

５．７１（ｓ、　ＬＨ）、５．５１（ｍ、　　ＬＨ）、
５．３７（ｄｔ、　Ｊ＝８゜Ｊ＝６．５Ｈｚ、　３Ｈ）
　　　　　　９Ｈ）、１．９３（ｓ、　３Ｈ）、］、、
８３（ｓ、　３Ｈ）、１．００ （ｄ、　Ｊ　−６，５Ｈｚ、　３Ｈ） １４３．５７，１３９．１７．　　　　１４３．２５，
１３４．８０゜１．３６．１１，１３４．６４．　　　
　１３２．２０，１３１．７６゜１２８．４１，１２８
．２６．　　　　１２４．９４．１２４．５０゜１２７
．９６，１２７．３８．　　　　　１１・９．５２，７
８．４５゜２０．２４．１５．７７　　　　　　　１８
．７４．１２．２４上記データおよび、トリメチルイソ
ポンフレケートの’　＋（−ＮＩＪＲスペクトルにおけ
るＣ２３−Ｎ２およびＣ，−Ｈでの化学的シフトがトリ
メチルポンフレケート（Ｉｌｂ）のそれに比較して異な
っていることから殺カビ性抗生物質インボンクレキン酸
の構造（Ｉ　ａ）に関する情報が与えられる。

種々の微生物に対するＭＩＣとして表わしたインポンフ
レキン酸の生物学的性質を以下に示す。

イソポンフレキン酸のＭＩＣ 番号　　　　　　　　　試験細菌　　　　　　　　　　
　ＭＩＣ値（μガニＱ１、カンジダ・アルビカンス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）　　　　　　　　＞
１２５２、サイ力ロミセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　　＞１２５
３、酵母５０６０　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　＞１２５４、アスペルギルス・ニガー（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）　　　　　　　
　６２．５５、ペニシリウム・ジギタツム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ　ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）１３５　　６２．
５６．７サリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｃ
ｕｌｍｏｒｕｍ）１００　　　　　　７．８７、トリコ
フィトン・メンタグロフィテス　　　　　　　　　　　
　１２５（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒ
ｏｐｈｙｔｅｓ）８、　タラトスボリウム・レジネ（Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｒｅｓｉｎａｅ）　　　　　
　２５０９、　ポツリチス・シネラ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
　ｃｉｎｅｒｅａ）１６　　　　　　　　　６２．５１
０、　　ポツリテス・シネラ４７　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１５．６１１、　　ポツリテス・シ
ネう５７　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３１
．２１２、　　アルタナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａ
ｒｉａ　５ｏｌａｎｉ）５　　　　　　　６２．５１３
、　　セルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ
　ｂｅｔｉｃｏｌａ）７１　　　　　１５．６１４、　
　ピリキュラリア・オリゼ（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　
ｏｒｙｚａｅ）１５４　　　　　３１．２１５、　　ス
タフイロコツカズ・オーレウス（Ｓｔａｐｈ、　ａｕｒ
ｅｕｓ）２０９　Ｐ　　　　１２５１６、　　大腸菌（
Ｅ、　ｃｏｌｉ）９６３２　　　　　　　　　　　　　
　　　　　＞１２５

【図面の簡単な説明】

第１図はインボンフレキン酸のＨＰＬＣ分析パターンを
示す。 第２図はインポンフレキン酸のＶＶスペクトルを示す。 第３図はトリメチルイソポンフレケートのｖｖスペクト
ルを示す。 第４図はインポンフレキン酸のＩＲスペクトルを示す。 第５図はトリメチルイソポンフレケートのＩＲスペクト
ルを示す。 第６図はインポンフレキン酸の’　Ｈ−ｔＪＩＪＲスペ
クトルを示す。 第７図はトリメチルイソボンクレケ−１・の１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。 第８図はインポンフレキン酸の１３０−ＮＭＲスペクト
ルを示す。 第９図はトリメチルイソボンフレケートの１Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。 特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名 ＩＧ−１ インポンフレキン酸のＨＰＬＣ分析曲線４Ｘ２５０ｍｍ
　Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１８−カラム；溶離剤
：　Ｍ＋９０Ｈ−Ｈ２Ｏ７：３；流速１ｍｆｆ／分；Ｕ
ｖ検出：　Ａ）　２６８ｎｍ、　Ｂ）　２３４ｎｍム ＩＧ−２ インボンフレキンａ（ｌａ）のＵＶスペクトル（ＭｅＯ
Ｈ中）２０ロ　　　　　２ら０３００３４０　　　　　
　　　　　ムＤｏ　ｎｍＦＩＧ−３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する化合物。 ２）細菌培養株Ｎｏ．Ｙ−８４，０７００（ＤＳＭ４３
   ０５）、その突然変異体または変種を、炭素源および窒
   素源、ならびに無機栄養塩および痕跡元素を含有する栄
   養培地上で好気性条件下に培養しそして請求項１記載の
   化合物を常法により培養ブロスから単離し精製すること
   からなる請求項１記載の化合物の製法。 ３）培養が２４℃〜３０℃およびｐＨ６〜８で行われる
   ことからなる請求項２記載の方法。 ４）培養が約２６℃（±１℃）およびｐＨ約６．５で行
   われることからなる請求項２または３記載の方法。 ５）培養が少くとも約６６時間実施されることからなる
   請求項２〜４のいずれかに記載の方 法。 ６）培養が深部培養で行われることからなる請求項２〜
   ５のいずれかに記載の方法。 ７）イソボンクレキン酸をクロマトグラフィ一法により
   精製することからなる請求項２〜６のいずれかに記載の
   方法。 ８）請求項１記載の化合物を他の活性物質および／また
   は助剤および／または付形剤と並に含有する薬剤。 ９）殺カビ性抗生作用を有する薬剤の製造への請求項１
   記載の化合物の使用。 １０）オイバクテリウムＹ−８４，０７００（ＤＳＭ４
   ３０５）。 １１）エステル官能基中に１〜４個の炭素原子を有する
   ことからなる請求項１記載の化合物のトリアルキルエス
   テル。