JPH01190636A - 制癌作用物質複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、キャリアーと、制癌作用物質とをアルドヘキ
ソピラノース環の開裂したデキストラン（以下、開裂デ
キストランという）を介して結合させてなる癌細胞への
集積性の優れた制癌作用物質複合体に関する。

〔従来技術〕

今日、多数の制癌作用物質が制癌剤として開発され、臨
床応用されているが、これらはいずれも癌細胞に対し非
特異的であって、正常細胞に対しても毒性を有するため
、制癌剤単独による治療効果はあまり得られていない。

このことから、制癌作用物質を癌細胞に対して親和性を
有する物質（キャリアー）と結合させて複合体とし、こ
の複合体を特異的に癌細胞に到達させて制癌作用を発揮
させようとする治療法のアイデアが生まれた。この一つ
として、ｔ！、　Ｈｕｌｗｉら（Ｅｕｒｏｐ、　Ｊ、　
Ｃａｎｃｅｒ、　Ｖｏｌ、１４．１２１３−１２２０．
１９７８年）により癌表面抗原に対する抗体にデキスト
ランを介し、制癌作用を有するアドリアマイシン、ダウ
ノマイシン等を結合させた複合体が開発された。この複
合体の製法は、開裂デキストランのアルデヒド基に抗体
等のキャリアーのアミノ基と制癌作用物質のアミノ基と
を結合させるというものである。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかし、この方法で複合体を調製した場合、開裂デキス
トラン中には多数のアルデヒド基が残存しているためキ
ャリアー（一般的にはタンパク質が使用される）との過
剰の結合が起こりやすく、分子の巨大化した化合物が生
成し、目的とする複合体の収量の低下およびキャリアー
の活性の低下をきたすという問題点がある。

また、当該複合体は、一般的にその製造過程において未
反応の原料等（例えば、制癌作用物質、制癌作用物質−
開裂デキストラン）の夾雑が懸念される。

さらに、当該複合体はキャリアーの活性を低下させるこ
となくキャリアーに対する制癌作用物質の結合比を多く
すること、即ち制癌作用物質／キャリアーの値を大きく
することが望まれる。

かつ当該明複合体から制癌作用物質−開裂デキストラン
の遊離が生じにくいことが望まれる。

従って、本発明の目的は、キャリアー、制癌作用物質お
よび開裂デキストランとが効率よく反応し、高収量で製
造されうる当該複合体を提供することである。

また、本発明の他の目的は未反応の原料等の夾雑がなく
、制癌作用物質／キャリアーの値が大きく、さらに制癌
作用物質−開裂デキストランの遊離が生じにくい複合体
を提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

かかる目的を達成するために、本発明者等は、より効率
的なキャリアー・開裂デキストラン・制癌作用物質複合
体の製造方法について鋭意研究を重ねて来たところ、ス
ペーサさして使う開裂デキストランのアルデヒド基の５
〜７０％程度にアミノ酸を結合してアミノ酸で保護され
た開裂デキストランを得た後に、当該保護された開裂デ
キストランを制癌作用物質およびキャリアーと反応させ
ることによって、即ち保護された開裂デキストランの遊
離アルデヒド基と制癌作用物質とをシェフ塩基形成反応
により結合させ、また保護された開裂デキストラン上の
保護基であるアミノ酸に由来する遊離カルボキシキル基
とキャリアーとをペプチド結合反応により結合させるこ
とにより得られる当該複合体が上記の目的を達成できる
ことを見出し、さらに研究を重ねて本発明を完成するに
至った。

即ち、本発明はアルドヘキソピラノース環の開裂したデ
キストラン、制癌作用物質およびキャリアーからなる制
癌物質複合体において、開裂デキストランと制癌作用物
質との結合体と、キャリアーとがアミノ酸を介して結合
してなることを特徴とする制癌物質複合体を提供するも
のである。

本発明において開裂デキストランとしては、好適には分
子量１０００〜１０万、好ましくは１万〜７万の範囲の
ものが用いられ、下式（１）で示されるアルドヘキソピ
ラノース環の開裂した部分を１０〜１００％含むデキス
トランであることが好ましい、そのデキストランのアル
ドヘキソピラノース環の開裂は、通常酸化によって行わ
れる。酸化剤としては、過ヨウ素酸ナトリウムを用いる
ことが好ましい、たとえば、デキストラン１ｇに対して
約８０〜４０００■、好ましくは約１３０〜３０００ｇ
（特に約１３０〜２６４０ａｇ）の割合で酸化剤を添加
し、例えば１〜２４時間反応を行うことによって上記の
如き開裂デキストランを製造することができる０反応の
終了後、例えば反応液を蒸溜水に対し１０〜３０時間透
析し、好ましくは凍結乾燥を行って開裂デキストランを
得る。

開裂デキストランはその１０−１００％程度のグルコー
ス残基が開裂されていることが好ましい。

この開裂デキストラン中のアルデヒド基の５〜７０％、
好ましくは１０〜５０％程度をアミノ酸と結合させるこ
とによってアミノ酸で保護された開裂デキストランを得
る。このアミノ酸は、開裂デキストランとキャリアーと
の間を架橋する役割をもつとともに、過剰の遊離アルデ
ヒド基を保護するものである。

当該アミノ酸としては以下のようなものが例示される。

中性アミノ酸： 脂肪族アミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシ
ン、イソロイシンなど〕、オキソアミノ酸、〔セリン、
スレオニンなど〕、含硫アミノ酸〔システィン、シスチ
ン、メチオニンなど〕、芳香族アミノ酸〔フェニルアラ
ニン、チロシン、トリプトファンなど〕 酸性アミノＭ： アスパラギン酸、グルタミン酸など 塩基性アミノ酸： ヒスチジン、リジン、アルギニンなど イミノ酸残基ニ プロリン、オキシプロリンなど α−アミノ酸以外のアミノ酸： β−アラニン、６−アミノ−ｎ−カプロン酸など本発明
において、当該開裂デキストラン中のアルデヒド基のア
ミノ酸による保護は、例えば次のようにして行われる。

即ち、例えば１０〜１００％開裂デキストランの１０■
に対して、約１０〜２００μ１ｌｏｌ　の割合でアミノ
酸を（好ましくは、ＮａＢＨ，ＣＮ等の還元剤と共に）
添加し、３〜２４時間反応を行う、かくして、開裂デキ
ストランのアルデヒド基の５〜７０％がアミノ酸で保護
された化合物を得る。この際、アルデヒド基とアミノ酸
が、シッフの塩基を形成した後、還元されて２級および
３級アミン化合物が得られる。２級および３級アミン化
合物とする理由は、シッフの塩基が不安定であり、これ
を安定化させるためである。

当該保護された開裂デキストランは制癌作用物質および
キャリアーと反応させる。その際の反応順序は特に制限
されないが、好ましくは先ず制癌作用物質を反応させ、
得られた化合物をキャリアーと反応させることが好まし
い。

なお、当該保護された開裂デキストランはそのまま制癌
作用物質との結合に用いるが、反応に供するアルデヒド
基が少ない場合（例えばアルデヒド基の保護が過剰に行
われた場合、デキストランの開裂度が少ない場合等）、
新たなアルデヒド基を必要とするので、保護された開裂
デキストランは、再度酸化等の手段でアルドヘキソピラ
ノース環の開裂を行ってもよい、酸化剤の使用量は、所
望する酸化の程度に応じて適宜選択されるが、例えば保
護された開裂デキストランの１０ｅｇに対して、約１０
〜３２ＩＩＩｇに相当する量である。酸化剤の添加後、
１〜２４時間反応を行い、反応終了後、透析し、さらに
凍結乾燥し、５〜７０％程度、好ましくはｌＯ〜５０％
程度のアルデヒド基が保護された開裂デキストランを得
る。また、保護に用いるアミノ酸の量を調節することに
より再酸化の工程を省略して該化合物を得ることも可能
である。

得られた保護された開裂デキストランは、好ましくは、
先ず制癌作用物質と反応させる。

制癌作用物質は、アルデヒド基と反応性の基（例えばア
ミノ基）を有するものであればよく、また、かかる反応
性の基を有しないものについても、当該制癌作用物質に
適当な化合物を反応させてアルデヒド基と反応性のもの
に導くことによって本発明に使用しうる。好適な制癌作
用物質としては、例えば、ダウノマイシン、マイトマイ
シンＣ１アドリアマイシンなどがあげられる。保護され
た開裂デキストランと制癌作用物質との反応は、保護さ
れた開裂デキストラン１０■に対して制癌作用物質１〜
１５μｍｏ１　　（即ち、例えばアドリアマイシンとし
ては０．５〜７ｍｇ）程度を結合させることが好ましい
、当該反応に際しては、例えば有機溶媒（ジメチルスル
ホキシドなど）あるいは水性溶媒（水性溶媒としてはｐ
Ｈ６〜９の緩衝液などが挙げられ、具体的には、例えば
リン酸緩衝液などが挙げられる）、あるいは有機溶媒−
水系混合溶媒中に開裂デキストランを最終濃度的０．１
〜５Ｗ／Ｖ％、制癌作用物質を最終濃度約０．１〜５Ｗ
／Ｖ％の割合で加えて、１〜３０時間程時間窓させるこ
とが好適である。

かくして保護されたデキストラン−制癌作用物質結合体
が得られる。

このようにして得られた結合体は、ゲル濾過、イオン交
換クロマト吸着クロマトなど既知の方法で精製すること
ができる。

次いで、保護されたデキストラン−制癌作用物質複合体
とキャリアー（運搬体）との反応が行われる。キャリア
ーは制癌作用物質を癌局所に集中的に運搬するために結
合させられるものであり、従って、癌細胞と親和性を有
するものであれば特に制限はなく、例えば免疫グロブリ
ン、癌特異抗体、フィブロネクチン、トランスフェリン
、フィブロネクチン等の蛋白質形のものが好適に例示さ
れる。

具体的に、例えば癌特異抗体としては、■背低分化型腺
癌由来細胞株（ＭＫＮ−４５）を免疫原として作成され
たハイプリドーマが産生する、 ■Ｉｇクラス：ＩｇＧ＋（に）、 ■認識抗原タイプ：細胞膜表在型抗原、■癌細胞との反
応性：食道癌（ＴＥ−３）、肺癌（ＰＣ−３）、胃癌（
ＭＫＮ−４５）、胃癌（ＫＡＴＯ−１ｆｆ）、肝癌（Ｈ
ＥＫ）細胞に対して陽性を示す、 以上■〜■の特性を有するモノクローナル抗体またはそ
のフラグメントなどが例示される。

当該癌特異抗体を調製する方法は、例えば、特開昭６１
−１６７６９９号公報等に開示されている。

保護されたデキストラン−制癌作用物質結合体とキャリ
アーとの反応は公知のペプチド結合反応に準じて行えば
よい、即ち、保護された開裂デキストラン中のアミノ酸
のカルボキシル基と、キャリアーに由来するアミノ基と
を結合させる。

当該反応は、例えば遊離のカルボン酸の態様でキャリア
ーを直接反応させる方法（直接法）、あるいはカルボキ
シル基を反応性誘導体、例えば活性エステル、酸ハライ
ド（酸クロライド等）としてからキャリアーと反応させ
る方法（活性化法）によって行われる９本反応は縮合剤
の存在下に反応を行うことが好ましい。

直接法の場合、縮合剤としはて水溶性カルボジイミド（
例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミドなど）が使用され、ｐＨ６〜９の水
性溶媒（例えば、リン酸緩衝液）中で、当該結合体的０
．１〜５Ｗ／Ｖ％とキャリアー約０．１〜５Ｗ／Ｖ％と
を、０°Ｃ〜３０’Ｃで１〜３０時間程時間窓させるこ
とによって行われる。

活性化法（例えば、活性エステル化法）の場合、縮合剤
としてはカルボジイミド（例えば、ジシクロへキシルカ
ルボジイミドなど）が使用され、当該結合体と、例えば
エステル活性化剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイ
ミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジ
カルボキシイミド、ｐ−ニトロフェノールなど）とを反
応させて活性エステルとした後、当該反応が行われる。

より具体的に゛は、当該結合体０．１〜５Ｗ／Ｖ％と前
記活性化剤０．１〜ＩＯＷ／Ｖ％程度とを縮合剤の存在
下、有ｎ溶媒（ジメチルスルホキシド、ジメチルホルム
アミド、ジオキサンなど）中で、０°Ｃ〜３０°ｃ、ｉ
ｏ分〜３０時間程度反応させて活性エステルを得る０次
いで、活性エステル化した結合体と、キャリアーとを反
応させる。この場合の反応条件は、例えば次の通りであ
る。即ち、当該結合体０．１〜ＩＷ／Ｖ％に対してキャ
リアー０．０１〜ＩＷ／ｖ％（好ましくは０．０５〜０
．５　Ｗ／Ｖ％）程度の割合で、有機溶媒−水系混合溶
媒（有機溶媒としてはジメチルスルホキシドなど、水性
溶媒としてはｐＨ６〜９の緩衝液などが例示され、その
混合比としては１：９〜ｌ：１程度が例示される）中、
Ｏ℃〜３０℃で１分間〜１０時間程度の条件が挙げられ
る。

また、キャリアーの特異性（活性）を保持するべく、キ
ャリアーを保護しておくことが好ましい。

具体的には、可逆的なアミノ基の保護剤を用いてキャリ
アーのアミノ基を保護した後、このキャリアーと、開裂
デキストランと制癌作用物質からなる結合体を反応させ
る。反応後に保護基を離脱する。

このような保護剤としては、ジメチル無水マレイン酸、
無水マレイン酸、無水シトラコン酸、チオトリフルオロ
酢酸エチル、無水トリフルオロ酢酸等が挙げられる。

また、これらの方法は、Ｂｉｏｃｈｅａ、　Ｊ、　１１
６．８４３〜８４９　（１９７０）、Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏ＋、＋　１１＋　３１７〜３２２等
に開示されている。

このようにして得られた本発明の複合体は、ゲル濾過、
イオン交換クロマト、固定化抗原によるアフィニティク
ロマトなどにより精製することができる。

本発明複合体の分子量は、１０万〜３０万程度である。

また、複合体の各構成成分の結合比は、デキストラン１
１０ｆｆ１当たり制癌作用物質１〜１５μｍｏｌ、アミ
ノ酸１２〜６２μｍｏｌ程度となる割合である。

これらは開裂デキストランのアルデヒド基の各々、１〜
ｌＯ％、１０〜５０％程度に相当する。

また、制癌作用物質とキャリアーの結合比は、５：１〜
３０：１程度である。

かくして得られた本発明の複合体は、例えば除菌濾過を
行った後、分注し、凍結乾燥して乾燥製剤とされる。

本発明の複合体は、例えばヒト、ウシ、ウマ、ラット、
マウス等の温血動物（特に、哺乳類）の癌細胞に対して
特異的な親和性を有し、かかる動物の癌に対して優れた
制癌作用を示し、制癌剤として有用である。

本発明の複合体は、例えば静脈内投与、点滴静注によっ
て投与される。当該複合体は製薬上許容される賦形剤、
希釈剤等、例えば注射用蒸溜水、生理食塩液等を使用し
て、例えば注射剤、点滴剤として製剤化される０本発明
複合体の投与量は、投与対象の種類、症状、体重、年齢
等に応じて変わりうるちのであり、制癌作用物質として
アドリアマイシンを使用した場合には、−瓜的には成人
１日当たり１０〜１５００■（例えば、アドリアマイシ
ンとして１０〜３００■）程度の本発明複合体を適当な
溶媒０．５〜５００ｉｄに溶解し、１日１回または数回
に分けて投与される。

〔効果〕

本発明複合体は、キャリアー（蛋白質）と開裂デキスト
ランとがペプチド結合しているので、通常のアミド化反
応によって得られる。即ち、本発明複合体は、その製造
過程において反応のコントロールが行われ易く、その原
料化合物の過剰の結合による凝集が生じにりく（即ち分
子の巨大化した副生物の夾雑が少なく）高収率で得られ
うるちのである。

また、本発明複合体は、その製造過程において未反応の
原料等（例えば、制癌作用物質、制癌作用物質−開裂デ
キストラン）の夾雑が少な（、しかも制癌作用物質／キ
ャリアーの値が大きく、かつ本発明複合体からの制癌作
用物質−開裂デキストランの遊離が生じにくいという効
果を有する。

本発明複合体は、癌のターゲツティング療法として極め
て有用と考える。

〔実施例〕

本発明をより詳細に説明するために、実施例を挙げるが
、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない
。

実施例１ １）デキストランの酸化 デキストラン（分子量７万）を５ｇ秤量後、４５０ｄの
蒸溜水に熔解しメタ過ヨウ素酸ナトリウム溶液（Ｎａ１
０４６．６ｇを含む）５０ｍｌを添加、暗所室温にて５
時間反応を行い、デキストランＴ−７０のグルコース残
基を酸化した。この反応液を一夜透析後、凍結乾燥を行
い５０％開裂デキストランを得た。

２）グリシンによる保護 この開裂デキストランＩｇを秤量後、１ＯＯＩｄの５０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）に溶解し、グリシン６
９５■を固体のまま添加し、開裂デキストランのアルデ
ヒド基とグリシンのアミノ基をシッフ塩基にて結合、同
時にシアノ水素化ホウ素ナトリウム５８３■を含む水溶
液１０ＩＲ１を添加、室温で−夜撹拌し、生じたシッフ
塩基を還元した。この反応液を水に対し一夜透析し、残
存のグルコース残基を酸化するためＮａｌ０ｓ２．７ｇ
を添加、暗所室温にて５時間撹拌後、水に対し透析、凍
結乾燥を行い、５０％がグリシンにより保護された開裂
デキストランを得た。

３）アドリアマイシンの結合 ２）で得た開裂デキストラン（５０％のアルデヒド基を
グリシンにより修飾したもの）４０ｍｇを秤量し５００
　ｐｇのジメチルスルホキシドに溶解した。この溶液に
アドリアマイシン１０■を含むジメチルスルホキシド溶
液５００μｇを添加、室温下（２５°Ｃ）２００時間反
応行った。その後、この反応液に５０ｍＭリン酸緩衝液
（ρ１１７．５）２ｍを加え再び３時間反応を行いアド
リアマイシン−開裂デキストラン−グリシン複合体の粗
成物を得た。

この粗成物溶液３Ｉｄにエタノール１２ｄ加え撹拌した
後、９０００ｇＸＩＱ分間の遠心分離を行った。得られ
た沈澱を１２ｄのエタノールで２回洗浄、減圧下で乾燥
後、このものを精製アドリアマインンー酸化デキストラ
ン−グリシン複合体とした。

４）活性エステル化 アドリアマイシン−開裂デキストラン−グリシン複合体
５００ｍｇをジメチルスルホキシド′−ジメチルホルム
アミド混合（３１）液Ｌ５ｍｌに溶解、水冷後、ジシク
ロへキシルカルボジイミド７０３．６■（３，４１ａ＋
ｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌、更にＮ−ヒドロキシス
クシンイミド４２８．２ｍｇ（３，７２Ｈｏｔ）添加し
、３０分間撹拌を行った。その後、反応温度を室温に戻
し、更に２０時間撹拌した。

反応終了後、反応溶液中に生じた白色法Ｒを１ＩＧ５ガ
ラスフイルターを用い吸引濾別し、その濾液（約１５ｄ
）にエーテル４００ｉを加えた。生じた沈澱を１１０５
ガラスフイルターにて速やかに濾取し更にエーテル５０
０ｉｄで沈澱を洗浄、減圧下デシケータ−にて乾燥し活
性エステル体５８８■を得た。

５）ＩｇＧ中のアミノ基の保護 ２．３−ジメチル無水マレイン酸（ＤＭＡ）によるＩｇ
Ｇの保護は下記の如く行い、ＤＭＡの添加量はＩｇＧ中
のリジン残基数を全７ミノ基残基の約７％と仮定しリジ
ン残基数の３０倍量を使用した。即ちｒｇｃｔｏｏ＊を
１６＋ｄの１００ｍＭホウ酸緩衝液に溶解し水冷下、攪
拌しながら２，３−ジメチル無水マレイン酸（２００■
／ａｄ　　ｄｉｏｘａｎ）溶液を６２５μＮ添加、０．
ＩＭ　　ＮａＯＨにてｐＨを８．５に維持した。−時間
反応の後、この反応液をゲル濾過に供し、アミノ基保護
１ｇＧを得た。

得られた２、３−ジメチルマレイル化［ｇＧ（１００倍
希釈溶液）の２８０ｎｓおよび２５Ｏｎ＋ａの吸光度を
測定し下記の結果を得た。

２．３−ジメチルマレイル化ＩｇＣの吸光度分析Ｓａｍ
ｐｌｅ　　　　　　２Ｂ０ｎｍ　　２５（ｌｎｍ　　２
Ｂ０ｎｍ／２５０ｒｖ未処理　ｒ　ｇ　Ｇ　　　０．２
Ｂ３　　０．１０４　　２．７０アミノ基保護　　　０
．３４７　　０．４６９　　０．７４ｇＧ ２．３−ジメチルマレイル化１ｇＧの回収率は９５．１
％であった。

６）複合体の調製 ４）の活性エステル体のジメチルスルホキシド溶液（４
０■／ｄ）およびアミノ基を保護した！ｇＧ溶液（１０
０■／１ｄ）を調製した。

活性エステル体溶液０．４ｍ１ｇＧ溶液０．１　ｄ、ジ
メチルスルホキシド０．８　ｍおよび５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７，５）　１．７　ｔｄからなる組成におい
て反応（室温、−晩）を行い、５０ｍリン酸緩衝液ｐＨ
６，０中４°Ｃで一夜放置、ジメチルアミノ基の脱保護
を行った後、メンブランフィルタ−（東洋口紙ＵＫ−２
００）にて精製を行い、アドリアマイシン−開裂デキス
トラン−グリシン−ＩｇＧ複合体を得た。精製アドリア
マイシン−開裂デキストラン−ＩｇＧ複合体の調製にお
いてアドリアマイシンの回収率は８９％、ＩｇＧの回収
率は９６％であった。

複合体の分子量は２３０，０００であり、その結合比は
、ｔｇｃ抗体１分子当たりデキストランが１分第２表　
ヒト由来株化癌細胞に対する反応性子、アドリアマイシ
ンは３０であった。

なお、高速ゲルろ過分析（担体：　　Ａｓａｈｉｐａｋ
　ＧＳ・５１０）にて測定したところ、目的とする複合
体からのアドリアマイシン−開裂デキストランの遊離は
無かった。

また、粗反応生成液中におけるアドリアマイシン−酸化
デキストランの夾雑率は５％以下であり、アドリアマイ
シンの夾雑率は０．３％以下である。

実施例２ （１）モノクローナル抗体の調製 免疫原として背低分化型腺癌由来細胞株（ＭＫＮ−４５
）を用い、特開昭６１−１６７６９９号公報に記載の手
法に準じてモノクローナル抗体を調製した。その特性を
第１表、第２表に示す。

第２表のづづき ＣＥＬＩＳＡ反応性は、土は反応陽性と判定される測定
検体の程度で示した。−は陰性を示した。

なお、ＣＥＬ　Ｉ　ＳＡ法における０Ｄ−ｖ。値は、−
７０，０５未満 ＋　：　０．１以上０．４未満 である。

（２）複合体の調製 ２．３−ジメチル無水マレイン酸（ＤＭＡ）によるモノ
クローナル抗体の保護は下記の如く行い、Ｄ　Ｍ　Ａの
添加量はモノクローナル抗体中のりジン残基を全アミノ
基残基の約７％と仮定しリジン残基数の９倍量を使用し
た。即ち、モノクローナル抗体８０■を１６−の１００
ｍＭホウ酸緩衝液に溶解し、水冷下、撹拌しながら２．
３−ジメチル無水マレイン酸（２００■／ｍｌ　　ｄｉ
ｏｘａｎ）　？ｇ液を１５０ａｆ添加、０．１Ｍ　　Ｎ
ａＯＨにてｐＨを８．５に維持した。１時間反応の後、
この反応液をゲルろ過に供し、アミノ基保護モノクロー
ナル抗体を得た。

得られた２、３−ジメチルマレイル化モノクローナル抗
体（１００倍希釈溶液）の２８０ｎｍおよび２５０ｎｍ
の吸光度を測定し、下記の結果を得た。

２．３−ジメチルマレイル化モノクローナル抗体の吸光
度分析 未処理　抗体　　　　０．１６０　　０．０６４　　２
．５４２．３−ジメチルマレイル化モノクローナル抗体
の回収率は９７．１％であった。

実施例１の活性エステル体１０ｇをジメチルスルホキシ
ド２−に溶解し、この溶液０．８　ｍを前記（１）のモ
ノクローナル抗体５１１１ｇを含む５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐ）１７．５　）　１．２　ｄｌに撹拌しながら添
加した。

４°Ｃで５分間反応させた後、さらに室温で５時間反応
させた。この後、ｐＨ６，ｏのリン酸緩衝液中４℃、−
夜脱保護を行い、ゲルろ過により精製を行った。アドリ
アマイシン−開裂デキストラン−グリシン−モノクロー
ナル抗体複合体を得た。精製アドリアマイシン−開裂デ
キストラン−モノクローナル抗体複合体調製においてア
ドリアマイシンの回収率は９３％、モノクローナル抗体
の回収率は９５％であった。使用したモノクローナル抗
体に対する相対的抗体価は９３％残存していた。

複合体の分子量は約２２０．０００　、モノクローナル
抗体１分子当たりのデキストランの結合比はｌであり、
アドリアマイシンの結合比は３３であった。

なお、高速ゲルろ過分析（担体：　Ａｓａｈｉｐａｋ　
ＧＳ・５１Ｏ）にて測定したところ、目的とする複合体
からのアドリアマイシン−開裂デキストランの遊離は無
かった。

また、粗反応生成液中におけるアドリアマイシン−開裂
デキストランの夾雑率は５％以下であり、アドリアマイ
シンの夾雑率は０．３％以下である。

実施例３ １）デキストランの酸化 デキストラン（分子１１万）を５ｇ秤量後、５００Ｉｄ
の蒸溜水に溶解し過ヨウ素酸ナトリウム２０ｇを添加し
て暗所・室温下５時間反応を行い、デキストランＴ−１
０のグルコース残基を全て酸化した。この反応液を水に
対して一夜透析後、凍結乾燥を行い１００％開裂デキス
トランを得た。

２）グリシンによる保護 １）で得られた１００％開裂デキストラン１ｇを秤量後
１００ｍの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）に溶解
し４８０■のグリシンを１０ｍ１の水に溶解後、先のデ
キストラン溶液に添加した。続いてシアノ水素化はう素
ナトリウム４８０■をそれぞれ添加し、室温下５時間の
撹拌を行い、得られた反応液を水に対して透析、凍結乾
燥を行い５０％開裂デキストランを得た。

３）アドリアマイシンの結合 制癌剤としてアドリアマイシンを用い、このものを２．
５ｍｇ（４，５μ■ｏｌ）秤量後、先に調製した開裂デ
キストラン（５０％のアルデヒド基がグリシンにより修
飾されたもの）１０■と実施例１に準じて反応を行った
後、ゲル濾過により精製してアドリアマイシン−開裂デ
キストラン−グリジン複合体を得た。

４）複合体の調製 実施例２に準じて行い、同様にアドリアマイシン−開裂
デキストラン−グリシン−モノクローナル抗体を得た。

アドリアマイシンの回収率は７３％、モノクローナル抗
体の回収率は９２％であった。

得られた複合体は分子量的２００，０００であり、結合
比はアドリアマイシン／モノクローナル抗体は２２、デ
キストラン／モノクローナル抗体で５であった。また、
相対的抗体価は７１％が残存していた。

なお、分子量はゲル濾過法く担体：　Ｔ　Ｓ　Ｋｇｅｌ
Ｇ４０００ＳＷ（東洋曹達社）〉によって、アドリアマ
イシン量は４９５ｒ＋ｍの吸光度によって、グリシン量
はケルプール法によって測定した。

なお、ゲルろ適法（担体：　Ｔ　Ｓ　Ｋｇｅｌ　Ｇ４０
００ＳＷ）にて測定したところ、目的とする複合体から
のアドリアマイシン−開裂デキストランの遊離は無かっ
た。

また、粗反応生成液中におけるアドリアマイシン−開裂
デキストランの夾雑率は５％以下であり、アドリアマイ
シンの夾雑率は１％以下である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）アルドヘキソピラノース環の開裂したデキストラ
   ン、制癌作用物質およびキャリアーからなる制癌作用物
   質複合体において、開裂デキストランと制癌作用物質と
   の結合体と、キャリアーとがアミノ酸を介して結合して
   なることを特徴とする制癌作用物質複合体。（２）アル
   ドヘキソピラノース環の開裂したデキストラン１分子中
   の５〜７０％のアルデヒド基が保護されていることを特
   徴とする請求項（１）記載の制癌作用物質複合体。 （３）制癌作用物質がアドリアマイシンまたはダウノマ
   イシンである請求項（１）記載の制癌作用物質複合体。 （４）キャリアーがガンマグロブリン、癌モノクローナ
   ル抗体、フィブロネクチン、トランスフェリン、フィブ
   リノーゲンから選ばれる少なくとも一種である請求項（
   １）記載の制癌作用物質複合体。