JPS60226819A - フイブロネクチン複合体 - Google Patents

フイブロネクチン複合体

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JPS60226819A
JPS60226819A JP59084418A JP8441884A JPS60226819A JP S60226819 A JPS60226819 A JP S60226819A JP 59084418 A JP59084418 A JP 59084418A JP 8441884 A JP8441884 A JP 8441884A JP S60226819 A JPS60226819 A JP S60226819A
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Japan
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fibronectin
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dextran
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Masao Kagitani
鍵谷　昌男
Yasuo Ueda
上田　泰生
Koji Munechika
公司 棟近
Satoshi Morimoto
聡 森本
Shiro Yoneda
米田　史朗
Kenji Tanaka
憲次 田中
Kazumasa Yokoyama
和正 横山
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
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    • C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明は新規フィブロネクチン、アドリアマイシン又は
ダウノマイシンとフィブロネクチンとの複合体の製造法
に関する。さらに詳しくは、癌細胞への親和性の高いフ
ィブロネクチンにアドリアマイシン又はダウノマイシン
を結合させたフィブロネクチン複合体の製造方法に関す
る。
〔技術水準・技術的課題〕
各種の制癌剤を全身的に投与し、癌細胞を死滅させるこ
とは通常の方法である。この場合、制癌剤が全身的に分
布するため、効果を発揮するに十分な濃度を得るために
は大量投与せざるを得ないのが現状である。
ところが、制癌効果が発現する投与量と副作用が発現す
る投与量が近接していることが多く、制癌効果が期待さ
れるにも拘らず、副作用の発現により投与を中止せざる
を得ないことになり、不幸な結果となることが多い。こ
れを防止するためには、換言すれば、効果の発現濃度と
副作用発現濃度に差をつけるためには、癌細胞に制癌剤
を特異的に集積させることが必須である。
発明者らは局所に特異的に生理活性物質を集積するため
には、癌細胞に親和性の高い物質を運搬体とし、治療薬
を高濃度に局所に運搬させるべきと考え、研究を重ねて
きた。
ところで、かかる運搬体として癌特異抗体を用いる例が
既に知られている。この場合、目的とする癌が運搬体と
して用いた抗体に対して特異的な抗原を保持していなけ
れば、特異的な集積は生しない。すなわち、非常に限定
されたものしか有用性を発揮しない欠点がある。また、
かかる抗体の多くはヒトにとって特異蛋白であり、人に
投与するに当たっては抗原性の問題がある。
本発明者らは人為的に投与したフィブロネクチンが癌細
胞に特異的に集積することを見い出したが、これを運搬
体とすれば、生体側における特異抗体といった特異性に
関係なく治療薬が目的とする疾患部位に集積され、治療
係数（毒性量／有効量）を改善することができると考え
られる。
〔発明の開示〕
かかる観点から、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、
フィブロネクチンとアドリアマイシン又はダウノマイシ
ン（以下、これらを制癌作用物質と総称することもある
）をデキストランを介して結合させて得た複合体が、そ
れぞれの薬物単独投与に比べて治療係数が著しく改善さ
れることを見い出すと共に当該複合体の製造方法を確立
することによって本発明を完成した。
従って、本発明は制癌作用物質とフィブロネクチンとを
デキストランを介して結合させることを特徴とするフィ
ブロネクチン複合体の製造方法に関するものである。
フィブロぶクチンは研究者により種々の名称で呼称され
ている。柄崎修−：蛋白質・核酸・酵素、２５巻１０号
、８９０〜９０５頁、１９８０年にみられるようにｃｏ
ｌｄ　１ｎｓｏｌｕｂｌｅ　ｇｌｏｂｕｌｉｎ、　ＬＥ
ＴＳｐｒｏｔｅｉｎ、　ｏｐｓｏｎｉｃ　ｐｒｏｔｅｉ
ｎ、　ｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　ｐｒｏｔ−ｅｉｎ等
の別呼称があるが、本発明に使用し得るフィブロネクチ
ンばどの名称で呼ばれているものでも良い。フィブロネ
クチンは、たとえば細胞表面、細胞外基質内および血漿
内に存在しているもので、一般にこれらより採取精製さ
れたもので、ダイマーが主たる成分であり、モノマーも
含んでいる。
その性状等は次の通りである。
主画分の易動度：α２−グロブリン、主分画の分子量；
４．３〜４．５Ｘ１０５、等電点：５．３〜６゜０、糖
含量：約５％、基質蛋白質としての性質：ＰｐｃＬｏｒ
■因子によりフィブロネクチン相互間及びフィブリンα
鎖との間に架橋を形成する。
本発明にて使用されるデキストランは、特に限定される
ものではなく、好適には分子量１０００〜２００万の範
囲１のものが用いられる。当該デキストランは、酸化デ
キストラン、即ち、下式で示されるアルドヘキソピラノ
ース環の開裂したデキストラン として、本発明に供される。
本発明の複合体を製造するに当たっては、酸化デキスト
ラン、制癌作用物質及びフィブロネクチンとを同時に反
応させる方法（第１法）、まず酸化デキストランと制癌
作用物質とを反応させておき、次にフィブロネクチンを
反応させる方法（第２法）、まず酸化デキストランとフ
ィブロネクチンとを反応させ、次に制癌作用物質を反応
させる方法（第３法）のいずれでもよいが、好ましくは
第２法が用いられる。
本発明の製造法の一例の概略は次の通りである。
デキストランのアルドヘキソピラノース環の開裂は、通
常酸化によって行われる。酸化剤としては、過ヨウ素酸
ナトリウムを用いることが好ましい。例えば、デキスト
ラン５００ｍｇに対して、約１００〜１４００＋ｎｇの
酸化剤を添加し、５〜２４時間反応を行う。反応の終了
後、例えば反応液を蒸留水に対し１０〜３０時間透析し
、好ましくは凍結乾燥を行って酸化（開裂）デキストラ
ンを得る。
酸化デキストランとダウノマイシン又はアドリアマイシ
ンとの反応に際して、酸化デキストラン１分子に対して
ダウノマイシン又はアドリアマイシン２〜２００分子を
結合させることが好ましく、かかる比とするためには、
例えばｐＨ６〜９において水性溶媒（好ましくは、リン
酸緩衝液）中に開裂デキストランを最終濃度約０．０５
〜ｌＱｗ／ｖ％、ダウノマイシン又はアドリアマイシン
を最終濃度約１〜ｌＱｗ／ｖ％加えて、５〜１５時間程
度反応させることが好適である。かくしてデキストラン
、制癌作用物質複合体が得られる。未反応の制癌作用物
質は、例えばトヨパールＨＷ４０などによる分子ふるい
クロマトグラフィー、その他自体既知の手段にて除去さ
れる。
当該デキストラン−制癌作用物質複合体にフィブロネク
チンを結合させるに際しては、当該複合体１〜３０ｗ／
ｖ％を含有する反応液に、フィブロネクチンを最終濃度
が例えば０．１〜３　ｗ　／　ｖ％になるように添加し
、冷所で１２〜４０時間反応させる。
このようにして得られた本発明に関する複合体は、ゲル
濾過担体イオン交換樹脂、ゼラチン−セファロースなど
にアプライして精製することができる。
かくして得られた複合体は、例えば除菌濾過を行った後
、分注し、液状凍結晶あるいは凍結乾燥した乾燥製剤と
される。
か（して得られた複合体におけるフィブロネクチンと制
癌作用物質との結合モル比は、フィブロネクチン：制癌
作用物質−１：２０〜１００である。
本発明にて得られる複合体は、癌細胞に効率よく集積す
るので、正常細胞に対する毒性が極めて低いものである
。従ってその治療係数が低く、溢血動物（ヒト、ウシ、
ウマ、ラット、マウス、イヌなど）の制癌剤として有用
なものである。
本発明で得られた複合体の臨床使用における投与量およ
び投与方法は、１０〜３００ｍｇの本品を日本薬局方生
理食塩液０．５〜５ｍｌに熔解し、年齢、症状および経
過に応じて、適宜加減して静脈内投与、点滴静注、点滴
注射として用いる。
実施例１ デキストラン（分子量１０，０００）　０．５　ｇを精
製水に溶解し、過ヨウ素酸ナトリウム０．６４ｇを加え
た後、暗所で３時間反応させた。反応後、この反応液を
水に対して十分透析した後、凍結乾燥し、５０％酸化デ
キストランを得た。
５０％酸化デキストラン１０ｍｇに対してアドリアマイ
シン１０ｍｇを加え、５０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液（
ｐＨ８，０）に熔解した。室温下２時間放置の後、ゲル
濾過により未反応のアドリアマイシンを除去した。得ら
れたデキストラン−アドリアマイシン複合体にフィブロ
ネクチンの］ＯｍＭリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７，５
）　（２０ｍｇ／ｍｌ）　１０ｍ１を加え、超音波で攪
拌しながら３時間反応させた。この反応液をゼラチンセ
ファロースカラム（φ２．５ｃｍＸ２０ｃｍ）にアプラ
イした。このカラムを同緩衝液で十分洗浄した後、８Ｍ
尿素にてゼラチンセファロースに吸着した両分を溶出さ
せた。
この両分をリン酸緩衝生理食塩液に対して十分透析して
、目的とするアドリアマイシン−デキストラン−フィブ
ロネクチン複合体（結合モル比ニアトリアマイシン／フ
ィブロ７クチンー５４／１）を得た。
実施例２ 実施例１で得た５０％酸化デキストラン１０ｍｇに対し
てダウノマイシン１０ｍｇを加え、リン酸緩衝生理食塩
液（ｐｌ＋　８．０　’）に溶解した。室温下２時間放
置の後、さらにグリシン１ｍｇを加えた。この反応液に
フィブロネクチンのリン酸緩衝生理食塩液（２０ｍｇ／
ｍｌ）　１０ｍｌを加え、超音波で攪拌しながら３時間
反応させた。この反応液をゲル濾過により低分子画分を
除き、さらに実施例１と同様にゼラチンセファロースカ
ラムによりゼラチンに親和性のある両分を８Ｍ尿素によ
り溶出させ、ｌ］的とする両分を得た。この両分をリン
酸緩衝生理食塩液に対して十分透析し、目的とするダウ
ノマイシン−デキストラン−フィブロネクチン複合体（
結合モル比：ダウノマイシン／フィブロネクチン−８０
／ｉ）を得た。
実験例１ 実施例１．２で得たアドリアマイシン−フィブロネクチ
ン複合体及びダウノマイソンーフィブロ不りチン複合体
の抗腫瘍活性を次の方法で測定した。
吉川肉腫の細胞１０６個をドンリュウラノト皮下に移植
し、移植第４日より薬剤を１日１回連続４日間、静脈内
投与し、移植第１１日日に腫瘍重量を測定した。その結
果を第１表に示す。
（以下余白）

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. アドリアマイシン又はダウンマイシンとフィブロネクチ
    ンとをデキストランを介して結合させることを特徴とす
    るフィブロネクチン複合体の製造方法。
JP59084418A 1984-04-25 1984-04-25 フイブロネクチン複合体 Pending JPS60226819A (ja)

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EP0160521A3 (en) 1986-12-10
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EP0160521A2 (en) 1985-11-06
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KR850007433A (ko) 1985-12-04

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