JPH01117867A

JPH01117867A - イミダゾール誘導体

Info

Publication number: JPH01117867A
Application number: JP62273209A
Authority: JP
Inventors: Satoru Ito; 哲伊藤
Original assignee: Fujirebio Inc
Current assignee: Fujirebio Inc
Priority date: 1987-10-30
Filing date: 1987-10-30
Publication date: 1989-05-10

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、化学発光現象を利用し、微量分析に用いられ
るイミダゾール誘導体に関するものである。

〔従来の技術〕

発光現象は、生物発光、化学発光に大別できる。

生物発光においては、ホタル類に含まれるルシフェリン
−ルシフェラーゼに代表される生物発光系があり、発光
効率も高いものである。これを利用するためには大ｔＫ
純度の高いルシフェリンが必要であるが供給する事が雌
しく、又酵素を利用するため、その安定性にも問題が多
く実用化の障害となりている。

化学発光を゛示す物質は、緊急非常灯、釣シ用灯、舞台
芸術用灯として広く活用されている。又、−方医学生物
学分野に於ても、微量分析法への応用を目指し、発光効
率の高い誘導体の合成が試みられ、そのものの実用化へ
の研究が進められてきた。

現在までに実用化研究が進められてきた化学発光物質ハ
、ルミノール、ルシｒニン、ロフィン（２，４，５−）
リフェニルイミダゾール）などがある。ルミノールは生
物発光に比べて発光効率は劣るが、大量合成、安定性、
誘導体の合成においてはすぐれておシ、化学発光機構な
どの研究も進んでいる（　）１．Ｒ，５ｃｈｒｏ＊ｄ＊
ｒ　ｆｔｌ！　、　Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｅｍ、、　２７゜
１３７８　〜１３８４　　（Ｉ９８１）　　、　　Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ５７　、
４２４〜４４５　（Ｉ９７９））。また、ルシｒニンも
、その合成法、発光波長の点で未だ改良の余地を多く含
んでいる。ざらにロフィンは、最も古くから知られてい
たものの反応機構の解明に向けての研究のみで実用、応
用化のための研究はほとんど行なわれていなかりた。（
Ａ、Ｍ、　Ｄｏｎａｌｄ、　Ａｎａｌ。

Ｃｈｅｍ、、　　５１．　２０７７〜２０８２　（Ｉ９
７９）　）。

〔発明が解決しようとする問題点〕これら化学発光を示す化合物の微量分析への応用は種々
試みらｎてきたが、発光強度、発光波長において未だ満
５足できるものではなかった。さらに目的とする化合物
は分析するタン・９り質、高分子物質への共有結合によ
るラベル化のための官能基をもつ化合物であることが望
ましく、このためイソルミノールなどが用いらｎている
ものの不充分であった。このため医学生物学の微量分析
の分野において、発光強度が強く、タンパク質や高分子
物質へのラベル化が可能な化学発光を示す化合物の出現
が望まれていた。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者等は、従来の欠点を克服すべく検討した結果、
従来の化合物より、長波長での発光能を有し、かつその
効果が高く、更に、容易に種々タンパク質や高分子物質
の官能基と共有結合を形成しやすい本発明を見出し、完
成した。

本発明は、ロフィン骨格を有し、化学発光によるラベル
化が可能な官能基を有する一般式（Ｉ）（式中Ｘ及びＹ
ｆｉ、同−又は異なり、いずれも、水素原子、低級アル
キル基、ジメチルアミノ基、低級アルコキシ基又は７１
０ｒン原子を表わし、２を表わす。Ｒは、−（ＣＨ２）
ｍ−ＣＯＯＲ１，−（’　ＣＨ２）、−ＮＨ２又は−（
ＣＨ２）ｒｎ−Ｘｌ　＊　ｎ　＊　ｍは０〜１０であり
、す、Ｘ、はハロダン原子を表わす。）で表わされるイミダゾール誘導体に関するものである。

一般式（Ｉ）で表わされるイミダゾール誘導体は以下の
方法で合成される。

ベンジル訪導体（ＩＱ（式中、Ｘ及びＹは同−又は、異なり、水素原子、低級
アルキル基、ジメチルアミノ基、低級アルコキシ基又は
ハロダン原子を表わす。）とベンズアルデヒド誘導体（
ＩＩＩ）又は−（ＣＨ２）ｎ−Ｒを表わす。

Ｒは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ４、−（ＣＨ２）ｒｒｌ
−ＮＨ２υ −（ｃｎ２）ｒｒｌ−ｘ、　　＋　　ｎ　ｒ　Ｉ’ｎは
０〜１０でアリ、ＲｌＨＸ、はハロゲン原子を表わす。

）とを、アンモニア又は、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモ
ニウムなどのアンモニウム塩存在下反応を行なう。反応
に用いられる溶媒としては、ギ酸、酢酸などの有機酸が
用いられ、反応温度は常温から還流温度まで用いられる
。

反応液から目的物の精製においては、通常用いられる有
機溶媒を用いた抽出、例えばシリカダルを担体とし九カ
ラムクロマトグラフィーなどを組み合わせて用いること
ができる。

本発明の原料は工業的に入手容易な化合物であり、化合
物（ＩＩ）及び（Ｉ［Ｄで表される化合物において、置
換基Ｘ及びＹは、０位９ｍ位及びｐ位のいずれでもよく
、水素原子、Ｃ１〜Ｃ３の低級アルキル基、ジメチルア
ミノ基、Ｃ１〜Ｃ３の低級アルコキシ基、フッ素、塩素
、臭素及びヨウ素のハロゲン原子を表わす。

また置換基２は０位、ｍ位及びｐ位のいずれでもよＨ−
（ＣＨ，）ｎ−Ｒを表わす。Ｒは　−（ＣＨ２）ｒｒ、
−ＣＯＯＲ，。

−（ＣＨ２）ｍ−８Ｈ又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｘｌ、の基
を表わす。ｎ、ｍはＯ〜１０であり、Ｒ１は、水素原子
、ニトロ基の置換位置は０位９ｍ位及びｐ位のいずれで
もよいフェニル基又は、ベンジル基であり、Ｘ、はフッ
素、塩素、臭素及びヨウ素のハロゲン原子を表わす。

本発明の一般式（Ｉ）で表わされる化合物において、タ
ンパク質などの官能基を有する物質との反応は、Ｒが−
（ＣＨ２）ｒｎ−ＣＯＯＲ１基のようなカルＲキシル基
又はそのエステル肪導体のとき、タンパク質のアミノ基
を利用して通常のペプチド合成反応と同様に縮合剤の存
在下又はこのエステルのまま反応を行ないアミド結合を
形成することができる。ま九、Ｒが−（ＣＨ２）ｒｎ−
ＮＨ２のときはタンノぐり質のカルフキシル基又はその
誘導体と上記と同様に反応を行なうことができる。さら
に以下式（Ｉ）に示すように、ジグリコール酸無水物と
の反応によシ、カル？ン酸誘導体に変換できる。

式１゜ υ （ｍは０〜１０を表わす） υ 体は、飽水ヒーラジンを用いアミノ基に変換できる。さ
らにＲが−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ，）ｍＳＨの
場合、カップリング試薬を用い官能基と結合することが
できる。

このように、ラベル化する種々のタンノ譬り質や高分子
物質の官能基の種類によシ一般式（υの化合物を適宜選
ぶことができる。

〔作用〕

一般式（Ｉ）で示されるイミダゾール誘導体における発
光条件は、活性酸累種として分子状酸素、過酸化水素、
次亜塩素酸ソーダ等の活性酸素発生が可能な化合物が単
一又は混合して用いることができる。さらに溶媒として
は緩衝液、水酸化カリウムを含むアルコール水溶液、塩
基を含むジメチルスルホキシド溶液等込ｌ混ざシうる溶
媒を塩基性条件下で使用することが好ましい。

発光量の測定において、イミダゾール誘導体としては次
式に示す（ＩＶ）　（Ｖ）、比較としてイソルミノール
を用いた。

イミダゾール誘導体の発光量の測定は、エタノール中水
酸化カリウム、３％過酸化水素水、を用い次亜塩素酸を
添加して発光させた。イソルミノールは、エタノール中
水酸化カリウム、フェリシアン化カリウム存在下、３％
過酸化水素水で、うＲサイエンス社ＴＤ−４０００フォ
トルミノメータ−を用い測定した。結果として、（ＩＶ
）はイソルミノールと比べ優れた発光能を示した。

結果を図−１に示す。縦軸は、カウント数、横軸はモル
濃度を表わし、○は化合物（Ｉ’／）、Δは化合物（Ｖ
）、口はイソルミノールを表わす。

実施例１６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ペ
ンノルエステルノ合成ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド２．４１をジメトキシ
エタン（ＤＭＥ　）　５０　ｄにとかし、無水炭酸カリ
ウム２．９３＃、６−ブロモヘキサン酸ベンジルエステ
ル６．０３１を加え１５時間加熱還流する。

反応後、冷却しエーテルで抽出、水洗後、乾燥、溶媒を
留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーでｆ［
Ｌ、６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ベンジ
化エステルを油状物として得た。

収量４．３６Ｆ（収率６７％）。

実施例２　６−（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イ
ミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサン酸ベンジ
ルエステル（Ｍの合成ベンジル１．５４１１．６−（４−ホルミルフェノキシ
）ヘキサン酸ベンジルエステル２．３７１１を酢酸６９
ｍ１に溶かし、酢酸アンモニウム１３．Ｆを加え１１０
℃で１時間反応させた。氷水６００ｄＫ反応物をそそぎ
、−アンモニア水約１２５Ｍを加え、ｐＨ７，５とし、
酢酸エチルで抽出、有機層を水洗後、乾燥した後、溶媒
を留去する。固体３．５９９を得、これをシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（溶出液：クロロホルムー酢酸
エチル）で精製し、６−　（４−４，５−ノフェニルー
ＩＨ−イミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサン
酸ヘンシルエステルを得た。収ｉ３．２４１１（収率８
６嗟）。

ｍｐ（’Ｃ）　：　１４２〜１４３ＩＲ（シ、ｃ！ＩＬ−’）：　　１７３４，１２５７．
７０５Ｅｘ　　３４０ｎｍ、　　Ｅｍ　　４８５ｎｍ’
Ｈ−ＮＭＲ（ｄ、　ＣＤＣｌ２）　：　１．５３（ｑ　
、Ｊ＝６．０Ｈｚ　、　２Ｈ）　。

１．７７（ｍ、、４Ｈ）、２．４１（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈ
ｚ、２Ｈ）、３．９９（ｔ。

Ｊ＝６．６Ｆｌｚ、２）Ｌｚ）、５．１２（＋ｓ、２Ｈ
）、６．９４（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ。

２Ｈ）、７．２６〜７．３７（ｍ、１５Ｈ）、７．５６
（ｂｒａ、ＩＨ）、７．８２（ａ、Ｊ＝６．９Ｈｚ　、
２Ｈ）実施例３　６−（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イ
ミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサン酸の合成６−（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾール
−２−イル）フェノキシ）ヘキサン酸ベンノルエステル
１１９ｒｖに２５優臭化水素酢酸３づを加え室温で１５
時間攪拌する。反応後氷水８ゴにそそぎ生じた沈殿物を
口過し、洗浄乾燥して無色の固体として６−　（４−（
４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾール−２−イル）
フェノキシ）ヘキサン酸を得た、収量９３■（収率、定
量的）。

ｍｐ（℃）：２０９Ｍａ８ａ（Ｃ２７Ｈ２６Ｎ２０３として）：計算値　４
２６，１９２８２実測値　４２６．１９２７０１ＨＮＭＲ（ａ、ＣＤ３０Ｄ）：１．５４（ｑ、Ｊ＝６
．９Ｈ２，２Ｈ）。

１．６８（ｑ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．８２（ｑ
　、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）。

２．２６（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．０２（ｔ
、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）。

７．００（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ　、２Ｈ）、７．３０（
ｍ、５Ｈ）、７．４６（ｍ。

５Ｈ）　、　７．８９　（ｄ　、　Ｊ　＝８．７Ｈｚ　
、　２Ｈ）　。

実施例４　６−（３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸
ペンジルエステルノ合成ｍ−ヒドロキシベンズアルデヒド２．５１ｆＩをＤＭＥ
　５０　ｍｌにとかし、６−プロモヘギサン酸ベンジル
エステル７．０４１．無水炭酸カリウム３．４１１を加
え、実施例１と同じ操作を繰υ返すことに！す、６−（
３−ホルミルフェノキシ）ヘキサン酸ベンジルエステル
を油状物として得た。４．９２ｙ、（収率７３％）。

実施例５　６−（３−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イ
ミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサン酸ベンジ
ルエステル（■の合成ベンジル１．５４．！ｉ’、６−（３−ホルミルフェノ
キシ）ヘキサン酸ベンジルエステル２．３９１酢酸アン
モニウム１２．８，９、酢酸６０ゴを用い実施例２と同
じ反応操作を行なうことにより、無色の固体として６−
（３−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾール−２
−イル）フェノキシ）ヘキサン酸ベンジルエステルを得
た、３．６２　ＩＩ（収率９６％）。

ｍｐ　（Ｃ）　：　１６３〜１６５ＩＲ（シ、ｃｍ−’）　：　１７２０．１２２５．６７
５Ｅｘ　３４０ｎｍ、　　Ｅｍ　４６０ｎｍ’Ｈ−ＮＭ
Ｒ（δ、　ｃｏｃｔ３）　：１．５（ｑ、Ｊ　＝６．９
Ｈｚ　、２Ｈ）、１７５（ｍ、４Ｈ）、２．３９（ｔ。

Ｊ＝７．５Ｈｚ　、　２Ｈ）　、　３．９９（ｔ　、　
Ｊ−６，６Ｈｚ　、　２Ｈ）　、５．０９（ｓ　。

２Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、ＩＨ）、７．
２５〜７．３８（ｍ、１５Ｈ）７．４８（ｄ、Ｊ＝８．
４Ｈｚ、ＩＨ）、７．５０（ｓ、２Ｈ）、７．５５（ｂ
ｒｓ。

ＩＨ）実施例６．　６−（３−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−
イミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサン酸の合
成６−　（３−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾー
ル−２−イル）フェノキシ）へキサン酸ヘンシルエステ
ル５０５１ｎ９．２５％臭化水素−酢酸１２ＩＬｔを用
い実施例３と同様な反応操作を行なうことに！、９．６
−　（３−（４，５−ジフェニルイミダゾール−２−イ
ル）フェノキシ）ヘキサン酸を無色固体として得た。収
ｆ４３η（収率定量的）。

ｍｐｃｃ）　：　２０１〜２０４ｎｔａｌｌｓ　（Ｃ２７Ｈ２６Ｎ２０３として）：計算
値　４２６．１９２８２実側値　４２６．１９２９２ ’Ｈ−Ｎ１１４桓δ、ＣＩ）ｓＯＤ）　：　１．５６　
（ｍ　、２Ｈ）　、Ｌ７０　（δ、Ｊ＝７．５Ｈ２゜２
Ｈ）、　１．８３（ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．
３４（ｔ、Ｊ＝７゜２Ｈｚ。

２Ｈ）、４．０８（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．
９７（ｄｄ、Ｊ＝６．３゜４．８Ｈｚ　、　１１（）　
、　７゜３５（ｍ、８Ｈ）、７．４８（ｍ、５Ｈ）実施
例７．　２−（４−（４，５−ゾフェニルーＩＨ−イミ
ｌ’ソール−２−イル）フェニル）−チアゾリン−３−
カルがン酸の合成ベンツル、４−シアノインズアルデヒドヲ用い実施例２
と同じ反応操作２行なうことにより中間体（７−１）を
得た。　　　− ｍｐ（℃）　：　２ｑｐ〜２７８ＩＲ（２，ｃｍ　　）：２２２５，１６０５，１４４１
，６９５’　Ｈ−ＮＯＲ（Ｊ　、ＣＤ　ｓ　００　）　
’　７−３４　（ｍ　、５　Ｈ）　、’７−４９　（ｍ
　、５　Ｈ）　。

７．８１　（ｄ　、　Ｊ＝８．１１１ｚ　、　２Ｈ）　
、　８．１６（ｄ　、　Ｊ＝１．８１１ｚ、２Ｈ）さら
に液体アンモニア中、システィンを反応させることＫよ
り、２−　（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダ
ゾール−２−イル）フェニル１−チアゾリン−３−カル
ーｌン酸を得た。

実施例８．　４−（４，５−ジフェニル−１）（−イミ
ダゾール−２−イル）安息香酸の合成ベンジル、４−ホルミル安息香酸メチルを用い実施例２
と同じ操作を行なうことにより中間体（８−１）を得た
。

ｒｎＰ（Ｉ１：：）　：　２５３〜２５５ＩＲ（２，ｃ
ｍ　　）　：　１６９８．１６１３，１２９０．６９５
’Ｈ−ＮＨＲ（δ、ＣＤＣＬ、　）　：　３．９５（ｓ
　、　３Ｈ）　、　７．３６（ｍ、　６Ｈ）　。

７．５８（ｍ、　４Ｈ）　、　８．００（ｔ、　Ｊ＝８
．４Ｈｚ　、２Ｈ）、　８．１３（ｄ　。

Ｊ＝８．４Ｈｚ　、　２Ｈ）中間体（８−１）を２５％臭化水素−酢酸を用いること
によシ４−　（４，５−ノフェニルーＩＨ−イミダゾー
ル−２−イル）安息香酸を得た。

実施例９．２−（４−（４−ブロモブトキシ）フェニル
）　−４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾールの合成ベンジル、４−（４−ブロモブトキシ）ベンズアルデヒ
ドを用い実施例２と同じ操作を行なうことｔｔｃｘＤ２
−（４−（４−ブロモブトキシ）フェニル）　−４，５
−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾールを得た。

ｍｐ（℃）　：　１２９−１３１１Ｒ（２，ｃｍ　　）　：　１６１２　、１４９０．６
９５’　Ｈ−ＮＭＲ（δ、　ＣＤＣｌ２）　：　１．９
８（、ｂｒｓ　、　４Ｈ）　、　３．５０（ｔ　。

Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．１６（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ、２Ｈ）、６．９５（ｄ。

Ｊ＝８．７Ｈｚ　、　２Ｈ）　、　７．３１　（ｍ、　
７Ｈ）　、　７．５４　（ｍ、　３Ｈ）　。

７．８９　（ｄ　、　Ｊ＝８．７Ｈｚ　、　２Ｈ）実施
例１０．　４−（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イ
ミダゾール−２−イル）フェノキシ）ブタンアミンの合
成ベンジル、Ｎ−（４−（４−ホルミルフェノキシ）ブチ
ル）フタルイミドを用い実施例２と同じ操作を行なうこ
とにより、中間体（Ｉ０−１）を得た。

ｍｐ（℃）　：　７８〜８１１Ｒ（２，ｃｍ　　）：１７１５，１７０５，１２５０
，７２０，６９５’　Ｈ−ＮＭＲ（ａ　、　ＣＤＣＬｓ
　）　：　１．８４　（ｍ　、４　Ｈ）　、４．００　
（ｔ　。

Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈ
ｚ、２Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、
７．２８（ｍ、５Ｈ）、７．５０（ｍ、７Ｈ）。

７．８０（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）さらに中間体（
Ｉ０−１）を飽水ヒドラジンを加え、反応を行なうこと
により４−　（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミ
ダソール−２−イル）フェノキシ）ブタンアミンを得た
。

実施例１１　６−（４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−
イミダゾール−２−イル）フェノキシ）ヘキサノールの
合成ベンジル、６−（４−ホルミルフェノキシ）ヘキサノー
ルを用い実施例２と同じ操作を行なうことによジロー（
−４−（４，５−ジフェニル−ＩＨ−イミダゾール−２
−イル）フェノキシ）ヘキサノールを得た。

ｆｆ１ｐ（℃）　：　１８０〜１８２ＩＲ（シ、浦　）：３４００，１６２０，１５０３，１
２６０．６９８Ｈ−ＮＭＲ（ａ　、　ＣＤＣｌ２　）　
：　１．４８　（ｍ　−、ｌ　Ｈ）　−１，６１（ｔ　
ｔ　ａＪ＝６．９．６．６Ｈｚ、２Ｈ）、　１．８１（
ｔｔ、Ｊ＝７．５，７．２Ｈｚ、２Ｈ）。

３．６６（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．９８（ｔ
、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）。

６．９３　（ｄ　、　Ｊ＝９．０Ｈｚ　、　２Ｈ）　、
　７．３１　（ｂｒｄ、　Ｊ＝７．８Ｈｚ　。

５Ｈ）、７．５４（ｂｒｄ、　Ｊ＝７．８Ｈｚ　、　５
Ｈ）　、　７．８７　（ｄ　、　Ｊ＝９．０Ｈｚ。

２Ｈ）実施例１２　４−（４，５−（４，４’−ジメトキシ）
ノフェニルーｌＨ−イミタソールー２−イル）安息香ば４．４゛−ジメトキシベンジル、４−ホルミル安息香酸
メチルを用い実施例２と同じ操作を行なうことＫより、
中間体（Ｉ２−１）を４念。

中間体（Ｉ２−１）を２５％臭化水素−酢酸を用いるこ
とにより４−　（４，５−（４，４’−ジメトキシ）ジ
フェニル−Ｉ　Ｈ−イミダゾール−２−イル）安息香酸
を得た。

実施例１３．化学発光量の測定イソルミノールを用い以下の溶液を調整した。

溶液Ａ　：　（ＩＶ）　１．７４□ＥｔＯＨ１０ｄ［３
，３７Ｘ１０　　ＭＥ溶液Ｂ　：　（Ｖ）　１．７９＃
／ＥｔＯＨ１０ｍＪ［３，４７Ｘ１０　　Ｍ］溶液Ｃ：
　イソルミノール０．６６ａ１９／ＥｔＯＨ１０ｙｄ［
３，７３ｘ　１０　　Ｍｌ溶液Ａ、Ｈについては、各希釈溶液をｏ、ｉｏ。

２５．５０．７５μ）づつマイクロチ２−プにとシ、０
．８Ｍ水酸化カリウム溶液５０μｍ、３％過酸化水素水
５０μノを入れ、全ｉｔｆ：１７５μＪどする。１％次
亜塩素酸ソーダ１００μＡｔ−マイクロシリンジで加え
、フォトルミノメータ−（うがサイエンス社、ＴＤ−４
０００）を用い発光量を測定した。

溶／ｆ１．Ｃにづいては、浴液Ａ、Ｂと同じ量を用いフ
ェリシアン化カリウム水溶Ｈ（Ｉ，６ｍ９／ｌ　）　ｔ
　２５μＪ、０．８Ｍ水酸化カリウム水溶液５０μｌ、
を加え、さらに水を加え全量を１７５μｌとする。３％
過酸化水素水１００μｇを加え上記と同様に７オトルミ
ノメーターで発光量を測定した。

〔発明の効果〕

本発明によれば、官能基金有するイミダゾール誘導体は
、６１１］定対照物例えばタン・ぐり質又は高分子物質
などの官能基と共有結合を形成し、容易にラベル化でき
る。また極めて優れた発光特注を持っており、医学生物
学分野においても、微量分析法への応用として用いるこ
とができる。

特許出願人　　富士レビオ株式会社

Claims

【特許請求の範囲】一般式（ I ）を有するイミダゾール誘導体 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）（式中、Ｘ及びＹは、同一又は異なり、水素原子、低級
アルキル基、ジメチルアミノ基、低級アルコキシ基、又
はハロゲン原子を表わし、Ｚは、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ
ＨＲ、▲数式、化学式、表等があります▼又は−（ＣＨ
＿２）＿ｎ−Ｒを表わす。Ｒは、−（ＣＨ＿２）＿ｍ−
ＣＯＯＲ＿１、−（ＣＨ＿２）＿ｍ−ＮＨ＿２▲数式、
化学式、表等があります▼、−（ＣＨ＿２）＿ｍＯＨ、
−（ＣＨ＿２）＿ｍＳＨ又は、−（ＣＨ＿２）＿ｍ−Ｘ
＿１、ｎ、ｍは０〜１０であり、Ｒ＿１は、水素原子、
▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
、表等があります▼であり、Ｘ＿１はハロゲン原子を表わす。）