JPH01104190A - チミジンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） チミジンは医薬原料、特に最近世界的に問題になってい
るエイズ（ＡＩＤＳ　）に対する最も効果のある治ｆＲ
薬として知られているアジド９チミジンの原料でメジ大
量合成法の確立が望まれている。

本発明は微生物を利用したこのチミジンの製造方法に関
するものである。

（従来の技術） チミジンの製造法としては２−デオキシリポースとチミ
ンからの化学合成法が良く知られているが収率が非常に
悪い為にチミジンの工業的製造方法はＤＮＡ　（デオキ
シリポ核酸）の加水分解物よりの抽出に限られている。

（発明が解決しようとする問題点） しかし、従来の抽出法においては、ＤＮＡの加水分解物
中に目的のチミジン以外に２′−デオキシアデノシン、
！−デオキシグアノシン、クーデオキシシチジン、更に
は２′−デオキシアデノシンの脱アミノ化された２′−
デオキシイノシンが含まれており抽出工程が繁雑しかも
コスト高の方法である為に、更に効率の良い方法の開発
が望まれているのが現状である。

（問題点を解決する為の手段） 本発明者はこのような目的を達成するべく鋭意検討の結
果、ＤＮＡの加水分解生成物であるチミジン以外の２′
−デオキシリポヌクレオシド（２′−デオキシアデノシ
ン、τ−デオキシグアノシン、２′−デオキシイノン、
あるいはτ−デオギシアデノシンが脱アミノ化されたτ
−デオキシイノシン）又は！−デオキシリゲースー１−
リン酸に、化学合成法で安価に供給されるチミンを微生
物の存在下に作用させることによシ、これらの物質がチ
ミジンに変換されることを見い出し本発明を完成させる
に至った。

尚、２′−デオキシリぜ−スー１−リン酸は市販の試薬
を用いてもよく、またＤＮＡの加水分解生成物の１−デ
オキシリポヌクレオシドを更に加リン酸分解して得ても
よい。

本発明を情単に記すと以下の通シである。

即ち本発明は■τ−デオキシリ？−スー１−リン酸とチ
ミンからチミジンを生成せしめる方法、■２′−デオキ
シアデノシン、！−デオギシグアノシン、クーデオキシ
シチジン及びτ−デオキシイノシン等の２−デオキシリ
デヌクレオンドと無機リン酸またはその塩とチミンから
チミジンを生成せしめる方法である。

本発明の更に有利な点は、上記τ−デオキシリゴヌクレ
オシドを混合して用いても効率良く反応が進行するので
ＤＮＡを“加水分解して得られるτ−デオΦシリ？ヌク
レオシド溶液に、本発明に使用される微生物（単独でも
複数の微生物を混合しても良い）の存在下、チミンを作
用させれば上記加水分解物中のチミジン以外のτ−デオ
キシリ？ヌクレオシドがチミジン（変換されるためチミ
ジン含量の極めて高い反応液が得られることにある。

本発明に用いる微生物はアクロモバクタ−属、エアロモ
ナス属、アグロバクテリウム属、アースロバクター属、
バチルス属、ブレビバクテリウム属、セルロモナス属、
シトロバクタ−属、コリネパクテリクム属、エシェリヒ
ア属、エンテロバクタ−属、エルビニア属、７う？パク
テリクム属、ロドコッカス属、クレブシェラ属、クルイ
ヘラ属、ミコノ々クテリクム属、ミクロコツカス属、ミ
コプラナ属、グラノコッカス属、グロタミノバクター属
、グロテクス属、シー−トモナス属、リゾビウム属、サ
ルモネラ屑、デルチナ属、セラチア属、２′−デオキシ
リデース−１−リン酸とチミンよシチミジンを生成する
場合及びτ−デオキシアデノシンあるいは２′−デオキ
ングアノシンあるいは？−デオキンイノシンと無機リン
酸またはその塩とチミンからチミジンを生成する場合に
用いる微生物としては以下のものがある。

アクロモバクタ−ビスコサス　ＡＴＣＣ−１２４４８（
Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｓｃｏｓｕｓ　）エ
アロモナス　サルモニシ／　　　ＡＴＣＣ−１４１７４
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ　）ア
グロバクテリウム　ラジオバクターＡＴＣＣ−４７１８
（Ａｇｒｏｂａｃｔ＠ｒｉｕｍ　ｒａｄｉｏｂａｃｔｅ
ｒ　）アースロバクター　シングレクス　ＡＴＣＣ−６
９４６（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｔｍｐｌｅｘ　
）バチルス　ズブチリス　ＡＴＣＣ−６６３３（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｔｌｍ　）ブレビバクテリウム
　アセチリカム　ＡＴＣＣ−９５４（Ｂｒ＠ｖｉｂａｃ
ｔｅｒｌｕｍ　ａｃｓｔｙｌｉｃｕｍ　）セルロモナス
　７ラプイｒす　ＡＴＣＣ−４８８（Ｃａｌｌｕｌｏｍ
ｏｎａｓ　ｆｌａｖｉｇ＠ｎａ　）シトロバクタ−フロ
インデ　ＡＴＣＣ−８０９０（Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒ
　ｆｒｅｕｎｄｌｉ　）コリネバクテリウム　キセロシ
ス　ＡＴＣＣ−３７３（Ｃｏｒｙｎ＠ｂａｃｔ＠ｒｉｕ
ｍ　ｘ＠ｒｏａｉｇ　）エシェリヒア　コリ　ＦＥＲＭ
−Ｐ　４７’！９（Ｅｍｃｈｅｒｉｈｌａ　ｃｏｉｌ　
）エンテロバクタ−クロアカニ　ＡＴＣＣ−１３０４７
（Ｅｎｔｅｒｏｂａａｔｅｒ　ｅｌｏａｃａ＊　）エル
ビニア　カロトーラ　ＡＴＣＣ−７４０３（Ｅｒｗｌｎ
ｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　）フラボパフチリウム　
アクアタイレ、ＡＴＣＣ−８３７５（Ｆｌａｖｏｂａｅ
ｔｅｒ（ｕｔｏ　　ａｑｕａｔｌｌｓ　　）ロドコッカ
ス　ロドクラウス　ＡＴＣＣ−１９１４９（Ｒｈｏｄｏ
ｅｏｃｅｕｓ　ｒｈｏｄｏｃｈｒａｕｓ　）クレブシェ
ラ　ニ鳳つモニアエ　ＡＴＣＣ−８３２９（Ｋ１ｅｂｓ
ｉ＠１１ａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓ　）クルイヘラ　シ
トロバクタ　ＦＥＲＭ−Ｐ　３１４９（Ｋｌｕｙｖｅｒ
ａ　ｃｉｔｒｏｐｈｉｌｍ　）ミコバクテリウム　ラク
チクム　ＡＴＣＣ−８１８０（Ｍｙｃｏｂｍｃｔｅｒｉ
ｕｍ　ｌａｃｔｉｅｕｍ　）ミクロコツカス　ロゼウス
　ＡＴＣＣ−９８１５（Ｍｉｃｒｏｅｏｅｃｕｓ　ｒｏ
ｍｅｕｓ　）ミコプラナ　デイモルファ　人ＴＣＣ−４
２７９（Ｍｙｃｏｐｌａｎａ　ｄｉｍｏｒｐｈａ　）プ
ラノコッカス　シトレウス　ＡＴＣＣ−１５２３４（Ｐ
ｌａｎｏｃｏａｃｕｓ　ａｉｔｒｅｕｓ　）プロタミノ
バクター　アルデフラプス　ＡＴＣＣ−８４５ＡＴＣＣ
−８４５８（Ｐｒｏｔａ＠ｒ　ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ　
）ｆａテクス　レッテダリ　ＦＥＲＭ−Ｐ　４７９６（
Ｐｒｏｔ＊ｕｓ　ｒｅｔｔａｇｅｒｌ　）シュードモナ
ス　ローゼオプパリア　ＦＢＲＭ−Ｐ　９４７１（Ｐｓ
＠ｕｄｏｍｏｎａ＠ｒｏｓｅｏｂｕｂａｌ１ｍ　）リゾ
ビウム　メリロッティ　Ｆ”ＥＲＭ−Ｐ、　８１９７（
Ｒｈｌｚｏｂｌｕｍ　ｍ・１ｉｌｏｔｌ　）？ルモネラ
　チ７ムリクム　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４７０（Ｓａ１ｍｏ
ｎ＠１１ａ　ｔｙｐｈｌｍｕｒｉｕｍ　）デルチナ　ア
ルピダ　ＦＥＲＭ−Ｐ　７０４８（５ａｒｔｉｎａ　ａ
ｌｂｔｄａ　） セラチア　マルセッセンス　ＡＴＣＣ−１４２２６（５
ｅｒｒａｔｌａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ＋　）ストレグ
トマイセス　フミ７アー　ＦＥＲＭ−Ｐ　８１９５（Ｓ
ｔｒａｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｆｕｍｉｆ＠ｒ　）ビブリオ
　メチェニコピ　ＡＴＣＣ−７７０８（Ｖｌｂｒｔｏ　
ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｖＬｉ　）＃９７トモナスシトリ
　ＦＥＩｔＭ−Ｐ　７０５８（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａａ
　ｏｉｔｒｌ　）スタフィロコッカス　シトレウス　Ｉ
ＦＯ３３３２（５ｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｉ
ｔｒｅｕｓ　）一方、τ−デオキシシチジンと無機リン
酸またはその塩とチミンからチミジンを生成する場合の
微生物としては アグロバクテリウム　ラジオバクター　ＡＴＣＣ−４７
１８（Ａｇｒｏｂａｃｔ＠ｒｉｕｍ　ｒａｄｉｏｂａｃ
ｔｅｒ　）アースロバクター　シトレウス　ＡＴＣＣ−
１１６２４（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｔｒｅｕ
ｓ　）バチルス　スフエリカス　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４６
８（Ｂａａｌｌｌｕｓ　　ａｐｈ＠ｒｌｅｕｓ　　）ブ
レビバクテリウム　テスタシウム　ＦＩＲＭ−Ｐ　９４
６９（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ＊ｒｉｕｍ　ｔ＠ｓｔａｃｅ
ｕｍ　）コリネバクテリウム　キセロシス　ＡＴＣＣ−
３７３（Ｃｏｒｙｎ＠ｂａｃｔ＠ｒｌｕｍ　ｘｅｒｏｓ
ｉｍ　）エルビニア　アロイデア　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４
７３（Ｅｒｗｉｎｉａ　ａｒｏｉｄ＠ａｅ　）フラがバ
クテリウム°　アクアタイレ　ＡＴＣＣ−８３７５（Ｆ
ｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｔｎ　ａｑｕａｔｉｌ＠）ｆ
’）ノコッカス　シトレウス　ＡＴＣＣ−１５２３４（
Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｉｔｒ＠ｕｓ　）シュード
モナス　ローゼオプパリア　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４７１（
Ｐｓ＠ｕｄｏｍｏｎａｓ　ｒｏｉ＠ｏｂｕｂａｌ１ｍ　
）デルチナ　アルビダ　ＦＥＲＭ−Ｐ　７０４８＠Ｉｅ
％ｏｐんＬＬｕｓ　　Ｌ４１ｔ、ｔｅｒｃｚＲｅスタフ
ィロコッカス　シトレウス　ＩＦＯ３３３２（５ｔａｐ
ｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｉｔｒｅｕｓ　）ストレプト
マイセス　アンチビオティクス　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４７
２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｎｔｌｂｉｏｔｉｃ
ｕｓ　）アクロそバクター　ビスコナス　ＡＴＣＣ−１
２４４８（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｅｔｅｒ　ｖｌｓｃｏｓ
ｕｓ　）セル口そナス　７ラビグナ　ＡＴＣＣ−４８８
（Ｃｏ１１ｕｌｏｍｏｎａｓ　ｆｌａｖｌｇｅｎａ　）
シトロバクタ−７０インデイ　ＡＴＣＣ−８０９０（Ｃ
１ｔｒｏｂａａｔ＠ｒ　　ｆｒｅｕｎｄｌｌ　　）エシ
ェリヒア　コリ　Ｆ’ＥＲＭ−Ｐ　’／り３６（Ｅｓｃ
ｈｅｒｌｈｉａ　ｃｏｌｉ　）エンテロバクタ−クロア
カニ　ＡＴＣＣ−７２５６（Ｅｎｔ＊ｒｏｂａｃｔ＠ｒ
　ｃｌｏａｃａｅ　）ハフニア　アルベイ　ＡＴＣＣ−
９７６０（Ｈａｆｎｌａ　ａｌｖｅｌ　） クレブシェラ　オキシト力　ＡＴＣＣ−８７２４（Ｋｌ
ｅｂａｉｅｌｌａ　ｏｘｙｔｏｅａ　）クルイヘラ　シ
トロバクタ　ＦＥＲＭ−Ｐ　８１９３（Ｋｌｕｙｖｅｒ
ａ　ｃｌｔｒｏｐｈｉｌｍ　）クルチア　シフイー　Ａ
ＴＣＣ−６９００（Ｋｕｒｔｈｉａ　ｚｏｐｈｌｌ　） ミクロバクテリウム　インベリアプル　ＡＴＣＣ−８３
６５（Ｍｉｃｒｏｂａａｔ＠ｒｉｕｍ　ｉｍｐ＊ｒｉａ
ｂｌｅ　）ミクロコツカス　ルテウス　ＡＴＣＣ−１１
８８０（ＡＴＣＣ−１１８８０（ｌｕｔ＠ｕａ　）ミコ
プラナ　デイ、モルファ　ＡＴＣＣ−４２７９（Ｍｙｃ
ｏｐｌａｎａ　ｄｌｍｏｒｐｈａ　）ノカルデイア　ア
スナロイデス　ＡＴＣＣ−１９２４７（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ　ａｓｔ＠ｒｏｉｄ’ｓ　）プロタミノバクター　ア
ル？７ラグス　ＡＴＣＣ−８４５８（Ｐｒｏｔａｍｉｎ
ｏｂａｃｔｅｒ　ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ　）グロテクス
　ブルガリス　ＡＴＣＣ−４７７５（Ｐｒｏｔ＠ｕｓ　
ｖｕｌｇａｒｉｍ　）プロピオニバクテリウム　シエル
マニー　ＦＩＲＭ−Ｐ　９’１Ｊ７（Ｐｒｏｐｌｐｎｌ
ｂａｃｔ＠ｒｌｕｍ　ｓｈ＠ｒｍａｎｉｌ　）リゾビウ
ム　メリロテイ　ＦＥＲＭ−Ｐ　８１９７（Ｒｈｉｓｏ
ｂｌｕｍ　ｍｅｌｌｒｏｔｌ　）ロドコッカス　エリス
ロポリス　ＡＴＣＣ−１１０４８（Ｒｈｏｄｏｅｏｃ＠
ｕｍ　＊ｒｙｔｈｒｏｐｏｌ１ｍ　）サルモネラ　チフ
イムリクム　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４７０（Ｓａ１ｍｏｎ＠
ｌｌａ　ｔｙｐｈｌｍｕｒｉｕｍ　）ビゾリオ　メチ晶
二コピ　ＡＴＣＣ−７７８０（Ｖｉｂｒｌｏ　ｍ＊ｔｓ
ｃｈｎｌｋｏｖｉｉ　）キサントモナス　シトリ　ＦＥ
ＲＭ−Ｐ　３３９６（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ａｉｔ
ｒｉ　）等がある。

これらの微生物を用いてチミジンを生成せしめる方法は
、微生物の培養中に基質″ｆ：添加する培養法を用いて
も良いし、また培養し喪菌体あるいはこの処理物を基質
に作用させる酵素法を用いても良い。

培養法を用いる場合には、炭素源、窒素源、Ｐ。

Ｓ、Ｆ・、　Ｍｎ等の無機イオン更に必要ならばビタミ
ン等の微量栄養素または蛋白分解物、酵母エキスのよう
な有機窒素源を含有する通常の培地を基本に用いれば良
い。

即ち、τ−デオキシリ？−スー１−リン酸からチミジン
を生産する場合には、上記基本培地！＝デオキシリゲー
ス−１−リン酸とチミンを適宜添加すればよい。

更に、チミジン以外の７−ジオキシリボヌクレオシドか
らチミジンを直接生産する場合には、上記基本培地に、
チミジン以外の７−デオΦシリがヌクレオシドとリン酸
もしくはその壇とチミン添加して培養すればよい。

上記基質の添加は培養初期でも培養途中でも構わない。

酵素法を用いる場合の酵素源としては、炭素源、窒素源
、Ｐ、Ｓ、Ｆｅ、Ｍｎ等の無機イオン、更に必要ならば
ビタミン等の微量栄養素または蛋白分解物、酵母エキス
のような有機窒素源を含有する通常の培地で培養した培
養液、洗浄菌体が使用できる他に、菌体処理物も使用で
きる。菌体処理物としては、アセトン乾燥菌体、菌体の
磨砕物、菌体の超音波処理物、界面活性剤あるいはトル
エン等の処理菌体、リゾチーム等の酵素処理菌体、菌体
よシ抽出した後、塩析等によシ分離した菌体の蛋白区分
、本反応の酵素活性を有する蛋白区分の精製物、更に本
菌体および菌体処理物の固定化物等いずれもが使用でき
る。培養法を用いる場合でも、酵素法を用いる場合でも
基質として使用する！−デオキシリゲースー１−リン酸
、ｒ−デオキシイノシン、ｌ−デオキシグアノシン、！
−デオキシシチジンあるいは２−デオキシイノシンの濃
度は１１−１Ｏ００ｒｎ程度が適当であシ、リン酸また
はその塩の濃度は上記基質の０．０１−１０倍モル程度
が適当である。無機リン酸の塩は反応の進行を大きく阻
害しないものであればいずれを用いても良く、例えばナ
トリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム
塩、マグネシウム塩、等の無機塩、さらにはトリメチル
アンモニウム塩等の有機塩が用いられる。！−デオキシ
アデノシン、！−デオキシグアノシン、２−デオキシシ
チジンあるいＦｉｚ−デオキシイノシンからチミジンを
直接生産する場合でも、τ−デオ中シリデースー１−リ
ン酸からチミジンを生産する場合でも、チミンの添加量
は上記基質と等モルあるいはそれ以上が適当で、通常１
−１０倍モル程度が適当である。また、直接生産させる
場合において、基質のτ−デオキシアデノシン、τ−チ
オキシグアノシン、２′−デオキシシチジン又は２′−
デオキシイノシンが反応液に残っても良い場合には、チ
ミンの添加量はこれらの基質の等モル以下でもよい。

さて、これらを含む水浴液に前記菌体、またはその処理
物を加え、ｐＨ’１ｉ−４−１０の範囲に調製した後、
２０−７０℃、望ましくは５０−７０”Ｏで静置あるい
は攪拌しながら１０分−１０日間保持すると反応が進行
し、反応液中に目的とするチミジンが著量蓄積される。

反応液よシチミジンを採取する方法は、水等の溶媒に対
する溶解度差を利用したシ、イオン交換樹脂や吸着樹脂
を用いる方法で行うことができる。

またチばジンの定量は高速液体クロマトグラフィーを用
いる方法で行なえばよい。

以下、実施例に従って本発明を更に詳細に説明する。

実施例１ 酵母ｘ　＊　ス０．５１１／ｄｌ　、’ブト／　１．０
１１／ｄｔ、肉工争ス１．０１／ｄｉおよびＮａＣ１Ｏ
，５ｆＩ／ｄｉを含む培地（ｐＨ７，０）　５０　！１
１１ｆ：５００　ａｔ容肩付フラスコに分注し殺菌した
。この培地に、ブイヨン寒天培地にて３０℃、１６時間
前培養した第１表に示す微生物を１白金耳ずつ接種し、
３０℃にて１６時間振とり培養した。得られた培養液よ
シ菌体を遠心分離によシ分離した後、０．０５Ｍ！Ｊン
酸バッファー（ｐＨ７，０）で洗浄し、更に遠心分離す
ることによシ洗浄菌体を調製した。

上記洗浄菌体を２０　ｍＭのτ−デオキシリ？−スー１
−リン酸と２０ｍＭのチミンを含む０．０５　Ｍ　）リ
スバッファー（ｐＨ７，２）　１０ｎｌに５　、ｌｉ’
　／ｄｉになる様に添加し、６０℃、２４時間反応させ
た。各反応液中に生成したチミジンの濃度を高速液体ク
ロマトグラフィーを用いて測定しその結果ｆ：ｇｔ表に
示した。

実施例２ 実施例１と同様に培養調製した第２表に示す微生物の洗
浄菌体ｆ　２０　ｍＭの２′−デオキシアデノシンある
いは２−デオキシグアノシンあるいは２′−デオキシイ
ノシンと２０ｍＭのチミンを含む１００ｍＭのリン酸バ
ッフｙ−（ｐＨ７，０）　１０Ｉｎｔに５１１７ｄｉに
なる様に添加し、６０°Ｃ９２４時間反応させた。

各反応液中に生成したチミジンを実施例１と同様の方法
で測定し、その結果ｔ−第２表に示した。

実施例３ 実施例１と同様に培養、調製した第３表に示す微生物の
洗浄菌体を、２０ｍＭの２−デオキシシチジンと２０　
ｍＭのチミンを含む１００ｍＢｉｌのリン酸パｙ　７　
ｙ　　（ｐＨ７，０）　１０　ｍｌに５９／ｄｉになる
様に添加し、６０υ、２４時間反応させた。各反応液中
に生成したチミジンを実施例１と同様の方法で測定し、
その結果ｔ−第３表に示した。

第　　３　　表 第３表のつづき 実施例４ 実施例１と同様に培養、調製した第４表に示す微生物の
洗浄菌体を、２０ｍＭのτ−デオキシシチジンと２０ｍ
Ｍのチミンを含む１００ｍＭのリン酸ノ々ｙ７　ｙ　−
（ｐＨ７，０）　１０１ＲＩＩＩＣ５９／ｄｌＶｃナル
様Ｋｍ加し、６０℃、２４時間反応させた。各反応液中
に生成したチミジンを実施例１と同様の方法で測定し、
その結果を第４表に示した。

第　　４　　表 第４表のつづき 実施例５ 実施例１と同様の培地を用いて、実施例１と同様の方法
で、３７℃、１６時間培養したエシエリヒアコＩＪ　　
ＦＥＲＭ−Ｐ　４７９９の培養液に予め殺菌した２　０
０　ｍＭの２−デオキシグアノシンと２００ｍｈｌｌの
チミンを含む５００ｍＭのリン酸バッファー（Ｐ）１７
．０＞５ｍｌを添７１１１し、更に１０時間培養を続け
た。

この培養液中に生成したチミジンを実施例１の方法と同
様に定量した結果、４１ｍ９／ｄｉのチミジンが生成し
ていた。

実施例６ ３００　ｍＭのリン酸バッフｙ　＝　（ｐＨ７，０，）
と５０ｍＭのチミンを含むサク精子由来のＤＮＡの酵素
氷解物（チミジン２８２■７ｄｌ　、τ−デオΦシアプ
ツシ７９７ｍ９／ｄｉ　、　２’−デオキシイノシｙ　
１２４ｍ９／ｄｔ　。

τ−デオキシシチジン１２１ｍ９７ｄｌ　、τ−デオキ
シグアノシン１５７ｍ９７ｄｉを含む）１０ｄに実施例
１と同様に培養調製したスタフィロコッカス　シトレク
ス　ＩＦＯ３３３２あるいはバチルス　スフエリカス　
ＦＥＲＭ−Ｐ　９４６８を５ｇ／ｄｌになる様に添加し
、６０℃、８時間反応させた。

この反応液中のチミジンの量を一実施例１と同様の方法
で測定した結果、スタフィロコッカス　シトレウス　Ｉ
Ｆｏ　３３３２　ｔ−用いた場合には４４０即／ｄ７！
バチルス　スフエリカス　ＦＥＲＭ−Ｐ　９４６８を用
いた場合には５６０〜／ｄｔに増加していた。

〔効果〕

本発明の方法を用いると、τ−デオキシリテースー１−
リン酸又はチミジン以外の２′−デオキシリボヌクレオ
シドから効率よく、しかも大量にチミジンを生産するこ
とができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）アクロモバクター属、エアロモナス属、アグロバ
   クテリウム属、アースロバクター属、バチルス属、ブレ
   ビバクテリウム属、セルロモナス属、シトロバクター属
   、コリネバクテリウム属、エシェリヒア属、エンテロバ
   クター属、エルビニア属、フラボバクテリウム属、ロド
   コッカス属、クレブシエラ属、クルイヘラ属、ミコバク
   テリウム属、ミクロコッカス属、ミコプラナ属、プラノ
   コッカス属、プロタミノバクター属、プロテウス属、シ
   ュードモナス属、リゾビウム属、サルモネラ属、ザルチ
   ナ属、セラチア属、ストレプトマイセス属、ビブリオ属
   、キサントモナス属、スタフィロコッカス属に属し、 ２′−デオキシリボース−１−リン酸又はその塩とチミ
   ンからチミジンを生成する能力を有する微生物を水性媒
   体中で、 ２′−デオキシリボース−１−リン酸又はその塩とチミ
   ンに作用させて、チミジンを生成させ、これを取得する
   ことを特徴とするチミジンの製造方法。
2. （２）アクロモバクター属、エアロモナス属、アグロバ
   クテリウム属、アースロバクター属、バチルス属、ブレ
   ビバクテリウム属、セルロモナス属、シトロバクター属
   、コリネバクテリウム属、エシェリヒア属、エンテロバ
   クター属、エルビニア属、フラボバクテリウム属、ロド
   コッカス属、クレブシエラ属、クルイヘラ属、ミコバク
   テリウム属、ミクロコッカス属、ミコプラナ属、プラノ
   コッカス属、プロタミノバクター属、プロテウス属、シ
   ュードモナス属、リゾビウム属、サルモネラ属、ザルチ
   ナ属、セラチア属、ストレプトマイセス属、ビブリオ属
   、キサントモナス属、スタフィロコッカス属、ヘモフィ
   ラス属、ハフニア属、クルチア属、ミクロバクテリウム
   、ノカルディア属、プロピオニバクテリウム属に属し、
   チミジン以外の２′−デオキシボヌクレオシド及び無機
   リン酸もしくはその塩とチミンから、チミジンを生成す
   る能力を有する微生物を水性媒体中でチミジン以外の２
   ′−デオキシリボヌクレオシド及び無機リン酸もしくは
   その塩とチミンに作用させて、チミジンを生成させ、こ
   れを取得することを特徴とするチミジンの製造方法。
3. （３）２′−デオキシリボヌクレオシドが２′−デオキ
   シアデノシン、２′−デオキシグアノシン、２′−デオ
   キシイノシン又は２′−デオキシシチジンであることを
   特徴とする特許請求の範囲第（２）項記載の製造方法。