JP7637166B2

JP7637166B2 - 凝固第ｉｘ因子および凝固第ｘ因子に結合する二重特異性抗体

Info

Publication number: JP7637166B2
Application number: JP2023017261A
Authority: JP
Inventors: ロバート・ティ・ピーターズ; ニーナ・レクサ; ブラッドリー・アール・ピアース; ジョン・カルマン; マリア・アレマン; アリソン・グッドマン
Original assignee: バイオベラティブセラピューティクスインコーポレイテッド
Priority date: 2016-11-23
Filing date: 2023-02-08
Publication date: 2025-02-27
Anticipated expiration: 2037-11-22
Also published as: JP2019535325A; ECSP19044484A; DOP2019000127A; MA46893A; PH12019501126A1; EP3545002A2; US20230192896A1; JP7227146B2; PE20200012A1; JP2025081447A; MX2019005772A; KR20190080949A; CL2019001372A1; CR20190297A; CA3044574A1; CO2019006500A2; TW201819417A; WO2018098363A3; BR112019010349A2; AU2017363309A1

Description

以前の出願への参照
本出願は、２０１６年１１月２３日に出願の米国仮特許出願第６２／４２５，９２１号、２０１７年１月３１日に出願の米国仮特許出願第６２／４５２，８０９号、２０１７年７月７日に出願の米国仮特許出願第６２／５２９，８０５号、および２０１７年１１月１６日に出願の米国仮特許出願第６２／５８７，２８４号への利益を主張するものであり、これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

ＥＦＳ－ＷＥＢによる電子出願された配列表への参照
本出願と共に出願された電子提出済み配列表の内容（名称：４１５９．４８５ＰＣ０４＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：１，０５３，３７０バイト；および作成日は２０１７年１１月２１日）は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

本出願は、とりわけ、活性化凝固第ＩＸ因子または凝固第Ｘ因子チモーゲンに優先的に結合する抗体、ならびに活性化第ＶＩＩＩ因子補因子を擬似する両方の特異性を含む二重特異性分子に関する。

血友病Ａは、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）遺伝子における変異により引き起こされる重症なＸ染色体連鎖劣性障害である。ＦＶＩＩＩは、血液凝固の潜在経路に関与しており、ＦＶＩＩＩの欠乏により、血液の凝固に乏しくなるか、または全く凝固されなくなる。血友病Ａとして代わりに知られているＦＶＩＩＩ欠乏症は、最も一般的な出血性障害の１つであり、約１０，０００名の男性に１名が罹患している（非特許文献１）の１つである。血友病Ａは、因子ＦＶＩＩＩの血漿中レベルが、１％以下（「重度」）、２～５％（「中度」）および６～３０％（「軽度」）によって定義される重症度という３種のグレードを有する（非特許文献２）。障害の重症な形態では、５～６か月の年齢で、通常、最初の出血が見られる一方、中度の形態では、この最初の出血は、約１～２歳まで遅れる。出血は、自発的に、または最小限の外傷後に見ることができる。血友病Ａを有する全患者の約半分は、重症な形態の疾患を有するものとして分類される。これらの患者は、幼少期に始まる重症な出血、および人生の後半において、自発的または過度な出血という頻度の高いエピソードを経験する。関節および筋肉に共通して出血が起こり、適切な処置がないと、再発性の出血により、非可逆的な血液関節症（ｈｅｍｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）に至る可能性がある（非特許文献３）。

血友病Ａの処置の重要な目的は、ＦＶＩＩＩの血漿中レベルを≧１％に維持することであり、これにより、出血リスクが低減される。これを実現するため、予防的治療法として、組換えまたは血漿由来のＦＶＩＩＩが、頻繁に静脈内に投与される。しかし、血友病Ａの現在の標準処置は困難であり、いくつかの欠点を有しており、患者およびその家族に身体的および精神的な負担をかなり強いる。

Ｓｔｏｎｅｂｒａｋｅｒら（２０１２年）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ１８巻（３号）：ｅ９１～４頁Ｗｈｉｔｅら（２００１年）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５巻：５６０頁Ｍａｎｃｏ－Ｊｏｈｎｓｏｎら（２００７年）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５７巻（６号）：５３５～４４頁

ＦＶＩＩＩ処置における最も一般的な弊害は、ＦＶＩＩＩ阻害剤として働く、ＦＶＩＩＩに対するアロ抗体の生成である。３０％もの多くの重症な罹患患者が、このようなアロ抗体を発生させており、発生が一旦起こると、持続中の出血を処置するためのＦＶＩＩＩの使用の有効性が制限される（ＫｅｍｐｔｏｎおよびＷｈｉｔｅ（２００９年）Ｂｌｏｏｄ１１３巻（１号）：１１～７頁）。このような場合、薬剤を回避する代替法を使用して、出血を制御する。しかし、これらの薬剤は、通常、半減期がより短く、常に有効なわけではない。さらに、血漿中半減期（成人では平均が約１２時間であり、児童では、さらに一層短い）が短いために、ＦＶＩＩＩを頻繁に投与することが必要となる。このようなレジメンは、特に幼い児童では困難となり得る。利用可能な処置は、合併症および副作用を伴うので、血友病を最適かつ有効に処置する単一処置は存在しない。したがって、ＦＶＩＩＩによる血友病Ａの処置の欠点を解決する新規かつ有効な処置の必要性が未だ満たされていない。

本開示は、活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＩＸａおよび第ＩＸ因子チモーゲン（ＦＩＸｚ）の存在下でＦＩＸａに優先的に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する。本開示はまた、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸａに結合する。一部の態様では、ＦＩＸａは、遊離ＦＩＸａ、テナーゼ複合体中のＦＩＸａ、またはＥＧＲ－ＣＭＫに共有結合により連結されているＦＩＸａ（ＦＩＸａ－ＳＭ）である。一部の態様では、ＦＩＸｚは、活性化不能型第ＩＸ因子（ＦＩＸｎ）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、このような参照抗体は、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４６０、ＢＩＩＢ－９－４３３およびそれらの任意の組合せから選択される。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、遊離ＦＩＸａもしくはＦＩＸｚと比べて、ＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合するか、および／または遊離ＦＩＸａもしくはＦＩＸｚに対する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、ＦＩＸａ－ＳＭに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、このような参照抗体は、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－４６０およびそれらの任意の組合せから選択される。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａ－ＳＭもしく
はＦＩＸｚと比べて、遊離ＦＩＸａに優先的に結合するか、および／またはＦＩＸａ－ＳＭもしくはＦＩＸｚに対する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、遊離ＦＩＸａに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＸｚと比べて遊離ＦＩＸａもしくはＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合するか、および／または抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性で、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、このような参照抗体は、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４３３およびそれらの組合せから選択される。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、ＡＲＤＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＹＹＸ_７ＭＤＶ（配列番号７５３）を含み、Ｘ_１はＶまたはＧであり、Ｘ_２は、ＧまたはＶであり、Ｘ_３は、ＧまたはＲであり、Ｘ_４は、ＹまたはＶであり、Ｘ_５は、ＡまたはＳであり、Ｘ_６は、ＧまたはＤであり、Ｘ_７は、Ｇであるか、または存在しない。一部の態様では、ＣＤＲ３は、ＡＲＤＶＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号９０５、ＢＩＩＢ－９－４８４、１３３５、１３３６）、ＡＲＤＩＳＴＤＧＥＳＳＬＹＹＹＭＤＶ（配列番号９０１、ＢＩＩＢ－９－４６０）、ＡＲＧＰＴＤＳＳＧＹＬＤＭＤＶ（配列番号１１８６、ＢＩＩＢ－９－８８２）またはＡＲＤＧＰＲＶＳＤＹＹＭＤＶ（配列番号９１２、ＢＩＩＢ－９－６１９）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＩＸａに特異的に結合する単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃの、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８１５、８６０および９０５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２
およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、９９５および１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８０９、配列番号８５４および配列番号８９９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４４、配列番号９８９および配列番号１０３４を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４４０）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１１０２、配列番号１１４４および配列番号１１８６を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２２８、配列番号１２７０および配列番号１３１２を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－８８２）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８１１、配列番号８５６および配列番号９０１を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４６、配列番号９９１および配列番号１０３６を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４６０）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１１０８、配列番号１１５０および配列番号１１９２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２３４、配列番号１２７６および配列番号１３１８を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４３３）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８２２、配列番号８６７および配列番号９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５７、配列番号１００２および配列番号１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８４３、配列番号８８８および配列番号９３３を含むＶＨ
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含むか、または（ｉｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８４４、配列番号８８９および配列番号９３４を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６）を含む。抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３
、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ１－６９．９、ＶＨ３－０７．０、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２１．２、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．１、ＶＨ４－３１．０、ＶＨ４－３４．０、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．２、ＶＨ４－３９．３、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－３９．６、ＶＨ４－３９．８、ＶＨ４－５９．６、ＶＨ４－０Ｂ．４、またはＶＨ４－０Ｂ．６の生殖系配列から誘導される。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、ＶＫ１－０５．０、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．９、ＶＫ１－０５．２１、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．３、ＶＫ１－３３．０、ＶＫ１－３３．１、ＶＫ１－３３．２、ＶＫ１－３３．８、ＶＫ１－３３．１０、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．６、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１０、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．６、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１１、ＶＫ３－１５．２０、ＶＫ３－１５．２６、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ３－２０．８、またはＶＫ４－０１．０の生殖系配列から誘導される。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３１および２２１（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；（ａ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９および２０９（ＢＩＩＢ－９－４４０）を含み；（ａ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１１５および３０１（ＢＩＩＢ－９－８８２）を含み；（ａ４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２３および２１３（ＢＩＩＢ－９－４６０）を含み；（ａ５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１２７および３１３（ＢＩＩＢ－９－４３３）を含み；（ａ６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４５および２３５（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み；（ａ７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１８５および３７１（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み；（ａ８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号８７および２２１（ＢＩＩＢ－９－１３３５）を含み；または（ａ９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号８９および２２１（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含む。

本開示はまた、ＦＩＸｚに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭの存在下で、ＦＩＸｚに優先的に結合するか、および／または抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分の遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸｚに結合する、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分も提供する。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、このような参照抗体はＢＩＩＢ－９－５７８である。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む。一部の態様では、ＣＤＲ３は、ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＦＤＩ（配列番号１３５５、ＢＩＩＢ－９－５７８）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤ
Ｒ３を含み、ＣＤＲ１は、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらのバリアントからなる群から選択される。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体はＩｇＧ４抗体である。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体は、エフェクターのない（ｅｆｆｅｃｔｏｒｌｅｓｓ）ＩｇＧ４Ｆｃを含む。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、重鎖定常領域を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体は、ヒト抗体、操作された抗体またはヒト化抗体である。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。

本開示はまた、第２の結合特異性を有する分子に連結する、本明細書に開示される、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分を含む二重特異性分子を提供する。同様に、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体もしくはその抗原結合部分を含む二重特異性分子をコードする核酸が提供される。同様に、本明細書に開示される、コードする核酸分子を含む発現ベクターが提供される。同様に、本明細書に開示される発現ベクターにより形質転換された細胞が提供される。本開示はまた、本明細書に開示される任意の抗体もしくはその抗原結合部分または本明細書に開示される二重特異性分子を含むイムノコンジュゲートであって、薬剤に連結されているイムノコンジュゲートを提供する。本開示はまた、（ｉ）本明細書に開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書に開示される二重特異性分子、または本明細書に開示されるイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）担体を含む組成物を提供する。同様に、（ｉ）本明細書に開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書に開示される二重特異性分子、または本明細書に開示されるイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）使用のための指示書を含むキットが提供される。

本開示はまた、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分を製造する方法であって、細胞中で抗体またはその抗原結合部分を発現させる工程、およびこの細胞からこの抗体またはその抗原結合部分を単離する工程を含む、方法を提供する。同様に、それを必要とする対象における活性化ＦＩＸのレベルを測定する方法であって、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部を、好適な条件下で、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびサンプル中の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸａへの結合を測定する工程を含む、方法が提供される。一部の態様では、サンプルは、血液または血清である。

本開示は、第Ｘ因子チモーゲン（ＦＸｚ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよび活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）の存在下で、ＦＸｚに優先的に結合する、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、
抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する。同様に、抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する、単離された抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分が提供される。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＬＩによって測定すると、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸｚに結合する。一部の態様では、ＦＸａは、遊離ＦＸａ、またはＥＧＲ－ＣＭＫに共有結合により連結されているＦＸａ（ＦＩＸａ－ＳＭ）である。一部の態様では、ＦＸｚは、活性化不能型第Ｘ因子（ＦＸｎ）を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－１２－９３２、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図１２Ａおよび図１２中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、ＡＲＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＲＸ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＤＸ_８（配列番号７６６）を含み、Ｘ_１は、ＧまたはＬであり、Ｘ_２は、ＲまたはＧであり、Ｘ_３は、ＦまたはＹであり、Ｘ_４は、ＰまたはＧであり、Ｘ_５は、ＲまたはＡであり、Ｘ_６は、ＧまたはＳであり、Ｘ_７は、ＲまたはＡであり、Ｘ_８は、ＹまたはＩである。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、ＡＲＧＲＦＲＰＲＧＲＦＤＹ（配列番号１５７５、ＢＩＩＢ－１２－９１７）、ＡＲＬＧＹＲＧＡＳＡＦＤＩ（配列番号１５８９、ＢＩＩＢ－１２－９３２）またはＡＲＶＧＧＧＹＡＮＰ（配列番号１５７３、ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＸｚに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ、図１２Ａおよび図１２Ｂの、ＶＨＣＤＲ１
、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３９３、１４８３または１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６３、１７５３および１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３９５、１４８５または１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６５、１７５５および１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１４０９、１４９９または１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６７９、１７６９および１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、および５５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６７５、６７７、６７９、６８１、６８３、６８５、６８７、６８９、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９、７３１、７３３、７３５、７３７、７３９、７４１、および７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４、またはＶＨ５－５１．１の生殖系配列から誘導される。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１
．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０の生殖系配列から誘導される。一部の態様では、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ｂ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４２３および６１１（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；（ｂ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４２７および６１５（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または（ｂ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４５５および６４３（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含む。

本開示はまた、活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよびＦＸａの存在下で、ＦＸａに優先的に結合するか、および／または抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合親和性よりも高い結合親和性で、ＦＸａに結合する、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－１２－９２５からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、ＡＫＧＰＲＹＹＷＹＳＷＹＦＤＬ（配列番号１９１９、ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２は、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３は、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ、図１２Ｃの、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１９１１、１９１５または１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１９２３、１９２７または１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨおよびＶＬは、
それぞれ、配列番号５５９および７４７（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む。一部の態様では、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらのバリアントからなる群から選択される。一部の態様では、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分はＩｇＧ４抗体である。一部の態様では、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、エフェクターのないＩｇＧ４Ｆｃを含む。一部の態様では、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、重鎖定常領域を含む。一部の態様では、抗ＦＸ抗体は、ヒト抗体、操作された抗体またはヒト化抗体である。一部の態様では、その抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。本開示はまた、第２の結合特異性を有する分子に連結している、本明細書に開示される抗ＦＸ抗体を含む二重特異性分子を提供する。同様に、本明細書に開示される抗ＦＸ抗体もしくはその抗原結合部分の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または本明細書に開示される抗ＦＸ抗体もしくはその抗原結合部分を含む二重特異性分子をコードする核酸が提供される。同様に、核酸分子を含む発現ベクターが提供される。同様に、発現ベクターにより形質転換された細胞が提供される。同様に、抗体もしくはその抗原結合部分、または二重特異性分子を含むイムノコンジュゲートであって、薬剤に連結されているイムノコンジュゲートが提供される。同様に、（ｉ）抗体もしくはその抗原結合部分、または二重特異性分子、またはイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）担体を含む組成物が提供される。同様に、（ｉ）抗体もしくはその抗原結合部分、または二重特異性分子、またはイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）使用のための指示書を含むキットが提供される。同様に、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を製造する方法であって、細胞中で抗体またはその抗原結合部分を発現させる工程、およびこの細胞からこの抗体またはその抗原結合部分を単離する工程を含む、方法が提供される。

本開示はまた、それを必要とする対象における、チモーゲンＦＸ（ＦＸｚ）を測定する方法であって、本明細書に開示される抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を、好適な条件下、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびサンプル中の抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合を測定する工程を含む、方法を提供する。一部の態様では、サンプルは、対象に由来する血液または血清である。本開示はまた、（ｉ）本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分、および（ｉｉ）本明細書に開示される抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を含む、二重特異性分子を提供する。一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃおよび図３Ｄ中の抗ＦＩＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａ、図１２Ｂおよび図１２Ｃ中の抗ＦＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＸ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃおよび図３Ｄ中の抗ＦＩＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａ、図１２Ｂおよび図１２Ｃ中の抗ＦＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＸ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。本明細書に開示される二重特異性分子の態様の一部において、（ｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、図１６Ａ、図１６Ｂ、図１６Ｃおよび図１６Ｄ中の抗ＦＩＸ（ＢＩＩＢ－９）抗体の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３からなる群から選択される；および（ｉｉ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、図１６Ａ、図１６Ｂ、図１６Ｃおよび図１６Ｄ中の、抗ＦＸ（ＢＩＩＢ－１２）抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３からなる群から選択される。本明細書に開示される二重特異性分子の一部の態様では
、（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、（ａ１）それぞれ、配列番号８１５、８６０または９０５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、９９５または１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４）；（ａ２）それぞれ、配列番号８２２、８６７および９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５７、１００２および１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９）；（ａ３）それぞれ、配列番号１３４７、１３５１および１３５５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１３５９、１３６３および１３６７を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－５７８）；（ａ４）それぞれ、配列番号８４３、８８８および９３３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９７８、１０２３および１０６８を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５）を含み；または（ａ５）それぞれ、配列番号８４４、８８９および９３４を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９７９、１０２４および１０６９を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含み；（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、（ｂ１）それぞれ、配列番号１３９３、１４８３および１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６３、１７５３および１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５）；（ｂ２）それぞれ、配列番号１３９５、１４８５および１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６５、１７５５および１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７）；（ｂ３）それぞれ、配列番号１９１１、１９１５および１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１９２３、１９２７および１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９２５）；（ｂ４）それぞれ、配列番号１４０９、１４９９および１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６７９、１７６９および１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２）；または（ｂ５）それぞれ、配列番号１４３３、１５２３および１６１３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１７０３、１７９３および１８８３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）を含む。本明細書に開示される二重特異性分子の一部の態様では、（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、（ａ１）それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＬＶ（ＢＩＩＢ－９－４８４）；（ａ２）それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）；（ａ３）それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）；（ａ４）それぞれ、配列番号８７および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－１３３５）；または（ａ５）それぞれ、配列番号８９および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含み；（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、（ｂ１）それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＬＶ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）；（ｂ２）それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）；（ｂ３）それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）；（ｂ４）それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９３２）；または（ｂ５）それぞれ、配列番号５０３および６９１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）を含む。本明細書に開示される二重特異性分子の一部の態様では、（ｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＬＶ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；および抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；また
は（ｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または（ｉｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含み；または（ｉｖ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含み；または（ｖ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；または（ｖｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または（ｖｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み；抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または（ｖｉｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み；および抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む。一部の態様では、二重特異性分子は、少なくとも１つのＦＶＩＩＩａ活性アッセイにおいて、活性化第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩａ）補因子を機能的に擬似する。一部の態様では、ＦＶＩＩＩａ活性アッセイは、発色ＦＸａ生成アッセイ、一段階凝固アッセイまたはそれらの組合せから選択される。一部の態様では、ＦＶＩＩＩａ活性は、同一のアッセイにおいて、普通なら、ＦＶＩＩＩにより実現される活性の、少なくとも１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％を実現する。一部の態様では、二重特異性分子は、インビトロまたはインビボで、プロトロンビンからトロンビンを、フィブリノゲンからフィブリンを、および／またはフィブリン凝塊を生成することができる。一部の態様では、二重特異性分子は、ＢＬＩによって決定すると、ＦＩＸａとＦＸの両方に同時に結合する。一部の態様では、二重特異性分子は、ＩｇＧアイソタイプのものである。一部の態様では、ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ１部分クラスのものである。一部の態様では、ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ４部分クラスのものである。一部の態様では、二重特異性分子は、二重特異性ＩｇＧフォーマットのものであり、表２中の抗体からなる群から選択される。一部の態様では、二重特異性分子は、二重特異性ヘテロ二量体フォーマットのものである。一部の態様では、二重特異性分子は、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖を含む。一部の態様では、二重特異性分子は、２つの同一の軽鎖および２つの異なる重鎖を含む。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、出血エピソードの出現率を制御または低減することが可能である。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、ホメオスタシスを維持することができる。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、決まった手順の予防を実現することができる。一部の態様では、対象は、第ＶＩＩＩ因子に対して中和抗体を発達させる、または発達させることが予想される。

本開示はまた、薬剤、例えば治療剤に連結されている、本明細書に開示される二重特異性分子を含むイムノコンジュゲートを提供する。同様に、（ｉ）本明細書に開示される二
重特異性分子または二重特異性分子を含むイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）担体を含む組成物が提供される。同様に、（ｉ）本明細書に開示される二重特異性分子または二重特異性分子を含むイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）使用のための指示書を含むキットが提供される。同様に、本明細書に開示される二重特異性分子をコードする核酸配列が提供される。同様に、核酸を含むベクター、およびベクターを含む宿主細胞が提供される。一部の態様では、宿主細胞は、原核細胞、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞またはＣＯＳ細胞である。同様に、本明細書に開示される二重特異性分子を生成する方法であって、二重特異性分子の発現を可能にする条件下で、本明細書に開示される宿主細胞を培養する工程を含む方法が提供される。一部の態様では、本明細書に開示される二重特異性分子を生成する方法は、ヘテロ二量化を増強する条件を使用することをさらに含む。

本開示はまた、それを必要とする対象において、ＦＸ活性化を促進する方法であって、対象に、治療有効量の、本明細書に開示される二重特異性分子、または本明細書に開示される二重特異性分子を含むまたはコードする、本明細書に開示されるイムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞を投与する工程を含む、方法を提供する。

本開示はまた、それを必要とする対象において、出血エピソードの頻度または程度を低下させる方法であって、対象に、有効量の、本明細書に開示される二重特異性分子、または本明細書に開示される二重特異性分子を含むもしくはコードする、本明細書に開示されるイムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞を投与する工程を含む、方法を提供する。一部の態様では、対象は、第ＶＩＩＩ因子（「ＦＶＩＩＩ」）に対して阻害剤を生じる、または生ずる傾向を有する。一部の態様では、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤は、ＦＶＩＩＩに対する中和抗体である。一部の態様では、出血エピソードは、関節血症、筋肉の出血、口腔内出血、出血、筋肉への出血、口内出血、外傷、頭部外傷、胃腸管の出血、頭蓋内出血、腹部内出血、胸郭内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙における出血、腹膜後腔における出血、腸腰筋鞘における出血、またはそれらの任意の組合せの結果である。

本開示はまた、それを必要とする対象において、血液凝固障害を処置する方法であって、対象に、有効量の、本明細書に開示される二重特異性分子、または本明細書に開示される二重特異性分子を含むもしくはコードする、本明細書に開示されるイムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞を投与する工程を含む、方法を提供する。一部の態様では、血液凝固障害は、血友病Ａまたは血友病Ｂである。一部の態様では、対象はヒト対象である。一部の態様では、対象は、ＦＶＩＩＩ補充療法を受けている最中か、またはこれを受けている。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病治療法と組み合わせて投与される。一部の態様では、血友病治療法は、ＦＶＩＩＩ補充療法である。一部の態様では、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターまたは宿主細胞は、血友病治療法の投与前、その間またはその後に投与される。一部の態様では、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターまたは宿主細胞は、静脈内または皮下に投与される。一部の態様では、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターまたは宿主細胞の投与により、出血エピソードの出現、自発的出血エピソードまたは急性出血の頻度が低下する。一部の態様では、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、組成物、核酸、ベクターまたは宿主細胞の投与により、年間出血率が５％、１０％、２０％、３０％または５０％低下する。

本開示はまた、ＢＩＩＢ－９－１３３６と同じエピトープに結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。同様に、ＢＩＩＢ－９－１３３６エピトープに重なるエピトープに結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が提供される。

本開示はまた、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによる位置（ｉ）９１および１０１、（ｉｉ）１２５と１２８、（ｉｉｉ）１６５と１７９、または（ｉｖ）２３２と２４１の間に位置する、少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープ領域に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。同様に、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合している、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が提供される。一部の態様では、エピトープは、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ９３、Ｒ１６５、Ｎ１７８およびＲ２３３を含む。他の態様では、エピトープは、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１を含む。一部の態様では、エピトープは、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５のうちの少なくとも１つを含まない。一部の態様では、エピトープは、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５を含まない。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの軽鎖中の少なくとも１つのアミノ酸残基（配列番号７５６）に結合する。一部の態様では、ＦＩＸａの軽鎖中のアミノ酸残基（配列番号７５６）はＫ１００である。一部の態様では、エピトープは、ＦＩＸａに対するＦＶＩＩＩａの結合部位に重なる。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａに結合に関して、ＦＶＩＩＩａと交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａに対するＦＶＩＩＩａの結合を遮断する。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、表７中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含み；および／または、（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、表７中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含み；および／または（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、表７中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含み；および／または（ｉｖ）ＶＬＣＤＲ１は、表７中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含み；および／または（ｖ）ＶＬＣＤＲ２は、表７中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含み；および／または（ｖｉ）ＶＬＣＤＲ３は、表７中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＸ_１ＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号２１９６）を含み、Ｘ_１は、ＬまたはＶである。一部の態様では、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列
番号２１９４）を含み、Ｘ_１は、Ｓ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＹまたはＦであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＤであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｖ、ＡまたはＴである；および／または（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_５ＩＳＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１９５）を含み、Ｘ_５は、Ｓ、Ａ、ＹまたはＧであり、Ｘ_６は、ＳまたはＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、ＡまたはＧであり、Ｘ_８は、Ｓ、ＧまたはＤであり、Ｘ_９は、Ｓ、ＴまたはＧであり、Ｘ_１０は、ＹまたはＴである。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＹＡＮＦＰＹＴ（配列番号２１６８）を含む。一部の態様では、（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＡＮＹＬＮ（配列番号２１１６）を含み；および／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号２１４２）を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０３８～２０４７から選択され、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２０６４～２０７３から選択され、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２０９０～２０９９から選択されるＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２１１６～２１２５から選択され、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１４２～２１５１から選択され、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１６８～２１７７から選択される、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_１ＲＤＶＸ_２ＧＹＡＧＸ_３ＹＧＭＤＶ（配列番号２１９８）を含み、Ｘ_１は、ＡまたはＶであり、Ｘ_２は、ＧまたはＳであり、Ｘ_３は、ＹまたはＦである。一部の態様では、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＧＳＹＤＭＮ（配列番号２０４８）を含み；および／または（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＳＹＩＸ_４ＹＡＸ_５ＳＶＫＧ（配列番号２１９７）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＤであり、Ｘ_２は、ＧまたはＳであり、Ｘ_３は、ＥまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、ＥまたはＤである。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_１ＱＹＡＸ_２ＦＰＹＴ（配列番号２２０１）を含み、Ｘ_１は、ＱまたはＳであり、Ｘ_２は、ＮまたはＲである。一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｘ_１ＡＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＩＸ_５Ｘ_６ＹＬＮ（配列番号２１９９）を含み、Ｘ_１は、Ｑ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＳまたはＮであり、Ｘ_３は、ＱまたはＥであり、Ｘ_４は、ＤまたはＹであり、Ｘ_５は、ＡまたはＳであり、Ｘ_６は、ＮまたはＤである；および／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＸ_７ＮＬＸ_８Ｘ_９（配列番号２２００）を含み、Ｘ_７は、ＳまたはＡであり、Ｘ_８は、Ｅ、ＨまたはＱであり、Ｘ_９は、ＴまたはＹである。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、
ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０４８～２０５２から選択され、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２０７４～２０７８から選択され、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２１００～２１０４から選択されるＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２１２６～２１３０から選択され、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１５２～２１５６から選択され、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１７８～２１８２から選択される、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＧＰＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＹＹＭＤＶ（配列番号２２０４）を含み、Ｘ_１は、ＲまたはＱであり、Ｘ_２は、Ｖ、Ｄ、ＬまたはＥであり、Ｘ_３は、ＳまたはＶである。一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＹＴＦＸ_１Ｘ_２ＹＸ_３ＭＨ（配列番号２２０２）を含む、Ｘ_１は、ＴまたはＨであり、Ｘ_２は、Ｓ、ＧまたはＨであり、Ｘ_３は、ＹまたはＰである；および／または（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_４ＩＮＰＳＸ_５ＧＸ_６ＴＸ_７ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２０３）を含む、Ｘ_４は、ＩまたはＳであり、Ｘ_５は、ＧまたはＲであり、Ｘ_６は、ＳまたはＲであり、Ｘ_７は、ＳまたはＥである。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＤＮＷＰＦＴ（配列番号２１１６）を含む。一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号２１１６）を含み；および／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２１１６）を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０５３～２０５７から選択され、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２０７９～２０８３から選択され、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２１０５～２１０９から選択されるＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２１３１～２１３５から選択され、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１５７～２１６１から選択され、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１８３～２１８７から選択される、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＸ_１ＤＩ（配列番号２２０７）を含み、Ｘ_１は、ＦまたはＶである。一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＹＸ_４ＷＸ_５（配列番号２２０５）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＡであり、Ｘ_２は、Ｓ、Ｔ、ＧまたはＶであり、Ｘ_３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、Ｇ、Ｖ、ＮまたはＳである；および／または（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_６ＩＸ_７Ｘ_８Ｘ_９ＧＸ_１０ＴＸ_１１ＹＮＰＳＬＫ
Ｓ（配列番号２２０６）を含み、Ｘ_６は、ＳまたはＹであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｙ、Ｒ、ＴまたはＱであり、Ｘ_８は、Ｙ、Ｇ、ＰまたはＡであり、Ｘ_９は、ＳまたはＱであり、Ｘ_１０は、Ｓまたはであり、Ｘ_１１は、ＹまたはＱである。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＡＮＦＬＰＦＴ（配列番号２１８８）を含む。一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＤＳＷＬＡ（配列番号２１３６）を含み；および／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２１６２）を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０５８～２０６３から選択され、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２０８４～２０８９から選択され、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２１１０～２１１５から選択される、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３であって、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２１３６～２１４１から選択され、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１６２～２１６７から選択され、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１８８～２１９３から選択される、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ｉ）ＶＨは、配列番号１９３５、１９３９、１９４３、１９４７、１９５１、１９５５、１９５９、１９６３、１９６７、１９７１、１９７５、１９７９、１９８３、１９８７、１９９１、１９９５、１９９９、２００３、２００７、２０１１、２０１５、２０１９、２０２３、２０２７、２０３１および２０３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％が同一のアミノ酸配列を含み；および／または（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１９３７、１９４１、１９４５、１９４９、１９５３、１９５７、１９６１、１９６５、１９６９、１９７３、１９７７、１９８１、１９８５、１９８９、１９９３、１９９７、２００１、２００５、２００９、２０１３、２０１７、２０２１、２０２５、２０２９、２０３３および２０３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３５および１９３７（ＢＩＩＢ－９－３５９５）を含み；（ａ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３９および１９４１（ＢＩＩＢ－９－３６０１）を含み；（ａ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４３および１９４５（ＢＩＩＢ－９－３６０４）を含み；（ａ４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４７および１９４９（ＢＩＩＢ－９－３６１７）を含み；（ａ５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５１および１９５３（ＢＩＩＢ－９－３６１８）を含み；（ａ６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５５および１９５７（ＢＩＩＢ－９－３６２１）を含み；（ａ７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５９および１９６１（ＢＩＩＢ－９－３６４７）を含み；（ａ８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９６３および１９６５（ＢＩＩＢ－９－３６４９）を含み；（ａ９）ＶＨおよびＶＬは、それぞ
れ、配列番号１９６７および１９６９（ＢＩＩＢ－９－３６５０）を含み；（ａ１０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７１および１９７３（ＢＩＩＢ－９－３６５４）を含み；（ａ１１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７５および１９７７（ＢＩＩＢ－９－３７５３）を含み；（ａ１２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７９および１９８１（ＢＩＩＢ－９－３７５４）を含み；（ａ１３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８３および１９８５（ＢＩＩＢ－９－３７５６）を含み；（ａ１４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８７および１９８９（ＢＩＩＢ－９－３７６４）を含み；（ａ１５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９１および１９９３（ＢＩＩＢ－９－３７６６）を含み；（ａ１６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９５および１９９７（ＢＩＩＢ－９－３７０７）を含み；（ａ１７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９９および２００１（ＢＩＩＢ－９－３７０９）を含み；（ａ１８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００３および２００５（ＢＩＩＢ－９－３７２０）を含み；（ａ１９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００７および２００９（ＢＩＩＢ－９－３７２７）を含み；（ａ２０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１１および２０１３（ＢＩＩＢ－９－３７４５）を含み；（ａ２１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１５および２０１７（ＢＩＩＢ－９－３７８０）を含み；（ａ２２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１９および２０２１（ＢＩＩＢ－９－３６７５）を含み；（ａ２３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２３および２０２５（ＢＩＩＢ－９－３６８１）を含み；（ａ２４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２７および２０２９（ＢＩＩＢ－９－３６８４）を含み；（ａ２５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３１および２０３３（ＢＩＩＢ－９－３６９８）を含み；または（ａ２６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３５および２０３７（ＢＩＩＢ－９－３７０４）を含む。

実施形態
実施形態１．活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＩＸａおよび第ＩＸ因子チモーゲン（ＦＩＸｚ）の存在下でＦＩＸａに優先的に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２．抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する、実施形態１の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３．抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸａに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５．ＦＩＸａが、遊離ＦＩＸａ、テナーゼ複合体中のＦＩＸａ、またはＥＧＲ－ＣＭＫに共有結合により連結されているＦＩＸａ（ＦＩＸａ－ＳＭ）である、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態６．ＦＩＸｚが、活性化不能型第ＩＸ因子（ＦＩＸｎ）を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７．図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８．図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９．参照抗体が、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４６０、ＢＩＩＢ－９－４３３およびそれらの任意の組合せから選択される、実施形態７または８の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０．遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸｚと比べて、ＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合するか、および／または遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸｚに対する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、ＦＩＸａ－ＳＭに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１１．図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１２．図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１３．参照抗体が、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－４６０およびそれらの任意の組合せから選択される、実施形態１１または１２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１４．ＦＩＸａ－ＳＭまたはＦＩＸｚと比べて、遊離ＦＩＸａに優先的に結合するか、および／またはＦＩＸａ－ＳＭまたはＦＩＸｚに対する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、遊離ＦＩＸａに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１５．図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１６．図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７．ＦＩＸｚと比べて、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合するか、および／またはＦＩＸｚに対する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８．図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９．図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２０．参照抗体が、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４３３およびそ
れらの任意の組合せから選択される、実施形態１８または１９の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２１．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２２．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、ＡＲＤＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＹＹＸ_７ＭＤＶ（配列番号７５３）を含み、Ｘ_１が、ＶまたはＧであり、Ｘ_２が、ＧまたはＶであり、Ｘ_３が、ＧまたはＲであり、Ｘ_４が、ＹまたはＶであり、Ｘ_５が、ＡまたはＳであり、Ｘ_６が、ＧまたはＤであり、Ｘ_７が、Ｇであるかまたは存在しない、実施形態１から２１のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２３．ＣＤＲ３が、ＡＲＤＶＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号９０５、ＢＩＩＢ－９－４８４、１３３５、１３３６）、ＡＲＤＩＳＴＤＧＥＳＳＬＹＹＹＭＤＶ（配列番号９０１、ＢＩＩＢ－９－４６０）、ＡＲＧＰＴＤＳＳＧＹＬＤＭＤＶ（配列番号１１８６、ＢＩＩＢ－９－８８２）またはＡＲＤＧＰＲＶＳＤＹＹＭＤＶ（配列番号９１２、ＢＩＩＢ－９－６１９）を含む、実施形態２２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２４．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２５．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨ
ＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２６．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬ
ＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２７．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬ
ＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２８．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬ
ＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２９．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＩＸａに特異的に結合する単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならび
にＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃの、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３０．それぞれ、配列番号８１５、８６０および９０５を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、９９５および１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含む、実施形態２９の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３１．（ａ１）抗体が、それぞれ、配列番号８０９、配列番号８５４および配列番号８９９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４４、配列番号９８９および配列番号１０３４を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４４０）を含み；
（ａ２）抗体が、それぞれ、配列番号１１０２、配列番号１１４４および配列番号１１８６を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２２８、配列番号１２７０および配列番号１３１２を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－８８２）を含み；
（ａ３）抗体が、それぞれ、配列番号８１１、配列番号８５６および配列番号９０１を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４６、配列番号９９１および配列番号１０３６を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４６０）を含み；または
（ａ４）抗体が、それぞれ、配列番号１１０８、配列番号１１５０および配列番号１１９２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２３４、配列番号１２７６および配列番号１３１８を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４３３）を含む、実施形態２９の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３２．抗体が、それぞれ、配列番号８２２、配列番号８６７および配列番号９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５７、配列番号１００２および配列番号１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含む、実施形態２９の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３３．（ｉ）抗体が、それぞれ、配列番号８４３、配列番号８８８および配列番号９３３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含むか、または（ｉｉ）抗体が、それぞれ、配列番号８４４、配列番号８８９および配列番号９３４を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６）を含む、実施形態２９の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３４．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨが、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３
、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３５．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬが、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３６．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨが、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ１－６９．９、ＶＨ３－０７．０、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２１．２、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．１、ＶＨ４－３１．０、ＶＨ４－３４．０、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．２、ＶＨ４－３９．３、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－３９．６、ＶＨ４－３９．８、ＶＨ４－５９．６、ＶＨ４－０Ｂ．４またはＶＨ４－０Ｂ．６のうちの生殖系配列から誘導される、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３７．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬが、ＶＫ１－０５．０、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．９、ＶＫ１－０５．２１、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．３、ＶＫ１－３３．０、ＶＫ１－３３．１、ＶＫ１－３３．２、ＶＫ１－３３．８、ＶＫ１－３３．１０、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．６、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１０、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．６、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１１、ＶＫ３－１５．２０、ＶＫ３－１５．２６、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ３－２０．８、またはＶＫ４－０１．０の生殖系配列から誘導される、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３８．ＶＨおよびＶＬを含み、
（ａ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３１および２２１（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み；
（ａ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９および２０９（ＢＩＩＢ－９－４４０）を含み；
（ａ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１１５および３０１（ＢＩＩＢ－９－８８２）を含み；
（ａ４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２３および２１３（ＢＩＩＢ－９－４６０）を含み；
（ａ５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１２７および３１３（ＢＩＩＢ－９－４
３３）を含み；
（ａ６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４５および２３５（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み；
（ａ７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１８５および３７１（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み；
（ａ８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号８７および２２１（ＢＩＩＢ－９－１３３５）を含み；または
（ａ９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号８９および２２１（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含む
前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態３９．ＦＩＸｚに特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭの存在下で、ＦＩＸｚに優先的に結合するか、および／または抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分の遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸｚに結合する、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４０．図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４１．図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４２．参照抗体がＢＩＩＢ－９－５７８である、実施形態４０または４１の抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４３．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４４．ＣＤＲ３が、ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＦＤＩ（配列番号１３５５、ＢＩＩＢ－９－５７８）を含む、実施形態４３の抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４５．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４６．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４７．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４８．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態４９．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む、前記実施形態のいずれかの抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５０．抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそのバリアントからなる群から選択される、前記実施形態および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５１．抗体が、ＩｇＧ４抗体である、実施形態５０の抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５２．抗体が、エフェクターのないＩｇＧ４Ｆｃを含む、実施形態５０の抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５３．重鎖定常領域を含む、前記実施形態および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態５４．抗体が、ヒト抗体、操作された抗体またはヒト化抗体である、前記実施形態および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗体。

実施形態５５．その抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、前記実施形態および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗原結合部分。

実施形態５６．第２の結合特異性を有する分子に連結している、前記実施形態および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分を含む、二重特異性分子。

実施形態５７．実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または実施形態５６の二重特異性分子をコードする核酸。

実施形態５８．実施形態５７の核酸分子を含む発現ベクター。

実施形態５９．実施形態５８の発現ベクターにより形質転換された細胞。

実施形態６０．実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つによる抗体もしくはその抗原結合部分、または実施形態５６の二重特異性分子を含む、イムノコンジュゲートであって、薬剤に連結されているイムノコンジュゲート。

実施形態６１．実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、実施形態５６の二重特異性分子、または実施形態６０のイムノコンジュゲート、および担体を含む、組成物。

実施形態６２．実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、実施形態５６の二重特異性分子、または実施形態６０のイムノコンジュゲート、および使用のための指示書を含む、キット。

実施形態６３．抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分を製造する方法であって、実施形態５９の細胞中で抗体またはその抗原結合部分を発現させる工程、およびこの細胞からこの抗体またはその抗原結合部分を単離する工程を含む、方法。

実施形態６４．それを必要とする対象における活性化ＦＩＸのレベルを測定する方法であって、実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を、好適な条件下、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびサンプル中の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸａへの結合を測定する工程を含む、方法。

実施形態６５．サンプルが、血液または血清である、実施形態６４の方法。

実施形態６６．第Ｘ因子チモーゲン（ＦＸｚ）に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよび活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）の存在下で、ＦＸｚに優先的に結合する、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態６７．抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する、実施形態６６の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態６８．抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する、単離された抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態６９．ＢＬＩによって測定すると、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸｚに結合する、実施形態６６から６８のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７０．ＦＸａが、遊離ＦＸａまたはＥＧＲ－ＣＭＫに共有結合により連結されているＦＸａ（ＦＩＸａ－ＳＭ）である、実施形態６６から６９のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７１．ＦＸｚが、活性化不能型第Ｘ因子（ＦＸｎ）を含む、実施形態６６から７０のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７２．図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、実施形態６６から７１のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７３．図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、実施形態６６から７２のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７４．ＢＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－１２－９３２、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、実施形態７３の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７５．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む、実施形態６６から７４のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７６．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、ＡＲＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＲＸ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＤＸ_８（配列番号７６６）を含み、Ｘ_１が、ＧまたはＬであり、Ｘ_２が、ＲまたはＧであり、Ｘ_３が、ＦまたはＹであり、Ｘ_４が、ＰまたはＧであり、Ｘ_５が、ＲまたはＡであり、Ｘ_６が、ＧまたはＳであり、Ｘ_７が、ＲまたはＡであり、Ｘ_８が、ＹまたはＩである、実施形態６６から７５のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７７．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、ＡＲＧＲＦＲＰＲＧＲＦＤＹ（配列番号１５７５、ＢＩＩＢ－１２－９１７）、ＡＲＬＧＹＲＧＡＳＡＦＤＩ（配列番号１５８９、ＢＩＩＢ－１２－９３２）またはＡＲＶＧＧＧＹＡＮＰ（配列番号１５７３、ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含む、実施形態６６から７６のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７８．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む、実施形態６６から７７のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態７９．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む、実施形態６６から７８のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８０．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む、実施形態６６から７９のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８１．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む、実施形態６６から８０のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８２．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図１２Ａおよび図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む、実施形態６６から８１のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８３．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＸｚに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ、図１２Ａおよび図１２Ｂの、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８４．抗体がそれぞれ、配列番号１３９３、１４８３または１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６３、１７５３および１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含む、実施形態８３の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８５．抗体がそれぞれ、配列番号１３９５、１４８５または１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６５、１７５５および１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含む、実施形態８３の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８６．抗体がそれぞれ、配列番号１４０９、１４９９または１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６７９、１７６９および１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含む、実施形態８３の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８７．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨが、配列番号３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、および５５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態６６から８６のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８８．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬが、配列番号５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６７５、６７７、６７９、６８１、６８３、６８５、６８７、６８９、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９、７３１、７３３、７３５、７３７、７３９、７４１、および７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態６６から８７のいずれか１つの、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態８９．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨが、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．
１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４またはＶＨ５－５１．１のうちの生殖系配列から誘導される、実施形態６６から８８のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９０．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬが、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０のうちの生殖系配列から誘導される、実施形態６６から８９のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９１．ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｂ１）ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号４２３および６１１（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；
（ｂ２）ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号４２７および６１５（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または
（ｂ３）ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号４５５および６４３（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含む、実施形態６６から９０のいずれか１つの抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９２．活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分」）であって、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよびＦＸａの存在下で、ＦＸａに優先的に結合するか、および／または抗体もしくはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合親和性よりも高い結合親和性で、ＦＸａに結合する、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９３．図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する、実施形態９２の抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９４．図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、実施形態９２または９３の抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９５．ＢＩＩＢ－１２－９２５からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する、実施形態９４の抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９６．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含む、実施形態９２から９５のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９７．ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、ＡＫＧＰＲＹＹＷＹＳＷＹＦＤＬ（配列番号１９１９、ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む、実施形態９２から９６のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９８．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含む、実施形態９２から９７のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態９９．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含む、実施形態９２から９８のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１００．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１が、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含む、実施形態９２から９９のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０１．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ２が、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含む、実施形態９２から１００のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０２．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ３が、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む、実施形態９２から１０１のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０３．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＦＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ、図１２ＣのＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０４．抗体がそれぞれ、配列番号１９１１、１９１５または１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１９２３、１９２７または１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬ
ＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む、実施形態１０３の抗ＦＸａまたはその抗原結合部分。

実施形態１０５．ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号５５９および７４７（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む、実施形態９２から１０４のいずれか１つの抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０６．抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはそのバリアントからなる群から選択される、実施形態６６から１０５のいずれか１つの抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０７．抗体が、ＩｇＧ４抗体である、実施形態１０６の抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０８．抗体が、エフェクターのないＩｇＧ４Ｆｃを含む、実施形態１０
６の抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１０９．重鎖定常領域を含む、実施形態６６から１０８のいずれか１つの抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１１０．抗体が、ヒト抗体、操作された抗体またはヒト化抗体である、実施形態６６から１０９のいずれか１つの抗ＦＸ抗体。

実施形態１１１．その抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態６６から１１０のいずれか１つの抗ＦＸ抗原結合部分。

実施形態１１２．第２の結合特異性を有する分子に連結している、実施形態６６から１１１のいずれか１つの抗ＦＸ抗体を含む、二重特異性分子。

実施形態１１３．実施形態６６から１１１のいずれか１つの、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または実施形態１１２の二重特異性分子をコードする核酸。

実施形態１１４．実施形態１１３の核酸分子を含む発現ベクター。

実施形態１１５．実施形態１１４の発現ベクターにより形質転換された細胞。

実施形態１１６．実施形態６６から１１１のいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、または実施形態１１２の二重特異性分子を含むイムノコンジュゲートであって、薬剤に連結されているイムノコンジュゲート。

実施形態１１７．実施形態６６から１１１のいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、または実施形態１１２の二重特異性分子、または実施形態１１６のイムノコンジュゲート、および担体を含む、組成物。

実施形態１１８．実施形態６６から１１１のいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、または実施形態１１２の二重特異性分子、または実施形態１１６のイムノコンジュゲート、および使用のための指示書を含む、キット。

実施形態１１９．抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を製造する方法であって、実施形態１１５の細胞中で抗体またはその抗原結合部分を発現させる工程、およびこの細胞からこの抗体またはその抗原結合部分を単離する工程を含む、方法。

実施形態１２０．それを必要とする対象における、チモーゲンＦＸ（ＦＸｚ）を測定する方法であって、実施形態６６から１１１のいずれか１つの抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を、好適な条件下、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびサンプル中の抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合を測定する工程を含む、方法を提供する。

実施形態１２１．サンプルが対象からの血液または血清である、実施形態１２０の方法。

実施形態１２２．実施形態１から５５および実施形態１６９から２０４のいずれか１つの抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分、ならびに（ｉｉ）実施形態６６から１１１の
いずれか１つの抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を含む、二重特異性分子。

実施形態１２３．参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体が、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃおよび図３Ｄ中の抗ＦＩＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａ、図１２Ｂおよび図１２Ｃ中の抗ＦＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＸ抗体のＶＨおよびＶＬを含む、実施形態１２２の二重特異性分子。

実施形態１２４．参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体が、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃおよび図３Ｄ中の抗ＦＩＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａ、図１２Ｂおよび図１２Ｃ中の抗ＦＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＸ抗体のＶＨおよびＶＬを含む、実施形態１２２または１２３の二重特異性分子。

実施形態１２５．（ｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、図１６Ａ、図１６Ｂ、図１６Ｃおよび図１６Ｄ中の抗ＦＩＸ（ＢＩＩＢ－９）抗体の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３からなる群から選択される；および
（ｉｉ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、図１６Ａ、図１６Ｂ、図１６Ｃおよび図１６Ｄ中の抗ＦＸ（ＢＩＩＢ－１２）抗体の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３からなる群から選択される、実施形態１２２から１２４のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１２６．（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ１）それぞれ、配列番号８１５、８６０または９０５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、９９５または１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４）；
（ａ２）それぞれ、配列番号８２２、８６７および９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５７、１００２および１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９）；
（ａ３）それぞれ、配列番号１３４７、１３５１および１３５５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１３５９、１３６３および１３６７を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－５７８）；
（ａ４）それぞれ、配列番号８４３、８８８および９３３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９７８、１０２３および１０６８を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５）；または
（ａ５）それぞれ、配列番号８４４、８８９および９３４を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９７９、１０２４および１０６９を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含み；
（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、
（ｂ１）それぞれ、配列番号１３９３、１４８３および１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６３、１７５３および１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５）；
（ｂ２）それぞれ、配列番号１３９５、１４８５および１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６５、１７５５および１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７）；
（ｂ３）それぞれ、配列番号１９１１、１９１５および１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１９２３、１９２７および１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９２５）；
（ｂ４）それぞれ、配列番号１４０９、１４９９および１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６７９、１７６９および１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２）；または
（ｂ５）それぞれ、配列番号１４３３、１５２３および１６１３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１７０３、１７９３および１８８３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）を含む、実施形態１２２から１２４のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１２７．（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ１）それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）；
（ａ２）それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）；
（ａ３）それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）；
（ａ４）それぞれ、配列番号８７および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－１３３５）；または
（ａ５）それぞれ、配列番号８９および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－１３３６）を含み；
（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、
（ｂ１）それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）；
（ｂ２）それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）；
（ｂ３）それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）；
（ｂ４）それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９３２）；または
（ｂ５）それぞれ、配列番号５０３および６９１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）を含む、実施形態１２２から１２４のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１２８．（ｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；
（ｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合
部分が、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；
（ｉｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含み；
（ｉｖ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含み；
（ｖ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；
（ｖｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；
（ｖｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または
（ｖｉｉｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む、実施形態１２２から１２７のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１２９．少なくとも１つのＦＶＩＩＩａ活性アッセイにおいて、活性化第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩａ）補因子に機能的に擬似する、実施形態１２２から１２８のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１３０．ＦＶＩＩＩａ活性アッセイが、発色ＦＸａ生成アッセイ、一段階凝固アッセイまたはそれらの組合せから選択される、実施形態１２９の二重特異性分子。

実施形態１３１．ＦＶＩＩＩａ活性が、同一のアッセイにおいて、普通なら、ＦＶＩＩＩにより実現される活性の、少なくとも１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％を実現する、実施形態１２９または１３０の二重特異性分子。

実施形態１３２．インビトロまたはインビボで、プロトロンビンからトロンビンを、フィブリノゲンからフィブリンを、および／またはフィブリン凝塊を生成することができる、実施形態１２２から１３１のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１３３．ＢＬＩによって決定すると、ＦＩＸａとＦＸの両方に同時に結合する、実施形態１２２から１３２のいずれか１つによる二重特異性分子。

実施形態１３４．ＩｇＧアイソタイプである、実施形態１２２から１３３のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１３５．ＩｇＧアイソタイプが、ＩｇＧ１部分クラスである、実施形態１３４の二重特異性分子。

実施形態１３６．ＩｇＧアイソタイプが、ＩｇＧ４部分クラスである、実施形態１３４の二重特異性分子。

実施形態１３７．二重特異性ＩｇＧフォーマットであり、表２中の抗体からなる群から選択される、実施形態１２２から１３６のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１３８．二重特異性ヘテロ二量体フォーマットである、実施形態１３７の二重特異性分子。

実施形態１３９．２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖を含む、実施形態１２２から１３８のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１４０．２つの同一の軽鎖および２つの異なる重鎖を含む、実施形態１２２から１３８のいずれか１つによる二重特異性分子。

実施形態１４１．二重特異性分子が、血友病を有する対象における、出血エピソードの出現率を制御または低減することが可能である、実施形態１２２から１４０のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１４２．血友病を有する対象における、ホメオスタシスを維持することが可能である、実施形態１２２から１４０のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１４３．血友病を有する対象における、決まった手順の予防を実現することができる、実施形態１２２から１４０のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１４４．対象が、第ＶＩＩＩ因子に対して中和抗体を生じる、または生じることが予想される、実施形態１２２から１４３のいずれか１つの二重特異性分子。

実施形態１４５．実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子を含むイムノコンジュゲートであって、薬剤に連結されているイムノコンジュゲート。

実施形態１４６．実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子、または実施形態１４５のイムノコンジュゲート、および担体を含む、組成物。

実施形態１４７．実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子、または実施形態１４５のイムノコンジュゲート、および使用のための指示書を含む、キット。

実施形態１４８．実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子をコードする核酸配列。

実施形態１４９．実施形態１４８による核酸を含むベクター。

実施形態１５０．実施形態１４９のベクターを含む宿主細胞。

実施形態１５１．宿主細胞が、原核細胞、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞またはＣＯＳ細胞である、実施形態１５０の宿主細胞。

実施形態１５２．二重特異性分子の発現を可能にする条件下で、実施形態１５０の宿主細胞を培養する工程を含む、二重特異性分子を生成する方法。

実施形態１５３．ヘテロ二量化を増強する条件をさらに含む、実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子を生成する方法。

実施形態１５４．それを必要とする対象における、ＦＸ活性化を促進する方法であって、対象に、治療有効量の実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子、実施形態１４５のイムノコンジュゲート、実施形態１４６の組成物、実施形態１４８の核酸、実施形態１４９のベクター、または実施形態１５０の宿主細胞を投与する工程を含む、方法。

実施形態１５５．それを必要とする対象における、出血エピソードの頻度または程度を低下させる方法であって、対象に、有効量の実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子、実施形態１４５のイムノコンジュゲート、実施形態１４６の組成物、実施形態１４８の核酸、実施形態１４９のベクター、または実施形態１５０の宿主細胞を投与する工程を含む、方法。

実施形態１５６．対象が、第ＶＩＩＩ因子（「ＦＶＩＩＩ」）に対して阻害剤を生じた、または生じる傾向を有する、実施形態１５５の方法。

実施形態１５７．ＦＶＩＩＩに対する阻害剤が、ＦＶＩＩＩに対する中和抗体である、実施形態１５６の方法。

実施形態１５８．出血エピソードが、関節血症、筋肉の出血、口腔内出血、出血、筋肉への出血、口内出血、外傷、頭部外傷、胃腸管の出血、頭蓋内出血、腹部内出血、胸郭内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙における出血、腹膜後腔における出血、腸腰筋鞘における出血、またはそれらの任意の組合せの結果である、実施形態１５５から１５７のいずれか１つの方法。

実施形態１５９．それを必要とする対象における、血液凝固障害を処置する方法であって、対象に、有効量の実施形態１２２から１４４のいずれか１つの二重特異性分子、実施形態１４５のイムノコンジュゲート、実施形態１４６の組成物、実施形態１４８の核酸、実施形態１４９のベクター、または実施形態１５０の宿主細胞を投与する工程を含む、方法。

実施形態１６０．血液凝固障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、実施形態１５９の方法。

実施形態１６１．対象がヒト対象である、実施形態１５４から１６０のいずれか１つの方法。

実施形態１６２．対象が、ＦＶＩＩＩ補充療法を受けている最中か、またはこれを受けた、実施形態１５４から１６０のいずれか１つの方法。

実施形態１６３．二重特異性分子が、血友病治療法と組み合わせて投与される、実施形態１５４から１６２のいずれか１つの方法。

実施形態１６４．血友病治療法がＦＶＩＩＩ補充療法である、実施形態１６３の方法
。

実施形態１６５．二重特異性分子が、血友病治療法の投与の前、その間またはその後に投与される、実施形態１６３または１６４の方法。

実施形態１６６．二重特異性分子が、静脈内または皮下に投与される、実施形態１５４から１６５のいずれか１つの方法。

実施形態１６７．二重特異性分子の投与により、出血エピソードの出現、自発的出血エピソードまたは急性出血の頻度が低下する、実施形態１５４から１６６のいずれか１つの方法。

実施形態１６８．二重特異性分子の投与により、年間出血率が５％、１０％、２０％、３０％または５０％低下する、実施形態１６７の方法。

実施形態１６９．ＢＩＩＢ－９－１３３６と同じエピトープに結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７０．ＢＩＩＢ－９－１３３６エピトープに重なるエピトープに結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７１．ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによる位置（ｉ）９１と１０１、（ｉｉ）１２５と１２８、（ｉｉｉ）１６５と１７９または（ｉｖ）２３２と２４１の間に位置する、少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープ領域に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７２．ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合している抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７３．エピトープが、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ９３、Ｒ１６５、Ｎ１７８およびＲ２３３を含む、実施形態１７１または１７２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７４．エピトープが、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１を含む、実施形態１７１から１７３の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７５．エピトープが、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５のうちの少なくとも１つを含まない、実施形態１７１から１７４の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７６．エピトープが、ＦＩＸａの重鎖の配列の、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５を含まない、実施形態１７１から１７
５の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７７．ＦＩＸａの軽鎖中の少なくとも１つのアミノ酸残基（配列番号７５６）に結合する、実施形態１７１から１７６の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７８．ＦＩＸａの軽鎖中のアミノ酸残基（配列番号７５６）が、Ｋ１００である、実施形態１７７の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１７９．エピトープが、ＦＩＸａへのＦＶＩＩＩａの結合部位に重なる、実施形態１６９から１７８のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８０．ＦＩＸａへの結合について、ＦＶＩＩＩａと交差競合する、実施形態１６９から１７９のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８１．ＦＶＩＩＩａのＦＩＸａへの結合を遮断する、実施形態１６９から１８０の任意のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８２．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、表７中のＶＨＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、表７中のＶＨＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２を含み；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、表７中のＶＨＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＨＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３を含み；および／または（ｉｖ）ＶＬＣＤＲ１は、表７中のＶＬＣＤＲ１または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１を含み；および／または
（ｖ）ＶＬＣＤＲ２は、表７中のＶＬＣＤＲ２または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ２からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２を含み；および／または
（ｖｉ）ＶＬＣＤＲ３は、表７中のＶＬＣＤＲ３または１つもしくは２つの変異を有するＶＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３を含む。
実施形態１から１２のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８３．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＤＸ_１ＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号２１９６）を含み、Ｘ_１が、ＬまたはＶである、実施形態１８２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８４．（ｉ）ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＦＴＦＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号２１９４）を含み、Ｘ_１が、Ｓ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２が、ＹまたはＦであり、Ｘ_３が、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＤであり、Ｘ_４が、Ｎ、Ｖ、ＡまたはＴである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_５ＩＳＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１９５）を含み、Ｘ_５が、Ｓ、Ａ、ＹまたはＧであり、Ｘ_６が、ＳまたはＡであり、Ｘ_７が、Ｓ、ＡまたはＧであり、Ｘ_８が、Ｓ、ＧまたはＤであり、Ｘ_９が、Ｓ、ＴまたはＧであり、Ｘ_１０が、ＹまたはＴである、実施形態１８３の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８５．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＹＡＮＦＰＹＴ（配列番号２１６８）を含む、実施形態１８２から
１８４のいずれか１つの単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８６．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＡＮＹＬＮ（配列番号２１１６）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号２１４２）を含む、実施形態１８５の単離された単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８７．配列番号２０３８～２０４７から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０６４～２０７３から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２０９０～２０９９から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２１１６～２１２５から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１４２～２１５１から選択されるＶＬＣＤＲ２、および配列番号２１６８～２１７７から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、実施形態１８２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８８．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列Ｘ_１ＲＤＶＸ_２ＧＹＡＧＸ_３ＹＧＭＤＶ（配列番号２１９８）を含み、Ｘ_１が、ＡまたはＶであり、Ｘ_２が、ＧまたはＳであり、Ｘ_３が、ＹまたはＦである、実施形態１８２の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１８９．（ｉ）ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＦＴＦＧＳＹＤＭＮ（配列番号２０４８）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＩＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＳＹＩＸ_４ＹＡＸ_５ＳＶＫＧ（配列番号２１９７）を含み、Ｘ_１が、ＳまたはＤであり、Ｘ_２が、ＧまたはＳであり、Ｘ_３が、ＥまたはＡであり、Ｘ_４が、ＹまたはＡであり、Ｘ_５が、ＥまたはＤである、実施形態１８８の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９０．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列Ｘ_１ＱＹＡＸ_２ＦＰＹＴ（配列番号２２０１）を含み、Ｘ_１が、ＱまたはＳであり、Ｘ_２が、ＮまたはＲである、実施形態１８２、１８８または１８９のいずれか１つの単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９１．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｘ_１ＡＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＩＸ_５Ｘ_６ＹＬＮ（配列番号２１９９）を含み、Ｘ_１が、Ｑ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２が、ＳまたはＮであり、Ｘ_３が、ＱまたはＥであり、Ｘ_４が、ＤまたはＹであり、Ｘ_５が、ＡまたはＳであり、Ｘ_６が、ＮまたはＤである；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＤＡＸ_７ＮＬＸ_８Ｘ_９（配列番号２２００）であり、Ｘ_７が、ＳまたはＡであり、Ｘ_８が、Ｅ、ＨまたはＱであり、Ｘ_９が、ＴまたはＹである、実施形態１９０の単離された単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９２．配列番号２０４８～２０５２から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０７４～２０７８から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１００～２１０４から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２１２６～２１３０から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１５２～２１５６から選択されるＶＬＣＤＲ２、および配列番号２１７８～２１８２から
選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、実施形態１８２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９３．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＤＧＰＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＹＹＭＤＶ（配列番号２２０４）を含み、Ｘ_１が、ＲまたはＱであり、Ｘ_２が、Ｖ、Ｄ、ＬまたはＥであり、Ｘ_３が、ＳまたはＶである、実施形態１８２の単離された単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９４．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＹＴＦＸ_１Ｘ_２ＹＸ_３ＭＨ（配列番号２２０２）を含み、Ｘ_１が、ＴまたはＨであり、Ｘ_２が、Ｓ、ＧまたはＨであり、Ｘ_３が、ＹまたはＰである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_４ＩＮＰＳＸ_５ＧＸ_６ＴＸ_７ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２０３）を含み、Ｘ_４が、ＩまたはＳであり、Ｘ_５が、ＧまたはＲであり、Ｘ_６が、ＳまたはＲであり、Ｘ_７が、ＳまたはＥである、実施形態１９３の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９５．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＲＤＮＷＰＦＴ（配列番号２１１６）を含む、実施形態１８２、１９３または１９４のいずれか１つの単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９６．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号２１１６）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２１１６）を含む、実施形態１９５の単離された単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９７．配列番号２０５３～２０５７から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０７９～２０８３から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１０５～２１０９から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２１３１～２１３５から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１５７～２１６１から選択されるＶＬＣＤＲ２、配列番号２１８３～２１８７から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、実施形態１８２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９８．ＦＩＸａに特異的に結合し、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＸ_１ＤＩ（配列番号２２０７）を含み、Ｘ_１が、ＦまたはＶである、実施形態１８２の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態１９９．ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＳＩＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＹＸ_４ＷＸ_５（配列番号２２０５）を含み、Ｘ_１が、ＳまたはＡであり、Ｘ_２が、Ｓ、Ｔ、ＧまたはＶであり、Ｘ_３が、ＳまたはＡであり、Ｘ_４が、ＹまたはＡであり、Ｘ_５が、Ｇ、Ｖ、ＮまたはＳである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_６ＩＸ_７Ｘ_８Ｘ_９ＧＸ_１０ＴＸ_１１ＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２２０６）を含み、Ｘ_６が、ＳまたはＹであり、Ｘ_７が、Ｓ、Ｙ、Ｒ、ＴまたはＱであり、Ｘ_８が、Ｙ、Ｇ、ＰまたはＡであり、Ｘ_９が、ＳまたはＱであり、Ｘ
_１０が、ＳまたはＫであり、Ｘ_１１が、ＹまたはＱである、実施形態１９８の単離された単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２００．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＡＮＦＬＰＦＴ（配列番号２１８８）を含む、実施形態１８２、１９８または１９９の単離された抗ＦＩＸａ抗体。

実施形態２０１．ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＤＳＷＬＡ（配列番号２１３６）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２１６２）を含む、実施形態２００の単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２０２．配列番号２０５８～２０６３から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０８４～２０８９から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１１０～２１１５から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２１３６～２１４１から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１６２～２１６７から選択されるＶＬＣＤＲ２、および配列番号２１８８～２１９３から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、実施形態１８２の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２０３．ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｉ）ＶＨが、配列番号１９３５、１９３９、１９４３、１９４７、１９５１、１９５５、１９５９、１９６３、１９６７、１９７１、１９７５、１９７９、１９８３、１９８７、１９９１、１９９５、１９９９、２００３、２００７、２０１１、２０１５、２０１９、２０２３、２０２７、２０３１および２０３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬが、配列番号１９３７、１９４１、１９４５、１９４９、１９５３、１９５７、１９６１、１９６５、１９６９、１９７３、１９７７、１９８１、１９８５、１９８９、１９９３、１９９７、２００１、２００５、２００９、２０１３、２０１７、２０２１、２０２５、２０２９、２０３３および２０３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１８２から２０２のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

実施形態２０４．ＶＨおよびＶＬを含み、
（ａ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３５および１９３７（ＢＩＩＢ－９－３５９５）を含み；
（ａ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３９および１９４１（ＢＩＩＢ－９－３６０１）を含み；
（ａ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４３および１９４５（ＢＩＩＢ－９－３６０４）を含み；
（ａ４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４７および１９４９（ＢＩＩＢ－９－３６１７）を含み；
（ａ５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５１および１９５３（ＢＩＩＢ－９－３６１８）を含み；
（ａ６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５５および１９５７（ＢＩＩＢ－９
－３６２１）を含み；
（ａ７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５９および１９６１（ＢＩＩＢ－９－３６４７）を含み；
（ａ８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９６３および１９６５（ＢＩＩＢ－９－３６４９）を含み；
（ａ９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９６７および１９６９（ＢＩＩＢ－９－３６５０）を含み；
（ａ１０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７１および１９７３（ＢＩＩＢ－９－３６５４）を含み；
（ａ１１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７５および１９７７（ＢＩＩＢ－９－３７５３）を含み；
（ａ１２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７９および１９８１（ＢＩＩＢ－９－３７５４）を含み；
（ａ１３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８３および１９８５（ＢＩＩＢ－９－３７５６）を含み；
（ａ１４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８７および１９８９（ＢＩＩＢ－９－３７６４）を含み；
（ａ１５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９１および１９９３（ＢＩＩＢ－９－３７６６）を含み；
（ａ１６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９５および１９９７（ＢＩＩＢ－９－３７０７）を含み；
（ａ１７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９９および２００１（ＢＩＩＢ－９－３７０９）を含み；
（ａ１８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００３および２００５（ＢＩＩＢ－９－３７２０）を含み；
（ａ１９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００７および２００９（ＢＩＩＢ－９－３７２７）を含み；
（ａ２０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１１および２０１３（ＢＩＩＢ－９－３７４５）を含み；
（ａ２１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１５および２０１７（ＢＩＩＢ－９－３７８０）を含み；
（ａ２２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１９および２０２１（ＢＩＩＢ－９－３６７５）を含み；
（ａ２３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２３および２０２５（ＢＩＩＢ－９－３６８１）を含み；
（ａ２４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２７および２０２９（ＢＩＩＢ－９－３６８４）を含み；
（ａ２５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３１および２０３３（ＢＩＩＢ－９－３６９８）を含み；または
（ａ２６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３５および２０３７（ＢＩＩＢ－９－３７０４）を含む、実施形態１８２から２０３のいずれか１つの抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分。

活性部位に結合している擬似基質を含むおよび含まない（ＦＩＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）（それぞれ、遊離ＦＩＸａおよびＦＩＸａ－ＳＭ）、ＦＩＸチモーゲンおよび活性化ＦＩＸのドメイン構成の概略図である。活性部位に結合している擬似基質を含むおよび含まない（ＦＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）、ＦＩＸチモーゲンおよび活性化ＦＩＸのドメイン構成の概略図である。この概略図では、ＨＣは、ＦＩＸ、ＦＩＸａ、ＦＸまたはＦＸａの重鎖である。ＬＣは、ＦＩＸ、ＦＩＸａ、ＦＸまたはＦＸａの軽鎖である。本明細書に記載されるある種の実施形態に関する、抗体生成、抗体の特徴付けおよび機能的特徴付けの概略図である。図３Ａ～Ｄは、図２に記載される抗体生成法により発見された、本明細書に開示される９５種の抗ＦＩＸ抗体を記した表である。抗体のＶＨおよびＶＬの両方に関する、生殖系、ＣＤＲ長さ、ＣＤＲアミノ酸配列および配列番号が提示される。ＶＨおよびＶＬの全配列が、表４に提示される。各ＣＤＲ配列の配列番号は、表４に示される。図３Ａ～３Ｃは、ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）と比較した、活性化凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に優先的に結合する抗体を表す（例えば、遊離ＦＩＸａ、および／またはＥＧＲ－もしくはＬＴＲ－ＣＭＫ（ＦＩＸａ－ＳＭ）によって共有結合により修飾されたＦＩＸａ）。特に、図３Ａは、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）（クラスＩ）と比較した、ＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合した抗体を列挙している。図３Ｂは、ＦＩＸａ－ＳＭまたはＦＩＸチモーゲンと比較した、遊離ＦＩＸａに優先的に結合する抗体を列挙している（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）（クラスＩＩ）。図３Ｃは、ＦＩＸａ－ＳＭまたは遊離ＦＩＸａのどちらか一方に結合しているが、ＦＩＸチモーゲンにそれほど結合しない抗体を列挙している（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）（クラスＩＩＩ）。図３Ｄは、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭと比較して、ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）に優先的に結合する抗体を列挙している（クラスＩＶ）。図３－１の続き。図３－２の続き。図３－３の続き。表示抗原、ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）またはＦＩＸａ（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）に対するセンサーに結合したＩｇＧのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）測定による結合を示す図である。各抗体の極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、ｙ軸にプロットされている。表示抗原、ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）またはＦＩＸａ（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）に対するセンサーに結合したＩｇＧのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）測定による結合を示す図である。各抗体の極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、ｙ軸にプロットされている。ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアに提供されている１：１当てはめアルゴリズムによって決定した、列挙されている抗体の各々に関する遊離ＦＩＸａへの見かけの一価親和性値（Ｋ_Ｄ）を提示している表である。図６Ａ～６Ｅは、表示抗原にセンサーが結合したＩｇＧのＢＬＩによる結合の測定値を示すグラフである（遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ））。図６Ａは、抗体ＢＩＩＢ－９－４８４（ＶＨ：配列番号３１；ＶＬ：配列番号２２１）の結合の測定値を示している。図６Ｂは、抗体ＢＩＩＢ－９－４４０（ＶＨ：配列番号１９；ＶＬ：配列番号２０９）の結合の測定値を示している。図６Ｃは、抗体ＢＩＩＢ－９－８８２（ＶＨ：配列番号１１５；ＶＬ：配列番号３０１）の結合の測定値を示している。図６Ｄは、抗体ＢＩＩＢ－９－４６０（ＶＨ：配列番号２３；ＶＬ：配列番号２１３）の結合の測定値を示している。図６Ｅは、抗体ＢＩＩＢ－９－４３３（ＶＨ：配列番号１２７；ＶＬ：配列番号３１３）の結合の測定値を示している。これらのプロットは、時間の関数として結合および解離に関するＢＬＩ応答（ｎｍ）を示す。図６－１の続き。図６－２の続き。図６－３の続き。図６－４の続き。図６Ｆは、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアに提供されている１：１当てはめアルゴリズムによって決定した、図６Ａ～６Ｅに記載される、列挙されている抗体（すなわち、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４６０およびＢＩＩＢ－９－４３３）のそれぞれに関して、それぞれ、ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）および遊離ＦＩＸａに対する見かけの一価親和性（Ｋ_Ｄ）の表を記している。表示抗原、遊離ＦＩＸａ（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）またはＦＩＸａ－ＳＭ（例えば、ＦＩＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ（ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国））にセンサーが結合したＩｇＧのＢＬＩによる抗体の測定値を示すグラフである。各抗体の極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、ｙ軸にプロットされている。図８Ａ～８Ｅは、表示した抗原（ＦＩＸａ－ＳＭ、例えば、ＦＩＸａ＋ＥＧＦ－ＣＭＫおよび遊離ＦＩＸａ）にセンサーが結合したＩｇＧのＢＬＩによる結合の測定値を示すグラフである。図８Ａは、抗体ＢＩＩＢ－９－４８４（ＶＨ：配列番号３１；ＶＬ：配列番号２２１）の結合の測定値を示している。図８Ｂは、抗体ＢＩＩＢ－９－４４０（ＶＨ：配列番号１９；ＶＬ：配列番号２０９）の結合の測定値を示している。図８Ｃは、抗体ＢＩＩＢ－９－８８２（ＶＨ：配列番号１１５；ＶＬ：配列番号３０１）の結合の測定値を示している。図８Ｄは、抗体ＢＩＩＢ－９－４６０（ＶＨ：配列番号２３；ＶＬ：配列番号２１３）の結合の測定値を示している。図８Ｅは、抗体ＢＩＩＢ－９－４３３（ＶＨ：配列番号１２７；ＶＬ：配列番号３１３）の結合の測定値を示している。これらの示されたプロットは、時間の関数として結合および解離に関するＢＬＩ応答（ｎｍ）を示す。図８－１の続き。図８－２の続き。図８－３の続き。図８－４の続き。図８Ｆは、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアに提供されている１：１当てはめアルゴリズムによって決定した、列挙されている抗体（すなわち、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４６０およびＢＩＩＢ－９－４３３）のそれぞれに関して、（ｉ）遊離ＦＩＸａまたは（ｉｉ）ＦＩＸａ－ＳＭ（例えば、ＦＩＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）に対する見かけの一価親和性（Ｋ_Ｄ）の表である。図９Ａ～９Ｄは、時間の関数としての、表示した抗原であるＦＩＸｎ（活性化不能型ＦＩＸ）、遊離ＦＩＸａまたはＦＸａ－ＳＭ（例えば、ＦＩＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）（すべて、ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国から取得）にセンサーが結合した列挙されているＩｇＧのＢＬＩによる結合の測定値を表示するグラフである。極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、各センサーグラムに提示される。図９Ａは、クラスＩ（図３Ａ）、例えば、抗体ＢＩＩＢ－９－４８４および抗体ＢＩＩＢ－９－４６０（ＶＨ：配列番号２３；ＶＬ：配列番号２１３）における代表的な抗体の結合の測定値を示している。図９Ｂは、クラスＩＩ（図３Ｂ）、例えば、抗体ＢＩＩＢ－９－４１６（ＶＨ：配列番号９３；ＶＬ：配列番号２７９）および抗体ＢＩＩＢ－９－８８５（ＶＨ：配列番号９７；ＶＬ：配列番号２８３）における代表的な抗体の結合の測定値を示している。図９Ｃは、クラスＩＩＩ（図３Ｃ）、例えば、抗体ＢＩＩＢ－９－１２８７（ＶＨ：配列番号１８１；ＶＬ：配列番号３６７）における代表的な抗体の結合の測定値を示している。図９Ｄは、クラスＩＶ（図３Ｄ）、例えば、抗体ＢＩＩＢ－９－３９７（ＶＨ：配列番号１８３；ＶＬ：配列番号３６９）における代表的な抗体の結合の測定値を示している。図９－１の続き。図９－２の続き。図９－３の続き。ＢＬＩ結合アッセイによって決定された、抗原結合プロファイルに基づく、その帰属されたクラスと共に、本明細書に開示される９５種の抗体を示す表である。抗体は、本実施例において定義したアッセイパラメーターを使用して、１つの抗体が別の抗体に対して０．１以上のＢＬＩ応答の差異を示した場合にクラスに帰属した。クラスＩの抗体は、図３Ａ中の抗体に相当する。クラスＩＩの抗体は、図３Ｂ中の抗体に相当する。クラスＩＩＩの抗体は、図３Ｃ中の抗体に相当する。クラスＩＶの抗体は、図３Ｄ中の抗体に相当する。ＡＣ－ＳＩＮＳによる自己相互作用に対する傾向をスクリーニングすることにより決定した、各表示抗体の極大波長（ｎｍ）を一覧表示した表である。５４０ｎｍの閾値値は、内部対照に基づいて設定されたものであり、閾値を超えている抗体は、黒色で影を付けている（自己相互作用の可能性を示す）。図１２Ａ～１２Ｃは、抗体生成法により発見した、本明細書に開示される９４種の抗体を一覧表示した表である。９４種の抗体のそれぞれのＶＨおよびＶＬの両方に関する、生殖系、ＣＤＲ長さ、ＣＤＲアミノ酸配列および配列番号が提示される。各抗体の完全ＶＨおよびＶＬ配列が表４に示される。図１２Ａおよび１２Ｂは、活性化凝固因子ＦＸ（ＦＸａ）（例えば、ＥＧＲ－またはＬＴＲ－ＣＭＫによって共有結合により修飾されたＦＸａ（ＦＸａ－ＳＭ））と比べた、ＦＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＸ）に優先的に結合する抗体（クラスＶ）を示している。図１２Ｃは、ＦＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＸ）（例えば、ＥＧＲ－またはＬＴＲ－ＣＭＫによって共有結合により修飾されたＦＸａ）と比較した、活性化凝固因子ＦＸ（ＦＸａ）に優先的に結合する抗体を表す（クラスＶＩ）。図１２－１の続き。図１２－２の続き。表示抗原、ＦＸチモーゲンまたはＦＸａ－ＳＭ（例えば、ＦＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）にセンサーが結合したＩｇＧのＢＬＩによる結合の測定値を示すグラフである。各抗体の極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、ｙ軸にプロットされている。表示抗原、ＦＸチモーゲンまたはＦＸａ－ＳＭ（例えば、ＦＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）にセンサーが結合したＩｇＧのＢＬＩによる結合の測定値を示すグラフである。各抗体の極大ＢＬＩ応答（ｎｍ）は、ｙ軸にプロットされている。ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアに提供されている１：１当てはめアルゴリズムによって決定した、列挙されている抗体の各々に関するＦＸチモーゲンへの見かけの一価親和性値（Ｋ_Ｄ）をＭで示す表である。ＡＣ－ＳＩＮＳによる自己相互作用に対する傾向をスクリーニングすることにより決定した、各表示抗体の極大波長（ｎｍ）を一覧表示した表である。５４０ｎｍである閾値値は、内部対照に基づいて設定したものである。閾値を超えた抗体は、黒色で影が付けられており、これは、自己相互作用がある可能性を示す。図１６Ａ～１６Ｄは、発色第Ｘａ因子生成アッセイにおける、ＦＶＩＩＩａ様機能を置き換える能力を有すると特定した２０２種の二重特異性抗体を示すグラフである。２０２種の二重特異性抗体を、４つの群、および４つの対応する部分図に分ける。図１６Ａは、二重特異性抗体（２０２種のうちの１～５１）の第１の群に関するＦＸａ発色性基質の切断速度を示している。図１６Ｂは、二重特異性抗体（２０２種のうちの５２～１０２）の第２の群に関するＦＸａ発色性基質の切断速度を示している。図１６Ｃは、二重特異性抗体（２０２種のうちの１０３～１５２）の第３の群に関するＦＸａ発色性基質の切断速度を示している。図１６Ｄは、二重特異性抗体（２０２種のうちの１５３～２０２）の第４の群に関するＦＸａ発色性基質の切断速度を示している。各場合において、二重特異性抗体の非存在下での平均ベースライン速度が、破線によって示されている。図１６－１の続き。図１６－２の続き。図１６－３の続き。ＩｇＧ４フォーマットにおける二重特異性抗体のサブセットに関するＦＸａ発色性基質の切断速度を示すグラフである。二重特異性抗体の非存在下での平均ベースライン速度が、破線によって示されている。３種の代表的な二重特異性抗体の存在下での、ＦＸａ発色性基質の切断速度を例示しているグラフである。ベースライン対照（抗体はこの反応混合物に添加しなかった）と比較すると、ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－９－６１９／ＢＩＩＢ－１２－９２５およびＢＩＩＢ－９－５７８／ＢＩＩＢ－１２－９１７は、経時的にＯＤの増加により示される通り、ＦＸａ発色性基質の切断速度を向上させることが可能であった。ＦＶＩＩＩ欠乏血漿での一段階凝固アッセイにおける（凝固時間の低下により示される）、ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１５およびＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－１３０６が、ＦＶＩＩＩａの機能に置き換わる能力を例示しているグラフである。比較のため、二重特異性抗体のないＦＶＩＩＩ欠乏血漿を示している。ＦＶＩＩＩ欠乏血漿での一段階凝固アッセイにおける、二重特異性抗体であるＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７がＦＶＩＩＩａの機能を置き換える能力が、二重特異性フォーマットに依存することを示すグラフである。ホモ二量体ＢＩＩＢ－９－４８４、ホモ二量体ＢＩＩＢ－１２－９１７、およびこの２種のホモ二量体の混合物は、ＦＶＩＩＩａ様機能を置き換えることができなかった。比較のため、抗体のないＦＶＩＩＩ欠乏血漿を示す。ディップアンドリードストレプトアビジンバイオセンサーを使用する、表示した二重特異性抗体への各標的抗原の共結合を評価するためのＢＬＩ結合アッセイを示すグラフである。センサーグラムは、時間の関数としてのＢＬＩ応答（ｎｍ）をプロットしたものであり、実験の各段階は、黒色の垂直線により分けている。特定の段階における応答の増加は、タンパク質のローディングを示す。ＢＩＩＢ－９－４８４および２種の親和性成熟娘であるＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６のＣＤＲ配列を列挙している。ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＶＨセグメントのＭＡＦＦＴ（ｖ７．２０５）による、ＣＬＵＳＴＡＬフォーマット多重配列アライメントが提示される。アミノ酸保存の程度は、このアライメントの上（「^＊」＝同一；「：」＝強力に保存；「．」＝保存に乏しい）、およびこのアライメントの下の棒に示される。ＶＨおよびＶＬＣＤＲには下線が引かれている。ＶＨ－ＣＤＲ１より前の配列は、フレームワーク領域（ＦＲ）１である；ＶＨ－ＣＤＲ１より後およびＶＨ－ＣＤＲ２より前の配列は、ＦＲ２である；ＶＨ－ＣＤＲ２より後およびＶＨ－ＣＤＲ３より前は、ＦＲ３である；ＶＨ－ＣＤＲ３より後の配列は、ＦＲ４である。ＶＬ－ＣＤＲ１より前の配列は、フレームワーク領域（ＦＲ）１である；ＶＬ－ＣＤＲ１より後およびＶＨ－ＣＤＲ２より前の配列は、ＦＲ２である；ＶＬ－ＣＤＲ２より後およびＶＬ－ＣＤＲ３より前の配列は、ＦＲ３である；ＶＬ－ＣＤＲ３より後の配列は、ＦＲ４である。それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６への遊離ＦＩＸａのＢＬＩ結合プロファイルを示すグラフである。それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６への遊離ＦＩＸａのＢＬＩ結合プロファイルを示すグラフである。それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６への遊離ＦＩＸａのＢＬＩ結合プロファイルを示すグラフである。一段階凝固アッセイにおいて、ＦＶＩＩＩａ様活性による二重特異性抗体に関連する、抗ＦＩＸａのアームの親和性の向上により一層高い活性がもたらされることを示すグラフである。この例は、上のプロットで例示されており、この場合、親和性の高い抗ＦＩＸａのアーム（ＢＩＩＢ－９－１３３５／ＢＩＩＢ－１２－９１７およびＢＩＩＢ－９－１３３６／ＢＩＩＢ－１２－９１７）を有する二重特異性抗体は、親和性の低い抗ＦＩＸａのアーム（ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７）を有する二重特異性抗体と比べて、凝固時間がさらに低下することを示している。ＦＩＸチモーゲン、活性化ＦＩＸ、ＦＸチモーゲンおよび活性化ＦＸ（すなわち、それぞれ、１μＭ、１μＭ、１μＭおよび１μＭ）と同一の二重特異性抗体（「エミシズマブバイオシミラー」）であるエミシズマブ（ＡＣＥ９１０）配列の結合親和性を示す図である。ＦＩＸチモーゲン、活性化ＦＩＸ、ＦＸチモーゲンおよび活性化ＦＸ（すなわち、それぞれ、８ｎＭ、２ｎＭ、２０ｎＭおよび未検出）に対する二重特異性分子（ＢＳ－０２７１２５）の結合親和性を示す図である。様々な濃度（ＩＵ／ｍＬまたはμＭ）にわたる、ＦＶＩＩＩ（逆三角形）、ＢＳ－０２５ＦＩＸａホモ二量体（大きなダイヤモンド）、ＢＳ－０２７ＦＸホモ二量体（小さいダイヤモンド）、ＢＳ－０２７０２５ホモ二量体混合物（三角形）およびＢＳ－０２７０２５二重特異性（正方形）の凝固時間（秒）を示すグラフである。ＢＳ－０２７１２５（正方形）、ＢＳ－０２７１２５ＦＩＸａホモ二量体（三角形）およびＢＳ－０２７１２５ＦＸホモ二量体（円形）によるＦＶＩＩＩ活性（ＦＶＩＩＩ当量％）を示すグラフである。ＦＶＩＩＩ活性は、一段階凝固アッセイによって測定した。発色第Ｘａ因子（ＦＸａ）生成アッセイにより測定した、ｒＦＶＩＩＩ（大きい円形）、ＢＳ－０２７１２５（正方形）、ＢＳ－０２７１２５ＦＩＸａホモ二量体（三角形）、ＢＳ－０２７１２５ＦＸホモ二量体（逆三角形）およびＢＳ－０２７１２５（ＰＬなし）（小さい円形）による、ｎＭでのＦＸａの生成を示すグラフである。ＢＳ－０２７１２５のトロンビン生成アッセイの結果を示している。左側のパネルは、時間のずれ（分）を示し、右側のパネルは、ピークを示している。ｒＦＶＩＩＩ（左側パネル）およびＢＳ－０２７１２５（右側パネル）により生成したトロンビンの量を示すグラフである。ＰＣ／ＰＳ（８０％／２０％）もしくはＰＣ／ＰＥ／ＰＳ（４０％／４０％／２０％）リン脂質ベシクルのどちらかを用いて、ｒＦＶＩＩＩ、エミシズマブバイオシミラーまたはＢＳ－０２７１２５の存在下で生成したｎＭでのＦＸａ（上部パネル）、およびＰＣ／ＰＳリン脂質ベシクルに対するＰＣ／ＰＥ／ＰＳにより分布される活性の倍率変化（下部パネル）を示すグラフである。ｒＦＶＩＩＩ、エミシズマブバイオシミラーおよびＢＳ－０２７１２５の存在下での、ＰＣ／ＰＥ／ＰＳリン脂質上でのトロンビン生成アッセイの結果を示すグラフである。上部パネルは、時間のずれ（分間）を示す；中間パネルは、ピークトロンビン（ｎＭ）を示す；下側パネルは、内因性トロンビンの可能性（ＥＴＰ）（ｎＭ^＊分間）を示す。図３１Ａ、３１Ｂ、３１Ｃおよび３１Ｄは、バイオレイヤー干渉法によって決定した、互いに対する４７種の異なる抗ＦＩＸａ抗体のエピトープビニングを示すグラフである。図３１Ａおよび図３１Ｂは、それぞれ、非競合的および競合的結合剤に関する、八重プロファイルを示している。図３１Ｃは、試験した４７×４７の相互作用、および抗体対が、競合的結合または非競合的結合をもたらすかどうかをまとめたものである。ダークグレーの正方形は、交差遮断する抗体対を示しており、これらの抗体は、同じビンに収まることを示している。中間グレーの正方形は、交差遮断しない抗体対を示しており、これらの抗体は、異なるビンに収まることを示している。白色の正方形は、一方向の対立を示しており、ライトグレーの正方形は、データを解析することができなかった抗体を示している。図３１Ｄは、図３１Ｃで決定した、ビニングネットワークのノード解析を示している。２種の抗体がこのマップ上で近づくほど、それらのビニングプロファイルは一層似てくる。図３１－１の続き。図３１－２の続き。図３２Ａは、バイオレイヤー干渉法を使用してカルシウムの存在下および非存在下における、ＢＩＩＢ－９－４８４のＦＩＸａへの結合プロファイルを示すグラフである。破線は、結合期の終わりおよび解離期の開始を示している。図３２Ｂは、バイオレイヤー干渉法を使用してカルシウムの存在下および非存在下における、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＦＩＸａへの結合プロファイルを示すグラフである。破線は、結合期の終了および解離期の開始を示している。ＦＩＸａ（２５０ｎＭ）単独による、または濃度の向上した２種の異なる抗ＦＩＸａ抗体（ＢＩＩＢ－９－１３３６およびＢＩＩＢ－９－５７９）または抗ＦＸ抗体対照（ＢＩＩＢ－１２－９１７）の存在下での基質切断の速度を示すグラフである。ＢＩＩＢ－９－１３３６は、二価抗体のホモ二量体（「ＢＩＩＢ－９－１３３６」）として、アームが１つの抗体（「１アームＢＩＩＢ－９－１３３６」）として、およびＢＩＩＢ－１２－９１７との二重特異性構成（「ＢＩＩＢ－９－１３３６／ＢＩＩＢ－１２－９１７」）で試験した。基質切断の速度は、ｍＯＤ／分で表し、抗体の増加量は、ＦＩＸａ－Ａｂ複合体の濃度（ｎＭ）に関して表している。ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３６、ＢＩＩＢ－９－６１９およびＢＩＩＢ－９－５７８抗体のパネルの存在下で、５００ｎＭのＦＩＸａの場合に観察された、ＦＩＸａアミド分解活性の向上倍率を示すグラフである。飽和量のＢＩＩＢ－９－１３３６の存在下または非存在下での、様々な基質濃度にわたる、ＦＩＸａによる基質切断の速度を示すグラフである。ＢＩＩＢ－９－１３３６の存在下、および非存在下でのＦＩＸａの場合のＫ_ＭおよびＶ_ｍａｘを示すグラフである。図３４Ａおよび図３４Ｂは、抗ＦＩＸａ抗体の存在下または非存在下での、ＦＩＸａのＡＴＩＩＩ阻害の速度を示すグラフである。図３４Ａは、ＡＴＩＩＩ－ＦＩＸａ複合体に対応する、７５ｋＤａのバンドの外観を示す図である。複合体形成の速度は、ＦＩＸａのＡＴＩＩＩ阻害を示しており、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６の存在下で向上している。図３４Ｂは、様々な時間点で定量してグラフにした、ＡＴＩＩＩ－ＦＩＸａ複合体形成のバンド強度を示すグラフである。２つの方向で示されている、ＦＩＸａのＥＧＦ２およびセリンプロテアーゼドメインとの複合体における、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＦａｂ領域の結晶構造の描写図である。表面にマッピングされている、ＢＩＩＢ－９－１３３６（１３３６エピトープ）およびＦＶＩＩＩａ（ＦＶＩＩＩａエピトープ）のエピトープとの表面描写におけるＦＩＸａのセリンプロテアーゼドメインを示す図である。ＦＩＸａ上のＢＩＩＢ－９－１３３６エピトープおよびＦＩＸａ上のＦＶＩＩＩａエピトープが、黒色で色づけされている。２つのエピトープの間で共有されている残基は、白色で輪郭線が描かれている。ＢＩＩＢ－９－１３３６およびＦＶＩＩＩａエピトープを構成しており、図３６で強調した残基に対応する、ＦＩＸａ重鎖中の特定のアミノ酸残基を一覧表示している。２つのエピトープの間で共有されている残基は、下線および太字で示されている。残基は、公表されている報告書と一致していないので、括弧内に示されている残基は、図３６に示されていない。アミノ酸残基の番号付けは、キモトリプシノーゲン番号付けに基づく。ＢＩＩＢ－９－１３３６はまた、ＦＩＸａの軽鎖中の１つの残基に接触しており、アスタリスクにより示している。ＦＶＩＩＩａの場合の軽鎖の接触は、一覧表示していない。野生型第Ｘ因子チモーゲン、野生型活性化ＦＸ、活性化ペプチド、チモーゲンＦＸ欠乏活性化ペプチドおよびキメラＦＩＸ構築物を維持する活性化ＦＸを含めた、ＦＸバリアントのパネルへのＢＩＩＢ－１２－９１７の結合を示す図であり、ＦＩＸ活性化ペプチドは、バイオレイヤー干渉法によって、ＦＸ活性化ペプチドにより置き換えられた。破線は、結合期の終了および解離期の開始を示している。上記のＦＸバリアントの各々の描写図である。＋および－の記号は、ＢＩＩＢ－１２－９１７が結合するかどうかを示している。これらのデータにより、ＢＩＩＢ－１２－９１７のエピトープは、ＦＸの活性化ペプチド領域に存在していることが示される。

本開示は、凝固因子の特定形態に優先的に結合する抗体を提供する。特に、本開示は、ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａおよび第ＩＸ因子チモーゲン（ＦＩＸｚ）の存在下で、活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に優先的に結合する抗体およびその抗原結合部分）に特異的に結合する、抗体およびその抗原結合部分を提供する。本開示はまた、ＦＸｚおよびＦＸａの存在下で、ＦＸ（ＦＸチモーゲン（ＦＸｚ））に特異的かつ優先的に結合する抗体およびその抗原結合部分を提供する。

同様に、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分のいずれか１つ、および本明細書に開示される抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分のいずれか１つを含む二重特異性分子（例えば、抗体）が提供される。これらの二重特異性抗体は、ＦＩＸおよびＦＸに同時に結合して、凝固第ＶＩＩＩａ因子の機能を擬似することができる。

本開示はまた、例えば、結合性分子、例えば本明細書に開示される抗体（例えば、医薬品または診断用組成物）、本明細書に開示される結合性分子をコードする核酸およびベクター、本明細書に開示される結合性分子をコードする核酸を含む細胞を含む組成物、作製方法、処置および診断の方法、イムノコンジュゲートならびにキットを提供する。

本明細書において提示されている見出しは、様々な態様または本開示の態様の限定ではなく、これらは、全体として、本明細書を参照することによって定義することができる。したがって、直下に定義されている用語は、その全体が参照により本明細書に十分に定義されている。本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の組成物または方法工程に制限されず、したがって、様々となり得ることを理解されたい。

Ｉ．定義
本開示を一層容易に理解することができるために、ある用語を最初に定義する。本出願において使用される通り、本明細書において特に明示的に提示している場合を除き、以下の用語の各々は、以下に説明されている意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願全体にわたり説明されている。

本発明は、グループの正確に１つの構成要素が、所与の生成物または方法に存在する、それらに使用される、またはそうでない場合、それらに関連している実施形態を含む。本発明は、そのグループの構成要素の１つ超またはすべてが、所与の生成物または方法に存在する、それらに使用される、またはそうでない場合、それらに関連している実施形態を含む。

本明細書及び添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が特に明白に示さない限り、複数の指示物を含む。用語「ａ」（または「ａｎ」）、および用語「１つまたはそれ以上の」、および「少なくとも１つの」は、本明細書において互換的に使用することができる。ある種の態様では、用語「ａ」または「ａｎ」は、「単一の」を意味する。他の態様では、用語「ａ」または「ａｎ」は、「２つまたはそれ以上」または「複数」を含む。

さらに、「および／または」は、本明細書において使用されている場合、他のものを含んでまたは含まないで、２つの指定した特徴または構成要素の各々を具体的に開示しているとして見なされる。したがって、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの言い回しにおいて使用される用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、
「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含むことが意図されている。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの言い回しで使用される用語「および／または」は、以下の態様：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；およびＣ（単独）の各々を包含することが意図されている。

特に定義されない限り、本明細書において使用される技術的用語および科学的用語はすべて、この開示が関連する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、ＣｏｎｃｉｓｅＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｊｕｏ、Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ、第２版、２００２年、ＣＲＣＰｒｅｓｓ；ＴｈｅＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＣｅｌｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、第３版、１９９９年、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；およびＯｘｆｏｒｄＤｉｃｔｉｏｎａｒｙＯｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＡｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｒｅｖｉｓｅｄ、２０００年、ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓが、本開示において使用されている用語の多数の一般的な辞書を当業者に提示する。

態様が、表現「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と共に本明細書に記載される場合、「からなる」および／または「から実質的になる」に関して記載されている他の類似の態様も提示されている。

単位、接頭語および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）の許容される形態で表される。数値範囲は、この範囲を定義する数を含む。値の範囲が列挙されている場合、その範囲の列挙されている上限値と下限値との間に介在する各整数値およびその一部の各々が、このような値の間の各部分範囲と共に、具体的にやはり開示されていることが理解される。任意の範囲の上部値および下限値は、独立して、その範囲に含まれる、またはその範囲から除外され、一方の境界値が含まれる、どちらの境界値も含まれない、または両方の境界値が含まれる範囲のそれぞれが、本発明にやはり包含されている。値が、明示的に列挙されている場合、列挙されている値とほぼ同じ量または同じ量である値も本発明の範囲内にあることを理解されたい。組合せが開示されている場合、その組合せの要素の部分組合せの各々もまた、具体的に開示されており、本発明の範囲内にある。反対に、異なる要素または要素の群が個別に開示されている場合、それらの組合せも開示されている。本発明の任意の要素が、複数の代替物を有すると開示されている場合、各代替物が、単一で、または他の代替物と任意に組み合わせて含まれているそのような発明の例もまた、本発明により開示されている；発明の１つを超える要素は、このような排除を有することができ、このような排除を有する要素のすべての組合せが、本明細書により開示されている。

ヌクレオチドは、それらの一般に許容されている単一の文字コードによって述べられる。特に示さない限り、核酸は、５’から３’の向きに、左から右に記載される。ヌクレオチドは、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会により推奨されている、その一般に公知の一文字記号により述べられる。したがって、Ａはアデニンを表し、Ｃはシトシンを表し、Ｇはグアニンを表し、Ｔはチミンを表し、Ｕはウラシルを表す。

アミノ酸は、本明細書において、その一般的に公知の三文字記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会により推奨されている、その一文字記号のどちらかによって述べられる。特に示さない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの向きに、左から右に記載される。

約：用語「約」は、本明細書および特許請求の範囲の全体にわたり数値に関して使用されている場合、当業者が精通し、許容する精度の間隔を表す。一般に、精度のこのような
間隔は±１０％である。

範囲が示されている場合、端点が含まれる。さらに、特に示さない限り、または文脈から、さらに当業者の理解から明白ではない限り、範囲として示されている値は、その文脈が明らかに別段の指定をしない限り、本発明の様々な実施形態において明記されている範囲内で、その範囲の下限値の単位の１０分の１までの具体的な任意の値または部分範囲を想定することができる。

組み合せて投与される：本明細書で使用する場合、用語「組み合わせて投与される」、「組合せ投与」または「併用療法」は、２つ以上の薬剤、例えば、本明細書に開示される結合性分子および第２の薬剤は、同時に、または患者に及ぼす各薬剤の作用が重なり得る間隔内で、対象に投与されることを意味する。一部の実施形態では、それらの薬剤は、互いに約６０、３０、１５、１０、５または１分間内に投与される。一部の実施形態では、薬剤の投与は、組合せ（例えば、相乗）作用が実現されるよう、一緒に十分に近い間隔が設けられる。

親和性：用語「親和性」とは、抗原および結合性分子の平衡が、それらの結合によって形成される複合体の存在の方向にシフトするよう、結合性分子、例えば抗体が抗原に結合する程度を指す。したがって、抗原および結合性分子が、相対的に等しい濃度で組み合わされた場合、高い親和性の結合性分子は、生じる複合体が高い濃度となる方向に平衡がシフトするよう、利用可能な抗原に結合することになる。結合性分子、例えば、本開示の抗体、または抗原結合断片、バリアントまたはそれらの誘導体はまた、抗原に対するその結合親和性に関して、記載または指定されている。抗原に対する結合性分子、例えば抗体の親和性は、任意の好適な方法を使用して実験的に決定することができる（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＡｎｔｉｇｅｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」、ＩｎＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．、編、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９８４年）；Ｋｕｂｙ，ＪａｎｉｓＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９２年）；および本明細書に記載される方法を参照されたい）。

異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ）下で測定した場合、特定の結合性分子－抗体の相互作用の測定される親和性は、様々となり得る。したがって、親和性および他の抗原結合パラメーター（例えば、Ｋ_Ｄ、Ｋ_ａ、Ｋ_ｄ）の測定は、好ましくは、結合性分子および抗原、ならびに標準緩衝溶液の標準溶液を用いて行われる。

結合性分子、例えば抗体に対する「高い親和性」とは、少なくとも約１×１０^７リットル／モル、または少なくとも約１×１０^８リットル／モル、または少なくとも約１×１０^９リットル／モル、または少なくとも約１×１０^１０リットル／モル、または少なくとも約１×１０^１１リットル／モル、または少なくとも約１×１０^１２リットル／モル、または少なくとも約１×１０^１３リットル／モル、または少なくとも約１×１０^１４リットル／モル、またはそれより高い平衡結合定数（Ｋ_ａｆｆ）であることを指す。「高い親和性」結合は、抗体アイソタイプの場合、変わり得る。

平衡解離定数であるＫ_Ｄは、抗体親和性を記載するためにやはり使用される用語であり、Ｋ_ａｆｆの逆数である。Ｋ_Ｄは、ｋ_ａに対するｋ_ｄ（すなわち、ｋ_ｄ／ｋ_ａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫ_Ｄ値は、当分野において十分に確立されている方法を使用して決定することができる。抗体のＫ_Ｄを決定するための利用可能な方法としては、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイ、表面プラズモン共鳴、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムまたはフローサイトメトリ
ー、およびスキャッチャード解析が挙げられる。Ｋ_Ｄが使用される場合、抗体に対する「高い親和性」という用語は、約１×１０^－７Ｍ未満、または約１×１０^－８Ｍ未満、または約１×１０^－９Ｍ未満、または約１×１０^－１０Ｍ未満、または約１×１０^－１１Ｍ未満、または約１×１０^－１２Ｍ未満、または約１×１０^１３Ｍ未満、または約１×１０^－１４Ｍ未満、またはそれ未満の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を指す。

アミノ酸置換：用語「アミノ酸置換」とは、親中または基準配列（例えば、野生型配列）に存在するアミノ酸残基を、別のアミノ酸残基によって置き換えることを指す。アミノ酸は、例えば、化学ペプチド合成により、または当分野において公知の組換え方法により、親中または基準配列（例えば、野生型ポリペプチド配列）中で置換されている。したがって、「位置Ｘにおける置換」と言う場合、位置×に存在するアミノ酸を代替アミノ酸残基により置換していることを指す。一部の態様では、置換パターンは、ＡｎＹという概要図に準拠して記載されており、この場合、Ａは、ｎ位に天然にまたは元々存在するアミノ酸に対応する一文字コードであり、Ｙは、置換するアミノ酸残基である。他の態様では、置換パターンは、Ａｎ（ＹＺ）という概要図に準拠して記載され、この場合、Ａは、ｎ位に天然にまたは元々存在するアミノ酸を置き換えるアミノ酸残基に対応する一文字コードであり、ＹおよびＺは、Ａを置き換えることができる代替の置換アミノ酸残基である。

本開示の文脈では、置換（それらが、アミノ酸置換と呼ばれる場合さえも）は、核酸レベルで行われる、すなわち、アミノ酸残基を代替アミノ酸残基により置き換えることは、第１のアミノ酸をコードするコドンを第２のアミノ酸をコードするコドンにより置き換えることにより行われる。

親和性の成熟した：用語「親和性の成熟した」とは、親和性成熟すなわち、標的抗原に対する親和性の増大している結合性分子、例えば抗体を生成する過程を受けた結合性分子、例えば抗体を指す。したがって、親和性の成熟した抗体は、１つまたはそれ以上のそのＣＤＲに１つまたはそれ以上の変質を有する抗体であって、そのような変質を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、上記の抗体のことである。例示的な親和性の成熟した抗体は、標的抗原に対して、ナノモル濃度での親和性を有しており、またはピコモル濃度の親和性さえ有すると予想される。

本明細書に開示される本発明の様々な実施形態に従い、親和性の成熟した抗体を生成するため、当分野において利用可能な親和性成熟ライブラリーを製造および／または使用するいずれか１つまたはそれ以上の方法を使用することができる。例示的な親和性成熟方法には、ランダム変異誘発、細菌変異誘発株継代、部位特異的変異誘発、変異多発点標的化、最小限の変異誘発（ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）、抗体シャフリング、軽鎖シャフリング、重鎖シャフリング、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ１の変異誘発が含まれ、本明細書に開示される本発明の様々な実施形態による方法および使用の実施に適合可能な親和性成熟ライブラリーを生成および使用する方法には、例えば、Ｐｒａｓｓｌｅｒら（２００９年）；Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、１巻（４号）、５７１～５８３頁；Ｓｈｅｅｄｙら（２００７年）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．、２５巻（４号）、３３３～３５２頁；ＷＯ２０１２／００９５６８；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；ＵＳ２００２／０１７７１７０；ＷＯ２００３／０７４６７９に開示されているものが含まれ、これらはすべて、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。Ｍａｒｋｓら（１９９２年）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０巻：７７９～７８３頁は、ＶＨおよびＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら（１９９４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１巻：３８０９～３８１３頁；Ｓｃｈｉｅｒら（１９９５年）Ｇｅｎｅ１６９巻：１４７～１５５頁；Ｙｅｌｔｏｎら（１９９５年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５巻：１９９４～２００４頁；Ｊａ
ｃｋｓｏｎら（１９９５年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４巻（７号）：３３１０～９頁；およびＨａｗｋｉｎｓら（１９９２年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６巻：８８９～８９６頁により記載されている。活性を増強するアミノ酸残基による選択的変異誘発位置、接触または超変異位置における変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載される。

動物：本明細書で使用する場合、用語「動物」とは、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発育段階のヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発育段階の非ヒト動物を指す。ある種の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類またはブタ）である。一部の実施形態では、動物は、以下に限定されないが、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生動物、魚および蠕虫を含む。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物またはクローンである。

抗体：用語「抗体」および「免疫グロブリン」（「Ｉｇ」と略す）は、本明細書において互換的に使用され、特定の抗原に特異的に結合する、または特定の抗原と免疫学的に反応性を示す、少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む分子を指す。この用語は、全抗体および任意の抗原結合部分、またはそれらの一本鎖、およびそれらの組合せ（例えば、二重特異性抗体）を含む。

典型的な抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結されている少なくとも２つの重鎖（「ＨＣ」）および２つの軽鎖（「Ｌ」）を含む。

「重鎖」はそれぞれ、「重鎖可変領域」（本明細書において「ＶＨ」と略される）および「重鎖定常領域」（本明細書において「ＣＨ」と略される）からなる。非修飾抗体中の重鎖定常領域は、３つの定数ドメインであるＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。

「軽鎖」はそれぞれ、「軽鎖可変領域」（本明細書において「ＶＬ」と略される）および「軽鎖定常領域」からなる。非修飾抗体中の軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン「ＣＬ」からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と称される超可変領域、より多くが保存されている領域で分散した領域、「フレームワーク領域」（「ＦＷ」）と称される領域にさらに小さく分類される。

ＶＨおよびＶＬはそれぞれ、以下の順序：ＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、ＦＷ４で、アミノ末端からカルボキシ末端まで並んだ、３つのＣＤＲおよび４つのＦＷからなる。本開示は、ＶＨおよびＶＬ配列、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する部分配列を表す。したがって、当業者は、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３およびＦＷ４の配列は、等しく開示されていることを理解する。特定のＶＨの場合、ＦＷ１は、ＶＨのＮ末端とＶＨ－ＣＤＲ１のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ２は、ＶＨ－ＣＤＲ１のＣ末端とＶＨ－ＣＤＲ２のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ３は、ＶＨ－ＣＤＲ２のＣ末端とＶＨ－ＣＤＲ３のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ４は、ＶＨ－ＣＤＲ３のＣ末端とＶＨのＣ末端との間の部分配列である。同様に、特定のＶＬの場合、ＦＷ１は、ＶＬのＮ末端とＶＬ－ＣＤＲ１のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ２は、ＶＬ－ＣＤＲ１のＣ末端とＶＬ－ＣＤＲ２のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ３は、ＶＬ－ＣＤＲ２のＣ末端とＶＬ－ＣＤＲ３のＮ末端との間の部分配列であり、ＦＷ４は、ＶＬ－ＣＤＲ３のＣ末端とＶＬのＣ末端との間の部分配列である。

重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）を含めた、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。本開示の例示的な抗体は、典型的な抗体、ｓｃＦｖおよびそれらの組
合せを含み、この場合、例えば、ｓｃＦｖは、典型的な抗体の重鎖および／または軽鎖のどちらか一方のＮ末端に共有結合により連結（例えば、ペプチド結合により、または化学リンカーによる）されているか、または典型的な抗体の重鎖および／または軽鎖にインターカレートされている。

本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、抗体が所望の生物活性を示す限り、無傷ポリクローナル抗体、無傷モノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片など）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ、少なくとも２つの無傷抗体および／またはその抗原結合部分から生成した二重特異性抗体などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。

抗体は、免疫グロブリンの５種の主要なクラス（アイソタイプ）：それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる、これらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、またはこれらのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のいずれかとすることができる。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造および三次元立体配置を有する。抗体は、裸のまま、または治療剤もしくは診断剤などの他の分子にコンジュゲートされて、イムノコンジュゲートを形成することができる。

ＣＤＲを決定するため、少なくとも２つの技法が存在する：（１）種間配列変化に基づく手法（すなわち、Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆ
ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、１９９１年、米国国立衛生研究所、ＢｅｔｈｅｓｄａＭｄ．）、および（２）抗原－抗体複合体の結晶学的検討に基づく手法（Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３巻：９２７～９４８年））。さらに、これらの２つの手法の組合せが時として、当分野において使用されて、ＣＤＲを決定する。Ｋａｂａｔの番号付けシステムは、可変ドメインにおける残基を参照する際に、一般に使用される（およそ、軽鎖の残基１～１０７、および重鎖の残基１～１１３）（例えば、Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．第５版、ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年））。

「Ｋａｂａｔと同様のアミノ酸位置の番号付け」、「Ｋａｂａｔ位」という言い回し、およびそれらの文法上の変化形は、Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）における、抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＷまたはＣＤＲの短縮化、またはこれらへの挿入に対応する、ほとんどないまたは追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に、単一アミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＷ残基８２の後に、挿入された残基（例えば、ｋａｂａｔによる、残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含むことができる。表１を参照されたい。

残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列による、抗体の配列の相同性の領域における、アライメントにより与えられた抗体について決定することができる。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、ループ構造の位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７頁（１９８７年））。Ｋａｂａｔ番号付けの慣習を使用して番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｈ１ループの端部は、該ループの長さに応じて、Ｈ３２とＨ３４との間で変わる（これは、Ｋａｂａｔの番号付けスキームは、Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂにおける挿入と見なし、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａしか存在しない場合、ループは３３で終わり、３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは、３４で終わるからである）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａのループ構造との間の折衷となり、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。

ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）はまた、ＣＤＲを含めた、免疫グロブリン可変領域に対する番号付けシステムを提供する。例えば、参照により本明細書に組み入れられるＬｅｆｒａｎｃ、Ｍ．Ｐ．ら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７巻：５５～７７頁（２００３年）を参照されたい。ＩＭＧＴ番号付けシステムは、５，０００を超える配列のアライメント、構造データおよび超可変ループの特徴付けに基づいており、すべての種に対する可変領域およびＣＤＲ領域の容易な比較を可能にする。ＩＭＧＴの番号付けスキームによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６～３５位に存在し、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１～５７位に存在し、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３～１０２位に存在し、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７～３２位に存在し、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０～５２位に存在し、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９～９７位に存在する。

本発明において議論されているすべての重鎖定常領域アミノ酸の位置に関すると、番号付けは、Ｅｄｅｌｍａｎら、１９６９年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６３巻（１号）：７８～８５頁に最初に記載されるＥＵ指標に準拠しており、配列決定された最初のヒトＩｇＧである、骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載している。ＥｄｅｌｍａｎらのＥＵ指標は、Ｋａｂａｔら、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆ
ＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国国立衛生研究所（United States Public Health Service, National Institutes of Health）、Ｂｅｔｈｅｓｄａにも説明されている。したがって、言い回し「Ｋａｂａｔに
説明されているＥＵ指標」または「ＫａｂａｔのＥＵ指標」および「Ｋａｂａｔに説明されているＥＵ指標による位置」およびその文法上の変化形は、Ｋａｂａｔ１９９１年に説明されているＥｄｅｌｍａｎらのヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体に基づく残基の番号付けシステムを指す。

可変ドメイン（重鎖および軽鎖の両方）および軽鎖定常領域アミノ酸配列に使用される番号付けシステムは、Ｋａｂａｔ１９９１年に説明されているものである。

本明細書で使用する場合、Ｆｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く、抗体の定常領域を含むポリペプチドを含む。したがって、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対する可撓性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、Ｆｃは、Ｊ鎖を含むことができる。ＩｇＧの場合、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。

Ｆｃ領域の境界は、様々となり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端へのＣ２２６またはＰ２３０残基を含むことが定義されており、この場合、番号付けは、Ｋａｂａｔに説明されているＥＵ指標に従う。Ｆｃは、単離におけるこのような領域、または抗体、抗体断片もしくはＦｃ融合タンパク質に関する、このような領域を指すことができる。

多形は、抗体定常領域（例えば、以下に限定されないが、Ｋａｂａｔに説明されているＥＵ指標による番号付けすると、位置２７０、２７２、３１２、３１５、３５６および３５８を含めた、Ｆｃ位置）内のいくつかの異なる位置において観察され、したがって、提示されている配列と従来技術における配列との間にわずかな差異が存在し得る。ヒト免疫グロブリンの多形は、十分に特徴付けられている。現在、１８Ｇｍアロタイプが知られている：Ｇ１ｍ（１、２、３、１７）またはＧ１ｍ（ａ、ｘ、ｆ、ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）またはＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５、６、１０、１１、１３、１４、１５、１６、２１、２４、２６、２７、２８）またはＧ３ｍ（ｂ１、ｃ３、ｂ３、ｂ０、ｂ３、ｂ４、ｓ、ｔ、ｇ１、ｃ５、ｕ、ｖ、ｇ５）。Ｌｅｆｒａｎｃら、ＴｈｅｈｕｍａｎＩｇＧｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、ｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ、４３～７８頁（１９９０年）；Ｌｅｆｒａｎｃら（１９７９年）、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．：５０巻、１９９～２１１頁を参照されたい。本発明の抗体は、任意の免疫グロブリン遺伝子の任意のアロタイプ、イソアロタイプまたはハプロタイプを取り込むことができ、本明細書において提示されている配列のアロタイプ、イソアロタイプまたはハプロタイプに限定されないことが具体的に包含されている。

抗体結合部位：用語「抗体結合部位」とは、相補性抗体が特異的に結合する連続部位または不連続部位（すなわち、エピトープ）を含む、抗原（例えば、ＦＩＸａまたはＦＸｚ）における領域を指す。したがって、抗体結合部位は、エピトープの上の抗原であって、結合親和性および／もしくは安定性などの特性を決定することができる、または抗原酵素活性もしくは二量化などの特性に影響を及ぼし得る、抗原における追加的な領域を含むことができる。したがって、２つの抗体が、抗原内の同じエピトープに結合する場合でさえも、抗体分子が、エピトープの外側のアミノ酸との個別の分子内接触を確立する場合、このような抗体は、個別の抗体結合部位に結合すると見なされる。

抗原結合部分：本明細書で使用する場合、用語「抗原結合部分」とは、「抗原結合断片
」と互換的に使用することができ、無傷抗体と同じエピトープへの特異的結合が可能な無傷抗体の部分を指す。特に、抗原結合部分は、無傷抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲを含む無傷抗体の一部分または部分を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片により行われることは当分野で公知である。抗体断片の例には、以下に限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

抗原結合性分子：用語「抗原結合性分子」および「結合性分子」は、本開示において互換的に使用され、本明細書で定義されている抗体、および同じエピトープに結合可能な、本明細書に開示される抗体のＣＤＲの少なくとも１つを含む他の分子実体を包含する。例えば、この用語は、フィブロネクチンＩＩＩ型（モノボディ）の足場、１つまたはそれ以上のＣＤＲがグラフト化される他の足場系（例えば、テネシイン）、アプタマーなどに基づく擬似抗体を含む。一部の態様では、抗体結合性分子は、二重特異性、すなわち「二重特異性結合性分子」または「二重特異性分子」とすることができる。

約：本明細書で使用する場合、用語「約」とは、１つまたはそれ以上の目的の値に適用する場合、明記した参照値に類似する値を指す。ある種の実施形態では、用語「約」とは、特に明記しない限り、または特に文脈から明白ではない限り（このような数は、可能な値の１００％を超える場合を除く）、明記した参照値のどちらかの方向（明記した参照値より大きいまたは小さい）の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ未満の範囲内に収まるある範囲の値を指す。

関連する：疾患に関連して本明細書で使用する場合、用語「関連する」は、問題の症状、測定値、特徴または状況が、その疾患の診断、発症、存在または進行にリンクしていることを意味する。関連とは、疾患に原因がリンクしていることがあるが、必要ではない。

用語「関連する」、「コンジュゲートされている」、「リンクしている」、「結合している」および「拘束されている」は、２つまたはそれ以上の部分に関して使用する場合、それらの部分が、物理的に結合されて、または互いに、直接的に、または架橋剤として働く１つもしくはそれ以上の追加の部分により連結されて、十分に安定な構造を形成し、その結果、その部分は、その構造が使用される条件下、例えば、生理的条件下で物理的に結合されている状態にあることを意味する。「結合」は、厳密に直接的な化学共有結合による必要はない。「結合」は、十分に安定なイオン性結合もしくは水素結合、またはハイブリッド化をベースとする結合をやはり示唆してもよく、こうして、「結合した」実体は、物理的に結合した状態を維持する。

結合親和性：「結合親和性」とは、一般に、ある分子（例えば抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用を総和したものの強度を指す。特に示さない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」とは、結合ペア（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する、潜在的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、解離定数（Ｋ_Ｄ）よって一般に表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含めた、当分野において公知の一般方法によって測定することができる。親和性の低い抗体は、一般に、抗原にゆっくりと結合して、容易に解離する傾向がある一方、親和性の高い抗体は、一般に、より速く結合して、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が、当分野において公知であり、これらのいずれも、本開示の目的に使用することができる。

用語「結合親和性がより高い」または「親和性がより大きい」とは、本発明の抗体のいずれかに適用した場合、参照抗体に対して、結合親和性の増大（例えば、Ｋ_Ｄにより測定される）を指す。一部の実施形態では、参照抗体は、親和性の成熟していない対応する抗
体のことである。一部の実施形態では、参照抗体は、同一特異性を有する別の抗体（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸａの場合、参照抗体は、当分野で公知の別の抗ＦＩＸまたは抗ＦＩＸａ抗体とすることができる）である。一部の実施形態では、結合親和性の増大は、同じ凝固因子（例えば、ＦＩＸまたはＦＸ）、因子の形態（例えば、ＦＩＸａまたはＦＸｚ）または抗原結合部位（例えば、エピトープ）に対する参照抗体の結合親和性よりも、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％高いとすることができる。一部の実施形態では、結合親和性の増大は、同じ凝固因子（例えば、ＦＩＸまたはＦＸ）、因子の形態（例えば、ＦＩＸａまたはＦＸｚ）または抗原結合部位（例えば、エピトープ）に対する参照抗体の結合親和性よりも、例えば、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍または少なくとも約１０倍高いとすることができる。

結合：用語「結合」とは、２つの分子、例えば、抗体と抗原の間の物理的な相互作用を指す。
（ｉ）結合特異性：用語「特異性」とは、結合性分子、例えば抗体が、様々な抗原性部位に対して、１つの抗原性部位（例えば、エピトープ）に優先的に結合する能力を指し、高い親和性を必ずしも暗示するものではない。用語「結合特異性」および「特異性」は、互換的に使用され、（ｉ）結合性分子の特定の部分、と（ｉｉ）特定のエピトープに特異的に結合する（以下の「特異的結合」の定義を参照されたい）結合性分子の能力の両方を指すことができる。例えば、一部の実施形態では、本明細書に開示される二重特異性抗体は、２つの結合特異性、すなわち、例えばＦＩＸａへの第１の結合特異性、および例えばＦＸｚへの第２の結合特異性を含む（この文脈では、特定の抗原決定基への二重特異性抗体の結合の特異的領域などの「結合特異性」は、「結合ドメイン」と等価である）。
（ｉｉ）特異的結合：結合性分子、例えば、抗体は、抗原と結合性分子との間の特異的相互作用の免疫学的反応が存在する場合、「特異的に結合する」。用語「特異的に結合する」は、抗体が生成して、その可変領域を介して、抗原に結合することを意味する。用語「非特異的な結合」は、抗体が抗原に特異的に結合するよう生成しないが、非特異的な手段を介して、抗原にいくらか結合することを意味する。一例として、抗体は、抗体分子のＦｃ部分を介して、Ｆｃ受容体に非特異的に結合すると予想される。別の例として、ある種の抗体は、それらが生成しない抗原と誤って交差反応することがある。
（ｉｉｉ）優先的な結合：結合性分子、例えば、抗体は、これが他の物質に結合するよりも、より大きな親和性、アビディティーで、一層容易に、および／またはより長い期間で結合する場合、抗原に「優先的に結合する」。例えば、ＦＩＸａエピトープに優先的に結合する抗体は、それらが、他のＦＩＸａエピトープまたは非ＦＩＸａエピトープに結合するよりも、より大きな親和性、アビディティー、一層容易に、および／またはより長い期間でこのエピトープに結合する抗体である。例えば、抗ＦＩＸ抗体の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％超が、ＦＩＸａとＦＩＸｚの両方の存在下で、ＦＩＸａに結合する場合、抗ＦＩＸ抗体は、ＦＩＸチモーゲンよりも活性化ＦＩＸに優先的に結合する。例えば、第１の標的に優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に優先的に結合することがあり、または優先的に結合しないことがあることが、この定義を一読することによりやはり理解される。したがって、「優先的な結合」は、排他的な結合を必ずしも必要としない（排他的な結合を含むことができる）。したがって、一部の態様では、「優先的な結合」は、「排他的な結合」とすることができる。これらの概念を例示するため、抗ＦＩＸの５０％が、ＦＩＸチモーゲンに特異的に結合し、ＦＩＸａに５０％特異的に結合する場合、このような結合は、「非選択的」または「非優先的」となる。抗ＦＩＸの５０％未満しか、ＦＩＸチモーゲンに結合せず、５０％を超えてＦＸａに結合する場合、抗ＦＩＸは、ＦＩＸａに「優先的に結合する」。抗ＦＩＸが、
ＦＩＸチモーゲンに結合せず、ＦＩＸａにしか結合しない場合、抗ＦＩＸは、ＦＩＸａに「排他的に結合する」。

生物サンプル：用語「生物サンプル」とは、本明細書で使用する場合、対象、細胞株、組織培養物、または本明細書に開示される結合性分子によって特異的に認識される抗原を含む分子を潜在的に含む他の供給源から得られた任意のサンプルを指す。一部の態様では、生物サンプルは、血液サンプル、または血液サンプルに由来するサンプル（例えば、血漿）である。哺乳動物からの組織生検体および体液を得るための方法は、当分野で周知である。

二重特異性抗体：「二重特異性抗体」は、「二重特異性分子」または「二重特異性結合性分子」の特定のタイプである。用語「二重特異性抗体」は、２つの異なる抗原結合部位を介して、少なくとも２つの抗原決定基（例えば、エピトープ）に結合することができる抗体を意味する。ある種の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの抗原決定基（例えば、エピトープ）に同時に結合することができる。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、その結合アーム（一対の重鎖／軽鎖）の１つの上の１つの抗原（エピトープ）に結合し、その第２の結合アーム（異なる一対の重鎖／軽鎖）上の異なる抗原（またはエピトープ）に結合する。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの個別の抗原結合アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方における）を有することができ、それが結合する各抗原に対して一価となる。二重特異性抗体には、例えば、クアドローマ技術（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ３０５巻（５９３４号）：５３７～４０頁）により、２つの異なるモノクローナル抗体の化学コンジュゲート（Ｓｔａｅｒｚら（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ３１４巻（６０１２号）：６２８～３１頁）により、またはＦｃ領域に変異を導入するノブイントゥーホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）もしくは類似の手法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０巻（１４号）：６４４４～６４４８頁）により生成したものが含まれる。

幅広い組換え二重特異性抗体のフォーマットが、例えば、ＩｇＧ抗体フォーマットおよび一本鎖ドメインの例えば融合によって、この１０年間に開発された（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎＲＥ、ｍＡｂｓ４巻：２号（２０１２年）１～１６頁を参照されたい）。可変ドメインＶＬおよびＶＨ、または定常ドメインＣＬおよびＣＨ１が、互いに置き換えられている二重特異性抗体は、ＷＯ２００９０８０２５１およびＷＯ２００９０８０２５２に記載される。

「ノブイントゥーホール」として知られている、誤対合副生物の問題を回避する手法は、ＣＨ３ドメインに変異を導入して、接触境界部を修飾することにより、２つの異なる抗体重鎖の対形成を強制的に行うことを目的とする。かさ高いアミノ酸は、１つの鎖上で、短い側鎖を有するアミノ酸により置き換えられて、「ホール」を生成した。反対に、大きな側鎖を有するアミノ酸は、他のＣＨ３ドメインに導入され、「ノブ」を生成した。これらの２つの重鎖（および、両方の重鎖に適切となる必要がある２つの同一軽鎖）を共発現させることにより、ホモ二量体形成（「ホール－ホール」または「ノブ－ノブ」）に対して、高い収率のヘテロ二量体形成（「ノブ－ホール」）が観察された（ＲｉｄｇｗａｙＪＢ、ＰｒｅｓｔａＬＧ、ＣａｒｔｅｒＰ；およびＷＯ１９９６０２７０１１）。ヘテロ二量体の割合は、ファージディスプレイ手法、およびヘテロ二量体を安定化するためのジスルフィド架橋の導入を使用して、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面を再モデリングすることによって、さらに高めることができる（ＭｅｒｃｈａｎｔＡ．Ｍら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ１６巻（１９９８年）６７７～６８１頁；ＡＴｗｅｌｌＳ、ＲｉｄｇｗａｙＪＢ、ＷｅｌｌｓＪＡ、ＣａｒｔｅｒＰ．、ＪＭｏｌＢｉｏｌ２７０巻（１９９７年）２６～３５頁）。ノブイントゥーホール技術に対する新規手
法は、例えば、ＥＰ１８７０４５９Ａ１、Ｘｉｅ，Ｚ．ら、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ２８６巻（２００５年）９５～１０１頁に記載されており、ＦＣ部分に関してノブイントゥーホール技術と組み合わせてｓｃＦｖを使用する二重特異性抗体のフォーマットを指す。

抗体のモジュール構造を活用して、６０を超える異なる二重特異性抗体フォーマットが作製されている。その全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｓｐｉｅｓｓら（２０１５年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６７巻：９５～１０６頁を参照されたい。したがって、一部の態様では、二重特異性抗体フォーマットは、クロスＭａｂ、ＤＡＦ（二重作用Ｆａｂ）（ツーインワン（ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ））、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホールアセンブリ、電荷対、Ｆａｂ－アーム交換、ＳＥＥＤボディ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ－Ｙ（２つのＨＣのヘテロ二量化を含めた、ロイシンジッパーを含む二重特異性抗体）、Ｆｃａｂ、Ｋλ－ボディ、オルソゴナルＦａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ（デュアル可変ドメインＩｇＧ）、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙボディ、ＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）、ナノボディ、ナノボディ－ＨＳＡ、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）、ダイアボディ、ＤＡＲＴ（デュアル親和性再標的化）、ＴａｎｄＡｂ（タンデム抗体）、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニ抗体、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ＳｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、イントラボディ、ドックアンドロック、ＩｍｍＴＡＣ、ＨＳＡボディ、ｓｃダイアボディ－ＨＳＡ、タンデムｓｃＦｖ－毒素、ＩｇＧ－ＩｇＧ、Ｃｏｖ－Ｘ－ボディおよびｓｃＦｖ１－ＰＥＧ－ｓｃＦＶ２から選択される。

一部の態様では、二重特異性抗体は、鎖Ａおよび鎖Ｂを含む、非対称性（例えば、ヘテロ二量体）抗体であり、
（ｉ）鎖Ａは、Ｔ３３６Ｗ変異を含み、鎖Ｂは、Ｔ３６６Ｗ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ変異を含む（ノブインホールフォーマット）；
（ｉｉ）鎖Ａは、Ｆ４０５Ｌ変異を含み、鎖Ｂは、Ｋ４０９Ｒ変異を含む（デュオボディフォーマット）；
（ｉｉｉ）鎖Ａは、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ変異を含み、鎖Ｂは、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ変異を含む（ａｚｙｍｅｔｒｉｃフォーマット）；
（ｉｖ）鎖Ａは、Ｋ４０９ＤおよびＫ３９２Ｄ変異を含み、鎖Ｂは、Ｄ３９９ＫおよびＥ３５６Ｋ変異を含む（電荷対フォーマット）；
（ｖ）鎖Ａは、Ｄ２２１Ｅ、Ｐ２２８ＥおよびＬ３６８Ｅ変異を含み、鎖Ｂは、Ｄ２２１Ｒ、Ｐ２２８ＲおよびＫ４０９Ｒ変異を含む（電荷対フォーマット）；
（ｖｉ）鎖Ａは、Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａ変異を含み、鎖Ｂは、Ｙ３４９ＴおよびＴ３９４Ｆ変異を含む（ＨＡ－ＴＦフォーマット）；または
（ｖｉｉ）鎖Ａは、ＩｇＧ／Ａキメラを含み、鎖Ｂもまた、ＩｇＧ／Ａキメラ（ＳＥＥＤボディフォーマット）を含む。

一部の態様では、二重特異性抗体は、追加の抗原結合単位を有する、軽鎖または重鎖のどちらか一方のアミノ末端またはカルボキシ末端のどちらか一方を付加することにより、二重特異性となるよう操作された一特異性抗体である。これらの付加的な抗原結合単位の代替は、単一ドメイン抗体（不対ＶＬまたはＶＨ）、対抗体可変ドメイン（例えば、Ｆｖ
またはｓｃＦｖ）または操作されたタンパク質足場を含む。一部の態様では、本発明の二重特異性分子は、二重特異性抗体断片を含む。二重特異性抗体定常ドメインのいくつかまたはすべてを欠く、多数の二重特異性断片形態が、当分野において公知である。一部の態様では、本発明の二重特異性分子は、二重特異性融合タンパク質、例えば、ＩｍｍＴＡＣ（親和性の成熟した受容体に連結したｓｃＦｖ）である。他の態様では、二重特異性分子は、二重特異性抗体コンジュゲートである。

二重特異性分子：上記の「抗原結合性分子」／「結合性分子」の定義を参照されたい。

キメラ抗体：用語「キメラ」抗体およびその文法上の変化形は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２種以上の動物種から誘導された、抗体を指す。通常、軽鎖と重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、および／または親和性、および／または能力を有する、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１つの種から誘導された抗体の可変領域に相当する一方、定常領域は、別の種（通常、ヒト）から誘導された抗体における配列と相同性であり、その種における免疫応答の誘発を回避する。

相補性決定領域：用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原標的に特異的に結合することが可能なアミノ酸配列を含有するＨ（重）またはＬ（軽）鎖のどちらかの可変領域を指す。これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定基の構造に関する抗体の基本的特異性を担う。このような領域はまた、「超可変領域」とも呼ばれる。上記の「抗体」の定義を参照されたい。

保存的アミノ酸置換：「保存アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似側鎖を有するアミノ酸残基により置き換えられたものである。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニンまたはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、非帯電性の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシンまたはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニンまたはトリプトファン）、ベータ－分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファンまたはヒスチジン）を含む。したがって、ポリペプチド中のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーに由来する別のアミノ酸により置き換えられる場合、このアミノ酸置換は、保存的であると考えられる。別の態様では、アミノ酸鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる、構造的に類似した鎖により保存的に置き換えられる。

非保存的アミノ酸置換は、（ｉ）電気陽性側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＬｙｓ）が、電気陰性側鎖（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）と、もしくはこれによって置き換えられている、（ｉｉ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＰｈｅまたはＶａｌ）と、もしくはこれにより置き換えられている、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが、任意の他の残基と、もしくはこれにより置き換えられている、または（ｉｖ）かさ高い疎水性または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＴｒｐ）は、小さな側鎖（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）を有するものまたは側鎖を有さない（例えば、Ｇｌｙ）ものと、またはこれにより置き換えられている。

他のアミノ酸置換は、当業者により容易に特定される。例えば、アミノ酸のアラニンの場合、置換は、Ｄ－アラニン、グリシン、ベータ－アラニン、Ｌ－システインおよびＤ－システインのいずれか１つから採用される。リシンの場合、置換は、Ｄ－リシン、アルギニン、Ｄ－アルギニン、ホモ－アルギニン、メチオニン、Ｄ－メチオニン、オルニチンま
たはＤ－オルニチンのいずれか１つとすることができる。一般に、単離されたポリペプチドの特性の変化を誘発することが予想される機能的に重要な領域における置換は、（ｉ）極性残基、例えば、セリンまたはトレオニンは、疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンまたはアラニンに（またはこれにより）置き換えられている；（ｉｉ）システイン残基は、他の任意の残基に（またはこれにより）置き換えられている；（ｉｉｉ）電気陽性側鎖を有する残基、例えば、リシン、アルギニンまたはヒスチジンは、電気陰性側鎖を有する残基、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸に（またはこれにより）置き換えられている；または（ｉｖ）かさ高い側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンは、このような側鎖を有さないもの、例えばグリシンに（またはこれにより）置き換えられている。上述の非保存的置換の１つが、タンパク質の機能的な特性を改変することができる可能性は、タンパク質の機能的に重要な領域に関して、置換位置にもやはり関連する：したがって、一部の非保存的置換は、生物学的特性にほとんどまたは全く影響を及ぼし得ない。

保存されている：本明細書で使用する場合、用語「保存されている」とは、比較されている２つ以上の配列の同じ位置において、改変が発生していないものである、それぞれ、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的、保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列のどこか他の場所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも多くの関連配列の中で保存されているものである。

一部の実施形態では、２つ以上の配列が、互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一」であると言うことができる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、互いに、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、互いに、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％または約９９％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、互いに、少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、互いに、約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全体の長さに適用することができ、またはその一部、領域または特徴部に適用することができる。

交差競合する：用語「競合する」または「交差競合する」は、結合性分子、例えば抗体に関して本明細書で使用する場合、第１の結合性分子、例えば第１の抗体またはその抗原結合性部分が、第２の結合性分子、例えば第２の抗体またはその抗原結合部分の結合に十分に類似して、エピトープに結合し、こうして、その同族エピトープとの第１の結合性分子の結合結果が、第２の結合性分子の非存在下で、第１の結合性分子の結合と比べて、第２の結合性分子の存在下で、検出可能に低下することを意味する。そのエピトープへの第２の結合性分子の結合がやはり、第１の結合性分子の存在下で検出可能に低下する別の可能性が、場合としてあり得るが、必要ではない。すなわち、第１の結合性分子は、第２の分子が、そのそれぞれのエピトープへの第１の結合性分子の結合を阻害することなく、そのエピトープへの第２の結合性分子の結合を阻害することができる。しかし、各結合性分子は、同じ程度であるか、より大きな程度であるかまたはより小さな程度であるかに関わりなく、その同族エピトープを有する他の結合性分子の結合を検出可能に阻害する場合、この結合性分子は、それらの個々のエピトープの結合と、互いに「交差競合する」と言われる。競合性と交差競合性の結合性分子のどちらも、本発明によって包含されている。

結合性分子が交差競合する場合、結合性分子、例えば、抗体は、「同じエピトープに結合する」または「同じ結合部位を含む」と言われるか、または「実質的に同じ結合」特徴を有しており、その結果、１つの抗体しか、所与の時間点で、エピトープに結合することができない、すなわち、１つの結合性分子は、他の分子の結合を阻害するか、またはその影響をモジュレートする。

本明細書における競合は、競合ＥＬＩＳＡ解析により、または例えば、実施例の項目に記載されるＦｏｒｔｅＢｉｏ解析により決定すると、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％よりも大きな相対的阻害を意味する。特定の文脈において、競合の好適なレベルとなる診断基準として、相対阻害の閾値がより高く設定することが望ましいことがある。したがって、例えば、抗体が十分に競合的と考えられる前に、少なくとも約４０％、または少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約５５％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の相対阻害、または約１００％にもなる相対阻害が検出される、競合的結合に関する診断基準を設定することが可能である。

有効量：本明細書で使用する場合、用語「有効量の」薬剤、例えば、抗体などの治療剤は、有益な結果または所望の結果、例えば臨床的結果をもたらすのに十分なそのような量であり、したがって、「有効量」は、適用される状況に依存する。例えば、出血を処置する治療剤を投与する状況では、有効量の薬剤は、例えば、その薬剤を投与しない場合に得られる応答と比べて、出血の発生を低減または低下させるのに十分な量である。用語「有効量」は、「有効用量」、「治療有効量」または「治療有効用量」と互換的に使用することができる。

エフェクター機能：抗体の「エフェクター機能」は、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）と称される過程において、標的抗原、例えば細胞病原体を溶解するのを支援することができる補体タンパク質に結合する能力である。Ｆｃ領域の別のエフェクター活性は、他の免役効果の引き金となる能力を有する、免疫細胞、いわゆるエフェクター細胞の表面のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に結合することである。抗体のエフェクター機能は、例えば、Ｆｃ領域のない抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）など）を使用することにより、Ｆｃ領域中の特定の残基に連結している糖を除去することにより（非グリコシル化抗体）、またはＩｇＧ１の代わりに、ＩｇＧ４抗体（「エフェクターのないＩｇＧ４Ｆｃ」）に由来するＦｃ領域を使用することにより回避することができる。ＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１よりも、補体活性化および抗体依存性細胞毒性のレベルを低く持たせることにより特徴付けられることが周知である。

操作された抗体：本明細書で使用する場合、本発明の実施形態は、それらが、構造上であるかまたは化学的であるかに関わらず、開始点、野生型または天然分子から変化している特徴または特性をもたせるよう設計されている場合、「操作されている」。この点で、「操作された抗体」は、例えば、置換／変異により、親和性、血漿中半減期などが改善されている抗体であり、これらの抗体のフォーマットは、修飾されている（例えば、ｓｃＦｖまたは二重特異性抗体を生成することにより）か、または抗体に親和性成熟が施されている。

エピトープ：用語「エピトープ」は本明細書で使用する場合、結合性分子、例えば抗体に結合することが可能な抗原タンパク質決定基（例えば、ＦＩＸａまたはＦＸｚのアミノ酸部分配列）を指す。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的な活性な表面基からなり、通常、特異的な三次元構造特徴および特異的な電荷特徴を有する。エピトープを認識する抗体または結合性分子の部分は、パラトープと呼ばれる。プロテイン抗原のエピトープは、その構造およびパラトープとの相互作用に基づいて、２つの分類、すなわち立体構造エピトープおよび線状エピトープに分けられる。立体構造エピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続区域からなる。これらのエピトープは、抗原の３Ｄ表面の特徴および形状、または三次構造に基づくパラトープと相互作用する。対照的に、線状エピトープは、それらの一次構造に基づくパラトープと相互作用する。線状エピトープは、抗原に由来するアミノ酸の連続配列によって形成される。

発現ベクター：「発現ベクター」は、適切な宿主に導入されると、ポリペプチドに転写および翻訳されるポリヌクレオチドである。「発現系」は、通常、所望の発現産生物を生じるよう機能することができる、発現ベクターからなる好適な宿主細胞を指す。本発明による抗体（例えば、二重特異性抗体）は、好ましくは、組換え手段により生成される。このような方法は、技術の現状で広く知られており、抗体ポリペプチドのその後の単離を含む原核生物細胞および真核細胞でのタンパク質の発現、および通常、薬学的に許容される純度への精製を含む。

生殖系配列：本明細書で使用する場合、用語「生殖系配列」とは、再配列されていない免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を指す。再配列されていない免疫グロブリンのいかなる手好適な供給源も使用することができる。用語「生殖系」とは、抗原への抗体の曝露前の、Ｖ、ＤおよびＪミニ遺伝子の配列を指す。再配列された「Ｖ領域」は、Ｖ、ＤおよびＪ（重鎖の場合）またはＶおよびＪミニ遺伝子（軽鎖の場合）の間の再配列事象に起因する遺伝的要素を記載する。「抗体Ｖ領域」は、Ｖ、ＤおよびＪ要素によってコードされるポリペプチド領域を指す。「抗体Ｖ領域」は、再配列されたＶ、ＤおよびＪミニ遺伝子によりコードされる。用語「Ｖ（Ｄ）Ｊ組換え」とは、Ｖ、ＤまたはＪミニ遺伝子が、別のＶ、ＤまたはＪミニ遺伝子に組み換えられている、任意の方法を指す。Ｖ領域は、完全長抗体、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、または抗体の任意の他の誘導体の部分とすることができる（以下の抗体の定義を参照されたい）。「生殖系Ｖ領域」とは、有意な突然変異現象前の、再配列されたＶ、ＤおよびＪミニ遺伝子の配列を指す。生殖系Ｖ領域は、Ｖ－Ｄ、Ｄ－ＪまたはＶ－Ｊミニ遺伝子の連結部におけるランダムな挿入または欠失を有することがある。非生殖系Ｖ領域（または「成熟した」Ｖ領域）は、通常、５超の残基（結合部の欠失または挿入を含まない）による、ミニ遺伝子の生殖系配列とは異なる。

相同性：本明細書で使用する場合、用語「相同性」とは、ポリマー分子、例えば核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の総合的な同系性を指す。一般に、用語「相同性」は、２つの分子間の進化的関係を暗示する。したがって、相同性である２つの分子は、共通の進化的祖先を有すると予想される。本発明の文脈では、相同性という用語は、同一性と類似性の両方を包含する。

一部の実施形態では、ポリマー分子は、分子中のモノマーの少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％が、同一である（正確に同じモノマー）か、または類似している（保存的置換）場合、互いに「相同性」と見なされる。用語「相同性の」は、必ず、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。

ヒト抗体：用語「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体、または当分野において公
知の技法（例えば、培養細胞での組換え発現、またはトランスジェニック動物での発現）のいずれかを使用して作製された、ヒトにより産生される抗体に相当するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。したがって、用語ヒト抗体はまた、ヒトによって元々産生されたが、非ヒト系（例えば、化学合成により生成した；細菌、哺乳動物または昆虫細胞で組換え発現した；または動物対象において発現した）で発現される、抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体（または操作されたバリアントまたはその誘導体）を包含する。したがって、ヒト対象から、またはヒト細胞（例えば、ハイブリドーマ、または組換え抗体もしくはその断片を発現する細胞株）から得られ、続いて動物、例えばマウスにおいて発現した抗体は、ヒト抗体と見なされる。ヒト抗体のこの定義には、無傷または完全長抗体、その断片、ならびに／または例えばマウス軽鎖およびヒト重鎖ペプチドを含む抗体などの、少なくとも１つのヒトの重鎖および／または軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。

ヒト化抗体：用語「ヒト化抗体」は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有するよう操作された、非ヒト（例えば、マウス）免役グロブリンに由来する抗体を指す。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲに由来する残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはハムスター）のＣＤＲに由来する残基により置き換えられた、ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２～５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３～３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４～１５３６頁）。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦＷ残基は、所望の特異性、および／または親和性、および／または能力を有する非ヒト種に由来する抗体中の対応する残基により置き換えられている。

ヒト化抗体は、ＦＷ領域中、および／または置き換えられた非ヒト残基内のどちらかにさらなる残基の置換によりさらに修飾されて、抗体特異性、および／または親和性、および／または能力を規定ならびに最適化することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応する、ＣＤＲ領域のすべてもしくは実質的にすべてを含有する、少なくとも１つの、通常、２つもしくは３つの可変ドメインの実質的にすべてを含む一方、ＦＷ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含むことができる。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号または同第５，６３９，６４１号に記載される。

同一性：本明細書で使用する場合、用語「同一性」とは、ポリマー分子間、例えばポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間のモノマーの総合的な保存を指す。例えば、いかなる追加的な修飾語のない用語「同一な」プロテインＡがプロテインＢと同一であるとは、その配列が１００％同一である（１００％配列同一性）ことを意味する。例えば「７０％同一」として２つの配列が記載される場合、それらは、例えば「７０％配列同一性」を有すると記載することと同じである。

２つのポリヌクレオチド配列の同一性のパーセントの算出は、例えば、最適比較目的のための２つの配列をアラインすることにより行うことができる（例えば、ギャップは、最適アライメントに対する第１および第２の核酸配列の一方または両方に導入され、非同一配列は、比較目的のため、無視される）。ある種の実施形態では、比較目的のためにアラインされた配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％である。対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチドを、次に、比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列における対応する位置
と同じヌクレオチドによって占有されている場合、この分子は、その位置で同一である。２つの配列の間の同一性のパーセントは、配列が共有する同一の位置の数と相関し、２つの配列の最適アライメントに対して導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さが考慮される。配列の比較、および２つの配列の間の同一性率の決定は、算術アルゴリズムを使用して行うことができる。ＤＮＡおよびＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）は、等価と見なすことができる。

タンパク質とヌクレオチド配列の両方のアライメントに好適なソフトウェアプログラムが様々な供給元から入手可能である。配列同一性率を決定するための好適なプログラムの１つは、国立生物工学情報センターＢＬＡＳＴのウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのどちらか一方を使用して２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用される一方、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒ、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにおいて、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）からも入手可能である。

配列アライメントは、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＣｌｕｓｔａｌＸまたはＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどの当分野において公知の方法を使用して行うことができる。

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド基準配列とアラインする単一ポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々、それ自体の配列同一性率を有することができる。配列同一性率の値は、小数第２位で四捨五入されることが留意される。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３および８０．１４は、８０．１に切り捨てられる一方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８および８０．１９は８０．２に切り上げられる。長さの値は、常に、整数となることも留意される。

ある種の態様では、第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性率（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、この場合、Ｙは、第１および第２の配列のアライメントの同一性の一致としてスコア化されるアミノ酸残基（または核酸塩基）の数（目視検査または特定の配列アライメントプログラムにより整列される）であり、Ｚは、第２の配列中の残基の合計数である。第１の配列の長さが、第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列の同一性率は、第１の配列に対する第２の配列の同一性率より高い。

当業者は、配列同一性率を算出するための配列アライメントの生成は、一次配列データによって専ら推進されるバイナリ配列－配列比較に限定されないことを理解しているものと予想される。配列アライメントは、配列データを、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）または系統学的データなどの、不均質源からのデータと統合することにより生成することができるも理解されよう。複数の配列アライメントを生成するための不均質データを統合する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能な、および代替として例えばＥＢＩから入手可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一性率を算出するために使用される最終アライメントは、自動によりまたは手作業でのどちらかでキュレートすることができることがやはり理解されよう。

イムノコンジュゲート：用語「イムノコンジュゲート」は、本明細書で使用する場合、
結合性分子（例えば、抗ＦＩＸａ、抗ＦＸｚまたは生体特異的抗ＦＩＸａ／抗ＦＸｚ）、および１つまたはそれ以上の部分、例えば、結合性分子に化学的にコンジュゲートされている治療部分または診断部分を含む化合物を指す。一般に、イムノコンジュゲートは、一般式：Ａ－（Ｌ－Ｍ）ｎによって定義され、式中、Ａは、結合性分子（例えば、抗体）であり、Ｌは、任意選択のリンカーであり、Ｍは、例えば、治療剤、検出可能な標識などとすることができる非相同性部分であり、ｎは整数である。イムノコンジュゲートはまた、反対の順序で一般式によって定義することもできる。一部の態様では、イムノコンジュゲートは、「抗体－薬物コンジュゲート」（「ＡＤＣ」）である。本開示の文脈では、用語「イムノコンジュゲート」は、化学的にまたは酵素によるコンジュゲート分子に限定されない。本開示に使用される用語「イムノコンジュゲート」はまた、遺伝的融合を含む。

単離された：本明細書で使用する場合、用語「単離された」とは、結合した（天然であるか、または実験設定であるかに関わらない）構成成分の少なくとも一部から分離された、物質または実体（例えば、ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または天然に見出されない形態の組成物）を指す。単離された物質（例えば、ヌクレオチド配列またはタンパク質配列）は、それらが結合していた物質を参照して、様々なレベルの純度を有することができる。

単離された物質および／または実体は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも９５％またはそれ超の、それらが最初に結合していた他の構成成分から分離される。

一部の実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％を超えるか、または約９９％を超える純度である。

本明細書で使用する場合、ある物質が、他の構成成分を実質的に含まない場合、その物質は、「純粋」である。用語「実質的に単離された」とは、この化合物が、形成されたまたは検出された環境から実質的に分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本開示の化合物に富む組成物を含むことができる。実質的な分離は、本開示の化合物またはその塩を、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９重量％含有する組成物を含むことができる。

「単離された」、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、抗体）、ベクター、ポリペプチド、細胞、または任意の組成物は、天然には見出されない形態にある、ポリヌクレオチド（例えば、抗体）、ベクター、ポリペプチド、細胞または組成物である。単離されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチドまたは組成物は、これらがもはや、天然に見出される形態にない程度まで精製されたものを含む。一部の実施形態では、単離されたポリヌクレオチド、ベクター、ポリペプチドまたは組成物は、実質的に純粋である。

ＦＶＩＩＩａ活性を擬似する：「ＦＶＩＩＩａ活性を擬似する」への本明細書に開示される結合性分子の能力、すなわち、活性化第ＶＩＩＩ因子の活性を擬似する能力は、当分野において公知の様々な方法により測定することができる。このような方法の１つは、本
明細書の実施例の項目に記載される発色アッセイである。一態様では、本明細書に開示される結合性分子（例えば、二重特異性抗体）は、観察されるＦＸａ基質切断の速度が、加える結合性分子（例えば、二重特異性抗体）の非存在下で、平均基本速度より少なくとも３標準偏差高いと、「ＦＶＩＩＩａ活性を擬似する」と言われる。別の例示的な方法は、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイである。用語「活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）」は、試験のリン脂質濃度のみが制御（リン脂質および表面アクチベータ濃度とは反対に）され、名称「部分トロンボプラスチン」が、凝固を加速するが、血友病性血漿の凝固時間の延長を補正しないリン脂質調製までの時間に適用される試験（１９５３年に考案された）の元々の形態から導かれる。実質的に、この用語「部分的な」は、リン脂質が存在するが組織因子は存在しないことを意味する。ａＰＴＴはまた、カオリンセファリン凝固時間（ＫＣＣＴ）またはカオリン加部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴＫ）としても知られている。他の有用な方法は、上記の従来的なａＰＴＴアッセイから修正された一段階（ＯＳ）凝固アッセイを含む。一段階凝固アッセイは、ＦＶＩＩＩ欠乏血漿および希釈試験サンプルを使用し、ＦＶＩＩＩ活性に対して定量的とすることができる。実施例４を参照されたい。対照的に、ａＰＴＴアッセイは、ａＰＴＴ試薬およびカルシウムを含むサンプル血漿を使用し、凝固時間を報告するものである。

モノクローナル抗体：「モノクローナル抗体」とは、単一抗原決定基またはエピトープの高度な特異的認識および結合に関与する、均質抗体集団を指す。これは、様々な抗原決定基を指向する様々な抗体を通常、含む、ポリクローナル抗体とは対照的である。用語「モノクローナル抗体」は、無傷モノクローナル抗体と完全長モノクローナル抗体との両方、および抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」とは、以下に限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選別、組換え発現およびトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニックマウスでのヒト抗体の発現）によるものを含む、任意のいくつかの方法で作製されるこのような抗体を指す。

変異：本開示の内容物では、上記で定義されている用語「変異」および「アミノ酸置換」（時として、単に「置換」と呼ぶ）は、互換性があると考えられる。一部の態様では、変異という用語は、抗体生殖系遺伝子をコードする核酸における、化学的手段、酵素的手段または他の任意の手段によって、任意のヌクレオチドの欠失、挿入または置換を指し、こうして、生じたポリペプチドのアミノ酸配列は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基において改変される。一部の実施形態では、本明細書に開示される核酸配列における変異は、アミノ酸置換をもたらす。他の態様では、生じたコドンが同義コドンである、本明細書に開示される核酸配列中のコドンの変異は、アミノ酸置換をもたらさない。したがって、一部の態様では、本明細書に開示される核酸配列は、１つまたはそれ以上の同義コドンの変化を導入することにより最適化されたコドンとすることができる。このようなコドンの最適化は、例えば、（ｉ）組換えタンパク質発現におけるタンパク質収率を改善することができる、または（ｉｉ）安定性、半減期、または本明細書に開示される結合性分子をコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡの他の所望の特性を改善することができ、この場合、このようなｍＲＮＡまたはＤＮＡが、それを必要とする対象に投与される。

患者：本明細書で使用する場合、「患者」とは、処置を求め得る、または処置を必要としている、処置を要求する、処置を現在受けている、処置を将来受ける対象、または特定の疾患または状態に関する訓練を受けた専門家による監督下にある対象を指す。

医薬組成物：用語「医薬組成物」とは、活性成分（例えば、抗体などの本明細書に開示される結合性分子）の生物活性が有効となるような形態の調製物であって、該組成物が投与される対象に対して、許容されない毒性となるさらなる構成成分を含有しない、調製物
を指す。このような組成物は滅菌されている。

薬学的に許容される：言い回し「薬学的に許容される」は、本明細書において使用され、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに好適な、妥当な医療的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に見合う、そのような化合物、物質、組成物および／または剤形を指す。一般に、動物、より詳細にはヒトにおける使用に対する、連邦政府または州政府の規制当局（または米国薬局方もしくは他の一般に認識されている薬局方に掲載されている）による承認は、そのような化合物、物質、組成物および／または剤形が、薬学的に許容されることを意味する。治療目的に安全であると一般に許容されている、化合物、物質、組成物および／または剤形は、「治療的に許容可能」である。診断目的に安全であると一般に許容されている、化合物、物質、組成物および／または剤形は、「診断的に許容可能」である。

薬学的に許容される添加剤：言い回し「薬学的に許容される添加剤」とは、本明細書で使用する場合、本明細書において記載されている化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁させるまたは溶解することが可能なビヒクル）であって、患者において、実質的に非毒性であり非炎症性となる特性を有する成分を指す。添加剤は、例えば：付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、エモリエント、乳化剤、充填剤（賦形剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、風味剤、フレグランス、流動促進剤（流動性増強剤）、滑沢剤、保存剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味剤、および湿潤水を含むことができる。例示的な添加剤は、以下に限定されないが：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカロメロース、架橋化ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム，マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、マイクロクリスタリンセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣおよびキシリトールを含む。

治療目的のために安全であると一般に許容されている添加剤は、「治療的に許容可能な添加剤」である。診断目的のために安全であると一般に許容されている添加剤は、「診断的に許容可能な添加剤」である。

薬学的に許容される塩：本開示はまた、本明細書において記載されている化合物の薬学的に許容される塩を含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、開示化合物の誘導体であって、その親化合物が、存在する酸部分または塩基部分をその塩形態に変換（例えば、遊離塩基を好適な有機酸と反応させることによる）することにより修飾される、誘導体である。薬学的に許容される塩の例には、以下に限定されないが、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩；などを含む。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ
酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、および以下に限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンを含めた非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミン陽イオンなどが含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の慣用的な非毒性塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性の部分を含んでいる親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、水中、もしくは有機溶媒中、または上記２つの混合物中、遊離酸または遊離塩基の形態のこれらの化合物を、化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることにより製造することができる；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体が使用される。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８５年、１４１８頁、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄＵｓｅ、Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００８年およびＢｅｒｇｅら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ、６６巻、１～１９頁（１９７７年）に見出され、それらのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み入れられる。

薬学的に許容される溶媒和物：用語「薬学的に許容される溶媒和物」は、本明細書において使用する場合、好適な溶媒の分子が結晶格子に取り込まれる、本発明の化合物を意味する。好適な溶媒は、投与される投与量で生理学的に耐容される。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水もしくはそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化または沈殿により製造することができる。好適な溶媒の例には、エタノール、水（例えば、一水和物、二水和物および三水和物）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２－（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２－ピロリドン、安息香酸ベンジルなどが含まれる。水が溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と呼ばれる。

薬物動態：本明細書で使用する場合、「薬物動態」とは、生きている生物に投与された物質の運命の決定に関する場合、分子または化合物の任意の１つまたはそれ以上の特性を指す。薬物動態は、吸収、分布、代謝および排出の程度および速度を含めた、いくつかの領域に分類される。これは、一般に、ＡＤＭＥと呼ばれ、この場合：（Ａ）吸収は、血液循環に入る物質の過程である；（Ｄ）分布は、身体の流体および組織全体にわたる物質の分散または広がりである；（Ｍ）代謝（または生体変換）は、娘代謝産物への親化合物の非可逆的な変換である；および（Ｅ）排出（または排除）は、身体からの物質の排除を指す。希な例では、一部の薬物は、身体組織中に非可逆的に蓄積する。

ポリヌクレオチド：用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書で使用する場合、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、そのアナログまたはそれらの混合物を含めた、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指す。この用語は、分子の一次構造を指す。した
がって、この用語は、三本鎖、二本鎖および一本鎖のデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖および一本鎖のリボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。それはまた、例えば、アルキル化によりおよび／またはキャッピングによる、ポリヌクレオチドの修飾形態、ならびにその非修飾形態を含む。より詳細には、用語「ポリヌクレオチド」には、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含む）、スプライシングされているかスプライシングされていないに関わらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびｍＲＮＡを含めたポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含む）、プリン塩基もしくはピリミジン塩基のＮグリコシドまたはＣグリコシドであるポリヌクレオチドの任意の他のタイプ、および非ヌクレオチド主鎖を含有する他のポリマー、例えばポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）、およびポリモルホリノポリマー、および他の合成による配列特異的核酸ポリマーが含まれるが、但し、これらのポリマーは、ＤＮＡおよびＲＮＡに見出されるような塩基対および塩基スタッキングを可能にする立体配置の核酸塩基を含有することを条件とする。特定の態様では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。他の態様では、ｍＲＮＡは、合成ｍＲＮＡである。一部の態様では、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。一部の態様では、ある種のクラスの核酸塩基はすべて、非天然の核酸塩基（例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド中のウリジンがすべて、非天然核酸塩基、例えば５－メトキシウリジンにより置き換えられている）で置き換えられている。一部の態様では、ポリヌクレオチド（例えば、合成ＲＮＡまたは合成ＤＮＡ）は、天然核酸塩基しか、すなわち合成ＤＮＡの場合、Ａ，Ｃ、ＴおよびＵしか、または合成ＲＮＡの場合、Ａ、Ｃ、ＴおよびＵしか含まない。

当業者は、本明細書に開示されるコドンマップ中のＴ塩基は、ＤＮＡに存在する一方、Ｔ塩基は、対応するＲＮＡでは、Ｕ塩基により置き換えられていることを理解しているであろう。例えば、ＤＮＡ形態において、本明細書に開示されるコドン－ヌクレオチド配列、例えば、ベクターまたはインビトロ翻訳（ＩＶＴ）のテンプレートは、その対応する翻訳されたｍＲＮＡにおけるＵ塩基として転写される、そのＴ塩基を有する。この点で、コドン最適化ＤＮＡ配列（Ｔを含む）およびその対応するＲＮＡ配列（Ｕを含む）は、本発明のコドン最適化ヌクレオチド配列と見なされる。当業者は、等価なコドンマップは、非天然塩基により置き換えられた１つまたはそれ以上の塩基によって生成することをやはり理解している。したがって、例えば、ＴＴＣコドン（ＤＮＡマップ）は、ＵＵＣコドン（ＲＮＡマップ）に対応しており、次に、このＵＵＣコドン）は、ΨΨＣコドン（Ｕが、擬似ウリジンにより置き換えられた、ＲＮＡマップ）に対応すると思われる。

チミジンのＮ３－ＨおよびＣ４－オキシと、それぞれアデノシンのＮ１およびＣ６－ＮＨ_２との間、およびシチジンのＣ２－オキソ、Ｎ３およびＣ４－ＮＨ_２と、それぞれグアノシンのＣ２－ＮＨ_２、Ｎ’－ＨおよびＣ６－オキシとの間での水素結合の形成を可能にする条件下で、標準Ａ－ＴおよびＧ－Ｃ塩基対が形成する。したがって、例えば、グアノシン（２－アミノ－６－オキシ－９－β－Ｄ－リボフラノシル－プリン）は、修飾されて、イソグアノシン（２－オキシ－６－アミノ－９－β－Ｄ－リボフラノシル－プリン）を形成することができる。このような修飾により、もはや効果的にシトシンと標準的な塩基対を効果的に形成しない、ヌクレオシド塩基がもたらされる。しかし、シトシン（１－β－Ｄ－リボフラノシル－２－オキシ－４－アミノ－ピリミジン）を修飾してイソシトシン（１－β－Ｄ－リボフラノシル－２－アミノ－４－オキシ－ピリミジン－）を形成させると、グアノシンとの塩基対を効果的に形成しないが、イソグアノシンとの塩基対を形成する、修飾ヌクレオシドとなる（Ｃｏｌｌｉｎｓらへの米国特許第５，６８１，７０２号）。イソシトシンは、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）から入手可能である；イソシチジンは、Ｓｗｉｔｚｅｒら（１９９３年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３２巻：１０４８９～１０４９６頁およびそこに引用されている参照文献によって記載されている方法により製造される；２’－デオキシ－５－メチル－イソシチジンは、Ｔｏｒら（１９９３年）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５巻：４４６１～４
４６７頁およびそこに引用されている参照文献の方法により製造される；およびイソグアニンヌクレオチドは、上記のＳｗｉｔｚｅｒら、１９９３年、およびＭａｎｔｓｃｈら（１９９３年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４巻：５５９３～５６０１頁によって記載されている方法を使用して、またはＣｏｌｌｉｎｓらへの米国特許第５，７８０，６１０号に記載される方法によって製造することができる。他の非天然塩基対は、２，６－ジアミノピリミジンおよびその補体（１－メチルピラゾロ－［４，３］ピリミジン－５，７－（４Ｈ，６Ｈ）－ジオンの合成に関する、Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ３４３巻：３３～３７頁に記載される方法により合成することができる。上記のＬｅａｃｈら（１９９２年）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４巻：３６７５～３６８３頁およびＳｗｉｔｚｅｒらに記載されるものなどの固有の塩基対を形成する他のこのような修飾ヌクレオチド単位が公知である。

ポリペプチド：用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、修飾アミノ酸を含むことができる。この用語はまた、天然に修飾されたアミノ酸ポリマー、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識用構成成分とのコンジュゲートなどの任意の他の操作もしくは修飾によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含する。同様に、例えば、アミノ酸（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸およびクレアチンなどの非天然アミノ酸を含む）の１つまたはそれ以上のアナログを含有するポリペプチド、および当分野で公知の他の修飾物がこの定義に含まれる。

この用語は、本明細書で使用する場合、任意のサイズ、構造または機能のタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドを指す。ポリペプチドは、上述の遺伝子生成物、天然ポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片および他の等価物、バリアントおよびアナログを含む。ポリペプチドは、単一ポリペプチドとすることができるか、または二量体、三量体もしくは四量体などの多重分子複合体とすることができる。それらはまた、単一鎖または多重鎖ポリペプチドを含むことができる。最も一般的なジスルフィド連結は、多重鎖ポリペプチドに見出される。用語ポリペプチドはまた、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人為的な化学アナログである、アミノ酸ポリマーも当てはまることができる。一部の実施形態では、「ペプチド」は、５０以下のアミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０のアミノ酸長とすることができる。

予防：本明細書で使用する場合、用語「予防すること」とは、疾患、障害および／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害および／もしくは状態の症状、特徴または臨床兆候のうちの１つまたはそれ以上の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害および／もしくは状態の症状、特徴または兆候のうちの１つまたはそれ以上の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害および／もしくは状態からの進行を部分的または完全に遅延させること；ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態に関連する病理を発症するリスクを低減させることを指す。

予防的：本明細書で使用する場合、「予防的」とは、治療的過程、または疾患もしくは状態の発症を予防するために使用される作用の過程、または出血エピソード、例えば血友病に関連する症状を予防または遅延させることを指す。

予防：本明細書で使用する場合、「予防」とは、健康を維持するため、および出血エピソードの発症を予防または遅延させるため、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防または遅延させるために採用される手段を指す。

組換え：「組換え」ポリペプチドまたはタンパク質は、組換えＤＮＡ方法によって生成されたポリペプチドまたはタンパク質を指す。操作された宿主細胞において発現した組換えにより生成したポリペプチドおよびタンパク質は、適切ないずれかの技法により分離された、画分化された、または部分的にもしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドと同様に、本発明の目的のために単離されたと見なされる。本明細書に開示されるポリペプチドは、当分野において公知の方法を使用して、組換えにより生成することができる。代替的に、本明細書に開示されるタンパク質およびペプチドは、化学的に合成することができる。

類似性：本明細書で使用する場合、用語「類似性」とは、ポリマー分子、例えばポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の総合的な同系性を指す。相互のポリマー分子の類似率の算出は、類似率が、当分野において理解されている通り、保存的置換を考慮することを除いて、同一性率の算出と同じように行うことができる。

対象：「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、その診断、予後または治療法が望まれている、任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象には、以下に限定されないが、ヒト、家畜、農場動物、動物園動物、スポーツ動物、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）、ウシ（ｃｏｗ）などのペット動物；類人猿、サル、オランウータンおよびチンパンジーなどの霊長類；イヌおよびオオカミなどのイヌ科；ネコ、ライオンおよびトラなどのネコ科；ウマ、ロバおよびシマウマなどのウマ科；クマ、ウシ、ブタおよびヒツジなどの食用動物；シカおよびキリンなどの有蹄動物；マウス、ラット、ハムスターおよびモルモットなどのげっ歯類；などが含まれる。ある種の実施形態では、哺乳動物はヒト対象である。他の実施形態では、対象はヒト患者である。特定の実施形態では、対象は、本明細書に記載される方法に適合可能な、インビボ、インビトロまたはエクスビボに関わらず、ヒト患者またはその細胞である。

実質的に：本明細書で使用する場合、用語「実質的に」とは、目的の特徴または特性の度合いもしくは程度の合計または合計近くを示す、定量的状態を指す。生物学分野の当業者は、生物学的および化学的現象が、仮にあるとしても、完了しない、および／もしくは完全まで進行しない、または絶対的な結果を実現しないもしくは避けられないことを理解しているであろう。したがって、用語「実質的に」は、多数の生物学的および化学的現象において内在する完全性の欠如の可能性をとらえるために、本明細書において使用されている。

実質的に等価である：本明細書で使用する場合、用量間で時間差に関連しているので、この用語は、プラス／マイナス２％を意味する。

実質的に同時に：本明細書で使用する場合、および複数の用量に関連するので、この用語は、２秒以内を意味する。

罹患している：疾患、障害および／または状態を「罹患している」個体は、疾患、障害および／もしくは状態の診断を受けたか、またはこれらのうちの１つまたはそれ以上の症状を示す。

罹患し易い：疾患、障害および／または状態を罹患し易い個体は、疾患、障害および／または状態の診断を受けていない、および／またはそれらの症状を示していないことがあるが、疾患またはその症状を発症する傾向を内在している。一部の実施形態では、疾患、
障害および／または状態（例えば、がん）に罹患し易い個体は、以下：（１）疾患、障害および／または状態の発症に関連する遺伝子変異；（２）疾患、障害および／または状態の発症に関連する遺伝的多形；（３）疾患、障害および／もしくは状態に関連するタンパク質ならびに／もしくは核酸の発現量ならびに／もしくは活性の向上および／または低下；（４）疾患、障害および／または状態の発症に関連する習慣および／または生活スタイル；（５）疾患、障害および／または状態の家族歴；（６）疾患、障害および／または状態の発症に関連する微生物への曝露および／またはこの微生物による感染症のうちの１つまたはそれ以上を特徴とすることができる。一部の実施形態では、疾患、障害および／または状態に罹患し易い個体は、疾患、障害および／または状態を発症すると予想される。一部の実施形態では、疾患、障害および／または状態に罹患し易い個体は、疾患、障害および／または状態を発症しないであろう。

治療剤：用語「治療剤」または「薬剤」とは、対象に投与すると、治療作用、診断作用および／もしくは予防作用を有する、ならびに／または所望の生物学的作用および／もしくは薬理学的作用を誘発する分子実体を指す。例えば、一部の実施形態では、本明細書に開示される二重特異性抗体が治療剤となり得る。一部の実施形態では、薬剤は、本明細書に開示される抗体の少なくとも１種との併用療法の一部として共投与される、別の分子（例えば、凝固因子、補因子など）である。

治療有効量：本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」は、感染症、疾患、障害および／または状態に罹患しているまたはこれらに罹患し易い対象に投与されると、感染症、疾患、障害および／または状態を処置するため、それらの症状を改善するため、それらを診断するため、それらを予防するため、および／またはそれらの発症を遅延するために十分であると考えられる、薬剤（例えば、核酸、薬物、治療剤、診断剤、予防剤など）の量を意味する。

治療的に有効な転帰：本明細書で使用する場合、用語「治療的に有効な転帰」は、感染症、疾患、障害および／または状態に罹患しているまたはこれらに罹患し易い対象において、感染症、疾患、障害および／または状態を処置するため、それらの症状を改善するため、それらを診断するため、それらを予防するため、および／またはそれらの発症を遅延するために十分な転帰を意味する。

処置すること、処置、治療法：本明細書で使用する場合、用語「処置する」または「処置」または「治療法」またはその文法上の変化形は、出血疾患、障害または状態、例えば、血友病の１つもしくはそれ以上の症状または特徴の部分的または完全な緩和、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、改善（ｉｍｐｒｏｖｅ）、軽減、それらの発症の遅延、それらの進行の阻止、それらの重症度の低減、および／またはそれらの出現率の低下を指す。例えば、出血障害を「処置する」ことは、出血を予防すること、出血エピソードなどの頻度および／または重症度を低下させることを指すことができる。処置は、疾患、障害および／または状態に関連する病理の発症リスクを低下させる目的のため、疾患、障害および／もしくは状態の兆候を示さない対象、ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態の早期兆候しか示さない対象に行うことができる。

ベクター：「ベクター」は、宿主細胞に、および／またはこれらの間に挿入された核酸分子を転移する、特に自己複製性の核酸分子である。この用語は、ＤＮＡもしくはＲＮＡの細胞への挿入に主に機能するベクター（例えば、染色体の組み込み）、ＤＮＡもしくはＲＮＡの複製に主に機能するベクターの複製、ならびにＤＮＡもしくはＲＮＡの転写および／または翻訳に機能する発現ベクターを含む。一部の態様では、本明細書に開示される結合性分子をコードする核酸（ＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのＲＮＡ）の投与および／または発現は、インビトロ（例えば、組換えタンパク質生成の間）で行うことができる一方
、他の場合では、インビボ（例えば、対象へのｍＲＮＡの投与）、またはエクスビボ（例えば、それを必要とする対象への投与のための自家移植または非相同性細胞に導入されるＤＮＡまたはＲＮＡ）で行うことができる。同様に、記載している通りの機能の１つ超をもたらすベクターが含まれる。

ＩＩ．抗ＦＩＸおよび抗ＦＸ結合性分子
本開示は、第ＩＸ因子および第Ｘ因子、ならびにそれらの抗原結合部分に結合する抗体を提供する。これらの抗体は、これらの凝固因子の特定の機能的形態への優先的な結合が可能である。例えば、一部の実施形態では、ＦＩＸに対する開示されている抗体は、活性部位において、擬似基質に共有結合により連結されている、活性化ＦＩＸ（ＦＩＸａ）、例えば遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａに優先的に結合する（ＦＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）。他の実施形態では、開示される抗体は、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸチモーゲンよりも、ＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合する。さらに他の実施形態では、開示される抗体は、ＦＩＸａ－ＳＭまたはＦＩＸチモーゲンよりも、遊離ＦＩＸａに優先的に結合する。対照的に、一部の実施形態では、ＦＸに対する開示される抗体は、活性化ＦＸ（ＦＸａ）よりもＦＸチモーゲン（ＦＸｚ）に優先的に結合する。この優先的な結合は、ＦＩＸａおよびＦＸｚに特異的かつ同時に結合することができる、抗ＦＩＸａ部分および抗ＦＸｚ部分を含む二重特異性分子を生成するのに重要である。第ＶＩＩＩ因子は、Ｃａ^２＋およびリン脂質の存在下で、ＦＸを活性化ＦＸａに変換するＦＸとの複合体を形成するＦＩＸａに対する補因子である。したがって、ＦＩＸａとＦＸｚとの間の抗体を媒介とする複合体の形成は、ＦＶＩＩＩａの作用を擬似する。

さらに他の実施形態では、一部の開示される抗体は、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭよりもＦＩＸチモーゲンに優先的に結合する（「抗ＦＩＸｚ抗体」）。したがって、抗ＦＩＸｚ抗体を使用して、抗ＦＩＸｚ抗体および抗ＦＸ抗体を含む二重特異性分子を生成することができる（例えば、抗ＦＸｚ抗体または抗ＦＸａ抗体）。

ある種の実施形態では、一部の開示されている抗ＦＸ抗体は、ＦＸｚよりもＦＸａに優先的に結合する（「抗ＦＸａ抗体」）。抗ＦＸａ抗体を使用して、抗ＦＸａ抗体および抗ＦＩＸ抗体を含む二重特異性分子を生成することができる（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）。

したがって、ＦＩＸとＦＸとの間の抗体を媒介とする複合体の形成を使用して、特に、ＦＶＩＩＩに対する抗体を生じた、またはＦＶＩＩＩに対する抗体を生じるリスクがある対象における、ＦＶＩＩＩ補充療法を迂回することができる。

本開示はまた、ＦＸ（ＦＸｚおよび／またはＦＸａ）およびＦＩＸ（ＦＩＸｚおよび／またはＦＩＸａ）に結合する二重特異性結合性分子を提供する。一実施形態では、二重特異性結合性分子は、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体のいずれか１つと抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体のいずれか１つとの組合せとすることができる。一部の実施形態では、二重特異性結合性分子は、ＦＸｚ、ＦＩＸｚおよびＦＩＸａに特異的に結合するが、ＦＸａへの検出可能な結合を有していない。ある種の実施形態では、二重特異性結合性分子は、様々な結合親和性（例えば、Ｋ_Ｄ）で、ＦＩＸｚ、ＦＩＸａおよびＦＸｚに結合する。他の実施形態では、二重特異性結合性分子は、ＦＩＸｚ、ＦＩＸａおよびＦＸｚの各々に対して、１μＭ未満のＫ_Ｄで結合する（例えば、それぞれ８ｎＭ、２ｎＭまたは２０ｎＭ）。

（ａ）抗ＦＩＸａ結合性分子
本開示は、抗ＦＩＸ結合性分子、例えば、ＦＩＸチモーゲンよりも活性化ＦＩＸ（ＦＩＸａ）に優先的に結合する抗ＦＩＸ抗体、またはその抗原結合部分を含む分子を提供する
。

第ＩＸ因子（ＦＩＸ）は、広範囲な転写後修飾を必要とする、プロチモーゲン前駆体として幹細胞により合成される。プレプロチモーゲンは、小胞体のルーメンに成長ポリペプチドを輸送するそのアミノ末端において、プレペプチド（疎水性シグナルペプチド）を含有する。このシグナルペプチドは、ＥＲの内側で一度、シグナルペプチダーゼにより切断される。プロペプチドは、１２のグルタミン酸残基をガンマ－カルボキシグルタミル（Ｇｌａ）残基に修飾する、ビタミンＫ依存性カルボキシラーゼ（γ－グルタミルカルボキシラーゼ）の認識要素として機能する。これらの残基は、Ｃａ２＋依存性結合による陰イオン性リン脂質表面との結合に必要である。

プレプロＦＩＸチモーゲンのアミノ酸配列は、以下に提示されている（シグナル配列は、下線が引かれている（１～２８）；プロペプチド配列（２９～４６）は、太字で記載されている）：

シグナルペプチドおよびプロペプチドの切断後、ＦＩＸはチモーゲン形態となる。ＦＩＸチモーゲンは、このように、４１５のアミノ酸の一本鎖ポリペプチドとして循環する。Ｖｙｓｏｔｃｈｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８巻：８４３６頁（１９９３年）を参照されたい。一実施形態では、ＦＩＸチモーゲンは、配列番号７６４のアミノ酸４７～４６１である。別の実施形態では、ＦＩＸチモーゲンは、配列番号７６４のアミノ酸４７～４６１であり、この場合、アミノ酸残基１８０は、アルギニンの代わりにアラニンである（すなわち、活性化不能型ＦＩＸ）。

ＦＩＸのチモーゲンは、ＦＸＩａによって、または組織因子／ＦＶＩＩａ複合体によって活性化される。第１の切断は、Ａｒｇ１９１（成熟ＦＩＸ配列中のＡｒｇ１４５）に存在し、不活性なＦＩＸ－アルファを生成する。Ａｒｇ２２６における第２の切断（成熟ＦＩＸ配列中のＡｒｇ１８０）により、ＦＩＸ活性化ペプチドの３５アミノ酸が取り除かれ、触媒的に活性な分子ＦＩＸａ－ベータとなる。ＦＶＩＩＩａに結合しない、この触媒的に活性なＦＩＸａは、本明細書において遊離ＦＩＸａとも呼ばれる。この生じたヘテロ二量体は、Ｃｙｓ１７８－Ｃｙｓ３３５のジスルフィド架橋によって保持されている。セリンプロテアーゼは、Ｈｉｓ２６７、Ａｓｐ３１５およびＳｅｒ４１１である触媒三残基を含有する。Ａｒｇ２２６の切断に際して、Ｖａｌ２２７は、Ａｓｐ４１０との塩架橋を形成することができ、これは、活性なセリンプロテアーゼの特徴である。一実施形態では、遊離ＦＩＸａは、配列番号７６４のアミノ酸４７～１９１、および配列番号７６４のアミノ酸２２７～４６１からなり、この場合、配列番号７６４のアミノ酸１７８およびアミノ酸３３５が、ジスルフィド結合を形成する。

しかし、遊離ＦＩＸａの活性は、ＦＩＸチモーゲンの活性に類似していることが知られている。補因子ＦＶＩＩＩａとの複合体形成は、活性化の重要な第２期となり、この後、潜在性Ｘアーゼ複合体は、生理学的基質ＦＸに対して厳密に特異的であり、活性化血小板の表面に限定される、約２００、０００倍の活性増強に到達する（ｖａｎＤｉｅｉｊｅ
ｎら、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．１９８１年４月１０日；２５６巻（７号）：３４３３～４２頁）。この巨大分子の活性化は、Ｃａ２＋を含めた、低分子量アゴニストによって支援される（Ｍａｔｈｕｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２巻（１９９７年）、２３４１８～２３４２６頁）。いくつかの一連の証拠により、Ｃａ２＋結合は、立体構造の再配列を伴うことが示されている（Ｂａｊａｊら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９巻（１９９２年）、１５２～１５６頁、ＥｎｆｉｅｌｄおよびＴｈｏｍｐｓｏｎ、Ｂｌｏｏｄ、６４巻（１９８４年）、８２１～８３１頁）。テナーゼ複合体におけるこの非常に活性なＦＩＸａは、擬似基質（例えば、Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ＥＧＲ－ＣＭＫ））をＦＩＸａの活性部位への共有結合によって擬似される（ＦＸａ＋ＥＧＲ－ＣＭＫ、ＦＩＸａ－ＳＭとも呼ばれる）。したがって、ＦＩＸａ－ＳＭは、遊離ＦＩＸａと比べて、非常に活性なＦＩＸａ（テナーゼ複合体中）に優先的に結合する、抗体またはその抗体結合部分を区別するための重要な手段として使用することができる。

トリペプチドクロロメチルケトンは、一般に、擬似基質として、この分野で許容され、トリペプチド配列は、特定の酵素により切断される天然基質配列となり、ＣＭＫ部分により、このトリペプチドを、活性部位のセリンと反応するので活性部位に非可逆的に封じ込めることができる。結果として、酵素が、擬似基質に結合している場合、これは、基質の結合形態、すなわち真の活性な立体構造となるはずである。Ｂｒａｎｄｓｔｅｔｅｒら（１９９５年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２巻（２１号）：９７９６～８０頁、およびＨｏｐｆｎｅｒら（１９９９年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ７巻（８号）：９８９～９６頁を参照されたい。

用語「ＦＩＸチモーゲン」は、本明細書において、「ＦＩＸｚ」、「ＦＩＸ前駆体」、「不活性化ＦＩＸ」、「非活性化ＦＩＸ」または「非活性化ＦＩＸ前駆体」と互換的に使用することができる。一実施形態では、ＦＩＸチモーゲン（ＦＩＸｚ）は、非活性化ＦＩＸ前駆体であって、活性化ペプチド（例えば、配列番号７６４のアミノ酸１４６～１８０として表される３５活性化ペプチド）（成熟番号付け）が、前駆体から切断されない、上記の非活性化ＦＩＸ前駆体を含む。ＦＩＸチモーゲンは、任意の天然または操作されたバリアントを含むことができる。ＦＩＸチモーゲンの非限定例は、配列番号７６４で示されている。別の実施形態では、ＦＩＸチモーゲンは、活性化不能型ＦＩＸ（ＦＩＸｎ）であり、これは、活性な血漿トロンボプラスチン前駆体である第ＸＩａ因子の存在下で、非活性となるよう操作されている。活性化不能型ＦＩＸの一例は、その活性化を阻止し、チモーゲン形態（ＦＩＸｚ）中の第ＩＸ因子を維持する１８０位（成熟番号付け）において、アルギニンにアラニン変異もたらすＦＩＸとすることができる。ＦＩＸチモーゲンは、シグナルペプチドおよび／またはプロペプチドを場合により含有することができる。

用語「活性化ＦＩＸ」は、「ＦＩＸａ」と本明細書において互換的に使用することができる。一実施形態では、活性化ＦＩＸは、野生型の天然ＦＩＸａ（本明細書において、「野生型ＦＩＸａ」とも称される）である。別の実施形態では、ＦＩＸａは、非天然ＦＩＸａ、例えばＦＩＸａ立体構造バリアントを含む。例えば、ＦＩＸａは、その基質であるＦＸに結合した野生型の天然ＦＩＸａとして、同じ立体構造を有するよう設計されている、ＦＩＸａ－ＳＭとすることができる。特定の実施形態では、ＦＩＸａ－ＳＭは、活性化ＦＩＸの最も活性な立体構造を擬似することが意図されている、活性部位に共有結合している擬似基質を有する活性化ＦＩＸである。

ＦＩＸチモーゲンおよびＦＩＸａは、ＦＩＸバリアントを含むことができる。一実施形態では、ＦＩＸバリアントは、米国特許第４，７７０，９９９号および同第７，７００，７３４号に記載される通りクローニングされ、ヒト第ＩＸ因子をコードするｃＤＮＡが、単離されて、特徴付けられて、発現ベクターにクローニングされる（例えば、Ｃｈｏｏら
、Ｎａｔｕｒｅ２９９巻：１７８～１８０頁（１９８２年）；Ｆａｉｒら、Ｂｌｏｏｄ６４巻：１９４～２０４頁（１９８４年）；およびＫｕｒａｃｈｉら．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．７９巻：６４６１～６４６４頁（１９８２年）を参照されたい）。Ｓｉｍｉｏｎｉらによって２００９年に特徴付けられたＲ３３８ＬＦＩＸ（Ｐａｄｕａ）バリアントである、ＦＩＸの１つの具体的なバリアントは、機能獲得型変異を含んでおり、これは、天然ＦＩＸと比べて、Ｐａｄｕａバリアントの活性がほぼ８倍、向上していることに相関している。ＦＩＸバリアントはまた、ＦＩＸポリペプチドのＦＩＸ活性に影響を及ぼさない、１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する、いかなるＦＩＸポリペプチドを含むことができる。

したがって、本開示は、活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）（例えば、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭ）に特異的に結合する、抗体（例えば、単離された抗体）またはその抗原結合部分であって、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＩＸａおよびＦＩＸチモーゲンの存在下で、ＦＩＸａに優先的に結合する、抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分」）を提供する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する。一実施形態では、結合親和性はＫ_Ｄとして表される。

本開示はまた、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸｚに対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合する、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、（例えば、１ｎＭ～１００ｎＭまたは０．１ｎＭ～１００ｎＭ）、約９５ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８５ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６５ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４５ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３５ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、または約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸａに結合する。他の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、または約０．０５ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸａに結合する。さらに他の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～９０ｎＭ、１ｎＭ～８０ｎＭ、１ｎＭ～７０ｎＭ、１ｎＭ～６０ｎＭ、１ｎＭ～５０ｎＭ、１ｎＭ～４０ｎＭ、１ｎＭ～３０ｎＭ、１ｎＭ～２０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．１ｎＭ～９０ｎＭ、０．１ｎＭ～８０ｎＭ、０．１ｎＭ～７０ｎＭ、０．１ｎＭ～６０ｎＭ、０．１ｎＭ～５０ｎＭ、０．１ｎＭ～４０ｎＭ、０．１ｎＭ～３０ｎＭ、０．１ｎＭ～２０ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭまたは０．１ｎＭ～１ｎＭのＫ_Ｄで、ＦＩＸａに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ、３Ｂおよび／または３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ、３Ｂおよび／または３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、参照抗体は、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－４６０、ＢＩＩＢ－９－４３３およびそれらの任意の組合せから選択される。

さらなる態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、以下の３つのクラスにさらに分類することができる：
クラスＩ：遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸｚよりもＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分（図３Ａの抗体）；
クラスＩＩ：ＦＩＸａ－ＳＭまたはＦＩＸｚよりも遊離ＦＩＸａに優先的に結合する、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分（図３Ｂの抗体）；および
クラスＩＩＩ：ほぼ等価に遊離ＦＩＸａおよびＦＩＸａ－ＳＭに結合するが、ＦＩＸｚに顕著なほどに結合しない、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分（図３Ｃの抗体）。

一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。他の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ａ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。他の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。他の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、
（ｉ）図３Ａ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

他の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、
（ｉ）図３Ｂ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、
（ｉ）図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。他の態様では、アミノ酸置換は復帰変異である。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、ＡＲＤＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６ＹＹＸ_７ＭＤＶ（配列番号７５３）を含み、Ｘ_１は、ＶまたはＧであり、Ｘ_２は、ＧまたはＶであり、Ｘ_３は、ＧまたはＲであり、Ｘ_４は、ＹまたはＶであり、Ｘ_５は、ＡまたはＳであり、Ｘ_６は、ＧまたはＤであり、Ｘ_７は、Ｇであるかまたは存在しない。

当業者は、位置が、コンセンサス配列において、「ない」または「存在しない」として記載される場合、このような存在のないことは、ポリペプチド鎖に切断があることを示すわけではないことを理解している。これらの用語は、単に、多重配列アライメントにおいて観察されるアミノ酸鎖中の挿入および欠失の発生を反映しているに過ぎない。したがって、２つの配列であって、このうちの１つがアミノ酸挿入を含有する、２つの配列が整列されて、コンセンサス配列が生成される場合、挿入のない配列は、その位置において、「存在しない」（「なし」）アミノ酸を有すると予想される。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、ＡＲＤＶＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号９０５；ＢＩＩＢ－９－４８４；ＢＩＩＢ－９－１３３５；およびＢＩＩＢ－９－１３３６の場合、ＶＨＣＤＲ３）、ＡＲＤＩＳＴＤＧＥＳＳＬＹＹＹＭＤＶ（配列番号９０１；ＢＩＩＢ－９－４６０）、ＡＲＧＰＴＤＳＳＧＹＬＤＭＤＶ（配列番号１１８６；ＢＩＩＢ－９－８８２）、ＡＲＳＰＲＨＫＶＲＧＰＮＷＦＤＰ（配列番号８９９；ＢＩＩＢ－９－４４０）またはＡＲＤＧＰＲＶＳＤＹＹＭＤＶ（配列番号９１２；ＢＩＩＢ－９－６１９）から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、本明細書に開示されるＶＨＣＤＲ３配列は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を含むことができる。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ａ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｃ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ａ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｃ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ａ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ａ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｂ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図３Ａ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ａ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図３Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｂ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図３Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｃ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＩＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、図３Ａ中の抗体：ＢＩＩＢ－９－６０５、ＢＩＩＢ－９－４７５、ＢＩＩＢ－９－４７７、ＢＩＩＢ－９－４７９、ＢＩＩＢ－９－４８０、ＢＩＩＢ－９－５５８、ＢＩＩＢ－９－４１４、ＢＩＩＢ－９－４１５、ＢＩＩＢ－９－４２５、ＢＩＩＢ－９－４４０、ＢＩＩＢ－９－４５２、ＢＩＩＢ－９－４６０、ＢＩＩＢ－９－４６１、ＢＩＩＢ－９－４６５、ＢＩＩＢ－９－５６４、ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－４６９、ＢＩＩＢ－９－５６６、ＢＩＩＢ－９－５６７、ＢＩＩＢ－９－５６９、ＢＩＩＢ－９－５８８、ＢＩＩ
Ｂ－９－６１１、ＢＩＩＢ－９－６１９、ＢＩＩＢ－９－６２６、ＢＩＩＢ－９－８８３、ＢＩＩＢ－９－４１９、ＢＩＩＢ－９－４５１、ＢＩＩＢ－９－４７３、ＢＩＩＢ－９－５６５、ＢＩＩＢ－９－５７３、ＢＩＩＢ－９－５７９、ＢＩＩＢ－９－５８１、ＢＩＩＢ－９－５８２、ＢＩＩＢ－９－５８５、ＢＩＩＢ－９－５８７、ＢＩＩＢ－９－５９０、ＢＩＩＢ－９－５９２、ＢＩＩＢ－９－６０６、ＢＩＩＢ－９－６０８ＢＩＩＢ－９－６１６、ＢＩＩＢ－９－６２１、ＢＩＩＢ－９－６２２、ＢＩＩＢ－９－６２７、ＢＩＩＢ－９－１３３５、およびＢＩＩＢ－９－１３３６からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、本開示は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＩＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、図３Ｂ中の抗体：ＢＩＩＢ－９－４０８、ＢＩＩＢ－９－４１６、ＢＩＩＢ－９－６２９またはＢＩＩＢ－９－８８５からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

他の実施形態では、本開示は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＩＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、図３Ｃ中の抗体：ＢＩＩＢ－９－６０７、ＢＩＩＢ－９－４７１、ＢＩＩＢ－９－４７２、ＢＩＩＢ－９－４３９、ＢＩＩＢ－９－４４６、ＢＩＩＢ－９－５６８、ＢＩＩＢ－９－６１５、ＢＩＩＢ－９－６２８、ＢＩＩＢ－９－８８２、ＢＩＩＢ－９－８８４、ＢＩＩＢ－９－８８６、ＢＩＩＢ－９－８８７、ＢＩＩＢ－９－８８８、ＢＩＩＢ－９－８８９、ＢＩＩＢ－９－４３３、ＢＩＩＢ－９－４４５、ＢＩＩＢ－９－４７０、ＢＩＩＢ－９－６２５、ＢＩＩＢ－９－１２６４、ＢＩＩＢ－９－１２６５、ＢＩＩＢ－９－１２６６、ＢＩＩＢ－９－１２６７、ＢＩＩＢ－９－１２６８、ＢＩＩＢ－９－１２６９、ＢＩＩＢ－９－１２７０、ＢＩＩＢ－９－１２７１、ＢＩＩＢ－９－１２７２、ＢＩＩＢ－９－１２７３、ＢＩＩＢ－９－１２７４、ＢＩＩＢ－９－１２７５、ＢＩＩＢ－９－１２７６、ＢＩＩＢ－９－１２７７、ＢＩＩＢ－９－１２７８、ＢＩＩＢ－９－１２７９、ＢＩＩＢ－９－１２８０、ＢＩＩＢ－９－１２８１、ＢＩＩＢ－９－１２８２、ＢＩＩＢ－９－１２８３、ＢＩＩＢ－９－１２８４、ＢＩＩＢ－９－１２８５、ＢＩＩＢ－９－１２８６、およびＢＩＩＢ－９－１２８７からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８００～８４４、配列番号８４５～８８９および配列番号８９０～９３４を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（クラスＩ抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９３５～９７９、配列番号９８０～１０２４および配列番号１０２５～１０６９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（クラスＩ抗体のＶＬＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１０７０～１０７３、配列番号１０７４～１０７７および配列番号１０７８～１０８１を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（クラスＩＩ抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１０８２～１０８５、配列番号１０８６
～１０８９および配列番号１０９０～１０９３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（クラスＩＩ抗体のＶＬＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１０９４～１１３５、配列番号１１３６～１１７７および配列番号１１７８～１２１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（クラスＩＩＩ抗体のＶＨ
ＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２２０～１２６１、配列番号１２６２～１３０３および配列番号１３０４～１３４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（クラスＩＩＩ抗体のＶＬＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８１５、配列番号８６０および配列番号９０５を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（ＢＩＩＢ－９－４８４抗体のＶＬＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８４３、配列番号８８８および配列番号９３３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（ＢＩＩＢ－９－１３３５抗体のＶＬＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８４４、配列番号８８９および配列番号９３４を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む（ＢＩＩＢ－９－１３３６抗体のＶＬＣＤＲ）。

他の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、抗体ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６と交差競合する、および／または抗体ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６と同じエピトープに結合する。ある種の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、ＡＲＤＶＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号９０５、ＢＩＩＢ－９－４８４ＶＨＣＤＲ３）を含み、ＶＨＣＤＲ２は、ＳＩＳＳＸ_１Ｘ_２ＳＹＩＹＹＡＸ_３ＳＶＫＧ（配列番号７５４）を含み、Ｘ_１は、Ｓ、Ｇまたは任意の保存的置換を含み、Ｘ_２は、Ｓ、Ｅまたは任意の保存性置換を含み、Ｘ_３は、Ｄ、Ｅまたは任意の保存性置換を含み、ＶＨＣＤＲ１は、ＦＴＦＸ_４ＳＹＸ_５ＭＸ_６（配列番号７５５）を含み、Ｘ_４は、Ｓ、Ｇまたは任意の保存性置換を含み、Ｘ_５は、Ｄ、Ｓまたは任意の保存性置換を含み、Ｘ_６は、Ｈ、Ｎまたは任意の保存性置換を含む。抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１の場合、配列番号８１５、ＶＨＣＤＲ２の場合、配列番号８６０、およびＶＨＣＤＲ３の場合、配列番号９０５を含むことができる（ＢＩＩＢ－９－４８４ＶＨＣＤＲ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ１）それぞれ、配列番号８０９、配列番号８５４および配列番号８９９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４４０抗体の
ＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４４、配列番号９８９および配列番号１０３４を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４４０抗体のＶＬＣＤＲ）；
（ａ２）それぞれ、配列番号１１０２、配列番号１１４４および配列番号１１８６を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－８８２抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２２８、配列番号１２７０および配列番号１３１２を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－８８２抗体のＶＬＣＤＲ）；
（ａ３）それぞれ、配列番号８１１、配列番号８５６および配列番号９０１を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４６０抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９４６、配列番号９９１および配列番号１０３６を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４６０抗体のＶＬＣＤＲ）；または
（ａ４）それぞれ、配列番号１１０８、配列番号１１５０および配列番号１１９２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４３３抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１２３４、配列番号１２７６および配列番号１３１８を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４３３抗体のＶＬＣＤＲ）；
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号８２２、配列番号８６７および配列番号９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５７、配列番号１００２および配列番号１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、
（ｉ）それぞれ、配列番号８４３、配列番号８８８および配列番号９３３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５抗体のＶＬＣＤＲ）；または
（ｉｉ）それぞれ、配列番号８４４、配列番号８８９および配列番号９３４を含む、ＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号９５０、配列番号９９５および配列番号１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６抗体のＶＬＣＤＲ）
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分はＶＨを含み、ＶＨは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１（クラスＩ抗体の場合、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２
５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、および８９；クラスＩＩ抗体の場合、配列番号９１、９３、９５および９７；ならびにクラスＩＩＩ抗体の場合、配列番号９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１）からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分はＶＬを含み、ＶＬは、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７（クラスＩ抗体の場合、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、および２７５；クラスＩＩ抗体の場合、配列番号２７７、２７９、２８１および２８３；クラスＩＩＩ抗体の場合、配列番号２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７）からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ｉ）ＶＨは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１（クラスＩ抗体の場合、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、
７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、および８９；クラスＩＩ抗体の場合、配列番号９１、９３、９５および９７；ならびにクラスＩＩＩ抗体の場合、配列番号９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、および１８１）からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７（クラスＩ抗体の場合、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、および２７５；クラスＩＩ抗体の場合、配列番号２７７、２７９、２８１および２８３；クラスＩＩＩ抗体の場合、配列番号２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、および３６７）からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

ある種の態様では、抗ＦＩＸａ抗体は、特定の生殖系重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域、および／または特定の生殖系軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体のＶＨ配列は、Ｖ、ＤまたはＪ生殖系配列のいずれか１つに由来することができ、かつ／または抗ＦＩＸａ抗体のＶＬ配列は、カッパまたはラムダ生殖系配列のいずれか１つに由来することができる。

本明細書において実証される通り、ヒト生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、ＦＩＸａに特異的なヒト抗体が製造される。したがって、ＶＨ１－１８、ＶＨ１－４６、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－３１、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－０Ｂ、ＶＨ５－５１およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ヒトＶＨ生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、単離されたＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、本明細書において提供される。特定の実施形態では、ＶＨ生殖系遺伝子は、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．
５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４、ＶＨ５－５１．１、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

他の態様では、ＶＫ１－０５、ＶＫ１－１２、ＶＫ１－３９、ＶＫ２－２８、ＶＫ３－１１、ＶＫ３－１５、ＶＫ３－２０、ＶＫ４－０１およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ヒトＶＬ生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、単離されたＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、本明細書において提供される。特定の実施形態では、ＶＬ生殖系遺伝子は、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

本明細書に記載される抗体は、図に示されている通り、上で列挙したヒト生殖系ＶＨ遺伝子のうちの１つの産生物であるか、またはそれに由来する重鎖可変領域を含むもの、および上で列挙したヒト生殖系ＶＫ遺伝子のうちの１つの産生物であるか、またはそれに由来する軽鎖可変領域をやはり含むものを含む。

本明細書で使用する場合、ヒト抗体は、抗体の可変領域が、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られる場合、特定の生殖系配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」重鎖および軽鎖可変領域を含む。このような系は、目的の抗原を有するヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを免役する工程、または目的の抗原を有するファージ上で示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングする工程を含む。ヒト生殖系免疫グロブリン配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列とヒト生殖系免疫グロブリンのアミノ酸配列とを比較して、ヒト抗体の配列に配列が最も近い（すなわち、最大の同一％）ヒト生殖系免疫グロブリン配列を選択するなどによって、特定することができる。ヒト生殖系免疫グロブリン配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」ヒト抗体は、例えば、天然の体細胞変異または部位指向性変異の意図的導入により、生殖系配列と比べたアミノ酸の差異を含有することができる。しかし、選択されたヒト抗体は、通常、アミノ酸配列が、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、他の種（例えば、マウス生殖系配列）の生殖系免疫グロブリンアミノ酸配列に比べると、ヒト抗体をヒトと特定するアミノ酸残基を含有する。ある種の場合、ヒト抗体は、アミノ酸配列が、生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一とすることができるか、または少なくとも９６％、９７％、９８％もしくは９９％をも同一とすることができる。通常、特定のヒト生殖系配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と１０以下のアミノ酸しか差異を示さないであろう。ある種の場合、ヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と５以下のアミノ酸しか差異を示すことができず、または４、３、２もしくは１以下のアミノ酸しか差異が示さないことさえあり得る。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ１）ＶＨは、配列番号３１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２２１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも
９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４８４のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ２）ＶＨは、配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４４０のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ３）ＶＨは、配列番号１１５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３０１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－８８２のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ４）ＶＨは、配列番号２３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２１３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４６０のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ５）ＶＨは、配列番号１２７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３１３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－４３３のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ６）ＶＨは、配列番号４５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２３５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－６１９のＶＨおよびＶＬ）；
（ａ７）ＶＨは、配列番号８７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２２１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－１３３５のＶＨおよびＶＬ）；または（ａ８）ＶＨは、配列番号８９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２２１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＶＨおよびＶＬ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－９－１３３６と同じエピトープに結合する。他の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－９－１３３６のエピトープに重なるエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによる位置９１および１０１、１２５および１２８、１６５お
よび１７９、または２３２および２４１（配列番号７５８では、それぞれ、位置７６～８８、１１２～１１５、１５３～１６７および２２２～２３１に対応する）の間に位置する、少なくとも１つのアミノ酸を含む、エピトープ領域に結合する。

本明細書で使用する場合、言い回し「キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基」およびその文法上の変化形とは、セリンプロテアーゼキモトリプシノーゲンへの相同性によってＦＩＸ中のある種のアミノ酸の説明を指す。本開示では、セリンプロテアーゼドメイン内のキモトリプシノーゲン番号付けは、Ｈｏｐｆｎｅｒら（ＥＭＢＯＪ．１９９７年；１６巻：６６２６～３５頁）に従って使用した。本開示の場合、キモトリプシノーゲン番号付けは、本明細書において明示的に示されている場合しか使用されない。開示されているキモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基とアミノ酸の位置との間の一致は、配列番号７５８であり、以下の表に提示されている：

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ
１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）のうちの少なくとも１つを含むエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）からなる群から選択される、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１，１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）を含むエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）からなるエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列中にキモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ９３、Ｒ１６５、Ｎ１７８およびＲ２３３（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｎ７８、Ｒ１５３、Ｎ１６６およびＲ２２３に対応する）を含むエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列中にキモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｎ８７、Ｋ１２１、Ｙ１２６、Ｒ１５８、Ｔ１６０、Ｆ１６２、Ｔ１６３、Ｈ１７４、Ｅ１９２およびＧ１９５に対応する）のうちの少なくとも１つを含まない、エピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列中にキモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｎ１００、Ｋ１３２、Ｙ１３７、Ｒ１７０、Ｔ１７２、Ｆ１７４、Ｔ１７５、Ｈ１８５、Ｅ２０２およびＧ２０５（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｎ８７、Ｋ１２１、Ｙ１２６、Ｒ１５８、Ｔ１６０、Ｆ１６２、Ｔ１６３、Ｈ１７４、Ｅ１９２およびＧ１９５に対応する）を含まない、エピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの軽鎖中の少なくとも１つのアミノ酸残基（配列番号７５６）を含むエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が結合するＦＩＸａ（配列番号７５６）の軽鎖中のエピトープは、Ｋ１００である。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）およびＦＩＸａの軽鎖の配列のアミノ酸残基Ｋ１００（配列番号７５６）を含むエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａの重鎖の配列における、キモトリプシノーゲン番号付けによるアミノ酸残基Ｈ９１、Ｈ９２、Ｎ９３、Ｈ１０１、Ｄ１２５、Ｋ１２６、Ｅ１２７、Ｙ１２８、Ｒ１６５、Ｙ１７７、Ｎ１７８、Ｎ１７９、Ｓ２３２、Ｒ２３３、Ｙ２３４、Ｖ２３５、Ｎ２３６、Ｗ２３７、Ｅ２４０およびＫ２４１（配列番号７５８において、それぞれ、位置Ｈ７６、Ｈ７７、Ｎ７８、Ｈ８８、Ｄ１１２、Ｋ１１３、Ｅ１１４、Ｙ１１５、Ｒ１５３、Ｙ１６５、Ｎ１６６、Ｎ１６７、Ｓ２２２、Ｒ２２３、Ｙ２２４、Ｖ２２５、Ｎ２２６、Ｗ２２７、Ｅ２３０およびＫ２３１に対応する）およびＦＩＸａの軽鎖の配列のアミノ酸残基Ｋ１００（配列番号７５６）からなるエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａに対するＦＶＩＩＩａの結合部位と重なるエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａへの結合について、ＦＶＩＩＩａと交差競合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａに対するＦＶＩＩＩａの結合を遮断する。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、表７中に開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ１配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、表７中に開示されているＶＨＣＤＲ２配列、または１つもしくは２つの変異を有する表７に開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ２配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、表７中に開示されているＶＨＣＤＲ３配列、または１つもしくは２つの変異を有する表７に開示されているＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、表７中に開示されているＶＬＣＤＲ１配列、または１つもしくは２つの変異を有する表７に
開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ１配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、表７中に開示されているＶＬＣＤＲ２配列、または１つもしくは２つの変異を有する表７に開示されているＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ２配列を含む。

一部の態様では、ＦＩＸａに特異的に結合する抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、表７中に開示されているＶＬＣＤＲ３配列、または１つもしくは２つの変異を有する表７に開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＬＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、それぞれ、表７に開示されている、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号２１９４）を含み、Ｘ_１は、Ｓ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＹまたはＦであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＤであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｖ、ＡまたはＴである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_５ＩＳＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１９５）を含み、Ｘ_５は、Ｓ、Ａ、ＹまたはＧであり、Ｘ_６は、ＳまたはＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、ＡまたはＧであり、Ｘ_８は、Ｓ、ＧまたはＤであり、Ｘ_９は、Ｓ、ＴまたはＧであり、Ｘ_１０は、ＹまたはＴである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＸ_１１ＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号２１９６）を含み、Ｘ_１１は、ＬまたはＶである。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＡＮＹＬＮ（配列番号２１１６）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号２１４２）を含み；および／または
（ｉｉｉ）ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＹＡＮＦＰＹＴ（配列番号２１６８）を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＭＸ_４（配列番号２１９４）を含み、Ｘ_１は、Ｓ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＹまたはＦであり、Ｘ_３は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＤであり、Ｘ_４は、Ｎ、Ｖ、ＡまたはＴである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_５ＩＳＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１９５）を含み、Ｘ_５は、Ｓ、Ａ、ＹまたはＧであり、Ｘ_６は、ＳまたはＡであり、Ｘ_７は、Ｓ、ＡまたはＧであり、Ｘ_８は、Ｓ、ＧまたはＤであり、Ｘ_９
は、Ｓ、ＴまたはＧであり、Ｘ_１０は、ＹまたはＴである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＸ_１１ＧＧＹＡＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号２１９６）を含み、Ｘ_１１は、ＬまたはＶである；および
単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＡＳＱＤＩＡＮＹＬＮ（配列番号２１１６）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号２１４２）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＹＡＮＦＰＹＴ（配列番号２１６８）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０３８～２０４７から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０６４～２０７３から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２０９０～２０９９から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／または配列番号２１１６～２１２５から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１４２～２１５１から選択されるＶＬＣＤＲ２、および配列番号２１６８～２１７７から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＧＳＹＤＭＮ（配列番号２０４８）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＳＹＩＸ_４ＹＡＸ_５ＳＶＫＧ（配列番号２１９７）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＤであり、Ｘ_２は、ＧまたはＳであり、Ｘ_３は、ＥまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、ＥまたはＤである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_６ＲＤＶＸ_７ＧＹＡＧＸ_８ＹＧＭＤＶ（配列番号２１９８）を含み、Ｘ_６は、ＡまたはＶであり、Ｘ_７は、ＧまたはＳであり、Ｘ_８は、ＹまたはＦである。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｘ_１ＡＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＩＸ_５Ｘ_６ＹＬＮ（配列番号２１９９）を含み、Ｘ_１は、Ｑ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＳまたはＮであり、Ｘ_３は、ＱまたはＥであり、Ｘ_４は、ＤまたはＹであり、Ｘ_５は、ＡまたはＳであり、Ｘ_６は、ＮまたはＤである；および／または
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＸ_７ＮＬＸ_８Ｘ_９（配列番号２２００）であり、Ｘ_７は、ＳまたはＡであり、Ｘ_８は、Ｅ、ＨまたはＱであり、Ｘ_９は、ＴまたはＹである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_１０ＱＹＡＸ_１１ＦＰＹＴ（配列番号２２０１）を含み、Ｘ_１０は、ＱまたはＳであり、Ｘ_１１は、ＮまたはＲである。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＦＴＦＧＳＹＤＭＮ（配列番号２０４８）を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＳＹＩＸ_４ＹＡＸ_５ＳＶＫＧ（配列番号２１９７）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＤであり、Ｘ_２は、ＧまたはＳであり、Ｘ_３は、ＥまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、ＥまたはＤである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_６ＲＤＶＸ_７ＧＹＡＧＸ_８ＹＧＭＤＶ（
配列番号２１９８）を含み、Ｘ_６は、ＡまたはＶであり、Ｘ_７は、ＧまたはＳであり、Ｘ_８は、ＹまたはＦである；および、
単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をさらに含み、
（ｉｖ）ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｘ_１ＡＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＩＸ_５Ｘ_６ＹＬＮ（配列番号２１９９）を含み、Ｘ_１は、Ｑ、ＧまたはＥであり、Ｘ_２は、ＳまたはＮであり、Ｘ_３は、ＱまたはＥであり、Ｘ_４は、ＤまたはＹであり、Ｘ_５は、ＡまたはＳであり、Ｘ_６は、ＮまたはＤである；および／または
（ｖ）ＶＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＤＡＸ_７ＮＬＸ_８Ｘ_９（配列番号２２００）であり、Ｘ_７は、ＳまたはＡであり、Ｘ_８は、Ｅ、ＨまたはＱであり、Ｘ_９は、ＴまたはＹである；および／または
（ｖｉ）ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ_１０ＱＹＡＸ_１１ＦＰＹＴ（配列番号２２０１）を含み、Ｘ_１０は、ＱまたはＳであり、Ｘ_１１は、ＮまたはＲである。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０４８～２０５２から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０７４～２０７８から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１００～２１０４から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／または配列番号２１２６～２１３０から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１５２～２１５６から選択されるＶＬＣＤＲ２および配列番号２１７８～２１８２から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＹＴＦＸ_１Ｘ_２ＹＸ_３ＭＨ（配列番号２２０２）を含み、Ｘ_１は、ＴまたはＨであり、Ｘ_２は、Ｓ、ＧまたはＨであり、Ｘ_３は、ＹまたはＰである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_４ＩＮＰＳＸ_５ＧＸ_６ＴＸ_７ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２０３）を含み、Ｘ_４は、ＩまたはＳであり、Ｘ_５は、ＧまたはＲであり、Ｘ_６は、ＳまたはＲであり、Ｘ_７は、ＳまたはＥである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＧＰＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＤＹＹＭＤＶ（配列番号２２０４）を含み、Ｘ_８は、ＲまたはＱであり、Ｘ_９は、Ｖ、Ｄ、ＬまたはＥであり、Ｘ_１０は、ＳまたはＶである。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号２１１６）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２１１６）を含み；および／または（ｉｉｉ）ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＤＮＷＰＦＴ（配列番号２１１６）を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＹＴＦＸ_１Ｘ_２ＹＸ_３ＭＨ（配列番号２２０２）を含み、Ｘ_１は、ＴまたはＨであり、Ｘ_２は、Ｓ、ＧまたはＨであり、Ｘ_３は、ＹまたはＰである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_４ＩＮＰＳＸ_５ＧＸ_６ＴＸ_７ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２０３）を含み、Ｘ_４は、ＩまたはＳであり、Ｘ_５は、ＧまたはＲであり、Ｘ_６は、ＳまたはＲであり、Ｘ_７は、ＳまたはＥである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＧＰＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０ＤＹＹＭＤＶ（配列番号２２０４）を含み、Ｘ_８は、ＲまたはＱであり、Ｘ_９は、Ｖ、Ｄ、ＬまたはＥで
あり、Ｘ_１０は、ＳまたはＶである；および、
単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号２１１６）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２１１６）を含み；および／または（ｉｉｉ）ＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＤＮＷＰＦＴ（配列番号２１１６）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０５３～２０５７から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０７９～２０８３から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１０５～２１０９から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／または配列番号２１３１～２１３５から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１５７～２１６１から選択されるＶＬＣＤＲ２および配列番号２１８３～２１８７から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＹＸ_４ＷＸ_５（配列番号２２０５）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＡであり、Ｘ_２は、Ｓ、Ｔ、ＧまたはＶであり、Ｘ_３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、Ｇ、Ｖ、ＮまたはＳである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_６ＩＸ_７Ｘ_８Ｘ_９ＧＸ_１０ＴＸ_１１ＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２２０６）を含み、Ｘ_６は、ＳまたはＹであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｙ、Ｒ、ＴまたはＱであり、Ｘ_８は、Ｙ、Ｇ、ＰまたはＡであり、Ｘ_９は、ＳまたはＱであり、Ｘ_１０は、ＳまたはＫであり、Ｘ_１１は、ＹまたはＱである；および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＸ_１２ＤＩ（配列番号２２０７）を含み、Ｘ_１２は、ＦまたはＶである。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＤＳＷＬＡ（配列番号２１３６）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２１６２）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＡＮＦＬＰＦＴ（配列番号２１８８）を含む。

一部の態様では、単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＳＩＸ_１ＳＸ_２Ｘ_３ＹＸ_４ＷＸ_５（配列番号２２０５）を含み、Ｘ_１は、ＳまたはＡであり、Ｘ_２は、Ｓ、Ｔ、ＧまたはＶであり、Ｘ_３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＹまたはＡであり、Ｘ_５は、Ｇ、Ｖ、ＮまたはＳである；および／または
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_６ＩＸ_７Ｘ_８Ｘ_９ＧＸ_１０ＴＸ_１１ＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２２０６）を含み、Ｘ_６は、ＳまたはＹであり、Ｘ_７は、Ｓ、Ｙ、Ｒ、ＴまたはＱであり、Ｘ_８は、Ｙ、Ｇ、ＰまたはＡであり、Ｘ_９は、ＳまたはＱであり、Ｘ_１０は、ＳまたはＫであり、Ｘ_１１は、ＹまたはＱである、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＸ_１２ＤＩ（配列番号２２０７）を含み、Ｘ_１２は、ＦまたはＶである；および
単離された抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＤＳＷＬＡ（配列番号２１３６）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２１６２）を含み；および／またはＶＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＡＮ
ＦＬＰＦＴ（配列番号２１８８）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０５８～２０６３から選択されるＶＨＣＤＲ１、配列番号２０８４～２０８９から選択されるＶＨＣＤＲ２および配列番号２１１０～２１１５から選択されるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびに／または配列番号２１３６～２１４１から選択されるＶＬＣＤＲ１、配列番号２１６２～２１６７から選択されるＶＬＣＤＲ２および配列番号２１８８～２１９３から選択されるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１９３５、１９３９、１９４３、１９４７、１９５１、１９５５、１９５９、１９６３、１９６７、１９７１、１９７５、１９７９、１９８３、１９８７、１９９１、１９９５、１９９９、２００３、２００７、２０１１、２０１５、２０１９、２０２３、２０２７、２０３１および２０３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号１９３７、１９４１、１９４５、１９４９、１９５３、１９５７、１９６１、１９６５、１９６９、１９７３、１９７７、１９８１、１９８５、１９８９、１９９３、１９９７、２００１、２００５、２００９、２０１３、２０１７、２０２１、２０２５、２０２９、２０３３および２０３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ｉ）ＶＨは、配列番号１９３５、１９３９、１９４３、１９４７、１９５１、１９５５、１９５９、１９６３、１９６７、１９７１、１９７５、１９７９、１９８３、１９８７、１９９１、１９９５、１９９９、２００３、２００７、２０１１、２０１５、２０１９、２０２３、２０２７、２０３１および２０３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；および／または
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１９３７、１９４１、１９４５、１９４９、１９５３、１９５７、１９６１、１９６５、１９６９、１９７３、１９７７、１９８１、１９８５、１９８９、１９９３、１９９７、２００１、２００５、２００９、２０１３、２０１７、２０２１、２０２５、２０２９、２０３３および２０３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号８９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２２１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ
酸配列を含む（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＶＨおよびＶＬ）。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ａ１）ＶＨは、配列番号１９３５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９３７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２）ＶＨは、配列番号１９３９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９４１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ３）ＶＨは、配列番号１９４３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９４５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ４）ＶＨは、配列番号１９４７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９４９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ５）ＶＨは、配列番号１９５１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９５３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ６）ＶＨは、配列番号１９５５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９５７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ７）ＶＨは、配列番号１９５９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９６１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ８）ＶＨは、配列番号１９６３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９６５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００
％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ９）ＶＨは、配列番号１９６７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９６９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１０）ＶＨは、配列番号１９７１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９７３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１１）ＶＨは、配列番号１９７５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９７７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１２）ＶＨは、配列番号１９７９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９８１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１３）ＶＨは、配列番号１９８３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９８５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１４）ＶＨは、配列番号１９８７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９８９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１５）ＶＨは、配列番号１９９１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９９３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１６）ＶＨは、配列番号１９９５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１９９７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１７）ＶＨは、配列番号１９９９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なく
とも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２００１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１８）ＶＨは、配列番号２００３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２００５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ１９）ＶＨは、配列番号２００７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２００９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２０）ＶＨは、配列番号２０１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０１３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２１）ＶＨは、配列番号２０１５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０１７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２２）ＶＨは、配列番号２０１９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０２１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２３）ＶＨは、配列番号２０２３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０２５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２４）ＶＨは、配列番号２０２７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０２９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；
（ａ２５）ＶＨは、配列番号２０３１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２
０３３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み；または
（ａ２６）ＶＨは、配列番号２０３５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０３７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、（ａ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３５および１９３７（ＢＩＩＢ－９－３５９５）を含み；
（ａ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９３９および１９４１（ＢＩＩＢ－９－３６０１）を含み；
（ａ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４３および１９４５（ＢＩＩＢ－９－３６０４）を含み；
（ａ４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９４７および１９４９（ＢＩＩＢ－９－３６１７）を含み；
（ａ５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５１および１９５３（ＢＩＩＢ－９－３６１８）を含み；
（ａ６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５５および１９５７（ＢＩＩＢ－９－３６２１）を含み；
（ａ７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９５９および１９６１（ＢＩＩＢ－９－３６４７）を含み；
（ａ８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９６３および１９６５（ＢＩＩＢ－９－３６４９）を含み；
（ａ９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９６７および１９６９（ＢＩＩＢ－９－３６５０）を含み；
（ａ１０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７１および１９７３（ＢＩＩＢ－９－３６５４）を含み；
（ａ１１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７５および１９７７（ＢＩＩＢ－９－３７５３）を含み；
（ａ１２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９７９および１９８１（ＢＩＩＢ－９－３７５４）を含み；
（ａ１３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８３および１９８５（ＢＩＩＢ－９－３７５６）を含み；
（ａ１４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９８７および１９８９（ＢＩＩＢ－９－３７６４）を含み；
（ａ１５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９１および１９９３（ＢＩＩＢ－９－３７６６）を含み；
（ａ１６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９５および１９９７（ＢＩＩＢ－９－３７０７）を含み；
（ａ１７）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号１９９９および２００１（ＢＩＩＢ－９－３７０９）を含み；
（ａ１８）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００３および２００５（ＢＩＩＢ－９－３７２０）を含み；
（ａ１９）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２００７および２００９（ＢＩＩＢ－９－３７２７）を含み；
（ａ２０）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１１および２０１３（ＢＩＩＢ－
９－３７４５）を含み；
（ａ２１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１５および２０１７（ＢＩＩＢ－９－３７８０）を含み；
（ａ２２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０１９および２０２１（ＢＩＩＢ－９－３６７５）を含み；
（ａ２３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２３および２０２５（ＢＩＩＢ－９－３６８１）を含み；
（ａ２４）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０２７および２０２９（ＢＩＩＢ－９－３６８４）を含み；
（ａ２５）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３１および２０３３（ＢＩＩＢ－９－３６９８）を含み；または
（ａ２６）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号２０３５および２０３７（ＢＩＩＢ－９－３７０４）を含む。

一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体（例えば、ＢＩＩＢ－９－４８４）のＦＩＸａへの結合は、カルシウム依存性である。他の態様では、ＦＩＸａへの本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体の結合は、カルシウムに無関係である。さらに他の態様では、抗ＦＩＸａ抗体（例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６）のＦＩＸａへの結合は、部分的にカルシウム依存性である。

一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体、例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６は、ＦＩＸａのアミド分解活性を向上させることができる。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体（例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６またはＢＩＩＢ－９－１３３６を含む二重特異性抗体）は、ＦＩＸａによる基質切断（例えば、ＡＤＧ２９９）の速度を向上することができる。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体、例えばＢＩＩＢ－９－１３３６のＦＩＸａへの結合は、少なくとも２倍、少なくとも３倍または少なくとも４倍、ＦＩＸａのアミド分解活性を向上することができる。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体、例えばＢＩＩＢ－９－１３３６のＦＩＸａへの結合は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２０％、少なくとも１４０％、少なくとも１６０％、少なくとも１８０％、少なくとも２００％、少なくとも２２０％、少なくとも２４０％、少なくとも２６０％、少なくとも２８０％、少なくとも３００％、少なくとも３２０％、少なくとも３４０％、少なくとも３６０％、少なくとも３８０％、少なくとも４００％、少なくとも４２０％、少なくとも４４０％、少なくとも４６０％、少なくとも４８０％または少なくとも５００％、ＦＩＸａのアミド分解活性を向上することができる。

本開示は、ＦＩＸａのアミド分解活性を向上させる方法であって、それを必要とする対象に、ここで開示されている抗ＦＩＸａ抗体、例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６、またはＢＩＩＢ－９－１３３６を含む二重特異性抗体を投与する工程を含む方法を提供する。

一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体は、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）により、ＦＩＸａ阻害の速度を向上させることができる。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体（例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６、またはＢＩＩＢ－９－１３３６を含む二重特異性抗体）は、ＡＴＩＩＩによってＦＩＸａ阻害の速度を向上することができる。一部の態様では、ＡＴＩＩＩによるＦＩＸａ阻害の速度は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍、向上する。他の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体、例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＦＩＸａへの結合は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも
５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２０％、少なくとも１４０％、少なくとも１６０％、少なくとも１８０％、少なくとも２００％、少なくとも２２０％、少なくとも２４０％、少なくとも２６０％、少なくとも２８０％、少なくとも３００％、少なくとも３２０％、少なくとも３４０％、少なくとも３６０％、少なくとも３８０％、または少なくとも４００％、ＡＴＩＩＩによるＦＩＸａ阻害の速度を向上することができる。

本開示は、ＡＴＩＩＩによるＦＩＸａ阻害の速度を向上させる方法であって、それを必要とする対象に、ここで開示されている抗ＦＩＸａ抗体、例えば、ＢＩＩＢ－９－１３３６、またはＢＩＩＢ－９－１３３６を含む二重特異性抗体を投与する工程を含む方法を提供する。

（ｂ）抗ＦＩＸｚ結合性分子
したがって、本開示は、ＦＩＸチモーゲン（ＦＩＸｚ）に特異的に結合する抗体（例えば、単離された抗体）またはその抗原結合部分であって、ＦＩＸａおよびＦＩＸｚの存在下でＦＩＸｚに優先的に結合する、抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）を提供する。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＩＸａ（例えば、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭ）への抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分の結合親和性よりも高い結合親和性で、ＦＩＸｚに結合する。

本開示はまた、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸｚに結合する、単離された抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分を提供する。一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、約９５ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８５ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６５ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４５ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３５ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、または約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸｚに結合する。他の実施形態では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、または約０．０５ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＩＸｚに結合する。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図３Ｄ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、参照抗体はＢＩＩＢ－９－５７８である。

さらなる態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分はまた、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭ（図３Ｄの抗体）よりもＦＩＸｚに優先的に結合する、クラスＩＶ：抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分とも称される。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、
（ｉ）図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中のＶＨＣＤＲ３配列
からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、ＡＲＤＫＹＱＤＹＳＦＤＩ（配列番号１３５５；ＢＩＩＢ－９－５７８）から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、本明細書に開示されるＶＨＣＤＲ３配列は、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を含むことができる。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１３５５（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｄ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１３５５（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｄ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図３Ｄ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３をさらに含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図３Ｄ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図３Ｄ中で開示されているＶＬ
ＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＩＸｚに優先的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、図３Ｄ：ＢＩＩＢ－９－３９７、ＢＩＩＢ－９－５７８、ＢＩＩＢ－９－６３１およびＢＩＩＢ－９－６１２の抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨ
ＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３４６～１３４９、配列番号１３５０～１３５３および配列番号１３５４～１３５７を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（クラスＩＶ抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１３５８～１３６１、配列番号１３６２～１３６５および配列番号１３６６～１３６９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（クラスＩＶ抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３４７、配列番号１３５１および配列番号１３５５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－５７８抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１３５９、配列番号１３６３および配列番号１３６７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－５７８抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分はＶＨを含み、ＶＨは、配列番号１８３、１８５、１８７および１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分はＶＬを含み、ＶＬは、配列番号３６９、３７１、３７３および３７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｉ）ＶＨは、配列番号１８３、１８５、１８７および１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号３６９、３７１、３７３および３７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

ある種の実施形態では、抗ＦＩＸｚ抗体は、特定の生殖系重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域、および／または特定の生殖系軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨ配列は、Ｖ、ＤまたはＪ生殖系配列のいずれか１つに由来することができ、かつ／または抗ＦＩＸｚ抗体のＶＬ配列は、カッパまたはラムダ生殖系配列のいずれか１つに由来することができる。

本明細書において実証される通り、ヒト生殖系遺伝子の産生物である、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、ＦＩＸｚに特異的なヒト抗体が製造される。したがって、ＶＨ１－１８、ＶＨ１－４６、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－３１、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－０Ｂ、ＶＨ５－５１およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ヒトＶＨ生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、単離されたＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、本明細書において提供される。特定の実施形態では、ＶＨ生殖系遺伝子は、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４、ＶＨ５－５１．１およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

他の実施形態では、ＶＫ１－０５、ＶＫ１－１２、ＶＫ１－３９、ＶＫ２－２８、ＶＫ３－１１、ＶＫ３－１５、ＶＫ３－２０、ＶＫ４－０１およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ヒトＶＬ生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、単離されたＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が本明細書において提供される。特定の実施形態では、ＶＬ生殖系遺伝子は、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

一部の態様では、抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１８５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３７１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列（それぞれ、ＢＩＩＢ－９－５７８抗体のＶＨおよびＶＬ）を含む。

（ｃ）抗ＦＸｚ結合性分子
本開示はまた、ＦＸに特異的に結合する、抗ＦＸ結合性分子、例えば、抗ＦＸ抗体、またはそのＦＸ結合性断片を含む分子を提供する。本開示の一部の態様では、開示されている抗ＦＸ結合性分子、例えば、抗ＦＸ抗体、またはそのＦＸ結合性断片を含む分子は、ＦＸチモーゲン（ＦＸｚ）（本開示全体を通して、「抗ＦＸｚ抗体」と称される）に優先的に結合する。

第Ｘ因子は、肝臓細胞からチモーゲンとして血漿に分泌される、５８．５ｋＤａの分子量を有するビタミンＫ依存性グリコタンパク質である。最初に、第Ｘ因子は、合計が４８
８のアミノ酸にあるシグナルペプチドを含むプレプロペプチドとして製造される。ＦＸチモーゲン（ＦＸｚ）のアミノ酸配列は、以下に提示されている（シグナル配列（１～２３）は、下線が引かれており、プロペプチド（２４～４０）は、太字で記載されている）：

シグナルペプチドは、小胞体への輸送中にシグナルペプチダーゼによって切断される。プロペプチド配列は、成熟Ｎ末端鎖のＮ末端部の第１の１１グルタミン酸残基においてガンマカルボキシル化が起こった後に切断される。さらなるプロセッシング工程が、Ａｒｇ１８２とＳｅｒ１８３との間の切断によって起こる。このプロセッシングステップはまた、同時に、トリペプチドＡｒｇ１８０－Ｌｙｓ１８１－Ａｒｇ１８２の欠失に至る。生じた分泌された第Ｘ因子チモーゲンは、１３９のアミノ酸（Ｍ、１６，２００）のＮ末端軽鎖（すなわち、配列番号７６５のアミノ酸４１～１７９）および３０６アミノ酸（Ｍ、４２，０００）のＣ末端重鎖（すなわち、配列番号７６５のアミノ酸１８３～４８８）からなり、これらは、Ｃｙｓ１７２とＣｙｓ３４２との間のジスルフィド架橋により共有結合により連結されている。さらなる翻訳後プロセシング工程は、Ａｓｐ１０３のβ－ヒドロキシル化、ならびにＮ－およびＯ－型グリコシル化を含む。

ＦＸチモーゲンは、第ＩＸａ因子によってＡｒｇ２３４とＩｌｅ２３５との間のその重鎖（配列番号７６５に対応する）で切断され、その後、活性化ペプチドの放出後に活性化されるようになる。

用語「ＦＸチモーゲン」は、本明細書において、「ＦＸｚ」、「ＦＸ前駆体」、「未活性化ＦＸ」、「非活性化ＦＸ」または「非活性化ＦＸ前駆体」と互換的に使用することができる。一実施形態では、ＦＸチモーゲン（ＦＩＸｚ）は、非活性化ＦＸ前駆体であって、活性化ペプチド（例えば、配列番号７６５のアミノ酸１８３～２３４として表される５２のアミノ酸の活性化ペプチド）（成熟番号付け）が前駆体から切断されない、非活性化ＦＩＸ前駆体を含む。ＦＩＸチモーゲンは、任意の天然のまたは操作されたバリアントを含むことができる。ＦＸチモーゲンの非限定例は、配列番号７６５で示されている。別の実施形態では、ＦＸチモーゲンは、活性化不能型ＦＸ（ＦＸｎ）であり、これは、第ＦＩＸａ因子の存在下で、非活性となるよう操作されている。活性化不能型ＦＸの一例は、その活性化を阻止し、チモーゲン形態（ＦＸｚ）の第Ｘ因子を維持する１９４位（成熟番号付け）において、アルギニンにアラニン変異もたらすＦＸとすることができる。ＦＸチモーゲンは、シグナルペプチドおよび／またはプロペプチドを場合により含有することができる。

用語「活性化ＦＸ」は、「ＦＸａ」と本明細書において互換的に使用することができる。一実施形態では、活性化ＦＸは、野生型の天然ＦＸａ（本明細書において、「野生型ＦＸａ」とも称される）である。別の実施形態では、ＦＸａは、非天然ＦＸａ、例えばＦＸａ立体構造バリアントを含む。例えば、ＦＸａは、ＦＸａ－ＳＭとすることができ、これは、ＦＸａに結合した基質と類似の立体構造を有するよう設計されている。特定の実施形態では、ＦＸａ－ＳＭは、活性部位に共有結合している擬似基質を有する活性化ＦＸであ
る。

本開示は、ＦＸｚに特異的に結合する抗体（例えば、単離された抗体）またはその抗原結合部分であって、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよびＦＸａの存在下で、ＦＸｚに優先的に結合する、抗体またはその抗原結合部分を提供する。一実施形態では、ＦＸａは、擬似基質（すなわち、Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ＥＧＲ－ＣＭＫ））に共有結合しているＦＸａである。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する。本開示はまた、抗体またはその抗原結合部分のＦＸａへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸｚに結合する、単離された抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を提供する。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＬＩアッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、約９５ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８５ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６５ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４５ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３５ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、または約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸｚに結合する。

他の実施形態では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、または約０．０５ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸｚに結合する。さらに他の実施形態では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～９０ｎＭ、１ｎＭ～８０ｎＭ、１ｎＭ～７０ｎＭ、１ｎＭ～６０ｎＭ、１ｎＭ～５０ｎＭ、１ｎＭ～４０ｎＭ、１ｎＭ～３０ｎＭ、１ｎＭ～２０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．１ｎＭ～９０ｎＭ、０．１ｎＭ～８０ｎＭ、０．１ｎＭ～７０ｎＭ、０．１ｎＭ～６０ｎＭ、０．１ｎＭ～５０ｎＭ、０．１ｎＭ～４０ｎＭ、０．１ｎＭ～３０ｎＭ、０．１ｎＭ～２０ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭまたは０．１ｎＭ～１ｎＭのＫ_Ｄで、ＦＸｚに結合する。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－１２－９３２、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示される任意の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分の抗原結合部分と実質的に同じ抗原結合部位（例えば、エピトープ）に結合する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示される抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分の抗原結合部位（例えば、エピトープ）と重なる抗原結合部位（例えば、エピトープ）に結合する。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨ
ＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換または復帰変異である。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＡＲＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＲＸ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＤＸ_８（配列番号７６６）を含み、Ｘ_１は、ＧまたはＬであり、Ｘ_２は、ＲまたはＧであり、Ｘ_３は、ＦまたはＹであり、Ｘ_４は、ＰまたはＧであり、Ｘ_５は、ＲまたはＡであり、Ｘ_６は、ＧまたはＳであり、Ｘ_７は、ＲまたはＡであり、Ｘ_８は、ＹまたはＩである。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＡＲＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＲＸ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７ＦＤＸ_８（配列番号７６６）からなるかまたはこれらから実質的になり、Ｘ_１は、ＧまたはＬであり、Ｘ_２は、ＲまたはＧであり、Ｘ_３は、ＦまたはＹであり、Ｘ_４は、ＰまたはＧであり、Ｘ_５は、ＲまたはＡであり、Ｘ_６は、ＧまたはＳであり、Ｘ_７は、ＲまたはＡであり、Ｘ_８は、ＹまたはＩである。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、ＡＲＧＲＦＲＰＲＧＲＦＤＹ（配列番号１５７５、ＢＩＩＢ－１２－９１７）、ＡＲＬＧＹＲＧＡＳＡＦＤＩ（配列番号１５８９、ＢＩＩＢ－１２－９３２）またはＡＲＶＧＧＧＹＡＮＰ（配列番号１５７３、ＢＩＩＢ－１２－９１５）から選択されるアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開
示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ａまたは図１２Ｂ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
からなるか、または実質的になる。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＸｚに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、ＢＩＩＢ－１２－８９１、ＢＩＩＢ－１２－８９２、ＢＩＩＢ－１２－８９３、ＢＩＩＢ－１２－８９５、ＢＩＩＢ－１２－８９６、ＢＩＩＢ－１２－８９７、ＢＩＩＢ－１２－８９８、ＢＩＩＢ－１２－８９９、ＢＩＩＢ－１２－９００、ＢＩＩＢ－１２－９０１、ＢＩＩＢ－１２－９０２、ＢＩＩＢ－１２－９０３、ＢＩＩＢ－１２－９０４、ＢＩＩＢ－１２－９０５、ＢＩＩＢ－１２－９０６、ＢＩＩＢ－１２－９０７、ＢＩＩＢ－１２－９０８、ＢＩＩＢ－１２－９０９、ＢＩＩＢ－１２－９１０、ＢＩＩＢ－１２－９１１、ＢＩＩＢ－１２－９１２、ＢＩＩＢ－１２－９１３、ＢＩＩＢ－１２－９１４、ＢＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－１２－９１６、ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－１２－９１８、ＢＩＩＢ－１２－９１９、ＢＩＩＢ－１２－９２０、ＢＩＩＢ－１２－９２１、ＢＩＩＢ－１２－９２２、ＢＩＩＢ－１２－９２３、ＢＩＩＢ－１２－９２４、ＢＩＩＢ－１２－９２６、ＢＩＩＢ－１２－９２７、ＢＩＩＢ－１２－９２８、ＢＩＩＢ－１２－９２９、ＢＩＩＢ－１２－９３０、ＢＩＩＢ－１２－９３１、ＢＩＩＢ－１２－９３２、ＢＩＩＢ－１２－９３３、ＢＩＩＢ－１２－９３４、ＢＩＩＢ－１２－９３５、ＢＩＩＢ－１２－９３６、ＢＩＩＢ－１２－９３７、ＢＩＩＢ－１２－１２８８、ＢＩＩＢ－１２－１２８９、ＢＩＩＢ－１２－１２９０、ＢＩＩＢ－１２－１２９１、ＢＩＩＢ－１２－１２９２、ＢＩＩＢ－１２－１２９３、ＢＩＩＢ－１２－１２９４、ＢＩＩＢ－１２－１２９５
、ＢＩＩＢ－１２－１２９６、ＢＩＩＢ－１２－１２９７、ＢＩＩＢ－１２－１２９８、ＢＩＩＢ－１２－１２９９、ＢＩＩＢ－１２－１３００、ＢＩＩＢ－１２－１３０１、ＢＩＩＢ－１２－１３０２、ＢＩＩＢ－１２－１３０３、ＢＩＩＢ－１２－１３０４、ＢＩＩＢ－１２－１３０５、ＢＩＩＢ－１２－１３０６、ＢＩＩＢ－１２－１３０７、ＢＩＩＢ－１２－１３０８、ＢＩＩＢ－１２－１３０９、ＢＩＩＢ－１２－１３１０、ＢＩＩＢ－１２－１３１１、ＢＩＩＢ－１２－１３１２、ＢＩＩＢ－１２－１３１３、ＢＩＩＢ－１２－１３１４、ＢＩＩＢ－１２－１３１５、ＢＩＩＢ－１２－１３１６、ＢＩＩＢ－１２－１３１７、ＢＩＩＢ－１２－１３１８、ＢＩＩＢ－１２－１３１９、ＢＩＩＢ－１２－１３２２、ＢＩＩＢ－１２－１３２３、ＢＩＩＢ－１２－１３２４、ＢＩＩＢ－１２－１３２５、ＢＩＩＢ－１２－１３２６、ＢＩＩＢ－１２－１３２７、ＢＩＩＢ－１２－１３２８、ＢＩＩＢ－１２－１３２９、ＢＩＩＢ－１２－１３３０、ＢＩＩＢ－１２－１３３１、ＢＩＩＢ－１２－１３３２、ＢＩＩＢ－１２－１３３３、またはＢＩＩＢ－１２－１３３４からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３９３、配列番号１４８３および配列番号１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６３、配列番号１７５３および配列番号１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１３９５、配列番号１４８５および配列番号１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６６５、配列番号１７５５および配列番号１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１４０９、配列番号１４９９および配列番号１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２抗体のＶＨＣＤＲ）、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１６７９、配列番号１７６９および配列番号１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２抗体のＶＬＣＤＲ）を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、および５５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少
なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６７５、６７７、６７９、６８１、６８３、６８５、６８７、６８９、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９、７３１、７３３、７３５、７３７、７３９、７４１、および７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｉ）ＶＨは、配列番号３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、および５５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）ＶＬは、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６７５、６７７、６７９、６８１、６８３、６８５、６８７、６８９、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９、７３１、７３３、７３５、７３７、７３９、７４１、および７４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

ある種の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体は、特定の生殖系重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域、および／または特定の生殖系軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体のＶＨ配列は、Ｖ、ＤまたはＪ生殖系配列のいずれか１つに由来することができ、かつ／または抗ＦＩＸａ抗体のＶＬ配列は、カッパまたはラムダ生殖系配列のいずれか１つに由来することができる。

本明細書において実証される通り、ヒト生殖系遺伝子の産生物である、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、ＦＩＸａに特異的なヒト抗体が製造される。したがって、ＶＨおよびＶＬを含む、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨが、ＶＨ１－１８、ＶＨ１－４６、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－２３、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－３１、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－０ＢまたはＶＨ５－５１の生殖系配列に由来する、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分が提供される。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、ＶＫ１－０５、ＶＫ１－１２、ＶＫ１－３９、ＶＫ２－２８、ＶＫ３－１１、ＶＫ３－１５、ＶＫ３－２０またはＶＫ４－０１の生殖系配列に由来する。一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４、またはＶＨ５－５１．１の生殖系配列に由来し、ＶＬは、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０の生殖系配列に由来する。一部の態様では、ＶＨおよび／またはＶＬは、親和性最適化による、それらのそれぞれの生殖系列に由来する。

本明細書に記載される抗体は、図に示されている通り、上で列挙したヒト生殖系ＶＨ遺伝子のうちの１つの産生物またはそれに由来する重鎖可変領域を含むもの、および上で列挙したヒト生殖系ＶＫ遺伝子のうちの１つの産生物またはそれに由来する軽鎖可変領域をやはり含むものを含む。

本明細書で使用する場合、ヒト抗体は、抗体の可変領域が、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られる場合、特定の生殖系配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」重鎖および軽鎖可変領域を含む。このような系は、目的の抗原を有するヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを免役する工程、または目的の抗原を有するファージ上で示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングする工程を含む。ヒト生殖系免疫グロブリン配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列とヒト生殖系免疫グロブリンのアミノ酸配列とを比較して、ヒト抗体の配列に配列が最も近い（すなわち、最大の同一％）ヒト生殖系免疫グロブリン配列を選択するなどによって特定することができる。特定のヒト生殖系免疫グロブリン配列「の産生物であるか、またはこれに由来する」ヒト抗体は、例えば、天然の体細胞変異または部位指向性変異の意図的導入により、生殖系配列と比べたアミノ酸の差異を含有することができる。しかし、選択されたヒト抗体は、通常、アミノ酸配列が、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、他の種（例えば、マウス生殖系配列）の生殖系免疫グロブリンアミノ酸配列に比べると、ヒト抗体をヒトと特定するアミノ酸残基を含有する。ある種の場合、ヒト抗体は、アミノ酸配列が、生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一とすることができるか、または少なくとも９６％、９７％、９８％もしくは９９％をも同一とすることができる。通常、特定のヒト生殖系配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と１０以下のアミノ酸しか差異を示さないであろう。ある種の場合、ヒト抗体は、生殖系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と５以下のアミノ酸しか差異を示す
ことができず、または４、３、２もしくは１以下のアミノ酸しか差異を示さないことさえあり得る。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１つのＶＨを含み、ＶＨは、配列番号４２３、４２７または４５５から選択される配列からなるか、またはこれらから実質的になる。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１つのＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６１１、６１５または６４３から選択される配列からなるか、またはこれらから実質的になる。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１つのＶＨおよび少なくとも１つのＶＬを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＶＨは、配列番号４２３、４２７または４５５から選択される配列からなるか、またはこれらから実質的になる；および、
（ｉｉ）少なくとも１つのＶＬは、配列番号６１１、６１５または６４３から選択される配列からなるか、またはこれらから実質的になる。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｂ１）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含む、これらからなる、またはこれらから実質的になる；
（ｂ２）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含む、これらからなる、またはこれらから実質的になる；または
（ｂ３）ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号４５５および６４３を含む、これらからなる、またはこれらから実質的になる。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号４２３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６１１と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号４２７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６１５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号４５５と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６４３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

ある種の態様では、本発明の抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、ＦＸａに対する検出可能な結合を有していない。他の態様では、本開示の二重特異性分子は、ＦＸｚに特異的に結合し、ＦＸａへの検出可能な結合を有していない、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分、およびＦＩＸｚとＦＩＸａの両方に特異的に結合する抗ＦＩＸ抗体を含む。

（ｄ）抗ＦＸａ結合性分子
本開示は、活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）に特異的に結合する抗体（例えば、単離された抗体）またはその抗原結合部分であって、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分が、ＦＸｚおよびＦＸａの存在下で、ＦＸａに優先的に結合する、抗体またはその抗原結合部分を提供する。一実施形態では、ＦＸａは、擬似基質（すなわち、ＥＧＲ－ＣＭＫ）に共有結合しているＦＸａである。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸａに結合する。本開示はまた、抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合親和性よりも高い結合親和性でＦＸａに結合する、単離された抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を提供する。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＬＩアッセイによって決定すると、約１００ｎＭ以下、約９５ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８５ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６５ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４５ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３５ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、または約１ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸａに結合する。

他の実施形態では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、または約０．０５ｎＭ以下のＫ_Ｄで、ＦＸａに結合する。さらに他の実施形態では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～９０ｎＭ、１ｎＭ～８０ｎＭ、１ｎＭ～７０ｎＭ、１ｎＭ～６０ｎＭ、１ｎＭ～５０ｎＭ、１ｎＭ～４０ｎＭ、１ｎＭ～３０ｎＭ、１ｎＭ～２０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．１ｎＭ～９０ｎＭ、０．１ｎＭ～８０ｎＭ、０．１ｎＭ～７０ｎＭ、０．１ｎＭ～６０ｎＭ、０．１ｎＭ～５０ｎＭ、０．１ｎＭ～４０ｎＭ、０．１ｎＭ～３０ｎＭ、０．１ｎＭ～２０ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭまたは０．１ｎＭ～１ｎＭのＫ_Ｄで、ＦＸａに結合する。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と交差競合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、図１２Ｃ中の抗体からなる群から選択される参照抗体と同じエピトープに結合する。一部の態様では、抗ＦＸａまたはその抗原結合部分は、ＢＩＩＢ－１２－９２５である参照抗体と同じエピトープに結合する。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示される抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分の抗原結合部分と実質的に同じ抗原結合部位（例えば、エピトープ）に結合する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示される抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分の抗原結合部位（例えば、エピトープ）と重なる抗原結合部位（例えば、エピトープ）に結合する。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列；または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中のＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＶＨＣＤＲ３配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、配列番号１９１９、ＢＩＩＢ－１２－９２５として記載されるアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中で開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中で開示されているＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中で開示されているＶＨ
ＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｉ）図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、図１２Ｃ中で開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
からなるか、またはこれらから実質的になる。

本開示はまた、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む、ＦＸａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は、ＢＩＩＢ－１２－８９４、ＢＩＩＢ－１２－９２５、ＢＩＩＢ－１２－１３２０またはＢＩＩＢ－１２－１３２１からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１９１１、配列番号１９１５および配列番号１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、ならびに／またはそれぞれ、配列番号１９２３、配列番号１９２７および配列番号１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号５５７、５５９、５６１および５６３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号７４５、７４７、７４９および７５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、
（ｉ）ＶＨは、配列番号５５７、５５９、５６１および５６３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）ＶＬは、配列番号７４５、７４７、７４９および７５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

ある種の実施形態では、抗ＦＩＸａ抗体は、特定の生殖系重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域、および／または特定の生殖系軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＦＸａ抗体のＶＨ配列は、Ｖ、ＤまたはＪ生殖系配列のいずれか１つに由来することができ、かつ／または抗ＦＸａ抗体のＶＬ配列は、カッパまたはラムダ生殖系配列のいずれか１つに由来することができる。

本明細書において実証される通り、ヒト生殖系遺伝子の産生物であるか、またはこれに由来する重鎖可変領域を含む、ＦＸａに特異的なヒト抗体が製造される。したがって、ＶＨおよびＶＬを含む、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨが、ＶＨ１－１８、ＶＨ１－４６、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－２３、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－３１、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－０ＢまたはＶＨ５－５１の生殖系配列に由来する、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分が提供される。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、ＶＫ１－０５、ＶＫ１－１２、ＶＫ１－３９、ＶＫ２－２８、ＶＫ３－１１、ＶＫ３－１５、ＶＫ３－２０またはＶＫ４－０１の生殖系配列に由来する。一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＶＨ１－１８．０、ＶＨ１－１８．１、ＶＨ１－１８．８、ＶＨ１－４６．０、ＶＨ１－４６．４、ＶＨ１－４６．５、ＶＨ１－４６．６、ＶＨ１－４６．７、ＶＨ１－４６．８、ＶＨ１－４６．９、ＶＨ３－２１．０、ＶＨ３－２３．０、ＶＨ３－２３．２、ＶＨ３－２３．６、ＶＨ３－３０．０、ＶＨ４－３１．５、ＶＨ４－３９．０、ＶＨ４－３９．５、ＶＨ４－０Ｂ．４、またはＶＨ５－５１．１、の生殖系配列に由来し、ＶＬは、ＶＫ１－０５．６、ＶＫ１－０５．１２、ＶＫ１－１２．０、ＶＫ１－１２．４、ＶＫ１－１２．７、ＶＫ１－１２．１０、ＶＫ１－１２．１５、ＶＫ１－３９．０、ＶＫ１－３９．３、ＶＫ１－３９．１５、ＶＫ２－２８．０、ＶＫ２－２８．１、ＶＫ２－２８．５、ＶＫ３－１１．０、ＶＫ３－１１．２、ＶＫ３－１１．６、ＶＫ３－１１．１４、ＶＫ３－１５．０、ＶＫ３－１５．８、ＶＫ３－１５．１０、ＶＫ３－２０．０、ＶＫ３－２０．１、ＶＫ３－２０．４、ＶＫ３－２０．５、ＶＫ４－０１．０、ＶＫ４－０１．４、ＶＫ４－０１．２０の生殖系配列に由来する。一部の態様では、ＶＨおよび／またはＶＬは、親和性最適化による、それらのそれぞれの生殖系列に由来する。

一部の態様では、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号５５９と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７４７と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

（ｅ）共通態様
本開示のある種の態様は、本明細書に開示されるＶＨおよびＶＬＣＤＲ配列を含み、さらに本明細書に開示される抗体とは異なるフレームワーク配列を含有する、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）および抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）に関する。このようなフレームワーク配列は、公のＤＮＡデータベース、または生殖系抗体遺伝子配列を含む公表されている参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにてインターネットで入手可能である）、およびＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａ
ｔｉｏｎ９１～３２４２頁；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ら（１９９２年）「Ｔｈｅ
ＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅｏｆＨｕｍａｎＧｅｒｍｌｉｎｅＶＨＳｅｑｕｅｎｃｅｓＲｅｖｅａｌｓａｂｏｕｔＦｉｆｔｙＧｒｏｕｐｓｏｆＶＨＳｅｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈＤｉｆｆｅｒｅｎｔＨｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅＬｏｏｐｓ」、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：７７６～７９８頁；およびＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ら（１９９４年）、「ＡＤｉｒｅｃｔｏｒｙｏｆＨｕｍａｎＧｅｒｍ－ｌｉｎｅＶＨ
ＳｅｇｍｅｎｔｓＲｅｖｅａｌｓａＳｔｒｏｎｇＢｉａｓｉｎｔｈｅｉｒ
Ｕｓａｇｅ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４巻：８２７～８３６頁において見出すことができる；これらの各々の内容は、参照により本明細書に明示的に組み入れられる。

本明細書に記載される抗体において使用するための例示的なフレームワーク配列は、本明細書に記載される抗体によって使用されるフレームワーク配列に構造的に類似している。ＶＨＣＤＲ１、２および３配列、ならびにＶＬＣＤＲ１、２および３配列は、フレームワーク配列に誘導される生殖系免疫グロブリン遺伝子に見出されたものと同一の配列を有するフレームワーク領域にグラフトすることができるか、またはＣＤＲ配列は、生殖系配列と比べて、１つまたはそれ以上の変異を含有するフレームワーク領域にグラフトすることができる。例えば、ある種の場合、フレームワーク領域内の残基を変異させて、抗体の抗原結合能力を維持または増強させることが有益となることが見出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号）。

本明細書に記載される操作された抗体は、例えば、抗体の特性を改善するため、ＶＨおよび／またはＶＬの内のフレームワーク残基に修飾がなされたものを含む。通常、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、手法の１つは、１つまたはそれ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系配列に「復帰突然変異」させることである。より詳細には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が導かれる生殖系配列とは異なるフレームワーク残基を含有することができる。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が導かれる生殖系配列と比較することにより特定することができる。フレームワーク領域配列をそれらの生殖系構成に戻すため、体細胞変異は、例えば部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介性突然変異誘発によって、生殖系配列に「復帰突然変異」させることができる。このような「復帰突然変異された」抗体も、包含されることが意図されている。別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内の１つまたはそれ以上の残基、または１つもしくはそれ以上のＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上の残基をも変異させることを含み、これにより、Ｔ細胞エピトープを除去し、この抗体の潜在的な免役原性を低下させることができる。この手法はまた、「脱免役化」とも称され、Ｃａｒｒらによる米国特許公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載される。

別のタイプの可変領域修飾は、ＶＨおよび／またはＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させて、これにより、目的とする抗体の１つまたはそれ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善することである。部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介性突然変異誘発は、変異および抗体結合に及ぼす作用を導入するために行うことができるかまたは目的とする他の機能的特性は、本明細書に記載されるインビトロまたはインビボアッセイにおいて評価され、本実施例において提示されている。一部の実施形態では、保存的修飾（上で議論されている）が導入される。この変異は、アミノ酸置換、付加または欠失とすることができる。さらに、通常、ＣＤＲ領域の内の１つ、２つ、３つ、４つまたは５つ以下の残基が、改変される。

一部の態様では、抗体のＣＤＲ中のメチオニン残基は酸化され、抗体の潜在的な化学的
分解、およびその後の効能の低下をもたらすことができる。したがって、同様に、酸化的分解を受けないアミノ酸残基により置き換えられた重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ中の１つまたはそれ以上のメチオニン残基を有する抗ＦＩＸ／ＦＸ抗体も提供される。一実施形態では、本明細書に開示される抗体のＣＤＲにおけるメチオニン残基は、酸化的分解を受けないアミノ酸残基により置き換えられる。同様に、脱アミド部位は、抗体のいずれかから、特にＣＲＤにおいて除去することができる。

ある種の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）および抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）のいずれか１つは、ＩｇＧとすることができる。一部の態様では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらのバリアントである。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）および抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）のいずれか１つは、ＩｇＧ４である。一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）および抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、エフェクターのないＩｇＧ４Ｆｃを含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）の重鎖定常領域またはその断片は、ＩｇＧ定常領域である。一部の態様では、ＩｇＧ定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常領域である。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、軽鎖定常領域（ＬＣ）を含むＶＬを含み、ＬＣ定常領域は、カッパ定常領域である。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、軽鎖定常領域（ＬＣ）を含むＶＬを含み、ＬＣ定常領域は、ラムダ定常領域である。

一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメインを含む。

一部の態様では、ＦＩＸまたはそのＦＸ抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。他の態様では、ＦＩＸまたはそのＦＸ抗原結合部分は、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ、ジスルフィド架橋Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トライアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、一特異性である。他の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、二重特異性、三重特異性、四重特異性などである。他の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、多重特異性である。一部の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、一価、二価、三価、四価などである。さらに他の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗
ＦＸｚ抗体）は、多価である。特定の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、二価の、例えば、いくつかの特異的抗原結合部位を含む抗体である。特定の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、二重特異性である、すなわち、この分子は、２つの異なる抗原（例えば、同一または異なる分子の２つの異なるエピトープ）に特異的に結合することができる。いくつかの特定の態様では、抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、二価および二重特異性である、例えば、２つの異なる抗原（例えば、同一または異なる分子の２つの異なるエピトープ）に結合することができる４つの二結合部位を含む抗体である。

一部の態様では、本明細書に開示される抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）または抗ＦＸ抗体（例えば、抗ＦＸａ抗体または抗ＦＸｚ抗体）は、ヒト抗体、操作された抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または最適化抗体である。一部の態様では、最適化抗体は、親和性最適化抗体である。一部の態様では、抗体は、所望の生物物理的特性または機能的特性、例えば、血漿中半減期の延長、凝集の低さ、熱的安定性などに最適化されている。

ＩＩＩ．二重特異性抗ＦＩＸａ／抗ＦＸｚ結合性分子
本開示はまた、第２の結合特異性を有する分子に連結されている、抗ＦＩＸ特異性（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体もしくは抗原結合部分、または本明細書に開示される抗ＦＩＸｚ抗体もしくはその抗原結合部分）を含む二重特異性分子を提供する。同様に、第２の結合特異性を有する分子に連結されている、抗ＦＸ特異性（例えば、本明細書に開示される抗ＦＸｚ抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書に開示される抗ＦＸａ抗体もしくはその抗原結合部分）を含む二重特異性分子を提供する。同様に、（ｉｉ）抗ＦＸｚ特異性（例えば、本明細書に開示される抗ＦＸｚ抗体もしくはその抗原結合部分または本明細書に開示される抗ＦＸａ抗体もしくはその抗原結合部分）に連結している、（ｉ）抗ＦＩＸ特異性（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸａ抗体もしくは抗原結合部分または抗ＦＩＸｚ抗体もしくはその抗原結合部分）を含む二重特異性分子が提供される。本明細書に開示される二重特異性分子は、免疫グロブリン構造、または例えば、ドメインを再配列することにより抗体から誘導される構造を有する二重特異性分子に限定されない。本明細書に開示される二重特異性分子は、本明細書に開示されるＣＤＲまたはその組合せが、グラフトされている分子足場（例えば、フィブロネクチンＩＩＩまたはテネシイン－Ｃ足場）も含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ａ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。他の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｂ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｃ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

ある種の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｄ中の抗ＦＩＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨ
およびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

本開示の他の態様はまた、参照二重特異性抗体と交差競合する二重特異性分子であって、参照二重特異性抗体が、図３Ａ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む、二重特異性分子を提供する。一部の実施形態では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｂ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。他の実施形態では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｃ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。さらに他の実施形態では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と交差競合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｄ中の抗ＦＩＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ａ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。他の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｂ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。さらに他の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｃ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

一部の他の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｄ中の抗ＦＩＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ａおよび図１２Ｂ中の抗ＦＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。さらに他の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｄ中の抗ＦＩＸｚ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸｚ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ａ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｂ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。他の態様において、一部の態様では、二重特異性分子は、参照二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、参照二重特異性抗体は、図３Ｃ中の抗ＦＩＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＩＸａ抗体のＶＨおよびＶＬ、ならびに図１２Ｃ中の抗ＦＸａ抗体からなる群から選択される抗ＦＸａ抗体のＶＨおよびＶＬを含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３が、図３Ａ、３Ｂ、３Ｃおよび３Ｄ中の抗ＦＩＸａ（ＢＩＩＢ－９）抗体の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（例えば、図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃおよび１５ＤのＣＤＲ）からなる群から選択される、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分；および
（ｉｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３が、図１２Ａおよび１２Ｂ中の抗ＦＸ（ＢＩＩＢ－１２）抗体の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（例えば、図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃおよび１５ＤのＣＤＲ）からなる群から選択される、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、
（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分であって：
（ａ１）それぞれ、配列番号８１５、８６０または９０５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号９５０、９９５または１０４０を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－４８４）
（ａ２）それぞれ、配列番号８２２、８６７または９１２を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号９５７、１００２または１０４７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－６１９）
（ａ３）それぞれ、配列番号１３４７、１３５１または１３５５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１３５９、１３６３または１３６７を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－５７８）
（ａ４）それぞれ、配列番号８４３、８８８または９３３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号９７８、１０２３または１０６８を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３５）、または
（ａ５）それぞれ、配列番号８４４、８８９または９３４を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号９７９、１０２４または１０６９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－９－１３３６）
を含む、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分ならびに
（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分であって：
（ｂ１）それぞれ、配列番号１３９３、１４８３または１５７３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１６６３、１７５３または１８４３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１５）
（ｂ２）それぞれ、配列番号１３９５、１４８５または１５７５を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１６６５、１７５５または１８４５を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤ
Ｒ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９１７）
（ｂ３）それぞれ、配列番号１９１１、１９１５または１９１９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１９２３、１９２７または１９３１を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９２５）
（ｂ４）それぞれ、配列番号１４０９、１４９９または１５８９を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１６７９、１７６９または１８５９を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－９３２）
（ｂ５）それぞれ、配列番号１４３３、１５２３または１６１３を含む、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３配列、および／またはそれぞれ、配列番号１７０３、１７９３または１８８３を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）
を含む、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、
（ａ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分であって：
（ａ１）それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－４８４）
（ａ２）それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－６１９）
（ａ３）それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－５７８）
（ａ４）それぞれ、配列番号８７および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－１３３５）
（ａ５）それぞれ、配列番号８９および２２１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－１３３６）
を含む、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分、
（ｂ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分であって：
（ｂ１）それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１５）
（ｂ２）それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１７）
（ｂ３）それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９２５）
（ｂ４）それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９３２）または
（ｂ５）それぞれ、配列番号５０３および６９１を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－１３０６）
を含む、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＩＸａもしくは抗ＦＩＸｚ抗体、またはそれらの抗原結合部分）および抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＸｚもしくは抗ＦＩＸａ抗体、またはその抗原結合部分）を含み、
（ｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；
（ｉｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；
（ｉｉｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含み；
（ｉｖ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号３１および２２１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－４８４）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５５および６４３を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９３２）を含み；
（ｖ）抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２３および６１１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１５）を含み；
（ｖｉ）抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号１８５および３７１を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－５７８）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；
（ｖｉｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４２７および６１５を含むＶＨおよびＶＬ；（ＢＩＩＢ－１２－９１７）を含み；または
（ｖｉｉｉ）抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号４５および２３５を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－９－６１９）を含み；抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ、配列番号５５９および７４７を含むＶＨおよびＶＬ（ＢＩＩＢ－１２－９２５）を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＨおよびＶＬを含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＨは、表６中に開示されているＶＨ配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、表６中に開示されているＶＬ配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％が同一のアミノ酸配列を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＨＣＤＲ１配列は、
（ｉｉｉ）表７中に開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列、または
（ｉｖ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中に開示されているＶＨＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＨＣＤＲ２配列は、
（ｉｉｉ）表７中のＶＨＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列、または
（ｉｖ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中のＶＨＣＤＲ２配列か
らなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＨＣＤＲ３配列は、
（ｉｉｉ）表７中に開示されているＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列、または
（ｉｖ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中に開示されているＶＨＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＨＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＬＣＤＲ１配列は、
（ｖ）表７中に開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列、または
（ｖｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中に開示されているＶＬＣＤＲ１配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ１配列
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＬＣＤＲ２配列は、
（ｖ）表７中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列、または
（ｖｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中のＶＬＣＤＲ２配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ２配列
を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＶＬＣＤＲ３配列は、
（ｖ）表７中に開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列、または
（ｖｉ）１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を除く、表７中に開示されているＶＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される配列と同一のＶＬＣＤＲ３配列
を含む。

一部の態様では、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分は、表７に開示されている、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３配列から選択される、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む。

本開示の一部の態様は、少なくとも１つのＦＶＩＩＩａ活性アッセイにおいて、ＦＩＸおよびＦＸに特異的に結合し、次に、活性化第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩａ）補因子に機能的に擬似する、二重特異性分子に関する。一部の態様では、ＦＶＩＩＩａ活性アッセイは、発色ＦＸａ生成アッセイ、一段階凝固アッセイまたはそれらの組合せから選択される。本開示の特定の態様には、遊離ＦＩＸａよりもＦＩＸａ（例えば、テナーゼ複合体におけるＦＩＸａ、例えば、ＦＩＸａ－ＳＭ）に、またはＦＸａ（例えば、ＦＸａ－ＳＭ）よりもＦＩＸチモーゲンおよびＦＸチモーゲンに優先的に結合する二重特異性分子であって、活性化第ＶＩＩＩ因子補因子活性を擬似する、二重特異性分子を含む。

一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩａ活性は、同一のアッセイにおいて、普通なら、ＦＶＩＩＩにより実現される活性の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１０５％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１１５％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１３５％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１４５％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１５５％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１６５％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１８５％、少なくとも約１９０％、少なくとも約１９５％または少なくとも約２００％を実現する。

さらなる実施形態では、二重特異性分子は、インビトロまたはインビボで、プロトロンビンからトロンビンを、フィブリノゲンからフィブリンを、および／またはフィブリン凝塊を生成することができる。一部の実施形態では、二重特異性分子は、ＢＬＩによって決定すると、ＦＩＸａとＦＸの両方に同時に結合する。

一部の態様では、二重特異性分子は、抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＩＸａもしくは抗ＦＩＸｚ抗体、またはそれらの抗原結合部分）および抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＸｚもしくは抗ＦＩＸａ抗体、またはその抗原結合部分）を含み、二重特異性分子は、ＦＸａ生成アッセイで測定すると、リン脂質の非存在下で活性の顕著な損失を示す。一部の態様では、二重特異性分子は、抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＩＸａもしくは抗ＦＩＸｚ抗体、またはそれらの抗原結合部分）および抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分（すなわち、抗ＦＸｚもしくは抗ＦＩＸａ抗体、またはその抗原結合部分）を含む。一部の態様では、ＦＸａ生成アッセイにおいてリン脂質が存在しないことにより、リン脂質の存在下で測定した活性に対して、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％の活性の喪失をもたらす。一部の態様では、二重特異性分子は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第８，０６２，６３５号に開示されている参照二重特異性抗体（例えば、エミシズマブ、ＡＣＥ９１０）のリン脂質に依存しない活性と比べると、最小限のリン脂質依存性活性を示す。一部の態様では、本明細書に開示される二重特異性分子は、リン脂質の非存在下で、ＦＸａ生成アッセイにおいて、米国特許第８，０６２，６３５号に開示されている参照二重特異性抗体（例えば、エミシズマブ、ＡＣＥ９１０）に関して観察された活性の、約２０％未満、約１５％未満、約１０％または約５％未満しか示さない。

一部の態様では、本明細書に開示される二重特異性分子は、第ＸＩａ因子により誘発されるトロンビン生成アッセイにおいて、試験した合成リン脂質のベシクルがＰＳ／ＰＣ（２０％／８０％）からなる場合よりも、試験した合成リン脂質のベシクルがＰＳ（ホスファチジルセリン）／ＰＥ（ホスファチジルエタノールアミン）／ＰＣ（ホスファチジルコリン）（２０％／４０％／４０％）からなる場合のほうが、高い活性を有する。一部の態様では、ＰＥ含有リン脂質ベシクル（例えば、ＰＳ／ＰＥ／ＰＣ２０％／４０％／４０％）の存在下での、本明細書に開示される二重特異性分子の活性は、第ＸＩａ因子により誘発されるトロンビン生成アッセイにおいて、ＰＥのないベシクル（例えば、ＰＳ／ＰＣ
２０％／８０％）の存在下での同一実験条件下で観察される活性よりも、少なくとも約
５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも約２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％または少なくとも約３００％高い。

一部の態様では、本開示の二重特異性分子のピーク活性を支持するリン脂質濃度は、ｒＦＶＩＩＩのピーク活性を支持するリン脂質濃度よりも高い。

一部の態様では、二重特異性分子は、ＩｇＧアイソタイプのものである。一部の態様では、ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ１部分クラスのものである。一部の態様では、ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ４部分クラスのものである。

一部の態様では、二重特異性分子は、二重特異性ＩｇＧフォーマットのものであり、表２中の二重特異性抗体からなる群から選択される。一部の態様では、二重特異性分子は、二重特異性ヘテロ二量体フォーマットのものである。

一部の態様では、二重特異性分子は、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖を含む。一部の態様では、二重特異性分子は、２つの同一の軽鎖および２つの異なる重鎖を含む。

一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、出血エピソードの出現率を制御または低減することが可能である。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、ホメオスタシスを維持することができる。

一部の態様では、二重特異性分子は、血友病を有する対象における、決まった手順の予防を実現することができる。一部の態様では、対象は、第ＶＩＩＩ因子に対して中和抗体を発達させる、または発達させることが予想される。

一部の態様では、本明細書に開示される二重特異性分子（例えば、抗体）は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する（モノクローナル）二重特異性抗体であり、任意のフォーマットとすることができる。幅広い組換え抗体フォーマット、例えば二価、三価または四価の二重特異性抗体が、最近に開発された。例には、ＩｇＧ抗体フォーマットおよび一本鎖ドメインの融合を含む（異なるフォーマットの場合、例えば、Ｃｏｌｏｍａ，Ｍ．Ｊ．ら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ１５巻（１９９７年）、１５９～１６３頁；ＷＯ２００１／０７７３４２；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ２５巻（２００７年）、１２３３～１２３４頁；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ．Ｐ．ら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．２３巻（２００５年）、１１２６～１１３６頁；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｎ．およびＬｅｇｅｒ，Ｏ．、Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ７４巻（２００７年）、３～１４頁；Ｓｈｅｎ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ３１８巻（２００７年）、６５～７４頁；Ｗｕ，Ｃら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．２５巻（２００７年）、１２９０～１２９７頁を参照されたい）。

本明細書における二重特異性抗体または断片はまた、ＷＯ２００９／０８０２５１；ＷＯ２００９／０８０２５２；ＷＯ２００９／０８０２５３；ＷＯ２００９／０８０２５４；ＷＯ２０１０／１１２１９３；ＷＯ２０１０／１１５５８９；ＷＯ２０１０／１３６１７２；ＷＯ２０１０／１４５７９２；ＷＯ２０１０／１４５７９３およびＷＯ２０１１／１１７３３０に開示されている方法に従って生成される二価、三価または四価の二重特異
性抗体を含み、それらはすべて、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。

一部の態様では、本明細書に開示される二重特異性分子、例えば抗体は、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ、ジスルフィド架橋Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トライアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、２超の結合ドメイン（すなわち、この抗体は、三価または多価である）が存在する場合でさえも、二重特異性となることがある。二重特異性抗体には、例えば、多価一本鎖抗体、ダイアボディおよびトライアボディ、ならびにさらなる抗原結合ドメインが、１つまたはそれ以上のペプチド－リンカーにより連結されている完全長抗体の定常領域構造を有する抗体（例えば、一本鎖Ｆｖ、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）が含まれる。抗体は、単一種に由来する完全長とすることができるか、またはキメラ化もしくはヒト化されている。２超の抗原結合ドメインを有する抗体の場合、タンパク質が２つの異なる抗原に対する結合ドメインを有する限り、いくつかの結合ドメインは同一であってもよい。

本出願内で使用されている用語「価数」は、抗体分子中に結合ドメインが指定数、存在していることを意味する。したがって、用語「二価」、「四価」および「六価」は、抗体分子中に、２つの結合ドメイン、４つの結合ドメインおよび６つの結合ドメインがそれぞれ存在していることを意味する。本明細書に開示される二重特異性抗体は、少なくとも「二価」であり、「三価」または「多価」（例えば、「四価」または「六価」）であってもよい。一部の態様では、本発明による二重特異性抗体は、二価、三価または四価である。

多重特異性抗体を作製するための技法には、以下に限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖の対の組換え共発現（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ３０５巻：５３７頁（１９８３年））、ＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯＪ．１０巻：３６５５頁（１９９１年））、および「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号；米国特許出願第２０１１／０２８７００９号を参照されたい）が含まれる。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製するために静電的ステアリング効果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇｅｆｆｅｃｔ）を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４（Ａ１））；２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照されたい）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーまたは多重コイルを使用すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８巻（５号）：１５４７～１５５３頁（１９９２年）およびＷＯ２０１１／０３４６０５を参照されたい）；二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：６４４４～６４４８頁（１９９３年）を参照されたい）；二重特異性抗体を作製するために免疫グロブリンドメインクロスオーバーを使用すること（例えば、ＷＯ２００９／０８０２５１を参照されたい）；および一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２巻：５３６８頁（１９９４年）を参照されたい）；および例えば、Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：６０頁（１９９１年）に記載される三重特異性抗体を製造することよって作製することもできる。

本開示に関する二重特異性結合性分子は、２つの抗体に由来する結合ドメインを含む抗体分子に関することができ、１つの結合ドメインは、ｓｃＦｖとすることができる。結合
ドメインの１つは、第１の標的分子（例えば、ＦＩＸａ）に特異的に結合する／これと相互作用することが可能な抗体の可変領域（またはその部分）、その抗体断片または誘導体からなる。第２の結合ドメインは、第２の標的分子（例えば、ＦＸｚ）に特異的に結合する／これと相互作用することが可能な抗体の可変領域（またはその部分）、その抗体断片または誘導体からなる。

二重特異性抗体分子中の２つのドメイン／領域は、好ましくは、相互に共有結合により連結されている。この連結は、例えば、ドメイン１［第１の（ヒト）標的分子、例えば、ＦＩＸａに特異的］－ドメイン２［第２の（ヒト）標的分子、例えば、ＦＸｚに特異的］またはその逆で直接、行うことができる。他の態様では、この連結は、追加のポリペプチドリンカー配列［ドメイン１］－［リンカー配列］－［ドメイン２］により行うことができる。

リンカーが使用される事象では、このリンカーは、本開示の文脈では、第１および第２のドメインの各々が、その異なる結合特異性を互いに独立して維持することができるのを確実とするのに十分な長さおよび配列となる。本開示の文脈では、追加のポリペプチドリンカー配列はまた、例えば、抗体のＦｃ部分または１つもしくはそれ以上の定常ドメインとすることができる、抗体これ自体の断片とすることができる。

本開示の文脈では、結合ドメイン１はまた、抗体アーム１の一部とすることができ、結合ドメイン２はまた、抗体アーム２の一部とすることができるか、またはその逆であり、これらの２つの抗体アームは、界面により連結されている。抗体アーム１は、（ヒト）標的分子１に特異的に結合する／これと相互作用することが可能な抗体の可変領域（またはその部分）、その抗体断片または誘導体からなる。抗体アーム２は、（ヒト）標的分子２に特異的に結合する／これと相互作用することが可能な抗体の可変領域（またはその部分）、その抗体断片または誘導体からなる。

「界面」は、第２の抗体アームの界面において、１つまたはそれ以上の「接触」アミノ酸残基（または他の非アミノ酸基）と相互作用する第１の抗体アーム中のそのような接触アミノ酸残基（または例えば炭水化物基などの他の非アミノ酸基）を含む。好ましい界面は、抗体の重鎖の定常ドメイン（またはその領域）などの免疫グロブリンのドメインであり、界面を介する結合／相互作用により、２つの抗体アームのヘテロ二量体をもたらす。例えば、それらのすべての全体が参照によって本明細書に組み入れられる、Ｒｉｄｇｗａｙら（１９９６年）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．９巻：６１７～６２１頁；国際特許出願番号ＷＯ９６／０２７０１１；Ｍｅｒｃｈａｎｔら（１９９８年）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１６巻：６７７～６８１頁；Ａｔｗｅｌｌら（１９９７年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０巻：２６～３５頁；欧州特許出願ＥＰ１８７０４５９（Ａ１）；および国際出願番号ＷＯ２００７／１４７９０１、ＷＯ２００９／０８９００４およびＷＯ２０１０／１２９３０４を参照されたい。

本開示に従い使用される二重特異性抗体分子は、例えば、単独または組合せのどちらかで、当分野で公知のアミノ酸の欠失、挿入、置換、付加および／または再結合、および／または任意の他の修飾により、当分野で公知の従来の技法を使用してさらに修飾することができる。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列の基礎をなすＤＮＡ配列におけるこのような修飾を導入する方法は、当業者に周知である；例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ（１９８９年）、同所。列挙されているＩｇ由来ドメインの断片または誘導体は、上記の抗体分子の部分であり、かつ／または化学的／生物化学的もしくは分子生物学的方法によって修飾された（ポリ）ペプチドを規定する。対応する方法は、当分野で公知であり、とりわけ実験室マニュアルに記載される（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：Ａ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、第２版（１９８９年）および第３版（２００１年）；Ｇｅｒｈａｒｄｔら、ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＧｅｎｅｒａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙＡＳＭＰｒｅｓｓ（１９９４年）；Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＭｅｔｈｏｄｓＭａｎｕａｌ：ＴｈｅＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＳｏｕｒｃｅｂｏｏｋｏｆＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ（１９９７年）；Ｇｏｌｅｍｉｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰｒｏｔｅｉｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：ＡＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＭａｎｕａｌＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ（２００２年）を参照されたい）。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、例えば、以下の構成成分の１つまたはそれ以上を含むことができる。：
（ｉ）「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」：抗体のＶＨおよびＶＬドメインを有する抗体断片であり、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合にとって所望の構造の形成を可能にする、ＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。一本鎖抗体の生成に関して記載されている技法は、例えば、ＰｌｕｃｋｈｕｎｉｎＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇａｎｄ
Ｍｏｏｒｅ（編）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．１１３巻（１９９４年）、２６９～３１５頁に記載される。
（ｉｉ）「Ｆａｂ断片」：１つの軽鎖、ならびに１つの重鎖のＣＨ１および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
（ｉｉｉ）「Ｆａｂ断片」：１つの軽鎖、およびＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１つの重鎖の部分、およびやはりまたＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間の領域を含み、こうして、鎖間ジスルフィド結合が、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間に形成されて、Ｆ（ａｂ’）_２分子を形成することができる。
（ｉｖ）「Ｆ（ａｂ’）_２断片」：ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部を含有する２つの軽鎖および２つの重鎖を含み、こうして鎖間ジスルフィド結合は、２つの重鎖の間に形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合により一緒に保持される２つのＦａｂ’断片からなる。「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、例えば、組換えにより生成した構築物の単離および／または製造のために、本明細書において定義されている第１の（Ｉｇ由来の）ドメインおよび（Ｉｇ由来の）第２のドメインに加えて、追加のドメインを含むことができることに留意されたい。

ＩＶ．抗体の定常領域
一重特異性、二重特異性または多重特異性分子として、本明細書に記載される抗ＦＩＸ可変領域（例えば、抗ＦＩＸａ可変領域または抗ＦＩＸｚ可変領域）および／または抗ＦＸ可変領域（例えば、抗ＦＸａ可変領域または抗ＦＸｚ可変領域）は、Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃに連結されており（例えば、共有結合により連結されているかまたは融合されている）、これらは、任意のアロタイプまたはイソアロタイプ、例えば、ＩｇＧ１の場合：Ｇｌｍ、Ｇｌｍ１（ａ）、Ｇｌｍ２（ｘ）、Ｇｌｍ３（ｆ）、Ｇｌｍｌ７（ｚ）；ＩｇＧ２の場合：Ｇ２ｍ、Ｇ２ｍ２３（ｎ）；ＩｇＧ３の場合：Ｇ３ｍ、Ｇ３ｍ２１（ｇ１）、Ｇ３ｍ２８（ｇ５）、Ｇ３ｍ１１（ｂ０）、Ｇ３ｍ５（ｂ１）、Ｇ３ｍｌ３（ｂ３）、Ｇ３ｍｌ４（ｂ４）、Ｇ３ｍ１０（ｂ５）、Ｇ３ｍ１５（ｓ）、Ｇ３ｍ１６（ｔ）、Ｇ３ｍ６（ｃ３）、Ｇ３ｍ２４（ｃ５）、Ｇ３ｍ２６（ｕ）、Ｇ３ｍ２７（ｖ）；およびＫの場合：Ｋｍ、Ｋｍ１、Ｋｍ２、Ｋｍ３（例えば、
Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓら（２００９年）ｍＡｂｓ１：１を参照されたい）のいずれかとすることができる。

ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＩＸまたは抗ＦＸ可変領域は、１つまたはそれ以上の活性化しているＦｃ受容体（Ｆｃγｌ、ＦｃγｌｌａまたはＦｃγｌｌｌａ）に結合する、Ｆｃに連結されており、こうして、ＡＤＣＣを刺激する。ある種の実施形態では、本明細書に記載される抗ＦＩＸまたは抗ＦＸ可変領域は、エフェクターのない、またはほとんどエフェクターのないＦｃ、例えば、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に連結されている。

本明細書に記載される抗ＦＩＸまたは抗ＦＸ可変領域は、非天然Ｆｃ領域、例えば、１つまたはそれ以上の活性化しているＦｃ受容体（Ｆｃγｌ、ＦｃγｌｌａまたはＦｃγｌｌｌａ）への結合の増強したエフェクターのないＦｃまたはＦｃに連結される。

一般に、本明細書に記載される可変領域は、１つまたはそれ以上の修飾を含むＦｃに連結されて、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存性細胞毒性などの、抗体の１つまたはそれ以上の機能的特性を改変することができる。さらに、本明細書に記載される抗体は、化学的に修飾（例えば、１つまたはそれ以上の化学部分が、抗体に結合することができる）または修飾されて、そのグリコシル化を改変する、抗体の１つまたはそれ以上の機能的特性を改変することができる。これらの実施形態はそれぞれ、以下にさらに詳細に記載される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵ指標の番号付けである。

Ｆｃ領域は、免疫グロブリン、好ましくは、定常領域の断片、アナログ、バリアント、変異体または誘導体を含めた、ヒト免疫グロブリンの定常領域から誘導されるドメインを包含する。好適な免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭなどの他のクラスを含む。免疫グロブリンの定常領域は、免疫グロブリンのＣ末端領域と相同性の、天然によりまたは合成的により生じるポリペプチドとして定義され、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはＣＨ４ドメインを、個別にまたは組み合わせて含むことができる。

免疫グロブリンの定常領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合および補体結合を含めた、多数の重要な抗体機能を担う。各々が、アイソタイプにより設計された特徴的なエフェクター機能を有する、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭとして分類される、重鎖定常領域の５つの主要なクラスが存在する。例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４として知られている、４つの部分クラスに分けられる。Ｉｇ分子は、細胞受容体の多重クラスと相互作用する。例えばＩｇＧ分子は、ＩｇＧクラスの抗体、すなわちＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩに特異的なＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）の３つのクラスと相互作用する。ＦｃγＲ受容体へのＩｇＧの結合に関する重要な配列は、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインに位置することが報告されている。抗体の血清半減期は、その抗体がＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する能力によって影響を受ける。

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、バリアントＦｃ領域、例えば、所望の構造的特徴および／または生物活性をもたらすよう、親Ｆｃ配列（例えば、後に修飾されてバリアントを生成する未修飾Ｆｃポリペプチド）に対して修飾されている（例えば、アミノ酸置換、欠失および／または挿入による）Ｆｃ配列である。

例えば、（ａ）抗体依存性細胞により媒介される細胞毒性（ＡＤＣＣ）の向上している、または低下している、（ｂ）補体媒介性の細胞毒性（ＣＤＣ）の向上している、または低下している、（ｃ）Ｃｌｑに対する親和性が増大している、または低下している、およ
び／または（ｄ）親Ｆｃに比べてＦｃ受容体に対する親和性が増大している、または低下している、Ｆｃバリアントを生成するため、Ｆｃ領域に修飾を行うことができる。このようなＦｃ領域バリアントは、一般に、Ｆｃ領域中に少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むであろう。アミノ酸修飾を組み合わせることは、特に望ましいことと考えられる。例えば、バリアントＦｃ領域は、その中に、例えば、本明細書において特定されている指定Ｆｃ領域の位置の、２つ、３つ、４つ、５つなどの置換を含むことができる。

バリアントＦｃ領域はまた、ジスルフィド結合形成に含まれるアミノ酸が、除去されるか、または他のアミノ酸により置き換えられた、配列の変質を含むことができる。このような除去は、本明細書に記載される抗体を生成するために使用される宿主細胞中に存在する、他のシステイン含有タンパク質との反応を回避することができる。システイン残基が除去される場合でさえも、一本鎖Ｆｃドメインが、非供給結合により一緒に保持されている二量体Ｆｃドメインを依然として形成することができる。他の実施形態では、Ｆｃ領域を修飾して、選択した宿主細胞に一層適合可能にすることができる。例えば、プロリンイミノペプチダーゼなどの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中の消化性酵素により認識される、典型的な天然のＦｃ領域のＮ末端近辺のＰＡ配列を除去することができる。他の実施形態では、Ｆｃドメイン内の１つまたはそれ以上のグリコシル化部位を除去することができる。通常、グリコシル化されている残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解応答をもたらすことができる。このような残基は、取り除くか、または非グリコシル化残基（例えば、アラニン）により置換することができる。他の実施形態では、Ｃｌｑ結合部位などの補体との相互作用に関与する部位は、Ｆｃ領域から除去することができる。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を取り除くか、または置換することができる。ある種の実施形態では、Ｆｃ受容体への結合に影響を及ぼす部位、好ましくはサルベージ受容体結合部位以外の部位を除去することができる。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、修飾されてＡＤＣＣ部位を除去することができる。ＡＤＣＣ部位は、当分野で公知である；例えば、ＩｇＧ１におけるＡＤＣＣ部位に関して、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９巻（５号）：６３３～９頁（１９９２年）を参照されたい。バリアントＦｃドメインの具体例は、例えば、ＷＯ９７／３４６３１およびＷＯ９６／３２４７８に開示されている。

一実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が変更されるように、例えば増加するまたは減少するように、修飾される。この手法は、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載される。Ｆｃのヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の組み立てを容易にするため、または抗体の安定性を増大または低下させるために変更される。一実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を低下させるために変異させる。より詳細には、１つまたはそれ以上のアミノ酸変異は、Ｆｃヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に導入されて、こうして抗体は、天然のＦｃヒンジドメインブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合に対する、不対ＳｐＡ結合を有する。この手法は、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載される。

さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基により置き換えることにより改変されて、抗体のエフェクター機能が改変される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基により置き換えられ、こうして、抗体は、エフェクターリガンドに対して改変された親和性をするが、親抗体の抗原結合能は維持したままとなる。親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣＩ構成成分とすることができる。この手法は、どちらもＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載される。

別の例では、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸は、異なるアミノ酸残基により置き換えられ、こうして、抗体は、Ｃｌｑ結合を改変する、および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を低下させるもしくは無効にすることができる。この手法は、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載される。

別の例では、アミノ酸の位置２３１および２３９内の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が改変され、これにより、補体を固定する抗体の能力が改変される。この手法は、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに記載される。

さらに別の例では、Ｆｃ領域が修飾されて、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を向上させる、および／または以下の位置：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９における１つまたはそれ以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆｃγ受容体の対する親和性を向上させることができる。例示的な置換には、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄおよび３３２Ｅが含まれる。例示的なバリアントには、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔおよび２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔが含まれる。ＦｃγＲおよび補体相互作用を増強するための他の修飾には、以下に限定されないが、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７１、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５１および３９６Ｌが含まれる。これら修飾および他の修飾は、Ｓｔｒｏｈｌ、２００９年、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２０巻：６８５～６９１頁に概説されている。

Ｆｃγ受容体への結合を増大させるＦｃ修飾には、Ｆｃ領域のいずれか１つまたはそれ以上のアミノ酸の位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９におけるアミノ酸修飾が含まれ、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔと同様のＥＵ指標の番号付け（ＷＯ００／４２０７２）である。

Ｆｅｓに行われる他のＦｃ修飾は、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質への結合の低下または除去のためのものであり、これにより、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣなどのＦｃ媒介性のエフェクター機能を低下または除去することができる。例示的な修飾には、以下に限定されないが、位置２３４、２３５、２３６、２３７、２６７、２６９、３２５および３２８における置換、挿入および欠失が含まれ、番号付けは、ＥＵ指標による。例示的な置換には、以下に限定されないが、２３４Ｇ、２３５Ｇ、２３６Ｒ、２３７Ｋ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、３２５Ｌおよび３２８Ｒが含まれ、番号付けは、ＥＵ指標による。Ｆｃバリアントは、２３６Ｒ／３２８Ｒを含むことができる。ＦｃｙＲおよび補体相互作
用を低下させるための他の修飾には、置換２９７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３７Ａ、３１８Ａ、２２８Ｐ、２３６Ｅ、２６８Ｑ、３０９Ｌ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２９Ｓ、２３８Ｓ、２３３Ｐおよび２３４Ｖ、ならびに変異手段もしくは酵素手段による、またはタンパク質をグリコシル化しない細菌などの生物中での産生による、位置２９７におけるグリコシル化の除去が含まれる。これら修飾および他の修飾は、Ｓｔｒｏｈｌ、２００９年、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２０巻：６８５～６９１頁に概説されている。

場合により、Ｆｃ領域は、当業者に公知の追加のおよび／または代替的な位置に非天然アミノ酸残基を含むことができる（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第６，２７７，３７５号；同第６，７３７，０５６号；同第６，１９４，５５１号；同第７，３１７，０９１号；同第８，１０１，７２０号；ＰＣＴ特許公開ＷＯ００／４２０７２；ＷＯ０１／５８９５７；ＷＯ０２／０６９１９；ＷＯ０４／０１６７５０；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０３５７５２；ＷＯ０４／０７４４５５；ＷＯ０４／０９９２４９；ＷＯ０４／０６３３５１；ＷＯ０５／０７０９６３；ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０５／０９２９２５およびＷＯ０６／０２０１１４を参照されたい）。

阻害性受容体ＦｃγＲｌｌｂに対する親和性を増強するＦｃバリアントもまた使用することができる。このようなバリアントは、例えば、Ｂ細胞および単球を含めた、ＦｃγＲｌｌｂ^＋細胞に関連した免役モジュレート活性をＦｃ融合タンパク質にもたらすことができる。一実施形態では、Ｆｃバリアントは、１つまたはそれ以上の活性受容体に関連するＦｃγＲｌｌｂへの親和性の選択的増大をもたらす。ＦｃγＲｌｌｂに対する結合を改変するための修飾は、ＥＵ指標による、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６６、２６７、２６８、３２５、３２６、３２７、３２８および３３２からなる群から選択される位置における、１つまたはそれ以上の修飾を含む。ＦｃγＲｌｌｂ親和性を増強するための例示的な置換は、以下に限定されないが、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｆ、２３４Ｗ、２３５Ｄ、２３５Ｆ、２３５Ｒ、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３６Ｎ、２３７Ｄ、２３７Ｎ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６６Ｍ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２７Ｄ、３２７Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、３２８Ｙおよび３３２Ｅを含む。例示的な置換には、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３９Ｄ、２６６Ｍ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗおよび３２８Ｙが含まれる。ＦｃｙＲｌｌｂへの結合を増強するための他のＦｃバリアントには、２３５Ｙ／２６７Ｅ、２３６Ｄ／２６７Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／２６７Ｅ、２６７Ｅ／２６８Ｄ、２６７Ｅ／２６８Ｅおよび２６７Ｅ／３２８Ｆが含まれる。

そのリガンドに対するＦｃ領域の親和性および結合特性は、以下に限定されないが、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ））または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ解析）、および直接結合アッセイ、競合的阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）などの他の方法を含めた、当分野で公知の様々なインビトロアッセイ法（生化学的または免疫学的なものをベースとするアッセイ）により決定することができる。これらの方法および他の方法は、試験される１つまたはそれ以上の構成成分への標識を利用する、および／または以下に限定されないが、発色、蛍光、発光または同位体標識を含めた様々な検出方法を使用することができる。結合親和性および動力学の詳細説明は、抗体－免抗原相互作用に着目したＰａｕｌ，Ｗ．Ｅ．（編）、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９年）に見出される。

ある種の実施形態では、抗体が修飾されて、その生物学的半減期を向上させる。様々な手法が可能である。例えば、これは、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を向上させ
ることにより行うことができる。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載される通り、以下の残基：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６のうちの多くの１つまたはそれ以上を変異させることができる。特定の例示的な置換は、以下：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓおよび／またはＴ２５６Ｆのうちの１つまたはそれ以上を含む。代替的に、生物学的半減期を増加させるため、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載される通り、ＣＨＩまたはＣＬ領域内で改変されて、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから採取されるサルベージ受容体結合エピトープを含有することができる。ＦｃＲｎへの結合を高める、および／または薬物動態特性を改善する他の例示的なバリアントには、例えば、２５９１、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４ｌｌ、４３４Ｆ、４３４Ｙおよび４３４Ｘｌを含めた、位置２５９、３０８、４２８および４３４における置換を含む。ＦｃＲｎへのＦｃ結合を増大する他のバリアントには、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎら、２００４年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９巻（８号）：６２１３～６２１６頁、Ｈｉｎｔｏｎら、２００６年、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７６巻：３４６～３５６頁）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００１年、２７６巻（９号）：６５９１～６６０４頁）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３ｌ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Ｄａｌｌ’ＡｃｑｕａらＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００２年、１６９巻：５１７１～５１８０頁、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、２００６年、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２８１巻：２３５１４～２３５２４頁）が含まれる。ＦｃＲｎ結合をモジュレートするための他の修飾は、Ｙｅｕｎｇら、２０１０年、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、１８２巻：７６６３～７６７１頁に記載される。ある種の実施形態では、特定の生物学的特徴を有するハイブリッド型ＩｇＧアイソタイプを使用することができる。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッド型バリアントは、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域におけるＩｇＧ１の位置を２つのアイソタイプが異なる位置のＩｇＧ３からのアミノ酸と置き換えることにより構築することができる。したがって、１つまたはそれ以上の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２ｌ、４３５Ｒおよび４３６Ｆを含むハイブリッド型バリアントＩｇＧ抗体を構築することができる。本明細書に記載される他の実施形態では、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ハイブリッド型バリアントは、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域におけるＩｇＧ２の位置を２つのアイソタイプが異なる位置のＩｇＧ１からのアミノ酸と置き換えることにより構築することができる。したがって、１つまたはそれ以上の置換、例えば、以下のアミノ酸置換：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、－２３６Ｇ（位置２３６におけるグリシンの挿入を指す）および３２１ｈのうちの１つまたはそれ以上を含むハイブリッド型バリアントＩｇＧ抗体を構築することができる。

さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１における結合部位がマッピングされて、結合の改善されたバリアントが記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００１年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６巻：６５９１～６６０４頁を参照されたい）。位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９における特定の変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示されている。さらに、以下の組合せ変異体は、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａであり、後者はＦｃγＲＩＩＩａ結合およびＡＤＣＣ活性の増大を示すことが示された（Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１年）。カニクイザルにおける
ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最も大きな増大、ＦｃγＲＩＩｂ結合の低下および強力な毒性活性を示した、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を有するバリアントを含めた、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を強力に増強させた他のＩｇＧ１バリアントが特定されている（Ｌａｚａｒら、２００６年）。ＡＤＣＣ活性がインビトロでかなり増大するよう翻訳された、アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）およびセツキシマブ（ＥＧＦＲ特異的）などの抗体への三重変異の導入、およびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅバリアントが、サルにおいてＢ細胞を枯渇させる能力の増大を示した（Ｌａｚａｒら、２００６年）。さらに、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳がんのモデルにおいて、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増大、およびヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおけるＡＤＣＣ活性の同時増大を示した、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ変異を含有するＩｇＧ１変異体が特定されている（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎら、２００７年；Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍら、２０１１年）。使用することができる他のＦｃ変異体は以下：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６ＬおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む。

ある種の実施形態では、ＦｃγＲへの結合が減少したＦｃが選択される。例示的なＦｃ、例えば、ＦｃγＲ結合の減少したＩｇＧ１Ｆｃは、以下の３つのアミノ酸置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを含む。

ある種の実施形態では、補体結合の低下したＦｃが選択される。例示的なＦｃ、例えば、補体結合の低下したＩｇＧ１Ｆｃは、以下の２つのアミノ酸置換：Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを有する。

ある種の実施形態では、エフェクター機能を実質的に有していないＦｃが選択される。すなわち、ＦｃγＲへの結合の低下および補体結合が低下する。例示的なＦｃ、例えば、エフェクターのないＩｇＧ１Ｆｃは、以下の５つの変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。

ＩｇＧ４定常ドメインを使用する場合、ＩｇＧ１におけるヒンジ配列を擬似する置換Ｓ２２８Ｐを含ませて、これによりＩｇＧ４分子を安定化させることが、通常、好ましい。

ある種の態様では、本明細書に開示される結合性分子は、それぞれの修飾された抗体またはその断片のヒンジ領域に、直接、ＣＨ３ドメインを融合するよう操作される。他の構築物では、ペプチドスペーサーは、ヒンジ領域と修飾されたＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインとの間に挿入される。例えば、ＣＨ２ドメインが欠失されて、残りのＣＨ３ドメイン（修飾済みまたは未修飾）が、５～２０のアミノ酸スペーサーを有するヒンジ領域に結合された、適合性構築物が発現される。このようなスペーサーを付加させて、例えば、定常ドメインの調節要素が遊離して接近可能の状態のままである、またはヒンジ領域が可撓性を維持したままであるのを確実とすることができる。しかし、アミノ酸スペーサーは、一部の場合、免疫原性となることが証明され得、構築物に対する望まれない免疫応答を誘発することに留意すべきである。したがって、ある種の態様では、構築物に付加されたいずれのスペーサーも、修飾抗体の所望の生化学的質を維持するよう、比較的、非免疫原性となるか、または完全に省略されることさえある。

全定常領域ドメインの欠失に加えて、本明細書に開示される結合性分子は、数個のまたはたった１個のアミノ酸の部分的欠失または置換によって提供されることが理解されよう。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された領域における単一アミノ酸の変異は、Ｆｃ結合を実質的に低減させるのに十分となり得、これにより、腫瘍の局在化が向上する。さらに、
上で言及したように、開示されている結合性分子の定常領域は、生じた構築物のプロファイルを増強する１つまたはそれ以上のアミノ酸の変異または置換によって修飾することができる。この点で、修飾された抗体またはその抗原結合断片の構造および免疫原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存された結合部位（例えば、Ｆｃ結合）によってもたらされる活性を混乱させることが可能である。ある種の態様は、定常領域への１つまたはそれ以上のアミノ酸の付加を含んで、エフェクター機能の低下などの所望の特徴を向上させる、またはより多くの治療剤または診断剤の結合を実現することができる。このような態様では、選択された定常領域ドメインに由来する特定の配列が挿入または複製される。

さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、この抗体はグリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増大するために改変することができる。このような炭水化物の修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つまたはそれ以上の部位を改変することによって行うことができる。例えば、１つまたはそれ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を除去し、それによりその部位でのグリコシル化を取り除いた１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を行うことができる。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大することができる。このような手法は、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載される。

Ｎ２９７における定常領域のグリコシル化は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基（例えば、グリコシル化アミノ酸残基または隣接アミノ酸残基）を別の残基、例えばＮ２９７Ａ、Ｓ２９８Ｇ、Ｔ２９９Ａまたはそれらの任意の組合せに変異させることにより防止することができる。

さらにまたは代替的に、フコシル残基の量が低減した低フコシル化抗体、または二分するＧｌｃＮａｃ構造の増大した抗体などの改変されたタイプのグリコシル化を有する抗体を作製することができる。このような改変されたグリコシル化のパターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大することが実証されている。このような炭水化物の修飾は、例えば、宿主細胞において、抗体を改変されたグリコシル化機構により発現させることによって行うことができる。改変されたグリコシル化の機構を有する細胞は、当分野において記載されており、宿主細胞として使用することができ、この宿主細胞において、本明細書に記載される組換え抗体を発現させて、それによって改変されたグリコシル化を有する抗体を生成する。例えば、ＨａｎａｉらによるＥＰ１，１７６，１９５は、フコシル化トランスフェラーゼをコードする機能的に撹乱されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載しており、こうして、このような細胞株で発現した抗体は、低フコシル化を示す。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）が連結した炭水化物へのフルコースの結合能が低下しているバリアントＣＨＯ細胞株であるＬｅｄ３細胞を記載しており、やはり、その宿主細胞において発現した抗体の低フコシル化をもたらす（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７巻：２６７３３～２６７４０頁）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４３４２は、グリコタンパク質を修飾したグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するよう操作された細胞株であって、こうして、操作された細胞株で発現された抗体が増大する二分するＧｌｃＮａｃ構造を示し、これにより抗体のＡＤＣＣ活性が増大した細胞株を記載している（同様に、Ｕｍａｎａら（１９９９年）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７巻：１７６～１８０頁を参照されたい）。

本明細書に記載される抗体の別の修飾は、ＰＥＧ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を延長するためＰＥＧ化することができる。抗体をＰＥＧ
化するため、抗体またはその断片を、通常、１つまたはそれ以上のＰＥＧ基を抗体または抗体断片に結合する条件下で、ＰＥＧの反応性エステル誘導体またはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる。好ましくは、ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または反応性水溶性ポリマーの類似体）とのアシル化反応またはアルキル化反応により行われる。本明細書で使用する場合、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ－またはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導するために使用されるＰＥＧの任意の形態を包含することが意図されている。ある種の実施形態では、ＰＥＧ化されている抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をＰＥＧ化する方法は、当分野で公知であり、本明細書に記載される抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６、およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照されたい。

Ｖ．イムノコンジュゲートおよび融合タンパク質
本開示はまた、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗体）のいずれかを含むイムノコンジュゲートを提供する（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）。一態様では、イムノコンジュゲートは、薬剤に連結されている、本明細書に開示される抗体または抗原結合部分を含む。特定の一態様では、イムノコンジュゲートは、薬剤（例えば、治療剤として、または診断剤として）に連結している本明細書に開示される二重特異性分子を含む。

したがって、本開示は、本明細書に開示される抗ＦＩＸに基づく、本明細書に開示される抗ＦＸに基づく、または本明細書に開示される二重特異性抗体、例えば抗ＦＩＸ特異性および抗ＦＸ特異性を含む二重特異性抗体に基づくイムノコンジュゲートを提供する。

一部の態様では、イムノコンジュゲートは、少なくとも１つの治療剤または診断剤にコンジュゲートされている本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のいずれかを含む。一部の態様では、イムノコンジュゲートは、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のポリペプチド鎖中の側鎖またはアミノ酸と治療部分または診断部分との間に介在されている少なくとも１つの任意選択のスペーサーをさらに含む。一部の態様では、少なくとも１つのスペーサーは、ペプチドスペーサーである。他の態様では、１つのスペーサーは非ペプチドスペーサーである。一部の態様では、スペーサーは、酸に不安定なスペーサー（例えば、ヒドラジン）など、不安定である。他の態様では、スペーサーは、酵素により切断可能なペプチド、例えば、切断可能なジペプチドである。一部の態様では、スペーサーは、切断不能（加水分解に安定である）であり、例えば、チオエーテルスペーサーまたは立体障害ジスルフィドスペーサーである。

一部の態様では、イムノコンジュゲートは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の治療部分または診断部分を含む。一部の態様では、治療部分または診断部分はすべて同じである。一部の態様では、少なくとも１つの治療部分または診断部分は他と異なる。一部の態様では、治療部分または診断部分はすべて異なる。一部の態様では、スペーサー（例えば、ペプチドおよび／または非ペプチドスペーサー）は、すべて同じである。一部の態様では、少なくとも１つのスペーサーはその他と異なる。さらに別の態様では、スペーサーはすべて異なる。

一部の態様では、治療部分または診断部分はそれぞれ、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のＦｃ領域における特定の位置のアミノ酸の側鎖に化学的にコンジュゲートされて
いる。

一部の態様では、Ｆｃ領域中の特定の位置は、２３９、２４８、２５４、２５８、２７３、２７９、２８２、２８４、２８６、２８７、２８９、２９７、２９８、３１２、３２４、３２６、３３０、３３５、３３７、３３９、３５０、３５５、３５６、３５９、３６０、３６１、３７５、３８３、３８４、３８９、３９８、４００、４１３、４１５、４１８、４２２、４３５、４４０、４４１、４４２、４４３、４４６、位置２３９と２４０との間の挿入、およびそれらの組合せからなる群から選択され、アミノ酸の位置の番号付けは、Ｋａｂａｔに説明されているＥＵ指標に従う。

一部の態様では、治療部分または診断部分がコンジュゲートされている、アミノ酸側鎖は、スルフヒドリル側鎖、例えばシステインアミノ酸のスルフヒドリル基である。一部の態様では、少なくとも１つの治療部分または診断部分は、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のＦｃ領域の外側の位置に位置するアミノ酸の側鎖に化学的にコンジュゲートされている。

一部の態様では、治療部分または診断部分はすべて、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のＦｃ領域の外側の位置に位置するアミノ酸の側鎖に化学的にコンジュゲートされている。一部の態様では、少なくとも１つの治療部分または診断部分は、当分野で公知の組換え技法を使用して、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のポリペプチド鎖に遺伝的に組み入れられる。

一部の実施形態では、本明細書に開示されるイムノコンジュゲートは、損傷の部位への抗体または本明細書に開示される結合性分子を標的とする部分を含むことができる。特定の実施形態では、損傷の部位への抗体または結合性分子を標的とする部分は、血小板標的部分、例えば血小板標的部分を含む。

本明細書に開示されるイムノコンジュゲートは、別の分子（例えば、ペプチド、低分子薬物、検出可能な分子など）に誘導化または連結された（例えば、化学的または組換えによる）本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）の少なくとも１つを含む。一般に、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、特定抗原結合部位（例えば、ＦＩＸａのエピトープおよび／またはＦＸｚのエピトープ）へのその結合が、例えば、化学的誘導もしくは酵素誘導、遺伝的融合または標識によって悪影響を及ぼさないよう、誘導化される。

したがって、本開示の結合性分子は、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）の無傷形態および修飾形態のどちらも含むことが意図されている。例えば、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）またはその抗原結合部分は、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）と別の分子（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなど）との結合を媒介することができる、医薬剤、検出剤、および／またはタンパク質もしくはペプチドなどの、１つまたはそれ以上の他の分子実体に機能的に連結する（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合またはその他）ことができる。

誘導分子の１つのタイプは、２つ以上の分子実体、例えば、本明細書に開示される結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）および治療部分を架橋することにより生成することができる。好適な架橋剤は、ヘテロ二官能性のもの、すなわち、適切なスペーサー（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル）；またはホモ二官能性（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）によって分離された個別の反応性基を２つ有するものを含む。このような架橋剤は、例えば、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩから入手可能である。さらなる二官能性カップリング剤には、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン２，６－ジイソシアネートなど）およびビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）が含まれる。

別のタイプの誘導分子は、検出可能な標識を取り込ませることにより生成することができる。有用な検出剤は、蛍光化合物（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、塩化５－ジメチルアミン－１－ナフタレンスルホニル、フィコエリスリン、ランタニド蛍光体など）、検出に有用な酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼなど）、二次レポータにより認識されるエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合性ドメイン、エピトープタグなど）を含む。一部の態様では、検出可能な標識は、少なくとも１つのスペーサーアームによって結合することができる。スペーサーアームは、潜在的な立体障害を低下させるため、様々な長さとすることができる。

本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）はまた、例えば、診断目的のために、放射標識により標識することができる。本明細書に開示される結合性分子はまた、化学基、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル基、エチル基、または炭水化物基などのポリマーにより誘導体化される。これらの基は、血清半減期の延長または組織結合の向上などの、結合性分子（例えば、本明細書に開示される抗ＦＩＸ、抗ＦＸまたは二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）の生物学的特徴を改善するために有用となり得る。

ＶＩ．核酸、発現ベクターおよび細胞
本開示はまた、本明細書に開示される結合性分子、例えば、本明細書に開示される抗体または結合性分子のいずれかをコードする核酸を提供する。一部の態様では、核酸は、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合部分の重鎖および／または軽鎖可変領域、または本明細書に開示される二重特異性分子もしくは多重特異性分子（例えば、抗体）をコードする。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態、またはＤＮＡの形態をとることができる。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡが含まれる；および一本鎖がコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖とすることができる場合、二本鎖または一本鎖とすることができる。ある種の態様では、ＤＮＡは、非天然組換え抗体を生成するために使用されるｃＤＮＡである。一部の態様では、ＲＮＡは、それを必要とする対象に投与した後、ここで開示されている結合性分子を発現することができるｍＲＮＡである。一部の態様では、ｍＲＮＡの発現は、インビボとすることができる。ｍＲＮＡ発現はまた、インビトロまたはエクスビボとすることができる。一部の態様では、本明細書に開示
される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）をコードするｍＲＮＡは、化学的に修飾されて、例えば、修飾ヌクレオシド間連結基（例えば、ホスホロチオエート）、または修飾塩基（例えば、シュードウリジン、チオウリジンなど）を含むことができる。

ある種の態様では、ポリヌクレオチドが単離される。ある種の態様では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。ある種の態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、宿主細胞からのポリペプチドの発現および分泌を補助する、ポリヌクレオチド（天然または非相同性のどちらか）への同一リーディングフレームにおいて融合された成熟ポリペプチドのコード配列を含む（例えば、細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）。リーダー配列を有するポリペプチドは、プレプロテインであり、ポリペプチドの成熟形態を形成するための宿主細胞により切断されたリーダー配列を有することができる。ポリヌクレオチドはまた、成熟タンパク質、および追加のアミノ酸残基、例えば、５’アミノ酸残基である、結合性分子の前駆タンパク質をコードすることができる。ある種の態様では、ポリヌクレオチドは、ある種の宿主細胞のためにコドン使用を最適化するために改変される。

ある種の態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、コードされたポリペプチドの精製を可能にする、非相同性マーカー配列と同一のリーディングフレームに融合された、成熟結合性分子、例えば、本明細書に開示される、結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）、またはその抗原結合断片のコード配列を含む。

例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合、マーカーに融合される成熟ポリペプチドを精製するための、例えば、ｐＱＥ－９ベクターによって供給されるヘキサ－ヒスチジン（Ｈｉｓ６）タグとすることができる。他の態様では、マーカー配列は、哺乳動物宿主（例えば、ＣＯＳ－７細胞）が使用される場合、例えば、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質から誘導されるヘマグルチニン（ＨＡ）タグとすることができる。

本開示は、例えば、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）の断片、アナログおよび誘導体をコードする記載されているポリヌクレオチドのバリアントにさらに関する。ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域またはそれらの両方に変質を含むことができる。一部の態様では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの特性または活性を改変しない変質を含む。一部の態様では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝コードの退化によるサイレント置換によって生じる。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由のため、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化するために生成することができる（ヒトｍＲＮＡ中のコドンを大腸菌などの細菌宿主によって好ましいものに変える）。

一部の態様では、本明細書に開示される結合性分子またはその抗原結合断片をコードするＤＮＡ配列は、例えば、オリゴヌクレオチド合成装置を使用する化学合成によって構築することができる。このようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列、および目的の組換えポリペプチドが産生される宿主細胞に好都合のコドンを選択することに基づいて設計される。標準法は、目的の単離されたポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド配列を合成するために適用することができる。例えば、完全アミノ酸配列を使用して、逆翻訳された遺伝子を構築することができる。さらに、特定の単離されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含有するＤＮＡオリゴマーを合成することができる。例えば、所望のポリペプチドの一部をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成して、次に、ライゲーションすることができる。それぞれのオリ
ゴヌクレオチドは、一般的に、相補的集合体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｓｓｅｍｂｌｙ）のための５’または３’突出部を含む。

同様に、発現ベクター、または本明細書に開示される１つまたはそれ以上の核酸分子を含む発現ベクターの組合せ物が提供される。一旦、集合すると（合成、部位特異的変異誘発または別の方法による）、目的の単離された特定のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、発現ベクターに挿入され、所望の宿主においてタンパク質の発現にとって適切な、発現調節配列に操作可能に連結される。適切な集合体は、例えば、好適な宿主における、ヌクレオチドの配列決定、制限マッピング、および生物活性なポリペプチドの発現により確認することができる。当分野において周知の通り、宿主において、トランスフェクトされた遺伝子の高い発現レベルを得るために、遺伝子は、選択された発現宿主において機能的な転写および翻訳発現調節配列に操作可能に連結されていなければならない。

ある種の態様では、組換え発現ベクターは、本明細書に開示される結合性分子をコードするＤＮＡを増幅してこれを発現するために使用される。組換えの発現ベクターは、例えば、哺乳動物、微生物、ウイルスまたは昆虫遺伝子に由来する、好適な転写または翻訳調節要素に操作可能に連結されている、本明細書に開示される結合性分子またはその抗原結合断片のポリペプチド鎖をコードする、合成のまたはｃＤＮＡ由来のＤＮＡ断片を有する、複製可能なＤＮＡ構築物である。

転写単位は、一般に、以下に詳述されている通り、（１）遺伝子発現における調節役割、例えば転写プロモータまたはエンヘンサーを有する、遺伝要素（単数または複数）、（２）ｍＲＮＡに転写されてタンパク質に翻訳される、構造配列またはコード配列、および（３）適切な転写および翻訳開始配列ならびに終止配列からなる集合体を含む。このような調節要素は、転写を制御するオペレータ配列を含むことができる。

宿主における複製能力は、通常、複製の起源よび選択遺伝子により与えられ、さらに組み込まれ得る形質転換の認識を容易にする。ＤＮＡ領域は、これらの領域が互いに機能的に関連している場合、操作可能に連結されている。例えば、ポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現される場合、シグナルペプチド（分泌性リーダー）のＤＮＡが、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結されている。プロモータは、コード配列の転写を制御する場合、この配列に操作可能に連結されている。またはリボソーム結合部位が、翻訳を可能にするよう位置されている場合、コード配列に操作可能に連結されている。酵母発現系に使用するよう意図されている構造要素には、宿主細胞により翻訳されたタンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列が含まれる。代替的に、組換えタンパク質が、リーダーまたはトランスポート配列なしに発現される場合、この組換えタンパク質は、Ｎ末端メチオニン残基を含むことができる。この残基は、続いて、場合により、発現した組換えタンパク質から切断されて、最終生成物をもたらすことができる。

発現調節配列および発現ベクターの選択は、宿主の選択に依存すると予想される。幅広い発現宿主／ベクターの組合せを使用することができる。真核生物の宿主に有用な発現ベクターには、例えば、ＳＶ４０、ウシヘルペスウイルス、アデノウイルスおよびサイトメガウイルスに由来する、発現調節配列を含むベクターが含まれる。細菌宿主に有用な発現ベクターには、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびこれらの誘導体、Ｍ１３などの広宿主域プラスミド、および繊維状一本鎖ＤＮＡファージを含めた、大腸菌に由来するプラスミドなどの既知の細菌プラスミドが含まれる。

本開示はまた、本明細書に開示される核酸（単数または複数）、または本明細書に開示される発現ベクター（単数または複数）を含む細胞を提供する。一部の態様では、細胞は
、本明細書に開示される発現ベクター（単数または複数）で形質転換される。一部の態様では、細胞は、組換え発現のための宿主細胞である。例えば、一部の態様では、宿主細胞は、原核細胞、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞またはＣＯＳ細胞である。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌または桿菌が含まれる。高等真核細胞には、哺乳動物起源の確立された細胞株が含まれる。細胞不含の翻訳系も使用することができる。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞の宿主と使用するのに好適なクローニングおよび発現ベクターは、Ｐｏｕｗｅｌｓら（ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８５年）により記載されており、この関連開示は、参照により本明細書に組み入れられる。抗体生成を含むタンパク質生成の方法に関する追加情報は、例えば、米国特許出願第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号および同第６，６６０，５０１号、および国際特許出願ＷＯ０４００９８２３に見出すことができ、その各々の全体が参照により明細書に組み入れられる。

哺乳動物細胞における組換えタンパク質の発現を行うことができるが、これは、このようなタンパク質は全体的に正確にフォールディングされており、適切に修飾されており、十分に機能的であるためである。好適な哺乳動物の宿主細胞株の例には、ＨＥＫ－２９３およびＨＥＫ－２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ２３巻：１７５頁、１９８１年）により記載されている、サル腎細胞のＣＯＳー７系、および例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳＯ、ＨｅＬａおよびＢＨＫ細胞株を含めた他の細胞株が含まれる。哺乳動物発現ベクターは、複製起源などの非転写要素、発現される遺伝子に連結されている好適なプロモータおよびエンヘンサー、他の５’または３’フランキング非転写配列、ならびに必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー部位およびアクセプター部位などの５’または３’非転写配列、および転写終止配列を含むことができる。昆虫細胞における非相同性タンパク質の生成用のバキュロウイルス系が、ＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６巻：４７頁（１９８８年）によって概説されている。

形質転換宿主によって生成された本明細書に開示される結合性分子またはその抗原結合断片は、任意の好適な方法によって精製することができる。このような標準法には、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティーカラムクロマトグラフィーおよびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質精製用の他の標準技法が含まれる。ヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼなどの親和性タグなどをタンパク質に結合させて、適切な親和性カラムに通すことにより、容易な精製が可能となり得る。単離したタンパク質はまた、例えば、タンパク質加水分解、核磁気共鳴またはＸ線結晶学を使用して、物理的に特徴付けることができる。

例えば、培養培地に組換えタンパク質を分泌する系に由来する上澄み液は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡＭＩＣＯＮ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅＰＥＬＬＩＣＯＮ（登録商標）の限外ろ過ユニットを使用して、まず濃縮することができる。濃縮工程の後に、濃縮物を好適な精製マトリックスに適用することができる。代替的に、陰イオン交換樹脂、例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまたは基質を使用することができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、タンパク質精製に一般に使用される他のタイプのものとすることができる。代替的に、陽イオン交換工程を使用することができる。

好適な陽イオン交換体は、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスを含む。最後に、疎水性ＲＰ－ＨＰＬＣ媒体、例えば、ペンダントメチ
ルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用する、１つまたはそれ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）工程を使用して、本明細書に開示される結合性分子またはその抗原結合部分をさらに精製することができる。上述の精製工程の一部またはすべてが、様々に組み合わされてさらに使用され、均一な組換えタンパク質を得ることができる。

細菌培養物中で生成された本明細書に開示される組換え結合性分子またはその抗原結合部分は、例えば、細胞ペレットから最初に抽出し、次いで、濃縮、塩析出、水性イオン交換またはサイズ排除クロマトグラフィー工程のうちの１つまたはそれ以上により単離することができる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、最終精製工程に使用することができる。組換えタンパク質の発現に使用された微生物細胞は、凍結－解凍サイクル、音波照射、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含めた、任意の従来的な方法により、破壊することができる。

抗体および他のタンパク質を精製するための当分野において公知の方法はまた、例えば、そのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願番号ＵＳ２００８０３１２４２５、ＵＳ２００８０１７７０４８およびＵＳ２００９０１８７００５に記載されるものを含む。

ＶＩＩ．作製方法および特徴付け
本開示はまた、本明細書に開示される結合性分子、例えば抗体を製造する方法を提供する。一部の態様では、（ｉ）抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分、（ｉｉ）抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分、または（ｉｉｉ）本明細書に開示される二重特異性分子を生成する方法は、細胞において（例えば、宿主細胞において）、その抗体、その抗原結合部分または二重特異性分子を発現させる工程、および細胞からの抗体、その抗体結合部分または二重特異性分子を単離する工程を含む。

本開示は、二重特異性分子を生成する方法であって、二重特異性分子の発現を可能にする条件下で、本明細書に開示される宿主細胞を培養する工程を含む方法を提供する。同様に、本明細書に開示される二重特異性分子を生成する方法は、ヘテロ二量化を増強する条件をさらに含む。

本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、当分野において公知の方法によって製造することができる。例えば、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ２５６巻：４９５頁によって記載されているものなどのハイブリドーマ法を使用して生成することができる。

ハイブリドーマ法を使用して、上記の通り、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物が免疫付与されて、免疫抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発させる。リンパ球はまた、インビトロで免役付与することができる。免疫付与後、リンパ球を単離して、例えば、ポリエチレングリコールを使用して、好適な骨髄腫細胞株と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成させ、この細胞を次に、未融合リンパ球および骨髄腫細胞から選別して取り出すことができる。免疫沈降、イムノブロッティングにより、またはインビトロ結合アッセイ（例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）；酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））により決定される、選別した抗原を特異的に指向するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを、標準法（Ｇｏｄｉｎｇ、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、１９８６年）を使用するインビトロ培養物中、または動物における腹水
腫瘍としてインビボでのどちらかで増殖させることができる。次に、モノクローナル抗体は、上記のポリクローナル抗体に関して記載されている培養培地または腹水から精製することができる。

本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換えＤＮＡ法を使用して作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを使用する、ＲＴ－ＰＣＲによるなど、成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から単離され、それらの配列は、慣用的な手順を使用して決定される。次に、重鎖および軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドは、好適な発現ベクターにクローニングされ、この発現ベクターは、これがなければ、免疫グロブリンタンパク質を生成しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされると、モノクローナル抗体が、宿主細胞によって生成される。

同様に、所望の種の組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む分子は、記載されている所望の種のＣＤＲを発現する、ファージディスプレイライブラリーから単離することができる（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ３４８巻：５５２～５５４頁（１９９０年）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５２巻：６２４～６２８頁（１９９１年）；およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１～５９７頁（１９９１年））。

本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）をコードするポリヌクレオチドは、組換えＤＮＡ技法を使用して、いくつかの異なる方法でさらに修飾されて、代替的な結合性分子を生成することができる。一部の態様では、例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインを、（１）例えば、ヒト抗体の領域の代わりにして、キメラ抗体を生成することができる、または（２）非免疫グロブリンポリペプチドの代わりにして、融合抗体を生成することができる。一部の態様では、定常領域は摘み取られ、または除去されて、モノクローナル抗体の所望の抗体断片を生成する。可変領域の部位特異的または高密度突然変異誘発を使用して、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化することができる。

ある種の態様では、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。ヒト抗体は、当分野において公知の様々な技法を使用して、直接、製造することができる。インビトロで免疫付与された、または標的抗原を対象とする抗体を生成する免役付与された個体から単離された、不死化ヒトＢリンパ球を生成することができる（例えば、Ｃｏｌｅら、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ、ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５年）；Ｂｏｅｍｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：８６～９５頁（１９９１年）；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい）。次に、不死化Ｂリンパ球中で抗体をコードする１つまたはそれ以上のｃＤＮＡを製造して、抗体の非天然組換え型を発現させるための発現ベクターおよび／または非相同性宿主細胞に挿入することができる。

同様に、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、ファージライブラリーから選択することができ、この場合、このファージライブラリーは、例えば、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４巻：３０９～３１４頁（１９９６年）；Ｓｈｅｅｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５巻：６１５７～６１６２頁（１９９８年）；Ｈｏｏｇｅｎ
ｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：３８１号（１９９１年）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１頁（１９９１年）に記載される、非相同性ファージタンパク質との融合タンパク質として、ヒト抗体またはその断片を発現する。抗体ファージライブラリーの生成および使用に関する技法はまた、そのそれぞれの全体が参照により組み入れられる、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号；同第６，５９３，０８１号；同第６，３００，０６４号；同第６，６５３，０６８号；同第６，７０６，４８４号；および同第７，２６４，９６３号に記載される。

親和性成熟戦略および鎖シャッフリング戦略（その全体が組み入れられる、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０巻：７７９～７８３頁（１９９２年））は、当分野において公知であり、高い親和性ヒト抗体またはその抗原結合断片を生成するために使用することができる。

一部の態様では、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、ヒト化抗体とすることができる。ヒト化抗体、または再表面化非ヒト抗体またはヒト抗体を操作する方法もまた、使用することができ、当分野において周知である。ヒト化、再表面化または同様に操作された抗体は、非ヒト、例えば、以下に限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物の供給源に由来する、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と称される残基により置き換えられ、この移入残基は、既知のヒト配列の、「移入」可変ドメイン、定常ドメインまたは他のドメインから、通常、採取される。このような移入配列を使用して、免疫原性を低下させるか、または結合性、親和性、会合速度、解離速度、アビディティー、特異性、半減期、もしくは当分野において公知の任意の他の好適な特徴を低下、向上または改変することができる。一般に、ＣＤＲ残基は、直接的かつほとんど実質的に、特定の抗結合部位（例えば、エピトープ）への結合に影響を及ぼすことに関与する。したがって、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部またはすべてが維持される一方、可変領域および定常領域の非ヒト配列は、ヒトアミノ酸または他のアミノ酸により置き換えられる。ある種の態様では、ヒトＣＤＲは、動物モデル系、例えば「マウス化」抗体において、免疫原性を低下させた抗体を作製するための非ヒト抗体足場に挿入される。

一部の態様では、本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、抗原結合部位（例えば、エピトープ）に対して高い親和性、および他の好都合な生物学的特性を維持して、ヒト化、再表面化または操作することができる。この目的を達成するため、ヒト化された（またはヒト）、操作された、または再表面化された結合性分子は、親配列、操作配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用する、親配列、ならびに様々な概念上のヒト化および操作生成物の解析過程によって、場合により製造することができる。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。

選択された候補免疫グロブリン配列の可能性の高い三次元立体構造を例示および表示する、コンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの精査により、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の可能性が高い役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能となる。このように、フレームワーク残基を選択して、コンセンサス配列および移入配列から組み合わせることができ、この結果、標的抗原に対する親和性の向上などの所望の抗体特徴が実現する。

本明細書に開示される結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）のヒト化、再表面化または操作は、以下に限定されないが、それらに引用されている参照文献を含めた、そのそれぞれが、参照により本明細書に組み入れられる、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３２１巻：５２２頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２巻：３２３頁（１９８８年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９巻：１５３４頁（１９８８年））、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１巻：２２９６頁（１９９３年）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１頁（１９８７年）、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９巻：４２８５頁（１９９２年）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１巻：２６２３頁（１９９３年）、米国特許第５，６３９，６４１号、５，７２３，３２３号；同第５，９７６，８６２号；同第５，８２４，５１４号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７６３，１９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６６，８８６号；同第５，７１４，３５２号；同第６，２０４，０２３号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，２２５，５３９号；同第４，８１６，５６７、同第７，５５７，１８９号；同第７，５３８，１９５号；および同第７，３４２，１１０号；ＷＯ９０／１４４４３；ＷＯ９０／１４４２４；ＷＯ９０／１４４３０；およびＥＰ２２９２４６に記載される方法などの任意の公知の方法を使用して行うことができる。

ある種では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）から得られる抗体断片が提供される。様々な技法が、抗体断片の生成に公知である。伝統的に、これらの断片は、無傷抗体のタンパク質分解消化によって誘導される（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２４巻：１０７～１１７頁（１９９３年）；Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年））。

ある種の態様では、抗体断片は、組換えにより生成される。Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖ抗体断片は、すべて、大腸菌または他の宿主細胞において発現され、ここから分泌され、こうして、多量のこれらの断片の生成が可能となる。このような抗体断片はまた、上で議論した抗体ファージライブラリーから単離することもできる。これらの抗体断片はまた、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されている、線状抗体とすることもできる。抗体断片を生成するための他の技法は、当業者に明白である。

技法は、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）と同じエピトープに特異的な一本鎖抗体の生成のために適合することができる。さらに、方法は、Ｆａｂ発現ライブラリー（例えば、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６巻：１２７５～１２８１頁（１９８９年））の構築のために適合されて、ＦＩＸおよび／もしくはＦＸ、またはそれらの誘導体、断片、アナログもしくはホモログに対する所望の特異性を有する、モノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ効果的な特定を可能にすることができる。以下に限定されないが：（ａ）抗体分子のペプシン消化により生成するＦ（ａｂ’）_２断片；（ｂ）Ｆ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋を減少することにより生成するＦａｂ断片、（ｃ）パパインおよび還元剤による抗体分子の処置によって生成するＦａｂ断片、および（ｄ）Ｆｖ断片を含めた抗体断片を、当分野における技法により生成することができる。

本明細書において開示されている結合性分子およびその抗原結合部分、バリアント、またはその誘導体は、当分野において公知の任意の方法により免疫特異的結合をアッセイすることができる。使用することができる免疫アッセイは、以下に限定されないが、数例を挙げると、ウエスタンブロット、放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッ
セイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、イムノ拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテインＡ免疫アッセイを含む。このようなアッセイは、決まった手順であり、当分野で周知である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、（１９９４年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．、ＮＹ）、第１巻を参照されたい）。

本明細書において開示されている結合性分子、その抗原結合部分、バリアントまたはその誘導体の所与の多くの結合活性は、周知の方法により決定することができる。当業者は、型通りの実験の使用によって、各決定の操作条件および最適アッセイ条件を決定することができよう。

本明細書において開示されている結合性分子またはその抗原結合部分の結合特徴の決定に好適な方法および試薬は、当分野で公知である、および／または市販されている。このような速度論的解析のために設計されている装置およびソフトウェアは、市販されている（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＫｉｎＥｘａＳｏｆｔｗａｒｅ、ＳａｐｉｄｙｎｅＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。

本発明の実施は、特に示さない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技法を使用し、これらは、当分野の範囲内にある。このような技法は、文献中に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（編）（１９８９年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（第２版；ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（編）（１９９２年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇｓＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ（編）（１９８５年）ＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇ、Ｉ巻およびＩＩ巻；Ｇａｉｔ（編）（１９８４年）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４，６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ（編）（１９８４年）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ（編）（１９８４）ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＡｎｄＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７年）ＣｕｌｔｕｒｅＯｆＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ（ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；ＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＣｅｌｌｓＡｎｄＥｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬＰｒｅｓｓ）（１９８６年）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４年）ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅＴｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅｔｒｅａｔｉｓｅ、ＭｅｔｈｏｄｓＩｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ（編）（１９８７）ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒＶｅｃｔｏｒｓＦｏｒＭａｍｍａｌｉａｎ
Ｃｅｌｌｓ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら（編）、ＭｅｔｈｏｄｓＩｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１５４巻および１５５巻；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ（編）（１９８７年）ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓＩｎＣｅｌｌＡｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；ＷｅｉｒおよびＢｌａｃｋｗｅｌｌ（編）（１９８６年）ＨａｎｄｂｏｏｋＯｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉ～ＩＶ巻；ＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、（１９８６年）；およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９８９年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇ
ｙ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍｄ．）を参照されたい。

抗体操作の一般原理は、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（編）（１９９５年）Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版；ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ）に説明されている。タンパク質操作の一般原理は、Ｒｉｃｋｗｏｏｄら（編）（１９９５年）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬＰｒｅｓｓａｔＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇ．）に説明されている。抗体および抗体－ハプテン結合の一般原理は、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ（１９８４年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第２版；ＳｉｎａｕｅｒＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．）；およびＳｔｅｗａｒｄ（１９８４年）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴｈｅｉｒＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎ（ＣｈａｐｍａｎａｎｄＨａｌｌ、ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）に説明されている。さらに、当分野で公知であり、具体的に記載されていない免疫学における標準法は、一般に、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｓｔｉｔｅｓら（編）（１９９４年）ＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第８版；Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃｏｎｎ．）およびＭｉｓｈｅｌｌおよびＳｈｉｉｇｉ（編）（１９８０年）ＳｅｌｅｃｔｅｄＭｅｔｈｏｄｓｉｎＣｅｌｌｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏ．、ＮＹ）に従う。

免疫学の一般原理を説明する標準的な参照研究には、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｋｌｅｉｎ（１９８２年）Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅｏｆＳｅｌｆ－ＮｏｎｓｅｌｆＤｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ）；Ｋｅｎｎｅｔｔら（編）（１９８０年）ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ：ＡＮｅｗＤｉｍｅｎｓｉｏｎｉｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｎａｌｙｓｅｓ（ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ、ＮＹ）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ（１９８４年）、「ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」ｉｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（編）、Ｂｕｒｄｅｎら、（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）；Ｇｏｌｄｓｂｙら（編）（２０００年）ＫｕｂｙＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版；Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎｄ＆Ｃｏ．）；Ｒｏｉｔｔら（２００１年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第６版；Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍｏｓｂｙ）；Ａｂｂａｓら（２００５年）ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第５版；ＥｌｓｅｖｉｅｒＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅｓＤｉｖｉｓｉｏｎ）；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（２００１年）ＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ）；Ｌｅｗｉｎ（２００３年）ＧｅｎｅｓＶＩＩＩ（ＰｒｅｎｔｉｃｅＨａｌｌ２００３年）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ）；ＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ（２００３年）ＰＣＲＰｒｉｍｅｒ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ）が含まれる。

ＶＩＩＩ．医薬組成物
本開示はまた、例えば、（ｉ）本明細書において開示されている抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示されている二重特異性分子（例えば、二重特異性抗体）、または本明細書において開示されているイムノコンジュゲート、および（ｉｉ）担体を
含む医薬組成物を提供する。

特に、本開示は、以下、
（１）以下からなる群から選択される、少なくとも１つの治療活性構成成分または診断活性構成成分、
（ｉ）本明細書において開示されている結合性分子、例えば抗ＦＩＸ抗体またはその抗原結合部分、抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分、抗ＦＩＸ特異性および／または抗ＦＸ特異性を含む二重特異性分子；
（ｉｉ）それらの誘導体、例えば本明細書において開示されている結合性分子に所望の特性（例えば、血漿中半減期の延長）をもたらす、非相同性部分を有するイムノコンジュゲート、融合タンパク質または誘導体；
（ｉｉｉ）（ｉ）の結合性分子をコードするポリヌクレオチドおよび／または（ｉｉ）の誘導体；
（ｉｖ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチドを含むベクター；
（ｖ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチドまたは（ｉｖ）のベクターを含む細胞；または
（ｖｉ）それらの組合せ、および
（２）１つまたはそれ以上の担体、添加剤および／または賦形剤
を含む、医薬組成物（例えば、治療用または診断用組成物）を提供する。

本明細書において開示されている医薬組成物は、獣医学的使用に、またはヒトにおける医薬品用途に好適となり得る。本明細書において開示されている医薬組成物は、通常、本明細書に記載されている１つまたはそれ以上の治療的または診断的に活性な構成成分、ならびに１種もしくはそれ以上の担体、添加剤および／または賦形剤を含む。使用される医薬組成物（例えば、乾燥粉末、液状製剤など）、ならびに添加剤、賦形剤および／または担体の形態は、該組成物の所期の使用、治療的又は診断的用途、および投与形式に依存する。

本明細書に記載されている治療的または診断的に活性な構成成分を含む医薬組成物は、以下に限定されないが、障害を診断する、検出するまたはモニタリングする際に、障害または１つもしくはそれ以上のその症状を予防する、処置する、管理するまたは改善する際に、ならびに／または研究に使用するためのものである。

治療的用途の場合、本医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む滅菌医薬組成物の一部として供給される。この医薬組成物は、任意の好適な形態（患者にそれを投与する所望の方法に応じる）にあることができる。投与を行う方法は、当業者に公知である。本医薬組成物は、経口、経皮、皮下、経鼻、静脈内、経筋肉、腫瘍内、鞘内、局所的または局部的などの様々な経路によって患者に投与することができる。任意の所与の場合において投与するための最も好適な経路は、特定の治療的または診断的に活性な構成成分、対象、ならびに疾患の性質および重症度、ならびに対象の身体状態に依存する。通常、医薬組成物は皮下に投与されるであろう。

医薬組成物は、用量あたり本明細書に記載されている所定量の治療的または診断的に活性な構成成分を含有する単位剤形で、好都合に供給される。単位用量に含まれる治療的または診断的に活性な構成成分の量は、処置または診断されている疾患、および当分野で周知の他の因子に依存すると予想される。このような単位投与量は、単回投与に好適な治療的または診断的に活性な構成成分をある量で含有する凍結乾燥粉末の形態、または液体の形態とすることができる。乾燥粉末の単位剤形は、シリンジ、好適な量の賦形剤および／または投与に有用な他の構成成分を備えたキット中に包装することができる。液状形態の単位投与量は、単回投与に好適な治療的または診断的に活性なある量の構成成分を事前に充填したシリンジの形態で好都合に供給することができる。

本医薬組成物はまた、多回投与に好適な治療的または診断的に活性な構成成分の量を含有するバルク形態で供給することもできる。

本医薬組成物はまた、投与用の指示書と共に、容器、パックまたはディスペンサー中に含まれる。

医薬組成物は、所望の純度を有する本明細書に記載されている治療的または診断的に活性な構成成分を、通常、当分野において使用される任意選択の薬学的に許容される担体、添加剤または安定剤（これらはすべて、本明細書において「担体」と称される）、すなわち緩衝化剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性界面活性剤、抗酸化剤および他の様々な添加物と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液剤として保管するために製造することができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版（Ｏｓｏｌ（編）１９８０年）およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ、第２２版（Ａｌｌｅｎ、ＬｏｙｄＶ．Ｊｒ．により編集、２０１２年）を参照されたい。このような添加物は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒であるべきである。

皮内または皮下施用に使用される溶液剤または懸濁液剤には、通常、以下の構成成分の１つまたはそれ以上：注射のための水などの滅菌賦形剤、生理食塩水溶液、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝液；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調節するための作用剤が含まれる。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調節することができる。このような製造は、ガラス製またはプラスチック製の、アンプル、使い捨てシリンジまたは多回用量用バイアルに入れられている。

注射に好適な医薬組成物は、注射用滅菌溶液または分散液の即時製造用の滅菌水溶液剤または分散液剤および滅菌散剤を含む。静脈内投与の場合、好適な担体は、生理食塩水、静菌水、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水を含む。すべての場合において、組成物は滅菌であるべきであり、容易なシリンジ注入性がある程度に流体であるべきである。組成物は、製造および保管の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の混入作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）および好適なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒体とすることができる。適切な流動性は、分散液の場合、必要な粒子サイズを維持することにより、例えばレシチンなどのコーティング剤の使用により、および界面活性剤の使用により維持することができる。

保存剤は、微生物の成長を遅延させるために加えることができ、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で加えることができる。本開示による使用のための好適な保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタ－クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびメチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノールおよび３－ペンタノールが含まれる。時に「安定剤」として知られている等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確保するために添加することができ、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールな
どの多価糖アルコール、例えば三価またはそれより多価の糖アルコールを含む。

安定剤は、バルク剤から治療剤を溶解する、または変性もしくは容器の壁への付着を防止する一助となる添加剤までの機能範囲とすることができる、添加剤の幅広い分類を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記で列挙）；アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなどのアミノ酸、イノシトールなどのシクリトールを含めた、ラクトース、トレハロース，スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール，ミオイノシトール、ガラクチトール、グリセロールなどの有機糖または糖アルコール；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；ウレア、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセリン、α－モノチオグリセリンおよびチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０以下の残基からなるペプチド）；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどのモノサッカライド；ラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどのジサッカライド；およびラフィノーゼなどのトリサッカライド；およびデキストランなどのポリサッカライドとすることができる。

緩衝化剤は、タンパク質を安定させる範囲のｐＨを維持する一助となる。緩衝化剤は、幅広い濃度で存在してもよく、通常、約２ｍＭ～約５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。

本開示により使用するための好適な緩衝化剤には、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グルコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）などの有機酸および無機酸とそれらの塩のどちらも含む。さらに、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、およびＴｒｉｓなどのトリメチルアミン塩を使用することができる。

さらなる様々な添加剤は、バルク剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）および共溶媒を含む。

ＩＸ．処置および診断方法
本開示はまた、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）の使用を含む処置方法および診断方法を提供する。

（ａ）治療的用途
一態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗
ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）を使用して、凝固障害または出血性障害を予防、処置または反転させることができる。別の態様では、本方法は、それを必要とする対象に、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）を投与する工程を含む。対象は、以下に限定されないが、ヒト、マウス、ラット、モルモット、以下に限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ネコ、イヌ、ハムスター、ロバなどの飼育動物などの哺乳動物とすることができる。一態様では、対象はヒトである。

様々な態様では、凝固障害または出血性障害は、凝固因子が存在しないことにより引き起こされる。当業者は、凝固因子が存在しないことに関連した凝固障害または出血性障害のタイプであることを認識している。一部の態様では、凝固障害または出血性障害は、血友病またはフォンウィルブランド病とすることができる。別の態様では、凝固障害または出血性障害は、血友病Ａまたは後天性血友病である。特定の態様では、凝固障害または出血性障害は、血友病Ａである。別の態様では、凝固障害または出血性障害は、対象が、もはやＦＶＩＩＩを生成しない後天性血友病である。

様々な態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、軽度の血友病Ａ、中度の血友病Ａまたは重度の血友病Ａを有する対象に投与することができる。別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、因子が６％～３０％、２％～５％または１％以下の血漿中レベルを有する対象に投与することができる。

一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、対象に外部創傷がある場合に、血友病Ａを有するまたは血友病Ａを有することが疑われる対象に投与することができる。別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、対象に既存の外部創傷がある場合に、血友病Ａを有するまたは血友病Ａを有することが疑われる対象に投与することができる。別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、創傷が治癒するまで、外部創傷を有する対象に投与することができる。一部の態様では、創傷は、以下に限定されないが、擦り傷、裂傷、刺し傷または剥離を含むことができる。

一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、手術、重症な損傷または歯科作業の前、それらの最中またはそれらの後に、血友病Ａを有する、または血友病Ａを有することが疑われる対象に投与することができる。

一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａを有する、または血友病Ａを有することが疑われ、自発的な出血を経験した対象に投与することができる。別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗
ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａを有する、または血友病Ａを有することが疑われ、１週間に１回、２回またはそれ超で、出血を経験した対象に投与することができる。

様々な態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａに罹患している、またはそれを有することが疑われる、任意の年齢群の対象に投与することができる。一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａに罹患している、またはそれを有することが疑われる、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６または１７歳の児童に投与することができる。別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａに罹患している、またはそれを有することが疑われる、乳児に投与することができる。

さらに別の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、血友病Ａに罹患している、またはそれを有することが疑われる、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２か月の年齢の幼児である対象に投与することができる。

一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）は、出血の第１のエピソードの前に、早期年齢の対象に投与される。

他の態様では、第１の出血のエピソードの前に、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の他の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）を投与することにより、将来のさらなる出血および関節損傷の発症を保護する。

一部の実施形態では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）または本開示の別の組成物（例えば、核酸、ベクター、細胞）の対象への投与は、以下の効果、以下に限定されないが、止血、疼痛の軽減および可動性の改善を有することができる。

同様に、それを必要とする対象におけるＦＸ活性化を促進する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書において開示されている抗体、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）またはそれらの組合せを投与する工程を含む方法が提供される。

同様に、それを必要とする対象における出血エピソードの頻度または程度を低減する方法であって、対象に、有効量の本明細書において開示されている抗体、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）またはそれらの組合せを投与する工程を含む方法が提供される。

一部の態様では、対象は、第ＶＩＩＩ因子（「ＦＶＩＩＩ」）に対して阻害剤を生じる
、生じる傾向を有する、および生じるリスクにある。一部の態様では、ＦＶＩＩＩに対する阻害剤は、ＦＶＩＩＩに対する中和抗体である。一部の態様では、対象は、ＦＶＩＩＩによる処置を受けているか、またはＦＶＩＩＩ、例えばＦＶＩＩＩ補充療法による処置の候補である。

一部の態様では、出血エピソードは、関節血症、筋肉の出血、口腔内出血、出血、筋肉への出血、口内出血、外傷、頭部外傷、胃腸管の出血、頭蓋内出血、腹部内出血、胸郭内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙における出血、腹膜後腔における出血、腸腰筋鞘における出血、またはそれらの任意の組合せの結果である。

本開示はまた、それを必要とする対象における血液凝固障害を処置する方法であって、対象に、有効量の本明細書において開示されている二重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）またはそれらの組合せを投与する工程を含む方法を提供する。

一部の態様では、血液凝固障害は、血友病Ａまたは血友病Ｂである。一部の態様では、対象はヒト対象である。

一部の態様では、対象は、ＦＶＩＩＩ補充療法を受けている最中か、またはこれを受けている。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病治療法と組み合わせて投与される。一部の態様では、血友病治療法は、ＦＶＩＩＩ補充療法である。一部の態様では、二重特異性分子は、血友病治療の投与の前、その間またはその後に投与される。一部の態様では、二重特異性分子は静脈内または皮下に投与される。

一部の態様では、二重特異性分子の投与により、出血エピソードの出現、自発的出血エピソードまたは急性出血の頻度が低下する。一部の態様では、二重特異性分子の投与により、年間出血回率が５％、１０％、２０％、３０％または５０％低下する。

本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、処置される状態に適切な任意の経路によって投与することができる。本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、通常、非経口的、すなわち注入、皮下、筋肉内、静脈内または皮内に投与される。一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、皮下に投与される。

ある種の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、断続的にまたは不連続的に投与される。様々な態様では、例えば、皮下注射などの注射により投与される本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸａ／抗ＦＸ抗体）の用量レベルは、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの身体重量の範囲となる。

一部の態様では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体、または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、疾患が進行するまでまたは許容できない毒性となるまで投与される。

（ｂ）診断的用途
本開示は、ＦＩＸおよびＦＸなどの、凝固因子の発現異常または欠陥を特徴とする疾患の診断に有用な診断的方法をさらに提供する。一部の態様では、診断は、個体からの組織
または体液中の、ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）および／またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）の発現レベルの測定、および測定された発現レベルと、正常組織または体液中のＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）および／またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）の標準発現レベルとを比較することを含み、それにより、標準品と比較した発現レベルの向上または低下が、障害の指標となる。

本開示の結合性分子、ならびにその抗原結合断片、バリアントおよび誘導体は、当業者に公知の従来的な免疫組織学的方法を使用して、生物サンプル中のＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）および／またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）タンパク質レベルをアッセイすることができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１巻：９７６～９８５頁（１９８５年）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１０５巻：３０８７～３０９６頁（１９８７年））。

ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）および／またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）タンパク質発現を検出するのに有用な他の抗体をベースとする方法は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降またはウェスタンブロッティング法などの免疫アッセイを含む。好適なアッセイは、本明細書のどこかに一層詳細に記載されている。

ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）ポリペプチドの発現レベルをアッセイするという言い回しは、第１の生物サンプルにおける、ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）ポリペプチドのレベルを、直接（例えば、絶対的なタンパク質レベルを決定または推定することによる）、または相対的（例えば、第２の生物サンプル中の疾患関連ポリペプチドと比較することによる）のどちらかで、定性的または定量的に、測定または推定することの両方を指す。

第１の生物サンプル中のＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）ポリペプチド発現レベルが測定または推定されて、標準ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）ポリペプチドレベルと比較され、標準は、障害を有していないか個体から得た第２の生物サンプルから採取されるか、または障害を有していない個体の集団からのレベルの平均値により決定される。当分野において認識されている通り、一旦、「標準」ＦＩＸ（例えば、ＦＩＸａ）またはＦＸ（例えば、ＦＸｚ）のポリペプチドレベルが既知となると、比較のための標準として繰り返し使用することができる。

本開示は、それを必要とする対象における活性化ＦＩＸのレベルを測定する方法であって、本明細書において開示されている抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部を、好適な条件下、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびサンプル中の抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸａへの結合を測定する工程を含む、方法を提供する。

一実施形態では、クラスＩにおける抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を使用して、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸチモーゲンと比較した、テナーゼ複合体中の活性化ＦＩＸのレベルを測定することができる。別の実施形態では、クラスＩＶにおける抗ＦＩＸｚ抗体またはその抗原結合部分を使用して、テナーゼ複合体中の遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａと比較した、ＦＩＸチモーゲンのレベルを測定することができる。他の実施形態では、クラスＩＩにおける抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を使用して、テナーゼ複合体またはＦＩＸチモーゲンにおけるＦＩＸａと比較した、遊離ＦＩＸのレベルを測定することができる。一部の実施形態では、クラスＩＩＩにおける抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分を使用して、ＦＩＸチモーゲンと比較した、テナーゼ複合体中の活性化ＦＩＸ（すなわち、遊離ＦＩＸａおよびＦＩＸａ）のレベルを測定することができる。

同様に、それを必要とする対象における、チモーゲンＦＸ（ＦＸｚ）を測定する方法で
あって、クラスＶにおける、抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分を、好適な条件下、対象から得たサンプルに接触させる工程、およびこのサンプル中の抗ＦＸ抗体またはその抗原結合部分のＦＸｚへの結合を測定する工程を含む、方法が提供される。他の実施形態では、クラスＶＩにおける抗ＦＸａ抗体またはその抗原結合部分を使用して、ＦＩＸチモーゲンと比較した、活性化ＦＸのレベルを測定することができる。一部の態様では、サンプルは、血液または血清である。

Ｘ．組合せ処置
本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体、抗ＦＸ抗体または二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体）は、単独の活性剤として投与することができるか、または例えば、併用療法として様々な疾患の処置において有用な１つもしくはそれ以上の追加医薬または治療剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、追加剤は、本明細書において提供される二重特異性抗体によって処置される、疾患または状態を処置するのに有用なものとして、当分野で認識されている治療剤とすることができる。この組合せ物はまた、１種超の追加剤、例えば、２種または３種の追加剤を含むことができる。

ある種の実施形態では、追加医薬または治療剤は、凝固障害または出血性障害の処置において決まった手順で使用される薬剤である。当業者は、決まった手順の治療剤を認識すると予想される。一部の実施形態では、追加の治療剤は、血友病治療法の薬剤である。例示的な血友病の治療剤には、以下に限定されないが、因子濃縮製剤補充療法（ｆａｃｔｏｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｈｅｒａｐｙ）を含む。特定の実施形態では、補因子補充療法は、ＦＶＩＩＩ補充療法である。当業者は、補充療法が、血漿由来および／または組換えＦＶＩＩＩ置換であってもよいことを認識していると思われる。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩ補充療法は、組換えＦＶＩＩＩである。別の実施形態では、ＦＶＩＩＩ補充療法は、血漿由来のＦＶＩＩＩである。様々な実施形態では、追加医薬または治療剤は、例えば、デスモプレシン酢酸塩、凝固保護薬（例えば、抗線維素溶解薬）またはフィブリンシーラントを含むことができる。

ある種の実施形態では、追加医薬または治療剤は、本明細書に記載されている抗体の投与前、その最中またはその後に、対象に投与することができる。様々な実施形態では、追加医薬または治療剤、および本明細書において提供される抗体は、同じ投与スケジュールで投与することができる。一部の実施形態では、追加医薬または治療剤は、本明細書に記載されている抗体と同時に投与される。

様々な実施形態では、追加医薬または治療剤は、予防的に、または必要に応じて投与される。別の実施形態では、追加医薬または治療剤は、一次処置として投与される。他の実施形態では、追加医薬または治療剤は、二次処置として投与される。

一部の実施形態では、本明細書において開示されている結合性分子（例えば、抗ＦＩＸ抗体および抗ＦＸ抗体、二重特異性抗ＦＩＸ／抗ＦＸ抗体またはイムノコンジュゲート）が標準治療と共にまたはこれに補助して投与した場合、本明細書において開示されている結合性分子による処置は、標準的治療の開始前に、例えば、標準的治療の開始の１日前、数日前、１週間前、数週間前、１か月前、または数か月前も前に開始することができる。

ＸＩ．キット
本開示はまた、本明細書に記載されている方法を行うために使用することができる、本明細書において開示されている結合性分子またはその抗原結合部分を含むキットを提供する。ある種の態様では、キットは、（ｉ）本明細書において開示されている抗体、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）またはそれらの組合せ、および（ｉｉ）使用
のための指示書を含む。一部の態様では、キットは、１つまたはそれ以上の容器中に、本明細書において開示されている抗体、二重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）またはそれらの組合せを含む。

一部の態様では、キットは、すべての対照を含む検出アッセイを行うのに必要な、および／または十分なすべての構成成分、アッセイを行うための指示書、ならびに解析および結果を発表するための任意の必要なソフトウェアを含む。

当業者は、本明細書において開示されている抗体、二重特異性分子（例えば、二重特異性抗体）、イムノコンジュゲート、医薬組成物、核酸（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクターまたは細胞（例えば、宿主細胞）、またはそれらの組合せ物は、当分野で周知の確立されたキットフォーマットの１つに容易に組み込むことができることを容易に認識しているであろう。

ＦＩＸよりもＦＩＸａに優先的に結合する抗体の生成
抗体選択および抗体生成の設計：ヒト活性化ＦＩＸに対する一連のヒト抗体は、ヒト抗体Ａｄｉｍａｂ酵母ライブラリー（ＡＤＩＭＡＢ、７ＬｕｃｅｎｔＤｒｉｖｅ、Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ０３７６６）から選択した。抗体選択は、３種の異なる第ＩＸ因子バリアントを使用して行った：
（ｉ）その活性化を阻止し、チモーゲン形態（ＦＩＸｚ）中の第ＩＸ因子を維持する１８０位（成熟番号付け）において、アルギニンにアラニン変異もたらす第ＩＸ因子である、「活性化不能型ＦＩＸ」（ＦＩＸｎとしても略される）；
（ｉｉ）活性化ＦＩＸの形態にあり、テナーゼ複合体中でＦＶＩＩＩａに結合されていない場合、活性化ＦＩＸの立体構造にあると考えられる「遊離ＦＩＸａ」；および
（ｉｉｉ）活性化ＦＩＸの最も活性な立体構造に擬似するよう意図されている、活性部位に共有結合している擬似基質（例えば、Ｌ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇクロロメチルケトン、すなわち、ＥＧＲ－ＣＭＫ）との活性化ＦＩＸの形態にある「ＦＩＸａ－ＳＭ」。

ＦＩＸチモーゲン（例えば、活性化不能型ＦＩＸ）、遊離活性化ＦＩＸおよびＦＩＸａ－ＳＭ（例えば、第ＩＸａ因子＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）の模式図が、図１Ａに示されている。

各場合において、ＦＩＸ配列の後に、分子のＣ末端における、ＧＳリンカーおよびビオチン化が続く。ビオチンの存在下で、ビオチンリガーゼＢｉｒＡと共発現させると、得られたＦＩＸ分子は、Ａｄｉｍａｂディスプレイライブラリーによる選択を可能にする単一ビオチン標識を有することになろう。

活性化不能型ＦＩＸは、当分野において公知の方法によって、ビオチンの存在下で、ＢｉｒＡと組換え発現して精製した。ビオチンの存在下でＢｉｒＡと共にやはり共発現した遊離ＦＩＸａは、活性化不能型ＦＩＸと同じ方法で精製した非活性化前駆体（ＦＩＸチモーゲン）の発現から生成した。次に、カルシウムの存在下で、１：５００のモル比で組換え凝固第ＸＩａ因子の添加により、非活性化ＦＩＸ前駆体を活性化し、続いて、当分野において公知の方法に従い、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。

遊離ＦＩＸａへのトリペプチドクロロメチルケトン（すなわち、ＥＧＲ－ＣＭＫ）の添加により、ペプチドまたは擬似基質とＦＩＸａの活性部位との共有結合による連結がもたらされる。ペプチドによる非可逆性連結が、ＦＩＸａ活性を中和している間、この複合体は、結合基質、またはＦＩＸａの最も活性な立体構造を擬似すると考えられる。活性部位に共有結合している擬似基質を有する活性化第ＩＸ因子（すなわち、ＦＩＸａ－ＳＭ）を
生成するため、カルシウムおよび３０％エチレングリコールの存在下で、６時間、５倍モル濃度過剰のペプチドと共に遊離ＦＩＸａをインキュベートした。過剰ペプチドをサイズ排除クロマトグラフィーまたは透析のどちらか一方によって除去し、質量分析法により活性部位の飽和を確認した。

上記の実施例中で使用したＦＩＸタンパク質は、当分野において公知の方法に従って組換えにより生成した。凝固因子の配列は以下：活性化不能型ＦＩＸ（配列番号７７３）、遊離ＦＩＸａ（配列番号７６４の４７～１９１および配列番号７６４のアミノ酸２２７～４６１）であり、ＦＩＸａ－ＳＭ（活性部位に共有結合しているＥＧＲ－ＣＭＫを含む、配列番号７６４の４７～１９１および配列番号７６４のアミノ酸２２７～４６１）は、表４に示されている。

ＦＩＸタンパク質はすべて、当分野において公知の方法に従い、添加物として５ｍＭのＣａＣｌ_２を含むＴｒｉｓ－緩衝生理食塩水に緩衝液交換した。

ＦＶＩＩＩａのそれと同様に、ＦＩＸよりも、ＦＩＸａと優先的に結合することが可能な、ＦＩＸａに対する一組の抗体を生成し、記載する。抗体のこれらのクラスを生成するために、Ａｄｉｍａｂ発現ライブラリーは、それらの全体が参照によって本明細書に組み入れられる、米国特許出願第２０１０／００５６３８６号および同第２００９／０１８１８５５号に開示されている方法に従いスクリーニングした。それらのすべての全体が参照により本明細書に組み入れられる、例えば、ＶａｎＤｅｖｅｎｔｅｒおよびＷｉｔｔｒｕｐ（２０１４年）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３１９巻：３～３６頁；Ｃｈａｏら（２００６年）、ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓ１巻（２号）：７５５～７６８頁；Ｆｅｌｄｈａｕｓら（２００３年）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２１巻（２号）：１６３～１７０頁；ＢｏｄｅｒおよびＷｉｔｔｒｕｐ（１９９７年）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１５巻（６号）：５５３～５５７頁を参照されたい。

標的抗原遊離ＦＩＸａおよび／またはＦＩＸａ－ＳＭに対する正の選択的圧力ならびに活性化不能型ＦＩＸに対する負の選択的圧力のいくつかの反復ラウンド後に、当分野で公知の技法を使用して、コロニーを配列させて固有のクローンを特定した。抗体選択に続いて、標準的方法に従い、これらの選択的抗体の６５８の抗体を発現させて、酵母由来のプロテインＡ樹脂上で精製した。続いて、６５８の抗体を、この場合、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、活性化不能型ＦＩＸに対する、遊離ＦＩＸａおよび／または擬似結合ＦＩＸａへの優先的な結合について再度、スクリーニングした。

特に明記されていない限り、本明細書において開示されているＢＬＩ実験における抗原はすべて、ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ＨＴＩ、５７ＲｉｖｅｒＲｏａｄ、ＥｓｓｅｘＪｕｎｃｔｉｏｎ、ＶＴ、米国）：ＦＩＸｚ（カタログ番号ＨＣＩＸ－００４０）、遊離ＦＩＸａ（カタログ番号ＨＣＩＸＡ－００５０）およびＦＩＸａ－ＳＭ（カタログ番号ＨＣＩＸＡ－ＥＧＲ）から購入した。ＯｃｔｅｔＲｅｄ９４、ＯｃｅｔｅｔＱＫ３８４またはＯｃｔｅｔＨＴＸ系をすべてのＢＬＩ実験に使用した。様々な工程に対する抗体および抗原濃度、ならびにインキュベート時間に関して、すべての方法は製造業者の推奨に基づく。ベースライン工程は、６０秒とした。抗体は、１００～２００ｎＭまたは１０～１５ｕｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ヒトＩｇＧ定量プローブに１８０秒間、ロードした。抗原濃度は、１０～２５０ｎＭの範囲とし、抗体をロードしたプローブへの抗原の結合は、９０～１８０秒の範囲とする。解離工程は、９０～１８０秒間、緩衝液単独で行った。ＢＬＩ実験はすべて、１００～２００ｎＭＮａＣｌ、２５～５０ｍＭＴｒｉｓｐＨ７．４～８．０または２５～５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．４～８．０含み、０．１％ＢＳＡを含むまたは含まない、２．５～５ｍ
ＭＣａＣｌ_２を含むまたは含まない緩衝液を用いて行った。特定の実験に関するさらなる詳細は、以下の実施例に示されている。特定の抗原に対する様々な抗体の相対的結合は、「応答」、または開始から結合期の終わりまでのナノメートルのシフト変化として一般に報告される。抗原結合応答は、ロード期の間にプローブにロードされた抗体の量に依存する。したがって、プローブにロードされた抗体の量が同じである場合、ならびに抗原の濃度および結合期の長さが同じである場合、これらの応答が比較可能となる。他の例では、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して、Ｋ_Ｄを算出することができる。すべての場合において、抗ヒトＩｇＧＡＨＱプローブへの抗原の非特異的な結合の欠如が確認された。

遊離ＦＩＸａおよびＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合した抗体を特定するための実験優先順位付けの概略を図２に示している。優先順位付けスキームの詳細は、以下の「標的抗原に対する抗体結合の特徴付け」および「生物物理学挙動に関する抗体のスクリーニング」に提示している。

このさらなる抗体の優先順位付けにより、遊離ＦＩＸａおよび／またはＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合することができる９３の一組の抗体が得られた。可変領域のアミノ酸および核酸配列を以下に提示する。これらの９３の抗体のＶＨおよびＶＬの生殖系およびＣＤＲ配列が、図３Ａ、３Ｂ、３Ｃおよび図３Ｄ（以下の実施例５に示されている方法により得られた、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６を除く）に示されている。

標的抗原ＦＩＸａに結合する抗体の特徴付け：活性化不能型ＦＩＸと比較した、遊離ＦＩＸａへの優先的な結合を実証した本発明者らの予備選別において発見された抗体を特定するため、酵母Ａｄｉｍａｂライブラリーから精製した６５８の抗体を、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリード（ｄｉｐａｎｄｒｅａｄ）バイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅＢｉｏ：カタログ番号１８－５００５）を使用して、１５０ｎＭの抗体を使用する一価アッセイフォーマットにおいて、ＢＬＩを使用してスクリーニングした。ＢＬＩは、標準的手順により、ＯｃｔｅｔＲｅｄ９４またはＯｃｔｅｔＨＴＸ系で行った。手短に言えば、バイオセンサーは、５ｍＭＣａＣｌ_２および０．１％ウシ血清アルブミン（ＴＢＳＦＣａ）を補給したＴｒｉｓ緩衝化生理食塩水中で平衡にした。次に、プレートを機器に移した。浸漬工程を機器で行い、ＴＢＳＦＣａ中、６０秒間、バイオセンサーをインキュベートした。次に、このバイオセンサーを、１８０秒間、代表的なＩｇＧ（ＴＢＳＦＣａ中の１５０ｎＭ）を含有するウェルに移した。この後、バイオセンサーは、ＴＢＳＦＣａ中で６０秒間、インキュベートし、ベースラインを確立した。次に、このバイオセンサーを所望の抗原（ＴＢＳＦＣａ中の１００ｎＭ）を含有するウェルに移して、９０秒間、インキュベートした。最後に、９０秒間のインキュベートを行うため、このセンサーをＴＢＳＦＣａ単独に移した。

遊離ＦＩＸａ特異性を指向した最初の酵母ライブラリー選別で特定した６５８の抗体のほとんどすべてが、活性化不能型ＦＩＸに対してよりも、遊離ＦＩＸａに対して大きな結合親和性の概数を示した。４つの抗体（すなわち、ＢＩＩＢ－９－３９７、ＢＩＩＢ－９－５７８、ＢＩＩＢ－９－６１２およびＢＩＩＢ－９－６３１）は、ＢＬＩアッセイにおいて、遊離ＦＩＸａに対するよりも活性化不能型ＦＩＸに対して大きな結合親和性を有した。

１００ｎＭの遊離ＦＩＸａまたは活性化不能型ＦＩＸのどちらかに対する、抗原結合期後の極大応答値（ｎｍ）を、選別で特定した９３の抗体の各々に関してプロットした（図４Ａおよび図４Ｂ）。

抗体であって、ＢＬＩによって測定される、その遊離ＦＩＸａに対する結合親和性が、活性化不能型ＦＩＸに対するものよりも高い、上記の抗体は、例えば、ＦＩＸａに固有のヒトＦＩＸａ上のエピトープへの、またはＦＩＸチモーゲン上の対応するエピトープとは大きく異なるＦＩＸａ上のエピトープへの選択的な結合により、遊離ＦＩＸａに優先的に結合する可能性が高い。言い換えると、ＦＩＸａへの抗体の優先的な結合が、例えば、ＦＩＸチモーゲン中に存在しないエピトープへの結合により、または同じエピトープまたはそのバリアント（例えば、重なりエピトープまたは立体構造が異なるエピトープ）へのより高い結合親和性により推進される。

図５は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアに提供されている１：１当てはめアルゴリズムによって決定した、列挙されている抗体の各々に関する遊離ＦＩＸａへの見かけの一価親和性（Ｋ_Ｄ）の表を示している。

解析した抗体の選別サブセットに関するＢＬＩ結合プロファイルが、図６Ａ～６Ｅに提示されている。ＢＬＩにより決定された、選択した一連の抗体試験に対する遊離ＦＩＸａまたは活性化不能型ＦＩＸへの一価親和性の概数が図６Ｆに一覧表示されている。

ＦＩＸａのより活性な立体構造を優先的に認識する二重特異性抗体（すなわち、ＦＸａ－ＳＭ）は、遊離ＦＩＸａに優先的に結合するものよりも高い活性を有することが予想される。

図７に実証されている通り、活性化不能型ＦＩＸに対するよりも遊離ＦＩＸａに対してより大きな結合親和性を示した９３の抗体のサブセットを、製造業者の手順に従い、ＯｃｔｅｔＲｅｄ９４またはＯｃｔｅｔＨＴＸ系に関して１５０ｎＭの抗体を用いるＢＬＩ一価結合アッセイで、１００ｎＭの遊離ＦＩＸａおよび１００ｎＭのＦＩＸａ－ＳＭに対する結合についてさらに評価した。手短に言えば、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅｂｉｏ：カタログ番号１８－５００５）をＴＢＳＦＣａ中で平衡にした。次に、プレートを機器に移した。浸漬工程を機器で行い、ＴＢＳＦＣａ中、６０秒間、バイオセンサーをインキュベートした。次に、このバイオセンサーを、１８０秒間、代表的なＩｇＧ（ＴＢＳＦＣａ中の１５０ｎＭ）を含有するウェルに移した。この後、バイオセンサーは、ＴＢＳＦＣａ中で６０秒間、インキュベートし、ベースラインを確立した。次に、このバイオセンサーを所望の抗原（ＴＢＳＦＣａ中の１００ｎＭ）を含有するウェルに移して、９０秒間、インキュベートした。最後に、９０秒間のインキュベートを行うため、このセンサーをＴＢＳＦＣａ単独に移した。

いくつかの抗体について、遊離ＦＩＸａに対するよりもＦＩＸａ－ＳＭに対する結合がより大きいことが観察された。各標的抗原に対する結合に関する、ＢＬＩ結合プロファイルの代表例が、図８Ａ～８Ｅに提示されている。図８Ｆの表は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアにおいて提供されている当てはめアルゴリズムにより、各標的抗原に対する試験抗体の見かけ親和性を一覧表示している。

選別において発見された抗体の特異性に取り組むことを意図したＢＬＩ実験から、抗体の４つのクラスを特定した：
クラスＩ：抗体は、遊離ＦＩＸａまたは活性化不能型ＦＩＸのどちらかと比べて、ＦＩＸａ－ＳＭに優先的に結合する。図９Ａに示される通り、ＢＩＩＢ－９－４６０およびＢＩＩＢ－９－４８４が、このクラスの例となる；
クラスＩＩ：抗体は、ＢＩＩＢ－９－８８５およびＢＩＩＢ－９－４１６によって示される通り、ＦＩＸａ－ＳＭまたは活性化不能型ＦＩＸに対するよりも遊離ＦＩＸａに優先的に結合する（図９Ｂ）；
クラスＩＩＩ：抗体は、ほぼ等しくＦＩＸａ－ＳＭまたは遊離ＦＩＸａのどちらかと結合
するが、活性化不能型ＦＩＸとほとんど結合しない。ＢＩＩＢ－９－１２８７は、このクラスの例として働く（図９Ｃ）；および、
クラスＩＶ：抗体は、遊離ＦＩＸａまたはＦＩＸａ－ＳＭに比べて、活性化不能型ＦＩＸに優先的に結合する（図９Ｄ）。ＢＩＩＢ－９－３９７は、このクラスの例として働く。

本明細書において開示されている抗ＦＩＸ抗体（例えば、抗ＦＩＸａ抗体または抗ＦＩＸｚ抗体）のすべてに関するクラス帰属を一覧表示した表を図１０に提示する。

生物物理学挙動に関する抗体のスクリーニング：９３の抗ＦＩＸ抗体を、自己会合を評価するためのナノ粒子の表面の標的抗体をマイクロ濃縮するアッセイである、親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ａｆｆｉｎｉｔｙｃａｐｔｕｒｅｓｅｌｆ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＡＣ－ＳＩＮＳ）により試験した。その同等物に関連して、生物物理特性、例えば自己凝集に乏しい抗体を特定するためのＡＣ－ＳＩＮＳのスクリーニングを文献に記載されている方法に準拠して行った。例えば、それらのどちらも、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる、Ｌｉｕら（２０１４年）ＭＡｂｓ．６巻（２号）：４８３～９２頁；およびＷｕら（２０１５年）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＤｅｓｉｇｎａｎｄＳｅｌｅｃｔｉｏｎ２８巻：４０３～４１４頁を参照されたい。１００μｌの量で、４０μｇ／ｍｌの開始濃度で、金ナノ粒子の表面に各抗体を捕捉し、室温で２時間、インキュベートした。インキュベート後、波長の全域の吸光度を決定した。抗体が自己会合する場合、粒子間距離が低下し、極大吸光度の波長が高くなる。生物物理学挙動の内部標準との比較では、５４０ｎｍ超の極大波長は、自己相互作用する傾向を有する抗体であることを示す。ＡＣ－ＳＩＮＳによって決定される、９３の抗ＦＩＸ抗体の計算された極大波長を一覧表示する表が図１１に示されている。

ＦＸａよりもＦＸに優先的に結合する抗体の生成
抗体選別および抗体生成の設計：活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）よりもＦＸチモーゲン（例えば、活性化不能型第Ｘ因子（ＦＸ））に選択的に結合する抗体を得る目的で、酵母Ａｄｉｍａｂヒト抗体ライブラリーからの抗体選別は、３つの異なる第Ｘ因子バリアントを使用して行った：
（ｉ）その活性化を阻止し、チモーゲン形態にあるＦＸを維持する１９４位（成熟番号付け）において、アルギニンからアラニンへの変異を有するＦＸである、「活性化不能型第Ｘ因子」（「ＦＸｎ」）。これは、ＢＬＩ実験に使用したＦＸｚ（チモーゲンＦＸ）であった。ＦＸｎを生成し、以下に記載されている通り、自家でビオチン化した。
（ｉｉ）いかなる擬似基質も含まない活性化ＦＸの形態にあり、野生型の活性化ＦＸ立体構造（ＨＴＩ、カタログ番号ＨＣＸＡ－００６０）にあると考えられている「遊離ＦＸ」（「ＦＸａ」）；
（ｉｉｉ）活性部位に共有結合した擬似基質（例えば、ＥＧＲ－ＣＭＫ）を有する活性化第Ｘ因子の形態にある「ＦＸａ－ＳＭ」（ＨＴＩ、カタログＨＣＸＡ－ＥＧＲ）。一部の場合、擬似基質をビオチン化（ＢＥＧＲ－ＣＭＫ）し、活性部位に共有結合させた（ＨＴＩ、カタログ番号ＨＣＸＡ－ＢＥＧＲ）。

ＦＸチモーゲン、遊離ＦＸａおよびＦＸａ－ＳＭ（第Ｘａ因子＋ＥＧＲ－ＣＭＫ）の模式図を図１Ｂに示す。

活性化不能型ＦＸ配列の後に、分子のＣ末端における、ＧＳリンカーおよびビオチン化を続けた。ビオチンの存在下で、ビオチンリガーゼＢｉｒＡと共発現させると、得られたＦＸ分子は、Ａｄｉｍａｂディスプレイライブラリーによる選別を可能にする単一ビオチン標識を有する。

活性化不能型ＦＸは、当分野において公知の方法によって、ビオチンの存在下で、ＢｉｒＡと組換え発現し、精製した。

ＦＩＸａの場合と同様に、配列ＥＧＲのトリペプチドクロロメチルケトン（すなわち、ＥＧＲ－ＣＫＭ）は、ＦＸａの活性部位を共有結合により修飾し、ＦＸａの基質が結合した立体構造を擬似することができる。

陰性選別の目的の場合、遊離ＦＸａ（ＨＴＩ、カタログ番号ＨＣＸＡ－００６０）およびヒトＦＸａ－ＳＭ（ＨＴＩ、カタログ番号ＨＣＸＡ－ＥＧＲおよびＨＣＸＡ－ＢＥＧＲ）をＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ（ＨＴＩ）から購入した。

ＦＸタンパク質はすべて、自家で生成したか購入したかにかかわらず、当分野において公知の方法に従い、添加物として５ｍＭのＣａＣｌ_２を含むＴｒｉｓ－緩衝生理食塩水に緩衝液交換した。本発明の開示では、ＦＸａ（例えば、遊離ＦＸａまたはＦＸａ擬似）に対してよりも活性化不能型ＦＸに対して強い結合となることを実証した活性化不能型ＦＸに対して生成した一連の抗体（ＦＶＩＩＩａと同様の方法）を記載する。

上で開示された抗ＦＩＸ抗体の場合のように、Ａｄｉｍａｂ発現ライブラリーは、米国特許出願第２０１０００５６３８６号および同第２００９０１８１８５５号に開示されている方法に従い、スクリーニングした。標的抗原遊離ＦＸ、すなわち活性化不能型ＦＸに対する正の選択的圧力、ならびに遊離ＦＸａまたはＦＸａ－ＳＭに対する負の選択圧力からなるいくつかの反復ラウンド後に、当分野で公知の技法を使用して、コロニーを配列させて固有のクローンを特定した。抗体選別に続いて、標準的方法に従い、８００を超える抗体を発現させて、酵母由来のプロテインＡ樹脂上で精製した。活性化不能型ＦＸに選択的に結合する抗体を同定する実験の優先順位付けを、図２に概説する。

優先順位付けスキームの第２の工程の詳細は、「標的抗原第Ｘ因子（ＦＸ）への抗体の結合の特徴付け」および「生物物理学挙動に関する抗体のスクリーニング」と題する項目で提示しており、以下を参照されたい。抗体の優先順位付けの第２の工程により、活性ＦＸａ（例えば、野生型ＦＸａまたはＦＸａ－ＳＭ）と比べて、ＦＸｎに優先的に結合することができる、ＦＸｎに対する一連の抗体が９４種、得られた。可変領域のアミノ酸および核酸配列は、上に提示されている。９４種の抗体の各々の生殖系およびＣＤＲの表が、図１２Ａ、１２Ｂおよび１２Ｃに図示されている。

標的抗原第Ｘ因子（ＦＸ）への抗体の結合の特徴付け：発見した抗体のどれが、ＦＸａ－ＳＭに対するよりもＦＸチモーゲンへの結合が大きくなることを実証するのかをさらに決定するため、酵母から精製した８００を超える抗体を、２００ｎＭの抗体を使用する一価アッセイフォーマット中、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用してスクリーニングした。活性化不能型ＦＸおよびＦＸａ－ＳＭは、ＨＴＩから得られた。遊離ＦＸａおよびＦＸａ－ＳＭは、結合実験において同じ挙動をし、互換的に使用することができる；したがって、遊離ＦＸａの結果は示されていない。遊離ＦＸａに対して示されたデータはＦＸａ－ＳＭに相当するので、ＦＸａ－ＳＭを使用する観察は、遊離ＦＸａに等しく適用可能である。

ＢＬＩは、標準的手順により、ＯｃｔｅｔＲｅｄ９４またはＯｃｔｅｔＨＴＸ系で行った。手短に言えば、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅｂｉｏ：カタログ番号１８－５００５）をＴＢＳＦＣａ中で平衡にした。次に、プレートを機器に移した。浸漬工程を機器で行い、ＴＢＳＦＣａ中、６０
秒間、バイオセンサーをインキュベートした。次に、このバイオセンサーを、１８０秒間、代表的なＩｇＧ（ＴＢＳＦＣａ中の２００ｎＭ）を含有するウェルに移した。この後、バイオセンサーは、ＴＢＳＦＣａ中で６０秒間、インキュベートし、ベースラインを確立した。次に、このバイオセンサーを所望の抗原（ＴＢＳＦＣａ中の２００ｎＭ）を含有するウェルに移して、９０秒間、結合を行った。最後に、９０秒間のインキュベートを行うため、このセンサーをＴＢＳＦＣａ単独に移した。２００ｎＭのＦＸｎまたはＦＸａ－ＳＭのどちらかに対する、結合期後の極大応答値（ｎｍ）を、選別で特定した９４種の抗体の各々に関してプロットした。ＦＸｎ特異性を指向する選別において特定された抗体はほとんどすべて、共有結合により修飾されたＦＸａに対してよりも、ＦＸへの結合親和性が大きくなることを実証した（図１３）。

ＢＩＩＢ－１２－８９４、ＢＩＩＢ－１２－９２５、ＢＩＩＢ－１２－１３２０およびＢＩＩＢ－１２－１３２１しか、ＦＸａ－ＳＭに対してより大きな結合を示さなかった。活性化ＦＸ（例えば、遊離ＦＸａまたはＦＸａ－ＳＭ）と比べて、ＦＸｎに優先的に結合する抗体は、ＦＸａと比べて、ＦＸチモーゲンに優先的に結合することが予想される。したがって、抗ＦＩＸｎ抗体はまた、抗ＦＸｚ抗体と呼ぶことができる。図１４は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析９．０ソフトウェアにおいて提供されている当てはめアルゴリズムにより、ＦＸｎに対する試験抗体に対する見かけ親和性を一覧表示した表を含む。

生物物理学挙動に関する抗体のスクリーニング：上記の開示抗ＦＩＸａ抗体について記載されている通り、９４種の抗ＦＸｚ抗体を、親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）によって試験した。その同等物に関連して、生物物理特性（例えば自己会合する傾向）に乏しい抗体を特定するためのＡＣ－ＳＩＮＳスクリーニングを、文献に記載されている方法に準拠して行った。例えば、Ｌｉｕら（２０１４年）ＭＡｂｓ６巻（２号）：４８３～９２頁を参照されたい。１００μｌの量で、４０μｇ／ｍｌの開始濃度で、金ナノ粒子の表面に抗体を捕捉し、室温で２時間、インキュベートした。インキュベート後、波長の全域の吸光度を決定した。抗体が自己会合する場合、粒子間距離が低下し、極大吸光度の波長が高くなる。生物物理学挙動の内部標準との比較では、５４０ｎｍ超の極大波長は、自己相互作用する傾向を有する抗体であることを示す。図１５は、ＡＣ－ＳＩＮＳによって決定した、９４種の抗ＦＸｚ抗体の計算された極大波長を一覧表示する表を含む。

発色アッセイにおける二重特異性抗体の構築およびＦＶＩＩＩａ様活性の評価
２つの異なるＦａｂのアームからなる二重特異性抗体であって、そのアームの１つが、ＦＩＸチモーゲンよりも活性化ＦＩＸ（「ＦＸａ」）に優先的に結合し（クラスＩ、ＩＩおよびＩＩＩ抗体）、第２のアームは、ＦＸａ（クラスＶ抗体）よりもＦＸチモーゲンに優先的に結合している、上記の二重特異性抗体を実施例１および２に記載されている個々の抗体から生成した。ＦＩＸａよりもＦＩＸチモーゲンに優先的に結合する第１のＦａｂアーム（クラスＩＶの抗体）およびＦＸａよりもＦＸｚに優先的に結合する（クラスＶの抗体）、またはＦＸｚよりもＦＸａに優先的に結合する（クラスＶＩの抗体）第２のＦａｂからなる、さらなる二重特異性抗体を生成した。ＦＩＸｚよりもＦＩＸａに優先的に結合する（クラスＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抗体）第１のＦａｂアームおよびＦＸｚよりもＦＸａに優先的に結合する（クラスＶＩの抗体）第２のＦａｂアームからなる他の二重特異性抗体も生成した。

開示されている二重特異性抗体は、過度の実験なしに当分野において公知の方法を使用して生成することができる。例えば、ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＢｒｉｎｋｍａｎｎ（２０１５年）ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙ２０巻：８３８～８４７頁およびその中に引用されている参照文献；Ｓｐｉｅｓら（２０１５年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６７巻：９５～１０６頁およびその中に引用されている参照文献；Ｂｙｒｎｅら（２０１３年）ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３１巻：６２１～６３２頁およびその中に引用されている参照文献；Ｓｔｒｏｐら（２０１２年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２０巻：２０４～２１９頁およびその中に引用されている参照文献を参照されたい；それらはすべて、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。同様に、上記は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられることをやはり参照されたい。

二重特異性抗体は、ＩｇＧ１様フォーマットにおける、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖、または２つの異なる重鎖および共通の軽鎖のどちらか一方からなる。さらなるサブセットでは、二重特異性抗体は、ＩｇＧ４部分クラスであった。これらの二重特異性抗体を、発色アッセイで最初に、血漿をベースとする凝固アッセイで２番目に、ＦＶＩＩＩａの活性を置き換える能力（すなわち、ＦＶＩＩＩａを擬似する能力）についてスクリーニングした。

アッセイ用緩衝液、リン脂質、ＣａＣｌ_２およびＦＸａ発色性基質Ｓ－２７６５は、ＣｈｏｍｏｇｅｎｉｘＣｏａｔｅｓｔＳＰ第ＶＩＩＩ因子キット（カタログ番号Ｋ８２４０８６）の一部としてＤｉａｐｈａｒｍａから購入した。タンパク質はすべて、アッセイ用緩衝液の１×調製物を使用して希釈した。各二重特異性抗体（２５μＬ）を、７５０ｎＭに希釈したＦＸ（ＨＴＩ、カタログ番号ＨＣＸ－００５０）２０μＬ、７５ｎＭに希釈したＦＩＸａ（ＨＴＩ、カタログ番号、ＨＣＩＸＡ－００５０）２０μＬおよびリン脂質１０μＬと共に室温で混合した。５分後、ＣａＣｌ_２２５μＬを加えた。

さらに１０分後、基質Ｓ－２７６５５０μＬを加え、４０５ｎｍにおける吸光度を、１時間、１５秒毎にＢｉｏｔｅｋＳｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダーで読み取った。初期速度は、各吸光度曲線の線形部分からの経時的なＯＤ４０５ｎｍの変化によって決定した。ＦＶＩＩＩａの非存在下で、ｈＦＩＸａは、少量のＦＸａしか生成しない不十分な酵素であり、経時的な４０５ｎｍにおけるＯＤの変化によって測定される、ＦＸａ基質切断の基底レベルとなった（ｍＯＤ／分）。二重特異性抗体の添加時のＦＸａ基質切断の速度の向上は、ＦＸａ生成アッセイにおける、ＦＩＸａによるＦＸの活性化を促進する能力を示す（それにより、ＦＶＩＩＩａ様機能を置き換える）。この方法を使用して、ＦＶＩＩＩａ活性を擬似する、すなわち、添加した二重特異性抗体の非存在下で、ＦＸａ基質切断の速度が平均基底速度よりも少なくとも３標準偏差超となる、２０２種の抗体を特定した（５．８８ｍＯＤ／分）。

ＦＶＩＩＩａ様機能を置き換えることができる、３つの異なる二重特性抗体：ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１５、ＢＩＩＢ－９－６１９／ＢＩＩＢ－１２－９２５およびＢＩＩＢ－９－５７８／ＢＩＩＢ－１２－９１７について、二重特異性抗体の非存在下（ベースライン）での経時的なＯＤの変化および経時的なＯＤ変化を図１６Ａ～１６Ｄに示す。

ＦＶＩＩＩａ様機能を置き換えることができる２０２種のＩｇＧ１二重特異性抗体のすべての速度を図１６Ａ～１６Ｄに示す。ＩｇＧ４ヒンジフォーマットにおけるこれらの抗体のサブセットの速度が、図１７に示されている。

血漿をベースとする凝固アッセイにおける二重特異性抗体の評価
発色アッセイにおける、ＦＶＩＩＩａ活性を置き換えるおよび／または擬似することが可能な二重特異性抗体を、血漿中の一段階凝固アッセイにおけるＦＶＩＩＩａ様活性を置き換えるその能力についてさらに試験した。上に記載されている発色アッセイにおける最高の活性を示す二重特異性抗体のみをこの検討に選択した。

様々な濃度の二重特異性抗体（５μＬ）を、６０秒間、ＦＶＩＩＩ欠乏血漿（Ｓｉｅｍｅｎｓ）５０μＬと混合した。反応を活性化するため、アクチンＦＳＬエラグ酸５０μＬをこの反応混合物に２４０秒間、加え、次いでＣａＣｌ_２５０μＬを加えた。凝固するまでの時間は、ＳｙｓｍｅｘＣＡ－１５００システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を使用する光学的検出により３００秒間、測定した。二重特異性抗体の存在下での凝固時間の増大は、凝固時間がベースラインを超えて約１２６秒まで特異的に短縮され、凝固時間の短縮を示す用量応答は、ＦＶＩＩＩａ機能を置き換える、および凝固形成を促進する抗体の能力の指標となると考えられる。

図１９は、３つのこのような二重特異性抗体：ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７、ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１５およびＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－１３０６の一例を示す。ＦＩＩＩａ様活性の結果は抗体の二重特異性フォーマットに起因することを示すため、二重特異性抗体と比べた、抗ＦＩＸａおよび抗ＦＸホモ二量体の単独によるか、またはホモ二量体の混合集団として同一実験を行った。ＢＩＩＢ－９－４８４とＢＩＩＢ－１２－９１７の対の結果を図２０に示す。

ＦＸａ生成アッセイおよび血漿をベースとする凝固アッセイにおいて観察される二重特異性活性が、標的抗原の各々の同時結合を含むことを確かなものとするため、ストレプトアビジンディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅＢｉｏ；カタログ番号１８－５０２１）を使用するＦｏｒｔｅＢｉｏＨＴＸ系でＢＬＩをベースとする実験を行った。次に、０．１％のウシ血清アルブミンおよび５ｍＭのＣａＣｌ_２を補給したＴｒｉｓ緩衝化生理食塩水（図２１の緩衝液と呼ぶ）中でのインキュベート後、バイオセンサーを自家で生成したビオチン化ＦＩＸａ－ＳＭと共にインキュベートした。続いて、バイオセンサーを、１００ｎＭのＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７を含有するウェルに移した。最後に、同じバイオセンサーを非ビオチン化ＦＸ（非活性化第Ｘ因子）２００ｎＭと共にインキュベートした。本明細書における開示において実証される通り、二重特異性ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－１２－９１７は、図２１中の例として提示されている、標的抗原の各々と結合することができた。これは、その観察された機能活性を支持するものであり、これと一致する。

二重特異性活性の操作および最適化
二重特異性活性が、抗体：抗原相互作用の操作により改善されるかどうかを決定するた
め、ＢＩＩＢ－９－４８４ＶＨのＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域を修飾して、生殖系配列にアミノ酸の多様性を導入した。次に、ＢＩＩＢ－９－４８４の１０^６の配列誘導体のライブラリーを、Ａｄｉｍａｂプラットフォームに導入した。

活性化不能型ＦＩＸと比較した、ＦＩＸａ（すなわち、遊離ＦＸａ）およびＦＩＸａ－ＳＭに対する親和性の改善した誘導体を特定するため、発現ライブラリーを、それらの全体が参照によって本明細書に組み入れられる、米国特許出願第２０１０００５６３８６号および同第２００９０１８１８５５号に開示されている方法に従って、一層高い親和性クローンに適用した選択的圧力による選別のいくつかの反復ラウンドに施した。それらがすべての全体が参照によって本明細書に組み入れられる、ＶａｎＤｅｖｅｎｔｅｒおよびＷｉｔｔｒｕｐ（２０１４年）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３１９巻：３～３６頁；Ｃｈａｏら（２００６年）、ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓ１巻（２号）：７５５～７６８頁；Ｆｅｌｄｈａｕｓら（２００３年）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２１巻（２号）：１６３～１７０頁；ＢｏｄｅｒおよびＷｉｔｔｒｕｐ（１９９７年）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１５巻（６号）：５５３～５５７頁をやはり参照されたい。

続いて、当分野において公知の方法に従い、コロニーの配列を決定して固有の誘導体を特定した。この手順により、少なくとも７６の固有のＶＨ配列が特定された。当分野における標準的手順に従い、７６種の抗体を発現して、プロテインＡ精製により酵母から精製した。

次に、親ＢＩＩＢ－９－４８４に由来する７６種の固有の誘導体抗体を、標的抗原、遊離ＦＩＸａ（ＨＴＩ）またはＦＩＸａ－ＳＭ（ＨＴＩ）への結合が改善されたかについて再度スクリーニングし、この場合、２００ｎＭの抗体を用いる一価アッセイフォーマットにおいて、ＢＬＩを使用した。ＢＬＩは、製造業者の手順に従い、ＯｃｔｅｔＨＴＸ系に関して行った。手短に言えば、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅｂｉｏ：カタログ番号１８－５００５）をＴＢＳＦＣａ中で平衡にした。次に、プレートを機器に移した。浸漬工程を機器で行い、ＴＢＳＦＣａ中、６０秒間、バイオセンサーをインキュベートした。次に、このバイオセンサーを、１８０秒間、代表的なＩｇＧ（ＴＢＳＦＣａ中の１００ｎＭ）を含有するウェルに移した。この後、バイオセンサーは、ＴＢＳＦＣａ中で６０秒間、インキュベートし、ベースラインを確立した。次に、このバイオセンサーを所望の抗原（ＴＢＳＦＣａ中の１０ｎＭ）を含有するウェルに移して、９０～１８０秒間、結合を行った。最後に、１８０秒間のインキュベートを行うため、このセンサーをＴＢＳＦＣａ単独に移した。

それぞれ、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６と称される、ＢＩＩＢ－９－４８４の少なくとも２つの誘導体は、１０ｎＭの抗体濃度において、親と比べて、標的抗原への結合の顕著な改善が実証された。重鎖のＢＩＩＢ－９－４８４ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域からの偏差を図２２Ａに明記している。２つの誘導体のＢＬＩ結合プロファイルが開示されており、標的抗原（すなわち、遊離ＦＩＸａ）への一層強力な結合が観察されることが示される（図２２Ｂ～２２Ｄ）。ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６の修飾ＶＨ領域のアミノ酸および核酸配列が、以下に提示されている。

一段階凝固アッセイにおいて、各二重特異性（親抗ＦＩＸａアームまたは一定の抗ＦＸアームを含む親和性成熟した抗ＦＩＸａアームのどちらか一方を含む）が、ＦＶＩＩＩａ活性を置き換えることができる能力を比較することにより、二重特異性の抗ＦＩＸａのアームの親和性の増大効果を試験した。実験は、実施例４に説明した通り行った。二重特異性（ＢＩＩＢ－１２－９１７）の抗ＦＸのアームが、ＢＩＩＢ－９－４８４抗ＦＩＸａの
アーム、または抗ＦＩＸａのアーム（ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６）の親和成熟娘のどちらかと対を形成した、１つのこのような実施例を図２３に示す（図２３）。親抗ＦＩＸａのアームと比べて、親和性成熟抗ＦＩＸａのアームを含有する二重特異性抗体の凝固時間のさらなる低下は、抗ＦＩＸａのアームの親和性増大により、生じる二重特異性抗体の活性の増大がもたらされることを示す。

血友病Ａの処置のための、ＦＶＩＩＩに対するＦＶＩＩＩａ擬似二重特異性抗体の基準試験
いくつかの活性アッセイを使用して、参照二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および本開示であるＢＳ－０２７１２５の二重特異性抗体を組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）と比較した。ｂｓＡｂＢＳ－０２７１２５はＢＩＩＢ－９－１３３６およびＢＩＩＢ－１２－９１７を含む。参照二重特異性抗体は、ＡＣＥ９１０／エミシズマブ（「エミシズマブバイオシミラー」）と同一の配列を有する；ＡＣＥ９１０は、活性化第ＩＸ因子および第Ｘ因子に結合して、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の補因子機能を擬似する組換えヒト化二重特異性抗体である。ＡＣＥ９１０は、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第８，０６２，６３５号に開示されている。エミシズマブバイオシミラーおよびＢＳ－０２７１２５は、図２４Ａおよび図２４Ｂにそれぞれ図示されている。エミシズマブバイオシミラーは、第ＩＸ因子チモーゲン、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子チモーゲンおよび第Ｘａ因子の各々に、約１μＭとなるＫ_ｄで結合する（図２４Ａ）。ＢＳ－０２７１２５はまた、第ＩＸ因子チモーゲン（Ｋ_Ｄ＝８ｎＭ）、第ＩＸａ因子（Ｋ_Ｄ＝２ｎＭ）および第Ｘ因子チモーゲン（Ｋ_Ｄ＝２０ｎＭ）に結合するが、第Ｘａ因子には結合しない（図２４Ｂ）。したがって、ＢＳ－０２７１２５は、エミシズマブバイオシミラーよりも、活性化第ＩＸ因子および／または第Ｘ因子チモーゲンに対して高い親和性および高い特異性を有する。

ＢＳ－０２７１２５は、ＦＡＣＳをベースとする選別、次いで親和性成熟によるＡｄｉｍａｂインビトロ酵母提示プラットフォームを使用して上で開示した通り設計した。ｂｓＡｂのこの最初のプールは、ＦＩＸａに特異的な＞２００種の固有の抗体、およびＡｄｉｍａｂを使用してｂｓＡｂに特定された、ＦＸに特異的な＞２５０種の固有の抗体をフォーマットすることにより生成した。ＢＳ－０２７１２５の親抗体であるＢＳ－０２７０２５は、一段階凝固アッセイにおいて、顕著な活性を維持するｂｓＡｂの最初のプールの間の最高のＦＶＩＩＩａ様活性を有した。図２５に図示されている通り、ＢＳ－０２７０２５は、同一アッセイにおいて、凝固時間をかなり短縮し、組換え第ＶＩＩＩ因子の活性に近づいた。表３に示されている通り、ＢＳ－０２７０２５は、第ＸＩ因子チモーゲン（Ｋ_Ｄ＝３７０ｎＭ）、第ＩＸａ因子（Ｋ_Ｄ＝６７ｎＭ）、第ＩＸａ因子－ＬＴＲ（Ｋ_Ｄ＝１０．５ｎＭ）および第Ｘ因子チモーゲン（Ｋ_Ｄ＝２０ｎＭ）に結合したが、第ＩＸａ因子に結合しなかった。

ＢＳ－０２７０２５の抗ＦＩＸａのアームの親和性成熟によりｂｓＡｂＢＳ－０２７１２５となった。特に、二重特異性抗体において、ＢＳ－０２７またはＢＳ－００７構成成分と対になると、抗ＦＩＸａのアーム（ＢＳ－０２５～ＢＳ－１２５）の親和性の増大により、生じた二重特異性抗体のＦＸａ生成速度が増大した（データは示されていない）。さらなる試験により、ＢＳ－０２７１２５は、一段階凝固アッセイにより決定すると、約９０％のＦＶＩＩＩａ様活性を実現することが示された（図２６）。

ＢＳ－０２７１２５、その個々の二価ホモ二量体およびｒＦＶＩＩＩの活性は、発色第Ｘａ因子（ＦＸａ）生成アッセイ（図２７）、第ＸＩａ因子により誘発されるトロンビン生成アッセイ（図２８Ａおよび２８Ｂ）、およびアクチンＦＳＬにより誘発される活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）（図２６）により測定した。

参照ｂｓＡｂは、すべてのアッセイにわたり高活性である一方、ピーク活性を実現した濃度は、アッセイ間で完全に異なった。ＢＳ－０２７１２５もまた、すべてのアッセイにおいて活性があることを示し、ａＰＴＴにおいて高活性であった。両方のｂｓＡｂに関して、トロンビン生成アッセイにおける時間のずれおよびピーク高さは、ｒＦＶＩＩＩ活性の様々なレベルと相関した。参照ｂｓＡｂ二価ホモ二量体のどちらも、いくつかのアッセイにおいて顕著な活性を示した一方、ＢＳ－０２７１２５ＦＩＸａの二価ホモ二量体のみ、ＦＸａ生成アッセイにおいて中程度の活性を保持した。予想される通り、ｒＦＶＩＩＩは、ＦＸａ生成アッセイにおいて、リン脂質の非存在下で、すべての活性を失った。ＢＳ－０２７１２５はまた、最小限のリン脂質に無関係な活性を示した。対照的に、参照ｂｓＡｂは、リン脂質の非存在下で、非常に顕著な活性を有した。

二重特異性ＦＶＩＩＩａの擬似抗体の活性に及ぼすリン脂質の組成の影響
テナーゼ複合体の一部として、活性化第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩａ）は、細胞膜上の露出しているホスファチジルセリン（ＰＳ）に結合して、活性化第ＩＸａ因子および第Ｘ因子と集合する。ＦＶＩＩＩａは、ＰＳ（ホスファチジルセリン）およびホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の両方を含有するリン脂質に優先的に結合することが示されている。ホスファチジルコリン（ＰＣ）リン脂質ベシクル中にホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）が存在すると、最適凝固因子活性に必要なＰＳの量が低下することを示す一方、ＰＳおよびＰＣのみで構成されているベシクルは、最適活性化に一層高いレベルのＰＳを必要とする。最近、ＦＶＩＩＩａの擬似二重特異性抗体（エミシズマブ）は、阻害剤を有するおよびこれを有さない血友病Ａ患者に対する潜在的処置として開発されたものである。ＦＶＩＩＩ擬似二重特異性抗体ＢＳ－０２７１２５は、エミシズマブよりも標的特
異性が改善している。リン脂質の組成がテンナーゼ活性に影響を及ぼすこと、および抗体が、リン脂質に直接、結合しないことを考慮すると、ＦＶＩＩＩａ擬似抗体は、類似したリン脂質優先性を示すかどうか明確ではない。

実施例６において示されている参照ｂｓＡｂ、すなわち本開示の二重特異性抗体であるＢＳ－０２７１２５および組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）の活性に及ぼす様々なリン脂質の組成および濃度の影響を比較した。

参照ｂｓＡｂ、ＢＳ－０２７１２５およびｒＦＶＩＩＩの凝固活性を、第ＸＩａ因子により誘発されるトロンビン生成アッセイにより評価した。ＭｕｉＢら、Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ、２００３年に記載されている通り、単層リン脂質ベシクルを押し出しにより製造した。試験した合成リン脂質のベシクルは、ＰＳ（ホスファチジルセリン）／ＰＥ（ホスファチジルエタノールアミン）／ＰＣ（ホスファチジルコリン）（２０％／４０％／４０％）またはＰＳ／ＰＣ（２０％／８０％）のいずれかからなった。

予想される通り、ｒＦＶＩＩＩ活性は、ＰＥ含有リン脂質に対して約２．５倍高く、活性は、限定時または大過剰の場合、両方のリン脂質の場合で失われた。留意すべきことに、参照ｂｓＡｂ活性は、両方のリン脂質に関して類似した一方、ＢＳ－０２７１２５は、ＰＥ含有リン脂質の場合、約３倍高い活性であった。ピーク活性を担ったリン脂質濃度は、ｒＦＶＩＩＩの場合よりも、参照ｂｓＡｂおよびＢＳ－０２７１２５の場合の方が高かった。これらの結果は、参照ｂｓＡｂおよびＢＳ－０２７１２５は、異なる機構により機能することを示唆している。

ｒＦＶＩＩＩおよびＢＳ－０２７１２５の場合、ＰＥ含有リン脂質に関して活性が向上する傾向は、ＦＸａ生成アッセイとトロンビン生成アッセイとの間で維持されている。図２９を参照されたい。しかし、Ｅｍｉ－ｂｓｉｍは、ＦＸａ生成において活性が向上したが、トロンビン生成ではそうではなかった。図３０を参照されたい。異なるリン脂質表面において、ｒＦＶＩＩＩおよびＦＶＩＩＩａ擬似二重特異性抗体に異なる相対活性があると、ｒＦＶＩＩＩに基準を設けてＦＶＩＩＩａ擬似二重特異性抗体の活性を評価した場合、これらの分子間の直接比較が複雑になり、アッセイ設計の影響が顕著になる。これらのデータは、Ｅｍｉ－ｂｓｉｍとＢＳ－０２７１２５との間の作用機序に差異があることをさらに示唆している。

抗ＦＩＸａ抗体のエピトープビニング
様々な対の抗ＦＩＸａ抗体が固有の部位に結合しているかどうかを決定するため、本発明者らは、製造業者の指示書に従い、ＯｃｔｅｔＨＴＸ系におけるバイオレイヤー干渉法を使用して、ビニング実験を行った。手短に言えば、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅｂｉｏ：カタログ番号１８－５００５）をＴＢＳＦＣａ中で６０秒間、平衡にした。続いて、第１の抗体（ＴＢＳＦＣａ中で２００ｎＭ）を１８０秒にわたり、バイオセンサーの先端にロードし、次いで、緩衝液単独中で６０秒間、ベースライン工程を行った。

プローブに残留する任意の遊離結合部位を１８０秒間、非特異的なＩｇＧにより遮断し、次いで、緩衝液単独中で６０秒間、別のベースライン工程を行った。次に、ＦＩＸａ＋ＳＭ（ＴＢＳＦＣａ中で１００ｎＭ）を９０秒間、抗ＦＩＸａ抗体をロードしたプローブに結合させた。最後に、第１の抗体とＦＩＸａ＋ＳＭとの間の複合体を、第２の抗ＦＩＸａ抗体に曝露させた（ＴＢＳＦＣａ中、２００ｎＭ）。

シグナルのさらなる向上は、抗体１および抗体２が、同時に抗原に結合することができ
ること、およびそれらの抗体は、非競合的であることを示しており、これらの抗体は、同じビンに収まらなかったことを意味する（図３１Ａ）。しかし、シグナルのさらなる向上が観察されなかった場合、このことは、抗体１および抗体２が、同時に抗原に結合することができないことを示しており、したがってそれらの抗体は、競合的であると言われ、これらの抗体は、同じビンに収まったことを意味する（図３１Ｂ）。

抗体１および２の同時結合が、１つの方向でしか観察されない場合（すなわち、抗体１－抗原－抗体２対抗体２－抗原－抗体１）、これは、単方向不一致と見なした。

この解析に４８種の抗体のサブセットを選択して、それらの結果を図３１Ｃにまとめている。数種の抗体は、データ補正におけるエラーのため、または所与の抗体がＦＩＸａ＋ＳＭ（例えば、ＦＩＸａに特異的であったため）に結合しなかったので、この解析から除外した。

ビニングネットワークにノード解析を施し、ＦＩＸａ抗体のそれぞれが、そのビニングプロファイルに関して、どのように密接に関連するかを目視により表示した（図３１Ｄ）。抗体の大多数は、互いに非常に密接にクラスター形成する一方、別のグループが数種存在する。ＢＩＩＢ－９－４８４は、固有のビンに収まるように見えた。

ＢＩＩＢ－９－４８４およびＢＩＩＢ－９－１３３６のカルシウム依存性結合
ＢＩＩＢ－９－４８４の固有のビニングプロファイルのために、本発明者らは、この抗体および親和性の成熟した娘ＢＩＩＢ－９－１３３６のさらなる特性を検討した。ＦＩＸａの場合を含む、多数の凝固因子の活性および結合特性が、カルシウム依存性であるので、本発明者らは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して、これらの２つの抗体が、カルシウムの存在または非存在によって影響を受けるかどうかを最初に試験した。

ＯｃｔｅｔＱＫ３８４系を使用して、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードバイオセンサー（ＰａｌｌＦｏｒｔｅｂｉｏ：カタログ番号１８－５００５）をＨＢＳ中で６０秒間、平衡にし、次いで、プローブに１０ｕｇ／ｍＬの抗体を１８０秒間、ロードする工程を行った。ＨＢＳ中での６０秒間のベースライン工程の後、抗体をロードしたプローブをＨＢＳ中、または５ｍＭのＣａＣｌ_２を含むＨＢＳ中、２００ｎＭのＦＩＸａに１８０秒間、曝露させて、次いで、ＨＢＳ中、または５ｍＭのＣａＣｌ_２を単独で含むＨＢＳ中で、１８０秒間、解離工程を行った。

図３２Ａおよび３２Ｂに示されている結合データにより、ＢＩＩＢ－９－４８４およびＢＩＩＢ－９－１３３６のどちらもＦＩＸａに対する結合は、カルシウム依存的であることが示される。ＢＩＩＢ－９－４８４は、カルシウムの存在に完全に依存する一方、ＢＩＩＢ－９－１３３６のＦＩＸａへの結合は著しく低下するが、カルシウムの非存在でも依然として測定可能である。

ＦＩＸａのタンパク質分解活性に及ぼすＢＩＩＢ－９－１３３６の影響
ＢＩＩＢ－９－１３３６が、ＦＩＸａの酵素機能に及ぼす効果を有するかどうか決定するため、本発明者らは、ＴＢＳＣａ中で５分間、２５０ｎＭのＦＩＸａと共に、様々な量の抗体をインキュベートした。続いて、ペプチド基質であるＡＤＧ２９９を加えて、最終濃度を０．８ｍＭにし、ＦＩＸａによる基質切断の速度を経時的なＯＤの変化により測定した（図３３Ａ）。

比較のため、別の抗ＦＩＸａ抗体であるＢＩＩＢ－９－５７９もまた、ＦＩＸａの、お
よびネガティブ対照として抗ＦＸ抗体であるＢＩＩＢ－１２－９１７のアミド分解活性に影響を及ぼす能力があるかを試験した。ＢＩＩＢ－９－１３３６は、ＦＩＸａによる基質切断の速度を３倍、向上させることができた一方、ＢＩＩＢ－９－５７９およびＢＩＩＢ－１２－９１７は、影響を及ぼさなかった。

この活性は、１つのアームとしてＢＩＩＢ－９－１３３６のホモ二量体性質、およびＢＩＩＢ－９－１３３６のたった１つのアームしか含んでいない二重特異性抗体に依存せず、同じ３倍、速度の向上を示す。ＢＩＩＢ－９－１３３６は、ＢＩＩＢ－９－４８４の娘であり、同じ固有のビンに収まるので、ＦＩＸａのアミド分解活性を向上させる能力について、このビンにおける他の抗体の試験を継続した。５００ｎＭＦＩＸａを使用することによる、上記の同一アッセイ設定を使用して、本発明者らは、ＢＩＩＢ－９－４８４／１３３６のビンからの１５種の抗体、および異なるビンに収まるＢＩＩＢ－９－６１９およびＢＩＩＢ－９－５７８からのさらなる１１種の娘抗体を試験した。

これらの抗体の存在下で、ＦＩＸａのアミド分解活性の変化倍率が、図３３Ｂに示されており、ＦＩＸａがアミド分解活性を向上させる能力は、ＢＩＩＢ－９－４８４／ＢＩＩＢ－９－１３３６のビンに由来する抗体に固有であり、試験した条件下で、最大で５倍の増加まで到達することを示している。本発明者らは、次に、ＢＩＩＢ－９－１３３６の存在下または非存在下での、ＡＤＧ２９９に対するＦＩＸａの速度パラメータであるＫＭおよびＶｍａｘを決定した。ここで、５００ｎＭのＦＩＸａを、ＴＢＳＣａおよび３３％エチレングリコール中、１０００ｎＭのＢＩＩＢ－９－１３３６と共にインキュベートした。基質ＡＤＧ２９９の濃度は、１０ｍＭ～０．０７８ｍＭで変えた。ＢＩＩＢ－９－１３３６の添加により、ＫＭは、４．４ｍＭから３．４ｍＭまで低下し、Ｖｍａｘは、５００ｍＯＤ／分から５８８ｍＯＤ／分まで向上した（図３３Ｃおよび３３Ｄ）。

ＢＩＩＢ－９－１３３６／ＢＩＩＢ－１２－９１７およびアームが１つのＢＩＩＢ－９－１３３６がアミド分解活性をホモ二量体の二価ＢＩＩＢ－９－１３３６と同じレベルにまで向上させた能力により、この活性が、ＢＩＩＢ－９－１３３６の１つのアームとＦＩＸａとの間の一価相互作用に起因することが示される。

ＦＩＸａのＡＴＩＩＩ阻害に及ぼすＢＩＩＢ－９－１３３６の影響
抗トロンビンＩＩＩは、セリンプロテアーゼ阻害剤であり、ＡＴＩＩＩとＦＩＸａの活性部位のセリンとの間の非可逆的結合の形成をもたらす。したがって、阻害の機構は、ＦＩＸａ活性部位の反応性に依存する。ＢＩＩＢ－９－１３３６は、ＦＩＸａのアミド分解活性を増大することができるので、ＢＩＩＢ－９－１３３６はまた、ＡＴＩＩＩによってＦＩＸａ阻害の速度を向上させるはずであることは理にかなっている。これを試験するため、本発明者らは、１５００ｎＭのＢＩＩＢ－９－１３３６、もしくはＢＩＩＢ－９－４８４の親和性成熟の間に特定された別の抗ＦＩＸａ抗体であるＢＩＩＢ－９－１３３５の存在下または非存在下で、ＴＢＳＣａ中、５０００ｎＭのＡＴＩＩＩと共に５００ｎＭのＦＩＸａをインキュベートした。サンプルは、１、３０、６０および１２０分間時に抜き取り、非還元性ＳＤＳローディング用緩衝液と混合し、４～２０％のＢｉｏＲａｄｓｔａｉｎ－ｆｒｅｅゲル上で泳動させた（図３４Ａ）。

７５ｋＤａの分子量マーカーの近辺を泳動するバンドの外観は、ＡＴＩＩＩ－ＦＩＸａ複合体の形成を示す。バンドの相対強度を定量化して経時的にプロットし（図３４Ｂ）、ＢＩＩＢ－９－１３３５およびＢＩＩＢ－９－１３３６は、ＦＩＸａのＡＴＩＩＩ阻害の速度を約３倍、向上させることができることが示される。

ＦＩＸａに関するＢＩＩＢ－９－１３３６エピトープの特徴付け
ＢＩＩＢ－９－４８４およびＢＩＩＢ－９－１３３６とＦＩＸａとの相互作用のさらなる本発明者らの理解のために、本発明者らは、これらの抗体の正確なエピトープを決定しようとした。これを行うため、本発明者らは、標準法を使用して、これらの抗体の各々のＦａｂ部分のみを最初に、クローニングして発現させて、精製した。続いて、本発明者らは、緩衝液を含有するカルシウム中で、各ＦａｂをＦＩＸａと１．５：１のモル比で混合し、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、過剰のＦａｂから得られた複合体を精製した。

得られた１：１の複合体を、蒸気拡散法を使用して、市販の結晶化ふるいでふるいにかけた。両方の複合体とも結晶になった一方、ＢＩＩＢ－９－１３３６複合体の結晶だけ、高品質の回折データが生じた。ＢＩＩＢ－９－１３３６ＦａｂとＦＩＸａとの間の得られた構造は、標準法を使用して分子置換により解明し、図３５に示している。

ＢＩＩＢ－９－１３３６エピトープを構成するＦＩＸａ上の残基が、図３６に黒色で示されており、比較のため、ＦＩＸａのＦＶＩＩＩａ結合部位を構成する残基も示している。これらの同じ残基が、図３７の表中に一覧表示されている。

これらのデータにより、ＢＩＩＢ－９－１３３６およびＦＶＩＩＩａは、ＦＩＸａで重なりエピトープを共有することが明らかである。共有される残基は、図３６中、白色で輪郭を描き、図３７に下線を引き、太字で記載している。

ＦＸに関するＢＩＩＢ－１２－９１７エピトープの特徴付け
本発明者らは、ＦＸ上のＢＩＩＢ－１２－９１７のエピトープは、ＢＩＩＢ－９－４８４またはＢＩＩＢ－９－１３３６と対を形成すると、高いＦＶＩＩＩａ様活性で、生産性のある二重特異性抗体を形成するので、上記のＢＩＩＢ－１２－９１７のエピトープを特徴付けようとした。ＢＬＩを使用して、本発明者らは、野生型チモーゲンＦＸ（ＦＸｚ）、野生型活性化ＦＸ（ＦＸａ）、活性化ペプチドを維持する活性化ＦＸ（ＦＸａ＋ＡＰ）、活性化ペプチドを欠如するチモーゲンＦＸ（ＦＸ－ＡＰ）、およびＦＸに由来する活性化ペプチドを含むチモーゲンＦＩＸ（ＦＩＸ＋ＦＸＡＰ）を含めた、異なる組換えＦＸバリアントのパネルへのＢＩＩＢ－１２－９１７の結合を試験した。バリアントの概略図は、図３８Ｂ中に示されている。

ＯｃｔｅｔＱＫ３８４を使用して、抗ヒトＩｇＧ定量（ＡＨＱ）ディップアンドリードを、ＨＢＳＣａ中で６０秒間、平衡にし、次いで、プローブに１５ｕｇ／ｍＬの抗体を１８０秒間、ロードする工程を行った。ＨＢＳＣａ中での６０秒間のベースライン工程の後、抗体をロードしたプローブをＨＢＳＣａ中、３００秒間、２５０ｎＭの各ＦＸバリアントに曝露させて、次いで、ＨＢＳＣａ中、１８０秒間、解離工程を行った。図３８Ａ中の結合データにより、ＢＩＩＢ－１２－９１７は、ＦＸの活性化ペプチドを含有するすべての構築物に結合するが、活性化ペプチドのないものには結合しないことが示される。したがって、ＢＩＩＢ－１２－９１７のエピトープは、ＦＸの活性化ペプチド内にある。

新しい抗ＦＩＸａ抗体
ＢＩＩＢ－９－４８４、ＢＩＩＢ－９－１３３６、ＢＩＩＢ－９－５７８またはＢＩＩＢ－９－６１９から誘導される一連の抗体は、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２；またはＣＤＲＨ３；またはＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３；またはこれらの組合せにアミノ酸多様性を導入することにより生成した。ＦＩＸａ特異性および／または親和性の向上した抗体は、実施例１および５に記載されている方法を使用して、これらの
ライブラリーから特定した。これらの抗体のＶＨおよびＶＬドメインの配列およびそれらのＣＤＲの配列は、以下の表６および７に提示されている。

血友病Ａのヒト化マウスモデルにおける二重特異性抗体の薬物動態および薬力学
二重特異性抗体の前臨床薬物動態評価を、血友病Ａのヒト化マウスモデルで行う。ヒトＦＩＸおよびヒトＦＸ遺伝子を、胚性幹細胞遺伝子標的を使用して、非相同性再結合により、個々のマウス遺伝子座位の各々に、個別にノックインする。続いて、ヒトＦＩＸのノックインマウスのＦＶＩＩＩ遺伝子を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術により編集して、ＦＶＩＩＩ遺伝子ノックアウトを生成した。ヒトＦＩＸノックインとヒトＦＸノックインとの間の品種交雑により、ヒトＦＩＸとヒトＦＸの両方に対する同型接合マウス（ＦＩＸ－Ｘ－ＫＩ）となるであろう。このマウスモデルは、下大静脈閉塞モデルまたは頸動脈塩化第二鉄損傷モデルなどの、血栓モデルを行うのに有用である。マウスＦＶＩＩＩ遺伝子を欠如するヒトＦＩＸノックインとヒトＦＸノックインとの間の品種交雑により、ヒトＦＩＸ、ヒトＦＸおよびＦＶＩＩＩ欠乏の同型接合マウス（ＦＩＸ－Ｘ－ＫＩ／ＦＶＩＩＩ－ｄｅｆ）となるであろう。このマウスモデルは、尾部クリップモデルおよび尾静脈切断モデルなどの止血モデルを行うのに有用である。

これらの実験では、ＦＩＸ－Ｘ－ＫＩ／ＦＶＩＩＩ－ｄｅｆマウスに、ある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩ、および／またはｒＦＶＩＩａもしくは活性化プロトロンビン複合体濃縮物（ａＰＣＣ）などのバイパス治療を投与する。マウスの群に１分子あたり、および時間点あたりに投与する。投与後の各時間点に、マウスを安楽死させて、血液を採集する。回転トロンボエストロメトリー（ＲＯＴＥＭ）に血液の一部を使用するか、または他の活性をベースとするアッセイおよび残留血液を血漿に処理して、ＥＬＩＳＡにより二重特異性抗体の循環レベルを決定する。

血友病Ａのヒト化マウスモデルにおける二重特異性抗体の効能
二重特異性抗体の急性効能は、尾部クリップ出血モデルを用いて決定し、ここでは、尾部先端を切断し、ある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩ、および／またはｒＦＶＩＩａもしくはａＰＣＣなどのバイパス治療を投与したＦＩＸ－Ｘ－ＫＩ／ＦＶＩＩＩ－ｄｅｆマウスからの全血液損失分を、既に記載されている通り測定する（Ｄｕｍｏｎｔら、２０１２年、Ｂｌｏｏｄ、１１９巻（１３号）：３０２４～３０３０頁）。二重特異性抗体の延長された効能は、既に記載した尾静脈切断モデルを用いて決定する（Ｐａｎら、２００９年、Ｂｌｏｏｄ、１１４巻（１３号）：２８０２～２８１１頁）で決定する。手短に言えば、ＦＩＸ－ＦＸ－ＫＩ／ＦＶＩＩＩ－ｄｅｆマウスに、ある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩ、および／またはｒＦＶＩＩａまたはａＰＣＣなどのバイパス治療を投与し、投与の２４時間後に安楽死させて、尾部静脈の切開を施す。出血時間を記録し、マウスを最大２４時間、ケージに戻し、この時点で、これらのマウスの再出血、総合的な応答、活性および生存率を評価する。

ヒト化マウスモデルにおける二重特異性抗体の安全性評価
血栓症モデルを使用して、潜在的な血栓形成促進特性について二重特異性抗体を評価する。下大静脈閉塞モデル（Ａｌｅｍａｎら、２０１４年、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ、１２４巻（８号）：３５９０～３６００頁）または頸動脈塩化第二鉄損傷モデル（Ｍａｃｈｌｕｓら、２０１１年、Ｂｌｏｏｄ、１１７巻（１８号）：４９５３～４９６３頁）を行う。手短に言えば、下大静脈モデルの場合、ＦＩＸ－ＦＸ－ＫＩマウスを安楽死させ、これにｒＦＶＩＩａまたはａＰＣＣなどのある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩおよび／またはバイパス治療を投与し、無菌開腹術を施し、下大静脈を完全に
ライゲーションする。２４時間後、マウスを安楽死させて、血栓重量を測定する。頸動脈塩化第二鉄損傷モデルの場合、ＦＩＸ－ＦＸ－ＫＩマウスを安楽死させ、これにある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩ、および／またはｒＦＶＩＩａまたはａＰＣＣなどのバイパス治療を投与する。頸動脈を１０％の塩化第二鉄溶液で損傷させる。血流の変化をドップラー超音波法によりモニタリングし、頸動脈の閉塞時間を記録する。

カニクイザルにおける二重特異性抗体の薬物動態および薬力学
カニクイザルにおける二重特異性抗体の薬物動態および薬力学評価も、記載されている通り行う（Ｄｕｍｏｎｔら、２０１５年、ＴｈｒｏｍｂＲｅｓ、１３６巻（６号）：１２６６～１２７２頁）。手短に言えば、Ｍｕｔｏら、２０１４年、Ｂｌｏｏｄ、１２４巻（２０号）：３１６５～３１７１頁に記載されているように、後天性血友病Ａモデルを開発する。血友病のサルに、ある範囲の量の二重特異性抗体、対照抗体、ｒＦＶＩＩＩ、および／またはｒＦＶＩＩａもしくはａＰＣＣなどのバイパス治療を投与する。投与後のある範囲の時間点に、血液サンプルを採集する。ＲＯＴＥＭ解析に血液の一部を使用するか、または他の活性をベースとするアッセイおよび残留血液を血漿に処理して、ＥＬＩＳＡにより二重特異性抗体の循環レベルを決定する。

概要および要約の項目ではなく発明を実施するための形態の項目は、特許請求の範囲を解釈するために使用することが意図されていることを理解すべきである。概要および要約の項目は、すべてではないが、１つまたはそれ以上の、本発明者により企図される例示的な本発明の実施形態を示し、こうして、本発明および添付の特許請求の範囲を限定することを決して意図するものではい。

本発明は、特定の機能の実施およびその関係を例示する、機能的基礎的構成要素を活用して上に記載されている。これらの機能的基礎的構成要素の境界は、本説明の便宜上、本明細書において任意に定義されている。特定の機能およびその関係が適切に行われる限り、代替的な境界が定義される。

具体的な実施形態の上述の説明は、本発明の一般的性質を十分に明らかにしているので、当分野の範囲内の知識を適用することにより、本発明の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験なしに、このような具体的な実施形態の様々な用途を容易に修正することができる、および／または適合することができる。したがって、このような適合および修正は、本明細書において提示されている教示および指針に基づいて、開示されている実施形態の意味およびこの均等物の範囲内に意図されている。本明細書における表現または専門用語は、説明を目的とするものであって、制限を目的とするものではなく、こうして、本明細書の専門用語または表現は、教示および指針に照らし合わせて、当業者により解釈されるものとすることを理解されたい。

本開示の広がりおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物によってしか定義されるべきでない。

本出願全体にわたり引用されている、すべての引用参照文献（参照文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、それらに引用されている参照文献にあるように、いずれの目的のためにも、それらの全体が参照により本明細書に明示的に組み入れられる。

Claims

活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸチモーゲン（ＦＩＸｚ）に対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合し、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、該ＶＨがＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、該ＶＬがＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、該ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、（ａ１）配列番号８００、８４５、８９０、９３５、９８０、および１０２５；（ｂ１）配列番号８０１、８４６、８９１、９３６、９８１、および１０２６；（ｃ１）配列番号８０２、８４７、８９２、９３７、９８２、および１０２７；（ｄ１）配列番号８０３、８４８、８９３、９３８、９８３、および１０２８；（ｅ１）配列番号８０４、８４９、８９４、９３９、９８４、および１０２９；（ｆ１）配列番号８０５、８５０、８９５、９４０、９８５、および１０３０；（ｇ１）配列番号８０６、８５１、８９６、９４１、９８６、および１０３１；（ｈ１）配列番号８０７、８５２、８９７、９４２、９８７、および１０３２；（ｉ１）配列番号８０８、８５３、８９８、９４３、９８８、および１０３３；（ｊ１）配列番号８１０、８５５、９００、９４５、９９０、および１０３５；（ｋ１）配列番号８１２、８５７、９０２、９４７、９９２、および１０３７；（ｌ１）配列番号８１３、８５８、９０３、９４８、９９３、および１０３８；（ｍ１）配列番号８１４、８５９、９０４、９４９、９９４、および１０３９；（ｎ１）配列番号８１６、８６１、９０６、９５１、９９６、および１０４１；（ｏ１）配列番号８１７、８６２、９０７、９５２、９９７、および１０４２；（ｐ１）配列番号８１８、８６３、９０８、９５３、９９８、および１０４３；（ｑ１）配列番号８１９、８６４、９０９、９５４、９９９、および１０４４；（ｒ１）配列番号８２０、８６５、９１０、９５５、１０００、および１０４５；（ｓ１）配列番号８２１、８６６、９１１、９５６、１００１、および１０４６；（ｔ１）配列番号８２３、８６８、９１３、９５８、１００３、および１０４８；（ｕ１）配列番号８２４、８６９、９１４、９５９、１００４、および１０４９；（ｖ１）配列番号８２５、８７０、９１５、９６０、１００５、および１０５０；（ｗ１）配列番号８２６、８７１、９１６、９６１、１００６、および１０５１；（ｘ１）配列番号８２７、８７２、９１７、９６２、１００
７、および１０５２；（ｙ１）配列番号８２８、８７３、９１８、９６３、１００８、および１０５３；（ｚ１）配列番号８２９、８７４、９１９、９６４、１００９、および１０５４；（ａ２）配列番号８３０、８７５、９２０、９６５、１０１０、および１０５５；（ｂ２）配列番号８３１、８７６、９２１、９６６、１０１１、および１０５６；（ｃ２）配列番号８３２、８７７、９２２、９６７、１０１２、および１０５７；（ｄ２）配列番号８３３、８７８、９２３、９６８、１０１３、および１０５８；（ｅ２）配列番号８３４、８７９、９２４、９６９、１０１４、および１０５９；（ｆ２）配列番号８３５、８８０、９２５、９７０、１０１５、および１０６０；（ｇ２）配列番号８３６、８８１、９２６、９７１、１０１６、および１０６１；（ｈ２）配列番号８３７、８８２、９２７、９７２、１０１７、および１０６２；（ｉ２）配列番号８３８、８８３、９２８、９７３、１０１８、および１０６３；（ｊ２）配列番号８３９、８８４、９２９、９７４、１０１９、および１０６４；（ｋ２）配列番号８４０、８８５、９３０、９７５、１０２０、および１０６５；（ｌ２）配列番号８４１、８８６、９３１、９７６、１０２１、および１０６６；（ｍ２）配列番号８４２、８８７、９３２、９７７、１０２２、および１０６７；（ｎ２）配列番号８４４、８８９、９３４、９７９、１０２４、および１０６９；（ｏ２）配列番号１０７０、１０７４、１０７８、１０８２、１０８６、および１０９０；（ｐ２）配列番号１０７１、１０７５、１０７９、１０８３、１０８７、および１０９１；（ｑ２）配列番号１０７２、１０７６、１０８０、１０８４、１０８８、および１０９２；（ｒ２）配列番号１０７３、１０７７、１０８１、１０８５、１０８９、および１０９３；（ｓ２）配列番号１０９４、１１３６、１１７８、１２２０、１２６２、および１３０４；（ｔ２）配列番号１０９５、１１３７、１１７９、１２２１、１２６３、および１３０５；（ｕ２）配列番号１０９６、１１３８、１１８０、１２２２、１２６４、および１３０６；（ｖ２）配列番号１０９７、１１３９、１１８１、１２２３、１２６５、および１３０７；（ｗ２）配列番号１０９８、１１４０、１１８２、１２２４、１２６６、および１３０８；（ｘ２）配列番号１０９９、１１４１、１１８３、１２２５、１２６７、および１３０９；（ｙ２）配列番号１１００、１１４２、１１８４、１２２６、１２６８、および１３１０；（ｚ３）配列番号１１０１、１１４３、１１８５、１２２７、１２６９、および１３１１；（ａ３）配列番号１１０３、１１４５、１１８７、１２２９、１２７１、および１３１３；（ｂ３）配列番号１１０４、１１４６、１１８８、１２３０、１２７２、および１３１４；（ｃ３）配列番号１１０５、１１４７、１１８９、１２３１、１２７３、および１３１５；（ｄ３）配列番号１１０６、１１４８、１１９０、１２３２、１２７４、および１３１６；（ｅ３）配列番号１１０７、１１４９、１１９１、１２３３、１２７５、および１３１７；（ｆ３）配列番号１１０９、１１５１、１１９３、１２３５、１２７７、および１３１９；（ｇ３）配列番号１１１０、１１５２、１１９４、１２３６、１２７８、および１３２０；（ｈ３）配列番号１１１１、１１５３、１１９５、１２３７、１２７９、および１３２１；（ｉ３）配列番号１１１２、１１５４、１１９６、１２３８、１２８０、および１３２２；（ｊ３）配列番号１１１３、１１５５、１１９７、１２３９、１２８１、および１３２３；（ｋ３）配列番号１１１４、１１５６、１１９８、１２４０、１２８２、および１３２４；（ｌ３）配列番号１１１５、１１５７、１１９９、１２４１、１２８３、および１３２５；（ｍ３）配列番号１１１６、１１５８、１２００、１２４２、１２８４、および１３２６；（ｎ３）配列番号１１１７、１１５９、１２０１、１２４３、１２８５、および１３２７；（ｏ３）配列番号１１１８、１１６０、１２０２、１２４４、１２８６、および１３２８；（ｐ３）配列番号１１１９、１１６１、１２０３、１２４５、１２８７、および１３２９；（ｑ３）配列番号１１２０、１１６２、１２０４、１２４６、１２８８、および１３３０；（ｒ３）配列番号１１２１、１１６３、１２０５、１２４７、１２８９、および１３３１；（ｓ３）配列番号１１２２、１１６４、１２０６、１２４８、１２９０、および１３３２；（ｔ３）配列番号１１２３、１１６５、１２０７、１２４９、１２９１、および１３３３；（ｕ３）配列番号１１２４、１１６６、１２０８、１２５０、１２９２、および１３３４；（ｖ３）配列番号１１２５、１１６７、１２０９、１２５１、１２９３、および１３３５；（ｗ３）
配列番号１１２６、１１６８、１２１０、１２５２、１２９４、および１３３６；（ｘ３）配列番号１１２７、１１６９、１２１１、１２５３、１２９５、および１３３７；（ｙ３）配列番号１１２８、１１７０、１２１２、１２５４、１２９６、および１３３８；（ｚ３）配列番号１１２９、１１７１、１２１３、１２５５、１２９７、および１３３９；（ａ４）配列番号１１３０、１１７２、１２１４、１２５６、１２９８、および１３４０；（ｂ４）配列番号１１３１、１１７３、１２１５、１２５７、１２９９、および１３４１；（ｃ４）配列番号１１３２、１１７４、１２１６、１２５８、１３００、および１３４２；（ｄ４）配列番号１１３３、１１７５、１２１７、１２５９、１３０１、および１３４３；（ｅ４）配列番号１１３４、１１７６、１２１８、１２６０、１３０２、および１３４４；または（ｆ４）配列番号１１３５、１１７７、１２１９、１２６１、１３０３、および１３４５に示されるアミノ酸配列を含み、
（ａ１）のＶＨが配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ１）のＶＨが配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ１）のＶＨが配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ１）のＶＨが配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ１）のＶＨが配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ１）のＶＨが配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ１）のＶＨが配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ１）のＶＨが配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ１）のＶＨが配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ１）のＶＨが配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ１）のＶＨが配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ１）のＶＨが配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ１）のＶＨが配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ１）のＶＨが配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ１）のＶＨが配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ１）のＶＨが配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ１）のＶＨが配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ１）のＶＨが配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ１）のＶＨが配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ１）のＶＨが配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ１）のＶＨが配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ１）のＶＨが配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ１）のＶＨが配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ１）のＶＨが配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ１）のＶＨが配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ１）のＶＨが配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ２）のＶＨが配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ２）のＶＨが配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ２）のＶＨが配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ２）のＶＨが配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ２）のＶＨが配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ２）のＶＨが配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ２）のＶＨが配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ２）のＶＨが配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ２）のＶＨが配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ２）のＶＨが配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ２）のＶＨが配列番号８１のア
ミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ２）のＶＨが配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ２）のＶＨが配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ２）のＶＨが配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ２）のＶＨが配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ２）のＶＨが配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ２）のＶＨが配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ２）のＶＨが配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ２）のＶＨが配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ２）のＶＨが配列番号１０１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ２）のＶＨが配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ２）のＶＨが配列番号１０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ２）のＶＨが配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ２）のＶＨが配列番号１０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ２）のＶＨが配列番号１１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ２）のＶＨが配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ３）のＶＨが配列番号１１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ３）のＶＨが配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ３）のＶＨが配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ３）のＶＨが配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ３）のＶＨが配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ３）のＶＨが配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ３）のＶＨが配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ３）のＶＨが配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ３）のＶＨが配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ３）のＶＨが配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ３）のＶＨが配列番号１３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ３）のＶＨが配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ３）のＶＨが配列番号１４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ３）のＶＨが配列番号１４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ３）のＶＨが配列番号１４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ３）のＶＨが配列番号１４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ３）のＶＨが配列番号１５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ３）のＶＨが配列番号１５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ３）のＶＨが配列番号１５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ３）のＶＨが配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ３）のＶＨが配列番号１５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ３）のＶＨが配列番号１６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ３）のＶＨが配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ３）のＶＨが配列番号１６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ３）のＶＨが配列番号１６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ３）のＶＨが配列番号１６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ４）のＶＨが配列番号１７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ４）のＶＨが配列番号１７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ４）のＶＨが配列番号１７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ４）のＶＨが配列番号１７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（
ｅ４）のＶＨが配列番号１７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、または（ｆ４）のＶＨが配列番号１８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
活性化第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分のＦＩＸチモーゲン（ＦＩＸｚ）に対する結合親和性よりも高い結合親和性でＦＩＸａに結合し、該抗ＦＩＸａ抗体またはその抗原結合部分が重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、該ＶＨがＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、該ＶＬがＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、該ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、（ａ１）配列番号８００、８４５、８９０、９３５、９８０、および１０２５；（ｂ１）配列番号８０１、８４６、８９１、９３６、９８１、および１０２６；（ｃ１）配列番号８０２、８４７、８９２、９３７、９８２、および１０２７；（ｄ１）配列番号８０３、８４８、８９３、９３８、９８３、および１０２８；（ｅ１）配列番号８０４、８４９、８９４、９３９、９８４、および１０２９；（ｆ１）配列番号８０５、８５０、８９５、９４０、９８５、および１０３０；（ｇ１）配列番号８０６、８５１、８９６、９４１、９８６、および１０３１；（ｈ１）配列番号８０７、８５２、８９７、９４２、９８７、および１０３２；（ｉ１）配列番号８０８、８５３、８９８、９４３、９８８、および１０３３；（ｊ１）配列番号８１０、８５５、９００、９４５、９９０、および１０３５；（ｋ１）配列番号８１２、８５７、９０２、９４７、９９２、および１０３７；（ｌ１）配列番号８１３、８５８、９０３、９４８、９９３、および１０３８；（ｍ１）配列番号８１４、８５９、９０４、９４９、９９４、および１０３９；（ｎ１）配列番号８１６、８６１、９０６、９５１、９９６、および１０４１；（ｏ１）配列番号８１７、８６２、９０７、９５２、９９７、および１０４２；（ｐ１）配列番号８１８、８６３、９０８、９５３、９９８、および１０４３；（ｑ１）配列番号８１９、８６４、９０９、９５４、９９９、および１０４４；（ｒ１）配列番号８２０、８６５、９１０、９５５、１０００、および１０４５；（ｓ１）配列番号８２１、８６６、９１１、９５６、１００１、および１０４６；（ｔ１）配列番号８２３、８６８、９１３、９５８、１００３、および１０４８；（ｕ１）配列番号８２４、８６９、９１４、９５９、１００４、および１０４９；（ｖ１）配列番号８２５、８７０、９１５、９６０、１００５、および１０５０；（ｗ１）配列番号８２６、８７１、９１６、９６１、１００６、および１０５１；（ｘ１）配列番号８２７、８７２、９１７、９６２、１００７、および１０５２；（ｙ１）配列番号８２８、８７３、９１８、９６３、１００８、および１０５３；（ｚ１）配列番号８２９、８７４、９１９、９６４、１００９、および１０５４；（ａ２）配列番号８３０、８７５、９２０、９６５、１０１０、および１０５５；（ｂ２）配列番号８３１、８７６、９２１、９６６、１０１１、および１０５６；（ｃ２）配列番号８３２、８７７、９２２、９６７、１０１２、および１０５７；（ｄ２）配列番号８３３、８７８、９２３、９６８、１０１３、および１０５８；（ｅ２）配列番号８３４、８７９、９２４、９６９、１０１４、および１０５９；（ｆ２）配列番号８３５、８８０、９２５、９７０、１０１５、および１０６０；（ｇ２）配列番号８３６、８８１、９２６、９７１、１０１６、および１０６１；（ｈ２）配列番号８３７、８８２、９２７、９７２、１０１７、および１０６２；（ｉ２）配列番号８３８、８８３、９２８、９７３、１０１８、および１０６３；（ｊ２）配列番号８３９、８８４、９２９、９７４、１０１９、および１０６４；（ｋ２）配列番号８４０、８８５、９３０、９７５、１０２０、および１０６５；（ｌ２）配列番号８４１、８８６、９３１、９７６、１０２１、および１０６６；（ｍ２）配列番号８４２、８８７、９３２、９７７、１０２２、および１０６７；（ｎ２）配列番号１０７０、１０７４、１０７８、１０８２、１０８６、および１０９０；（ｏ２）配列番号１０７１、１０７５、１０７９、１０８３、１０８７、および１０９１；（ｐ２）配列番号１０７２、１０７６、１０８０、１０８４、１０８８、
および１０９２；（ｑ２）配列番号１０７３、１０７７、１０８１、１０８５、１０８９、および１０９３；（ｒ２）配列番号１０９４、１１３６、１１７８、１２２０、１２６２、および１３０４；（ｓ２）配列番号１０９５、１１３７、１１７９、１２２１、１２６３、および１３０５；（ｔ２）配列番号１０９６、１１３８、１１８０、１２２２、１２６４、および１３０６；（ｕ２）配列番号１０９７、１１３９、１１８１、１２２３、１２６５、および１３０７；（ｖ２）配列番号１０９８、１１４０、１１８２、１２２４、１２６６、および１３０８；（ｗ２）配列番号１０９９、１１４１、１１８３、１２２５、１２６７、および１３０９；（ｘ２）配列番号１１００、１１４２、１１８４、１２２６、１２６８、および１３１０；（ｙ２）配列番号１１０１、１１４３、１１８５、１２２７、１２６９、および１３１１；（ｚ２）配列番号１１０３、１１４５、１１８７、１２２９、１２７１、および１３１３；（ａ３）配列番号１１０４、１１４６、１１８８、１２３０、１２７２、および１３１４；（ｂ３）配列番号１１０５、１１４７、１１８９、１２３１、１２７３、および１３１５；（ｃ３）配列番号１１０６、１１４８、１１９０、１２３２、１２７４、および１３１６；（ｄ３）配列番号１１０７、１１４９、１１９１、１２３３、１２７５、および１３１７；（ｅ３）配列番号１１０９、１１５１、１１９３、１２３５、１２７７、および１３１９；（ｆ３）配列番号１１１０、１１５２、１１９４、１２３６、１２７８、および１３２０；（ｇ３）配列番号１１１１、１１５３、１１９５、１２３７、１２７９、および１３２１；（ｈ３）配列番号１１１２、１１５４、１１９６、１２３８、１２８０、および１３２２；（ｉ３）配列番号１１１３、１１５５、１１９７、１２３９、１２８１、および１３２３；（ｊ３）配列番号１１１４、１１５６、１１９８、１２４０、１２８２、および１３２４；（ｋ３）配列番号１１１５、１１５７、１１９９、１２４１、１２８３、および１３２５；（ｌ３）配列番号１１１６、１１５８、１２００、１２４２、１２８４、および１３２６；（ｍ３）配列番号１１１７、１１５９、１２０１、１２４３、１２８５、および１３２７；（ｎ３）配列番号１１１８、１１６０、１２０２、１２４４、１２８６、および１３２８；（ｏ３）配列番号１１１９、１１６１、１２０３、１２４５、１２８７、および１３２９；（ｐ３）配列番号１１２０、１１６２、１２０４、１２４６、１２８８、および１３３０；（ｑ３）配列番号１１２１、１１６３、１２０５、１２４７、１２８９、および１３３１；（ｒ３）配列番号１１２２、１１６４、１２０６、１２４８、１２９０、および１３３２；（ｓ３）配列番号１１２３、１１６５、１２０７、１２４９、１２９１、および１３３３；（ｔ３）配列番号１１２４、１１６６、１２０８、１２５０、１２９２、および１３３４；（ｕ３）配列番号１１２５、１１６７、１２０９、１２５１、１２９３、および１３３５；（ｖ３）配列番号１１２６、１１６８、１２１０、１２５２、１２９４、および１３３６；（ｗ３）配列番号１１２７、１１６９、１２１１、１２５３、１２９５、および１３３７；（ｘ３）配列番号１１２８、１１７０、１２１２、１２５４、１２９６、および１３３８；（ｙ３）配列番号１１２９、１１７１、１２１３、１２５５、１２９７、および１３３９；（ｚ３）配列番号１１３０、１１７２、１２１４、１２５６、１２９８、および１３４０；（ａ４）配列番号１１３１、１１７３、１２１５、１２５７、１２９９、および１３４１；（ｂ４）配列番号１１３２、１１７４、１２１６、１２５８、１３００、および１３４２；（ｃ４）配列番号１１３３、１１７５、１２１７、１２５９、１３０１、および１３４３；（ｄ４）配列番号１１３４、１１７６、１２１８、１２６０、１３０２、および１３４４；または（ｅ４）配列番号１１３５、１１７７、１２１９、１２６１、１３０３、および１３４５
に示されるアミノ酸配列を含み、
（ａ１）のＶＬが配列番号１９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ１）のＶＬが配列番号１９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ１）のＶＬが配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも
８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ１）のＶＬが配列番号１９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ１）のＶＬが配列番号１９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ１）のＶＬが配列番号２０１の
アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ１）のＶＬが配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ１）のＶＬが配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ１）のＶＬが配列番号２０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ１）のＶＬが配列番号２１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ１）のＶＬが配列番号２１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ１）のＶＬが配列番号２１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ１）のＶＬが配列番号２１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ１）のＶＬが配列番号２２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ１）のＶＬが配列番号２２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ１）のＶＬが配列番号２２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ１）のＶＬが配列番号２２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ１）のＶＬが配列番号２３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ１）のＶＬが配列番号２３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ１）のＶＬが配列番号２３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ１）のＶＬが配列番号２３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ１）のＶＬが配列番号２４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ１）のＶＬが配列番号２４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ１）のＶＬが配列番号２４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ１）のＶＬが配列番号２４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ１）のＶＬが配列番号２４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ２）のＶＬが配列番号２５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ２）のＶＬが配列番号２５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ２）のＶＬが配列番号２５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ２）のＶＬが配列番号２５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ２）のＶＬが配列番号２５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ２）のＶＬが配列番号２６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ２）のＶＬが配列番号２６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ２）のＶＬが配列番号２６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ２）のＶＬが配列番号２６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ２）のＶＬが配列番号２６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ２）のＶＬが配列番号２７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ２）のＶＬが配列番号２７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ２）のＶＬが配列番号２７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ２）のＶＬが配列番号２７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ２）のＶＬが配列番号２７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ２）のＶＬが配列番号２８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ２）のＶＬが配列番号２８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ２）のＶＬが配列番号２８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ２）のＶＬが配列番号２８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ２）のＶＬが配列番号２８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ２）のＶＬが配列番号２９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ２）のＶＬが配列番号２９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ２）のＶＬが配列番号２９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ２）のＶＬが配列番号２９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ２）のＶＬが配列番号２９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミ
ノ酸配列を含む、（ｚ２）のＶＬが配列番号３０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ３）のＶＬが配列番号３０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ３）のＶＬが配列番号３０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ３）のＶＬが配列番号３０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ３）のＶＬが配列番号３１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ３）のＶＬが配列番号３１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ３）のＶＬが配列番号３１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ３）のＶＬが配列番号３１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ３）のＶＬが配列番号３２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ３）のＶＬが配列番号３２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ３）のＶＬが配列番号３２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ３）のＶＬが配列番号３２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ３）のＶＬが配列番号３２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ３）のＶＬが配列番号３３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ３）のＶＬが配列番号３３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ３）のＶＬが配列番号３３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ３）のＶＬが配列番号３３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ３）のＶＬが配列番号３３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ３）のＶＬが配列番号３４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ３）のＶＬが配列番号３４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ３）のＶＬが配列番号３４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ３）のＶＬが配列番号３４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ３）のＶＬが配列番号３４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ３）のＶＬが配列番号３５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ３）のＶＬが配列番号３５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ３）のＶＬが配列番号３５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ３）のＶＬが配列番号３５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａ４）のＶＬが配列番号３５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ４）のＶＬが配列番号３６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ４）のＶＬが配列番号３６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ４）のＶＬが配列番号３６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、または（ｅ４）のＶＬが配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合部分および第Ｘ因子チモーゲン（ＦＸｚ）に結合する抗体またはその抗原結合部分（「抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分」）を含む二重特異性分子であって、該抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分がＶＨおよびＶＬを含み、該ＶＨがＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、該ＶＬがＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、該抗ＦＸｚ抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）それぞれ、配列番号１３７０、１４６０、１５５０、１６４０、１７３０、および１８２０；
（ｂ）それぞれ、配列番号１３７１、１４６１、１５５１、１６４１、１７３１、および１８２１；
（ｃ）それぞれ、配列番号１３７２、１４６２、１５５２、１６４２、１７３２、および１８２２；
（ｄ）それぞれ、配列番号１３７３、１４６３、１５５３、１６４３、１７３３、および
１８２３；
（ｅ）それぞれ、配列番号１３７４、１４６４、１５５４、１６４４、１７３４、および１８２４；
（ｆ）それぞれ、配列番号１３７５、１４６５、１５５５、１６４５、１７３５、および１８２５；
（ｇ）それぞれ、配列番号１３７６、１４６６、１５５６、１６４６、１７３６、および１８２６；
（ｈ）それぞれ、配列番号１３７７、１４６７、１５５７、１６４７、１７３７、および１８２７；
（ｉ）それぞれ、配列番号１３７８、１４６８、１５５８、１６４８、１７３８、および１８２８；
（ｊ）それぞれ、配列番号１３７９、１４６９、１５５９、１６４９、１７３９、および１８２９；
（ｋ）それぞれ、配列番号１３８０、１４７０、１５６０、１６５０、１７４０、および１８３０；
（ｌ）それぞれ、配列番号１３８１、１４７１、１５６１、１６５１、１７４１、および１８３１；
（ｍ）それぞれ、配列番号１３８２、１４７２、１５６２、１６５２、１７４２、および１８３２；
（ｎ）それぞれ、配列番号１３８３、１４７３、１５６３、１６５３、１７４３、および１８３３；
（ｏ）それぞれ、配列番号１３８４、１４７４、１５６４、１６５４、１７４４、および１８３４；
（ｐ）それぞれ、配列番号１３８５、１４７５、１５６５、１６５５、１７４５、および１８３５；
（ｑ）それぞれ、配列番号１３８６、１４７６、１５６６、１６５６、１７４６、および１８３６；
（ｒ）それぞれ、配列番号１３８７、１４７７、１５６７、１６５７、１７４７、および１８３７；
（ｓ）それぞれ、配列番号１３８８、１４７８、１５６８、１６５８、１７４８、および１８３８；
（ｔ）それぞれ、配列番号１３８９、１４７９、１５６９、１６５９、１７４９、および１８３９；
（ｕ）それぞれ、配列番号１３９０、１４８０、１５７０、１６６０、１７５０、および１８４０；
（ｖ）それぞれ、配列番号１３９１、１４８１、１５７１、１６６１、１７５１、および１８４１；
（ｗ）それぞれ、配列番号１３９２、１４８２、１５７２、１６６２、１７５２、および１８４２；
（ｘ）それぞれ、配列番号１３９３、１４８３、１５７３、１６６３、１７５３、および１８４３；
（ｙ）それぞれ、配列番号１３９４、１４８４、１５７４、１６６４、１７５４、および１８４４；
（ｚ）それぞれ、配列番号１３９５、１４８５、１５７５、１６６５、１７５５、および１８４５；
（ａａ）それぞれ、配列番号１３９６、１４８６、１５７６、１６６６、１７５６、および１８４６；
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１３９７、１４８７、１５７７、１６６７、１７５７、および１８４７；
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１３９８、１４８８、１５７８、１６６８、１７５８、およ
び１８４８；
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１３９９、１４８９、１５７９、１６６９、１７５９、および１８４９；
（ｅｅ）それぞれ、配列番号１４００、１４９０、１５８０、１６７０、１７６０、および１８５０；
（ｆｆ）それぞれ、配列番号１４０１、１４９１、１５８１、１６７１、１７６１、および１８５１；
（ｇｇ）それぞれ、配列番号１４０２、１４９２、１５８２、１６７２、１７６２、および１８５２；
（ｈｈ）それぞれ、配列番号１４０３、１４９３、１５８３、１６７３、１７６３、および１８５３；
（ｉｉ）それぞれ、配列番号１４０４、１４９４、１５８４、１６７４、１７６４、および１８５４；
（ｊｊ）それぞれ、配列番号１４０５、１４９５、１５８５、１６７５、１７６５、および１８５５；
（ｋｋ）それぞれ、配列番号１４０６、１４９６、１５８６、１６７６、１７６６、および１８５６；
（ｌｌ）それぞれ、配列番号１４０７、１４９７、１５８７、１６７７、１７６７、および１８５７；
（ｍｍ）それぞれ、配列番号１４０８、１４９８、１５８８、１６７８、１７６８、および１８５８；
（ｎｎ）それぞれ、配列番号１４０９、１４９９、１５８９、１６７９、１７６９、および１８５９；
（ｏｏ）それぞれ、配列番号１４１０、１５００、１５９０、１６８０、１７７０、および１８６０；
（ｐｐ）それぞれ、配列番号１４１１、１５０１、１５９１、１６８１、１７７１、および１８６１；
（ｑｑ）それぞれ、配列番号１４１２、１５０２、１５９２、１６８２、１７７２、および１８６２；
（ｒｒ）それぞれ、配列番号１４１３、１５０３、１５９３、１６８３、１７７３、および１８６３；
（ｓｓ）それぞれ、配列番号１４１４、１５０４、１５９４、１６８４、１７７４、および１８６４；
（ｔｔ）それぞれ、配列番号１４１５、１５０５、１５９５、１６８５、１７７５、および１８６５；
（ｕｕ）それぞれ、配列番号１４１６、１５０６、１５９６、１６８６、１７７６、および１８６６；
（ｖｖ）それぞれ、配列番号１４１７、１５０７、１５９７、１６８７、１７７７、および１８６７；
（ｗｗ）それぞれ、配列番号１４１８、１５０８、１５９８、１６８８、１７７８、および１８６８；
（ｘｘ）それぞれ、配列番号１４１９、１５０９、１５９９、１６８９、１７７９、および１８６９；
（ｙｙ）それぞれ、配列番号１４２０、１５１０、１６００、１６９０、１７８０、および１８７０；
（ｚｚ）それぞれ、配列番号１４２１、１５１１、１６０１、１６９１、１７８１、および１８７１；
（ａａａ）それぞれ、配列番号１４２２、１５１２、１６０２、１６９２、１７８２、および１８７２；
（ｂｂｂ）それぞれ、配列番号１４２３、１５１３、１６０３、１６９３、１７８３、お
よび１８７３；
（ｃｃｃ）それぞれ、配列番号１４２４、１５１４、１６０４、１６９４、１７８４、および１８７４；
（ｄｄｄ）それぞれ、配列番号１４２５、１５１５、１６０５、１６９５、１７８５、および１８７５；
（ｅｅｅ）それぞれ、配列番号１４２６、１５１６、１６０６、１６９６、１７８６、および１８７６；
（ｆｆｆ）それぞれ、配列番号１４２７、１５１７、１６０７、１６９７、１７８７、および１８７７；
（ｇｇｇ）それぞれ、配列番号１４２８、１５１８、１６０８、１６９８、１７８８、および１８７８；
（ｈｈｈ）それぞれ、配列番号１４２９、１５１９、１６０９、１６９９、１７８９、および１８７９；
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１４３０、１５２０、１６１０、１７００、１７９０、および１８８０；
（ｊｊｊ）それぞれ、配列番号１４３１、１５２１、１６１１、１７０１、１７９１、および１８８１；
（ｋｋｋ）それぞれ、配列番号１４３２、１５２２、１６１２、１７０２、１７９２、および１８８２；
（ｌｌｌ）それぞれ、配列番号１４３３、１５２３、１６１３、１７０３、１７９３、および１８８３；
（ｍｍｍ）それぞれ、配列番号１４３４、１５２４、１６１４、１７０４、１７９４、および１８８４；
（ｎｎｎ）それぞれ、配列番号１４３５、１５２５、１６１５、１７０５、１７９５、および１８８５；
（ｏｏｏ）それぞれ、配列番号１４３６、１５２６、１６１６、１７０６、１７９６、および１８８６；
（ｐｐｐ）それぞれ、配列番号１４３７、１５２７、１６１７、１７０７、１７９７、および１８８７；
（ｑｑｑ）それぞれ、配列番号１４３８、１５２８、１６１８、１７０８、１７９８、および１８８８；
（ｒｒｒ）それぞれ、配列番号１４３９、１５２９、１６１９、１７０９、１７９９、および１８８９；
（ｓｓｓ）それぞれ、配列番号１４４０、１５３０、１６２０、１７１０、１８００、および１８９０；
（ｔｔｔ）それぞれ、配列番号１４４１、１５３１、１６２１、１７１１、１８０１、および１８９１；
（ｕｕｕ）それぞれ、配列番号１４４２、１５３２、１６２２、１７１２、１８０２、および１８９２；
（ｖｖｖ）それぞれ、配列番号１４４３、１５３３、１６２３、１７１３、１８０３、および１８９３；
（ｗｗｗ）それぞれ、配列番号１４４４、１５３４、１６２４、１７１４、１８０４、および１８９４；
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号１４４５、１５３５、１６２５、１７１５、１８０５、および１８９５；
（ｙｙｙ）それぞれ、配列番号１４４６、１５３６、１６２６、１７１６、１８０６、および１８９６；
（ｚｚｚ）それぞれ、配列番号１４４７、１５３７、１６２７、１７１７、１８０７、および１８９７；
（ａａａａ）それぞれ、配列番号１４４８、１５３８、１６２８、１７１８、１８０８、
および１８９８；
（ｂｂｂｂ）それぞれ、配列番号１４４９、１５３９、１６２９、１７１９、１８０９、および１８９９；
（ｃｃｃｃ）それぞれ、配列番号１４５０、１５４０、１６３０、１７２０、１８１０、および１９００；
（ｄｄｄｄ）それぞれ、配列番号１４５１、１５４１、１６３１、１７２１、１８１１、および１９０１；
（ｅｅｅｅ）それぞれ、配列番号１４５２、１５４２、１６３２、１７２２、１８１２、および１９０２；
（ｆｆｆｆ）それぞれ、配列番号１４５３、１５４３、１６３３、１７２３、１８１３、および１９０３；
（ｇｇｇｇ）それぞれ、配列番号１４５４、１５４４、１６３４、１７２４、１８１４、および１９０４；
（ｈｈｈｈ）それぞれ、配列番号１４５５、１５４５、１６３５、１７２５、１８１５、および１９０５；
（ｉｉｉｉ）それぞれ、配列番号１４５６、１５４６、１６３６、１７２６、１８１６、および１９０６；
（ｊｊｊｊ）それぞれ、配列番号１４５７、１５４７、１６３７、１７２７、１８１７、および１９０７；
（ｋｋｋｋ）それぞれ、配列番号１４５８、１５４８、１６３８、１７２８、１８１８、および１９０８；または
（ｌｌｌｌ）それぞれ、配列番号１４５９、１５４９、１６３９、１７２９、１８１９、および１９０９
を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、
（ａ）のＶＨが配列番号３７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ）のＶＨが配列番号３７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ）のＶＨが配列番号３８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ）のＶＨが配列番号３８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ）のＶＨが配列番号３８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ）のＶＨが配列番号３８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ）のＶＨが配列番号３８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ）のＶＨが配列番号３９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ）のＶＨが配列番号３９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ）のＶＨが配列番号３９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ）のＶＨが配列番号３９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ）のＶＨが配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ）のＶＨが配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ）のＶＨが配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ）のＶＨが配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ）のＶＨが配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ）のＶＨが配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ）のＶＨが配列番号４１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ）のＶＨが配列番号４１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ）のＶＨが配列番号４１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ）のＶＨが配列番号４１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ）のＶＨが配列番号４１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ）のＶＨが配列番号４２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ）のＶＨが配列番
号４２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ）のＶＨが配列番号４２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ）のＶＨが配列番号４２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａ）のＶＨが配列番号４２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）のＶＨが配列番号４３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）のＶＨが配列番号４３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）のＶＨが配列番号４３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）のＶＨが配列番号４３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）のＶＨが配列番号４３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）のＶＨが配列番号４４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）のＶＨが配列番号４４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）のＶＨが配列番号４４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）のＶＨが配列番号４４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）のＶＨが配列番号４４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）のＶＨが配列番号４５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）のＶＨが配列番号４５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）のＶＨが配列番号４５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）のＶＨが配列番号４５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）のＶＨが配列番号４５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）のＶＨが配列番号４６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）のＶＨが配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）のＶＨが配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）のＶＨが配列番号４６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）のＶＨが配列番号４６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）のＶＨが配列番号４７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）のＶＨが配列番号４７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）のＶＨが配列番号４７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）のＶＨが配列番号４７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）のＶＨが配列番号４７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）のＶＨが配列番号４８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂｂ）のＶＨが配列番号４８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃｃ）のＶＨが配列番号４８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄｄ）のＶＨが配列番号４８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅｅ）のＶＨが配列番号４８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆｆ）のＶＨが配列番号４９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇｇ）のＶＨが配列番号４９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈｈ）のＶＨが配列番号４９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉｉ）のＶＨが配列番号４９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊｊ）のＶＨが配列番号４９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋｋ）のＶＨが配列番号５０１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌｌｌ）のＶＨが配列番号５０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍｍｍ）のＶＨが配列番号５０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎｎｎ）のＶＨが配列番号５０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏｏｏ）のＶＨが配列番号５０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐｐｐ）のＶＨが配列番号５１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑｑｑ）のＶＨが配列番号５１３の
アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒｒｒ）のＶＨが配列番号５１１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓｓｓ）のＶＨが配列番号５１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔｔｔ）のＶＨが配列番号５１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕｕｕ）のＶＨが配列番号５２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖｖｖ）のＶＨが配列番号５２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗｗｗ）のＶＨが配列番号５２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘｘｘ）のＶＨが配列番号５２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙｙｙ）のＶＨが配列番号５２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚｚｚ）のＶＨが配列番号５３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａａａ）のＶＨが配列番号５３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂｂｂ）のＶＨが配列番号５３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃｃｃ）のＶＨが配列番号５３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄｄｄ）のＶＨが配列番号５３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅｅｅ）のＶＨが配列番号５４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆｆｆ）のＶＨが配列番号５４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇｇｇ）のＶＨが配列番号５４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈｈｈ）のＶＨが配列番号５４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉｉｉ）のＶＨが配列番号５４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊｊｊ）のＶＨが配列番号５５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋｋｋ）のＶＨが配列番号５５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、または（ｌｌｌｌ）のＶＨが配列番号５５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、前記二重特異性分子。
（ａ）のＶＬが配列番号５６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂ）のＶＬが配列番号５６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃ）のＶＬが配列番号５６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄ）のＶＬが配列番号５７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅ）のＶＬが配列番号５７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆ）のＶＬが配列番号５７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇ）のＶＬが配列番号５７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈ）のＶＬが配列番号５７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉ）のＶＬが配列番号５８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊ）のＶＬが配列番号５８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋ）のＶＬが配列番号５８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌ）のＶＬが配列番号５８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍ）のＶＬが配列番号５８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎ）のＶＬが配列番号５９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏ）のＶＬが配列番号５９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐ）のＶＬが配列番号５９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑ）のＶＬが配列番号５９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒ）のＶＬが配列番号５９９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓ）のＶＬが配列番号６０１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔ）のＶＬが配列番号６０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕ）のＶＬが配列番号６０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖ）のＶＬが配列番号６０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗ）のＶＬが配列番号６０
９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘ）のＶＬが配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙ）のＶＬが配列番号６１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚ）のＶＬが配列番号６１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａ）のＶＬが配列番号６１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂ）のＶＬが配列番号６１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃ）のＶＬが配列番号６２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄ）のＶＬが配列番号６２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅ）のＶＬが配列番号６２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆ）のＶＬが配列番号６２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇ）のＶＬが配列番号６２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈ）のＶＬが配列番号６３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉ）のＶＬが配列番号６３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊ）のＶＬが配列番号６３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋ）のＶＬが配列番号６３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌｌ）のＶＬが配列番号６３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍｍ）のＶＬが配列番号６４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎｎ）のＶＬが配列番号６４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏｏ）のＶＬが配列番号６４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐｐ）のＶＬが配列番号６４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑｑ）のＶＬが配列番号６４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒｒ）のＶＬが配列番号６５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓｓ）のＶＬが配列番号６５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔｔ）のＶＬが配列番号６５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕｕ）のＶＬが配列番号６５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖｖ）のＶＬが配列番号６５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗｗ）のＶＬが配列番号６６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘｘ）のＶＬが配列番号６６３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙｙ）のＶＬが配列番号６６５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚｚ）のＶＬが配列番号６６７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａａ）のＶＬが配列番号６６９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂｂ）のＶＬが配列番号６７１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃｃ）のＶＬが配列番号６７３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄｄ）のＶＬが配列番号６７５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅｅ）のＶＬが配列番号６７７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆｆ）のＶＬが配列番号６７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇｇ）のＶＬが配列番号６８１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈｈ）のＶＬが配列番号６８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉｉ）のＶＬが配列番号６８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊｊ）のＶＬが配列番号６８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋｋ）のＶＬが配列番号６８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｌｌｌ）のＶＬが配列番号６９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｍｍｍ）のＶＬが配列番号６９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｎｎｎ）のＶＬが配列番号６９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｏｏｏ）のＶＬが配列番号６９７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｐｐｐ）のＶＬが配列番号６９９のアミノ酸配
列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｑｑｑ）のＶＬが配列番号７０１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｒｒｒ）のＶＬが配列番号７０３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｓｓｓ）のＶＬが配列番号７０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｔｔｔ）のＶＬが配列番号７０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｕｕｕ）のＶＬが配列番号７０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｖｖｖ）のＶＬが配列番号７１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｗｗｗ）のＶＬが配列番号７１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｘｘｘ）のＶＬが配列番号７１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｙｙｙ）のＶＬが配列番号７１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｚｚｚ）のＶＬが配列番号７１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ａａａａ）のＶＬが配列番号７２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｂｂｂｂ）のＶＬが配列番号７２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｃｃｃｃ）のＶＬが配列番号７２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｄｄｄｄ）のＶＬが配列番号７２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｅｅｅｅ）のＶＬが配列番号７２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｆｆｆｆ）のＶＬが配列番号７３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｇｇｇｇ）のＶＬが配列番号７３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｈｈｈｈ）のＶＬが配列番号７３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｉｉｉｉ）のＶＬが配列番号７３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｊｊｊｊ）のＶＬが配列番号７３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、（ｋｋｋｋ）のＶＬが配列番号７４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、または（ｌｌｌｌ）のＶＬが配列番号７４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の二重特異性分子。
請求項１もしくは２に記載の抗体もしくはその抗原結合部分または請求項３もしくは４に記載の二重特異性分子をコードする、核酸。
請求項１もしくは２に記載の抗体もしくはその抗原結合部分または請求項３もしくは４に記載の二重特異性分子、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
治療において使用するための、請求項１もしくは２に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項３もしくは４に記載の二重特異性分子、または請求項６に記載の医薬組成物。
血友病Ａ患者を処置するのに使用するための、請求項３もしくは４に記載の二重特異性分子、または請求項６に記載の医薬組成物。