JP7807367B2 - 抗ｋｌｋ７抗体、抗ｋｌｋ５抗体、多重特異性抗ｋｌｋ５／ｋｌｋ７抗体および使用方法 - Google Patents

抗ｋｌｋ７抗体、抗ｋｌｋ５抗体、多重特異性抗ｋｌｋ５／ｋｌｋ７抗体および使用方法

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関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／９０１，９９０号の優先権の利益を主張するものであり、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、抗ＫＬＫ７抗体、抗ＫＬＫ５抗体、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体、およびそれらを使用する方法に関する。
ヒトカリクレイン関連ペプチダーゼ（ＫＬＫ）は、前立腺、卵巣、乳房、精巣、脳、および皮膚などの様々な組織で発現する（キモ）－トリプシン様セリンプロテアーゼである。ＫＬＫは、ｃｌａｎ ＰＡ（Ｓ）のキモトリプシン様セリンプロテアーゼファミリＳ１Ａのサブグループに属する。１５のヒトＫＬＫ遺伝子は、染色体１９ｑ１３．４上に位置し、ヒトゲノム中で最大の連続セリンプロテアーゼクラスタを構成する。これらの遺伝子は一般に５つのコード化エクソンからなり、場合によっては、１つ／または２つの５’非コード化エクソンからなり、カリクレイン関連ペプチダーゼＫＬＫ１～ＫＬＫ１５をコードする。すべてのＫＬＫ遺伝子は、ＫＬＫ４～ＫＬＫ１５の間でおよそ４０％のアミノ酸配列同一性を有する２２４～２３７残基のキモトリプシン様またはトリプシン様触媒ドメインを含有する、一本鎖プレプロタンパク質をコードする。ＫＬＫ１ならびにその近縁の相同体であるＫＬＫ２およびＫＬＫ３はそれら自身のクレードを形成し、ＫＬＫ４、５、および７は別のサブグループに属するが、一方でＫＬＫ６はＫＬＫ１３およびＫＬＫ１４とより類似している。Ｄｅｂｅｌａら，Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８９，６２３－６３２（２００８）を参照されたい。
ＫＬＫ５は、ヒトの皮膚、特に皮膚の上部の棘層および顆粒層で最も大量に発現していると思われるトリプシン様セリンプロテアーゼであり、ケラチノサイトは最終分化を経て、角質層、最外表皮層、および外部環境に対するバリアを形成する、扁平なレンガ様構造に変化する。Ｄｅｂｅｌａら，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，３７３，１０１７－１０３１（２００７）；およびＴａｎら，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２０１５ Ｊａｎ ２２；５８（２）：５９８－６１２（２０１４）を参照されたい。ＫＬＫ７は、皮膚にも発現するキモトリプシン様セリンプロテアーゼである。ＫＬＫ５がネザートン症候群などの皮膚障害において病理学的役割を果たすことが記載されている。Ｆｕｒｉｏら，ＰＬＯＳ Ｇｅｎｅｔ １１（９），ｅ１００５３８９（２０１５）を参照されたい。ネザートン症候群は、Ｋａｚａｌ型セリンプロテアーゼ阻害剤５（ＳＰＩＮＫ５）をコードするＳＰＩＮＫ５遺伝子の機能欠失型変異によって引き起こされる。Ｄｅｓｃａｒｇｕｅｓら，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．２００５ Ｊａｎ；３７（１）：５６－６５（２００４）を参照されたい。ＳＰＩＮＫ５がＫＬＫセリンプロテアーゼファミリ（例えば、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７）のいくつかのメンバーを阻害することが示されている。Ｗａｎｇら，Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｊｕｌ；２３（７）：５２４－６（２０１４）を参照されたい。ネザートン症候群におけるＳＰＩＮＫ５の欠如は、拮抗されないＫＬＫ活性を生じる。ＫＬＫ５活動亢進は、ＫＬＫ５が表皮におけるタンパク質分解の調節因子であるため、ネザートン症候群の病態生理における重要な要素であると考えられている。ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の切除は、ネザートン症候群様表現型の致死性を救済する。Ｂｒｉｏｔら，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．Ｍａｙ １１；２０６（５）：１１３５－４７（２００９）；Ｆｕｒｉｏら，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．Ｍａｒ １０；２１１（３）：４９９－５１３（２０１４）；およびＫａｓｐａｒｅｋら，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ．２０１７ Ｊａｎ １７；１３（１）：ｅ１００６５６６（２０１７）を参照されたい。ネザートン症候群は、複数の作用を有する複雑な全身性疾患であり、現在のところ満足な治療法はない。
喘息は、遺伝的および環境的危険因子の両方に関連する臨床的に不均一な障害である。喘息の双生児に関する研究から推定される遺伝率は３５％～８０％で変動し、遺伝的リスクにおいて重要な役割を有することを示している。例えば、Ｕｌｌｅｍａｒら，Ａｌｌｅｒｇｙ ７１，２３０－２３８（２０１６）を参照されたい。喘息および喘息関連表現型に対していくつかの大規模ＧＷＡＳが実施されており、ＯＲＭＤＬ３、ＩＬ１３、ＩＬ１ＲＬ１、およびＴＳＬＰ遺伝子近傍の遺伝子といった同定された遺伝子座の多くが、複数の研究集団で確認されている。例えば、Ｂｏｎｎｅｌｙｋｋｅら，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４６，５１－５５（２０１４）を参照されたい。最近の研究では、低ペリオスチン喘息または２型低炎症喘息に関するリスクを保護するＫＬＫ４／５遺伝子座のＳＮＰが同定された。同じ研究で、ＫＬＫ５量は重症喘息患者の気管支肺胞洗浄で増加することが発見され、ＫＬＫ５が気管支閉塞および喘息病因において役割を担うという仮説を支持した。
ネザートン症候群および喘息のような疾患の分野における進歩にもかかわらず、標的を同定し、かつ既存の治療法の有効性を補完または増強できる手段を開発する必要がある。
本発明は、抗ＫＬＫ７抗体、抗ＫＬＫ５抗体、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体、およびそれらを使用する方法を提供する。
実施形態１．ヒトカリクレイン関連ペプチダーゼ７（ＫＬＫ７）に結合する単離された抗体であって、
ａ）アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）（式中、Ｎｖａｌはノルバリンである）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害し；
ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ未満、もしくは９ｐＭ未満、もしくは８ｐＭ未満、もしくは７ｐＭ未満、もしくは６ｐＭ未満、もしくは５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し；
ｃ）ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８および／もしくはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合し；かつ／あるいは
ｄ）キモトリプシンナンバリングによる、ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／もしくはＴ２１３の１つ以上を含むエピトープ、またはＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ９１、Ｐ９２、Ｇ９３、Ｓ９５、Ｑ９７、Ｎ１０１、Ｎ１７８、Ｋ２３３および／もしくはＴ２３５の１つ以上を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施形態２．ヒトＫＬＫ７に結合する抗体であって、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体。
実施形態３．（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１に記載の抗体。
実施形態４．モノクローナル抗体である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５．ヒト化抗体またはキメラ抗体である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態６．ヒトＫＬＫ７に結合する抗体断片である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態７．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ未満、もしくは９ｐＭ未満、もしくは８ｐＭ未満、もしくは７ｐＭ未満、もしくは６ｐＭ未満、もしくは５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し；かつ／あるいは表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１０ｐＭ未満、もしくは９ｐＭ未満、もしくは８ｐＭ未満、もしくは７ｐＭ未満、もしくは６ｐＭ未満、もしくは５ｐＭ未満のＫＤでカニクイザルＫＬＫ７に結合する、実施形態１～６のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態８．前記重鎖可変領域が、配列番号１２３～１２８から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１３０～１３３から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１３５～１４３から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／または配列番号１４４～１４５から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ４を含有する、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態９．前記軽鎖可変領域が、配列番号１４７～１５０から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１５２～１５４から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１５６～１５８から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／または配列番号１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１０．以下から選択される配列を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の抗体：
（ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
（ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１１．以下から選択される配列を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の抗体：
（ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
（ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
（ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１２．配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列を含む、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１３．配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１４．配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列を含むヒトＫＬＫ７に特異的に結合する抗体。
実施形態１５．配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含むヒトＫＬＫ７に特異的に結合する抗体。
実施形態１６．重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）および／もしくはＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み；かつ／あるいは前記軽鎖定常領域が、Ｖ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）および／もしくはＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１７．完全長ＩｇＧ １抗体である、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１８．Ｎ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態１７に記載の抗体。
実施形態１９．Ｍ４２８Ｌ置換（ＥＵナンバリング）および／またはＮ４３４Ｓ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態２０．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合する、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態２１．５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態２２．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し；５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態２３．ヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性の阻害が、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断の阻害であり、Ｎｖａｌがノルバリンである、実施形態２１または実施形態２２に記載の二重特異性抗体。
実施形態２４．多重特異性抗体である、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態２５．二重特異性抗体である、実施形態２４に記載の抗体。
実施形態２６．実施形態１～２５のいずれか１つに記載の抗体とヒトＫＬＫ７への結合について競合する、ヒトＫＬＫ７に特異的に結合する抗体。
実施形態２７．実施形態２６に記載の抗体であって、
ａ）５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満、もしくは２ｎＭ未満、もしくは１ｎＭ未満のＩＣ５０でアミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）（式中、Ｎｖａｌはノルバリンである）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害し；かつ／あるいは
ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ未満、もしくは９ｐＭ未満、もしくは８ｐＭ未満、もしくは７ｐＭ未満、もしくは６ｐＭ未満、もしくは５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合する、抗体。
実施形態２８．実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体をコードする、単離された核酸。
実施形態２９．実施形態２８に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
実施形態３０．実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
実施形態３１．実施形態２９または実施形態３０に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含む、ヒトＫＬＫ７に結合する抗体を産生する方法。
実施形態３２．前記抗体を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３３．実施形態３２に記載の方法によって産生される抗体。
実施形態３４．ヒトＫＬＫ５に結合する抗体であって、
ａ）（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｂ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｃ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｄ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４７～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｅ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｆ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｇ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体。
実施形態３５．（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態３４に記載の抗体。
実施形態３６．（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態３４に記載の抗体。
実施形態３７．モノクローナル抗体である、実施形態３４～３６のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態３８．ヒト化抗体またはキメラ抗体である、実施形態３４～３７のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態３９．ヒトＫＬＫ５に結合する抗体断片である、実施形態３４～３８のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態４０．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１ｎＭ未満、もしくは５００ｐＭ未満、もしくは３００ｐＭ未満、もしくは２００ｐＭ未満、もしくは１００ｐＭ未満、もしくは５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合し、かつ／あるいは表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｎＭ未満、もしくは５００ｐＭ未満、もしくは３００ｐＭ未満、もしくは２００ｐＭ未満、もしくは１００ｐＭ未満、もしくは５０ｐＭ未満のＫＤでカニクイザルＫＬＫ５に結合する、実施形態３４～３９のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態４１．実施形態３４～４０のいずれか１つに記載の抗体であって、前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号１６１から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１６２～１６３のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／もしくは配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＦＲ４；または
ｂ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１７２～１７３から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／もしくは配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む、抗体。
実施形態４２．実施形態３４～４１のいずれか１つに記載の抗体であって、前記軽鎖可変領域が、
ａ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１６７～１６８から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／もしくは配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＦＲ４；または
ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号１７７～１７８から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および／もしくは配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む、抗体。
実施形態４３．以下から選択される配列を含む、実施形態３４～４２のいずれか１つに記載の抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態４４．以下から選択される配列を含む、実施形態３４～４３のいずれか１つに記載の抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態４５．配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬ配列を含む、実施形態３４～４４のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態４６．配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含む、実施形態３４～４４のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態４７．配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬ配列を含む、ヒトＫＬＫ５に特異的に結合する抗体。
実施形態４８．配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含む、ヒトＫＬＫ５に特異的に結合する抗体。
実施形態４９．配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８８のＶＬ配列を含む、実施形態３４～４４のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５０．配列番号８７のＶＨ配列および配列番号９２のＶＬ配列を含む、実施形態３４～４４のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５１．配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８８のＶＬ配列を含む、ヒトＫＬＫ５に特異的に結合する抗体。
実施形態５２．配列番号８７のＶＨ配列および配列番号９２のＶＬ配列を含む、ヒトＫＬＫ５に特異的に結合する抗体。
実施形態５３．重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）および／もしくはＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ／あるいは前記軽鎖定常領域が、Ｖ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）および／もしくはＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態３４～５２のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５４．完全長ＩｇＧ１抗体である、実施形態３４～５３のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５５．Ｎ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態５４に記載の抗体。
実施形態５６．Ｍ４２８Ｌ置換（ＥＵナンバリング）および／またはＮ４３４Ｓ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態５３～５５のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５７．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合する、実施形態３４～５６のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５８．５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態３４～５７のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態５９．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合し、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態３４～５８のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態６０．ヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性の阻害が、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断の阻害である、実施形態５８または実施形態５９に記載の抗体。
実施形態６１．多重特異性抗体である、実施形態３４～６０のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態６２．二重特異性抗体である、実施形態６１に記載の抗体。
実施形態６３．実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体をコードする、単離された核酸。
実施形態６４．実施形態６３に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
実施形態６５．実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
実施形態６６．実施形態６４または６５に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含む、ヒトＫＬＫ５に結合する抗体を産生する方法。
実施形態６７．前記抗体を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態６６に記載の方法。
実施形態６８．実施形態６７に記載の方法によって産生される抗体。
実施形態６９．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、二重特異性抗体。
実施形態７０．前記第１の結合ドメインがヒト化されている、実施形態６９に記載の二重特異性抗体。
実施形態７１．前記第１の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態６９または７０に記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
（ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
（ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態７２．前記第１の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態６９～７１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
（ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
（ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態７３．前記第１の結合ドメインが、配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列を含む、実施形態６９～７２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態７４．前記第１の結合ドメインが、配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含む、実施形態６９～７２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態７５．実施形態６９～７４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、前記第２の結合ドメインが、
ａ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｂ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、二重特異性抗体。
実施形態７６．前記第２の結合ドメインが、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態６９～７５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態７７．前記第２の結合ドメインが、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態６９～７５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態７８．前記第２の結合ドメインがヒト化されている、実施形態６９～７７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態７９．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態７５～７８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態８０．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態７５～７８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態８１．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態６９～７８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態８２．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態６９～７８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；および
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態８３．前記第１の結合ドメインが、配列番号２９または配列番号３０のＶＨアミノ酸配列、および配列番号３２または配列番号３８のＶＬアミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインが、配列番号５２または配列番号５３のＶＨ配列、および配列番号５５または配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態６９～７９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態８４．（ｉ）前記第１の結合ドメインが、配列番号２９のＶＨアミノ酸配列および配列番号３２のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号３０のＶＨアミノ酸配列および配列番号３８のＶＬアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記第２の結合ドメインが、配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態８３に記載の二重特異性抗体。
実施形態８５．前記第１の結合ドメインが、配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含み、前記第２の結合ドメインが、配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含む、実施形態６９～７９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態８６．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインが、配列番号３０の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列および配列番号３８の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインが、配列番号５３のＶＨアミノ酸配列および配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態８７．前記第１の結合ドメインが第１の重鎖可変ドメインおよび第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが第１の重鎖定常領域に連結されており、前記第１の軽鎖可変ドメインが第１の軽鎖定常領域に連結されており、前記第２の結合ドメインが、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが第２の重鎖定常領域に連結されており、前記第２の軽鎖可変ドメインが第２の軽鎖定常領域に連結されている、実施形態６９～８６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態８８．前記第１の重鎖定常領域がノブ変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がホール変異を含むか、または、前記第１の重鎖定常領域がホール変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がノブ変異を含む、実施形態８７に記載の二重特異性抗体。
実施形態８９．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ノブ変異がＴ３６６Ｗ置換を含む、実施形態８８に記載の二重特異性抗体。
実施形態９０．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ホール変異が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つの置換を含む、実施形態８８または実施形態８９に記載の二重特異性抗体。
実施形態９１．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ホール変異がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ置換を含む、実施形態９０に記載の二重特異性抗体。
実施形態９２．前記第１の重鎖定常領域および／または前記第２の重鎖定常領域がＮ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態８７～９１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態９３．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｎ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態９２に記載の二重特異性抗体。
実施形態９４．実施形態８７～９３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、
ａ） 前記第１の重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含むか；または
ｂ） 前記第１の重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域がＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む、二重特異性抗体。
実施形態９５．前記第１の重鎖定常領域および／または前記第２の重鎖定常領域が、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つの置換をさらに含む、実施形態８７～９４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態９６．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つの置換をさらに含む、実施形態９５に記載の二重特異性抗体。
実施形態９７．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含む、実施形態９６に記載の二重特異性抗体。
実施形態９８．実施形態８７～９７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、
ａ）前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖定常領域が配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ）前記第２の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０、および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態９９．実施形態９８に記載の二重特異性抗体であって、
ａ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号９６もしくは１８４のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号９７もしくは１８５のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号９８もしくは１８６のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号９９もしくは１８７のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｃ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号９６もしくは１８４のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号９７もしくは１８５のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｄ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号９８もしくは１８６のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号９９もしくは１８７のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｅ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１８もしくは１８９のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１７もしくは１８８のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｆ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号１２０もしくは１９１のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１９もしくは１９０のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｇ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１８もしくは１８９のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１７もしくは１８８のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｈ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号１２０もしくは１９１のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１９もしくは１９０のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１００．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１０８または１９２の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１０または１９３の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１０１．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２または１９４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４または１９５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１０２．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１０８の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１０３．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１０４．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第２の結合ドメインは、
ａ）（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３もしくは４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｂ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｃ）（ａ）配列番号３９もしくは１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｄ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４７～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｅ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｆ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｇ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、二重特異性抗体。
実施形態１０５．前記第２の結合ドメインが、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１０４に記載の二重特異性抗体。
実施形態１０６．前記第２の結合ドメインが、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１０４に記載の二重特異性抗体。
実施形態１０７．前記第２の結合ドメインがヒト化されている、実施形態１０４～１０６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１０８．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態１０４～１０７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１０９．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態１０４～１０７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１１０．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態１０４～１０７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１１１．前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、実施形態１０４～１０７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体：
ａ）配列番号５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１１２．前記アミノ酸抗体の後半部分が、配列番号５２または配列番号５３のＶＨ配列、および配列番号５５または配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１０４～１０７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１１３．前記アミノ酸抗体の後半部分が、配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１１２に記載の二重特異性抗体。
実施形態１１４．前記第１の結合ドメインがヒト化されている、実施形態１０４～１１３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１１５．前記第１の結合ドメインが第１の重鎖可変ドメインおよび第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが第１の重鎖定常領域に連結されており、前記第１の軽鎖可変ドメインが第１の軽鎖定常領域に連結されており、前記第２の結合ドメインが、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが第２の重鎖定常領域に連結されており、前記第２の軽鎖可変ドメインが第２の軽鎖定常領域に連結されている、実施形態１０４～１１４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１１６．前記第１の重鎖定常領域がノブ変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がホール変異を含むか、または、前記第１の重鎖定常領域がホール変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がノブ変異を含む、実施形態１１５に記載の二重特異性抗体。
実施形態１１７．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ノブ変異がＴ３６６Ｗ変異を含む、実施形態１１６に記載の二重特異性抗体。
実施形態１１８．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ホール変異が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つの変異を含む、実施形態１１６または１１７に記載の二重特異性抗体。
実施形態１１９．前記抗体がＩｇＧ１抗体であり、前記ホール変異がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ変異を含む、実施形態１１８に記載の二重特異性抗体。
実施形態１２０．前記第１の重鎖定常領域および／または前記第２の重鎖定常領域がＮ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態１１５～１１９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１２１．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｎ２９７Ｇ置換（ＥＵナンバリング）を含む、実施形態１２０に記載の二重特異性抗体。
実施形態１２２．実施形態１１５～１２１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、
ａ）前記第１の重鎖定常領域がＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域がＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含むか；または
ｂ）前記第１の重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域がＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む、二重特異性抗体。
実施形態１２３．前記第１の重鎖定常領域および／または前記第２の重鎖定常領域が、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つの置換をさらに含む、実施形態１１５～１２２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１２４．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つの置換をさらに含む、実施形態１２３に記載の二重特異性抗体。
実施形態１２５．前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域がそれぞれ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含む、実施形態１２４に記載の二重特異性抗体。
実施形態１２６．実施形態１１５～１２５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体であって、
ａ）前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖定常領域が配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ）前記第２の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０、および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１２７．実施形態１２６に記載の二重特異性抗体であって、
ａ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号９６もしくは１８４のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号９７もしくは１８５のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｂ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号９８もしくは１８６のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号９９もしくは１８７のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｃ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号９６もしくは１８４のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号９７もしくは１８５のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｄ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号９８もしくは１８６のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号９９もしくは１８７のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｅ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１８もしくは１８９のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１７もしくは１８８のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｆ）前記第１の重鎖定常領域が配列番号１２０もしくは１９１のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１９もしくは１９０のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｇ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号１１８もしくは１８９のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１７もしくは１８８のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
ｈ）前記第２の重鎖定常領域が配列番号１２０もしくは１９１のアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が配列番号１１９もしくは１９０のアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態１２８．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合する、実施形態６９～１２７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１２９．５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態６９～１２８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１３０．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合し、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態６９～１２９のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１３１．ヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性の阻害が、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断の阻害である、実施形態１２９または実施形態１３０に記載の二重特異性抗体。
実施形態１３２．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合する、実施形態６９～１３１のいずれか１つに記載の抗体。
実施形態１３３．５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態６９～１３２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１３４．表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、実施形態６９～１３３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１３５．ヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性の阻害が、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断の阻害であり、Ｎｖａｌがノルバリンである、実施形態１３３または実施形態１３４に記載の二重特異性抗体。
実施形態１３６．ヒトＫＬＫ５に対する前記二重特異性抗体のＫＤおよびヒトＫＬＫ７に対する前記抗体のＫＤが、互いに３倍以内、または２．５倍以内、または２倍以内、または１．５倍以内である、実施形態６９～１３５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態１３７．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体をコードする、単離された核酸。
実施形態１３８．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体の第１の結合ドメインをコードする、単離された核酸。
実施形態１３９．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体の第２の結合ドメインをコードする、単離された核酸。
実施形態１４０．実施形態１３７に記載の単離された核酸を含む、単離された宿主細胞。
実施形態１４１．実施形態１３８に記載の単離された核酸を含む、単離された宿主細胞。
実施形態１４２．実施形態１３９に記載の単離された核酸を含む、単離された宿主細胞。
実施形態１４３．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を発現する、単離された宿主細胞。
実施形態１４４．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体の第１の結合ドメインを発現する、単離された宿主細胞。
実施形態１４５．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体の第２の結合ドメインを発現する、単離された宿主細胞。
実施形態１４６．実施形態１４０または実施形態１４３に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含む、ヒトＫＬＫ５およびヒトＫＬＫ７に結合する二重特異性抗体を産生する方法。
実施形態１４７．前記抗体を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態１４６に記載の方法。
実施形態１４８．ヒトＫＬＫ５およびヒトＫＬＫ７に結合する二重特異性抗体を産生する方法であって、（ｉ）実施形態１４１または実施形態１４４に記載の宿主細胞を、前記第１の結合ドメインの発現に適した条件下で培養すること、および（ｉｉ）実施形態１４２または実施形態１４５に記載の宿主細胞を、前記第２の結合ドメインの発現に適した条件下で培養することを含む、方法。
実施形態１４９．前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインを回収することと、前記二重特異性抗体を構築することとをさらに含む、実施形態１４８に記載の方法。
実施形態１５０．実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態１５１．追加の治療剤をさらに含む、実施形態１５０に記載の医薬組成物。
実施形態１５２．前記追加の治療剤がＫＬＫ５阻害剤である、実施形態１５１に記載の医薬組成物。
実施形態１５３．前記ＫＬＫ５阻害剤が抗ＫＬＫ５抗体である、実施形態１５２に記載の医薬組成物。
実施形態１５４．実施形態１５３に記載の医薬組成物であって、前記抗ＫＬＫ５抗体が、
ａ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
ｂ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、医薬組成物。
実施形態１５５．前記抗ＫＬＫ５抗体が、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１５３または実施形態１５４に記載の医薬組成物。
実施形態１５６．前記抗ＫＬＫ５抗体が、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１５３または実施形態１５４に記載の医薬組成物。
実施形態１５７．前記抗ＫＬＫ５抗体がモノクローナル抗体である、実施形態１５３～１５６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１５８．前記抗ＫＬＫ５抗体がヒト化抗体またはキメラ抗体である、実施形態１５３～１５７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１５９．前記抗ＫＬＫ５抗体が、ヒトＫＬＫ５に結合する抗体断片である、実施形態１５３～１５８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１６０．前記抗ＫＬＫ５抗体が、以下から選択される配列を含む、実施形態１５３～１５９のいずれか１つに記載の医薬組成物：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１６１．前記抗ＫＬＫ５抗体が、以下から選択される配列を含む、実施形態１５３～１５９のいずれか１つに記載の医薬組成物：
ａ）配列番号５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１６２．前記抗ＫＬＫ５抗体が、以下から選択される配列を含む、実施形態１５３～１５９のいずれか１つに記載の医薬組成物：
ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１６３．前記抗ＫＬＫ５抗体が、以下から選択される配列を含む、実施形態１５３～１５９のいずれか１つに記載の医薬組成物：
ａ）配列番号５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｂ）配列番号５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
ｄ）配列番号８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
ｅ）配列番号８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
実施形態１６４．前記抗ＫＬＫ５抗体が、実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体である、実施形態１５３に記載の医薬組成物。
実施形態１６５．前記抗ＫＬＫ５抗体が、実施形態４７、４８、５１、および５２のいずれか１つに記載の抗体である、実施形態１５３に記載の医薬組成物。
実施形態１６６．実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態１６７．追加の治療剤をさらに含む、実施形態１６６に記載の医薬組成物。
実施形態１６８．前記追加の治療剤がＫＬＫ７阻害剤である、実施形態１６７に記載の医薬組成物。
実施形態１６９．前記ＫＬＫ７阻害剤が抗ＫＬＫ７抗体である、実施形態１６８に記載の医薬組成物。
実施形態１７０．前記抗ＫＬＫ７抗体が、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体である、実施形態１６９に記載の医薬組成物。
実施形態１７１．実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と、実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態１７２．抗炎症剤および抗生物質から選択される追加の治療剤を含む、実施形態１５０～１７１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１７３．実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を含む医薬組成物。
実施形態１７４．追加の治療剤をさらに含む、実施形態１７３に記載の医薬組成物。
実施形態１７５．前記追加の治療剤が抗炎症剤である、実施形態１７４に記載の医薬組成物。
実施形態１７６．局所投与用である、実施形態１５０～１７５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１７７．皮下投与用または静脈内投与用である、実施形態１５０～１７５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１７８．医薬として使用するための、実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１７９．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患の治療に使用するための、実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１８０．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態１７９に記載の使用のための抗体、二重特異性抗体もしくは医薬組成物。
実施形態１８１．前記喘息が低好酸球性喘息である、実施形態１８０に記載の使用のための抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物。
実施形態１８２．医薬として使用するための、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と、実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体との組み合わせ。
実施形態１８３．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患の治療に使用するための、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と、実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体との組み合わせ。
実施形態１８４．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態１８３に記載の組み合わせ。
実施形態１８５．前記喘息が低好酸球性喘息である、実施形態１８４に記載の組み合わせ。
実施形態１８６．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
実施形態１８７．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態１８６に記載の使用。
実施形態１８８．前記喘息が低好酸球性喘息である、実施形態１８７に記載の使用。
実施形態１８９．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体との組み合わせの使用。
実施形態１９０．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態１８９に記載の使用。
実施形態１９１．前記喘息が低好酸球性喘息である、実施形態１９０に記載の使用。
実施形態１９２．上皮炎症を減少させるための医薬、上皮透過性を減少させるための医薬、経皮水分喪失を減少させるための医薬、皮膚浸潤を減少させるための医薬、錯角化を減少させるための医薬、上皮バリアを回復させるための医薬、および／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるための医薬の製造における、実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
実施形態１９３．上皮炎症を減少させるための医薬、上皮透過性を減少させるための医薬、経皮水分喪失を減少させるための医薬、皮膚浸潤を減少させるための医薬、錯角化を減少させるための医薬、上皮バリアを回復させるための医薬、および／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるための医薬の製造における、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体と実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体との組み合わせの使用。
実施形態１９４．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、該個体に有効量の、実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
実施形態１９５．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、該個体に、ａ）有効量の実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体；およびｂ）有効量の実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体を投与することを含む方法。
実施形態１９６．（ａ）に記載の抗体および（ｂ）に記載の抗体を同時に投与する、実施形態１９５に記載の方法。
実施形態１９７．（ａ）に記載の抗体および（ｂ）に記載の抗体を連続して投与する、実施形態１９５に記載の方法。
実施形態１９８．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、該個体に、有効量の実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または有効量の実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
実施形態１９９．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態１９４～１９８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２００．前記喘息が低好酸球性喘息である、実施形態１９９に記載の方法。
実施形態２０１．前記個体が、ネザートン症候群を有する、実施形態１９４～１９８のいずれか１つに記載の方法
実施形態２０２．前記個体が酒さを有する、実施形態１９４～１９８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０３．前記個体に、追加の治療剤を投与することをさらに含む、実施形態１９４～２０２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０４．前記追加の治療剤が抗炎症剤である、実施形態２０３に記載の方法。
実施形態２０５．個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に有効量の実施形態１～２７および３４～６２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与して、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させることを含む方法。
実施形態２０６．個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に、ａ）有効量の実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体；およびｂ）有効量の実施形態３４～６２のいずれか１つに記載の抗体を投与して、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させることを含む方法。
実施形態２０７．（ａ）に記載の抗体および（ｂ）に記載の抗体を同時に投与する、実施形態２０６に記載の方法。
実施形態２０８．（ａ）に記載の抗体および（ｂ）に記載の抗体を連続して投与する、実施形態２０６に記載の方法。
実施形態２０９．個体において、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に、実施形態６９～１３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または有効量の実施形態１５０～１７７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与して、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させることを含む方法。
実施形態２１０．投与が皮下投与または静脈内投与である、実施形態１９４～２０９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１１．投与が局所投与である、実施形態１９４～２０９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１２．投与が静脈内投与である、実施形態１９４～２０９のいずれか１つに記載の方法
実施形態２１３．ヒトＫＬＫ７に結合する単離された抗体であって、ヒトＫＬＫ７に結合するとヒトＫＬＫ７の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、単離された抗体。
実施形態２１４．二重特異性抗体である、実施形態２１３に記載の単離された抗体。
実施形態２１５．前記二重特異性抗体がヒトＫＬＫ７およびヒトＫＬＫ５に結合する、実施形態２１４に記載の単離された抗体。
実施形態２１６．ヒトＫＬＫ５に結合すると、ヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の前記基質結合部位および／または前記活性部位の破壊がもたらされる、実施形態２１５に記載の単離された抗体。
実施形態２１７．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５、およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２１６に記載の単離された抗体。
実施形態２１８．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、およびＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２１７に記載の単離された抗体。
実施形態２１９．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２１７に記載の単離された抗体。
実施形態２２０．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４およびＰｒｏ２２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２１７に記載の単離された抗体。
実施形態２２１．ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８および／またはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合する、実施形態２１３～２２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
実施形態２２２．ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／またはＴ２１３の１つ以上を含むエピトープに結合する、実施形態２１３～２２１のいずれか１つに記載の単離された抗体。
実施形態２２３．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、ヒトＫＬＫ７に結合するとヒトＫＬＫ７の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、二重特異性抗体。
実施形態２２４．ヒトＫＬＫ５に結合すると、ヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、該立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、実施形態２２３に記載の二重特異性抗体。
実施形態２２５．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、ヒトＫＬＫ５に結合するとヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、該立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、二重特異性抗体。
実施形態２２６．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２２４または実施形態２２５に記載の二重特異性抗体。
実施形態２２７．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、およびＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２２６に記載の単離された抗体。
実施形態２２８．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２２６に記載の単離された抗体。
実施形態２２９．標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４およびＰｒｏ２２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、実施形態２２６に記載の単離された抗体。
実施形態２３０．ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８および／またはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合する、実施形態２２３～２２９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態２３１．ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／またはＴ２１３のうちの１つ以上を含むエピトープに結合する、実施形態２２３～２３０のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
実施形態２３２．実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態２３３．実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態２３４．医薬として使用するための、実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物。
実施形態２３５．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患の治療に使用するための、実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物。
実施形態２３６．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態２３５に記載の抗体、二重特異性抗体もしくは医薬組成物。
実施形態２３７．上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるために使用するための、実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物。
実施形態２３８．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物の使用。
実施形態２３９．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態２３８に記載の使用。
実施形態２４０．上皮炎症を減少させるための医薬、上皮透過性を減少させるための医薬、経皮水分喪失を減少させるための医薬、皮膚浸潤を減少させるための医薬、錯角化を減少させるための医薬、上皮バリアを回復させるための医薬、および／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるための医薬の製造における、実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物の使用。
実施形態２４１．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、有効量の実施形態２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物を前記個体に投与することを含む方法。
実施形態２４２．前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、実施形態２４１に記載の方法。
実施形態２４３．個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に、有効量の２１３～２２２のいずれか１つに記載の抗体、実施形態２２３～２３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、または実施形態２３２もしくは実施形態２３３に記載の医薬組成物を投与して、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させることを含む方法。
実施形態２４４．前記疾患がネザートン症候群である、実施形態１７９または実施形態２３５に記載の使用のための抗体、二重特異性抗体または医薬組成物。
実施形態２４５．前記疾患がネザートン症候群である、実施形態１８３に記載の使用のための組み合わせ。
実施形態２４６．前記疾患がネザートン症候群である、実施形態１８６、１８９および２３８のいずれか１つに記載の使用。
実施形態２４７．前記医薬が、ネザートン症候群を有する個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるためのものである、実施形態１９２、１９３および２４０のいずれか１つに記載の使用。
実施形態２４８．ネザートン症候群の治療に使用するための二重特異性抗体であって、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２または１９４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４または１９５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態２４９．（ａ）配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬ配列；または（ｂ）配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含む、ネザートン症候群の治療に使用するための抗ＫＬＫ５抗体。
実施形態２５０．（ａ）配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列；または（ｂ）配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含む、ネザートン症候群の治療に使用するための抗ＫＬＫ７抗体。
実施形態２５１．ネザートン症候群の治療に使用するための抗体の組み合わせであって、抗ＫＬＫ５抗体および抗ＫＬＫ７抗体を含み、前記抗ＫＬＫ５抗体が、配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬ配列、または配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含み、前記抗ＫＬＫ７抗体が、配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列、または配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含む、抗体の組み合わせ。
実施形態２５２．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、該個体に、有効量の前記二重特異性抗体を投与することを含み、前記二重特異性抗体が第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、前記第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、ＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害し、前記第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、方法。
実施形態２５３．ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を有する個体を治療する方法であって、該個体に、抗ＫＬＫ５抗体および抗ＫＬＫ７抗体を投与することを含み、前記抗ＫＬＫ５抗体がＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害し、前記抗ＫＬＫ７抗体がＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、方法。
実施形態２５４．個体において、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体にＫＬＫ５アンタゴニストおよびＫＬＫ７アンタゴニストを投与することを含む方法。
実施形態２５５．前記ＫＬＫ５アンタゴニストが抗ＫＬＫ５抗体であり、かつ／または前記ＫＬＫ７アンタゴニストが抗ＫＬＫ７抗体である、実施形態２５４に記載の方法。
実施形態２５６．個体において、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に有効量の二重特異性抗体を投与することを含み、前記二重特異性抗体が第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、前記第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、ＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害し、前記第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する方法。
実施形態２５７．個体において、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、前記個体に抗ＫＬＫ５抗体および抗ＫＬＫ７抗体を投与することを含み、前記抗ＫＬＫ５抗体がＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害し、前記抗ＫＬＫ７抗体がＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する方法。
実施形態２５８．ネザートン症候群を有する個体における皮膚発疹および／またはスケーリングを改善する方法であって、前記個体に有効量の二重特異性抗体を投与することを含み、前記二重特異性抗体が第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、前記第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合して、ＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害し、前記第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合して、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する、方法。
実施形態２５９．ネザートン症候群を有する個体における皮膚発疹および／またはスケーリングを改善する方法であって、前記個体に抗ＫＬＫ５抗体および抗ＫＬＫ７抗体を投与することを含み、前記抗ＫＬＫ５抗体がＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害し、前記抗ＫＬＫ７抗体がＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する、方法。
実施形態２６０．皮膚炎症性サイトカインがＩＬ－８、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－４および／またはＧ－ＣＳＦのうちの１つ以上である、実施形態１９２、１９３、２４０もしくは２４７のいずれか１つに記載の使用、または実施形態２０５、２０６、２０９、２４３もしくは２５４～２５７のいずれか１つに記載の方法、または実施形態２３７に記載の使用のための抗体、二重特異性抗体もしくは医薬組成物。
実施形態２６１．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１９４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１９５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態２６２．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１９５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
実施形態２６３．第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、配列番号１９４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
図１Ａは、抗ＫＬＫ７抗体ｒｂ．１４Ｈ１１ｃ－ＬＣ軽鎖可変領域と、軽鎖可変領域の特定のヒト化バージョンとのアラインメントを示す。 図１Ｂは、抗ＫＬＫ７抗体ｒｂ．１４Ｈ１１ｃ－ＨＣ重鎖可変領域と、重鎖可変領域の特定のヒト化バージョンとのアラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔおよび接触残基によるＣＤＲが示されている。ウサギの親の可変領域に対するヒト化バージョンの相違点を、黒色の背景を有する白色で示す。
図２Ａは、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５軽鎖可変領域と、軽鎖可変領域の特定の修飾化ヒト化バージョンとのアラインメントを示す。 図２Ｂは、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５重鎖可変領域と、重鎖可変領域の特定の修飾化ヒト化バージョンとのアラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔおよび接触残基によるＣＤＲが示されている。親の可変領域に対するヒト化バージョンの相違点を、黒色の背景を有する白色で示す。
図３Ａは、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４軽鎖可変領域と、軽鎖可変領域の特定の修飾化ヒト化バージョンとのアラインメントを示す。 図３Ｂは、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４重鎖可変領域と、重鎖可変領域の特定の修飾化ヒト化バージョンとのアラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔおよび接触残基によるＣＤＲが示されている。親の可変領域に対するヒト化バージョンの相違点を、黒色の背景を有する白色で示す。
図４は、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８の重鎖および軽鎖バリアントと、親抗体ｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８との親和性を示す。
図５は、ヒト化抗ＫＬＫ５抗体ｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４の重鎖および軽鎖バリアントのオン速度（ｋａ）およびオフ速度（ｋｄ）の散布図を示す。
図６Ａは、ヒトＫＬＫ５に対して示されたｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８バリアントについての表面プラズモン共鳴トレースを示す。 図６Ｂは、カニクイザルＫＬＫ５に対して示されたｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８バリアントについての表面プラズモン共鳴トレースを示す。
図７Ａは、ヒトＫＬＫ５に対して示されたｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４バリアントについての表面プラズモン共鳴トレースを示す。 図７Ｂは、カニクイザルＫＬＫ５に対して示されたｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４バリアントについての表面プラズモン共鳴トレースを示す。
図８は、ヒト正常皮膚、アトピー性皮膚炎および酒さにおける代表的なＫＬＫ５タンパク質発現を示す。
図９は、ヒト正常皮膚、アトピー性皮膚炎、酒さおよび乾癬における代表的なＫＬＫ７ ｍＲＮＡ染色を示す。
図１０Ａは、ヒト正常皮膚、アトピー性（ｔｏｐｉｃ）皮膚炎、酒さおよび乾癬における、ＫＬＫ５の発現深度を示す。 図１０Ｂは、ヒト正常皮膚、アトピー性（ｔｏｐｉｃ）皮膚炎、酒さおよび乾癬における、ＫＬＫ７の発現深度を示す。 図１０Ｃは、ヒト正常皮膚、アトピー性（ｔｏｐｉｃ）皮膚炎、酒さおよび乾癬における、ＳＰＩＮＫ５の発現深度を示す。
図１１は、生理食塩水、ＫＬＫ５またはＫＬＫ７を投与したマウスにおける経表皮水分蒸散量を示す。
図１２Ａは、ＳＤＳ／Ｓにおける毎日の臨床スコアを示す。 図１２Ｂは、ＳＤＳ／Ｓにおける総終末アトピー性皮膚炎スコア（ｔｏｔａｌ ｔｅｒｍｉｎａｌ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｓｃｏｒｅ）を示す。 図１２Ｃは、ＳＤＳ／ＳにおけるＡＵＣ皮膚スコアを示す。黄色ブドウ球菌（Ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡアトピー性皮膚炎モデルマウスに、アイソタイプ対照抗体、抗マウスＫＬＫ５抗体、抗マウスＫＬＫ７抗体、抗ＫＬＫ５抗体と抗ＫＬＫ７抗体の組み合わせ、またはＳＰＩＮＫ５－Ｆｃを投与した。
図１３は、ＳＤＳ／Ｓにおける総終末アトピー性皮膚炎スコア、経表皮水分蒸散量および組織学的疾患重症度スコアを示す。黄色ブドウ球菌（Ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡアトピー性皮膚炎モデルマウスに、アイソタイプ対照抗体、抗マウスＫＬＫ５抗体、抗マウスＫＬＫ７抗体、抗ＫＬＫ５抗体と抗ＫＬＫ７抗体の組み合わせ、または抗ＩＬ－１３抗体を投与した。
図１４は、ＳＤＳ／Ｓ由来の皮膚の代表的なヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。黄色ブドウ球菌（Ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡアトピー性皮膚炎モデルマウスに、アイソタイプ対照抗体、抗ＫＬＫ５抗体と抗ＫＬＫ７抗体の組み合わせ、または抗ＩＬ－１３抗体を投与した。
図１５は、適切な重鎖／軽鎖のペアリングを促進するための置換、および／またはエフェクター機能を低下させるための置換を含む、本明細書で提供される例示的な二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体の概略図を示す。別の形式では、ノブは抗ＫＬＫ５アーム上に存在し得、ホールは抗ＫＬＫ７アーム上に存在し得る。
図１６Ａは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスにおいて、皮膚発疹およびスケーリングが減少したことを示す。 図１６Ｂは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスにおいて、皮膚発疹およびスケーリングが減少したことを示す。 図１６Ｃは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスにおいて、皮膚発疹およびスケーリングが減少したことを示す。 図１６Ｄは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスにおいて、皮膚発疹およびスケーリングが減少したことを示す。Ｓｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２陰性対照マウスを１６ｍｇ／ｋｇタモキシフェン（１６Ａ）で治療し、Ｓｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２＋マウスに１６ｍｇ／ｋｇ（１６Ｂ）、８ｍｇ／ｋｇ（１６Ｃ）、または４ｍｇ／ｋｇ（１６Ｄ）タモキシフェンを注射し、次いで、２．５ｍｇの抗ｇｐ１２０アイソタイプ対照抗体または２．５ｍｇ抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で１日おきに治療した。注射の６日後に背部皮膚を分析した。
図１７Ａは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療後のＳｐｉｎｋ５欠損マウスの背部皮膚から調製した溶解物中のサイトカインＩＬ－８が、アイソタイプ対照抗体治療と比較して減少したことを示す。 図１７Ｂは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療後のＳｐｉｎｋ５欠損マウスの背部皮膚から調製した溶解物中のサイトカインＴＮＦ－αが、アイソタイプ対照抗体治療と比較して減少したことを示す。 図１７Ｃは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療後のＳｐｉｎｋ５欠損マウスの背部皮膚から調製した溶解物中のサイトカインＩＬ－６が、アイソタイプ対照抗体治療と比較して減少したことを示す。 図１７Ｄは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療後のＳｐｉｎｋ５欠損マウスの背部皮膚から調製した溶解物中のサイトカインＩＬ－４が、アイソタイプ対照抗体治療と比較して減少したことを示す。 図１７Ｅは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療後のＳｐｉｎｋ５欠損マウスの背部皮膚から調製した溶解物中のサイトカインＧ－ＣＳＦが、アイソタイプ対照抗体治療と比較して減少したことを示す。
図１８は、１６ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンで治療したＳｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２陰性対照マウス、１６ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンとアイソタイプ対照抗体または抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したＳｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２＋マウスのヘマトキシリンおよびエオシン染色皮膚の代表的な断面図を示す。
図１９Ａは、ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、ＫＬＫ５＋ＫＬＫ７、およびＫＬＫ５＋ＫＬＫ７＋抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したヒト表皮ケラチノサイトにおける経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）によって測定される上皮透過性を示す。 図１９Ｂは、ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、ＫＬＫ５＋ＫＬＫ７、およびＫＬＫ５＋ＫＬＫ７＋抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体で治療したヒト表皮ケラチノサイトにおける経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）によって測定される上皮透過性を示す。
図２０Ａは、ＫＬＫ７に結合した抗ｒｂ．１４Ｈ１１ｃ Ｆａｂの結晶構造を示す。 図２０Ｂは、ＫＬＫ７に結合した抗ｒｂ．１４Ｈ１１ｃ Ｆａｂの結晶構造を示す。 図２０Ｃは、ＫＬＫ７に結合した抗ｒｂ．１４Ｈ１１ｃ Ｆａｂの結晶構造を示す。ＫＬＫ７に結合した完全なＦａｂを、ＫＬＫ７のみを重ねて図２０Ａに示す。図２０Ｂは、ＫＬＫ７－Ｆａｂの界面を示す。図２０Ｃは、その天然の立体配座のＫＬＫ７（黄色）およびｒｂ．１４Ｈ１１ｃ Ｆａｂに結合したＫＬＫ７（を重ね合わせて示す。１４Ｈ１１ｃＦａｂ（青色）。ｒｂ１４Ｈ１１ｃ重鎖の一部を濃い青色で示す。
Ｉ．定義
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、またはアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一の結合部位の間の非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表し得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で既知の一般的な方法によって測定し得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的および例示的な方法が以下に説明される。
「親和性成熟」抗体とは、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる改変によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
「抗ＫＬＫ７抗体」および「ＫＬＫ７に結合する抗体」という用語は、抗体がＫＬＫ７を標的化する際の診断および／または治療剤として有用であるように十分な親和性で、ヒトＫＬＫ７などのＫＬＫ７に結合し得る抗体を指す。一態様では、無関係の非ＫＬＫ７タンパク質への抗ＫＬＫ７抗体の結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した場合に、ＫＬＫ７への抗体の結合の約１０％未満である。特定の態様では、ＫＬＫ７に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体はＫＬＫ７に「特異的に結合する」と言われる。特定の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、異なる種のＫＬＫ７間で保存されているＫＬＫ７のエピトープに結合する。
「抗ＫＬＫ５抗体」および「ＫＬＫ５に結合する抗体」という用語は、抗体がＫＬＫ５を標的とする際の診断および／または治療剤として有用であるように十分な親和性で、ヒトＫＬＫ５などのＫＬＫ５に結合し得る抗体を指す。一態様では、無関係の非ＫＬＫ５タンパク質への抗ＫＬＫ５抗体の結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した場合に、ＫＬＫ５への抗体の結合の約１０％未満である。特定の態様では、ＫＬＫ５に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体はＫＬＫ５に「特異的に結合する」と言われる。特定の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、異なる種のＫＬＫ５間で保存されているＫＬＫ５のエピトープに結合する。
「抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体」および「ＫＬＫ５およびＫＬＫ７に結合する抗体」という用語は、抗体がＫＬＫ７および／またはＫＬＫ５を標的化する際の診断および／または治療剤として有用であるように、ＫＬＫ７およびＫＬＫ５に十分な親和性で結合し得る多重特異性抗体を指す。一態様では、無関係の非ＫＬＫ５／非ＫＬＫ７タンパク質への抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体の結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した場合に、ＫＬＫ７またはＫＬＫ５への抗体の結合の約１０％未満である 特定の態様では、ＫＬＫ７およびＫＬＫ５に結合する抗体は、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７のそれぞれについて、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体は標的タンパク質に「特異的に結合」すると言われる。特定の態様では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、異なる種由来のＫＬＫ７間で保存されているＫＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの態様では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、異なる種由来のＫＬＫ５の中で保存されているＫＬＫ５のエピトープに結合する。
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含めた、様々な抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖおよびｓｃＦａｂ）；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）；ならびに、抗体断片から形成した多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、抗体の「結合ドメイン」は、抗原に結合するのに十分な可変ドメインの一部を指す。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＣＤＲ３を含む。
「エピトープ」という用語は、抗ＫＬＫ７抗体または抗ＫＬＫ５抗体が結合する、タンパク質性または非タンパク質性のいずれかの抗原上の部位を表す。エピトープは、連続したアミノ酸ストレッチ部位から形成される場合（線状エピトープ）、または非連続のアミノ酸を含む場合（構造的エピトープ）の両方があり、例えば、抗原の折り畳みに起因して（すなわち、タンパク質性抗原の三次折り畳みによって）空間的に近接して形成される。線状エピトープは、典型的には、タンパク質性抗原を変性剤に曝露した後も依然として抗体によって結合されているが、コンフォメーションエピトープは、典型的には、変性剤での処理により破壊される。エピトープは、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、または８～１０個のアミノ酸を、独特な空間的構造で含む。
特定のエピトープに結合する抗体（すなわち、同じエピトープに結合する抗体）のスクリーニングは、例えば、限定されないが、アラニンスキャニング、ペプチドブロット（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８（２００４）４４３－４６３）、ペプチド切断分析、エピトープ切除、エピトープ抽出、抗原の化学的修飾（Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９（２０００）４８７－４９６を参照）、およびクロスブロッキング（「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．，ＮＹを参照）などの、当該技術分野で慣用の方法を用いて行われ得る。
改変支援プロファイリング（ＭＡＰ）としても知られる抗原構造ベースの抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）により、多数から化学的または酵素的に改変された抗原表面（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１０１９２０号明細書を参照されたい。）への各抗体の結合プロファイルに基づいて、ＫＬＫ７またはＫＬＫ５に特異的に結合する多数のモノクローナル抗体を受け入れることが可能になる。区分けされた各抗体は同じエピトープに結合するが、このエピトープは、他の区分けで表されるエピトープとは明確に異なることがあるか、または部分的に重なっている独特なエピトープであり得る。
また、競合的結合を使用して、抗体が抗ＫＬＫ７抗体と同じＫＬＫ７エピトープに結合するか、または抗ＫＬＫ７抗体と結合について競合するかどうかを容易に決定し得る。例えば、基準抗ＫＬＫ７抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、基準抗ＫＬＫ７抗体の抗原への結合を競合アッセイで５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、基準抗体は、抗体の抗原への結合を競合アッセイで５０％以上阻害する。また、例えば、抗体が基準抗ＫＬＫ７抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、基準抗体を飽和条件下でＫＬＫ７に結合させる。過剰の基準抗ＫＬＫ７抗体を除去した後、当の抗ＫＬＫ７抗体がＫＬＫ７に結合する能力を評価する。抗ＫＬＫ７抗体が基準抗ＫＬＫ７抗体の飽和結合後にＫＬＫ７に結合し得る場合、問題の抗ＫＬＫ７抗体は基準抗ＫＬＫ７抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付け得る。しかし、問題の抗ＫＬＫ７抗体が、基準抗ＫＬＫ７抗体の飽和結合後にＫＬＫ７に結合し得ない場合、問題の抗ＫＬＫ７抗体は、基準抗ＫＬＫ７抗体によって結合されたエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。この抗体が同じエピトープに結合しているのか、または立体的な理由で結合が妨害されているだけなのかを確認するためには、慣用的な実験を用いることができる（例えばペプチド変異や、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリ、または当技術分野で利用可能なその他の定量的または定性的な抗体結合アッセイを用いた結合分析など）。このアッセイは、２つのセットアップ、すなわち、両方の抗体が飽和抗体である状態で実施されるべきである。両方の設定において、第１の（飽和）抗体のみがＫＬＫ７に結合し得る場合、問題の抗ＫＬＫ７抗体および基準抗ＫＬＫ７抗体はＫＬＫ７への結合について競合すると結論付け得る。
同様に、競合結合を使用して、抗体が抗ＫＬＫ５抗体と同じＫＬＫ５のエピトープに結合するか、または抗ＫＬＫ５抗体と結合について競合するかどうかを容易に決定し得る。例えば、基準抗ＫＬＫ５抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、基準抗ＫＬＫ５抗体の抗原への結合を競合アッセイで５０％以上阻害抗体を指し、逆に、基準抗体は、抗体の抗原への結合を競合アッセイで５０％以上阻害する。また、例えば、抗体が基準抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、基準抗体を飽和条件下でＫＬＫ５に結合させる。過剰の基準抗ＫＬＫ５抗体を除去した後、問題の抗ＫＬＫ５抗体がＫＬＫ５に結合する能力を評価する。抗ＫＬＫ５抗体が基準抗ＫＬＫ５抗体の飽和結合後にＫＬＫ５に結合し得る場合、問題の抗ＫＬＫ５抗体は基準抗ＫＬＫ５抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付け得る。しかし、問題の抗ＫＬＫ５抗体が、基準抗ＫＬＫ５抗体の飽和結合後にＫＬＫ５に結合し得ない場合、問題の抗ＫＬＫ５抗体は、基準抗ＫＬＫ５抗体によって結合されたエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。この抗体が同じエピトープに結合しているのか、または立体的な理由で結合が妨害されているだけなのかを確認するためには、慣用的な実験を用いることができる（例えばペプチド変異や、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリ、または当技術分野で利用可能なその他の定量的または定性的な抗体結合アッセイを用いた結合分析など）。このアッセイは、２つのセットアップ、すなわち、両方の抗体が飽和抗体である状態で実施されるべきである。両方の設定において、第１の（飽和）抗体のみがＫＬＫ５に結合し得る場合、問題の抗ＫＬＫ５抗体および基準抗ＫＬＫ５抗体はＫＬＫ５への結合について競合すると結論付け得る。
いくつかの態様では、２つの抗体は、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰の一方の抗体が、競合結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）１４９５－１５０２を参照のこと）で測定される場合、他方の結合を少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％またはさらには９９％またはそれ以上阻害する場合、同じエピトープまたは重複するエピトープに結合するとみなされる。
いくつかの態様では、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原中の本質的にすべてのアミノ酸変異が他方の結合も低減または排除する場合、同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少または排除するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を減少または排除する場合、「重複エピトープ」を有するとみなされる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラスがあり、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分け得る。特定の態様では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。特定の態様では、抗体は、Ｆｃ領域エフェクター機能を低下させるためのＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の態様では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプのものである。特定の態様では、抗体は、ＩｇＧ４抗体の安定性を改善するためにヒンジ領域にＳ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４アイソタイプのものである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）、λ（ラムダ）と呼ばれる２種類のいずれかに割り当てられてもよい。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、以下のものが挙げられる：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；およびＢ細胞活性化。
薬剤、例えば、医薬組成物の「有効量」は、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な投薬量および所要期間で有効な量を指す。
本明細書での「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。本用語は、ネイティブ配列Ｆｃ領域とバリアントＦｃ領域とを含む。一態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ以上、特に１つ／または２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、全長重鎖を含んでいてもよく、または全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）およびリジン（Ｋ４４７、ＥＵインデックスによるナンバリング）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、またはＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）およびリジン（Ｌｙｓ４４７）が存在してもよい、または存在していなくてもよい。したがって、例えば「完全長ＩｇＧ１」は、Ｇｌｙ４４６およびＬｙｓ４４７を有するか、またはＬｙｓ４４７を有しないか、またはＧｌｙ４４６およびＬｙｓ４４７の両方を有しないＩｇＧ１を含む。Ｆｃ領域を含む重鎖のアミノ酸配列は本明細書において、別様に示されない場合、Ｃ末端グリシン－リジンジペプチドを含まずに表される。一態様では、本発明による抗体に含まれる、本明細書で指定されるＦｃ領域を含む重鎖は、Ｇｌｙ４４６およびＬｙｓ４４７（ナンバリングはＥＵインデックスに従う）を含み得る。一態様では、本発明による抗体に含まれる、本明細書で指定されるＦｃ領域を含む重鎖は、Ｇｌｙ４４６（ナンバリングはＥＵインデックスに従う）を含み得る。本明細書で特に指示がない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ（１９９１年）に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、概して、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４の４つのＦＲドメインからなる。したがって、ＣＤＲおよびＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列で出現する：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されたＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」という用語は、同義で使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の後代を含む。宿主細胞としては、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞および継代の数にかかわらず宿主細胞に由来する子孫が含まれる。子孫は、親細胞と核酸含有量の点で完全に同一でない場合があるが、突然変異を含んでもよい。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体の子孫は、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。一態様では、ＶＬについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらのようにサブグループカッパＩである。一態様では、ＶＨについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらのサブグループＩＩＩである
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基、およびヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、そのドメイン中ではＣＤＲのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は、必要に応じて、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変可能であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。
一般的に、抗体は、６個のＣＤＲを含み、ＶＨに３個（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、ＶＬに３個（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）含む。本明細書における例示的なＣＤＲとしては、以下が挙げられる：
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）および９６－１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）および９５－１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））；ならびに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）および９３－１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））が挙げられる。
特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔらに従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、または、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定することができることを理解するであろう。一態様では、ＣＤＲ残基は、図１～図３または本明細書の他の箇所で確認されたものを含む。
「イムノコンジュゲート」とは、細胞毒性剤を含むがこれらに限定されない、１つ以上の異種分子にコンジュゲートされた抗体のことである。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、飼い馴らされた動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の態様では、個体または対象は、ヒトである。
「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）法によって決定される場合、純度が９５％より大きく、または９９％より大きくなるまで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
「連結された」という用語は、２つのポリペプチドの文脈で使用される場合、ポリペプチドが同じアミノ酸配列の一部であることを意味する。連結された２つのポリペプチドは、さらなるアミノ酸配列によって分離され得る；すなわち、それらは、互いに連続していなくてもよく、または互いに直接連結されていなくてもよい。
「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物および／または物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基で構成され、具体的には、プリン塩基またはピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボースまたはリボース）、およびリン酸基で構成される。多くの場合、核酸分子は塩基配列によって記載され、それにより、塩基は、核酸分子の一次構造（線状構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’～３’へと表される。本明細書中、核酸分子という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、例えば、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）およびゲノムＤＮＡ、リボ核酸（ＲＮＡ）、特に、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡまたはＲＮＡの合成形態、およびこれらの分子の２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線状または環状であってもよい。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖およびアンチセンス鎖、ならびに一本鎖形態および二本鎖形態の両方を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチドまたは天然に存在しないヌクレオチドを含み得る。誘導体化された糖またはホスフェート骨格結合または化学修飾された残基を含む、天然に存在しないヌクレオチドの例として、修飾されたヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子は、例えば、宿主または患者において、インビトロおよび／またはインビボで本発明の抗体の直接的な発現のためのベクターとして適したＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子も包含する。そのようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、修飾されていなくてもよく、または修飾されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、インビボで抗体を産生するために対象にｍＲＮＡを注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性および／またはコードされた分子の発現を高めるように化学修飾されてもよい。（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、２０１７年６月１２日にオンラインで公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６または欧州特許第２１０１８２３Ｂ１号を参照。）
「単離された」核酸とは、核酸分子が自然環境の構成要素から分離されたものを指す。
単離核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が、染色体外に存在するか、または本来の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子が含まれる。
「抗ＫＬＫ７抗体をコードする単離された核酸」とは、抗ＫＬＫ７抗体の重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、および宿主細胞内の１つ以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
「抗ＫＬＫ５抗体をコードする単離された核酸」とは、抗ＫＬＫ５抗体の重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、および宿主細胞内の１つ以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
「抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体をコードする単離された核酸」とは、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体の重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、および宿主細胞内の１つ以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、および／または同一のエピトープを結合している抗体を指すが、例えば、自然に生じる突然変異を含むか、またはモノクローナル抗体調製物の製造中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは、一般的に微量に存在する。通常、異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従うモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法および本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。
「ネイキッド抗体」とは、異種部位（例えば、細胞毒性部位）または放射性標識に結合していない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬組成物中に存在していてもよい。
「ネイティブ抗体」とは、様々な構造を持つネイティブに存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラメリック糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて３つの定常重ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。
「添付文書」との用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、このような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む。
基準ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性率（％）」は、アラインメントの目的で、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、基準ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性率を決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアまたはＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、同一性率の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、かつ、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。
特に断りのない限り、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性率の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用するか、またはその後にＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリクスを使用して生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．ＰｅａｒｓｏｎおよびＤ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」，ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；ならびにＰｅａｒｓｏｎら、（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６に開示されており、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌまたはｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公的に入手可能である。これに代えて、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公的なサーバーを使用して、ｇｇｓｅａｒｃｈ（ｇｌｏｂａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｒｏｔｅｉｎ）プログラムおよびデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；オープン：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用し、ローカルではなくグローバルのアラインメントを確実に行い、配列を比較し得る。アミノ酸同一性率は、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。
「医薬組成物」または「薬学的製剤」という用語は、調製物に含まれる有効成分の生物活性が有効になるような形態をしており、かつ、医薬組成物が投与されるであろう対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない、調製物を指す。
薬学的に許容され得る担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容され得る担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ＫＬＫ５」および「カリクレイン関連ペプチダーゼ５」という用語は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびにげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物供給源源の任意の天然ＫＬＫ５を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＫＬＫ５、ならびに細胞内での処理から生じる任意の形態のＫＬＫ５を包含する。この用語はまた、ＫＬＫ５の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒト前駆体ＫＬＫ５タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ９Ｙ３３７．３）に示す。シグナルペプチド（アミノ酸１～２２）およびプロペプチド（アミノ酸２３～６６）を欠く例示的なヒト成熟ＫＬＫ５タンパク質のアミノ酸配列を配列番号２に示す。例示的なカニクイザル前駆体ＫＬＫ５タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１００（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ａ０Ａ２Ｋ５Ｗ０Ｔ６）に示す。シグナルペプチド（アミノ酸１～２２）およびプロペプチド（アミノ酸２３～６４）を欠く例示的なカニクイザル成熟ＫＬＫ５タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１０１に示す。
本明細書で使用される場合、「ＫＬＫ７」および「カリクレイン関連ペプチダーゼ７」という用語は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびにげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物供給源の任意の天然ＫＬＫ７を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＫＬＫ７、ならびに細胞内での処理から生じる任意の形態のＫＬＫ７を包含する。この用語はまた、ＫＬＫ７の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒト前駆体ＫＬＫ７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ４９８６２．１）に示す。シグナルペプチド（アミノ酸１～２２）およびプロペプチド（アミノ酸２３～２９）を欠く例示的なヒト成熟ＫＬＫ７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号４に示す。例示的なカニクイザル前駆体ＫＬＫ７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｇ７ＰＹＧ２）に示す。シグナルペプチド（アミノ酸１～２１）およびプロペプチド（アミノ酸２２～２９）を欠く例示的なカニクイザル成熟ＫＬＫ７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号６に示す。
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（およびその文法的な変化形、例えば、「治療（ｔｒｅａｔ）する」または「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）すること」）は、治療される個体において疾患の本来の経過を変える試行における臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の経過の間に行い得る。治療の所望の効果としては、疾患の発症または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移の予防、疾患進行率を低下させること、症状の寛解または緩和、および回復または改善された予後が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、または疾患の進行を遅らせるために使用される。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する、抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔら、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。可変ドメインは、ＦＲ１および／またはＦＲ４の全部または一部を伴って、または伴わずに、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３を；ならびに、ＦＲ１および／またはＦＲ４の全部または一部を伴って、または伴わずに、軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３を含み得る。すなわち、可変ドメインは、抗原結合活性を保持する限り、ＦＲ１および／またはＦＲ４の一部を欠いていてもよい。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分でありうる。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７，１９９３；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１．を参照されたい。
「ベクター」という用語は、本明細書では、連結している別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、およびベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれるベクターを含む。特定のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを本明細書では、「発現ベクター」と呼ぶ。
ＩＩ．組成物および方法
一態様では、本発明は、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方が上皮バリア透過性において役割を果たし得るという知見に部分的に基づく。したがって、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方を阻害することにより、過剰な上皮バリア透過性に関連する状態の治療において有効性が向上されることが示され得る。特定の態様では、ＫＬＫ５に結合する抗体が提供される。特定の態様では、ＫＬＫ７に結合する抗体が提供される。特定の態様では、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７に結合する多重特異性抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さの診断または治療に有用である。
Ａ．例示的な抗ＫＬＫ７抗体
一態様では、本発明は、ＫＬＫ７に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、ＫＬＫ７に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、ＫＬＫ７に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｎｖａｌはノルバリンである）（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０で、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｎｖａｌはノルバリンである）（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、５ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０で、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｎｖａｌはノルバリンである）（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または９ｐＭ未満、または８ｐＭ未満、または７ｐＭ未満、または６ｐＭ未満、または５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、または９ｐＭ以下、または８ｐＭ以下、または７ｐＭ以下、または６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下、または３ｐＭ以下、または２ｐＭ以下、または１ｐＭ以下のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８、および／またはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合する。ここで、アミノ酸は配列番号４に従ってナンバリングされている。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号４に従ってナンバリングされたように、アミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２内の少なくとも１つのアミノ酸と接触し、アミノ酸Ｋ１５２～Ｓ１５８内の少なくとも１つのアミノ酸と接触し、ＫＬＫ７のアミノ酸Ｑ２１１～Ｋ２２２内の少なくとも１つのアミノ酸と接触する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号４に従ってナンバリングされたＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／またはＴ２１３の１つ以上を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、キモトリプシンナンバリングによる、ＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ９１、Ｐ９２、Ｇ９３、Ｓ９５、Ｑ９７、Ｎ１０１、Ｎ１７８、Ｋ２３３、および／またはＴ２３５の１つ以上を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号４に従ってナンバリングされたＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１およびＴ２１３を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、キモトリプシンナンバリングによる、ＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ９１、Ｐ９２、Ｇ９３、Ｓ９５、Ｑ９７、Ｎ１０１、Ｎ１７８、Ｋ２３３、およびＴ２３５を含むエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７に結合すると、ヒトＫＬＫ７の立体構造変化がもたらされ、この立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体はＫＬＫ５に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ１、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ１１、およびＫＬＫ１４に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、ヒトＫＬＫ７およびカニクイザルＫＬＫ７に結合する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ／または６つすべてのＣＤＲを含む抗ＫＬＫ７抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、および配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体を提供する。
本明細書で提供される態様のいずれかでは、抗ＫＬＫ７抗体はヒト化されている。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、（ａ）配列番号１２３～１２８の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１３０～１３３の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１３５～１４３の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１４４～１４５の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１２３～１２８のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３０～１３３のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３５～１４３のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４４～１４５のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１２３～１２８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１２３～１２８と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１２３～１２８と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３０～１３３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３０～１３３と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３０～１３３と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３５～１４３に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３５～１４３と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３５～１４３と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４４～１４５に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１４４～１４５と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１４４～１４５と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、（ａ）配列番号１４７～１５０の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１５２～１５４の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１５６～１５８の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１６０の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４７～１５０のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１５２～１５４のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１５６～１５８のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１６０のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４７～１５０と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１４７～１５０と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１４７～１５０と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１５２～１５４に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１５２～１５４と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１５２～１５４と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１５６～１５８に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１５６～１５８と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１５６～１５８と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１６０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６０と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６０と少なくとも９８％の配列同一性を有するＬＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのＣＤＲ配列の１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのＣＤＲ配列の１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのＣＤＲ配列、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのＣＤＲ配列を含む。
さらなる態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨの１つ以上の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、ならびに配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１３および１５～３０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬの１つ以上の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１４および３１～３８から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。
一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、該抗体はＫＬＫ７に特異的に結合する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ以下、または９ｐＭ以下、または８ｐＭ以下、または７ｐＭ以下、または６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下の解離定数（ＫＤ）でＫＬＫ７に結合する。一態様では、抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ以下、または９ｐＭ以下、または８ｐＭ以下、または７ｐＭ以下、または６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下の解離定数（ＫＤ）でＫＬＫ７に結合する。
別の態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されている。一部の態様では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合により、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号２９または３０のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ／または３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＫＬＫ７抗体が提供される。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されている。特定の態様では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。場合により、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合により、抗ＫＬＫ７抗体は、配列番号３２または３８のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ／または３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、上記に提供された態様のいずれかのようなＶＨ配列と、上記に提供された態様のいずれかのようなＶＬ配列とを含む、抗ＫＬＫ７抗体が提供される。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号２９および配列番号３２のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号３０および配列番号３８のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供される抗ＫＬＫ７抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３２のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ７抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
さらなる態様では、本発明は、ＫＬＫ７への結合について本明細書で提供される抗ＫＬＫ７抗体と競合する抗体を提供する。
本発明のさらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ７抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＫＬＫ７抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様では、抗体は、完全長抗体、例えばインタクトＩｇＧ１抗体または本明細書で定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ７抗体は、以下のセクション１～８に記載されるように、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
Ｂ．例示的な抗ＫＬＫ５抗体
一態様では、本発明は、ＫＬＫ５に結合する抗体を提供する。一態様では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体が提供される。一態様では、本発明は、ＫＬＫ５に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様では、抗ＫＬＫ５抗体はＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０で、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、５ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０で、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでＫＬＫ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、または５ｐＭ以下のＫＤでＫＬＫ５に結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒトＫＬＫ５に結合すると、ヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、この立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリング（Ｐ１１３、Ｓ１１４、Ａ１１５、Ｇ１１６、Ｖ１４５、Ｌ１４６、Ｓ１４７、Ｑ１４８、Ｋ１４９、Ｒ１５０、Ｅ１５２、Ｄ１５３、Ａ１５４、Ｙ１５５、Ｐ１５６、Ｒ１５７、Ｑ１５８、Ｉ１５９、Ｄ１６０、Ｄ１６１、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｋ１６９、Ａ１７０、Ｒ１７２、Ｎ２０４、Ｒ２０５、Ｐ２０６およびＫ２１４：配列番号２の連続したナンバリング）に従って、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５、およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する。例えば、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１９／１７８３１６Ａ１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、およびＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、およびＰｒｏ２２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体はＫＬＫ７に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ１、ＫＬＫ４、ＫＬＫ７、ＫＬＫ１１、またはＫＬＫ１４に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒトＫＬＫ５およびカニクイザルＫＬＫ５に結合する。
抗体ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５およびバリアント
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９および１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（ｂ）配列番号４０および４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４３および４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ／または６つすべてのＣＤＲを含む抗ＫＬＫ５抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９および１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４０および４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。別の態様では、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号４３および４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３９および１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０および４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４３および４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体を提供する。
本明細書で提供される態様のいずれかでは、抗ＫＬＫ５抗体はヒト化されている。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号１６１の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１６２～１６３の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１６４の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１６５の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６１のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６２～１６３のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６４のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６５のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６１と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６１と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６２～１６３に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６２～１６３と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６２～１６３と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６４と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６４と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６５に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６５と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１６５と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号１６６の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１６７～１６８の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１６９の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１７０の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６６のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６７～１６８のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６９のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７０のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６６に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６６と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６６と少なくとも９８％の配列同一性を有するＬＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６７～１６８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６７～１６８と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６７～１６８と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６９に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６９と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１６９と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７０と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ４を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７０と少なくとも９８％の配列同一性を有するＬＣ－ＦＲ４を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む別の実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１または５４～５７のＶＬのＣＤＲ配列の１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨのＣＤＲ配列、および配列番号５１または５４～５７のＶＬのＣＤＲ配列を含む。
さらなる態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列と、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列とを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ以上と、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５０、５２、５３、１０５、または１０６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ以上と、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１または５４～５７のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３９または１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４０または４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４３または４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３９または１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４０または４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４３または４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；ＫＬＫ５に特異的に結合する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６のＶＨ配列ならびに配列番号５１および５４～６７のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍低下または最大１０倍上昇した解離定数（ＫＤ）でＫＬＫ５に結合する。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６において合計１から１０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または欠失されている。一部の態様では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは（ａ）配列番号３９または１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０または４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１および５４～６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号５１および５４～６７において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されている。特定の態様では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。場合により、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号５１および５４～６７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号４３または４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号４６～４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＣＤＲを含む。
別の態様では、上記に提供された態様のいずれかのようなＶＨ配列、および上記に提供された態様のいずれかのようなＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６ならびに配列番号５１および５４～６７のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６のＶＨ配列ならびに配列番号５１および５４～６７のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
本発明のさらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様では、抗体は、完全長抗体、例えばインタクトＩｇＧ１抗体または本明細書で定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、以下のセクション１～８に記載されるように、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
抗体ｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４およびバリアント
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６９および７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号７１および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；（ｆ）配列番号７５～７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ／または６つすべてのＣＤＲを含む抗ＫＬＫ５抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６９および７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号７５～７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ／または３つすべてのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体を提供する。
本明細書で提供される態様のいずれかでは、抗ＫＬＫ５抗体はヒト化されている。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号１７１の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１７２～１７３の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１７４の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１７５の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７１のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７２または１７３のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７４のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７５のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７１と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７１と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７２または１７３に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７２または１７３と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７２または１７３と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７４に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７４と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７４と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７５に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７５と少なくとも９５％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号１７５と少なくとも９８％の配列同一性のＨＣ－ＦＲ４を含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号１７６の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号１７７～１７８の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号１７９の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、および（ｄ）配列番号１８０の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７６のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７７～１７８のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７９のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１８０のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７６に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７６と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７６と少なくとも９８％の配列同一性を有するＬＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７７または１７８に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７７または１７８と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７７または１７８と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ２を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７９に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７９と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１７９と少なくとも９８％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ３を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１８０に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号１８０と少なくとも９５％の配列同一性のＬＣ－ＦＲ１を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号１８０と少なくとも９８％の配列同一性を有するＬＣ－ＦＲ１を含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬのＣＤＲ配列の１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨのＣＤＲ配列、および配列番号８０または８８～９４のＶＬのＣＤＲ配列を含む。
さらなる態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、ならびに配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ以上と、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７９または８１～８７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ以上と、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号８０または８８～９４のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６９～７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号７１～７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号７５～７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。
一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６９～７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号７１～７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号７５～７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、ＫＬＫ５に特異的に結合する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨ配列および配列番号８０または８８～９４のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍低下または最大１０倍上昇した解離定数（ＫＤ）でＫＬＫ５に結合する。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号７９または８１～８７において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されている。一部の態様では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号７９または８１～８７のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９～７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７１～７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ／または３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持している。特定の態様では、配列番号８０または８８～９４において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入および／または欠失されている。特定の態様では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。場合により、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号８０または８８～９４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｃ）配列番号７５～７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ／または３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、上記に提供された態様のいずれかのようなＶＨ配列、および上記に提供された態様のいずれかのようなＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号７９または８１～８７および配列番号８０または８８～９４のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、配列番号７９または８１～８７のＶＨ配列および配列番号８０または８８～９４のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
本発明のさらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様では、抗体は、完全長抗体、例えばインタクトＩｇＧ１抗体または本明細書で定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、以下のセクション１～８に記載されるように、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
Ｃ．例示的な抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体
一態様では、本発明は、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方に結合する多重特異性抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方に結合する二重特異性抗体が提供される。いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性およびＫＬＫ７プロテアーゼ活性の両方を阻害する。いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでＫＬＫ５に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または９ｐＭ未満、または８ｐＭ未満、または７ｐＭ未満、または６ｐＭ未満、または５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでＫＬＫ７に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、または５ｐＭ以下のＫＤでＫＬＫ５に結合する。いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、または９ｐＭ以下、または８ｐＭ以下、または７ｐＭ以下、または６ｐＭ以下、または５ｐＭ以下、または３ｐＭ以下、または２ｐＭ以下、または１ｐＭ以下のＫＤでＫＬＫ７に結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体は、ヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害し、ヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体は、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でアミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｎｖａｌはノルバリンである）（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体は、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０で、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体は、５ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０で、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｎｖａｌはノルバリンである）（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７多重特異性抗体は、５ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０で、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断を阻害する。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５に対する多重特異性抗体のＫＤおよびヒトＫＬＫ７に対する抗体のＫＤは、互いに３倍以内、または２．５倍以内、または２倍以内、または１．５倍以内である。
いくつかの態様では、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方に結合する多重特異性抗体は、ＫＬＫ７に結合する第１の結合ドメインと、ＫＬＫ５に結合する第２の結合ドメインとを含む。
いくつかの態様では、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方に結合する多重特異性抗体は、ヒトＫＬＫ５に結合すると、ヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、この立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる。いくつかの態様では、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の両方に結合する多重特異性抗体は、ヒトＫＬＫ７に結合すると、ヒトＫＬＫ７の立体構造変化をもたらし、この立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＫＬＫ７抗体結合ドメインを含む。例えば、いくつかのこのような実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。さらなる非限定的な例として、いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号２９および配列番号３２のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号３０および配列番号３８のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＫＬＫ５抗体結合ドメインを含む。例えば、いくつかのこのような実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。さらなる非限定的な例として、いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号５２および配列番号５５のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号５３および配列番号６２のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。さらなる非限定的な例として、いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号８３および配列番号８８のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号８７および配列番号９２のＶＨおよびＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインがＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが本明細書に提供される抗ＫＬＫ７抗体結合ドメインであり、第２の結合ドメインが本明細書に提供される抗ＫＬＫ５結合ドメインである多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）が提供される。いくつかのこのような実施形態では、第１の結合ドメイン
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、ならびに配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号５０、５２、５３、１０５および１０６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号１３および１５～３０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号１４および３１～３８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびにおよび（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨドメインと、配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み；第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、（ｉ）第１の結合ドメインは、配列番号２９のＶＨアミノ酸配列および配列番号３２のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号３０のＶＨアミノ酸配列および配列番号３８のＶＬアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）第２の結合ドメインは、配列番号５２のＶＨ配列および配列番号５５のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含み、第２の結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ配列および配列番号６２のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、（ｉ）第１の結合ドメインは、配列番号２９のＶＨアミノ酸配列および配列番号３２のＶＬアミノ酸配列を含むか、または配列番号３０のＶＨアミノ酸配列および配列番号３８のＶＬアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）第２の結合ドメインは、配列番号８３のＶＨ配列および配列番号８８のＶＬアミノ酸配列を含むか；または配列番号８７のＶＨ配列および配列番号９２のＶＬアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号３０のＶＨ配列および配列番号３８のＶＬ配列を含み、第２の結合ドメインは、配列番号８７のＶＨ配列および配列番号９２のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７に結合する第１の結合ドメインおよびＫＬＫ５に結合する第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインは、第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域を含み、第２の結合ドメインは、第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域を含む。いくつかのこのような実施形態では、第１の重鎖可変領域はＱ３９Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み、第１の軽鎖可変領域はＱ３８Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み；第２の重鎖可変領域はＱ３９Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み、第２の軽鎖可変領域はＱ３８Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖可変領域はＱ３９Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み、第１の軽鎖可変領域はＱ３８Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み；第２の重鎖可変領域はＱ３９Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み、第２の軽鎖可変領域はＱ３８Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含む。いくつかの実施形態では、Ｑ３９Ｅ／Ｑ３８ＫおよびＱ３９Ｋ／Ｑ３８Ｅ置換は、二重特異性抗体の重鎖および軽鎖のミスペアリングを低減させる。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、第１の重鎖定常領域に連結された第１の重鎖可変ドメインと、第１の軽鎖定常領域に連結された第１の軽鎖可変ドメインとを含み；第２の結合ドメインは、第２の重鎖定常領域に連結された第２の重鎖可変ドメインと、第２の軽鎖定常領域に連結された第２の軽鎖可変ドメインとを含む。いくつかのこのような実施形態では、第１の重鎖定常領域はＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第１の軽鎖定常領域はＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第２の重鎖定常領域はＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第２の軽鎖定常領域はＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖定常領域は、Ｓ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第１の軽鎖定常領域は、Ｖ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第２の重鎖定常領域は、Ｓ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、第２の軽鎖定常領域は、Ｖ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ１８３Ｋ／Ｖ１３３ＥおよびＳ１８３Ｅ／Ｖ１３３Ｋ置換は、二重特異性抗体の重鎖および軽鎖のミスペアリングを低減させる。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体は、結合ドメインにＱ３９Ｅ／Ｑ３８ＫおよびＱ３９Ｋ／Ｑ３８Ｅ置換を含み、定常領域にＳ１８３Ｋ／Ｖ１３３ＥおよびＳ１８３Ｅ／Ｖ１３３Ｋ置換を含む。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照されたい。これは、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。二重特異性抗体の非限定的な例示的概略図を図１５に示す。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１０８または１９２の重鎖アミノ酸配列、および配列番１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１１０または１９３の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１１の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１１２または１９４の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１１４または１９５の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１０８または１９２の重鎖アミノ酸配列、および配列番１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１１４または１９５の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１１の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１１２または１９４の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１１０または１９３の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１９４の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１９５の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１１２の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１９５の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインがヒトＫＬＫ７に結合し、第２の結合ドメインがヒトＫＬＫ５に結合し、第１の結合ドメインが配列番１９４の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインが配列番１１４の重鎖アミノ酸配列、および配列番１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる多重特異性抗体は、以下のセクション１～８に記載されるように、任意の特徴を単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
１．抗体親和性
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
一態様では、ＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用して測定される。一態様では、ＫＤは、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８ＫアッセイなどのＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ（ニュージャージー州ピスカタウェイのＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用するアッセイを、約３００応答単位（ＲＵ）でプロテインＡチップ上で固定化抗体を用いて２５℃または３７℃で行う。抗原（例えば、ヒトＫＬＫ７またはヒトＫＬＫ５）の１０倍段階希釈物を、１００μＬ／分の流量で３７℃のＨＢＳ－Ｐ緩衝液に注入する。あるいは、抗原の１０倍段階希釈液をＨＢＳ－Ｐ緩衝液に２５℃で３０μＬ／分の流速で注入する。結合率（ｋａ）および解離率（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０）を用いて計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｄ／ｋａとして計算した。
一態様では、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一態様では、ＲＩＡは、目的の抗体およびその抗原のＦａｂバージョンを用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識された抗原でＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第２９３巻、第８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間、室温（およそ２３℃）でブロッキングする。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］－抗原を、関心のあるＦａｂの連続希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」第５７巻、第４５９３～４５９９頁（１９９７年）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する）。次いで、関心のあるＦａｂを一晩インキュベートする；しかしながら、平衡に達することを達するために、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物は、室温でのインキュベーションのためのキャプチャプレートに移される（例えば、１時間）。次いで、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中の０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートを１０分間、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）上で計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイでの使用のために選択する。
２．抗体断片
一部の態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。
一態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨまたはＦ（ａｂ’）２断片、特にＦａｂ断片である。無傷の抗体をパパイン消化すると、重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨおよびＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合断片（いわゆる「Ｆａｂ」断片）が得られる。よって「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメインおよびＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含む重鎖を有する抗体断片のことである。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）と、Ｆｃ領域の一部とを有するＦ（ａｂ’）２断片が得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期が長くなったＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
別の態様では、抗体断片は、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディである。「ダイアボディ」は、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディおよびテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）においても説明されている。
さらなる態様では、抗体断片は一本鎖Ｆａｂ断片である。「一本鎖Ｆａｂ断片」または「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、およびリンカーからなるポリペプチドであり、上記抗体ドメインおよび上記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の順序：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、またはｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有する。特に、上記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。当該一本鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化される。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ断片は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングによると、可変重鎖の位置４４および可変軽鎖の位置１００）を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって、さらに安定化し得る。
別の態様では、抗体断片は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、リンカーにより接続された、抗体の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である。特に、リンカーは、１０～２５個のアミノ酸の短いポリペプチドであり、通常、柔軟性のためにグリシンが、かつ、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と、またはこの逆のいずれかで、接続させ得る。このタンパク質は、定常領域が取り除かれ、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の抗体の特異性を保持することができる。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号および米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。
別の態様では、抗体断片は単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照されたい）。
抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載される、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、および組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌）による組み換え産生を含む種々の技術によって作製し得る。
３．キメラ抗体およびヒト化抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１～６８５５（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変化させられた「クラス切り替え」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体が、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（またはその一部）はヒト抗体配列に由来する。必要に応じて、ヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの態様では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
ヒト化された抗体およびその作製方法については、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で総説され、さらに以下に記載される：Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトの記述）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（リサーフェシングについての記述）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３－６０（２００５）（ＦＲシャッフルについての記述）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフルの「ガイド付き選択」アプローチの記述）
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、以下のものが含まれるが、これらに限定されるものではない：「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）；およびＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。
４．ヒト抗体
一部の態様では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して作製することができる。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋおよびｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含むか、または染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに統合されている。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；および、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。このような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変されてもよい。
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマを用いた方法で作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉら、，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択される可変ドメイン配列を単離することによって生成し得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
５．ライブラリ由来の抗体
一部の態様では、本明細書に提供される抗体はライブラリから得られる。本発明の抗体は、１つ以上の所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離されうる。コンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための方法は、例えば、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ１６：４９８－５０８（２０１６）におけるＬｅｒｎｅｒら等において総説されている。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、ｍＡｂｓ８：１１７７－１１９４（２０１６）；ＢａｚａｎらのＨｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ８：１８１７－１８２８（２０１２）におけるＦｒｅｎｚｅｌらおよびＣｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３６：２７６－２８９（２０１６）におけるＺｈａｏらと並んで、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）におけるＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらおよびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）におけるＭａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙに見られる。
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって個別にクローニングされ、ファージライブラリにおいて無作為に組換えられており、次いで、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１２：４３３－４５５（１９９４）におけるＷｉｎｔｅｒらにおいて説明されたように、抗原結合ファージについてスクリーニングし得る。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとしてディスプレイする。免疫源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいはまた、ナイーブなレパートリーをクローン化し（例えば、ヒトから）、ＧｒｉｆｆｉｔｈｓらのＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるように、免疫化することなく、非自己から自己抗原までの広範囲に対する単一の抗体源を得ることができる。最終的に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ２２７：３８１－３８８（１９９２）により記載されるように、再整列していないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングすること、およびランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再整列を達成することによって、合成により作製し得る。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公報としては、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、同第７，９８５，８４０号、同第７，７８５，９０３号および同第８，６７９，４９０号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０２３７７６４号および同第２００７／０２９２９３６号。
コンビナトリアルライブラリを所望の活性（複数可）を有する抗体についてスクリーニングするための当技術分野で既知の方法のさらなる例には、リボソームおよびｍＲＮＡディスプレイ、ならびに細菌、哺乳動物細胞、昆虫細胞または酵母細胞での抗体のディスプレイおよび選択方法が含まれる。酵母表面ディスプレイのための方法は、例えば、ＳｃｈｏｌｌｅｒらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ５０３：１３５－５６（２０１２）およびＣｈｅｒｆらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ１３１９：１５５－１７５（２０１５）ならびにＺｈａｏらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ８８９：７３－８４（２０１２）に概説がある。リボソームディスプレイのための方法は、例えば、ＨｅらのＮｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２５：５１３２－５１３４（１９９７）およびＨａｎｅｓらのＰＮＡＳ９４：４９３７－４９４２（１９９７）に記載されている。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片とみなされる。
６．多重特異性抗体
特定の態様では、本明細書において提供される抗体は多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位、すなわち、異なる抗原上の異なるエピトープまたは同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の態様において、多重特異性抗体は３つ以上の結合特異性を有する。特定の態様では、結合特異性の１つはＫＬＫ７に対するものであり、他の特異性は任意の他の抗原に対するものである。特定の態様では、結合特異性の一方はＫＬＫ７に対するものであり、他方の特異性はＫＬＫ５に対するものである。特定の態様では、二重特異性抗体は、抗原の２つ（またはそれ以上）の異なるエピトープに結合し得る。多重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製し得る。
多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現が含まれる（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７（１９８３））および「ノブ・イン・ホール」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号およびＡｔｗｅｌｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６（１９９７）参照）。非限定的な例示的なノブ・イン・ホール置換としては、Ｔ３６６Ｗ（ノブ）およびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ（ホール）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ノブ・イン・ホール置換はＩｇＧ１定常ドメイン中にある。
多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作することによって作製され得る。例えば、国際公開第２００９／０８９００４号、Ｄｉｌｌｏｎら、Ｍａｂ、９（２）：２１３－２３０（２０１７）を参照されたい。非限定的な例として、２つの重鎖可変領域および２つの軽鎖可変領域を含む二重特異性抗体において、第１の重鎖可変領域はＱ３９Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み得、第１の軽鎖可変領域はＱ３８Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み得る。第２の重鎖可変領域はＱ３９Ｋ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み得、第２の軽鎖可変領域はＱ３８Ｅ置換（Ｋａｂａｔナンバリング）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｑ３９Ｅ／Ｑ３８ＫおよびＱ３９Ｋ／Ｑ３８Ｅ置換は、二重特異性抗体の重鎖および軽鎖のミスペアリングを低減させる。同様に、第１の重鎖定常領域はＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み得、第１の軽鎖定常領域はＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み得、第２の重鎖定常領域はＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み得、第２の軽鎖定常領域はＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｓ１８３Ｋ／Ｖ１３３ＥおよびＳ１８３Ｅ／Ｖ１３３Ｋ置換は、二重特異性抗体の重鎖および軽鎖のミスペアリングを低減させる。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、結合ドメインにおけるＱ３９Ｅ／Ｑ３８ＫおよびＱ３９Ｋ／Ｑ３８Ｅ置換ならびに定常領域におけるＳ１８３Ｋ／Ｖ１３３ＥおよびＳ１８３Ｅ／Ｖ１３３Ｋ置換を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ノブ・イン・ホール置換および静電置換の両方を含む。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照されたい。これは、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。二重特異性抗体の非限定的な例示的概略図を図１５に示す。
したがって、いくつかの実施形態では、ａ）第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）および第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含む、第１の抗原に結合する第１の重鎖／軽鎖対と、ｂ）第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）および第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、第２の抗原に結合する第２の重鎖／軽鎖対とを含む、多重特異性抗体であって、各Ｈ１およびＨ２が重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、各Ｌ１およびＬ２が軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで、Ｈ１のＣＨ１ドメインは、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）におけるアミノ酸置換を含み、Ｌ１のＣＬドメインは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）におけるアミノ酸置換を含み；Ｈ１のＶＨドメインは位置Ｑ３９にアミノ酸置換を含み、Ｌ１のＶＬドメインは位置Ｑ３８にアミノ酸置換を含み、および／またはＨ２のＶＨドメインは位置Ｑ３９にアミノ酸置換を含み、Ｌ２のＶＬドメインは位置Ｑ３８にアミノ酸置換を含む（すべてＫａｂａｔナンバリング）、多重特異性抗体が提供される。いくつかの実施形態では、Ｈ１のＶＨドメインはＱ３９（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸置換を含み、Ｌ１のＶＬドメインはＱ３８（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２のＣＨ１ドメインは、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）におけるアミノ酸置換を含み、Ｌ２のＣＬドメインは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２のＶＨドメインは、位置Ｑ３９にアミノ酸置換をさらに含み、Ｌ２のＶＬドメインは、位置Ｑ３８にアミノ酸置換をさらに含む（Ｋａｂａｔナンバリング）。いくつかの実施形態では、Ｈ１のＣＨ１ドメインはＳ１８３Ｋ変異を含み、Ｌ１のＣＬはＶ１３３Ｅ変異を含み、Ｈ２のＣＨ１はＳ１８３Ｅ変異を含み、Ｌ２のＣＬドメインはＶ１３３Ｋ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１のＶＨドメインはＱ３９Ｅ変異を含み、Ｌ１のＶＬドメインはＱ３８Ｋ変異を含み、Ｈ２のＶＨドメインはＱ３９Ｋ変異を含み、Ｌ２のＶＬドメインはＱ３８Ｅ変異を含む（すべてＫａｂａｔナンバリング）。
多重特異性抗体はまた、２つ以上の抗体もしくは断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）；ロイシンジッパーを使用した二重特異的抗体の産生（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）、および国際公開第２０１１／０３４６０５号を参照されたい）；軽鎖のミスペアリング問題を回避するための、一般的な軽鎖技術の使用（例えば国際公開第９８／５０４３１号を参照されたい）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；ならびに一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；ならびに例えばＴｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異的抗体の調製により作製し得る。
例えば、「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む３つ以上の抗原結合部位を有する操作抗体、またはＤＶＤ－Ｉｇも本明細書に含まれる（例えば、国際公開第２００１／７７３４２号および国際公開第２００８／０２４７１５号を参照されたい）。３つ以上の抗原結合部位を有する多重特異性抗体の他の例は、国際公開第２０１０／１１５５８９号、国際公開第２０１０／１１２１９３号、国際公開第２０１０／１３６１７２号、国際公開第２０１０／１４５７９２号および国際公開第２０１３／０２６８３１号に見出すことができる。二重特異性抗体またはその抗原結合断片はまた、ＫＬＫ７ならびに別の異なる抗原、例えばＫＬＫ５（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号および国際公開第２０１５／０９５５３９号を参照されたい）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用性ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む。
多重特異性抗体はまた、同じ抗原特異性の１つ以上の結合アームにドメインクロスオーバーを持つ非対称形態で、すなわちＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号および国際公開第２０１５／１５０４４７号を参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（国際公開第２００９／０８０２５３号を参照）または完全なＦａｂアーム（国際公開第２００９／０８０２５１号、国際公開第２０１６／０１６２９９号を参照、Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１８７－１１９１、およびＫｌｅｉｎ ａｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０も参照）を交換することによっても提供され得る。一態様では、多重特異性抗体はクロスＦａｂ断片を含む。「クロスＦａｂ断片」または「ｘＦａｂ断片」または「クロスオーバーＦａｂ断片」との用語は、重鎖および軽鎖の可変領域または定常領域のいずれかが交換されたＦａｂ断片を指す。クロスＦａｂ断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖定常領域１（ＣＨ１）とで構成されるポリペプチド鎖、および重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とで構成されるポリペプチド鎖を含む。非対称Ｆａｂアームは、荷電または非荷電アミノ酸変異をドメインインターフェースに導入して正しいＦａｂペアリングを指示することによって操作することもできる。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照されたい。
多重特異性抗体の様々なさらなる分子形式が当技術分野で知られており、本明細書に含まれる（例えばＳｐｉｅｓｓら，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６７（２０１５）９５－１０６参照）。
この目的のために有用でありうる二重特異性抗体フォーマットの例には、２つのｓｃＦｖ分子が柔軟なリンカーによって融合されている、いわゆる「ＢｉＴＥ」（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒ））分子（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、同第２００５／０６１５４７号、同第２００７／０４２２６１号および同第２００８／１１９５６７号、ＮａｇｏｒｓｅｎおよびＢａｅｕｅｒｌｅ，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３１７，１２５５－１２６０（２０１１）参照）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，２９９－３０５（１９９６））およびその誘導体、例えばタンデムダイアボディ（「ＴａｎｄＡｂ」；Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３，４１－５６（１９９９））；ダイアボディフォーマットに基づくが、安定化付加のためのＣ末端ジスルフィド架橋を特徴とする「ＤＡＲＴ」（二重親和性再標的化）分子（Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９９，４３６－４４９（２０１０））、ならびに全ハイブリッドマウス／ラットＩｇＧ分子であるいわゆるトリオマブ（ｔｒｉｏｍａｂ）（Ｓｅｉｍｅｔｚら，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｖ ３６，４５８－４６７（２０１０）に概説）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に含まれる、具体的なＴ細胞二重特異性抗体形式は、国際公開第２０１３／０２６８３３号、国際公開第２０１３／０２６８３９号、国際公開第２０１６／０２０３０９号；Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（８）（２０１６）ｅ１２０３４９８に記載されている。
７．抗体バリアント
特定の態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製されてもよい。このような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入および置換の任意の組み合わせは、最終コンストラクトが、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終コンストラクトに到達するように行うことができる。
ａ）置換、挿入、および欠失バリアント
特定の態様において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載されるとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入し得、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングする。
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般的に、さらなる研究のために選択された結果のバリアントは、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）において修飾（例えば、改善）を有し、および／または親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用い、簡便に作製され得る。要するに、１つ以上。ＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
抗体親和性を向上させるために、例えば、ＣＤＲにおいて改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８））、および／または抗原と接触する残基において行われ得、得られたバリアントＶＨまたはＶＬは結合親和性について試験される。二次ライブラリからの構築と再選択による親和性成熟化は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、このライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニン走査突然変異誘発またはモデル化を用いて、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３が、標的にされることが多い。
特定の態様では、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変化（例えば、本明細書で提供される保存的置換）がＣＤＲにおいて行われ得る。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ中の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の特定のバリアントＶＨおよびＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、または１つ、２つ／または３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。
変異導入の標的となり得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）の残基またはグループを同定し、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。代替的に、または、加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との間における接触点を特定するために使用される場合がある。かかる接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、または除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに１個または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ治療法のための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増大させる。
ｂ）グリコシル化バリアント
特定の態様では、本明細書において提供する抗体を変えて、抗体のグリコシル化の程度を増減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合しているオリゴ糖を変化させることができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの態様では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾が、特定の改良された特性を有する抗体バリアントを生成するために行われてもよい。
一態様では、非フコシル化オリゴ糖、即ち、Ｆｃ領域へのフコース結合（直接または間接）が欠落した、オリゴ糖構造を有する抗体多様体が提供される。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分枝オリゴ糖構造の幹に第１のＧｌｃＮＡｃが結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖である。一態様では、内在性または親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した抗体バリアントを提供する。例えば、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、または場合によっては約１００％（即ち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であってもよい。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、国際公開第２００６／０８２５１５号に記載のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定した、Ａｓｎ２９７に結合したすべてのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、およびハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流または下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。Ｆｃ領域に増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を有するこのような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合および／または改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。
フコシル化が低下した抗体を産生可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が不足しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；および国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子のＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）、またはＧＤＰ－フコース合成もしくはトランスポータータンパク質の活性が低下もしくは消滅した細胞（例えば、米国特許出願公開第２００４２５９１５０号、同第２００５０３１６１３号、同第２００４１３２１４０号、同第２００４１１０２８２号を参照されたい）が挙げられる。
さらなる態様では、抗体バリアントは、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分されたオリゴ糖と共に提供される。このような抗体バリアントは、上述のとおり、低下したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。このような抗体バリアントの例は、例えばＵｍａｎａら，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００３／０１１８７８号に記載されている。
Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。このような抗体バリアントは、ＣＤＣの機能を改善している可能性がある。かかる抗体バリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号、同第１９９８／５８９６４号、および同第１９９９／２２７６４号に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域バリアント
特定の態様では、１つ以上のアミノ酸改変は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作製する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
特定の態様では、本発明は、すべてではないが一部のエフェクター機能を有する抗体バリアントを企図し、これにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）など）が不要または有害である用途の望ましい候補となる。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、インビトロおよび／またはインビボの細胞毒性アッセイを実施し得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認し得る。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ、およびＦｃＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。いる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。代替としては、非放射性アッセイ法を採用してもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリ用非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、およびＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性試験法（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ：ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ：ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に記載のように、インビボで、例えば、動物モデルにおいて評価され得る。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）、ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期の測定も、当技術分野で公知の方法（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；国際公開第２０１３／１２０９２９号を参照されたい）を用いて行い得る。
エフェクター機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９の１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうち２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられ、残基２６５および２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善または減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，およびＳｈｉｅｌｄｓら、，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
一定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の２９８，３３３および／または３３４の位置の置換（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２３４および２３５（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａおよび／またはＰ３２９Ｇをさらに含む。
一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照されたい。）別の態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。
いくつかの態様では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、およびＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち向上または低下のいずれか）をもたらすＦｃ領域内で変化が起こる。
半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が向上した、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントとしては、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８または４３４の１つ以上において置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが挙げられる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、置換Ｍ４２８Ｌおよび／またはＮ４３４Ｓ、例えばＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ」）を含む。
マウスＦｃマウスＦｃＲｎ相互作用に不可欠なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発により識別されている（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．ら．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照されたい）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、およびＨ４３５（ＥＵインデックスナンバリング）が、相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．ら．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ，Ｍ．ら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、およびＨ４３５が、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎの相互作用に決定的であることが発見された（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、およびＹ４３６が相互作用に決定的であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．ら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）において、残基２４８～２５９、および３０１～３１７、および３７６～３８２、および４２４～４３７の様々な変異が報告され、調査されている。
特定の態様において、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２５３、および／または３１０、および／または４３５（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様において、抗体バリアントは、位置２５３、３１０、および４３５におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、およびＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照されたい。
ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置３１０、および／または４３３、および／または４３６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置３１０、４３３および４３６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域のＨ３１０Ａ、Ｈ４３３ＡおよびＹ４３６Ａである。例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照されたい。）
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５２、および／または２５４、および／または２５６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５２、２５４、および２５６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域のバリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；および国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
本明細書に報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であってもよい。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうち１つ／または２つが除去された、短くなったＣ末端であってもよい。１つの好ましい態様では、重鎖のＣ末端は短縮Ｃ末端末端ＰＧである。本明細書に報告されるすべての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リジンジペプチドを含む（Ｇ４４６およびＫ４４７、ＥＵインデックスナンバリングのアミノ酸位置）。本明細書に報告されるすべての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基を含む（Ｇ４４６、ＥＵインデックスナンバリングのアミノ酸位置）。
ｄ）システイン操作抗体バリアント
特定の態様では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書にさらに記載されるように、抗体を薬物部位またはリンカー薬物部位等のような他の部位にコンジュゲートしてイムノコンジュゲートを作成するために使用することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０，９３０号、同第７，８５５，２７５号、同第９，０００，１３０号、または国際公開第２０１６０４０８５６号に記載のように生成し得る。
ｅ）抗体誘導体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。このポリマーは、任意の分子量を有していてもよい、分岐していてもよい、または分岐していなくてもよい。抗体に接続するポリマーの数は、様々であってもよく、１つより多いポリマーが接続する場合、ポリマーは、同じ分子であってもよく、または異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数および／またはタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定し得る。
８．イムノコンジュゲート
本発明はまた、細胞毒性剤、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、または放射性同位体などの１種以上の治療剤にコンジュゲート（化学的に結合）された抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
一態様では、イムノコンジュゲートは、抗体が、前述の治療剤の１種以上にコンジュゲートした、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。抗体は典型的には、リンカーを使用して、治療剤の１種以上に連結される。治療剤および薬物およびリンカーの例を含む、ＡＤＣ技術の概観は、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ ６８：３－１９（２０１６）に記載されている。
別の態様では、イムノコンジュゲートは、本明細書に記載されるように、酵素活性毒素またはこれらの断片にコンジュゲートされた抗体を含む。これらは以下に限定されるわけではないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（緑膿菌からのもの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリのタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウのタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、ならびにトリコテセンを含む。
別の態様では、イムノコンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされ、放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載される抗体を含む。放射性物質の製造には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性物質が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィ研究のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍまたはＩ１２３、または核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ：ＮＭＲ）イメージング（別名、磁気共鳴イメージング、ＭＲＩ）のためのスピンラベル、例えば再びヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄を含んでいてもよい。
抗体と細胞毒性剤とのコンジュゲートは、例えば、各種の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる：Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネート等）、および二活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン等）。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように、リシン免疫トキシンを調製し得る。炭素１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、抗体にラジヌクレオチドを共役させるための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞内での細胞毒性薬物の放出を促進する「開裂性リンカー」であってもよい。例えば、酸解離性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」第５２巻、第１２７～１３１頁（１９９２年）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。
本明細書のイムノコンジュゲートまたはＡＤＣは、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａから）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、およびスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製される、このようなコンジュゲートを明示的に企図するが、これらに限定されない。
Ｄ．組換え方法および組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法および組成物を使用して産生し得る。これらの方法のために、抗体をコードする１つ以上の単離された核酸が提供される。
２つの核酸が必要とされるネイティブ抗体またはネイティブ抗体断片の場合、１つは軽鎖またはその断片のためのものであり、１つは重鎖またはその断片のためのものである。このような核酸は、ＶＬを含むアミノ酸配列および／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター上、または異なる発現ベクター上にあってもよい。
ヘテロ二量体重鎖を有する二重特異性抗体の場合、第１の軽鎖に１つ、第１のヘテロ単量体Ｆｃ領域ポリペプチドを含む第１の重鎖に１つ、第２の軽鎖に１つ、および第２のヘテロ単量体Ｆｃ領域ポリペプチドを含む第２の重鎖に１つの、４つの核酸が必要である。この４つの核酸は、１つ以上の核酸分子または発現ベクターに含まれていてもよい。そのような核酸は、第１のＶＬを含むアミノ酸配列、および／または第１のヘテロ単量体Ｆｃ領域を含む第１のＶＨを含むアミノ酸配列、および／または第２のＶＬを含むアミノ酸配列、および／または抗体の第２のヘテロ単量体Ｆｃ領域を含む第２のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の第１および／もしくは第２の軽鎖、かつ／あるいは第１および／もしくは第２の重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクターまたは異なる発現ベクターの上にあってもよく、通常、これらの核酸は、２つ／または３つの発現ベクター上に位置しており、すなわち、１つのベクターは、これらの核酸のうち、１つより多くを含んでいてもよい。これらの二重特異性抗体の例は、ＣｒｏｓｓＭａｂ（例えば、Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．ら，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１１８７－１１９１を参照されたい）である。例えば、ＥＵインデックスナンバリングによれば、ヘテロモノマー重鎖の一方はいわゆる「ノブ変異」（Ｔ３６６Ｗおよび場合によりＳ３５４ＣまたはＹ３４９Ｃの一方）を含み、他方はいわゆる「ホール変異」（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖならびに場合によりＹ３４９ＣまたはＳ３５４Ｃ）（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２（１９９６）７３）を含む。
一態様では、本明細書に記載の方法で使用される抗体をコードする単離された核酸が提供される。
一態様では、抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。
抗体の組換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができ、組換え方法によって産生または化学合成によって取得することができる。
抗体コードベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号および米国特許第５，８４０，５２３号を参照。（また、Ｅ，ｃｏｌｉ中の抗体断片の発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（編集），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９－１４１４；およびＬｉ，Ｈ．ら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０－２１５を参照されたい。
また、（グリコシル化）抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウイルス株が同定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、これを昆虫細胞と組み合わせて使用してもよい。
植物細胞培養物も、宿主として利用し得る。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、米国特許第６，０４０，４９８号、米国特許第６，４２０，５４８号、米国特許第７，１２５，９７８号および米国特許第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ら，Ｊ．ＧｅｎＶｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞または２９３Ｔ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ら，ＡｎｎａｌｓＮ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、および骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞の総説としては、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．およびＷｕ，Ａ．Ｍ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（編集），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００４），ｐｐ．２５５－２６８を参照されたい。
一態様では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
Ｅ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＫＬＫ７抗体および抗ＫＬＫ５は、当技術分野で公知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性および／または生物学的活性について同定、スクリーニング、または特徴付けし得る。
１．結合アッセイおよび他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体を、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の公知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。
別の態様では、競合アッセイを使用して、ＫＬＫ７への結合について、ｈｕ．１４１１ｃ－Ｈ１１Ｌ２などの本明細書で提供される抗体と競合する抗体を同定し得る。特定の態様では、かかる競合抗体は、ｈｕ．１４１１ｃ－Ｈ１１Ｌ２により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、ｈｕ．１４１１ｃ－Ｈ１１Ｌ２により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する いくつかの実施形態では、競合アッセイを使用して、ＫＬＫ５への結合について、ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５またはｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４などの本明細書で提供される抗体と競合する抗体を同定し得る。特定の態様では、かかる競合抗体は、ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５またはｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
例示的な競合アッセイでは、固定された抗原（例えば、ＫＬＫ５またはＫＬＫ７）を、抗原（例えば、ｈｕ．１４１１ｃ－Ｈ１１Ｌ２，ｈｕ．１０Ｃ５－Ｈ２８Ｌ５またはｈｕ．９Ｈ５－Ｈ１４Ｌ４）に結合する第１の標識抗体と、抗原への結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。対照として、固定化された抗原を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体の抗原への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化された抗原に関連する標識の量を測定する。固定化された抗原に関連する標識の量が、対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、第２の抗体が抗原への結合について第１の抗体と競合していることを示す。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
２．活性アッセイ
ＫＬＫ７は、キモトリプシン様セリンプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ７は、チロシン、フェニルアラニン、および／またはロイシンの後など、芳香族および／または疎水性アミノ酸の後のポリペプチドを切断する。一態様では、ヒトＫＬＫ７活性を阻害する抗ＫＬＫ７抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性としては、例えば、ＫＬＫ７プロテアーゼ活性が挙げられ得る。かかる生物活性をインビボおよび／またはインビトロで有する抗体も提供される。
特定の態様では、本発明の抗体は、このような生体活性について試験される。ＫＬＫ７プロテアーゼ活性を測定するためのアッセイは当技術分野で公知であり、通常は、基質および試験分子（抗ＫＬＫ７抗体など）の存在下でＫＬＫ７をインキュベートすることを含む。抗ＫＬＫ７抗体（または抗ＫＬＫ７結合アームを含む多重特異性抗体）がＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害するかどうかを試験するための非限定的アッセイは以下の通りである：ＫＬＫ７直接機能アッセイは、３８４ウェルプレート中、１５μＬの最終反応体積で室温で実施し得る。阻害剤サンプルをアッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０）中で最終濃度の３倍に希釈する。阻害剤（例えば、抗ＫＬＫ７抗体）または対照サンプル（５μＬ）をプレートに添加し、続いて最終濃度０．５ｎＭのアッセイ緩衝液中５μＬヒトＫＬＫ７（配列番号４）を添加し、４０分後、アッセイ緩衝液中１０μＭの最終濃度の５μＬのＭｃａ－ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｄｎｐ）（配列番号１２１；Ｂａｃｈｅｍ Ｍ－２１１０、ＤＭＳＯ中４．３ｍＭ原液）を添加する。基質の添加後、光学モジュールＦＩ ３２０ ４０５を使用し、ゲインを０％に設定してＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）でプレートを読み取る。約１．５時間にわたって１００秒ごとに測定を行う。反応速度（ＲＦＵ／ｓとして表される）は、線形範囲の線形回帰によって計算される。反応率を０％および１００％活性対照の値に正規化し、４パラメータ式に適合させてＩＣ５０値を計算し得る。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０を２倍し得る。
ＫＬＫ５はトリプシン様セリンプロテアーゼである。一態様では、ヒトＫＬＫ５活性を阻害する抗ＫＬＫ５抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性としては、例えば、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性が挙げられ得る。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性を阻害する。かかる生物活性をインビボおよび／またはインビトロで有する抗体も提供される。
特定の態様では、本発明の抗体は、このような生体活性について試験される。ＫＬＫ５プロテアーゼ測定を決定するためのアッセイは当技術分野で公知であり、例えば、基質および試験分子（抗ＫＬＫ５抗体など）の存在下でＫＬＫ５をインキュベートすることを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体の生物学的活性は、直接活性アッセイ、蛍光ペプチドアッセイ、ＬＣ／ＭＳアッセイ、およびＫｉ（ａｐｐ）アッセイから選択される１つ以上の方法によって試験される。いくつかの態様では、生物学的活性は、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイ、カップリングされたｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイ、カップリングされたｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ１ ＬＣ／ＭＳアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ７ ＬＣ／ＭＳアッセイおよびＫｉ（ａｐｐ）アッセイから選択される１つ以上の方法によって測定される。いくつかの実施形態では、ＩＣ５０値は、本明細書中に記載されるアッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＫＬＫ５抗体は、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイ、カップリングされたｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイ、カップリングされたｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ１ＬＣ／ＭＳアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ７ＬＣ／ＭＳアッセイおよびＫｉ（ａｐｐ）アッセイから選択される１つ以上の方法によって測定される場合、ＫＬＫ５の生物学的活性を少なくとも５０％阻害する。いくつかの実施形態では、該生物活性は、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性である。いくつかの実施形態では、ＩＣ５０値は、本明細書中に記載されるアッセイによって測定される。
抗ＫＬＫ５抗体（または抗ＫＬＫ５結合アームを含む多重特異性抗体）がＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害するかどうかを試験するための非限定的アッセイは以下の通りである：ＫＬＫ５直接機能アッセイは、３８４ウェルプレート中、１５μＬの最終反応体積で室温で実施し得る。阻害剤サンプルをアッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０）中で最終濃度の３倍に希釈する。阻害剤（例えば、抗ＫＬＫ５抗体）または対照サンプル（５μＬ）をプレートに添加し、続いて最終濃度０．５ｎＭのアッセイ緩衝液中５μＬのヒトＫＬＫ５（配列番号２）を添加し、４０分後、最終濃度５０μＭのアッセイ緩衝液中５μＬのＢｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣ（ＢａｃｈｅｍＩ－１１２０、３１．３ｍＭ水溶液）を添加する。基質の添加後、光学モジュールＦＩ ３２０ ４０５を使用し、ゲインを０％に設定してＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）でプレートを読み取る。約１．５時間にわたって１００秒ごとに測定を行う。反応速度（ＲＦＵ／ｓとして表される）は、線形範囲の線形回帰によって計算される。反応率を０％および１００％活性対照の値に正規化し、４パラメータ式に適合させてＩＣ５０値を計算し得る。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０を２倍し得る。
Ｆ．診断および検出のための方法および組成物
特定の態様では、本明細書で提供される抗体のいずれかは、生物学的サンプル中の抗原の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用される「検出」という用語は、定量的または定性的な検出を包含する。特定の態様では、生物学的サンプルは、皮膚サンプルなどの細胞または組織を含む。
一態様では、診断または検出の方法で使用するための抗体が提供される。さらなる態様では、生物学的サンプル中のＫＬＫ５および／またはＫＬＫ７の存在を検出する方法が提供される。特定の態様では、方法は、抗体とその抗原との結合を許容する条件下で、生物学的サンプルを本明細書に記載の抗ＫＬＫ５抗体または抗ＫＬＫ７抗体と接触させること、および抗体と抗原との間に複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法またはインビボ法であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書において提供する抗体による治療のために患者を選択する方法は、患者からのサンプルにおけるＫＬＫ５および／またはＫＬＫ７の発現を検出する工程を含む。
特定の態様では、標識された抗ＫＬＫ７抗体が提供される。特定の態様では、標識された抗ＫＬＫ５抗体が提供される。特定の態様では、標識された多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。ラベルには、直接検出されるラベルまたは部位（例えば、蛍光ラベル、発色性ラベル、電子密度ラベル、化学発光ラベル、放射性ラベルなど）、および酵素反応または分子間相互作用を介して間接的に検出される部位（例えば、酵素またはリガンドなど）が含まれるが、これらに限定されるものではない。例示的なラベルには、以下のものが含まれる：放射性同位元素３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈおよび１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体のようなフルオロフォア、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、ルシフェラーゼ、例えば ホタルルシフェラーゼおよび細菌性ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼのような複素環オキシダーゼ、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼのような色素前駆体を酸化するために過酸化水素を用いる酵素、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定したフリーラジカル、およびそのようなものと結合したもの。
Ｇ．医薬組成物
さらなる態様では、例えば、以下の治療方法のいずれかで使用するための、本明細書で提供される抗体のいずれかを含む医薬組成物が提供される。一態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれか、および薬学的に許容され得る担体を含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれかと、例えば以下に記載される少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
本明細書に記載の抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体の医薬組成物は、所望の純度を有するそのような１種以上の抗体を、凍結乾燥組成物または水溶液の形態で、１つ以上の任意の薬学的に許容され得る担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編集（１９８０））と混合することによって調製される。薬学的に許容され得る担体は、一般的に、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ヒスチジン、ホスファート、シトラート、アセタートおよび他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、かつ／あるいはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｈａｌｏｚｙｍｅ、Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質性（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含め、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせる。
いくつかの実施形態では、本明細書中に提供される１種以上の抗体は、皮下投与用として製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供される１種以上の抗体は、静脈内投与用として製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供される１種以上の抗体、局所投与用として製剤化される。
例示の凍結乾燥抗体組成物は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体組成物としては、米国特許第６，１７１，５８６号および国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが挙げられ、後者の組成物としてはヒスチジン－酢酸緩衝液が挙げられる。
本明細書の医薬組成物はまた、治療される特定の適応症に必要な２種以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗ＫＬＫ５抗体と組み合わせて抗ＫＬＫ７抗体を含む。かかる有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル中に封入されてもよく（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションに封入されてもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編集（１９８０）に開示されている。
徐放性の医薬組成物を調製し得る。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、これらのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される医薬組成物は、一般に無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。
Ｈ．治療方法および投与経路
本明細書で提供される抗体のいずれも、単独でまたは組み合わせて治療方法に使用され得る。
一態様では、医薬として使用するための抗ＫＬＫ７抗体が提供される。一態様では、医薬として使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一態様では、医薬として使用するための多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７抗体が提供される。一態様では、医薬として使用するための抗ＫＬＫ７抗体および抗ＫＬＫ５抗体の組み合わせが提供される。さらなる態様では、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さの治療に使用するための、そのような抗体が提供される。特定の態様では、治療方法で使用するための抗ＫＬＫ７抗体が提供される。特定の態様では、治療方法で使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。特定の態様では、治療方法で使用するための多重特異性抗ＫＬＫ５／抗ＫＬＫ７抗体が提供される。特定の態様では、治療方法で使用するための抗ＫＬＫ７抗体および抗ＫＬＫ５抗体の組み合わせが提供される。特定の態様では、本発明は、有効量の１種以上の抗体を個体に投与することを含む、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを有する個体を治療する方法で使用するためのそのような抗体を提供する。
そのような一態様では、本方法は、例えば以下に記載されるように、有効量の少なくとも１種の追加の治療剤（例えば、１種、２種、３種、４種、５種、または６種の追加の治療剤）を個体に投与することをさらに含む。
さらなる態様では、本発明は、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるのに使用するための抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体を提供する。特定の態様では、本発明は、個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、個体に有効量の１種以上の抗体を投与して上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させる方法に使用するための、抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体を提供する。上記の態様のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
さらなる態様では、本発明は、医薬の製造または調製における抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体の使用を提供する。一態様では、医薬は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを治療するためのものである。さらなる態様では、医薬は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを有する個体に、有効量の医薬を投与することを含む、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを治療する方法に使用するためのものである。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１種の追加の治療剤、例えば、以下に記載されるものを個体に投与することをさらに含む。さらなる態様では、医薬は、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるためのものである。さらなる態様では、医薬は、個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法であって、個体に、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、かつ／または上皮バリアを回復させるための有効量の医薬を投与することを含む方法で使用するためのものである。上記の態様のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを治療する方法を提供する。一態様では、前記方法は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および／または酒さを有する個体に、有効量の抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体を投与することを含む。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１種の追加の治療剤、以下に記載されるものを個体に投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ネザートン症候群を有する個体における皮膚発疹および／またはスケーリングを改善する方法であって、有効量の抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体を個体に投与することを含む方法が提供される。
上記の態様のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、個体において上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させる方法を提供する。一態様では、方法は、有効量の抗ＫＬＫ７抗体および／または抗ＫＬＫ５抗体および／または多重特異性抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ５抗体を個体に投与して、上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、かつ／または皮膚炎症性サイトカインを減少させることを含む。非限定的な例示的皮膚炎症性サイトカインとしては、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－４およびＧ－ＣＳＦが挙げられる。一態様では、「個体」は、ヒトである。
さらなる態様では、本発明は、例えば上記の治療方法のいずれかで使用するための、本明細書で提供される抗体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。一態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれか、および薬学的に許容され得る担体を含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれかと、例えば以下に記載される少なくとも１種の追加の治療剤とを含む。
本発明の抗体は、単独で投与され得るか、または併用療法において使用され得る。例えば、該併用療法には、本開示の化合物を投与することと、少なくとも１種類の追加の治療剤（例えば、１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、または６種類の追加の治療剤）を投与することとが含まれる。特定の態様では、併用療法は、本発明の抗体を投与すること、および抗炎症剤などの少なくとも１種の追加の治療剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗炎症剤は経口投与される。いくつかの実施形態では、抗炎症剤は局所投与される。抗炎症剤としては、低用量抗生物質、ステロイド、コルチコステロイド、タクロリムス、抗ＩＬ４Ｒ抗体、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ－１２／２３阻害剤、ＩＬ－１７阻害剤およびＩＬ－４受容体阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。非限定的な例示的な抗炎症剤としては、ドキシサイクリン、メトトレキサート、プレドニゾン、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、デュピルマブ、セルトリズマブペゴール、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、セクキヌマブ、イキセキズマブ、ブロダルマブ、アバタセプト、チドラキズマブ－ａｓｍｎ、リサンキスマブ－ｒｚａａおよびグセルクマブが挙げられる。
いくつかの実施形態では、例えば、酒さの治療において、追加の治療薬は、経口投与されるドキシサイクリンである。いくつかの実施形態では、例えば、アトピー性皮膚炎の治療において、追加の治療薬は、皮下投与されるデュピルマブ、および／または局所投与されるステロイドである。いくつかの実施形態では、例えば、酒さの治療において、追加の治療薬は、局所投与されるステロイド；経口投与されたメトトレキサート；経口投与されるシクロスポリン；典型的には皮下投与されるＴＮＦ阻害剤から選択される。
上記のそのような併用療法は、併用投与（２種以上の治療剤が同一または別個の医薬組成物に含まれる場合）および別個の投与を包含し、その場合、本発明の抗体の投与は、１種以上の追加の治療剤の投与の前、同時および／または後に実施し得る。一態様では、本発明の１種以上の抗体の投与および追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、または約１、２もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５もしくは６日以内に行われる。一態様では、抗体および追加の治療剤は、治療の１日目に患者に投与される。
本発明の抗体（および任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに局所治療のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与し得る。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、皮下投与などがある。投薬は、投与が短期または長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射等の注射によるものであり得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は皮下投与される。いくつかの実施形態では、抗体は４週間ごとに、または毎月投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、抗体は４週間ごとに、または毎月投与される。いくつかの実施形態では、例えば、抗体がＭ４２８Ｌ（ＥＵナンバリング）およびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）などの半減期延長置換を含む場合、抗体は８週間ごとに投与される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。この文脈において考慮すべき因子としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医師に既知である他の因子が挙げられる。抗体は、当該疾患を予防または治療するために現在使用されている１種以上の薬剤と一緒に製剤化されている必要はないが、場合により製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、医薬組成物中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、および上記の他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量および投与経路によって、または本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、または適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量および任意の経路で使用される。
疾患の予防または治療について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１種以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度および経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴および抗体への応答、ならびに主治医の裁量に依存するだろう。本発明の抗体は、好適には、患者に一度にまたは一連の治療にわたって投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、例えば、１回以上の別個の投与によるか、または連続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投与量とし得る。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。状態に応じて、数日間以上にわたる反復投与に対して、治療は通常、疾患症状の所望の抑制が生じるまで続けられる。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば毎週または３週間毎に（例えば、患者が約２～約２０回、または例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。最初の多めの投与量、それに続く１回以上の量の少ない用量を投与してよい。しかしながら、他の投薬レジメンも有用であり得る。この療法の進展は、従来の技術およびアッセイによって、容易にモニタリングされる。
様々な実施形態では、本明細書の方法で使用される抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５アンタゴニストで置き換えられてもよく、ＫＬＫ５アンタゴニストは、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する。様々な実施形態では、本明細書の方法で使用される抗ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ７アンタゴニストで置き換えられてもよく、ＫＬＫ７アンタゴニストは、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害する。様々な実施形態では、本明細書の方法で使用される二重特異性抗ＫＬＫ５．ＫＬＫ７抗体は、ＫＬＫ５／ＫＬＫ７アンタゴニストで置き換えられてもよく、ＫＬＫ５／ＫＬＫ７アンタゴニストは、ＫＬＫ５プロテアーゼ活性およびＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害する。
Ｉ．製造物品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防および／または診断に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、状態を治療、予防、および／または診断するのに有効な別の組成物と単独でまたは組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択される症状を治療するために使用されることを示す。さらに、製造物品は、（ａ）組成物を含む第１の容器を含み、この組成物は本発明の抗体を含み、（ｂ）組成物を含む第２の容器を含み、この組成物は細胞毒性剤または他の治療剤をさらに含む。本発明のこの態様における製造物品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含んでいてもよい。これに代えて、またはこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液およびデキストロース溶液を含む第２の（または第３の）容器をさらに備えていてもよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、注射器等、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法および組成物の例である。先に提供した一般的な説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施されてもよいことは理解される。
実施例１：抗ＫＬＫ７抗体の作成
ニュージーランドホワイトウサギをヒトＫＬＫ７（配列番号４）で免疫化し、公開された文献に関連する改変されたプロトコルを使用して単一Ｂ細胞を単離した。例えば、Ｏｆｆｎｅｒら、ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（２），２０１４を参照されたい。この改変されたワークフローは、ＩｇＧ＋ｈｕＫＬＫ７＋Ｂ細胞の単一ウェルへの直接ＦＡＣＳソーティングを含んでいたＢ細胞培養上清を、ヒトＫＬＫ７および無関係の対照タンパク質への結合についてＥＬＩＳＡによってアッセイした。ＫＬＫ７特異的Ｂ細胞を溶解し、直ちに－８０℃で凍結し、分子クローニングまで保存した。ウサギＢ細胞由来の各モノクローナル抗体の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）を、前述のように抽出されたｍＲＮＡからの発現ベクターにクローニングした。前述の文献を参照されたい。個々の組換えウサギ抗体をＥｘｐｉ２９３細胞で発現させ、続いてプロテインＡで精製した。ヒトＫＬＫ７およびカニクイザルＫＬＫ７の両方に結合する２４４個の抗ＫＬＫ７抗体が得られた。さらなる特徴付けのために１７１個の抗体をクローニングし、発現させた。精製された抗ＫＬＫ７抗体を、ｈｕＫＬＫ７に対する結合親和性、ｈｕＫＬＫ７に対する選択性、および機能的活性についてスクリーニングした。
抗体の結合親和性をＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００装置によって測定した。ウサギ抗体を組換え的に発現させた。動力学的測定のために、抗体を研究グレードのプロテインＡチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）で捕捉して、約３００ＲＵを達成した。ヒトおよびカニクイザルのＫＬＫ７の１０倍連続希釈液を、３０μＬ／分の流量で２５℃でＨＢＳ－Ｐ緩衝液に注入した。会合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０）を用いて計算した。
平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｄ／ｋａとして計算した。
最も強力な抗体のサブセットについてのヒトＫＬＫ７およびカニクイザルＫＬＫ７に対するオフ速度の結果を表１に示す。ｈｕＫＬＫ１、ｈｕＫＬＫ４、ｈｕＫＬＫ５、またはｈｕＫＬＫ１１に対する結合は観察されず、これらの抗体が特異的であることが確認された。
ＫＬＫ７直接機能アッセイを、１５μＬの最終反応体積を有する３８４ウェルプレート（黒色、小容積丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃４５１４）において室温で行った。阻害剤サンプルをアッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０）中で最終濃度の３倍に希釈した。阻害剤を含まない反応物、および２００ｎＭの最終濃度のＳＦＴＩ２１７０５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ＤＭＳＯ中１０ｍＭストック；ＳＦＴＩ－ＫＬＫ７とも呼ばれる。配列ＧＫＣＬＦＳＮＰＰＩＣＦＰＮ（配列番号１９６）；例えば、ｄｅ Ｖｅｅｒら，２０１７，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１３７：４３０－４３９を参照されたい）との反応物を、それぞれ１００％および０％の活性対照として使用した。阻害剤または対照サンプル（５μＬ）をプレートに添加した後、アッセイ緩衝液中５μＬのヒトＫＬＫ７（配列番号４＋Ｃ末端ＦＬＡＧタグ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）または５μＬのカニクイザルＫＬＫ７（配列番号６＋Ｃ末端ＦＬＡＧタグ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、最終濃度０．５ｎＭで添加した（Ｍｃａ基質アッセイ）。４０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＭｃａ－ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｄｎｐ）（配列番号１２１；ＢａｃｈｅｍＭ－２１１０、ＤＭＳＯ中４．３ｍＭ原液）を、基質濃度１０μＭの最終濃度で添加した。基質を添加した後、光学モジュールＦＩ ３２０ ４０５を使用して、ゲインを０％に設定してＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）でプレートを読み取った。測定は１００秒ごとに約１．５時間行った。反応速度（ＲＦＵ／ｓとして表される）を、線形範囲の線形回帰によって計算した。反応速度を０％および１００％の活性対照の値に標準化し、４パラメータ方程式に適合させてＩＣ５０値を計算した二価阻害剤に関する特定のデータについては、以下に記載するように、生のＩＣ５０を２倍した。
各時点で測定した相対蛍光単位（ＲＦＵ）の線形回帰によって、各アッセイウェルの初期速度を計算した。最初の２つの時点は、一般的には無視した。対照に対する活性の割合を、非阻害および完全阻害対照の平均に対して計算した。これら対照に対する活性の割合を阻害剤濃度に対してプロットし、４パラメータ式を使用してフィッティングしてＩＣ５０値を決定した。表２は、特定の抗体クローンに対するヒトＫＬＫ７およびカニクイザルＫＬＫ７阻害アッセイの結果を示す。表２では、すべてのクローンが二価であるので、ＩＣ ５０は二価について補正されていない。
実施例２：抗ＫＬＫ７抗体のヒト化
実施例１に記載されるようなスクリーニングの後、最良の阻害活性を有する１７個の抗体をさらなる特徴づけのために選択した。最も強い結合親和性、阻害活性、および製造上の問題が最も少ない抗体（１４Ｈ１１）をヒト化のために選択した。抗体１４Ｈ１１重鎖可変領域（配列番号１１６）を、まず、Ｃ３５ａをＳで置換して不対システインを除去することによって改変し、抗体１４Ｈ１１ｃを得た（ＶＨ、配列番号１３；ＶＬ配列番号１４）。
ウサギモノクローナル抗体１４Ｈ１１ｃを以下のようにヒト化した。残基番号はＫａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による。
１４Ｈ１１ｃのヒト化中に構築されたバリアントをヒトＩｇＧ１の形態で評価した。ＶＬドメイン中の２４～３４位（Ｌ１；配列番号１０）、５０～５６位（Ｌ２；配列番号１１）および８９～９７位（Ｌ３；配列番号１２）のウサギ抗体由来の超可変領域をヒトＫＶ１Ｄ－３９＊０１フレームワークに移植し；ＶＨドメイン中の３１～３５ｂ（Ｈ１；配列番号７）、５０～６５（Ｈ２；配列番号８）および９５～１０２（Ｈ３；配列番号９）をヒトＨＶ３～５３＊０１フレームワークに移植した。ウサギ抗体からのすべてのＶＬおよびＶＨ Ｖｅｒｎｉｅｒ位置も、それぞれのヒト生殖系列フレームワークに移植した。すべてのウサギアミノ酸Ｖｅｒｎｉｅｒ位置にあるグラフトをＬ１Ｈ１（ｈｕ．１４Ｈ１１ｃ．Ｌ１Ｈ１；配列番号：１５（ＶＨ）および３１（ＶＬ））と呼ぶ。
ヒト化抗体の結合親和性をＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８ＫＳＰＲシステムによって測定した。動力学的測定のために、抗体を研究グレードのプロテインＡチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で捕捉して、約３００ＲＵを達成した。ヒトＫＬＫ７の１０倍連続希釈液をＨＢＳ－Ｐ緩衝液に３７℃で１００μＬ／分の流速で注入した。会合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン２．０）を使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｄ／ｋａとして計算した。
ｈｕ．１４Ｈ１１ｃ．Ｌ１Ｈ１抗体の結合親和性をそのキメラ親クローンと比較した。ｈｕ．１４Ｈ１１ｃ．Ｌ１Ｈ１抗体のウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置をヒト残基に戻して、ｈＫＬＫ７への結合親和性に対する各ウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置の寄与を評価した。３つの追加の軽鎖（Ｌ２：Ｌ１＋Ａｌａ４３（配列番号３２）、Ｌ３：Ｌ１＋Ｐｈｅ７１（配列番号３３）、Ｌ４：Ｌ１＋Ａｌａ４３＋Ｐｈｅ７１（配列番号３４））、および９つの追加の重鎖（Ｈ２：Ｈ１＋Ｖａｌ２（配列番号１６）、Ｈ３：Ｈ１＋Ｖａｌ４８（配列番号１７）、Ｈ４：Ｈ１＋Ｓｅｒ４９（配列番号１８）、Ｈ５：Ｈ１＋Ａｒｇ７１（配列番号１９）、Ｈ６：Ｈ１＋Ａｓｎ７３（配列番号２０）、Ｈ７：Ｈ１＋Ｌｅｕ７８（配列番号２１）、Ｈ８：Ｈ１＋Ｔｙｒ９１（配列番号２２）、Ｈ９：Ｈ１＋Ｇｌｎ１０５（配列番号２３）、Ｈ１０：Ｖｅｒｎｉｅｒ位のウサギ残基なし（配列番号２４））を作製した。図１Ａ～１Ｂを参照されたい。軽鎖上のＴｙｒ７１（Ｌ２；配列番号３２）および重鎖上のＧｌｎ２およびＰｒｏ１０５（Ｈ１１；配列番号２９）は、上記のバリアント抗体の結合親和性評価に基づいて、重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された（データは示さず）。キメラ１４Ｈ１１ｃは、１ｐＭ未満のＫＤで結合したが、ｈｕ．１４Ｈ１１ｃ．Ｌ２Ｈ１１は０．４ｐＭのＫＤで結合した。
実施例３：抗ＫＬＫ５抗体の親和性最適化
抗ＫＬＫ５抗体の親和性を増加させるために、ｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４およびｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８の５４４および５７６の単一点変異バリアントをそれぞれ生成した。得られた抗体を表面プラズモン共鳴によってスクリーニングし、オフ速度に従ってランク付けした。図４（ｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８バリアント）および図５（ｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４バリアント）を参照されたい。ｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８には５つの変異しかなく、これにより、オフ速度が著しく遅くなった。これらは、ＬＣ．Ｓ３４Ｋ（配列番号５４）、ＬＣ．Ｆ９２Ｙ（配列番号５５）、ＬＣ．Ｓ９５Ｆ（配列番号５６）、ＨＣ．Ｇ３３Ｐ（配列番号１０５）およびＨＣ．Ｎ５３Ｖ（配列番号５２）であった。図２Ａ～２Ｂを参照されたい。ｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４の場合、変異は以下の４つのみであり、これにより、オフ速度は親抗体よりも遅くなった：ＬＣ．Ｈ８９Ｖ（配列番号８８）、ＬＣ．Ｓ９５Ｙ（配列番号８９）、ＨＣ．Ｇ５４Ａ（配列番号８１）、およびＨＣ．Ｇ９８Ｑ（配列番号８２）。図３Ａ～３Ｂを参照されたい。
バリアントの良好な組み合わせを同定するために、本発明者らは、変異の個々のセットと組み合わせたセットの両方を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有するワンアーム型（ＯＡ）一価抗体を作製した。良好な組み合わせは、表面プラズモン共鳴特性評価によって特定した。表４～７は、ワンアーム型（ＯＡ）一価抗体の力学的特性を示す。
図６は、ヒトＫＬＫ５（図６Ａ）およびカニクイザルＫＬＫ５（図６Ｂ）に対する、示されたｈｕ．１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８バリアントの表面プラズモン共鳴トレースを示す。図７は、ヒトＫＬＫ５（図７Ａ）およびカニクイザルＫＬＫ５（図７Ｂ）に対する、示されたｈｕ．９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４バリアントの表面プラズモン共鳴トレースを示す。
実施例４：抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体の作製および特徴付け
二重特異性抗体において抗ＫＬＫ７アームと対になる１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８バリアントの良好な組み合わせを選択するために、本発明者らは、ＫＬＫ５阻害活性、バキュロウイルス結合アッセイにおける非特異的結合について各バリアントを評価し、単一細胞における抗ＫＬＫ７アームとの共発現時の二重特異性生成を補正した。各バリアントは、単一細胞二重特異性アセンブリのための正しい鎖ペアリングを増強するために以前に記載された変異で構築された。Ｄｉｌｌｏｎら，Ｍａｂｓ ９（２）：２１３－２３０（２０１７）を参照されたい。抗ＫＬＫ５ ＬＣはＱ３８ＥおよびＶ１３３Ｋを、ＨＣはＱ３９ＫおよびＳ１８３Ｅを含有していた。抗ＫＬＫ７ ＬＣはＱ３８ＫおよびＶ１３３Ｅを、ＨＣはＱ３９ＥおよびＳ１８３Ｋを含有していた。
すべてのワンアーム型抗ＫＬＫ５抗体バリアントは、ＫＬＫ５阻害アッセイにおいて同様の効力を示し、ＩＣ５０は１．１４ｎＭ～２．３０ｎＭの範囲であった（データは示さず）。
各抗ＫＬＫ５抗体バリアントの非特異的結合を、実質的にＨｏｔｚｅｌら，Ｍａｂ ４（６）：７５３－７６０（２０１２）に記載されているように、バキュロウイルス粒子を使用したＥＬＩＳＡで測定した。
２つのバリアント（Ｎ５３Ｖ／Ｓ３４ＫおよびＮ５３Ｖ／Ｓ３４Ｋ／Ｆ９２Ｙ／Ｓ９５Ｆ）は、より高い非特異的結合のためにバキュロウイルス結合アッセイ後に排除され、これは不十分な薬物動態特性をもたらし得る。表８および９を参照されたい。
ＨＥＫ２９３細胞における共発現時に抗ＫＬＫ７アームと正しくペアリングする各バリアントの能力を評価した。表１０に示すように、ＬＣ．Ｓ３４Ｋを有するすべてのバリアントの集合性は不良であった。
組み合わせた特性に基づいて、Ｑ３９Ｋ／Ｑ３８Ｅ変異を有する１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８．Ｎ５３Ｖ．Ｆ９２Ｙ（ＶＨ，配列番号５３；ＶＬ，配列番号６２）は、Ｑ３９Ｅ／Ｑ３８Ｋ変異を有するｈｕ１４Ｈ１１ｃ．Ｌ２Ｈ１１（ＶＨ，配列番号３０；ＶＬ，配列番号３８）抗ＫＬＫ７アームとペアリングする抗ＫＬＫ５アームとして選択された。エフェクター機能を弱めたｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ｇを用いて、二重特異性抗体の２つのバージョンを作製した。バージョンの１つは、インビボで抗体半減期を延長することが示されている２つの変異（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を含んでいた。Ｚａｌｅｖｓｋｙら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１０，２８：１５７－９；Ｋｏら，Ｎａｔｕｒｅ，２０１４，５１４：６４２－５；Ｇａｕｄｉｎｓｋｉら，ＰＬＯＳ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１８，１５：ｅ１００２４９３を参照されたい。
Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（「ＬＳ」）変異の有無にかかわらず、抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体の親和性を、ヒトおよびカニクイザルのＫＬＫ５およびＫＬＫ７について測定した。
二重特異性抗体の活性を、実質的に実施例１に記載されているように、ＫＬＫ７およびＫＬＫ５直接機能アッセイを使用してアッセイした。ＫＬＫ５機能アッセイのために、実施例１のアッセイを、ＫＬＫ７に代えてヒトまたはカニクイザルＫＬＫ５（それぞれ配列番号２および１０１）を使用し、５０μＭの最終濃度の基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣ（ＢａｃｈｅｍＩ－１１２０、３１．３ｍＭ保存水溶液）を使用するように改変した。２００ｎＭ ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（配列番号１９７；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；例えば、Ｂｒａｎｎｓｔｒｏｍら，２０１２，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３９３：３６９－３７７）を０％活性対照として使用した。結果を表１３および表１４に示す。
実施例５：アトピー性皮膚炎、酒さ、乾癬におけるＫＬＫ５およびＫＬＫ７の発現
免疫化学を使用して、ヒト酒さおよびアトピー性皮膚炎サンプルにおけるＫＬＫ５の発現を検出した。図８に示すように、ＫＬＫ５タンパク質は、正常な皮膚と比較して、ヒト酒さおよびアトピー性皮膚炎において増加している。
ＫＬＫ７がヒト皮膚炎状態でも発現されるかどうかを判定するために、アンチセンスＲＮＡプローブをインサイチュハイブリダイゼーションに使用して、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の発現を可視化した。図９は、正常皮膚と比較した、アトピー性皮膚炎、酒さおよび乾癬における代表的なＫＬＫ７ ｍＲＮＡ染色を示す。図１０は、ＫＬＫ５（１０Ａ）およびＫＬＫ７（１０Ｂ）ｍＲＮＡがヒト皮膚において同様の解剖学的発現を示し、両者ともアトピー性皮膚炎、酒さおよび乾癬において上方制御されることを示す。ＳＰＩＮＫ５発現の増加は、アトピー性皮膚炎または酒さでは有意ではなかったが、乾癬では有意であった。図１０のデータは、病理学者による二重盲検定量化を示す。
実施例６： ＫＬＫ５またはＫＬＫ７の皮内注射により経皮水分喪失が増加する
ＫＬＫ５またはＫＬＫ７が上皮バリア調節不全を直接促進し、経皮水分喪失を増加させるかどうかを試験するために、２μｇの組換えＫＬＫ５またはＫＬＫ７をＢａｌｂ／ｃマウスの背側皮膚に皮内注射した。
図１１に示すように、ＫＬＫ５を注射した動物およびＫＬＫ７を注射した動物はいずれも、注射の６時間後、携帯型皮膚蒸気計（Ｄｅｌｆｉｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって測定した場合、経皮水分喪失が増加していた。これらのデータは、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７がそれぞれ上皮透過性の増加を促進し得ることを示唆した。
実施例７：ＫＬＫ５およびＫＬＫ７を阻害するとマウス炎症性皮膚炎を改善する
代用の抗マウスＫＬＫ５および抗マウスＫＬＫ７阻害抗体を生成して、マウスアトピー性皮膚炎においてＫＬＫ５およびＫＬＫ７を阻害する治療効果を試験した。ＳＤＳおよび黄色ブドウ球菌プロテインＡによる局所治療により、マウスのアトピー性皮膚炎を誘導した。次いで、炎症性皮膚炎を有するマウスに、２５０μｇのアイソタイプ対照抗体（抗ｇｐ１２０）、抗マウスＫＬＫ５抗体、抗マウスＫＬＫ７抗体、または抗ＫＬＫ５抗体と抗ＫＬＫ７抗体との配合物の腹腔内注射を行った。マウスＳＰＩＮＫ５－Ｆｃ融合タンパク質を、複数のＫＬＫ（ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、およびＫＬＫ１４を含む）に対する非特異的阻害剤とし、本発明で使用した。
図１２に示すように、ＫＬＫ５またはＫＬＫ７単独の阻害は、毎日の皮膚炎臨床スコア（１２Ａ）、総終末アトピー性皮膚炎スコア（１２Ｂ）、およびＡＵＣ皮膚スコア（１２Ｃ）において中程度の保護をもたらすが、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の共阻害は、ＳＰＩＮＫ５－Ｆｃと同様に優れた治療効果をもたらす。ＳＰＩＮＫ５はＫＬＫ５およびＫＬＫ７に加えて他のＫＬＫを阻害するので、このデータは、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７の阻害が治療効果に十分であることを示唆している。
炎症性アトピー性皮膚炎は、Ｔ細胞浸潤およびＩＬ－１３産生に関連する。ＩＬ－１３の中和により、マウス動物モデルおよびヒトアトピー性皮膚炎患者におけるアトピー性皮膚炎が改善する。第２の実験では、抗ＩＬ－１３抗体をＳＤＳ／黄色ブドウ球菌プロテインＡアトピー性皮膚炎モデルにおける陽性対照として使用した。図１３に示すように、抗ＫＬＫ５抗体および抗ＫＬＫ７抗体を併用することにより、総末端ＡＤスコアが減少し、経皮水分喪失（ＴＥＷＬ）が減少し、組織学的疾患重症度スコアが抗ＩＬ－１３抗体と同程度に減少した。図１４は、代表的なヘマトキシリンおよびエオシン染色を示し、抗ＫＬＫ５およびＫＬＫ７抗体を組み合わせることにより、皮膚炎症および錯角化が抗ＩＬ－１３抗体と同程度に減少したことを実証している。
まとめると、これらの結果は、上皮バリア透過性の促進におけるＫＬＫ５およびＫＬＫ７の役割が重複していることを示唆している。したがって、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７を併用することによる阻害により、ＫＬＫ５またはＫＬＫ７単独の阻害と比較して、皮膚炎臨床スコア、皮膚バリア機能、および組織病理発現が改善されると予想される。
実施例８：Ｓｐｉｎｋ５欠損マウスの皮膚発疹およびスケーリングは、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体による治療または抗ｍＫＬＫ５抗体／抗ｍＫＬＫ７抗体の併用による治療で改善する
Ｓｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２＋マウスに、１６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、または４ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンを腹腔内注射して、Ｓｐｉｎｋ５遺伝子を欠失させた。タモキシフェン治療の１日前に、抗マウスＫＬＫ５抗体（マウスあたり２．５ｍｇ）および抗マウスＫＬＫ７抗体（マウスあたり０．５ｍｇ）またはアイソタイプ対照抗体（マウスあたり２．５ｍｇ）。抗ｍＫＬＫ７抗体と比較して過剰の抗ｍＫＬＫ５抗体を使用したのは、抗ｍＫＬＫ５抗体が抗ｍＫＬＫ７抗体よりも１００倍強力ではなく、抗ｍＫＬＫ７抗体のＩＣ５０が０．４８ｎＭであるのと比較して、ＩＣ５０が４．７８ｎＭであると測定されたためである。タモキシフェンを注射した６日後に背部皮膚を分析した。Ｓｐｉｎｋ５ ｆ／ｆ Ｃｒｅ－ＥＲＴ２陰性マウスも、対照として１６ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンで治療した。
感染６日後のマウスの背部皮膚を図１６Ａ～１６Ｄに示す。アイソタイプ対照で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスの皮膚は乾燥し、鱗状になり、炎症を起こし、赤くなった。これらの外側ネザートン症候群（ｅｘｔｅｒｉｏｒ Ｎｅｔｈｅｒｔｏｎ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）様症状は、種々のタモキシフェン用量にわたって抗ｍＫＬＫ５抗体および抗ｍＫＬＫ７抗体を併用して注射することによって有意に改善された。
マウスの背部皮膚をリン酸緩衝生理食塩水でホモジナイズして、皮膚溶解物を生成した。Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ（ＢｉｏＲａｄ）を使用してサイトカインレベルについて溶解物を分析した。
サイトカインアッセイの結果を図１７Ａ～１７Ｅに示す。サイトカインＩＬ－８（１７Ａ）、ＴＮＦ－α（１７Ｂ）、ＩＬ－６（１７Ｃ）、ＩＬ－４（１７Ｄ）およびＧ－ＣＳＦ（１７Ｅ）のレベルは、アイソタイプ対照抗体治療と比較して、抗ｍＫＬＫ５／ｍＫＬＫ７二重特異性抗体治療によって低下した。
図１８は、１６ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンおよびアイソタイプ対照抗体、または抗ｍＫＬＫ５抗体／抗ｍＫＬＫ７抗体の併用で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスのヘマトキシリンおよびエオシン染色皮膚の代表的な断面図を示す。アイソタイプ対照抗体で治療したＳｐｉｎｋ５欠損マウスの皮膚は、有意な白血球浸潤、表皮層の肥厚および表皮落屑を示すが、ｍＫＬＫ５およびｍＫＬＫ７を併用遮断は病理学的症状を有意に減少させた。
実施例９：抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体はＫＬＫ５およびＫＬＫ７誘導性上皮透過性を阻害する
ヒト表皮ケラチノサイトを、コラーゲンでコーティングした組織培養トランスウェルプレートに播種し、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２で２日間分化させた。分化後、ＣａＣｌ２を０．１ｍＭまで減少させた。単層の頂端側を、ＫＬＫ５（５μｇ／ｍｌ）、ＫＬＫ７（５μｇ／ｍｌ）、ＫＬＫ５＋ＫＬＫ７（各５μｇ／ｍｌ）、またはＫＬＫ５＋ＫＬＫ７（各５μｇ／ｍｌ）＋１００μｇ／ｍｌ抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体（ｈｕ．１０Ｃ５ＶＹ．ｈｕ１４Ｈ１１ｃ．Ｌ２Ｈ１１ ＬＳ）で７２時間または９６時間処理した。各時点において、経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）をボルト／オーム計で測定した。
結果を図２２Ａ～図２２Ｂに示す。組換え型ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、またはＫＬＫ５／ＫＬＫ７を一緒に添加すると、経上皮電気抵抗によって定量化されるように上皮透過性が誘導された。抗ＫＬＫ５／ＫＬＫ７二重特異性抗体は、ＫＬＫ５およびＫＬＫ７誘導性上皮透過性を有意に低下させた。
実施例１０：ＫＬＫ７に結合した抗ＫＬＫ７抗体１４Ｈ１１ｃの構造決定
組換え型ＫＬＫ７の残基Ｉ３０～Ｒ２５３（配列番号４）を、Ｎ末端にＨｉｓタグを有し、続いてＨｉｓタグとＫＬＫ７との間にエンテロキナーゼ切断部位を有するように設計し、哺乳動物発現系（ＣＨＯ細胞）で発現させた。ＣＨＯ細胞を１ｍｇ／ｍＬのキフネンシンと共にＥｎｄｏＨと共発現させた。発現培地を回収し、第１の工程としてＮｉ－ＮＴＡで精製した。Ｎｉ－ＮＴＡカラムから溶出したタンパク質を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（Ｓ２００）サイズ排除カラムでさらに精製した。ＫＬＫ７上のＨｉｓタグを、エンテロキナーゼで一晩処理することによって除去し、ＫＬＫ７を、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．８および０～８００ｍＭ ＮａＣｌの勾配を有するＳＰ ＨＰ陽イオン交換カラムでさらに精製した。
抗ＫＬＫ７抗体ｒｂ．１４Ｈ１１ｃの重鎖および軽鎖を含むＦａｂ断片をＨＥＫ２９３細胞中で発現させた。Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂を使用して精製を容易にするために重鎖のＣ末端にＨｉｓタグを付加し、続いてＰＢＳ中でサイズ排除クロマトグラフィーを行った。重鎖および軽鎖の配列を、それぞれ配列番号１９８および１９９に示す。この実施例の目的のために、配列をシグナル配列で始めてナンバリングした。したがって、配列番号１９８に示されるＦａｂ重鎖のナンバリングは２０で始まり（アミノ酸２０～２５６）、配列番号１９９に示されるＦａｂ軽鎖のナンバリングは２３で始まる（アミノ酸２３～２３７）。
ＫＬＫ７を１４Ｈ１１ｃ Ｆａｂと１：１．５（ＫＬＫ７：Ｆａｂ）のモル比で混合し、複合体を２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．８、１５０ｍＭ ＮａＣｌ中でサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。ＫＬＫ７：Ｆａｂ複合体を含むピークをリジン（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２００６，１４，１６１７－１６２２）でメチル化し、２５ｍＭ ＴＲＩＳ ｐＨ７．８および１５０ｍＭ ＮａＣｌを使用してＳ２００カラムでさらに精製した。複合体を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、１μＬのタンパク質および１μＬの１０％ ＰＥＧ４Ｋおよび０．２Ｍ硫酸アンモニウムを滴下することによって結晶を成長させた。結晶が３日後に現れ、さらに２～３日かけて成熟した。次いで、データ収集のために結晶を採取した。
Ｘ線回折データは、標準的な方法に従ってＡｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）で様々なシンクロトロンＸ線放射を使用して、１００ケルビンの極低温条件下で収集した。回折画像は、データ処理ソフトウェアＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ，Ｗ．ＸＤＳ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ６６，１２５－１３２（２０１０））を使用して処理および縮小した。モデルはプログラムＰＨＡＳＥＲによる分子置換法を用いて作成した。ヒトＫＬＫ７（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ１０４：１６０８６－１６０９１（２００７））の構造およびＦａｂ抗体モデルを検索モデルとして使用した。構造体は、プログラムＣＯＯＴを使用したモデル調整およびＰＨＥＮＩＸを使用した精密化の反復ラウンドを受けた。モデルを、許容可能なＲおよびＲ自由値ならびにＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ統計（モル確率で算出）に改良した。ＫＬＫ７のアミノ酸残基ナンバリングは、キモトリプシンナンバリングシステム（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０４：１６０８６－１６０９１（２００７）（ＫＬＫ７用）、ＰＤＢコード２ ＱＸＩ（参考用）；「標準プロテアーゼナンバリング」とも呼ばれる）に基づいていた。
ヒトＫＬＫ７に結合した１４Ｈ１１ｃＦａｂの構造を図２０Ａ～２０Ｂに示す。ＫＬＫ７に結合した完全なＦａｂを、ＫＬＫ７のみを重ねて図２０Ａに示す。図２０Ｂは、ＫＬＫ７－Ｆａｂの界面を示す。
表１５は、Ｆａｂ－ＫＬＫ７界面に関与する１４Ｈ１１ｃ重鎖アミノ酸およびＫＬＫ７アミノ酸を示す。
表１６は、Ｆａｂ－ＫＬＫ７界面に関与する１４Ｈ１１ｃ軽鎖アミノ酸およびＫＬＫ７アミノ酸を示す。
表１７は、構造中の水素結合を形成する１４Ｈ１１ｃ重鎖アミノ酸およびＫＬＫ７アミノ酸を示し、表１８は、塩橋を形成する１４Ｈ１１ｃ重鎖アミノ酸およびＫＬＫ７アミノ酸を示す。
表１９は、構造中に水素結合を形成する１４Ｈ１１ｃ重鎖アミノ酸およびＫＬＫ７アミノ酸を示す。
結晶構造に基づいて、抗ＫＬＫ７抗体ｒｂ．１４Ｈ１１ｃは、ＫＬＫ７の不連続エピトープに結合し、ＫＬＫ７の領域Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８およびＱ２１１～Ｋ２２２を含む界面を有する（配列番号４）。ｒｂ．１４Ｈ１１ｃは、配列番号４に従ってナンバリングされたＫＬＫ７のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１およびＴ２１３と水素結合および／または塩架橋を形成する（キモトリプシンナンバリングによるＨ９１、Ｐ９２、Ｇ９３、Ｓ９５、Ｑ９７、Ｎ１０１、Ｎ１７８、Ｋ２３３およびＴ２３５）。
図２０Ｃに示されるように、ＫＬＫ７の１７０ｓ（キモトリプシンナンバリング）ループへの１４Ｈ１１ｃＦａｂの結合は、１７０ｓループにおける協奏的な立体配座変化をもたらし、Ｌ１７６（配列番号４のＬ１５５）およびＤ１７４（配列番号４のＤ１５３）の立体配座における最も有意な変化を伴う。天然状態のＫＬＫ７の疎水性コアにあるＬ１７６は、Ｆａｂに面している（また、Ｆａｂとの相互作用によって安定化されている）。Ｆａｂとの立体的衝突により、Ｄ１７４は、基質結合領域により近い領域に移動し、Ｙ１７２（配列番号４のＹ１５１）およびＷ２１５（配列番号４のＷ１９２）の移動をもたらし、１８０ｓループと衝突し、１８０ｓループおよび２２０ｓループの両方のアンフォールディングおよび基質結合部位の狭窄をもたらす。これらの立体構造変化は、ＫＬＫ７酵素の不活性化をもたらすと考えられる。
上述の発明を、理解を明確にする目的で、説明および実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、説明および実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に引用されたすべての特許文献および科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれている。

Claims (56)

  1. ヒトＫＬＫ７に結合する単離された抗体であって、
    （ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体。
  2. ヒトカリクレイン関連ペプチダーゼ７（ＫＬＫ７）に結合する単離された抗体であって、
    （ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み、
    ａ）アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）（式中、Ｎｖａｌはノルバリンである）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断を阻害し；かつ／または
    ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１０ｐＭ未満、もしくは９ｐＭ未満、もしくは８ｐＭ未満、もしくは７ｐＭ未満、もしくは６ｐＭ未満、もしくは５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し；かつ／または
    ｃ）ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８および／もしくはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合し；かつ／または
    ｄ）ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／もしくはＴ２１３の１つ以上を含むエピトープに結合する、
    抗体。
  3. 以下から選択される配列を含む、請求項１または２に記載の抗体：
    （ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    （ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
  4. （ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し；５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害するか、または
    （ｂ）（ａ）において、ヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性の阻害が、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断の阻害であり、Ｎｖａｌがノルバリンである、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
  5. ヒトＫＬＫ５に結合する単離された抗体であって、
    ａ）（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｂ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｃ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｄ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４７～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｅ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｆ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｇ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７６～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、を含む、抗体。
  6. 以下から選択される配列を含む、請求項５に記載の抗体：
    ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
    ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
  7. （ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合し、かつ／または、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害するか、または
    （ｂ）（ａ）において、ヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性の阻害が、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断の阻害である、請求項５または６に記載の抗体。
  8. （ａ）抗体が多重特異性抗体であるか、または
    （ｂ）抗体が二重特異性抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
  9. 請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  10. 請求項９に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
  11. 請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
  12. 抗体を産生する方法であって、
    （ａ）請求項１０または１１に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含むか、または
    （ｂ）請求項１０または１１に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養すること、および前記抗体を前記宿主細胞から回収することを含む、方法。
  13. 第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、および（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、二重特異性抗体。
  14. 前記第１の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、請求項１３に記載の二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号１５～３０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号３１～３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    （ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列。
  15. 請求項１３または１４に記載の二重特異性抗体であって、前記第２の結合ドメインが、
    ａ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｂ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、を含む、二重特異性抗体。
  16. 前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体：
    ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
    ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
  17. 前記第１の結合ドメインが、配列番号２９または配列番号３０のＶＨアミノ酸配列、および配列番号３２または配列番号３８のＶＬアミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインが、配列番号５２または配列番号５３のＶＨ配列、および配列番号５５または配列番号６２のＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  18. 前記第１の結合ドメインが第１の重鎖可変ドメインおよび第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが第１の重鎖定常領域に連結されており、前記第１の軽鎖可変ドメインが第１の軽鎖定常領域に連結されており、前記第２の結合ドメインが、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが第２の重鎖定常領域に連結されており、前記第２の軽鎖可変ドメインが第２の軽鎖定常領域に連結されており、
    ａ）前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖定常領域が配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
    ｂ）前記第２の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０、および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、請求項１３～１７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  19. 第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、（ｉ）前記第１の結合ドメインは、配列番号１０８または１９２の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１０または１９３の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１の軽鎖アミノ酸配列を含み、または（ｉｉ）前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２または１９４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４または１９５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含み、または（ｉｉｉ）前記第１の結合ドメインは、配列番号１０８の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１０の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１の軽鎖アミノ酸配列を含み、または（ｉｖ）前記第１の結合ドメインは、配列番号１１２の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１３の軽鎖アミノ酸配列を含み、前記第２の結合ドメインは、配列番号１１４の重鎖アミノ酸配列および配列番号１１５の軽鎖アミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  20. 第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、前記第２の結合ドメインは、
    ａ）（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３もしくは４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｂ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｃ）（ａ）配列番号３９もしくは１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｄ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４７～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｅ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｆ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｇ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号７６～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、を含む、二重特異性抗体。
  21. 前記第２の結合ドメインが、以下から選択される配列を含む、請求項２０に記載の二重特異性抗体：
    ａ）配列番号５０、５２、５３、１０５、および１０６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｂ）配列番号５１および５４～６７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｃ）（ａ）で定義されたＶＨ配列および（ｂ）で定義されたＶＬ配列；
    ｄ）配列番号７９および８１～８７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ配列；
    ｅ）配列番号８０および８８～９４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ配列；ならびに
    ｆ）（ｄ）で定義されたＶＨ配列および（ｅ）で定義されたＶＬ配列。
  22. （ａ）前記第１の結合ドメインが第１の重鎖可変ドメインおよび第１の軽鎖可変ドメインを含み、前記第１の重鎖可変ドメインが第１の重鎖定常領域に連結されており、前記第１の軽鎖可変ドメインが第１の軽鎖定常領域に連結されており、前記第２の結合ドメインが、第２の重鎖可変ドメインおよび第２の軽鎖可変ドメインを含み、前記第２の重鎖可変ドメインが第２の重鎖定常領域に連結されており、前記第２の軽鎖可変ドメインが第２の軽鎖定常領域に連結されているか、または
    （ｂ）（ａ）において、前記第１の重鎖定常領域がノブ変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がホール変異を含むか、または、前記第１の重鎖定常領域がホール変異を含み、前記第２の重鎖定常領域がノブ変異を含む、請求項２０または２１に記載の二重特異性抗体。
  23. 請求項２２に記載の二重特異性抗体であって、
    ａ）前記第１の重鎖定常領域がＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域がＳ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含むか；または
    ｂ）前記第１の重鎖定常領域が、Ｓ１８３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第１の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）を含み、前記第２の重鎖定常領域がＳ１８３Ｋ置換（ＥＵナンバリング）をさらに含み、前記第２の軽鎖定常領域がＶ１３３Ｅ置換（ＥＵナンバリング）を含む、二重特異性抗体。
  24. 前記第１の重鎖定常領域および／または前記第２の重鎖定常領域が、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つの置換をさらに含む、請求項２２または２３に記載の二重特異性抗体。
  25. 請求項２２～２４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体であって、
    ａ）前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖定常領域が配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか；または
    ｂ）前記第２の重鎖定常領域が、配列番号９６、１８４、９８、１８６、１１７、１８８、１１９、および１９０から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２の軽鎖定常領域が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記第１の重鎖定常領域が、配列番号９７、１８５、９９、１８７、１１８、１８９、１２０、および１９１から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに前記第１の軽鎖定常領域が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  26. （ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、抗体が、６０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ５に結合し、かつ／または、抗体が、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性を阻害するか、または
    （ｂ）（ａ）において、ヒトＫＬＫ５プロテアーゼ活性の阻害が、基質Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣのヒトＫＬＫ５媒介性切断の阻害である、請求項１３～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  27. （ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、抗体が、２０ｐＭ未満、または１５ｐＭ未満、または１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、または３ｐＭ未満、または２ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＫＤでヒトＫＬＫ７に結合し、かつ／または、抗体が、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性を阻害するか、または
    （ｂ）（ａ）において、ヒトＫＬＫ７プロテアーゼ活性の阻害が、アミノ酸配列ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（配列番号１２１）を含む基質のヒトＫＬＫ７媒介性切断の阻害であり、Ｎｖａｌがノルバリンである、請求項１３～２６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  28. 請求項１３～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードする、単離された核酸。
  29. 請求項１３～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインをコードする、単離された核酸。
  30. 請求項２８または２９に記載の単離された核酸を含む、単離された宿主細胞。
  31. 請求項１３～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を発現する、単離された宿主細胞。
  32. 請求項１３～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインを発現する、単離された宿主細胞。
  33. ヒトＫＬＫ５およびヒトＫＬＫ７に結合する二重特異性抗体を産生する方法であって、
    （ａ）請求項３１または請求項３２に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含むか、または
    （ｂ）請求項３１または請求項３２に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養すること、および前記抗体を前記宿主細胞から回収することを含む、方法。
  34. 医薬組成物であって、
    （ａ）医薬組成物が、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含むか、
    （ｂ）医薬組成物が、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体と、追加の治療剤とを含むか、
    （ｃ）（ｂ）における前記追加の治療剤がＫＬＫ５阻害剤であるか、または
    （ｄ）（ｃ）における前記ＫＬＫ５阻害剤が抗ＫＬＫ５抗体である、医薬組成物。
  35. 請求項３４に記載の医薬組成物であって、前記抗ＫＬＫ５抗体が、
    ａ）（ａ）配列番号３９および１０７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０および４１から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号４３および４４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに（ｆ）配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；または
    ｂ）（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６９および７０から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号７１および７２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｆ）配列番号７５～７８から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、を含む、医薬組成物。
  36. 前記抗ＫＬＫ５抗体が、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体である、請求項３４に記載の医薬組成物。
  37. 医薬組成物であって、
    （ａ）医薬組成物が、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含むか、
    （ｂ）医薬組成物が、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体と、追加の治療剤とを含むか、
    （ｃ）（ｂ）における前記追加の治療剤がＫＬＫ７阻害剤であるか、
    （ｄ）（ｃ）における前記ＫＬＫ７阻害剤が抗ＫＬＫ７抗体であるか、または
    （ｅ）（ｄ）における前記抗ＫＬＫ７抗体が、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体である、医薬組成物。
  38. ヒトＫＬＫ７に結合する単離された抗体であって、ヒトＫＬＫ７に結合するとヒトＫＬＫ７の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  39. （ａ）単離された抗体が二重特異性抗体であり、
    （ｂ）単離された抗体が二重特異性抗体であり、二重特異性抗体がヒトＫＬＫ７およびヒトＫＬＫ５に結合するか、または
    （ｃ）（ｂ）において、ヒトＫＬＫ５に結合するとヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、請求項３８に記載の単離された抗体。
  40. 抗体が、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５、およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合するか、または抗体が、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、およびＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合するか、または抗体が、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７およびＬｙｓ２３３から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合するか、または抗体が、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４およびＰｒｏ２２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープに結合する、請求項３９に記載の単離された抗体。
  41. （ａ）抗体が、ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｒ７１～Ｎ８２、Ｋ１５２～Ｓ１５８および／またはＱ２１１～Ｋ２２２内のエピトープに結合するか、または
    （ｂ）（ａ）において、抗体が、ＫＬＫ７（配列番号４）のアミノ酸Ｈ７２、Ｐ７３、Ｇ７４、Ｓ７６、Ｑ７８、Ｎ８２、Ｎ１５７、Ｋ２１１および／またはＴ２１３の１つ以上を含むエピトープに結合する、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  42. 第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、前記第１の結合ドメインはヒトＫＬＫ７に結合し、前記第２の結合ドメインはヒトＫＬＫ５に結合し、ヒトＫＬＫ７に結合するとヒトＫＬＫ７の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ７の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、および／または、ヒトＫＬＫ５に結合すると、ヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらし、前記立体構造変化により、アロステリックに、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位および／または活性部位の破壊がもたらされる、請求項８に記載の二重特異性抗体。
  43. 請求項３８～４２のいずれか一項に記載の抗体または二重特異性抗体を含む、医薬組成物。
  44. 医薬として使用するための、請求項１～７および３８～４１のいずれか一項に記載の抗体、請求項１３～２７および４２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項３４～３７および４３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  45. ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患の治療に使用するための、請求項１～７および３８～４１のいずれか一項に記載の抗体、請求項１３～２７および４２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項３４～３７および４３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  46. ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～７および３８～４１のいずれか一項に記載の抗体、請求項１３～２７および４２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項３４～３７および４３のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
  47. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、請求項４５に記載の抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物。
  48. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、請求項４６に記載の使用。
  49. 医薬として使用するための、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体との組み合わせ。
  50. ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患の治療に使用するための、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体との組み合わせ。
  51. ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎および酒さから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体との組み合わせの使用。
  52. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、請求項５０に記載の組み合わせ。
  53. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽症の喘息、中等症～重症の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息もしくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、または２型（Ｔ２）起因性喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息もしくは非Ｔｈ２起因性喘息、低ペリオスチン喘息、および低好酸球性喘息から選択される、請求項５１に記載の使用。
  54. 上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、および／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるための医薬の製造における、請求項１～７および３８～４１のいずれか一項に記載の抗体、請求項１３～２７および４２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項３４～３７および４３のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
  55. 上皮炎症を減少させ、上皮透過性を減少させ、経皮水分喪失を減少させ、皮膚浸潤を減少させ、錯角化を減少させ、上皮バリアを回復させ、および／または皮膚炎症性サイトカインを減少させるための医薬の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体と、請求項５～７のいずれか一項に記載の抗体との組み合わせの使用。
  56. ネザートン症候群を有する個体における皮膚発疹および／またはスケーリングを改善するための医薬組成物であって、（ａ）請求項１３～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または（ｂ）請求項５～７のいずれか一項に記載の抗ＫＬＫ５抗体および請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＫＬＫ７抗体を含み、前記二重特異性抗体が第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む、医薬組成物。
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