JP7475018B2 - 皮膚外用組成物 - Google Patents
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Description
前記ヒアルロン酸又はその塩のうち、分子量が50,000以上400,000以下の中分子量ヒアルロン酸又はその塩が占める割合は、40%以上であることを特徴としている。
前記ヒアルロン酸又はその塩の数平均分子量は、100,000以上300,000以下であることを特徴としている。
前記ヒアルロン酸又はその塩の数平均分子量は、100,000以上300,000以下であり、
前記ヒアルロン酸又はその塩のうち、分子量が50,000以上400,000以下の中分子量ヒアルロン酸又はその塩が占める割合は、40%以上であることを特徴としている。
又は、本実施形態の表皮改善剤は、ヒアルロン酸又はその塩を含み、該ヒアルロン酸又はその塩の数平均分子量は、100,000以上300,000以下である。
本実施形態の表皮改善剤は、上記のヒアルロン酸又はその塩を含むことから、表皮細胞増殖機能の指標マーカーを高めて、表皮細胞増殖機能を十分に高めることができる。よって、低下した表皮の機能を十分に改善できる。
上記の中分子量ヒアルロン酸の製造方法は、特に限定されず、中分子量ヒアルロン酸として市販品を用いることもできる。市販品としては、例えば、キッコーマンバイオケミファ社製、製品名「ヒアルロン酸Na-FCHSU」が挙げられる。
数平均分子量が100,000以上300,000以下であることにより、表皮細胞増殖機能を十分に高め、低下した表皮の機能を十分に改善できる。
GPC測定によって得られた分子量分布曲線を基にして、積分分布を示すスライスデータを求める。スライスデータを基にして、5万~40万の指定分子量範囲で分画し、上記の割合(含有率)を算出する。
これに対して、コラーゲン量の減少を防止する方法として、女性ホルモンを女性に投与する方法が知られているが、それ以外の有効な方法は、特に見出されていない。一方で、女性ホルモンを投与すると、副作用が発生するという危惧があり、女性ホルモンを配合した製剤を製品として販売することは、安全性の点で制限される場合が多く、現実的でない。
上記の皮膚外用組成物は、中分子量ヒアルロン酸よりも分子量が大きいヒアルロン酸や、中分子量ヒアルロン酸よりも分子量が小さい加水分解ヒアルロン酸等をさらに含んでもよい。上記の皮膚外用組成物においては、本実施形態のように、ヒアルロン酸及びその塩の全体に対して、分子量が5万~40万の範囲のヒアルロン酸(中分子量ヒアルロン酸)が占める割合(含有率)が40%以上であることが好ましい。これにより、表皮を十分に活性化でき、低下した表皮機能を十分に改善することができる。
実施例1の表皮改善剤として、製品名「ヒアルロン酸Na-FCHSU」(キッコーマンバイオケミファ社製)を用意した。参考例2の表皮改善剤として、製品名「ヒアルロンサンHA-LQH」(キューピー社製)を希塩酸に溶解した後、室温で2時間処理し、透析処理後、凍結乾燥することによって調製したものを用意した。
比較例1の表皮改善剤として、製品名「ヒアルロン酸Na-FCH60」(キッコーマンバイオケミファ社製)を用意した。比較例2の表皮改善剤として、製品名「ヒアルロンサンHA-LQ」(キューピー社製)を用意した。比較例3の表皮改善剤として、製品名「ヒアロオリゴ」(キューピー社製)を用意した。比較例4の表皮改善剤として、製品名「マイクロヒアルロン酸」(キッコーマンバイオケミファ社製)を用意した。
(1)前処理方法
試料を溶離液にて溶解後、0.45μmメンブランフィルターでろ過したものを測定溶液として調製した。
(2)測定条件
測定機器:島津製作所社製 製品名「GPC-HPLC コントローラー SCL-10AVP」
カラム:TSKgel GMPWXL×2+G2500PWXL×1
(7.8mm I.D.×300mm×3本)
溶離液:200mM硝酸ナトリウム水溶液
流量:1.0 mL/min.
検出器:RI検出器(Viscotek LR125 Laser Refractometer)
カラム温度:40℃
注入量:200μL
分子量標準:標準プルラン・グルコース(American Polymer Standards Corp.社製)
(3)分子量及び数平均分子量の測定
分子量:上記の標準プルラン・グルコースの換算値
数平均分子量:付属ソフトウェア データ解析ソフト「マルチステーションGPC-8020」(東ソー社製)
なお、GPC測定において、5,000以上400万以下の分子量範囲における、数平均分子量を求めた。また、5,000以上400万以下の分子量範囲のヒアルロン酸の量を基準にして、分子量が5万~40万の範囲の中分子量ヒアルロン酸の含有率を求めた。
三次元ヒト皮膚モデル(クラボウ社製、EFT-400、表皮モデル)の表面に、下記の各液(50μL)をそれぞれ添加し、37℃、5容量%CO2存在下で、皮膚モデルを培養した。培地として、皮膚モデル用培地「EFT-400MM」(クラボウ社製)を用いた。
・PBS(-):コントロール
・実施例1,参考例2、及び比較例1~4の各ヒアルロン酸の1.0質量%水溶液
・エストラジオール製剤(市販品 製品名「エストロジェル」) 陽性対照
β-エストラジオール(シグマE2758)の0.06重量%水溶液
(エストラジオール分散のためのエタノールを1%含む)
4日間培養後、皮膚モデルの表面を生理食塩水で10回洗浄した。その後、4%パラホルムアルデヒドを用いて固定し、定法に従い薄切切片を作製した。以下の方法で免疫染色を行い、Ki-67陽性細胞の数を確認した。
薄切切片を脱パラフィン処理した後に、Blockingone(ナカライテスク社製 #03953095)に室温で15分間浸漬し、非特異タンパクのブロッキングを行った。生理食塩水で洗浄した後、一次抗体であるAnti-Human Ki-67 Mouse monoclonal antibody clone:MIB-1(DAKO社製 #M7240)を500倍希釈したものに、4℃で一晩浸漬した後、生理食塩水で洗浄した。次に、二次抗体であるペルオキシダーゼ標識抗マウスIgGポリクロナール抗体(ニチレイ社製#424134)と、室温で30分間反応させた。さらに、3-Amino-9-ethyl-arbazole(AEC)と室温で20分間接触させて、発色させた後、ヘマトキシリン(Mayer社製)を用いて対比染色した。この皮膚切片像の拡大画像から、Ki-67陽性細胞の数を測定した。結果を表2に示す。
続いて、角質層に対してテープストリッピングをした後に、角質層のタンパク質の量を測定すること、また、水分蒸散量(TEWL)を測定することによって、角質強度を評価した。
角質強度は、角質層内部のintegrity(整合性)を示す。角質強度は、角質細胞同士の接着状態に依存する。角質細胞同士は、コルネオデスモソームによって接着している。角質層では、角質細胞が外側へ移動するに従ってコルネオデスモソームが分解され、角質細胞が最外層で剥離する。角質強度が弱い状態とは、角質層内部においてコルネオデスモソームによって接着している角質細胞同士の接着が弱いために、角質細胞が剥がれやすい状態である。そこで、テープストリッピングを行うと、最外層の角質細胞だけでなく、内側の角質細胞も重なった状態で剥がれ(重層剥離が起こり)、テープストリッピング後の水分蒸散量が多くなる。従って、角質層に対してテープストリッピングをした後に、テープ側に付着した角質層のタンパク質の量(重層剥離量)を測定することによって、角質強度を評価することができる。また、テープストリッピング前後の水分蒸散量(TEWL)の差によって、角質強度を評価することができる。
前腕内側部の角質層に、角質層採取用テープであるD-Squame(CuDerm社製)を貼り付け、同社の加圧装置を10秒間押し当てた後に、テープを剥がし取った。角質層タンパク質量測定装置 SquameScan850(CuDerm社製)に、剥がし取ったテープをセットして、テープにおける角質層のタンパク質の量を測定した。この装置では、赤外線(850nm)吸収率からタンパク質の量を数値化できる。角質強度が弱い角質層は、角質層内部の接着が弱いため、テープストリッピングによって重層剥離する。このため、角質強度が弱い程、剥がれ取られるタンパク質の量は、多くなる。
試験を開始する前の角質層のタンパク質の量を100とした。各モニターの4週間後における角質層のタンパク質の量を測定し、角質層のタンパク質の量の変化量を、下記の式によって算出した。結果を比較したグラフを図1に示す。
角質強度(角質層タンパク質の変化量)=
4週間使用後の吸収率(A850)/試験前の吸収率(A850)
図1から把握されるように、ヒアルロン酸含有ローション使用群では、テープストリッピング後の角質層タンパク質の量が、プラセボローション使用群よりも、有意に少なくなった。
前腕を洗浄した後、23℃、湿度50%環境下にて20分間安静にした。その後、前腕内側部の水分蒸散量(TEWL)を、携帯型閉鎖チャンバー方式水分蒸散量測定装置 VAPOSCAN AS-VT100RS(アサヒバイオメッド社製)を用いて測定した。
測定後、角質層採取用テープであるD-Squame(CuDerm社製)を前腕に貼り付け、同社の加圧装置を10秒間押し当てた後に、テープを剥がし取った。同様にして合計10回、角質層を取り、10回目の角質層を取った後の水分蒸散量(TEWL)を測定した。角質強度は、下記の式から算出した値(ΔTEWL)を基にして評価した。なお、角質強度は、角質層を取った後の水分蒸散量(TEWL)と、角質層を取る前の水分蒸散量(TEWL)との差が大きいほど弱く、差が小さいほど強い。結果を図2に示す。
ΔTEWL=4週間使用後の角質層を剥がす前のTEWL-
4週間使用後の10回角質層を剥がした後のTEWL
図2から把握されるように、テープストリッピング前後の水分蒸散量の差(ΔTEWL)も、ヒアルロン酸含有ローション使用群の方で、プラセボローション使用群よりも有意に少なくなった。
更年期障害の重症度を示す指標としては、クッパーマン指数、簡略更年期指数(SMI)、日本産婦人科学会による更年期症状評価表等がある。本評価では、日本人を対象として作成され、且つスコア化が可能なSMI更年期指数を用いた。SMIとは、簡略更年期指数[小山ら(1992)]の質問票に従って、更年期の重症度をスコア化したものである。50点以下においては、食事や運動などの生活習慣を整える程度での改善が見込まれるが、51点以上においては、医療機関を受診する必要がある。受診を必要とするレベルか否かの区切りとなるSMIスコア51点を境界として、モニターを2つのセグメントに分けた。
配合成分 配合量(質量%)
油相
ミネラルオイル 2.8
ポリオキシエチレン(20E.O)ステアリンソルビタン 0.7
モノステアリン酸ソルビタン 0.2
アラキルアルコール 1.5
アラキルグルコシド 0.5
ベヘニルアルコール 0.5
シア脂 1.5
水相
実施例1のヒアルロン酸(固形分) 0.5
グリセリン 5.0
1,3-ブチレングリコール 4.0
カルボキシメチルキトサンミリスタミド 0.1
パルミチン酸アスコルビルリン酸3Na 0.1
精製水 残量(合計:100にする)
また、ヒアルロン酸を配合しない点以外は、同様にして、比較用の美容液を調製した。
上記のごとく調製した中分子量ヒアルロン酸を含む美容液の使用群に関する結果を下記に示す。
使用前に比べて、
肌の状態が改善 (改善+やや改善:70%)
肌のカサツキが改善 (改善+やや改善:80%)
肌のハリ弾力が改善 (改善+やや改善:50%)
肌のかゆみが改善 (改善+やや改善:50%)
使用前に比べて、
肌の状態が改善 (改善+やや改善:50%)
肌のカサツキが改善 (改善+やや改善:40%)
肌のハリ弾力が改善 (改善+やや改善:20%)
肌のかゆみが改善 (改善+やや改善:30%)
上記のごとく調製した中分子量ヒアルロン酸を含む美容液の使用群に関する結果を下記に示す。
使用前に比べて、
肌の状態が改善 (改善+やや改善:80%)
肌のカサツキが改善 (改善+やや改善:90%)
肌のハリ弾力が改善 (改善+やや改善:70%)
肌のかゆみが改善 (改善+やや改善:60%)
使用前に比べて、
肌の状態が改善 (改善+やや改善:40%)
肌のカサツキが改善 (改善+やや改善:40%)
肌のハリ弾力が改善 (改善+やや改善:20%)
肌のかゆみが改善 (改善+やや改善:20%)
簡略更年期指数(SMI)が51以上を示すモニターに対して、更に高い有用性を示すことが示唆された。
表皮の角化を改善することにより、皮膚のタルミ、カサツキ、ハリの低下、皮膚弾性の低下を抑制することが期待できる。
Claims (2)
- 更年期における皮膚の老化を抑制するために簡略更年期指数(SMI)が51以上の女性に適用される皮膚外用組成物であって、
ヒアルロン酸又はその塩を含み、
前記ヒアルロン酸又はその塩の数平均分子量は、140,000であり、前記ヒアルロン酸又はその塩のうち、分子量が50,000以上400,000以下の中分子量ヒアルロン酸又はその塩が占める割合は、55%である、皮膚外用組成物。 - アスコルビン酸の誘導体、トコフェロールの誘導体、キチンの誘導体、及び、キトサンの誘導体からなる群から選択された少なくとも1種をさらに含み、
前記アスコルビン酸の誘導体は、パルミチン酸アスコルビルリン酸3Na、アスコルビン酸セチルエーテル、グリセリルアスコルビン酸、又は、ミリスチル3-グリセリルアスコルビン酸であり、
前記トコフェロールの誘導体は、ニコチン酸トコフェロール、リン酸トコフェロールナトリウム塩、コハク酸トコフェロール、又は、トコフェリルリン酸ナトリウム塩であり、
前記キチンの誘導体は、カルボキシメチルキチン、硫酸化キチン、又は、ミリストイル化キチン塩であり、
前記キトサンの誘導体は、カルボキシメチルキトサン、キトサン乳酸塩、部分アシル化カルボキシメチルキトサン、カルボキシメチルキトサンサクシナミド、カルボキシメチルキトサンミリスタミド、ヒドロキシプロピルキトサン、又は、カルボキシメチルキトサンラウラミドである、請求項1に記載の皮膚外用組成物。
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A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
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C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
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