JP7100390B2

JP7100390B2 - 活性物質－ヘキサペプチド複合体、及びこれを含む化粧料組成物

Info

Publication number: JP7100390B2
Application number: JP2020537121A
Authority: JP
Inventors: ソンジンガン; ムンヨンバク; ダウンギム
Original assignee: エニジェンカンパニー．，リミテッド．
Priority date: 2017-09-18
Filing date: 2018-09-17
Publication date: 2022-07-13
Anticipated expiration: 2038-09-17
Also published as: KR102293250B1; KR20210014723A; CN111278420B; KR20190032218A; JP2020534356A; CN111278420A; KR102359224B1; WO2019054822A1

Description

本発明は、活性物質－ヘキサペプチド複合体、及びこれを含む化粧料組成物に関するものである。

皮膚の老化現像は、内因性老化と外因性老化とに分けられる。内因性老化とは、時間が経つにつれて、膠原繊維、弾性繊維などの細胞外基質タンパク質の合成量が減ることにより、弾力性が減少され、角質層の構造が変化して、皮膚細胞内の水分量が減少する自然老化を意味する。外因性老化とは、紫外線、大気汚染、タバコの煙、ストレスなどのような外部からの刺激が原因とされる老化であり、光老化が代表的な外因性老化に該当する。光老化とは、皮膚が過剰な紫外線に露出されると、活性酸素種が発生し、これにより、ＡＰ－１（ａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｔｉｎ－１）及びＮＦ－ｋＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋＢ）の活性化による炎症反応が誘導され、皮膚を構成する脂質、タンパク質、核酸、酵素などが損傷されて、老化が起こることを意味する。

また、紫外線暴露による、皮膚内での活性酸素種の生成は、抗酸化防御機構を損傷させ、皮膚のタンパク質と他のポリマーにおいて、酸化ストレスと光損傷を引き起こす。これらの紫外線暴露による皮膚の老化は、皮膚に様々な形で影響を与え、深いしわ、小じわ、皮膚粗鬆症、乾燥肌のような現象を引き起し、皮膚の老化を加速させる（ＨｏｎｇＪａｅＫｅｅ、ＫｏｒｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｅｓｔｈｅｔｉｃａｎｄＣｏｓｍｅｔｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ７Ｎｏ．２：５１－６２、２００９）。

最近、オゾン層の破壊に伴う紫外線の照射量の増加、生活空間の乾燥化、個人のアレルギー体質、ストレス、有害化学素材の増加による皮膚損傷がより多く発生しており、このような皮膚損傷の予防と改善に対する需要が増加している。皮膚損傷の予防と改善に対する需要の増加により、機能性化粧品の研究において、既存のような美白やシワの予防のみに留まらず、皮膚損傷の予防と改善、並びにそのための抗酸化活性に係る新素材の開発は、新たに脚光を浴びる分野であり、その重要性がさらに増大している。

特に、環境汚染により、敏感肌を持つ消費者が増加しており、化学素材による刺激を最小限にするために、いくつかの機能性を持つ天然物を利用した化粧品に対する需要が、継続的に増加している。また、最近、皮膚炎やアトピー性疾患を治療するためのステロイド系素材が活発に研究されている。

このような理由から、皮膚内での副作用を抑えながら効能が現れることができる、天然物由来の機能性素材及びステロイド系素材の開発への関心が高まっており、これを利用した様々な機能性化粧品の開発、及び有効性成分の開発に関して、多くの研究結果が報告されている。

これに伴い、本発明者らは、活性物質を利用した化粧料組成物を開発するための研究を行った結果、自然界に存在する有機酸と、機能性ペプチドであるヘキサペプチドとを結合して、有機酸－ヘキサペプチド複合体を開発した。また、本発明者らは、皮膚炎やアトピーの患者において効能があるステロイドと、機能性ペプチドであるヘキサペプチドとを結合させ、改変したヘキサペプチド複合体を開発した。上記有機酸－ヘキサペプチド複合体、且つその改変したヘキサペプチド複合体が、抗酸化と皮膚再生の効果を見せることを確認することで、本発明を完成した。

本発明に係る第一形態は、ＥＥＭＱＲＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するヘキサペプチドと活性物質とが結合された、活性物質－ヘキサペプチド複合体を提供する。

また、他の形態は、上記活性物質－ヘキサペプチド複合体を有効成分として含む化粧料組成物が提供する。

さらに、他の形態は、上記活性物質－ヘキサペプチド複合体を有効成分として含む皮膚傷の治療用薬学組成物を提供する。

さらに、他の形態は、皮膚状態を改善するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

さらに、他の形態は、皮膚状態を改善する化粧料組成物を製造するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

さらに、他の形態は、皮膚傷を治療するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

さらに、他の形態は、皮膚傷を治療する薬剤を製造するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

さらに、他の形態は、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体により、個体の皮膚を処理するステップを含む、皮膚状態の改善方法を提供する。

さらに、他の形態は、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体により、個体の皮膚を処理するステップを含む、皮膚傷の治療方法を提供する。

本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体は、有機酸またはステロイドと、ヘキサペプチドとを結合することにより、従来の有機酸、ステロイド、又はヘキサペプチドよりも、優れた抗酸化と皮膚再生の効果を見せる。したがって、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体、並びにこれを含んでなる化粧料組成物は、抗酸化と皮膚老化防止に有効に使用することができる。

図１は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ギ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、グルクロン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、乳酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、メバル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図５は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、プロピオン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図６は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ピルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図７は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、キナ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図８は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、シキミ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図９は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、アビエチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１０は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、アシアト酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１１は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、コール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１２は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ウルソデオキシコール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１３は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ウルソール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１４は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、アゼライン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１５は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ジピコリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１６は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、フマル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１７は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、イタコン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１８は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、リンゴ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図１９は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、しゅう酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２０は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、コハク酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２１は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、酒石酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２２は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、α‐ケトグルタル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２３は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、クエン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２４は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、リポ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２５は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２６は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ソルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２７は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ビオチン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２８は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、トレチノイン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図２９は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、カフェ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３０は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、シナミック酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３１は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、フェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３２は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３３は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ニコチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３４は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、シリング酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図３５は、ヘキサペプチドのＣ末端に有機酸を結合する合成プロセスを示した図である。図３６は、ヘキサペプチドのＮ末端に有機酸を結合する合成プロセスを示した図である。図３７は、ヘキサペプチドの側鎖に有機酸を結合する合成プロセスを示した図である。図３８ａは、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、カフェ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、フェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、酒石酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リンゴ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アゼライン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アビエチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ピルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びコハク酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図３８ｂは、アシアト酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ビオチン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、コール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シナミック酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、クエン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジピコリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ギ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、フマル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、グルクロン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、イタコン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リポ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、乳酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メバル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ニコチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、しゅう酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プロピオン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、キナ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シキミ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ソルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シリング酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、トレチノイン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソデオキシコール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びα‐ケトグルタル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図３８ｃは、本発明に係るヘキサペプチドであるＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、Ａｃｅｔｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２（Ａｃｅｔｙｌｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ－８）、ロスマリン酸、フェルラ酸、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びフェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図３９は、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図４０は、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の細胞毒性を知るために行った、ＷＳＴ－１分析の結果を示したグラフである。図４１は、グルタル酸無水物をリンカーとする、ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の合成工程を示した図である。図４２は、マロン酸をリンカーとする、ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の合成工程を示した図である。図４３は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４４は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、デキサメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４５は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、ヒドロコルチゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４６は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、プレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４７は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、メチルプレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４８は、高性能液体クロマトグラフィーによって精製された、エストリオール－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体に関する分析結果を示した図である。図４９は、ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、デキサメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びエストリオール－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図５０は、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びメチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図５１は、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体における皮膚再生の効果について、傷の回復の実験で確認したグラフである。図５２は、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びメチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の細胞毒性を知るために行った、ＷＳＴ－１分析の結果を示したグラフである。図５３は、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の細胞毒性を知るために行った、ＷＳＴ－１分析の結果を示したグラフである。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明に係る第一形態は、ＥＥＭＱＲＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するヘキサペプチドと活性物質とが結合された、活性物質－ヘキサペプチド複合体が提供する。

上記活性物質は、有機酸であることができる。具体的には、上記有機酸は、１価酸、２価酸、３価酸、脂肪酸、ケイ皮酸、及び芳香族酸からなる群より選択される何れか一つであることができる。上記有機酸は、少なくとも一つのカルボキシ基を有することができる。

上記１価酸は、ギ酸（Ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ）、グルクロン酸（Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、乳酸（Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ）、メバル酸（Ｍｅｖａｌｏｎｉｃａｃｉｄ）、プロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃａｃｉｄ）、ピルビン酸（Ｐｙｒｕｖｉｃａｃｉｄ）、キナ酸（Ｑｕｉｎｉｃａｃｉｄ）、シキミ酸（Ｓｈｉｋｉｍｉｃａｃｉｄ）、アビエチン酸（Ａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄ）、アシアト酸（Ａｓｉａｔｉｃａｃｉｄ）、コール酸（Ｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、ウルソデオキシコール酸（Ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、及びウルソール酸（Ｕｒｓｏｌｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「ギ酸」とは、蟻酸またはメタン酸とも呼ばれ、アリのほか、イラクサなどの植物に含まれている有機酸を意味する。上記ギ酸の構造は、下記化学式１の通りである。

（化学式１）

本発明で用いられる用語の「グルクロン酸」とは、わら、木材などの構造多糖類の構成成分として存在しており、動物界には高等動物のムコ多糖類の主要構成要素として、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸などに含有されている有機酸を意味する。上記グルクロン酸の構造は、下記化学式２の通りである。

（化学式２）

本発明で用いられる用語の「乳酸」とは、Ｌａｃｔｉｃ酸とも呼ばれ、乳酸菌によって糖から生成される有機酸を意味する。上記乳酸は、自然界に広く分布しており、ほとんどの植物にラス状態として存在するほか、植物の果実の発酵時に生成される。上記乳酸の構造は、下記化学式３の通りである。

（化学式３）

本発明で用いられる用語の「メバル酸」とは、火落酸（ｈｉｏｃｈｉｃａｃｉｄ）とも呼ばれ、清酒やビールに含まれている有機酸を意味する。上記メバロン酸は、清酒に繁殖して腐敗させる真性ヒオチ菌であるラクトバチルスヘテロヒオチ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｔｅｒｏｈｉｏｃｈｉｉ）の生育に必要である。上記メバル酸の構造は、下記化学式４の通りである。

（化学式４）

本発明で用いられる用語の「プロピオン酸」とは、アルコール又はプロピオン酸における発酵の産物として、乳糜（ｃｈｙｌｅ）と汗の中に含まれている有機酸を意味する。上記プロピオン酸の構造は、下記化学式５の通りである。

（化学式５）

本発明で用いられる用語の「ピルビン酸」とは、細菌や酵母の発酵において、エムデン‐マイヤーホフ経路（解糖経路）（Ｅｍｂｄｅｎ－ＭｅｙｅｒｈｏｆＰａｔｈｗａｙ）、又はエントナー・ドゥドロフ経路（Ｅｎｔｎｅｒ－ＤｏｕｄｏｒｏｆｆＰａｔｈｗａｙ）によって生成される有機酸を意味する。上記ピルビン酸の構造は、下記化学式６の通りである。

（化学式６）

本発明で用いられる用語の「キナ酸」とは、キナの樹皮、コーヒーの種子、りんご、桃などの果実などに含まれている、高等植物特有のリング構造をもつ有機酸を意味する。上記キナ酸の構造は、下記化学式７の通りである。

（化学式７）

本発明で用いられる用語の「シキミ酸」とは、キナ酸の不飽和誘導体であり、シキミの実に含まれているテトラヒドロトリヒドロキシ安息香酸のような、有機酸の一種を意味する。上記シキミ酸の構造は、下記化学式８の通りである。

（化学式８）

本発明で用いられる用語の「アビエチン酸」とは、松脂の主成分であるジテルペンのような、有機酸の一種を意味する。上記アビエチン酸の構造は、下記化学式９の通りである。

（化学式９）

本発明で用いられる用語の「アシアト酸」とは、センテラアジアチカに含有されているダンマロール酸のような、有機酸の一種を意味する。上記のアシアト酸の構造は、下記化学式１０の通りである。

（化学式１０）

本発明で用いられる用語の「コール酸」とは、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類など、胆汁を分泌する動物の胆汁中に存在する有機酸を意味する。上記コール酸の構造は、下記化学式１１の通りである。

（化学式１１）

本発明で用いられる用語の「ウルソデオキシコール酸」とは、熊胆の主成分として知られている胆汁酸を意味する。上記ウルソデオキシコール酸の構造は、下記化学式１２の通りである。

（化学式１２）

本発明で用いられる用語の「ウルソール酸」とは、りんご、サクランボなどの果物や葉において、ワックス状態の皮膜物質であり、α－アミリン系トリテルペンのような、有機酸の一種を意味する。上記ウルソール酸の構造は、下記化学式１３の通りである。

（化学式１３）

上記２価酸は、アゼライン酸（Ａｚｅｌａｉｃａｃｉｄ）、ジピコリン酸（Ｄｉｐｉｃｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、イタコン酸（Ｉｔａｃｏｎｉｃａｃｉｄ）、リンゴ酸（Ｍａｌｉｃａｃｉｄ）、しゅう酸（Ｏｘａｌｉｃａｃｉｄ）、コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）、酒石酸（Ｔａｒｔａｒｉｃａｃｉｄ）、及びα‐ケトグルタル酸（α－Ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「アゼライン酸」とは、小麦、ライ麦、及び大麦などの穀物に含まれている、飽和ジカルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。アゼライン酸は、抗菌剤として、毛包と毛穴の中の細菌を減少させ、抗酸化及び抗炎症の効果があると知られている。また、アゼライン酸は、皮膚細胞または毛包がニキビに異常増殖したり変形したりする場合、それを正常に回復させ、嚢胞性ニキビ、ニキビに起因する色素沈着と赤みを緩和してくれる。アゼライン酸の構造は、下記化学式１４の通りである。

（化学式１４）

本発明で用いられる用語の「ジピコリン酸」とは、枯草菌を含む多くのバシラス属細菌の胞子内に含まれているピリジン－ジカルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。また、上記ジピコリン酸は、食品中でアスコルビン酸の抗酸化剤として作用する。上記ジピコリン酸の構造は、下記化学式１５の通りである。

（化学式１５）

本発明で用いられる用語の「フマル酸」とは、アイスランド苔や菌類などに含まれている不飽和ジカルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。上記フマル酸の構造は、下記化学式１６の通りである。

（化学式１６）

本発明で用いられる用語の「イタコン酸」とは、メチレンコハク酸とも呼ばれ、梅干カビが糖類を用いて生成するジカルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。また、梅干カビ以外に、紫紋羽病菌もイタコン酸を少量培地中に蓄積する。上記イタコン酸の構造は、下記化学式１７の通りである。

（化学式１７）

本発明で用いられる用語の「リンゴ酸」とは、林檎酸またはオキシコハク酸とも呼ばれ、リンゴやブドウなどの果実に多く含まれているヒドロキシコハク酸に該当する有機酸を意味する。上記リンゴ酸の構造は、下記化学式１８の通りである。

（化学式１８）

本発明で用いられる用語の「しゅう酸」とは、カリウム塩またはカルシウム塩の形で植物界に広く分布されている有機酸を意味する。上記しゅう酸は、２つのカルボキシ基が結合した最も簡単なジカルボン酸である。上記しゅう酸の構造は、下記化学式１９の通りである。

（化学式１９）

本発明で用いられる用語の「コハク酸」とは、スクシン酸とも呼ばれ、カボチャ（ａｍｂｅｒ）、テレビン油、二枚具、地衣類、菌類などの有機酸を意味する。上記コハク酸は、２価カルボン酸である。上記コハク酸の構造は、下記化学式２０の通りである。

（化学式２０）

本発明で用いられる用語の「酒石酸」と、タルタル酸とも呼ばれ、ブドウやワインに存在するジオキシコハク酸のような、有機酸の一種を意味する。酒石酸は、錫に炭酸カルシウムを入れて生成された沈殿物に硫酸を処理して得ることができる。上記酒石酸の構造は、下記化学式２１の通りである。

（化学式２１）

本発明で用いられる用語の「α‐ケトグルタル酸」とは、シュードモナス属の微生物の発酵によって、グルコースからケトグルコン酸を経て合成される有機酸を意味する。上記α‐ケトグルタル酸の構造は、下記化学式２２の通りである。

（化学式２２）

上記３価酸は、クエン酸（Ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ）であり得る。

本発明で用いられる用語の「クエン酸」とは、枸櫞酸とも呼ばれ、主にレモンやライムのような柑橘類の果物に存在する有機酸を意味する。上記クエン酸は、ヒドロキシ基を有する多塩基カルボン酸の一つであり、多くの植物の種や果汁の中にガラス状態の酸として含有されている。上記クエン酸の構造は、下記化学式２３の通りである。

（化学式２３）

上記脂肪酸は、リポ酸（Ｌｉｐｏｉｃａｃｉｄ）、ゲラン酸（Ｇｅｒａｎｉｃａｃｉｄ）、ソルビン酸（Ｓｏｒｂｉｃａｃｉｄ）、ビオチン（Ｂｉｏｔｉｎ）、及びトレチノイン酸（Ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）からなる群から選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「リポ酸」とは、チオクト酸とも呼ばれ、脂肪酸とジスルフィド結合を有する有機酸を意味する。上記リポ酸の構造は、下記化学式２４の通りである。

（化学式２４）

本発明で用いられる用語の「ゲラン酸」とは、バラ、ハーブなどに含まれる香り成分である有機酸を意味する。上記ゲラン酸の構造は、下記化学式２５の通りである。

（化学式２５）

本発明で用いられる用語の「ソルビン酸」とは、２，４－ヘキサジエン酸とも呼ばれ、ナナカマド（ＳｏｒｂｕｓｃｏｍｍｉｘｔａＨｅｄｌｕｎｄ）の未熟果実に含有されている有機酸を意味する。上記ソルビン酸は、微生物の生育を抑制し、加工食品の保存料として使用される。上記ソルビン酸の構造は、下記化学式２６の通りである。

（化学式２６）

本発明で用いられる用語の「ビオチン」とは、ビタミンＢ群の一つであり、硫黄を含有し、バレル酸基を持つテトラヒドロチオフェン環とウレイド環とが接合されている有機酸を意味する。上記ビオチンの構造は、下記化学式２７の通りである。

（化学式２７）

本発明で用いられる用語の「トレチノイン酸」と、ビタミンＡの誘導体であるトレチノイン酸の全トランス（ａｌｌ－ｔｒａｎｓ）型異性体を意味する。上記トレチノイン酸の構造は、下記化学式２８の通りである。

（化学式２８）

上記ケイ皮酸は、カフェ酸（Ｃａｆｆｅｉｃａｃｉｄ）、シナミック酸（Ｃｉｎｎａｍｉｃａｃｉｄ）、フェルラ酸（Ｆｅｒｕｌｉｃａｃｉｄ）、及びロスマリン酸（Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「カフェ酸」とは、コーヒー豆、ジャガイモ、穀物、野菜などの様々な農作物に存在するフェノール酸化合物の一種であり、３－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－２－プロペン酸（３－（３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－２－ｐｒｏｐｅｎｏｉｃａｃｉｄ）で表示される有機酸を意味する。上記カフェ酸の構造は、下記化学式２９の通りである。

（化学式２９）

本発明で用いられる用語の「シナミック酸」とは、シナモン油や、エゴノキのようなバルサミモミに含まれている不飽和カルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。上記シナミック酸の構造は、下記化学式３０の通りである。

（化学式３０）

本発明で用いられる用語の「フェルラ酸」とは、植物の細胞壁を形成するリグニンの前駆体物質を意味する。上記フェルラ酸の構造は、下記化学式３１の通りである。

（化学式３１）

本発明で用いられる用語の「ロスマリン酸」とは、主にペパーミント、スペアミント、ローズマリーのようなハーブ植物に含有されている有機酸を意味する。上記ロスマリン酸の構造は、下記化学式３２の通りである。

（化学式３２）

上記芳香族酸は、ニコチン酸（Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｉｄ）、及びシリング酸（Ｓｙｒｉｎｇｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「ニコチン酸」とは、ビタミンＢ３又はナイアシン（ｎｉａｃｉｎ）とも呼ばれ、動物の肝臓、酵母、豆類、穀物など、生体内に広く存在しているピリジン－３カルボン酸のような、有機酸の一種を意味する。上記ニコチン酸の構造は、下記化学式３３の通りである。

（化学式３３）

本発明で用いられる用語の「シリング酸」とは、アカシア（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄａｃａｃｉａＬ）、カスカラサグラダ（Ｃａｓｃａｒａｓａｇｒａｄａ）などの植物に含まれている、トリヒドロキシ安息香酸のような、有機酸の一種を意味する。上記シリング酸の構造は、下記化学式３４の通りである。

（化学式３４）

本発明の活性物質－ヘキサペプチド複合体において、活性物質が有機酸である場合、有機酸と結合したヘキサペプチドを、「有機酸－ヘキサペプチド複合体」と名付けた。

具体的には、本発明は、ＥＥＭＱＲＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するヘキサペプチドに有機酸が結合された、有機酸－ヘキサペプチド複合体を提供する。

上記有機酸は、ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または側鎖に結合することができる。具体的には、上記有機酸のカルボキシ基は、ヘキサペプチドのＮ末端とペプチド結合をすることができる。

上記有機酸は、リンカーを介して、ヘキサペプチドのＣ末端と結合することができる。この際、有機酸は、置換または非置換のＣ１－Ｃ６などのリンカーを介して、ヘキサペプチドのＣ末端に結合することができる。本発明に係る第一形態では、上記リンカーとしてエチレングリコールを使用した。また、上記有機酸において、ヘキサペプチドのＣ末端が、カルボキシ基がアミド基に置換されたヘキサペプチドと、ペプチド結合することができる。

上記有機酸は、ヘキサペプチドの側鎖に結合することができる。具体的には、上記有機酸は、ヘキサペプチドの側鎖において、カルボキシ基またはアミド基の位置に結合することができる。この際、有機酸がカルボキシ基の位置に結合する場合、エチレングリコールなどのリンカーを介して結合することができ、有機酸がアミド基の位置に結合する場合には、ペプチド結合することができる。

上記有機酸－ヘキサペプチド複合体に係る第一形態は、下記化学式３５で表すことができる。

（化学式３５）
（上記式において、Ｘは有機酸であり、Ｒ’及びＲ”がそれぞれ独立して、水素原子またはＣ１－Ｃ３アルキル基である。）

また、上記有機酸が、リンカーを介して、ヘキサペプチドのＮ末端と結合した複合体に係る第一形態は、下記化学式３５－１で表すことができる。

（化学式３５－１）
（上記式において、Ｘは有機酸であり、Ｌはリンカーであり、Ｒ’及びＲ”がそれぞれ独立して、水素原子またはＣ１－Ｃ３アルキルである。）

本発明で用いられる用語の「ヘキサペプチド」とは、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇのアミノ酸配列を有するヘキサペプチドを意味する。また、上記ヘキサペプチドは、ヘキサペプチドのＣ末端において、カルボキシ基がアミド基に置換されたものであり得る。上記ヘキサペプチドは、配列番号１で表示されるアミノ酸配列であり得る。

上記アミド基は、第１級アミド基、第２級アミド基、及び第３級アミド基からなる群より選択される何れか一つのアミド基である。好ましくは、上記アミド基は、第１級アミド基である。上記ヘキサペプチド構造に係る第一形態は、下記化学式３６の通りである。

（化学式３６）

上記有機酸－ヘキサペプチド複合体に係る化学式は、表１に示した。

本発明者らは、天然物質を利用した化粧料組成物を開発するために、自然界に存在する有機酸とヘキサペプチドとを結合し、有機酸－ヘキサペプチド複合体を製造した（図１～図３４）。

また、本発明者らは、上記有機酸－ヘキサペプチド複合体が、ビタミンＣに相当の優れた抗酸化活性を示すことを確認した（表７）。さらに、本発明者らは、上記有機酸－ヘキサペプチド複合体が、皮膚の再生や傷の回復に優れた効果を見せることを確認した（図３８ａ～図３８ｃ）。したがって、本発明に係る有機酸－ヘキサペプチド複合体を、有効成分として含む、皮膚再生と創傷治療用の組成物として、有効に使用することができる。

また、上記活性物質は、ステロイドであり得る。具体的には、上記ステロイドは、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、メチルプレドニゾン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、エストリオール（ｅｓｔｒｉｏｌ）、ベタメタゾンバレラート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、ベタメタゾンジプロピオナート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、モメタゾンフロアート（Ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅｆｕｒｏａｔｅ）、ヒドロコルチソン１７－ブチラート（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ１７－ｂｕｔｙｒａｔｅ）、ジフルコルトロンバレラート（Ｄｉｆｌｕｃｏｒｔｏｌｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、及びメチルプレドニゾロンアセポナート（Ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅａｃｅｐｏｎａｔｅ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「ベタメタゾン」とは、糖質コルチコイド作用を示す副腎皮質ホルモン剤を意味する。上記ベタメタゾンは、優れた抗炎症効果を見せる。上記ベタメタゾンの構造は、下記化学式３７の通りである。

（化学式３７）

本発明で用いられる用語の「デキサメタゾン」とは、プレドニゾロンの誘導体として、糖質コルチコイド作用を示す副腎皮質ホルモン剤を意味する。上記デキサメタゾンの構造は、下記化学式３８の通りである。

（化学式３８）

本発明で用いられる用語の「ヒドロコルチゾン」とは、コルチゾンとも呼ばれ、糖質コルチコイド作用を示す副腎皮質ホルモン剤を意味する。上記ヒドロコルチゾンの構造は、下記化学式３９の通りである。

（化学式３９）

本発明で用いられる用語の「プレドニゾン」とは、コルチゾン誘導体であり、糖質コルチコイド作用を示す副腎皮質ホルモン剤を意味する。上記プレドニゾンの構造は、下記化学式４０の通りである。

（化学式４０）

本発明で用いられる用語の「メチルプレドニゾン」とは、プレドニゾンの６番目の炭素の位置に結合された水素原子を、α－メチル基に置換した、副腎皮質ホルモン剤を意味する。上記メチルプレドニゾンの構造は、下記化学式４１の通りである。

（化学式４１）

本発明で用いられる用語の「エストリオール」とは、卵胞ホルモンに属するエストロゲンのような、ホルモン剤の一種を意味する。上記エストリオールの構造は、下記化学式４２の通りである。

（化学式４２）

上記ベタメタゾンバレラートの構造は、下記化学式４３の通りである。

（化学式４３）

上記ベタメタゾンジプロピオナートの構造は、下記化学式４４の通りである。

（化学式４４）

上記ジフルコルトロンバレラートの構造は、下記化学式４５の通りである。

（化学式４５）

上記ヒドロコルチソン１７－ブチラートの構造は、下記化学式４６の通りである。

（化学式４６）

上記モメタゾンフロアートの構造は、下記化学式４７の通りである。

（化学式４７）

上記メチルプレドニゾロンアセポナートの構造は、下記化学式４８の通りである。

（化学式４８）

本発明の活性物質－ヘキサペプチド複合体において、活性物質がステロイドである場合、ステロイドと結合したヘキサペプチドを、「改変したヘキサペプチド複合体」と名付けた。

具体的には、本発明は、ＥＥＭＱＲＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するヘキサペプチドと、ステロイドとが結合された、改変したヘキサペプチド複合体を提供する。

上記ステロイドは、ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端、又は側鎖に結合することができる。具体的には、上記ステロイドは、リンカーを介して、ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端、又は側鎖に結合することができる。

上記ステロイドは、ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または側鎖に位置するカルボキシ基やアミド基に、リンカーを介して結合することができる。上記側鎖に位置するカルボキシ基は、グルタミン酸の側鎖に位置するものであり得る。また、上記側鎖に位置するアミド基は、グルタミンの側鎖に位置するものであり得る。

上記改変したヘキサペプチド複合体に係る第一形態は、下記化学式４９で表すことができる。

（化学式４９）
（上記式において、Ｙはステロイドであり、Ｒ’及びＲ”がそれぞれ独立して、水素原子またはＣ１－Ｃ３アルキル基である。）

上記ステロイドは、リンカーを介して、ヘキサペプチドのＮ末端と結合した複合体に係る第一形態においては、下記化学式４９－１で表すことができる。

（化学式４９－１）
（Ｙはステロイドであり、Ｌ’はリンカーである。具体的には、上記リンカーは下記化学式５０で表すことができる。）

（化学式５０）
（この際、上記ＺはＣ１～Ｃ１０アルキレン基、Ｃ２～Ｃ１２アルケニレン基またはＣ６～Ｃ１４アリーレン基である。）

当分野で用いられる慣例に基づいて、本願に係る構造式では、

は、核または骨格構造において、残基または置換基の付着点での結合を表すために使用される。

本発明で用いられる用語の「アルキレン」とは、母体（ｐａｒｅｎｔ）アルカンの同一または異なる２つの炭素原子から、２つの水素原子が除去されて誘導される２つの１価ラジカル中心を有する、分岐鎖または直鎖、或いは、環状の飽和炭化水素ラジカルを意味する。例えば、アルキレン基は、１～２０個の炭素原子、１～１０個の炭素原子、または１～６個の炭素原子を有することができる。典型的なアルキレンラジカルは、メチレン（－ＣＨ_２－）、１，１－エチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）－）、１，２－エチル（－ＣＨ_２ＣＨ_２－）、１，１－プロピル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）－）、１，２－プロピル（－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－）、１，３－プロピル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）、１，４－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などを含むが、これらに限定されない。

本発明で用いられる用語の「アルケニレン」とは、母体アルケンの同一または異なる２つの炭素原子から、２つの水素原子が除去されて誘導される２つの１価ラジカル中心を有する、分岐鎖または直鎖、或いは、環状の不飽和炭化水素ラジカルを意味する。例えば、アルケニレン基は、１～２０個の炭素原子、１～１０個の炭素原子、または１～６個の炭素原子を有することができる。典型的なアルケニレン基は、１，２－エチレン（－ＣＨ＝ＣＨ－）を含むが、これに限定されない。

当業者であれば、「アルキル」、「アリール」、「ヘテロシクリル（複素環）」などの残基が、一つ以上の置換基によって置換される場合、これらは選択的に、「アルキレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクリレン」などの残基として呼ばれること（即ち、母体である「アルキル」、「アリール」、「ヘテロシクリル」残基の一つ以上の水素原子が、言及した置換基で置換されることを意味する。）を認識するだろう。「アルキル」、「アリール」、「ヘテロシクリル」などのような残基が、本願において、「置換された」と呼ばれたり、図面上置換されたもの（または任意に置換されたもの。例えば、置換基の数が０ないし正の整数の場合）として図示される場合、「アルキル」、「アリール」、「ヘテロシクリル」などの用語は、「アルキレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクリレン」などと相互互換的であると理解すべきである。

本発明で用いられる用語の「アリール」とは、母体芳香族環システムの６つの炭素原子から、一つの水素原子が除去されて誘導される芳香族炭化水素ラジカルを意味する。例えば、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子、又は６～１２個の炭素原子を有することができる。典型的なアリール基は、ベンゼン（例えば、フェニル）、置換されたベンゼン、置換または非置換のナフタレン、置換または非置換のアントラセン、置換または非置換のビフェニル等から誘導されるラジカルを含むが、これらに限定されない。

具体的には、上記Ｘは、

からなる群より選択される何れか一つであり得る。

具体的に、上記リンカーは、グルタル酸（Ｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄ）、コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）、マレイン酸（Ｍａｌｅｉｃａｃｉｄ）、マロン酸（Ｍａｌｏｎｉｃａｃｉｄ）、アジピン酸（Ａｄｉｐｉｃａｃｉｄ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、イソフタル酸（Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、テレフタル酸（Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、及び２，６‐ナフタレンジカルボン酸（２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり得る。

本発明で用いられる用語の「ヘキサペプチド」とは、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇのアミノ酸配列を有するヘキサペプチドを意味する。また、上記ヘキサペプチドは、ヘキサペプチドのＣ末端にカルボキシ基がアミド基で置換されたものであることができる。上記ヘキサペプチドは、配列番号１で表示されるアミノ酸配列であり得る。

上記アミド基は、第１級アミド基、第２級アミド基、及び第３級アミド基からなる群より選択される何れか一つのアミド基であり得る。好ましくは、上記アミド基は、第１級アミド基であり得る。上記ヘキサペプチド構造に係る第一形態は、有機酸－ヘキサペプチド複合体について上述したことと同じである。

上記６種のステロイドが結合されたヘキサペプチド複合体の化学式を、表２に表した。

また、上記８種のリンカーを介してベタメタゾンが結合されたヘキサペプチド複合体の構造を、表３に示した。

また、上記９種のリンカーを介してベタメタゾンバレラートが結合されたヘキサペプチド複合体を、表４に示した。

本発明者らは、ヘキサペプチドを利用した化粧料組成物を開発するために、皮膚炎やアトピー皮膚疾患に効能のあるステロイドと、化粧品向けの生理活性機能のヘキサペプチドとを結合し、改変したヘキサペプチド複合体を製造した（図４３～図４８）。

また、本発明者らは、上記ステロイドを用いた複合体に、抗酸化活性が現れることを確認した（表１１）。さらに、本発明者らは、上記の改変したヘキサペプチド複合体が、皮膚の再生や傷の回復に優れた効果を見せることを確認した（図５０及び５１）。したがって、本発明に係る改変したヘキサペプチド複合体は、それを有効成分として含む皮膚再生用と創傷治療用の組成物として、有効に使用することができる。

本発明に係る他の形態は、活性物質－ヘキサペプチド複合体を有効成分として含んでなる、化粧料組成物を提供する。上記活性物質－ヘキサペプチド複合体は、有機酸－ヘキサペプチド複合体または改変したヘキサペプチド複合体であることができる。

上記化粧料組成物は、皮膚老化防止、皮膚の再生効果を見せることができる。

また、上記化粧料組成物は、化粧水、クリーム、ローション、セラム、エッセンス、及び紫外線遮断剤からなる群より選択される何れか一つの製剤であり得る。

上記化粧料組成物に含まれる成分は、有効成分として、有機酸－ペプチド複合体または改変したヘキサペプチド複合体のほか、一般的に、化粧品組成物に利用される成分を含み、例えば、抗酸化剤、安定化剤、溶解剤、ビタミン、顔料、及び香料のような、通常の補助剤または担体を含むことができる。

また、上記化粧料組成物は、当業界で、一般的に製造される任意の剤型でも製造することができる。例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、石鹸、界面活性剤含有クレンジング、オイル、パウダーファンデーション、乳濁液ファンデーション、ワックスファンデーション、及びスプレーなどに剤形化することができるが、これに限定されない。より詳細には、化粧水（収束化粧水、柔軟化粧水など）、クリーム、ローション、セラム、エッセンス、栄養ゲル、又はマッサージクリームの剤形として製造され得る。

上記化粧料組成物の剤形が、ペースト、クリームまたはゲルインの場合には、担体成分として動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、または酸化亜鉛などを使用することができる。

上記化粧料組成物の剤形が、溶液または乳濁液である場合には、担体成分として、溶媒、溶解剤、または乳濁化剤を用いることができる。具体的には、担体成分は、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、またはソルビタンの脂肪酸エステルであり得る。

上記化粧料組成物の剤形が、懸濁液である場合には、担体成分として、水、エタノール、またはプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天またはトラカントなどを利用することができる。

上記化粧料組成物の剤形が、界面活性剤を含有するクレンジングである場合には、担体成分として、脂肪族アルコール硫酸、脂肪族アルコールエーテル硫酸、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテル硫酸、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどを利用することができる。

本発明に係る他の形態は、活性物質－ヘキサペプチド複合体を有効成分として含む、皮膚傷の治療用薬学組成物を提供する。上記活性物質－ヘキサペプチド複合体は、有機酸－ヘキサペプチド複合体、又は改変したヘキサペプチド複合体であり得る。

上記薬学組成物は、薬剤学的に許容される担体を含むことができる。具体的には、薬剤学的に許容される担体は、製剤時に通常的に利用されるものであって、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム、及びミネラルオイルなどを含むことができるが、これに限定されない。

上記薬学組成物は、上記成分の以外に、潤滑剤、湿潤剤、甘味料、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などをさらに含むことができる。

上記薬学組成物は、当該発明の属する技術分野において、通常の知識を有する者が容易に実施できる方法に従って、薬剤学的に許容される担体、及び／又は賦形剤を用いて製剤化することにより、単位容量形態に製造したり、又は、多容量容器内に入れて製造することができる。この際、剤形は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤、または乳化液の形態であるか、エキス製剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態であることもでき、分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。

上記薬学組成物は、軟膏基剤（Ｏｉｎｔｍｅｎｔｂａｓｅ）に希釈して、局所塗布剤用軟膏を製造して、一日に１～５回、病変部位に塗布することができ、ゲル製剤に希釈した局所塗布剤用パック剤を製造して、一日に１～５回、病変部位に適用することができる。

本発明に係る他の形態は、皮膚状態を改善するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

本発明に係る他の形態は、皮膚状態を改善する化粧料組成物を製造するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

本発明に係る他の形態は、皮膚傷を治療するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

本発明に係る他の形態は、皮膚傷を治療する薬剤を製造するべく、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体の用途を提供する。

本発明に係る他の形態は、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体を、個体の皮膚に処理するステップを含む、皮膚状態の改善方法を提供する。上記皮膚状態を改善するとは、皮膚の老化を防止したり、皮膚の再生を促進させたりすることを意味する。

本発明に係る他の形態は、本発明に係る活性物質－ヘキサペプチド複合体を、個体の皮膚に処理するステップを含む、皮膚傷の治療方法を提供する。

以下、本発明を実施例により詳細に説明する。ただし、下記の実施例は、本発明の一例を示すものであり、本発明が下記実施例に限定されるものではない。

実施例１．有機酸－ヘキサペプチド複合体の製造
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔｂｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、及びＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨの原料は、ＧＬＳ（ＧＬＢｉｏｃｈｅｍ、Ｓｈａｎｇｈａｉ）から購入した。また、有機酸は、ＴＣＩ（ＴＣＩｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｄｉａ）とＳｉｇｍａ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、ＵＳ）から購入した（表５）。また、ＤＭＦ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、ＤＩＥＡ（Ｎ、Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、ＤＣＭ（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、及びピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）は、ＤａｅｊｕｎｇＣｈｅｍｉｃａｌ＆Ｍｅｔａｌｓ（Ｋｏｒｅａ）から購入して使用した。

実施例１．１．有機酸－ヘキサペプチド複合体の合成
有機酸－ヘキサペプチド複合体の合成工程は、下記（１）～（６）の工程プロセスで示した。また、合成工程の条件は、下記表６に示した。

（１）樹脂膨張（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）
ろ過膜が装着された固相（ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ）合成反応器に、合成末端にカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）を有するペプチドの合成は、クロロトリチルクロリド樹脂（２－Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅｒｅｓｉｎ、ＢｅａｄＴｅｃｈ）を用いた。また、合成末端にペプチド結合（－ＣＯＮＨ_２）に終わるペプチド合成は、リンクアミド樹脂（Ｒｉｎｋａｍｉｄｅｒｅｓｉｎ、ＧＬＳ）を用いた。ＤＣＭ及びＤＭＦを使用して、３０分間樹脂を膨張させた。

（２）アミノ酸ローディング（ｌｏａｄｉｎｇ）
クロロトリチルクロライド樹脂を用いた合成は、最初のアミノ酸を樹脂にロードさせるプロセスが含まれた。膨張させた樹脂を減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した。上記樹脂に２当量のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨをＤＭＦに完全に溶かした後、クロロトリチルクロライド樹脂に添加し、密度を調整したＤＩＥＡを、クロロトリチルクロライド樹脂の４当量に対応する量で添加した。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で反応を行った。

（３）樹脂Ｆｍｏｃ脱保護
上記クロロトリチルクロライド樹脂またはリンクアミド樹脂を用いた合成プロセスは、Ｆｍｏｃの脱保護反応させるプロセスが含まれた。樹脂Ｆｍｏｃ脱保護のプロセスは、減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した後、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを添加したＤＭＦを使用して、５分間洗浄した。次に、また２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを添加したＤＭＦを使用して、１０分間洗浄した。減圧下で濾過して反応液を除去し、ＤＣＭまたはＤＭＦを使用して、２分ずつ６回以上洗浄した。

（４）アミノ酸の合成と有機酸の結合
上記リンクアミド樹脂に、３～５当量のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（ＧＬＳ）を、ＤＭＦに完全に溶かした後、溶媒を除去したリンクアミド樹脂に入れた。カップリング試薬（ｃｏｕｐｌｉｎｇｒｅａｇｅｎｔ）で、２ＭＨＯＢｔ／ＤＩＣ（Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ／ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を、アミノ酸当量とリンクアミド樹脂の量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で合成を行った。反応完了後、溶媒をベントしてから、きれいなＤＭＦで２分ずつ６回かけて洗浄した。

洗浄後、上記アミノ酸の結合方法と同じ方法で、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨ、及びＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨのアミノ酸を順番にカップリングした。次に、ヘキサペプチドが合成された状態の樹脂に、フェルラ酸を４当量、２ＭＨＯＢｔ／ＤＩＣを、アミノ酸当量と樹脂量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で反応させた。

（５）分離（Ｃｌｅａｖａｇｅ）
上記反応の完了後、減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した後、きれいなＤＭＦで２分ずつ２回、ＤＣＭで２分ずつ２回かけて洗浄した。次に、殆どの溶媒をベントして除去した。乾燥されたフェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の樹脂を、７０％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／２９％（ｖ／ｖ）ＤＣＭ／１％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ溶液を用いて、４時間分離を行った。

（６）再結晶（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅ）
分離が完了した溶媒を、エチルエーテル（Ｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）を用いて、粗（Ｃｒｕｄｅ）製品を再結晶化させて抽出した。

また、ギ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、グルクロン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、乳酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メバル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プロピオン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ピルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、キナ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シキミ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アビエチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アシアト酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、コール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソデオキシコール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アゼライン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジピコリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、フマル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、イタコン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リンゴ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、しゅう酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、コハク酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、酒石酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、α‐ケトグルタル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、クエン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リポ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ソルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ビオチン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、トレチノイン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、カフェ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シナミック酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ニコチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びシリング酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体においても、上記フェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の合成工程と同じ方法で合成した。

実施例１．２．有機酸－ヘキサペプチド複合体の精製
実施例１．１．で合成したフェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の粗製品を、１０％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを添加した蒸留水の溶液に溶かした。次に、下記のようなグラデーション（ｇｒａｄｉｅｎｔ）の条件下で、ＨＰＬＣで精製した後、凍結乾燥してフェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体を得た（図１～図３４）。上記グラデーションは下記表７に示した。

Ａ．機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ８Ａ（５ｃｍ＊２５ｃｍ）／８Ａ（ｐｒｅｐ（ｄｉａ５ｃｍ））
Ｂ．溶媒の組成：バッファＡ＝０．０５％ＴＦＡ／アセトニトリル、バッファＢ＝０．０５％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ
Ｃ．流れ速度（Ｆｌｏｗｒａｔｅ）：１４ｍｌ／分
Ｄ．カラム：ＳｉｌｉｃａｇｅｌＣ１８ｒｅｖｅｒｓｅｐｈａｓｅ
Ｅ．吸光度：２３０ｎｍ
Ｅ．グラデーション

また、ギ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、グルクロン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、乳酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メバル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プロピオン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ピルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、キナ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シキミ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アビエチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アシアト酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、コール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソデオキシコール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ウルソール酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、アゼライン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジピコリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、フマル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、イタコン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リンゴ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、しゅう酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、コハク酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、酒石酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、α‐ケトグルタル酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、クエン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、リポ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ソルビン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ビオチン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、トレチノイン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、カフェ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、シナミック酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ニコチン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びシリング酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体においても、上記フェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２の精製工程と同じ方法を用いて精製した。

実験例１．ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖の位置での有機酸結合の確認
ヘキサペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖の位置において、有機酸が結合できるかどうかを確認するために、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２の複合体を合成した。

上記ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の合成方法は、図３５～図３７に示した。ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体は、実施例１と同じ方法で合成した（図３５）。

上記ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸複合体は、下記プロセスを通して合成した。まず、トリチル樹脂（ｔｒｉｔｙｌｒｅｓｉｎ）を反応器に入れ、ＤＣＭ／ＤＭＦを用いて２回洗浄した後、ＤＣＭを用いて、３０分間、反応器で樹脂を膨潤させた。次に、樹脂にアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）アミノ酸２ｅｑ及びＤＩＥＡｌｅｑを入れ、４時間ロードした。ロード後、ＤＭＦを用いて、５回洗浄した。上記アルギニンをロードした方法と同じ方法で、アルギニン、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン酸の順で、残り５つのアミノ酸をロードした。このプロセスを繰り返して、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲを合成した後、樹脂を５％ＴＦＡ／ＤＣＭを用いて、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲを抽出した。次に、ＨＯＢｔ、ＤＩＣを用いて、ゲラン酸をＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲのＮ末端に結合させた（図３６）。

反応が完了したＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸を、ＤＭＦで３～４回、ＤＣＭで３～４回洗浄し、ポンプを利用して乾燥した。乾燥プロセスが完了した後、７０％ＴＦＡを用いて、実施例１．１の（５）分離プロセスと同様に、４時間分離プロセスを行った。

実施例１．１の（６）再結晶プロセスと同様に、反応器から、分離プロセスが終わった溶液（ｃｌｅａｖａｇｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）を取り、チューブに移して空気乾燥し、エチルエーテルを利用して、溶液内に溶けているＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸を固体状態で回収した。回収したＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸を、ＨＰＬＣ分析後、精製を行った。

上記ＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２は、上記実験例１と同様の方法で、ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２をペプチド合成した後、グルタミンの保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｇｒｏｕｐ）を除去した後、ＥＤＣ、ＨｏＡｔを添加してエチレングリコールリンカーを結合し、ＤＭＦで３回洗浄した後、ＨＯＢｔ、ＤＩＣを用いてゲラン酸を結合させた（図３７）。次に、実施例１．１の（５）分離及び（６）再結晶のプロセスと同様に、分離及び再結晶のプロセスを行った。回収したＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２を、ＨＰＬＣ分析後、精製を行った。

実験例２．有機酸－ヘキサペプチド複合体の抗酸化効果の確認
安定したフリーラジカルであるＤＰＰＨ（１，１－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｈｙｄｒａｚｙｌ、ＳｉｇｍａＤ９１３２－１Ｇ）を利用して、ラジカルが減少する程度を分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）で測定し、間接的に試料の抗酸化活性を測定した。具体的には、エタノール０．４ｍｌに、０．１ｍＭのＤＰＰＨ溶液０．５ｍｌ、及び上記実施例１で合成した様々な濃度の有機酸－ヘキサペプチド複合体（試料）を、それぞれ０．１ｍｌずつ添加し、１０秒間、強くヴォルテックスした後、冷暗所で３０分間反応させた。

次に、分光光度計ＥＬＩＳＡを用いて、５１７ｎｍの波長で吸光度を測定した。陽性対照群としては、ビタミンＣ（Ａｓｃｏｒｂｉｃａｃｉｄ）を使用した。

（数式１）
ＤＰＰＨフリーラジカルの捕捉活性（％）＝｛１－試料の吸光度／Ｂｌａｎｋの吸光度）×１００｝

ＤＰＰＨは、エタノール内で固有の紫色を表しており、抗酸化物質によって還元されると、固有の紫色を失い、黄色に変わることになる。ＤＰＰＨは、５１７ｎｍの波長で、分光分析によって、ラジカルの測定が可能である。

その結果、ヘキサペプチド複合体を濃度別に処理した際、ＤＰＰＨのフリーラジカルの捕捉活性が、濃度に応じた抗酸化活性の増加を確認した。また、抗酸化作用の優れたビタミンＣと比較すると、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、且つカフェ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２で、ビタミンＣと同様のＤＰＰＨフリーラジカルの捕捉活性を示した（表８）。

上記表８におけるＳＣ_５０は、フリーラジカルを５０％消去するときの試料濃度を示す。その他の有機酸－ヘキサペプチド複合体でも、ＤＰＰＨフリーラジカルの捕捉活性を示しており、上記３４種の有機酸－ヘキサペプチド複合体は、抗酸化化粧料組成物として使用できることを確認した。

実験例３．有機酸－ヘキサペプチド複合体における皮膚再生効果の確認
傷の回復実験（Ｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇａｓｓａｙ）で、有機酸－ヘキサペプチド複合体による細胞増殖と移動促進の有無に基づいて、皮膚再生の効果を評価した。ヒト表皮角化細胞株（ＨａＣａＴ（ｈｕｍａｎｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ、ＡｄｄｅｘＢｉｏ、ＵＳ、ＣａｔａｌｏｇＮｏ：Ｔ００２０００１））を使用しており、細胞培養のためのＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃは、ＧＩＢＣＯから購入し、ＦＢＳ（ｆａｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ）は、Ｃａｐｒｉｃｏｒｎから購入して使用した。

ＨａＣａＴ細胞は、ＤＭＥＭに１０％ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃと一緒に、１００ｍｍ／６０．１ｃｍ^２のペトリ皿で、３７℃、５％ＣＯ_２，１００％湿潤の条件下で、培養器で培養した。ＨａＣａＴ細胞の細胞飽和度が９０％程度になるとき、１００ｍｍ／６０．１ｃｍ^２のペトリ皿で、１．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／１２－ウェル－プレートに分注し、４８時間、３７℃、５％ＣＯ^２，１００％湿潤の条件下で、培養器で培養した。

次に、ＦＢＳを添加していないＤＭＥＭに交換した後、各ウェルに２００μｌピペット‐チップを利用してスクラッチングをした。実験群として実施例１で製造した有機酸－ヘキサペプチド複合体を使用しており、１００ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した。陽性対照群としてｈＥＧＦ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ）を使用しており、０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した。陰性対照群として１×ＰＢＳを使用した。

実験群または対照群を処理した後、直ぐに細胞の写真を顕微鏡で撮り、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。更に２０時間培養した後、顕微鏡で細胞の写真を撮って、ＩｍａｇｅＪプログラムを利用し、細胞の再生の程度を計算した。ＳＰＳＳ統計分析プログラムで統計分析を行い、シグマプロットプログラムでグラフに表した。統計学的有意性は、Ｐ値（ｖａｌｕｅ）が０．０５以下である場合、有意であると評価した。

（数式２）
傷の回復面積（Ｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）（％）＝｛（ＡＢ）／Ａ｝×１００
Ａ＝実験群または対照群の処理直後、０時間帯、傷の面積
Ｂ＝実験群または対照群の処理後、２０時間帯、傷の面積

その結果、有機酸－ヘキサペプチド複合体の３４種の全てにおいて、陰性対照群（ＰＢＳ）に比べて、回復面積が増加した。その中でも、フェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２が、陰性対照群に比べ、それぞれの回復面積（ｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）が約２倍以上増加した。そして効能の良いフェルラ酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２と、ロスマリン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２と、それぞれのＡｃｅｔｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２（Ａｃｅｔｙｌｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ－８）、ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２（ヘキサペプチド）、及び有機酸とにおいて、傷の回復面積を比較すると、有機酸－ヘキサペプチド複合体の方が、それぞれ（有機酸、ヘキサペプチド）で処理した方よりも、回復面積（ｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）が増加した（図３８ａ～図３８ｃ）。

また、実験例１で製造したゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体による、細胞増殖且つ移動促進の有無に基づいて、皮膚再生の効果を評価した。実験方法は、上記と同様に行った。

その結果、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の全てにおいて、陰性対照群に比べて、それぞれの回復面積（ｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）が約２倍以上増加した。これにより、有機酸－ヘキサペプチド複合体が細胞の増殖と移動を促進し、回復面積を増加させることに効果的であり、したがって、皮膚の再生にも効能を有するため、化粧料組成物として使用できることを確認した（図３９）。

実験例４．有機酸－ヘキサペプチド複合体における細胞毒性の確認
ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の細胞毒性を確認するために、ＷＳＴ－１分析を行った。

具体的には、十分に成長した細胞を、２×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で、９６－ウェル－プレートに移し培養した。細胞がプレートの底にすべて取り付けられるように、２４時間培養しており、いくつかのウェルは、細胞なしで培地のみを詰めた。サンプルは、ＤＭＥＭを用いて、最終体積が１００μｌになるように製造した。ＷＳＴ－１試薬は、各ウェル当り１０μｌを分注し、分注後、４時間、３７℃の温度で培養した。その後、ＥＬＩＳＡｒｅａｄｅｒを利用して、４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。

その結果、図４０に示したように、ゲラン酸－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ＣＯＯＨ－ＥＥＭＱＲＲ－ゲラン酸、及びＣＯＯＨ－ＥＥ（ゲラン酸）ＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の全てにおいて、細胞毒性が現れないことを確認した。

実施例２．改変したヘキサペプチド複合体の製造
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔｂｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、及びＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨの原料は、ＧＬＳ（ＧＬＢｉｏｃｈｅｍ、Ｓｈａｎｇｈａｉ）から購入した。また、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレラート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、ベタメタゾンジプロピオナート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、モメタゾンフロアート（Ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅｆｕｒｏａｔｅ）、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチソン１７－ブチラート（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ１７－ｂｕｔｙｒａｔｅ）、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、及びエストリオールは、Ｓｉｇｍａ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、ＵＳ）から購入した。また、グルタル酸無水物（ｇｌｕｔａｒｉｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ）は、ＴＣＩ（ＴＣＩｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から購入した。また、ジフルコルトロンバレラート（Ｄｉｆｌｕｃｏｒｔｏｌｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、及びメチルプレドニゾロンアセポナート（Ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅａｃｅｐｏｎａｔｅ）は、ＨｅｎａｎＴｉａｎｆｕＣｈｅｍｉｃａｌから購入した。また、ＤＭＦ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、ＤＩＥＡ（Ｎ、Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、ＤＣＭ（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、及びピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）は、ＤａｅｊｕｎｇＣｈｅｍｉｃａｌ＆Ｍｅｔａｌｓ（Ｋｏｒｅａ）から購入して使用した。

実施例２．１．改変したヘキサペプチド複合体の合成
改変したヘキサペプチド複合体の合成工程は、下記（１）～（８）の工程で示した。また、合成工程の条件は、下記表９に示した。

（１）樹脂膨張（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）
ろ過膜が装着された固相（ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ）合成反応器において、合成末端にカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）を有するペプチドの合成は、クロロトリチルクロリド樹脂（２－Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅｒｅｓｉｎ、ＢｅａｄＴｅｃｈ）を用いた。また、合成末端にペプチド結合（－ＣＯＮＨ２）に終わるペプチド合成は、リンクアミド樹脂（Ｒｉｎｋａｍｉｄｅｒｅｓｉｎ、ＧＬＳ）を用いた。ＤＣＭとＤＭＦを使用して、３０分間、樹脂を膨張させた。

（２）アミノ酸ローディング（ｌｏａｄｉｎｇ）
クロロトリチルクロライド樹脂を用いた合成は、最初のアミノ酸を樹脂にロードさせるプロセスを含んでいる。膨張させた樹脂を、減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した。上記樹脂に、２当量のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨを、ＤＭＦに完全に溶かした後、クロロトリチルクロライド樹脂に添加し、密度を調整したＤＩＥＡを、クロロトリチルクロライド樹脂の４当量に対応する量で添加した。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で反応を行った。

（３）樹脂Ｆｍｏｃ脱保護
上記クロロトリチルクロライド樹脂またはリンクアミド樹脂を用いた合成プロセスは、Ｆｍｏｃの脱保護の反応をさせるプロセスが含まれた。樹脂Ｆｍｏｃ脱保護プロセスは、減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した後、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを添加したＤＭＦを使用して、５分間洗浄した。次に、また２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを添加したＤＭＦを使用して、１０分間洗浄した。減圧下で、ろ過して反応液を除去し、ＤＣＭまたはＤＭＦを使用して、２分ずつ６回以上洗浄した。

（４）アミノ酸の合成
上記リンクアミド樹脂に、３～５当量のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（ＧＬＳ）を、ＤＭＦに完全に溶かした後、溶媒を除去したリンクアミド樹脂に入れた。カップリング試薬（ｃｏｕｐｌｉｎｇｒｅａｇｅｎｔ）で、２ＭＨＯＢｔ／ＤＩＣ（Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ／ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を、アミノ酸当量とリンクアミド樹脂の量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で合成を行った。反応が完了したら、溶媒をベントした後、きれいなＤＭＦで２分ずつ６回かけて洗浄した。

洗浄後、上記のアミノ酸の結合方法と同様の方法で、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨ、及びＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨのアミノ酸を順番にカップリングした。

（５）リンカー結合
（５－１）ＤＩＥＡを用いたリンカー結合
上記ヘキサペプチドが合成された状態の樹脂に、Ｆｍｏｃ脱保護を行い、洗浄された樹脂に、リンカーとして、グルタル酸無水物（ｇｌｕｔａｒｉｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ）を３当量、２Ｍの濃度のＤＩＥＡを、グルタル酸無水物当量とリンクアミド樹脂量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で合成を行った。反応が完了したら、溶媒をベントした後、きれいなＤＭＦで２分ずつ６回かけて洗浄した。

上記グルタル酸無水物の代わりに、コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）またはマレイン酸無水物（Ｍａｌｅｉｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ）を利用して、コハク酸リンカーまたはマレイン酸リンカーを結合させた。

（５－２）ＨＯＢＴ／ＤＩＣを用いたリンカー結合
また、上記ヘキサペプチドが合成された状態の樹脂に、Ｆｍｏｃ脱保護を行い、洗浄された樹脂に、リンカーとして、マロン酸（Ｍａｌｏｎｉｃａｃｉｄ）を３当量、２Ｍの濃度のＨＯＢＴ／ＤＩＣを、マロン酸当量とリンクアミド樹脂量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で合成を行った。反応が完了したら、溶媒をベントした後、きれいなＤＭＦで２分ずつ６回かけて洗浄した。

上記マロン酸の代わりに、アジピン酸（Ａｄｉｐｉｃａｃｉｄ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、イソフタル酸（Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、テレフタル酸（Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、又は２，６‐ナフタレンジカルボン酸（２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ）を利用して、アジピン酸リンカー、フマル酸リンカー、イソフタル酸リンカー、テレフタル酸リンカー、又は２，６‐ナフタレンジカルボン酸リンカーを結合させた。

（６）ステロイド結合
次に、リンカー結合された状態のヘキサペプチド樹脂に、ベタメタゾンを３当量、２Ｍの濃度のＤＭＡＰ／ＤＩＣを、アミノ酸当量と樹脂量に合わせて入れた。次に、反応器を用いて、５時間以上、２５℃～３２℃の温度で反応させた。

（７）分離（Ｃｌｅａｖａｇｅ）
反応が完了したら、減圧下で、ろ過膜にて溶媒を除去した後、きれいなＤＭＦで２分ずつ２回、ＤＣＭで２分ずつ２回かけて洗浄した。次に、殆どの溶媒をベントして除去した。乾燥された改変したヘキサペプチド複合体樹脂を、７０％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／２９％（ｖ／ｖ）ＤＣＭ／１％（ｖ／ｖ）Ｈ_２Ｏ溶液を用いて、４時間分離を行った（図４１及び図４２）。

（８）再結晶（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅ）
分離が完了された溶媒を、エチルエーテル（Ｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ）を用いて、粗（Ｃｒｕｄｅ）製品を再結晶化させて、ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２を抽出した。

上記ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２の合成方法と同様の方法で、デキサメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、エストリオール－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２を合成した。

実施例２．２．改変したヘキサペプチド複合体の精製
実施例２．１．で合成したベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の粗製品を１０％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを添加した蒸留水の溶液に溶かした。次に、下記グラデーション（ｇｒａｄｉｅｎｔ）の条件下で、ＨＰＬＣで精製した後、凍結乾燥してベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体を得た（図４３～図４８）。上記グラデーションは、下記表１０に示した。

また、デキサメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、プレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びエストリオール－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体においても、上記ベタメタゾン－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の精製工程と同様の方法で精製した。

実験例４．改変したヘキサペプチド複合体の抗酸化効果の確認
安定フリーラジカルであるＤＰＰＨ（１，１－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｈｙｄｒａｚｙｌ、ＳｉｇｍａＤ９１３２－１Ｇ）を利用して、ラジカルが減少する程度を分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）で測定し、間接的に試料の抗酸化活性を測定した。具体的には、エタノール０．４ｍｌに、０．１ｍＭのＤＰＰＨ溶液０．５ｍｌ且つ上記実施例２．で合成した、様々な濃度の改変したヘキサペプチド複合体（試料）を、それぞれ０．１ｍｌずつ添加し、１０秒間、強くヴォルテックスした後、冷暗所で３０分間反応させた。

ＤＰＰＨは、エタノール内で固有の紫色を示しており、抗酸化物質によって還元されると、固有の紫色を失い、黄色に変わることになる。ＤＰＰＨは、５１７ｎｍの波長で、分光分析にてラジカルを測定することができる。

その結果、改変したヘキサペプチド複合体を濃度別に処理した際に、ＤＰＰＨのフリーラジカルの捕捉活性が、濃度に応じて抗酸化活性が増加することを確認した（表１１）。

上記表１１は、改変したヘキサペプチド複合体のＤＰＰＨフリーラジカルの捕捉活性を示した表である。ＳＣ_５０は、フリーラジカルを５０％消去する際の試料濃度に意味する。その他、改変したヘキサペプチド複合体でも、ＤＰＰＨフリーラジカルの捕捉活性を示しており、上記の６種の改変したヘキサペプチド複合体は、抗酸化の化粧料組成物として使用できることを確認した。

実験例５．改変したヘキサペプチド複合体の皮膚再生効果の確認
傷の回復実験（Ｗｏｕｎｄｈｅａｌｉｎｇａｓｓａｙ）にて、改変したヘキサペプチド複合体による細胞増殖と移動の促進有無に基づいて、皮膚再生の効果を評価した。ヒト表皮角化細胞株（ＨａＣａＴ（ｈｕｍａｎｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ、ＡｄｄｅｘＢｉｏ、ＵＳ、ＣａｔａｌｏｇＮｏ：Ｔ００２０００１））を使用しており、細胞培養のためのＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）、及びＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃは、ＧＩＢＣＯから購入し、ＦＢＳ（ｆａｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ）は、Ｃａｐｒｉｃｏｒｎから購入して使用した。

ＨａＣａＴ細胞は、ＤＭＥＭに、１０％ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃと一緒に、１００ｍｍ／６０．１ｃｍ^２のペトリ皿で、３７℃、５％ＣＯ_２，１００％湿潤の条件下で、培養器で培養した。ＨａＣａＴ細胞の細胞飽和度が９０％程度になるとき、１００ｍｍ／６０．１ｃｍ^２のペトリ皿で、１．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／１２ウェル－プレートに分注して、４８時間、３７℃、５％ＣＯ^２，１００％湿潤の条件下で、培養器で培養した。

次に、ＦＢＳを添加していないＤＭＥＭに交換した後、各ウェルに２００μｌのピペット‐チップを利用してスクラッチングをした。実験群として、実施例２で合成して改変したヘキサペプチド複合体を使用し、１００ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した。陽性対照群として、ｈＥＧＦ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ）を使用し、０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で処理した。陰性対照群として１×ＰＢＳを使用した。

実験群または対照群を処理した後、直ぐに細胞の写真を顕微鏡で撮り、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。更に２０時間培養した後、顕微鏡で細胞の写真を撮って、ＩｍａｇｅＪプログラムを利用して、細胞の再生の程度を計算した。ＳＰＳＳ統計分析プログラムで統計分析を行い、シグマプロットプログラムでグラフに表した。統計学的有意性は、Ｐ値（ｖａｌｕｅ）が０．０５以下である場合、有意であると評価した。

その結果、改変したヘキサペプチド複合体の６種の全てにおいて、陰性対照群（ＰＢＳ）に比べて、回復面積が増加した（図４９）。

また、実施例２．で合成したベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びメチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体による細胞増殖と移動の促進有無に基づいて、皮膚再生の効果を評価した。実験方法は、上述した方法と同様に行った。

その結果、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びメチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の全てにおいて、陰性対照群に比べて、それぞれの回復面積（ｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）が約２倍以上増加した（図５０）。

さらに、実施例２．で製造した９種のリンカーを用いて、ステロイドを結合させたベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体による、細胞増殖と移動の促進有無に基づいて、皮膚再生の効果を評価した。実験方法は、上述した方法と同様に行った。

その結果、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の全てにおいて、陰性対照群に比べて、それぞれの回復面積（ｈｅａｌｉｎｇａｒｅａ）が約２倍以上増加した。これにより、改変したヘキサペプチド複合体が、細胞の増殖と移動を促進して、回復面積を増加させることに効果的であり、したがって、皮膚の再生にも効果を有しており、化粧料組成物として使用できることを確認した（図５１）。

実験例６．改変したヘキサペプチド複合体の細胞毒性の確認
ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の細胞毒性を確認するために、ＷＳＴ－１分析を行った。

具体的には、十分に成長した細胞を、２×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で、９６ウェル－プレートに移し培養した。細胞をプレートの底にすべて取り付けられるように、２４時間培養しており、いくつかのウェルは、細胞なしで培地のみを詰めた。サンプルは、ＤＭＥＭを用いて、最終的体積が１００μｌになるように製造した。ＷＳＴ－１試薬は、各ウェル当り１０μｌを分注し、分注後、４時間、３７℃の温度で培養した。その後、ＥＬＩＳＡｒｅａｄｅｒを利用して、４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。

その結果、図５２及び図５３に示したように、ベタメタゾンバレラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンジプロピオナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ジフルコルトロンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｏｙｌ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ヒドロコルチソン１７－ブチラート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、モメタゾンフロアート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、メチルプレドニゾロンアセポナート－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｇｌｕｔａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｓｕｃｃｉｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｅｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｍａｌｏｎｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ａｄｉｐｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｆｕｍａｒｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、ベタメタゾンバレラート－Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２、及びベタメタゾンバレラート－２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ－ＥＥＭＱＲＲ－ＮＨ_２複合体の全てにおいて、細胞毒性が現れないことを確認した。

Claims

ＥＥＭＱＲＲ（配列番号１）のアミノ酸配列を有するヘキサペプチドと、活性物質とが結合された、活性物質－ヘキサペプチド複合体であって、
上記活性物質は、有機酸又はステロイドであり、
上記有機酸は、ギ酸（Ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ）、グルクロン酸（Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、乳酸（Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ）、メバロン酸（Ｍｅｖａｌｏｎｉｃａｃｉｄ）、プロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃａｃｉｄ）、ピルビン酸（Ｐｙｒｕｖｉｃａｃｉｄ）、キナ酸（Ｑｕｉｎｉｃａｃｉｄ）、シキミ酸（Ｓｈｉｋｉｍｉｃａｃｉｄ）、アビエチン酸（Ａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄ）、アシアト酸（Ａｓｉａｔｉｃａｃｉｄ）、コール酸（Ｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、ウルソデオキシコール酸（Ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、ウルソール酸（Ｕｒｓｏｌｉｃａｃｉｄ）、アゼライン酸（Ａｚｅｌａｉｃａｃｉｄ）、ジピコリン酸（Ｄｉｐｉｃｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、イタコン酸（Ｉｔａｃｏｎｉｃａｃｉｄ）、リンゴ酸（Ｍａｌｉｃａｃｉｄ）、しゅう酸（Ｏｘａｌｉｃａｃｉｄ）、コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）、酒石酸（Ｔａｒｔａｒｉｃａｃｉｄ）、α‐ケトグルタル酸（α－Ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄ）、クエン酸（Ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ）、リポ酸（Ｌｉｐｏｉｃａｃｉｄ）、ゲラン酸（Ｇｅｒａｎｉｃａｃｉｄ）、ソルビン酸（Ｓｏｒｂｉｃａｃｉｄ）、ビオチン（Ｂｉｏｔｉｎ）、トレチノイン酸（Ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、カフェ酸（Ｃａｆｆｅｉｃａｃｉｄ）、フェルラ酸（Ｆｅｒｕｌｉｃａｃｉｄ）、ロスマリン酸（Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃａｃｉｄ）、及びシリング酸（Ｓｙｒｉｎｇｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つであり、
上記ステロイドは、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、メチルプレドニゾン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、エストリオール（ｅｓｔｒｉｏｌ）、ベタメタゾンバレラート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、ベタメタゾンジプロピオナート（Ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、モメタゾンフロアート（Ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅｆｕｒｏａｔｅ）、ヒドロコルチソン１７－ブチラート（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ１７－ｂｕｔｙｒａｔｅ）、ジフルコルトロンバレラート（Ｄｉｆｌｕｃｏｒｔｏｌｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、及びメチルプレドニゾロンアセポナート（Ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅａｃｅｐｏｎａｔｅ）からなる群より選択される何れかである、活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記ステロイドが、リンカーを介して結合することを特徴とする、請求項１に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記リンカーは、下記化学式で表されるものである、請求項２に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。

（上記Ｚは、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン基、Ｃ２～Ｃ１２アルケニレン基、又はＣ６～Ｃ１４アリーレン基である。）
上記Ｚは、

からなる群より選択される何れか一つである、請求項３に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記リンカーは、グルタル酸（Ｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄ）、コハク酸（Ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）、マレイン酸（Ｍａｌｅｉｃａｃｉｄ）、マロン酸（Ｍａｌｏｎｉｃａｃｉｄ）、アジピン酸（Ａｄｉｐｉｃａｃｉｄ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、イソフタル酸（Ｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、テレフタル酸（Ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌｉｃａｃｉｄ）、及び２，６‐ナフタレンジカルボン酸（２，６－Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ）からなる群より選択される何れか一つである、請求項２に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記活性物質が、ヘキサペプチドのＮ末端とペプチド結合をすることを特徴とする、請求項１に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記ヘキサペプチドのＣ末端において、カルボキシ基がアミド基で置換されたことを特徴とする、請求項１に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記アミド基は、第１級アミド基、第２級アミド基、及び第３級アミドからなる群より選択される何れか一つのアミド基である、請求項７に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
上記アミド基は、第１級アミドであることを特徴とする、請求項７に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体。
請求項１ないし請求項９の何れか一項に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体を、有効成分として含む、化粧料組成物。
上記化粧料組成物は、化粧水、クリーム、ローション、セラム、及びエッセンスからなる群より選択される何れか一つの製剤であることを特徴とする、請求項１０に記載の化粧料組成物。
請求項１ないし請求項９の何れか一項に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体を、有効成分として含む、皮膚傷の治療用薬学組成物。
皮膚の老化防止又は皮膚の再生促進用化粧料組成物を製造するための、請求項１ないし請求項９の何れか一項に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体の使用。
皮膚傷の治療用薬学組成物を製造するための、請求項１ないし請求項９の何れか一項に記載の活性物質－ヘキサペプチド複合体の使用。