KR102103771B1 - 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 가르시니아 캄보지아(Garcomoa cambogia) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 가르시니아 캄보지아 추출물은 비자극성으로 피부에 안전하고 여드름 방지효과, 아토피 개선 효과를 나타내며 항염증 효과 또한 매우 우수하다.

Description

가르시니아 캄보지아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물{SKIN EXTERNA COMPOSITION FOR IMPRIVING INFLAMMATION CONTAINING EXTRACT OF GARCOMOA CAMBOGIA}

본 발명은 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부염증 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효 성분으로 함유하여 여드름 방지효과, 아토피 개선효과, 항염증 효과를 갖는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

화장품은 피부를 보호, 미화 및 청결을 위해 사용되는 제품이지만, 화장료 조성물에는 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 불가피하게 포함된다. 이러한 성분들로는 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소뿐만 아니라, 그 밖의 효능 및 효과를 부여하기 위한 여러 가지 성분들이 여기에 포함된다. 이들 성분은 일반적으로 피부에 염증이나 뾰루지, 부종 등 각종 트러블을 발생시키는 것으로 알려져 있다(Maibach. H. I.,Contact Dermatitis, 6. 369-404, 1980). 또한, 체내로부터 배출되는 피지 및 땀, 화장품 성분 중 지방산, 고급 알코올, 단백질 성분 등이 피부에 존재하는 피부상재균에 의해 독성이 강한 물질로 분해되며 이들에 의해 피부 염증이 유발될 수도 있다. 또한, 자외선에 의해서도 피부 염증이 유발된다는 것은 잘 알려진 사실이다.

염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하며, 이처럼 증가된 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인 등을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 해준다. 그러나, 이러한 작용은 인접해 있는 조직 세포와 비세포 성분들에 해로운 손상을 일으키기도 한다. 적절한 조건 하에서는 염증 초기상태가 지난 후 정상 기능을 되찾게 되지만, 염증을 자극하는 자극제가 없어지지 않거나 계속해서 만들어질 경우에는 결과적으로 만성 염증이 일어나게 되어 심각한 조직의 손상을 가져온다.

염증과 관련된 대표적인 피부 트러블의 형태로는 아토피와 여드름 등이 있으며 아토피에 대해서 설명하면 다음과 같다. 아토피성 피부염 또는 아토피성 습진이라고 불리는 피부질환은 일반적으로 유아 및 소아에게 발생하는 만성 및 재발성 질환으로 심한 가려움(소양증, pruritus)과 피부습진 등 증상이 여러 가지 원인에 의해 악화, 완화, 재발 등의 악순환이 계속된다.

아토피 피부염의 임상적 증상들의 직접적인 원인은 알레르기 유발 물질에 대한 피부방어 및 보호기능의 약화 또는 피부 면역반응이 과민하게 발생하기 때문이다. 첫 번째 원인은 각질형성세포의 기능 이상으로서, 피부의 각질층의 구조적 결함에 의해 수분유지기능과 피부장벽기능이 저하되고 정상피부에서는 침투가 어려운 세균 및 이물질이 피부에 침투하여 자극 및 알레르기 반응이 쉽게 일어나는 것이다. 두 번째 원인은 피부 면역학적 과민반응이다. 아토피 피부염이 발생한 경우에 나타나는 여러 가지 면역학적 이상 현상은 면역글로브린(IgE)의 합성 증가, 다양한 항원들에 대한 면역글로브린의 증가, B 림프구와 단핵구의 IgE 수용체의 발현 증가, 비만세포/호염구에 의한 히스타민 분비 증가, 지연형 과민반응 증가, 호산구(eosinophil)의 증가, 제 2 형 보조 T 림프구(Th2 lymphocyte)에 의한 인터루킨 IL-4, IL-5, IL-13 의 분비 증가, 제 1 형 보조 T 림프구(Th1 lymphocyte)에 의한 인터페론 INF-γ 의 분비 감소 등 다양하고 복잡한 양상을 보이고 있다. 그리고 면역학적 과민반응에 의해 나타나는 다양한 염증반응 사이토카인들 중 일부는 각질형성세포의 기능이상을 초래하는데, 이는 피부장벽의 기능이상이 염증반응을 유도하고, 유도된 염증반응이 다시 피부장벽 기능이상을 유도하는 순환과정에 의해 아토피 피부염이 악화되는 것이다.

한편, 항염 작용은 염증을 방어하는 기전으로, 염증은 조직에 해롭거나 해로울 가능성이 있는 요인들로부터 생체를 보호하는 국소적인 생리적 반응이다. 이러한 염증 현상이 과다하게 유발되면 염증성 세포 산물인 단백질 분해효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합조직의 손상은 피부탄력을 감소시켜 피부의 노화를 촉진시키므로 건강한 피부를 유지할 수 없게 된다. 따라서 피부 건강을 증진하거나 유지하는 화장료 소재로 항염 작용을 갖는 소재가 요구된다.

한편, 아토피 피부염 환자는 정상인에 비하여 세균, 바이러스, 곰팡이에 의한 피부 감염이 잘 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히 아토피 환자의 90%가 피부에 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus)이 집적되어 번식하고 있으며, 많은 연구 결과들을 통해서 아토피 환자의 상피세포에 황색 포도상 구균에 감염되어 있음이 알려져 있다. 이들 포도상구균의 외독소가 우리 몸의 면역체계를 자극하여 알레르기를 일으키는 화학물질을 나오게 하여 아토피를 악화시킨다. 이러한 문제를 해결하기 위하여, 현재 일반적으로 사용되고 있는 아토피 피부를 치료하는 방법으로는 보습제 사용, 타르제제 사용, 바르거나 먹는 스테로이드제제 사용, 자외선 치료, 항생제, 항소양제, 항균제, 면역 관련 치료제, 식품, 향기, 한방 등의 방법을 사용하고 있다.

한편, 여드름은 가장 흔한 피부질환 중 하나로 피부 속의 모낭(hair follicle)과 피부의 기름샘인 피지선(sebaceous gland)의 염증성 병변이다. 여드름의 내적 원인은 정신적, 신체적 스트레스에 따라 호르몬 변화 등의 내분비 작용에 의한 피지 분비와 그 성분의 이상, 과다한 피지의 분비에 따른 피지선 또는 모낭의 막힘을 들 수 있다. 외적 원인으로는 피지의 증가로 피지선 안에 살고 있는 여드름 간균(Propionibacterium acnes)에 의한 자극인자가 모낭 상피벽을 자극하기 때문에, 상피내면의 각질이 두꺼워지고, 이 시기에 모낭의 이상 각화로 인한 폐색이 일어나고 모낭 내로 산소유입이 감소한다. 이 현상은 여드름 발병 원인균인 혐기성 P. acnes에 있어서 매우 양호한 발육조건이 되어 여드름 병소에서 증식이 촉진되며 염증이 발생된다. 일반적으로 건강한 피부에는 여드름 간균, 포도상 구균 등 세균(bacteria)이 상재하고 있다. 사람에 따라서 피부 1 cm² 중에 수십부터 수십만 개에 달하는 여드름 간균이 상재해 있으며, 세균보다 큰 모낭충(진드기의 일종)도 기생하고 있다. 모낭충에 의한 여드름은 여드름 간균에 의한 여드름보다도 붉은 기가 매우 강하고 염증도 크게 생긴다.

가르시니아 캄보지아를 이용한 특허문헌으로는, 가르시니아 캄보지아 껍질 추출물을 함유하는 안정한 다이어트용 젤리 조성물 및 그 제조방법(한국등록특허 제10-1211067호), 카르시니아 캄보지아 추출물을 함유한 건강보조식품(한국등록특허 제10-1782134호), 가르시니아 캄보지아 껍질추출물을 함유하는 육류용 소스 조성물 및 그 제조방법(한국등록특허 제10-1397391호), 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물(한국등록특허 제10-1449577호)등이 있다.

본 발명자들은 여드름, 아토피 피부질환의 치료와 보호를 목적으로 염증 개선용 소재를 탐색하였고 친환경적인 천연 소재 중 가르시니아 캄보지아에서 항염 효능 및 여드름, 아토피 개선 효과를 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증 개선용 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 가르시니아 캄보지아 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 가르시니아 캄보지아 추출물은 여드름 방지효과, 아토피 개선 효과, 항염증 효과를 나타내어 피부 염증 개선에 효과가 있다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다. 용어 약이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, 포함하다 및 포함하는 이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명은 가르시니아 캄보지아(Lagerstroemia indica)를 유효 성분으로 함유하는 피부염증 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

가르시니아 캄보지아(Lagerstroemia indica)는 Guttiferae과의 식물로서 인도 남서부에서 자생하는 열대 식물인 ‘가르시니아 캄보지아’열매의 껍질 부위를 사용하며, 껍질에는 기능성분인 히드록시 시트르산(Hydroxycitric acid, HCA)가 약 10~30%가 함유되어 있다. 동남아시아에서는 카레 등의 향신료로 사용되고, 남부 인디안 해안지역에서는 수세기동안 돼지고기 및 생선의 산미제로서 사용되어 왔다. “가르시니아 캄보지아 추출물”은 1969년 Brandeis University의 연구자들이 HCA의 krebs/citric acid cycle 억제제로서의 역할을 제시하여 신체 내에서 탄수화물로부터 지방합성을 감소시킨다는 사실이 연구되기 시작하였으며, 현재 건강식품 및 다이어트 보조 식품등으로 알려져 있다.

본 발명에 있어서, 가르시니아 캄보지아 추출물은 다양한 기관(예: 잎, 뿌리, 줄기, 가지, 여린가지, 껍질, 열매의 껍질 및 종자 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 잎, 여린가지, 줄기, 가지, 껍질, 열매의 껍질 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이고, 보다 바람직하게는 잎, 여린가지, 열매의 껍질 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이며, 가장 바람직하게는 열매의 껍질로부터 얻은 추출물을 의미한다.

또한, 본 발명의 가르시니아 캄보지아 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a)물, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3 - 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 핵산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법, (b)이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 추출법 또는 (c)초음파 추출법을 이용하여 추출한다. 바람직하게는 에탄올 또는 물을 이용하여 추출한 것이고, 더 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 이용하여 추출한 것이다.

한편, 본 발명의 가르시니아 캄보지아 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 가르시니아 캄보지아 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.

지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다.

이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 외용제 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

또한, 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 가르시니아 캄보지아 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는데, 가르시니아 캄보지아의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 가르시니아 캄보지아를 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5.0~7.0으로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5 내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 가르시니아 캄보지아 추출물은 피부 외용제 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 가르시니아 캄보지아 추출물은 피부 외용제 조성물의 총 중량 대비 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 피부 외용제 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 피부 외용제 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물은 바람직하게 화장료 조성물인 것이 좋은데, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 가르시니아 캄보지아 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, 여드름 방지효과, 아토피 개선효과, 항염증 효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 가르시니아 캄보지아 추출물 제조

세절하여 음건한 가르시니아 캄보지아 열매 껍질 100 g 분쇄하고, 이 분쇄물에 70%(v/v) 에탄올 500 mL를 첨가한 다음 60℃ 온도에서 24시간 동안 환류추출하고 냉침하였다. 상기 추출물을 400 메쉬(mesh) 여과포로 여과한 후, 여과지 No.2(Whatman)로 한번 더 여과하였다. 그 후, 감압 농축하여 가르시니아 캄보지아 추출물 20g을 수득하였다.

실시예 2 내지 10: 가르시니아 캄보지아 추출물 제조

추출 용매를 표 1과 같이 변경한 것을 제외하고는, 실시예 1에서와 동일한 방법으로 추출하여 가르시니아 캄보지아 추출물을 얻었다.

구분	추출용매	최종 추출물의 건조 중량(단위:g)
실시예2	정제수	18.2
실시예3	100%(v/v) 에탄올	17.4
실시예4	메탄올	17.2
실시예5	n-프로판올	16.9
실시예6	이소프로판올	15.9
실시예7	2-부탄올	15.0
실시예8	아세톤	14.3
실시예9	클로로포름	15.8
실시예10	에틸아세테이트	16.3

실시예 11: 발효추출법을 이용한 가르시니아 캄보지아 추출물 제조

세절하여 음건한 가르시니아 캄보지아 열매 껍질 100g 분쇄하고, 이 분쇄물에 미생물 배양액을 100 ~ 1,000 L를 첨가하고 효모균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5 내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과한 후, 감압 농축하여 가르시니아 캄보지아 발효추출물 18.7g을 수득하였다.

실시예 12: 초음파추출법을 이용한 가르시니아 캄보지아 추출물 제조

세절하여 음건한 가르시니아 캄보지아 열매 껍질 100g 분쇄하고, 이 분쇄물에 70% 에탄올 500 mL를 첨가한 다음 초음파추출기를 사용하여 28kHz, 진폭 80% 조건에서 초음파를 발생시켜 추출하였다. 온도를 일정하게 유지하기 위하여 25℃로 순환식 항온 수조(Circulator Water Bath)를 연결하여 사용하였다. 그 후 여과 및 감압 농축하여 20.2g의 추출물을 수득하였다.

실시예 13: 초임계추출법을 이용한 가르시니아 캄보지아 추출물 제조

세절하여 음건한 가르시니아 캄보지아 열매 껍질 100g 분쇄하고, 초임계추출용기에 넣고 액체 크로마토그래피 펌프를 이용하여 순수한 이산화탄소를 온도 60℃, 압력 300기압으로 하여 초임계상태를 만들었다. 공용매로 부틸아세테이트를 흘려보내면서 매 5분씩 120분까지 추출물을 수득하였다. 그 후 여과 및 감압 농축하여 4.3g의 추출물을 수득하였다.

실험예 1: 염증성 사이토카인 발현 억제효과 측정

상기 실시예 1 ~ 13에서 제조된 가르시니아 캄보지아 추출물의 항염증 효과를 측정하기 위해 LPS에 의해 유도되는 염증성 사이토카인 발현 억제 정도를 측정하였다.

사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5 X 10개 씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 실시예 1의 가르시니아 캄보지아 추출물과 양성대조군인 NDGA(Nordigydroguaiaretic Acid, 0.001%)을 처리한 후, 4시간 동안 배양하였다. 배양을 한 후, 배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토카인 발현 억제율(%)은 수학식 1에 의해 산출하고, 그 결과를 표 2에 나타냈다.

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량

시료명	처리농도(%)	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
비교예 1 (NDGA)	0.001	37.2
실시예 1	0.005	66.7
	0.001	39.5
실시예 2	0.005	65.2
	0.001	37.7
실시예 3	0.005	62.5
	0.001	37.8
실시예 4	0.005	62.3
	0.001	37.5
실시예 5	0.005	54.6
	0.001	32.7
실시예 6	0.005	52.1
	0.001	31.3
실시예 7	0.005	58.2
	0.001	36.5
실시예 8	0.005	57.5
	0.001	36.2
실시예 9	0.005	42.1
	0.001	24.3
실시예 10	0.005	58.4
	0.001	37.5
실시예 11	0.005	64.4
	0.001	39.0
실시예 12	0.005	66.5
	0.001	39.9
실시예 13	0.005	42.7
	0.001	29.6

표 1에서, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 측정한 결과, 실시예 1 ~ 13의 가르시니아 캄보지아 추출물은 농도 의존적으로 염증성 사이토카인의 발현을 억제하였으며 실시예 1의 가르시니아 캄보지아 추출물은 0.001% 농도에서 염증성 사이토카인의 발현을 39.5% 억제하여 같은 농도의 양성대조군인 NDGA 보다 우수한 효능을 나타내었다. 가르시니아 캄보지아 추출물은 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 확인할 수 있었으며, 상기의 결과로부터 본 발명의 가르시니아 캄보지아 추출물이 항염증 효과가 우수한 것을 확인하였다.

실험예 2: NO 생성 억제능 측정

상기 실시예 1 ~ 13에서 제조된 가르시니아 캄보지아 추출물의 항염증 효과를 측정하기 위해 LPS에 의해 유도되는 NO 생성 억제 정도를 측정하였다.

대식세포는 알레르기성 염증반응을 매개하는 중요한 면역관련세포로서 LPS 와 같은 외부항원 자극시 염증성 사이토카인 유전자 발현과 NF-κB 와 MAPK 같은 신호전달체계를 활성화시킴으로서 이후의 염증반응을 매개함이 잘 알려져 있다. 대식세포(macrophage)인 RAW 264.7 세포를 Dulbecco's modified Eagle's medium 으로 배양하고 대식세포 활성을 위해서는 LPS(lipopolysaccharide ; E. coli B0111:B4; Sigma,USA)를 이용하였다. RAW 264.7 세포를 24 well plate (6 X 10/well)에 DMEM 배지로 분주하고 2시간 동안 플레이팅(plating) 하였다. 여기에 양성대조군인 NDGA(0.001%)과 가르시니아 캄보지아 추출물을 농도별로 처리하고 2시간 후에 LPS (1 μg/ml)를 24시간 처리하였다. 24시간 처리한 세포의 상등액을 Ependorf (EP) 튜브에 옮겨 부유물이 남지 않도록 원심분리하고 그 상등액 100 μl와 Griess reagent 100 μl를 혼합하여 15분 동안 상온에서 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하여 NO 생성량을 측정하였다. NO 생성 억제율(%)은 수학식 2를 이용하여 산출하고, 그 결과를 표 3에 나타냈다.

A : LPS를 처리하고 시료를 첨가하지 않은 웰의 NO 생성량

B : LPS를 처리하고 시료를 첨가한 웰의 NO 생성량

시료명	처리농도(%)	NO 생성 억제율(%)
비교예(NDGA)	0.001	49.8
실시예 1	0.005	86.5
	0.001	64.2
실시예 2	0.005	85.1
	0.001	62.6
실시예 3	0.005	79.4
	0.001	51.2
실시예 4	0.005	80.2
	0.001	52.6
실시예 5	0.005	75.2
	0.001	48.2
실시예 6	0.005	77.1
	0.001	48.4
실시예 7	0.005	72.7
	0.001	44.2
실시예 8	0.005	76.8
	0.001	45.5
실시예 9	0.005	65.1
	0.001	36.3
실시예 10	0.005	76.4
	0.001	46.2
실시예 11	0.005	82.1
	0.001	59.8
실시예 12	0.005	86.5
	0.001	64.1
실시예 13	0.005	65.2
	0.001	32.1

표 3을 보면, LPS에 의해 유도되는 NO 생성 억제효과를 측정한 결과, 실시예 1 ~ 13의 가르시니아 캄보지아 추출물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였다. 특히, 실시예 1의 가르시니아 캄보지아 추출물은 0.001% 농도에서 NO 생성을 64.2% 억제하여 같은 농도의 양성대조군인 NDGA 보다 우수한 효능을 나타내었다. 상기의 결과로 가르시니아 캄보지아 추출물은 LPS에 의한 대식세포의 NO 생성을 낮은 농도에서 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다.

실험예 3: 여드름균에 대한 항균력 측정

상기 실시예 1 ~ 13에서 제조된 가르시니아 캄보지아 추출물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위해 프로피오니박테리움 아크네(Propioni- bacterium acnes)을 대상으로 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다.

먼저, BHI 고체배지에 상기 균주를 0.1㎖씩 도말한 후 건조시켰다. 실시예 1 ~ 13 에서 수득한 가르시니아 캄보지아 추출물을 95% 에탄올 수용액에 12%, 6%(w/v)로 희석하여 직경 8㎜의 페이퍼 디스트(paper disc)에 50㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체배지 위에 올려 놓은 후 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 'Paper disc' 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하고 그 결과를 표 4에 나타냈다.

시료명	처리농도(%)	균 성장 저지환의 크기
실시예 1	12%	22 mm
	6%	14 mm
실시예 2	12%	20 mm
	6%	13 mm
실시예 3	12%	21 mm
	6%	14 mm
실시예 4	12%	21 mm
	6%	14 mm
실시예 5	12%	15 mm
	6%	6 mm
실시예 6	12%	15 mm
	6%	6 mm
실시예 7	12%	19 mm
	6%	12 mm
실시예 8	12%	16 mm
	6%	7 mm
실시예 9	12%	18 mm
	6%	8 mm
실시예 10	12%	16 mm
	6%	8 mm
실시예 11	12%	20 mm
	6%	14 mm
실시예 12	12%	21 mm
	6%	14 mm
실시예 13	12%	16 mm
	6%	7 mm

표 4를 보면, 여드름균에 대한 항균력을 확인한 결과, 실시예 1 ~ 13의 가르시니아 캄보지아 추출물은 농도 의존적으로 여드름 균의 성장을 억제하였다. 특히, 실시예 1의 가르시니아 캄보지아 추출물은 12% 농도에서 여드름 균 성장 저지환의 크기는 22 ㎜으로 항균활성이 우수함을 확인하였다.

실험예 4: 황색포도상구균에 대한 항균 활성 효과

상기 실시예 1 ~ 13에서 제조된 가르시니아 캄보지아 추출물의 황색포도상구균에 대한 항균력을 확인하기 위해 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)을 대상으로 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다.

먼저, TSA고체배지에 상기 균주를 0.1㎖씩 도말한 후 건조시켰다. 실시예 1 ~ 13에서 수득한 가르시니아 캄보지아 추출물을 95% 에탄올 수용액에 12%, 6%(w/v)로 희석하여 직경 8㎜의 페이퍼 디스트(paper disc)에 50㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체배지 위에 올려 놓은 후 이것을 35℃ 호기성 배양조에서 3일간 배양하였다. 'Paper disc' 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하고 그 결과를 표 5에 나타냈다.

시료명	처리농도(%)	균 성장 저지환의 크기
실시예 1	12%	18 mm
	6%	8 mm
실시예 2	12%	16 mm
	6%	5 mm
실시예 3	12%	16 mm
	6%	6 mm
실시예 4	12%	15 mm
	6%	7 mm
실시예 5	12%	10 mm
	6%	3 mm
실시예 6	12%	10 mm
	6%	4 mm
실시예 7	12%	12 mm
	6%	5 mm
실시예 8	12%	13 mm
	6%	4 mm
실시예 9	12%	13 mm
	6%	5 mm
실시예 10	12%	12 mm
	6%	5 mm
실시예 11	12%	18 mm
	6%	7 mm
실시예 12	12%	18 mm
	6%	7 mm
실시예 13	12%	13 mm
	6%	6 mm

표 5를 보면, 황색포도상구균에 대한 항균력을 확인한 결과, 실시예 1 ~ 13의 가르시니아 캄보지아 추출물은 농도 의존적으로 황색포도상구균의 성장을 억제하였다. 특히, 실시예 1의 가르시니아 캄보지아 추출물은 12% 농도에서 황색포도상구균 성장 저지환의 크기는 18 ㎜으로 항균활성이 우수함을 확인하였다.

제조예 1: 가르시니아 캄보지아 추출물을 함유하는 피부 외용제 제조

상기 가르시니아 캄보지아 추출물(실시예 1)을 함유하는 피부 외용제를 제조한 후 피부염 개선 효능에 대한 임상실험을 실시하였다.

제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 6에 나타낸 바와 같이 가르시니아 캄보지아 추출물을 3.0 중량%의 양으로 함유하는 피부염 개선용 피부 외용제 조성물(제조예 1) 및 가르시니아 캄보지아 추출물을 함유하지 않은 피부 외용제 조성물(비교제조예 1)을 제조하였다.

우선 표 6의 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림(제조예 1, 비교제조예 1)을 제조하였다.

(단위: 중량%)

원료		제조예 1	비교제조예 1
가	스테아릴 알콜	8	8
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2	2
나	가르시니아 캄보지아 추출물(실시예1)	3	-
	프로필렌글리콜	5	5
	정제수	100에 대한 나머지	100에 대한 나머지

실험예 5: 아토피성 피부염에 대한 개선효과 측정

제조예 1과 비교제조예 1의 아토피성 피부염에 대한 개선효과를 비교 측정하기 위해 다음과 같이 임상실험을 실시하였다.

5-30세의 아토피 환자로서, 2년 이상 아토피성 피부염을 앓고 있는 환자 30명에 대하여 아토피성 피부염 개선효과를 조사하였다. 동일인에게 왼쪽 손에는 제조예 1을, 오른쪽 손에는 비교제조예 1을 매일 저녁 세정 후, 피부에 1일 1회 60일간 도포하고 아토피성 피부염 상태 개선 정도를 측정하였다. 측정은 설문조사에 의한 관능평가로 실시하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

	매우 좋다	좋다	그저 그렇다
제조예 1	70% (21명)	30% (9명)	0%
비교제조예 1	10% (3명)	20% (6명)	70% (21명)

표 7을 보면, 가르시니아 캄보지아 추출물을 함유하는 외용제의 아토피성 피부염 개선에 대한 개선효과를 측정한 결과, 가르시니아 캄보지아 추출물을 첨가하여 제조한 제조예 1이 비교제조예 1보다 아토피성 피부개선효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었다. 상기의 결과로부터 본 발명의 피부 염증 개선용 외용제 조성물의 우수한 아토피성 피부염 개선효과를 확인할 수 있었다.

실험예 6: 표피 수분 손실량(Trans Epidermal Water Loss: TEWL ) 측정

제조예 1과 비교제조예 1의 표피 수분 손실량에 대한 개선효과를 비교 측정하기 위해 다음과 같이 임상실험을 실시하였다.

실험은 상박에 Taping stripping Method를 이용하여 피부의 장벽을 손상시킨 후, 표피 수분 손실량(TEWL,transdermal water loss)을 servomed사(스웨덴) evaporimeter EP1으로 측정하여 4.0g/㎡/h에 도달하면, 제조예 1과 비교제조예 1을 각각 5㎠ 면적에 도포한 후, 표피 수분 손실량을 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 경과 후에 측정하여 감소되는 정도를 평가하였다. 결과는 초기 상태에서의 표피 수분 손실량을 기준(100%)으로 하여 시간에 따른 변화를 비교하여 하기 표 8에 나타내었다.

	0시간	1시간	2시간	4시간	8시간
제조예 1	85	63	35	21	21
비교제조예 1	85	70	60	50	41

가르시니아 캄보지아 추출물을 함유하는 외용제의 표피 수분 손실량 개선에 대한 개선효과를 측정한 결과(표 8), 가르시니아 캄보지아 추출물을 첨가하여 제조한 제조예 1이 비교제조예 1보다 표피 수분 손실량 개선 효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (4)

1. 삭제
2. 가르시니아 캄보지아 추출물을 피부 외용제 조성물의 총 중량 대비 0.001 ~ 30.0 중량%의 함량으로 유효성분으로서 함유하고, 상기 가르시니아 캄보지아 추출물은 발효 추출법, 초음파 추출법 및 초임계 추출법으로 이루어진 군에서 선택된 추출법으로 추출되고, 아토피 피부 개선 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물.
3. 가르시니아 캄보지아 추출물을 피부 외용제 조성물의 총 중량 대비 0.001 ~ 30.0 중량%의 함량으로 유효성분으로서 함유하고, 상기 가르시니아 캄보지아 추출물은 발효 추출법, 초음파 추출법 및 초임계 추출법으로 이루어진 군에서 선택된 추출법으로 추출되고, 여드름 예방 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 피부 염증 개선용 피부 외용제 조성물.
4. 삭제