KR20140125937A

KR20140125937A - 트리터페노이드 화합물 또는 이를 포함하는 복분자 추출물을 포함하는 미백 조성물

Info

Publication number: KR20140125937A
Application number: KR1020130043437A
Authority: KR
Inventors: 정대균; 백윤수; 방면호; 이도경; 한민희; 박원만
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2013-04-19
Filing date: 2013-04-19
Publication date: 2014-10-30

Abstract

본 발명은 복분자 부탄올 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물 및 그 제조 방법에 대한 것이다. 상기 복분자 부탄올 분획물은 트리터페노이드계 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함한다.

Description

트리터페노이드 화합물 또는 이를 포함하는 복분자 추출물을 포함하는 미백 조성물{SKIM BRIGHTENING COMPOSITION CONTAINING TRITERPENOID COMPOUND OR RUBUS COREANUS MIG. CONTAINING IT}

본 발명은 트리터페노이드 화합물 또는 이를 포함하는 복분자 추출물을 포함하는 미백 조성물에 대한 것이다.

복분자(Rubus coreanus Mig.)는 한국, 일본, 대만 등에 분포하는 식물로, 우리나에는 황해도 이남의 중남부지방 해발 50~1000 m 지역의 산기슭 양지에 자생하고 있으며, 근연종인 청복분자딸기 (Rubus coreanus for. Concolor T.Lee)는 경남 해안지역에 주로 자생한다. 복분자 딸기의 익지 않은 열매(미숙과)는 복분자라고 하여 한약재로 널리 쓰이고 있다.

본초강목에 의하면 복분자의 성미는 달고 평하며 독이 없다고 한다. 또한 복분자는 간, 신경에 들어가면 기운을 돕고 몸을 가볍게 하며 머리털을 희어지지 않게 하는 익기경신(명의별록), 자양강장(당본본초), 보간명목(당본본초)의 효능이 있다고 알려져 있다. 민간에서는 복분자의 잎과 꽃을 우린 액으로 치질, 눈의 염증을 치료하고 신경쇠약, 고혈압, 동맥경화에 쓴다. 또한 복분자의 뿌리는 알레르기 또는 감염성인 오래된 기관지 천식, 습진 등 알레르기성 질병에 달여 먹는다. 잎을 우린 물은 설사멎이약, 피멎이약으로 쓴다. 꽃 달인 물은 자궁염증, 신경쇠약, 급성 및 만성 감염성질병에 쓰며, 뱀이나 벌레에 물렸을 때 약으로 쓴다.

최근에는 복분자 술을 민속주로 개발하여 생산, 판매하고 있으며, 칼로리가 가장 적은 식이성 과일로도 인식되어 다이어트식품으로 여성들에게 널리 선호되면서 그 소비량이 증가하고 있다.

한편, 사람의 피부 표피 기저층에 존재하는 멜라닌 생성세포(melanocytes)는 자외선, 방사선 등의 자극을 받게 되면서 타이로시나아제(tyrosinase)가 활성화가 되어 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되고 도파크롬(dopachrome)을 거쳐 최종적으로 검은색 및 갈색의 멜라닌을 생성하게 된다. 멜라닌 생합성 과정은 최근 집중적으로 연구되고 있고, 이 연구 결과는 다양한 멜라닌 생성 저해 물질을 이용한 치료제 및 미백용 제품에 적용되고 있다.

현재 코직산, 알부틴, 레티놀 등의 기능성 성분들이 화장료에 사용되고 있는데, 이들은 햇빛 등에 안정하지 않아 낮 시간대에 사용이 곤란하거나, 민감성 피부에 적용이 제한되거나, 타 기능성 성분과의 혼합 적용이 적당하지 않은 등의 문제가 있다. 이에 본 발명자들은 미백 효능을 갖는 소재를 추가로 연구하던 중 복분자 분획물 및 이로부터 분리한 화합물의 미백 효능이 뛰어난 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 미백 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 복분자 부탄올 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

이 때, 상기 R은 COOH, CH2OH, H, OH, CH3, CH2COOH, OCH3, 및 COH로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.

또한 본 발명은 복분자를 알코올로 추출하는 단계;

상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계;및

상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 복분자를 알코올로 추출하는 단계;

상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계;

상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계;및

상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하고, 7 번 째 분획물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 미백 조성물은 멜라닌 생성 억제능을 갖는다.

도 1은 Fr.-1 내지 Fr.-12 분획물들의 멜라닌 생성 억제능을 나타낸다.
도 2는 Fr.-7-1 내지 Fr.-7-14 분획물들의 멜라닌 생성 억제능을 나타낸다.
도 3은 Fr.-7-11-1 내지 Fr.-7-11-4 분획물들의 멜라닌 생성 억제능을 나타낸다.
도 4는 Fr.-7-11-2로부터 정제, 분리된 단일 화합물의 1H-NMR 결과이다.
도 5는 Fr.-7-11-2로부터 정제, 분리된 단일 화합물의 13C-NMR 결과이다.
도 6은 Fr.-7-11-2로부터 정제, 분리된 단일 화합물의 DEPT 135 측정 결과이다.

본 발명은 복분자 부탄올 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물에 대한 것이다.

또한 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물에 대한 것이다.

<화학식 1>

또한 본 발명은,

복분자를 알코올로 추출하는 단계;

상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법에 대한 것이다.

또한 본 발명은,

복분자를 알코올로 추출하는 단계;

상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계;및

상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하고, 7 번 째 분획물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법에 대한 것이다.

이하 본 발명을 자세히 설명한다.

복분자

본 발명의 복분자는 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 본 발명의 복분자는 재배 또는 야생 복분자이며, 생과 또는 건조 복분자일 수 있다. 본 발명의 복분자는 복분자의 줄기, 종자, 잎, 뿌리 등일 수 있으며, 바람직하게는 잎이다.

복분자 부탄올 분획물

본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 복분자 추출물을 부탄올로 분획한 분획물이다.

본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 복분자를 알코올로 추출한 후, 상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻고, 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하여 수득할 수 있다.

바람직하게는 본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 복분자를 알코올로 추출한 후, 상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻고, 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출한 후, 상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 7 번 째 분획물일 수 있다.

더욱 바람직하게는 본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 상기 7 번째 분획물을 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 11 번 째 분획물일 수 있다.

더더욱 바람직하게는 본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 상기 7 번째 분획물을 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하고, 이를 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 2 번 째 분획물일 수 있다.

이 때, 상기 알코올은 탄소수 5 이하의 저가 알코올일 수 있으며, 바람직하게는 탄소수 3 이하의 저가 알코올이고, 더욱 바람직하게는 에탄올이다.

본 발명의 복분자 부탄올 분획물은 트리터페노이드계 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함한다. 바람직하게는 상기 트리터페노이드계 화합물은 하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염이다. 더욱 바람직하게는 상기 R은 COOH이다. 상기 염은 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.

<화학식 1>

피부 미백용 조성물

본 발명의 피부 미백용 조성물은 복분자 부탄올 분획물를 포함할 수 있으며, 상기 복분자 부탄올 분획물은 트리터페노이드계 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 피부 미백용 조성물은 하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함할 수 있다.

<화학식 1>

이 때, 상기 R은 COOH, CH2OH, H, OH, CH3, CH2COOH, OCH3, 및 COH로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나이며, 바람직하게는 상기 R은 COOH이다. 또한 상기 염은 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 조성물은 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.

화장료 조성물

본 발명의 피부 미백용 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 미백(화이트닝), 피부 톤의 균일화, 잡티 완화, 브라이트닝 등의 효능을 갖는다.

본 발명의 화장료 조성물은, 당업계의 통상적으로 제조되는 어떠한 제형에도 제조될 수 있으며 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 제형으로 제조될 수도 있다.

약학적 조성물

본 발명의 약학적 조성물은 전체적 또는 부분적인 멜라닌 이상 과다에 의한 색소 질환 또는 멜라닌 세포 이상 증식에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물일 수 있다. 상기 멜라닌 이상 과다에 의한 색소 질환 또는 멜라닌 세포 이상 증식에 의한 질환은 악성흑색종, 색소 침착, 기미, 주근깨, 흑자, 기미, 주근깨, 잡티, 오타모반, 밀크반점, 피부염증 후의 피부흑화 및 노인성 색소반점으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물 100 중량부에 대하여 본 발명의 복분자 부탄올 분획물 또는 본 발명의 트리터페노이드계 화합물을 0.001 내지 99.99 중량부 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.001 내지 30 중량부 포함할 수 있다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 조성물 100 중량부에 대하여 본 발명의 화합물을 0.001 내지 20 중량부 포함할 수 있다. 그러나 이는 투약자의 필요에 따라 증감할 수 있으며, 식생활, 영양 상태, 병의 진행 정도 등 상황에 따라 적절히 증감할 수 있다. 또한 본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 화합물을 약학적으로 허용되는 담체와 함께 적합한 형태로 제형화 될 수 있다. ‘약학적으로 허용되는’이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 바람직한 약제학적 제제는 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제가 있으며 이들 약제학적 제제는 약제학적으로 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다. 또한 본 발명의 약학적 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제 등과 같은 비경구 투여용 제제로 사용되는 것 역시 바람직하다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 용량은, 환자의 상태, 연령, 성별 및 합병증 등의 다양한 요인에 따라 전문가에 의해 결정될 수 있지만 일반적으로는 성인 1kg 당 0.1㎎ 내지 10g, 바람직하게는 10 mg 내지 5g의 용량으로 투여될 수 있다. 또, 단위 제형당 상기 약학적 조성물의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

식품 조성물

본 발명의 식품은 건강보조식품, 건강기능식품, 기능성 식품 등이 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 천연식품, 가공식품, 환자식품, 일반적인 식자재 등에 본 발명의 화합물을 첨가하는 것도 포함된다.

본 발명의 식품 조성물은, 상기 본 발명의 복분자 부탄올 분획물 또는 본 발명의 트리터페노이드계 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 복분자 부탄올 분획물 또는 본 발명의 트리터페노이드계 화합물은, 식품 또는 음료의 제조 시에 식품 또는 음료의 원료 100 중량부에 대하여 0.001 내지 99.99 중량부, 바람직하게는 0.001 내지 30 중량부 첨가될 수 있다. 상기 복분자 부탄올 분획물 또는 트리터페노이드계 화합물의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 상기 성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.

상기 화합물 또는 본 발명의 항염증 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제, 기타 영양제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.

피부 미백용 조성물의 제조 방법

본 발명은 복분자를 알코올로 추출하는 단계; 상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계;및 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법에 대한 것이다.

또한 본 발명은, 복분자를 알코올로 추출하는 단계; 상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계; 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계;및 상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하고, 7 번 째 분획물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법에 대한 것이다.

바람직하게는 본 발명은 상기 7 번째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

더욱 바람직하게는 본 발명은 상기 7 번째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하는 단계;및 상기 11 번 째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 2 번 째 분획물을 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

재료 및 방법

복분자는 시판되는 국내산 복분자(전남 생약단지 생산)를 구입하여 사용하였다. C57BL/6 마우스에서 유래한 불멸화 세포주(immortalized cell line)인 melan-A 세포는 Dr. Bennett (Cancer Research Center, London, England)로부터 분양받아 사용하였다. Melan-A 세포는 10% FBS, 200nM 12-O-테트라데카노일포르볼-13-아세테이트(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate), 100 mg/L의 스트렙토마이신(streptomycin), 100 IU/ml의 페니실린(penicillin)이 포함된 RPMI 1640 배지를 사용하여 37℃, 10% CO2 조건하에서 배양하여, 시험에 사용하였다.

멜라닌 생성 억제능은 하기와 같이 시험하였다. Melan-A 세포가 배양기에서 가득(confluent) 자라면 0.25% 트립신/EDTA로 세포를 떼어내서 24 웰 플레이트에 웰당 1x105개를 주입하였다. 그리고 24시간 동안 세포가 플레이트에 잘 부착하도록 기다렸다가 PBS로 한 번 세척한 후, FBS가 함유되지 않은 배양 배지에 시료를 첨가하여 세포에 처리하였다. 이 때, 시료를 DMSO에 원하는 농도의 1000배가 되도록 녹인 후, 세포에 처리시 1000분의 1로 희석하여 사용하였다. 상기 시료를10 μM의 농도로 세포에 3일간 처리한 후, 멜라닌의 양을 측정하였다. 상기 멜라닌 양의 측정은 하기와 같이 수행하였다. 먼저, 1N NaOH에 10% DMSO가 포함된 용액으로 세포를 녹여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그리고 상기 파쇄액으로부터 다시 브래드포드(Bradford)법에 의하여 총 단백질 양을 구한 후, 이를 일정 단백질 당 멜라닌 양으로 산출하였다. 그리고 이를 시료 무처리군의 일정 단백질 당 멜라닌 양(100 %)에 대한 상대적인 비율로 환산하여 각 시료의 멜라닌 활성 억제능을 평가하였다.

이 때, 대조군으로, N-페닐티오유리아(N-phenylthiourea)를 이용하였으며, N-페닐티오유리아는 시료와 같은 농도로 처리하여 시험을 수행하였다.

복분자 n-부탄올 분획물은 하기 방법으로 제조하였다. 먼저, 복분자 잎 6 kg를 음지에서 건조하고 세절한 다음, 80% 에탄올을 이용하여 실온에서 3일 동안 자기 교반기로 교반하면서 추출을 수행하여 복분자 에탄올 추출물을 얻었다. 상기 복분자 에탄올 추출물을 여과하고 40 ℃에서 감압농축기를 이용하여 농축하였다. 그 결과, 생성된 검질 덩어리 460 g을 물에 현탁하고, 이를 에틸아세테이트(ethyl acetate, 3 L X 3)와 물(3 L)로 분배 추출하고, 상기 물 층을 n-부탄올(n-BuOH, 3 L ｘ 3)로 분배 추출하였다. 그리고, 각 층을 감압 농축하여, 에틸아세테이트 분획물(280g), n-부탄올 분획물(120g) 및 물 분획물(42g)을 수득하였으며, 상기 n-부탄올 분획물을 이용하여 하기 시험들을 수행하였다.

<실험예 1>

상기 n-부탄올 분획물에 대하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (c.c.)(Φ 12 ｘ 20 cm, CHCl3-MeOH = 49:1 → 19:1 → 9:1 → 4:1 → 1:1)를 실시하여 100mL씩 분취하였다. 각 분취액을 SiO2 TLC로 확인하여, 유사한 부분들을 함께 모으고, 농축하여 12 개의 분획물을 얻었다(Fr.-1 내지 Fr.-12. 각 분획물의 번호는 크로마토그래피 하단에서부터 넘버링하였다).

각 분획물들을 Melan-A 세포에 처리하여 멜라닌 생성 억제능을 평가하였다. 그 결과, Fr.-7 분획이 대조군인 N-페닐티오유리아 및 다른 분획물들보다 멜라닌 생성 억제 활성이 유의하게 높은 것으로 확인되었다(도 1).

<실험예 2>

상기 실험예 1에서 멜라닌 억제능이 높은 것으로 확인된 Fr.-7 분획(1.8g)에 대하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Kiesel gel 60, 머크)(실리카겔 c.c.)(Φ 2 ｘ 10 cm, n-헥산-아세톤 = 4:1 → 2:1 → 1:1 → MeOH)를 실시하여 14개의 분획물을 얻었다(Fr.-7-1 내지 Fr.-7-14, 각 분획물의 번호는 크로마토그래피 하단에서부터 넘버링하였다).

상기 분획물들을 각각 Melan-A 세포에 처리하여 멜라닌 생성 억제능을 평가하였다. 그 결과, Fr.-7-11 분획이 대조군인 N-페닐티오유리아 및 다른 분획물들보다 멜라닌 생성 억제 활성이 유의하게 높은 것으로 확인되었다(도 2).

<실험예 3>

상기 실험예 2에서 멜라닌 억제능이 높은 것으로 확인된 Fr.-7-11 분획(321 mg)에 대하여 옥타데실 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(ODS c.c.)(φ 3 cm × 6 cm, MeOH-H2O = 2:1)를 실시하여 4개의 분획물을 수득하였다((Fr.-7-11-1 내지 Fr.-7-11-4, 각 분획물의 번호는 크로마토그래피 하단에서부터 넘버링하였다).

상기 분획물들을 각각 Melan-A 세포에 처리하여 멜라닌 생성 억제능을 평가하였다. 그 결과, Fr.-7-11-2 분획이 대조군인 N-페닐티오유리아 및 다른 분획물들보다 10 μM 수준에서 멜라닌 생성 억제 활성이 유의하게 높은 것으로 확인되었다(도 3).

<실험예 4>

상기 실험예 3에서 수득한 Fr.-7-11-2(75 mg)에 대하여, Sephadex LH-20을 충진시킨 컬럼크로마토그래피(Φ 1 ｘ 100 cm)를 실시하고, 최종 정제를 하여 단일화합물을 분리하였다. 상기 화합물에 대하여 VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 핵자기 공명 분석(Bruker AMX 500)을 통하여 1H-NMR, 13C-NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Hetronuclear Multiple-Bond Correlation), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 수득하였다(도 4 내지 6), 그 결과 및 Jang et al.(Dae Sik Jang; Jong Min Kim; Ga Young Lee; Joo Hwan Kim; Jin Sook Kim Ursane-type Triterpenoids from the Aerial Parts of Potentilla discolor Agric. Chem. Biotechnol. 2006, 49(2), 48-50)로부터 상기 화합물의 분자구조를 결정하였다.

측정 결과는 하기 화학식 2와 같으며, 화학식의 화합물은 우르솔산(ursolic acid)(3β-hydroxy-urs-12-en-28-oic acid) [Fr.-7-11-2, 75 mg, TLC(RP-18 F254S) Rf 0.55, MeOH-H2O = 2:1]으로 동정되었다:

<화학식 2>

1) 백색 분말 고체

2) ESI-MS: m/z 457 [M+H]⁺ (calcd. for C28H36O13: 456.3760)

3) ¹H-NMR(400 MHz, pyridine-d5) 5.48 (1H, t-like, H-12), 3.46 (1H, dd, J = 9.0, 7.2 Hz, H-3), 2.68 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-18), 1.26 (3H, s, H-23), 1.22 (3H, s, H-27), 1.05 (3H, s, H-26), 1.02 (3H, s, H-24), 0.99 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-30), 0.95 (3H, d, J = 5.4 Hz, H-29), 0.89 (3H, s, H- 25)

¹³C-NMR(100 MHz, pyridine-d5) 180.0 (C-28), 139.3 (C-13), 125.7 (C-12), 78.2 (C-3), 55.9 (C-5), 53.9 (C-18), 48.1 (C-9), 42.6 (C-17), 40.0 (C-14), 39.9 (C-19), 39.8 (C-20), 39.8 (C-4), 39.7 (C-8), 39.2 (C-1), 37.8 (C-22), 37.7 (C-10), 33.7 (C-7), 31.7 (C-21), 28.9 (C-23), 28.8 (C-15), 28.2 (C-2), 25.0 (C-16), 24.0 (C-27), 23.7 (C-11), 21.5 (C-30), 18.6 (C-6), 17.6 (C-26), 17.5 (C-29), 16.7 (C-24), 15.7 (C-25)

Claims

복분자 부탄올 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 복분자를 알코올로 추출한 후, 상기 복분자 에탄올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻고, 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하여 수득하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 복분자를 알코올로 추출한 후, 상기 복분자 에탄올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻고, 상기 물 층을 부탄올로 분배 추출한 후, 상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 7 번 째 분획물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 상기 7 번째 분획물을 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 11 번 째 분획물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 상기 7 번째 분획물을 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하고, 이를 다시 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 수득한 2 번 째 분획물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 트리터페노이드계 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 복분자 부탄올 분획물은 하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.

<화학식 1>

이 때, 상기 R은 COOH, CH2OH, H, OH, CH3, CH2COOH, OCH3, 및 COH로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
제 7항에 있어서,
상기 R은 COOH인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 1항에 있어서,
멜라닌 생성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
하기 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.

<화학식 1>

이 때, 상기 R은 COOH, CH2OH, H, OH, CH3, CH2COOH, OCH3, 및 COH로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
제 10항에 있어서,
상기 R은 COOH인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제 10항에 있어서,
멜라닌 생성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
복분자를 알코올로 추출하는 단계;
상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계;및
상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법.
복분자를 알코올로 추출하는 단계;
상기 복분자 알코올 추출물을 에틸아세테이트 및 물로 분배 추출하여 물 층을 얻는 단계;
상기 물 층을 부탄올로 분배 추출하는 단계;및
상기 분배 추출된 부탄올 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하고, 7 번 째 분획물을 수득하는 단계를 포함하는 피부 미백용 조성물의 제조 방법.
제 14항에 있어서,
상기 7 번째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
제 14항에 있어서,
상기 7 번째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 11 번 째 분획물을 수득하는 단계;및
상기 11 번 째 분획물을 오픈 컬럼 크로마토그래피를 하여 2 번 째 분획물을 수득하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
제 14항에 있어서,
상기 피부 미백용 조성물은 멜라닌 생성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 제조 방법.