JP2005281224A - 美白剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 安全かつ安定性に優れたより強い美白作用を発揮する美白剤を提供する。
【解決手段】 人工栽培により得られたハナビラタケ子実体及び／又は液体培養法により得られた菌糸体の乾燥粉末そのものあるいはそれらから、クロロホルムもしくはエタノール及びアセトン及びヘキサンを用いて抽出を行い、得られた抽出溶液を減圧下に留去して得られた成分を有効成分として含有した美白剤ならびにこの美白剤を含有することを特徴とする化粧料および飲食品。
【選択図】 なし

Description

本発明は、ハナビラタケから得られる美白剤に関する。

女性にとって美容上最も多い悩みの一つに皮膚のしみ、そばかすがある。かかるしみ、そばかすは、一般に紫外線による刺激やホルモン異常等によってメラノサイトが刺激され、続いてメラニン生成の鍵酵素であるチロシナーゼが活性化されることによってメラニン色素が産生され、生成したメラニン色素が隣接細胞へ拡散、沈着することによって生じると考えられている。

このようなメラニン色素の沈着を正常皮膚色にまで回復することが可能な物質の開発が強く望まれており、これまでに多くの物質が商品化されてきている。例えば、アスコルビン酸類、コウジ酸、ハイドロキノン誘導体等のメラニン生成抑制剤を化粧品に配合し、これを皮膚に塗布することによって治療する方法が主に用いられてきた。

一方、キノコ類は古くから食用として利用されているが、最近その成分の生理活性が明らかにされ、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン（いずれも商品名）などは、医薬品としてその有用性が認められており、アガリクス、メシマコブ、霊芝などは免疫腑活作用や抗腫瘍作用を期待して、子実体や菌糸体の乾燥物や抽出物を健康食品素材として利用することが試みられている（例えば、特許文献１、２及び３参照）。

このようなキノコ類に属するハナビラタケは、カラマツに生えるキノコであって、非常に僅少なキノコである。歯ごたえがよく、その純白の色合いと葉牡丹のような形態が特徴である食用キノコである。これまで、このハナビラタケは成長が遅く人工栽培は非常に困難であるとされてきたが、最近になって、比較的短期間で栽培可能な新しい栽培法が確立され、商業規模での供給が可能となってきている。

このハナビラタケの子実体について溶媒でβ−グルカンを抽出する方法が提案され、その抽出物について医薬品分野での用途が提案されている（例えば、特許文献４及び５参照）。

一方、キノコ類由来の美白効果を有する素材としては、シメジ科、モエギタケ科、ハリタケ科、サルノコシカケ科、カンゾウタケ科、キコブタケ科、シロキクラゲ科、ノボリリュウ科、ショウロ科、スッポンタケ科、アミタケ科およびヒラタケ科からなる群より選択される担子菌の培養液又は菌体の抽出液（特許文献６参照）、イグチ科に属するアメリカウラベニイロガワリ、アシベニイグチ、イロガワリ、ウツロベニハナイグチ、アカジコウ、ヤマドリタケモドキ、ドクヤマドリ、ニセアシベニイグチ 、コガネヤマドリ、コウジタケ、キノボリイグチ、シロヌメリイグチ 、ヌメリツバイグチ、ハナイグチ、ヌメリイグチ 、アカヤマドリ、キンチャヤマイグチ、ヤマイグチ 、アケボノアワタケ 、ホオベニシロアシイグチ、ニガイグチ 、コショウイグチ、ウツロイイグチ、オオキノボリイグチ、ヌメリコウジタケ、ハンノキイグチ、アミハナイグチ、キヒダタケ 、ヒダハタケ、クリカワヤシャイグチ、クロアザアワタケから選ばれる担子菌の抽出物（特許文献７参照）、キコブタケ属キノコの抽出物などが知られている（特許文献８参照）。

しかし、ハナビラタケの抽出物が美白効果を有することはこれまで知られていなかった。
特開２００１−１０９７０号公報 特開２００１−１３１０８３号公報 特開２００３−１８３１７６号公報 特開２０００−２１７５４３号公報 特開２００２−１２５４６０号公報 特開平７−３１６０３５号公報 特開平９−２２７３３３号公報 特開２００３−７３２２５号公報

上記のような化合物は、実用レベルでは利用しにくかったり、化粧料用途に限られていたりという問題がある。すなわち、アスコルビン酸類は安定性に難があり、コウジ酸は発ガンの可能性が指摘されている。ハイドロキノン誘導体も一応効果が認められているが、刺激性及びアレルギー性を有していることから安全性に問題があり、薬剤として配合することには問題がある。

一方、特許文献３記載のシメジ科、モエギタケ科、ハリタケ科、サルノコシカケ科、カンゾウタケ科、キコブタケ科、シロキクラゲ科、ノボリリュウ科、ショウロ科、スッポンタケ科、アミタケ科およびヒラタケ科からなる群より選択される担子菌の培養液又は菌体の抽出液及び特許文献４記載のイグチ科に属するアメリカウラベニイロガワリ、アシベニイグチ、イロガワリ、ウツロベニハナイグチ、アカジコウ、ヤマドリタケモドキ、ドクヤマドリ、ニセアシベニイグチ 、コガネヤマドリ、コウジタケ、キノボリイグチ、シロヌメリイグチ 、ヌメリツバイグチ、ハナイグチ、ヌメリイグチ 、アカヤマドリ、キンチャヤマイグチ、ヤマイグチ 、アケボノアワタケ 、ホオベニシロアシイグチ、ニガイグチ 、コショウイグチ、ウツロイイグチ、オオキノボリイグチ、ヌメリコウジタケ、ハンノキイグチ、アミハナイグチ、キヒダタケ 、ヒダハタケ、クリカワヤシャイグチ、クロアザアワタケから選ばれる担子菌の抽出物は美白効果のみならず保湿効果も併せ持った素材である。特許文献５記載のキコブタケ属キノコの抽出物も美白効果のみならず保湿効果、抗シワ効果さらには抗炎症効果も有しており、優れた素材である。しかし、上記のキノコ由来の素材はいずれも化粧料用途に限られているのが現状である。

本発明は、安全かつ安定性に優れたより強い美白作用を発揮する素材を提供するとともに、そのような美白剤を含有した化粧料および摂取することによっても美白効果を十分発揮することができる飲食品を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意研究を行った結果、ハナビラタケ子実体及び／又は菌糸体、さらにはそれらからの特定の抽出物が美白効果を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体、もしくはそれらからクロロホルムまたはエタノール及びアセトン及びヘキサンを用いて抽出される画分を有効成分として含有することを特徴とする美白剤を要旨とするものであり、好ましくは、経口投与剤であるものである。

また、別の本発明は、前記の美白剤を含有することを特徴とする化粧料を要旨とするものである。

さらに、別の本発明は、前記の美白剤を含有することを特徴とする飲食品を要旨とするものである。

本発明によれば、美白作用に優れた美白剤を提供できる。また、食用キノコであるハナビラタケを原料としているため、極めて安全性が高いことから、化粧料に含ませて用いることができる他、経口投与剤として、あるいは食品に含ませて用いることもできる。

以下、本発明を詳細に説明する。

ハナビラタケは、標高1千メートル以上のカラマツ等の針葉樹に特異的に発生するキノコで、発見することが難しいために「幻のキノコ」と言われてきた。これまで、その栽培は難しく、一般にはあまり知られていなかったが、近年、人工栽培方法が確立され、量産されるに至った。

本発明で用いられるハナビラタケ子実体は、天然のものでも人工栽培されたものでもよい。人工栽培の方法としては、従来から知られている人工栽培用の菌床を作成することにより行うことができる（詳細は、例えば、特開平１１−５６０９８号公報、特開２００２−３６９６２１号公報、特開２００２−１２５４６０号公報参照）。

また、本発明においては、ハナビラタケの菌糸体も用いることができる。菌糸体は液体培養法によって得ることができる。培地に使用する炭素源としては、グルコースなどの単糖の他、デキストリン、グリセロールなど通常用いられる炭素源が使用できる。また、窒素源としては無機又は有機窒素源が使用できるが、生育速度の観点からは有機窒素源を用いるほうが好ましい。また、必要に応じて微量元素やビタミン等の生育因子を添加することは通常の培養と何ら変わりはない。培養温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、２０℃〜２５℃が最も好ましい。ｐＨは２．５〜８．０、好ましくは３．０〜７．０、３．５〜５．０が最も好ましい。培地成分には不溶成分を添加することが均一に生育させることができることから好ましい。培養期間は菌株により、数日から数週間程度に設定されうる。

このようにして得られたハナビラタケの子実体あるいは菌糸体は、生のままで次の抽出工程に移してもよいし、乾燥し、必要により粉末化などの加工をしてから抽出工程に移してもよい。

本発明における有効成分はハナビラタケに含まれており、生のハナビラタケでも効果を得ることができる。さらに効果を高めるためには、有効成分を抽出、濃縮することが望ましい。その際、有機溶剤又は水溶液による抽出操作によって活性物質を得ることができる。有機溶剤としてはアルコール、アセトニトリル、酢酸エステル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、グリコール、エーテル、ＴＨＦ、アセトン、塩化メチレン、クロロホルム、ヘキサン、シクロヘキサンなどが挙げられる。また、水溶液は純水、酸水溶液、アルカリ水溶液、塩溶液などを用いることができる。抽出にはこれら溶剤を単独で又は２種類以上を混合して用いることができるが、特にエタノール、アセトンおよびクロロホルム、ヘキサンが好ましい。

抽出に用いる溶剤の量に特に制限はないが、ハナビラタケ重量に対して２〜２０倍量を用いることが好ましい。２倍量以下では操作性が、２０倍量以上では作業効率が悪い。

また、抽出は１種又は複数種の溶剤を用いて、複数回行うこともできる。複数回行う場合は、ハナビラタケからの抽出でもよいし、ハナビラタケから得られた抽出画分をさらに抽出してもよい。また、それらを組み合わせて行うことができる。

抽出操作の際の温度は、特に制限はないが１０〜６０℃が好ましい。１０℃以下では抽出効率が悪く、６０℃以上ではハナビラタケが変色し、抽出物に色が付くなどする。抽出時間にも特に制限はないが、１時間〜３日間程度が好ましい。１時間以下では抽出量が少なく、３日間以上では作業効率が低い。また、抽出は静置のまま行うこともできるが、撹拌又は振盪などすることによって抽出効率を高めることができる。

本発明の美白剤は、以上のように、ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体の乾燥粉末または以上のようにして得られた抽出画分を有効成分として含有するものである。本発明においては、以上のようにして得られた抽出画分をさらに分画、濃縮して含ませることも可能である。分画、濃縮の方法としては、溶媒抽出、乾燥などの周知の分離手段が用いられる。

本発明の美白剤は、通常、ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体もしくはそれらの抽出画分を０．００５〜１００質量％配合するのが好ましい。さらに好ましくは、０．０１〜９０質量％配合するのが好ましい。この範囲であれば製剤化が容易であり、また生体が効率よく有効成分を吸収することができる。

本発明の美白剤の形態は、適用の仕方に応じて種々の形態にすることができる。経口投与する場合には、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができ、皮膚に直接塗り込む場合には、ローション、乳剤、クリーム、軟膏等とすることができる。これらのうち、経口投与剤とすることが労力を要することなく簡単に服用することが可能であるため好ましい。

製剤には薬剤的に許容できる種々の担体を加えることができる。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、コーティング剤を含むことができるが、これらに限定されない。本発明の美白剤を持続性、徐放性のものとしてもよい。

本発明の美白剤の有効成分は、ハナビラタケ子実体又は菌糸体に由来するものであり、ハナビラタケ子実体は食経験があり極めて安全なキノコである。この点から、本発明の美白剤の服用量は厳しく制限されるものではないと考えられるが、概ね、下限は予防又は治療という目的に応じた効果を発揮しうる量を、上限は服用のしやすさ、経済性等の観点から実際的な量を基準とし、通常、ハナビラタケ子実体乾燥物に換算して成人１日あたり約５ｍｇ〜約５００ｇ、好ましくは約５０ｍｇ〜約５０ｇを服用すればよい。もちろん、服用する者の年齢、体重、症状、服用期間、治療経過等に応じて変化させることもできる。１日あたりの量を数回に分けて投与することもできる。また、他の美白剤と組み合わせて服用することもできる。

本発明の化粧料は、上記した美白剤を含有するものである。美白剤の配合量としては、０．００１〜８０質量％が好ましい。配合量が０．００１％以下であると十分な効果が得られなくなり、８０％以上であると化粧料の安定性に影響を及ぼすことがある。

本発明の化粧料は、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる水性成分、油性成分、植物抽出液、動物抽出液、粉末、界面活性剤、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することにより調整される。形態としては、ローション（液状皮膚外用剤、化粧水など）、乳剤（乳液状ファンデーション、Ｏ／Ｗ乳化型美容液など）、クリーム（Ｏ／Ｗ乳化型クリーム、メイクアップベースクリーム、ハンドクリームなど）、軟膏（Ｏ／Ｗ型乳剤性軟膏など）、粉末（入浴化粧料など）等の形態をとることができる。また本発明の化粧料は、既存の柔軟性化粧水、収れん性化粧水、洗浄用化粧水等の化粧水類、エモリエントクリーム、モイスチュアクリーム、マッサージクリーム、クレンジングクリーム、メイクアップクリーム等のクリーム類、エモリエント乳液、モイスチュア乳液、ナリシング乳液、クレンジング乳液等の乳液類、ゼリー状パック、ピールオフパック、洗い流しパック、粉末パック等のパック類、美容液、及び洗顔料といった、種々の製剤形態の化粧料に、上記した本発明の美白剤を含ませることによっても得ることができる。

さらに本発明の化粧料は、上記した本発明の美白剤のほかに、他の美白成分や、保湿剤、抗炎症剤、紫外線吸収剤等、他の有効成分を含ませるものであってもよく、そうすることで、美白作用に加え、日焼け止め作用、皮膚保護作用、荒れ肌改善作用を併せ持った化粧料とすることができる。

本発明の化粧料の使用量は厳密に定義されるものではないが、概ね、下限は使用目的に応じた効果を発揮しうる量を、上限は使用のしやすさ、経済性等の観点から実際的な量を選択すればよい。すなわち、通常の化粧品と同様に、日焼け、しみ、そばかす等が生じている領域を含めた範囲の皮膚に適量を塗り込めばよい。また、入浴化粧料として使用する場合にも、従来の入浴化粧料と同様に適量を浴槽中の湯に溶かしてよく攪拌した上で使用すればよい。

本発明の飲食品は、上記した本発明の美白剤を含有するものである。ハナビラタケ子実体は食経験があり極めて安全なキノコである。この点から、本発明の美白剤の含有量は厳しく制限されるものではないと考えられるが、概ね、下限は予防又は治療という目的に応じた効果を発揮しうる量を、上限は摂取のしやすさ、経済性等の観点から実際的な量を基準とし、通常、ハナビラタケ子実体乾燥物に換算して成人１日あたり約５ｍｇ〜約５００ｇ、好ましくは約５０ｍｇ〜約５０ｇを摂取すればよい。もちろん、摂取する者の年齢、体重、症状、投与期間、治療経過等に応じて変化させることもできる。１日あたりの量を数回に分けて摂取することもできる。また、他の美白剤と組み合わせて摂取することもできる。

本発明の飲食品は、本発明の美白剤を飲食品の原材料に前記の配合量となるよう配合することにより、麺類、パン、キャンディー、ゼリー、クッキー、スープ、美白飲料の形態とすることができる。本発明の飲食品には、さらに、鉄、カルシウム等の無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖、キトサン等の食物繊維、大豆抽出物等のタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖、乳糖等の糖類を加えることができる。

本発明の美白剤、化粧料及び飲食品における美白作用は、皮膚に適用してメラノサイトにおけるメラニンの生成を抑制するものであり、その作用機序は、メラノサイトにおけるメラニン生成の鍵酵素であるチロシナーゼを阻害するものと考えられる。

以下、本発明の実施例およびその効果を説明するための試験例を挙げるが、これらは本発明を何ら限定するものではない。

製造例１〔ハナビラタケ子実体の製造〕
ハナビラタケ子実体を以下のようにして製造した。
カラマツの大鋸屑、小麦粉、栄養分（バナナ、蜂蜜、エビオス、ペプトン、塩化カルシウム、ハイポネックス）及び水を、大鋸屑：小麦粉：栄養分：水＝１００：１１．５：１．９：５１の重量比で含む菌床基材を準備した。この菌床基材（５２０ｇ）を、８５０ｃｃのポリプロピレン製の培養瓶に入れ、常法に従って培養瓶を滅菌した後に、ハナビラタケの種菌（１６ｇ）を接種した。その後、この培養瓶を、２３℃の温度下で、５６日間放置することによりハナビラタケ子実体を収穫した。子実体の重量は培養瓶１本当たり１４０ｇであった。

製造例２〔ハナビラタケ菌糸体の製造〕
ハナビラタケ菌糸体を以下のようにして製造した。
イーストエキス０．４％、グルコース２％、リン酸２水素カリウム０．１％、リン酸水素２ナトリウム０．１％となるように水に溶解し、１Ｎの塩化水素でｐＨ５．０に調製し、５００ｍｌ容三角フラスコにそれぞれ２００ｍｌ入れ、常法に従って滅菌した。この液体培地にハナビラタケの種菌を生育させた平板培地から径６ｍｍの寒天片を打ち抜き、その一片を接種し、２４℃の暗黒下で、２１日間振とう培養（１００ｒｐｍ）することによりハナビラタケ菌糸体を収穫した。菌糸体の乾燥重量は三角フラスコ１本当たり２ｇであった。

実施例１〔美白剤１の製造〕
製造例１で得たハナビラタケ子実体を６０℃で６時間熱風乾燥して得た乾燥粉末１７４ｇから、クロロホルム３Ｌで、室温、２４時間、成分抽出を行った。抽出溶液を分離して、同様の操作を５回繰り返した。得られたクロロホルム溶液を減圧下に留去して、クロロホルム可溶部６．２ｇを得た（美白剤１）。この美白効果を検討するために、美白剤１を２５ｍｇ／ｍlとなるようにＤＭＳＯに溶解させ、フィルター濾過により滅菌した。

比較例１
β−アルブチン（ＳＩＧＭＡ製）を２５ｍｇ／ｍlとなるようにＤＭＳＯに溶解させ、フィルター濾過により滅菌した。

実施例２,３〔美白剤２,３の製造〕
製造例１で得られたハナビラタケ子実体１０ｋｇから、８５％エタノール１８Ｌで、室温、２４時間、成分抽出を行った。この操作を５回繰り返し、次いでエタノール抽出後のハナビラタケからアセトン２０Ｌを用いて同様に３回成分抽出を行った。得られたエタノール溶液およびアセトン溶液は混合し、減圧下に濃縮した。得られた濃縮物からヘキサンを用いて溶媒分画を行って溶媒を留去し、ヘキサン可溶部３８．２ｇを得た。

得られたヘキサン可溶部のうち１３．２ｇをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｎ、３５０ｇ、φ４×６０ｃｍ）に供し、ヘキサン／アセトン＝１０：０、９：１、６：４、ヘキサン／エタノール＝９：１、７：３、０：１０（各１Ｌ）で順次溶出を行い、約４００ｍｌずつ合計１４のフラクションを回収して順にＮｏ．１〜１４とし、各フラクションの溶媒を減圧下に留去した。このうち、Ｎｏ．４とＮｏ．５のフラクションから得られた画分がそれぞれ美白剤２、３である。その後の試験に供試するため、美白剤２、３をそれぞれ２５ｍｇ／ｍlとなるようにＤＭＳＯに溶解させ、フィルター濾過により滅菌した（実施例２,３）。

実施例４〔液状皮膚外用剤の製造〕
次のような製法により、本発明の化粧料の一態様である液状皮膚外用剤を製造した。
(１)グリセリン ５．０（質量％）
(２)プロピレングリコール ４．０
(３)エタノール １０．０
(４)実施例２で得られた美白剤２ ０．５
(５)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(６)水 ８０．４
製法：(５)を(３)に溶解して(６)に加え、(１)、(２)、(４)を順次添加し、混合、均一化した。

実施例５〔Ｏ／Ｗ型乳剤性軟膏の製造〕
次のような製法により、本発明の化粧料の一態様であるＯ／Ｗ型乳剤性軟膏を製造した。
(１)白色ワセリン ２５．０（質量％）
(２)ステアリルアルコール １５．０
(３)ラウリル硫酸ナトリウム １．０
(４)パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
(５)実施例２で得られた美白剤２ ０．５
(６)精製水 ５８．４
製法：(１)〜(４)の油相成分を混合し７５℃に加熱して溶解、均一化した。７５℃に加熱した(６)に油相成分を添加して乳化し、冷却後４０℃にて(５)を添加、混合、均一化した。

比較例２,３
上記実施例４、５の液状皮膚外用剤とＯ／Ｗ型乳剤性軟膏において、ヘキサン抽出物を配合しないものを比較例２,３としてそれぞれ調製した。
実施例６〔顆粒状食品の製造〕
ハナビラタケ子実体（ユニチカ製）を熱風乾燥したハナビラタケ粉末に還元麦芽糖を全体の２０％量添加して顆粒化し、本発明の飲食品の一態様である顆粒状食品（ユニチカ製、商品名「白幻鳳凰」）を製造した。

比較例４
市販小麦粉に還元麦芽糖を２０％量添加して顆粒化した。

実施例７〔美白飲料の製造〕
次の製法により、本発明の飲食品の一態様である美白飲料を製造した。
成分 配合量(１００ｍl中)
(１)実施例３で得られた美白剤３ １０００ｍｇ
(２)ハチミツ ３２０ｍｇ
(３)環状オリゴ糖 ６００ｍｇ
(４)甘味料 適量
(５)酸味料 適量
(６)保存料 適量
(７)香料 適量
(８)水 残余
製法：（８）に（１）から（７）を順次添加する。

比較例５
実施例７において、実施例３の美白剤を含まない飲料を調製した。

試験例１〔チロシナーゼ阻害効果〕
実施例１で得られた美白剤１及び陽性対照として比較例１のβ−アルブチンをサンプルとして、以下の方法によりチロシナーゼ阻害効果を調べた。０．５６ｍｌの３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）、０．５６ｍｌの１．６６ｍＭ Ｌ−ＤＯＰＡ（L−β−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニン、ＳＩＧＭＡ製）、０．０２ｍｌのサンプル、０．０２ｍｌの１５００Ｕ／ｍｌチロシナーゼを混合し、２５℃で３分間インキュベートした。４７５ｎｍの吸光度を測定し、チロシナーゼの活性を５０％阻害する濃度（ＩＣ₅₀）を算出した。なお、チロシナーゼとしてはマッシュルーム由来のチロシナーゼ（ナカライテスク製）を用いた。結果を表１に示す。

表１から明らかなように、本発明の美白剤は陽性対照であるβ−アルブチンよりも高いチロシナーゼ阻害活性を示した。

試験例２〔メラニン生成抑制効果〕
以下のようにしてメラニン生成抑制効果を調べた。
マウス由来のメラニン生成細胞であるＢ１６メラノーマ細胞を用い、クロロホルム抽出物のＤＭＳＯ溶液を細胞に作用させメラニンの生成を観察し評価した。Ｂ１６細胞は７０％コンフルエントの細胞をＰＢＳにて洗いトリプシンを加え剥離し、１０％ＦＢＳ加ＲＰＭＩ１６４０培地に細胞を懸濁して細胞数をカウントし、細胞培養用６ウェルプレート（アズワン製：１４０６７５）に１ウェルあたり１×１０⁵cellsとなるように分散させた。なお、各ウェルの培地容量は３ｍｌとした。これを細胞接着のため２４時間３７℃のＣＯ₂インキュベーター内に静置した後、培地を交換し、実施例１のクロロホルム抽出物（本発明の美白剤１）、実施例２のＮｏ．４（本発明の美白剤２）及び実施例３のＮｏ．５（本発明の美白剤３）を３μｌ添加（培養液中の最終濃度２５μｇ／ｍｌ）した。また、陽性対照として比較例１のβ−アルブチンも同様に供試した。これをさらに３７℃、ＣＯ₂インキュベーター内にて７２時間培養した。その後、培地を取り除き、１ｍｌの１Ｎ、ＮａＯＨに細胞を懸濁し、３７℃で３時間加温することによってメラニンを溶出し、４５０nmの吸光度から６９０nmの吸光度を差し引くことで細胞由来のメラニン量を考慮した。すなわち、溶媒であるＤＭＳＯを反応させた場合と比較して、メラニン生成量の相対値を比較した。結果を表２に示した。

表２から明らかなように、本発明の美白剤は、マウスＢ１６メラノーマ細胞におけるメラニン生成を陽性対照のβ−アルブチン以上に抑制することが明らかとなった。メタノール抽出物にはメラニン生成抑制効果は見られなかった。また、いずれの抽出物を作用させた場合の顕微鏡写真によっても、β−アルブチンの場合よりＢ１６細胞の黒色化が抑えられており、優れたメラニン生成抑制効果及び美白効果を有していることも分かった。

試験例３〔ヒトにおけるしみ、そばかすの消失効果1)〕
皮膚のしみやそばかす等の色素沈着を主な症状として有する２５歳乃至５５歳の男女４０名を２０名ずつランダムに２群にふり分けた。各群にそれぞれ実施例４及び比較例２の液状皮膚外用剤、実施例５及び比較例３のＯ／Ｗ型乳剤性軟膏をブラインドにて顔面及び手に一日一回適量を使用させ、色素沈着の変化を観察し評価した。使用期間は５月から９月の５ヶ月間とした。美白効果は色素沈着症状について「改善」、「やや改善」、「変化なし」、「悪化」の４段階で評価した。各評価を得た被験者数を表３に示す。

表３の結果から明らかなように、本発明の化粧料は顕著な美白効果を示した。

試験例４〔ヒトにおけるしみ、そばかすの消失効果2)〕
皮膚のしみやそばかす等の色素沈着を主な症状として有する２５歳乃至５５歳の男女４０名を２０名ずつランダムに２群にふり分け、実施例６の顆粒状食品、比較例４をそれぞれ１日当たり１．９ｇ摂取させた。また、実施例７の美白飲料、比較例５をそれぞれ１日当たり１００ｍｌ飲用させた。摂取開始２ヶ月後における症状の改善効果について評価した。美白効果は色素沈着症状について、「改善」、「やや改善」、「変化なし」、「悪化」の４段階にて評価し、各評価を得た被験者数を表４に示した。

表４の結果から明らかなように、本発明の飲食品の摂取は美白に有効であることが明らかとなった。

Claims (7)

1. ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体を含有することを特徴とする美白剤。
2. ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体から少なくとも１種類以上の有機溶媒または水系溶媒によって抽出される画分を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
3. ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体からエタノール及びアセトン及びヘキサンを用いて抽出される画分を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
4. ハナビラタケの子実体及び／又は菌糸体からクロロホルムを用いて抽出される画分を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
5. 経口投与剤である請求項１乃至３のいずれかに記載の美白剤。
6. 請求項２乃至４のいずれかに記載の美白剤を含有することを特徴とする化粧料。
7. 請求項１乃至３のいずれかに記載の美白剤を含有することを特徴とする飲食品。