JP7013238B2 - 筋脂肪化抑制用組成物 - Google Patents
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Description
(1)ケルセチン又はその配糖体を有効成分とし、投与対象における筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中の脂肪細胞様細胞の増加を抑制するための、筋脂肪化抑制用組成物(ただし、ラフマ又はラフマの抽出物を含有する組成物を除き、投与対象からヒト筋ジストロフィー患者を除く)。
(2)筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中の脂肪滴の増加を抑制するための、(1)に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
(3)筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中のトリグリセリド量の増加を抑制するための、(1)に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
(4)前記投与対象が、加齢に起因する運動器機能障害又はロコモティブシンドロームを有する対象である、(1)~(3)のいずれか一項に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
(4)前記組成物が剤である、(1)~(4)のいずれか一項に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
本発明の一態様は、ケルセチン又はその配糖体を有効成分として含有する、筋脂肪化抑制用組成物等に関する。本明細書において「ケルセチン」とは、ポリフェノールの一種であるケルセチン(クエルセチンとも呼ばれる)を意味し、式(I)で表される。
本発明は、ケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋脂肪化抑制用組成物に関する。
筋組織には、多能性幹細胞である筋サテライト細胞が存在し、通常は未分化状態にあるが、筋肉損傷時や筋肉成長時に活性化されて増殖し、筋管細胞に分化して筋線維を形成する。従って、筋サテライト細胞の筋管細胞への分化促進により、筋肉の肥大化等が可能になる。一方で、前記筋サテライト細胞は、筋管細胞のみならず脂肪細胞様細胞にも分化し、これにより筋肉の質が低下し、筋肉量又は筋断面積あたりの筋力が低下する。従って、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することで、筋脂肪化を抑制することができる。また、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程が抑制されることで、筋肉の質の低下や筋肉量の低下、筋力の低下、及び筋萎縮を予防、抑制又は改善することができる。さらに、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等により前記効果が得られることで、運動機能の改善効果も発揮される。
本発明の筋脂肪化抑制用組成物は、その形態に応じて、ケルセチン又はその配糖体の他に、任意の添加剤、通常の組成物に用いられる任意の成分を含有することができる。これらの添加剤又は成分の例としては、ビタミンA、ビタミンB、ビタミンE、ビタミンC等のビタミン類、ミネラル類、栄養成分、生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤(等張化剤)、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、コーティング剤や、香料等が挙げられる。
本発明の筋脂肪化抑制用組成物は、前記ケルセチン又はその配糖体を有効量含有するという特徴を有することにより、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することができる。これにより、脂肪細胞様細胞の増加が抑制され、それに伴い、筋肉中の脂肪滴の増加や筋肉中のトリグリセリド量の増加も抑制される。本発明の筋脂肪化抑制用組成物は、例えば、長期間の安静臥床や骨折等によるギプス固定、疾病、加齢等に起因する運動器機能障害やロコモティブシンドローム等を有する対象に投与することができるが、これらに限定されない。
本発明の一態様は、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するための、ケルセチン又はその配糖体の使用である。例えば、運動器機能障害に関連する様々な疾患又は症状、例えば、長期間の安静臥床や骨折等によるギプス固定、疾病、加齢等に起因する運動器不安定症やロコモティブシンドローム等を予防、改善、又は処置するための使用が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、当該使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
本発明の一態様は、対象に、ケルセチン又はその配糖体を投与することを含む、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法を提供するものである。本発明の投与量は、前記所望の効果が得られる量、即ち、有効量であれば特に限定されるものではない。また、本発明の方法によれば、副作用を生じることなく筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化を抑制することが可能になる。尚、当該投与対象は、本発明の剤の投与対象と同様である。
(1)筋サテライト細胞の単離
麻酔下、10~14週齢のFischer344ラットから腓腹筋、ヒラメ筋、前頸骨筋、長趾伸筋、及び大腿四頭筋を摘出し、ミンスした。Protease(Sigma-Aldrich社)で前記組織を酵素分解後に、遠心分離処理により沈殿物を得た。得られた沈殿物を10%ウマ胎児血清含有Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)に懸濁し、筋サテライト細胞として5×104~7×104細胞/mLとなるように8ウェルスライドガラス(BDサーモサイエンス社)に播種した。
(2)脂肪細胞様細胞への分化誘導
20%ウシ血清を含むF-10(GIBCO社)で単離した筋サテライト細胞を72時間培養した。その後、0.1%DMSO(コントロール)、5μMケルセチン、10μMケルセチン、又は50μMケルセチンを含有するAdipogenic induction medium(Lonza社)で72時間培養した。その後、コントロール、5μMケルセチン、10μMケルセチン、又は50μMケルセチンを含有するAdipogenic maintenance medium(Lonza社)で72時間培養した。
(3)細胞中脂肪滴の染色
培養した細胞をPBSで洗浄後、10分間室温にて10%ホルマリン液(和光純薬)により固定した。その後、2-プロパノールに溶解した10%オイルレッド-O溶液(Sigma Aldrich社)に30分間室温で反応させた。その後、顕微鏡にて観察し、オイルレッド-Oで染色される脂肪細胞様細胞数を計測した。結果を図1及び2に示す。
(4)細胞中トリグリセリド量の定量
脂肪分化培養した細胞をPBSで洗浄後、細胞可溶化液として5%Triton-X100を含むPBSを加え、細胞溶液を回収し加熱冷却を行った。遠心分離後、回収した上清中のトリグリセリド量とタンパク質量を定量した。トリグリセリドの定量にはラボアッセイTMトリグリセリド(和光純薬社)を用いた。タンパク質の定量にはPierce BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific社)を用いた。尚、各濃度のケルセチン存在下で脂肪分化させた細胞中のトリグリセリド量(左)、タンパク質量(中央)、トリグリセリド/タンパク質比(右)の平均値±標準誤差の値とそのグラフを図3に示す。Dunnett’s test検定を用いて検定し、5%以下を有意とした(*:p<0.05 vs 0μM。†:p<0.05 vs 5μM)。
Claims (5)
- ケルセチン又はその配糖体を有効成分とし、投与対象における筋繊維の基底膜と細胞膜の間隙に存在する多能性幹細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中の脂肪細胞様細胞の増加を抑制するための、筋脂肪化抑制用組成物(ただし、ラフマ又はラフマの抽出物を含有する組成物を除き、投与対象からヒト筋ジストロフィー患者を除く)。
- 筋繊維の基底膜と細胞膜の間隙に存在する多能性幹細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中の脂肪滴の増加を抑制するための、請求項1に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
- 筋繊維の基底膜と細胞膜の間隙に存在する多能性幹細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することにより、投与対象の筋肉中のトリグリセリド量の増加を抑制するための、請求項1に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
- 前記投与対象が、加齢に起因する運動器機能障害又はロコモティブシンドロームを有する対象である、請求項1~3のいずれか一項に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
- 前記組成物が剤である、請求項1~4のいずれか一項に記載の筋脂肪化抑制用組成物。
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