JP6360357B2 - 脂肪細胞形成抑制方法 - Google Patents
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Description
(1)必要とする対象における脂肪細胞形成抑制方法であって、前記対象に、治療有効量の脂肪細胞への分化抑制剤を投与することを含み、分化抑制剤がアカモク又はその処理物であることを特徴とする脂肪細胞形成抑制方法;
(2)アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする上記(1)記載の脂肪細胞形成抑制方法;
(3)アカモクの抽出物が、アカモクの水抽出物であることを特徴とする上記(2)に記載の脂肪細胞形成抑制方法;
(4)アカモクの水抽出物が、3000以下の分子量からなるアカモク水抽出物であることを特徴とする上記(3)に記載の脂肪細胞形成抑制方法;
(5)脂肪細胞への分化抑制剤が、骨髄細胞から前駆脂肪細胞への分化抑制剤であることを特徴とする上記(1)記載の脂肪細胞形成抑制方法;
(6)脂肪細胞への分化抑制剤が、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化抑制剤であることを特徴とする上記(1)記載の脂肪細胞形成抑制方法;
(7)対象が、マウス、ラット、トリ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ネコ、イヌ、霊長類、ヒトから選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする上記(1)記載の脂肪細胞形成抑制方法;
1)アカモク又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする脂肪細胞への分化抑制剤;
2)アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする上記1)に記載の分化抑制剤;
3)アカモクの抽出物が、アカモクの水抽出物であることを特徴とする上記2)に記載の分化抑制剤;
4)アカモクの抽出物が、3000以下の分子量からなるアカモク抽出物であることを特徴とする上記2)又は3)に記載の分化抑制剤;
5)上記1)〜4)のいずれかに記載の脂肪細胞への分化抑制剤を含有することを特徴とする脂肪細胞形成抑制剤;
6)上記1)〜4)のいずれかに記載の脂肪細胞への分化抑制剤を含有することを特徴とする抗肥満剤;
7)アカモク又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする脂肪細胞過形成による病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材;
8)アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする上記7)記載の脂肪細胞過形成による病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材;
9)アカモク又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする脂肪細胞過形成による病態の予防・改善用飼料;
10)アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする上記9)記載の脂肪細胞過形成による病態の予防・改善用飼料;
11)アカモク又はその処理物の、脂肪細胞への分化抑制剤を製造するための使用。
12)アカモク又はその処理物の、脂肪細胞形成抑制剤を製造するための使用。
13)脂肪細胞への分化抑制剤に使用するためのアカモク又はその処理物。
14)脂肪細胞形成抑制剤に使用するためのアカモク又はその処理物。
(アカモク水抽出物の調製)
海藻アカモクは静岡県下田市及び岩手県宮古市の沿岸から採取した。水洗されたアカモクは、精製蒸留水中でホモジナイズ(粉砕)後、5500gにて10分間遠心分離し、その上清液をアカモク水溶性抽出物として凍結乾燥した。凍結乾燥したアカモク水溶性抽出物は、精製蒸留水に溶解され、膜分画法で分子量3000以下の画分を分離することにより、アカモク水抽出物を調製した。かかるアカモク水抽出物を凍結乾燥し、実験に使用するときには精製蒸留水に溶解して用いた。
マウス骨髄間葉系幹細胞を以下のとおり採取した。マウス(CD1−Elite野生型、雌2か月齢)は、チャールスリバー社(USA)から購入し、病原菌のない動物飼育室で飼育した。該マウスから得られた大腿骨及び頸骨は、ダルベッコ改良イーグル培養液(Invitrogen Corporation社製 (Carlsbad, CA, USA))中において、無菌的に筋肉組織を除去し、それぞれの骨幹部を卓上遠心分離(10000rpmにて1分間)することによって無菌的に骨髄細胞を分離し、ダルベッコ改良イーグル培養液に懸濁して骨髄細胞懸濁液を調製した。かかる骨髄細胞懸濁液は、さらに1200rpmにて5分間遠心分離後洗浄した。さらに赤血球の除去処理を行い、マウス骨髄間葉系幹細胞を得た。
上記アカモク水抽出物が、マウス骨髄間葉系幹細胞から脂肪細胞への分化を抑制するか否かを検討した。
上記マウス骨髄間葉系幹細胞(1×106細胞数/培養穴/mL、12穴プレート)は、10%の牛胎児血清(Hyclone社製、USA)と、1%のペニシリン−ストレプトマイシン(10,000U/mL)(Invitrogen Corporation社製 (Carlsbad, CA, USA))とを含有するダルベッコ改良イーグル培養液(Invitrogen Corporation社製 (Carlsbad, CA, USA))中に、1μM/mLのデキサメタゾン(Sigma-Aldrich社製)と、0.5mM/mLの3−イソブチル−1−メチルキサンチンとを細胞分化促進因子として添加した前駆脂肪細胞への分化用培養液を調製した。この培養液に、0(対照1)、5、10、25、50μg/培養液mLの上記アカモク水抽出物を添加した各培養液中で、37℃にて48時間培養した。また、対照2として、アカモクを添加せず、かつ、デキサメタゾンと3−イソブチル−1−メチルキサンチンとを添加しない培養液を用いて上記マウス骨髄間葉系幹細胞を同様に培養した。
上記48時間培養した細胞について、10%牛胎児血清と1%ペニシリン−ストレプトマイシンとを含有するダルベッコ改良イーグル培養液に、10μg/mLのインスリンを添加した脂肪細胞への分化用培養液を調製した。この培養液に、0(対照1)、5、10、25、50μg/培養液mLの上記アカモクの水抽出物を添加した各培養液中で、さらに37℃にて4日間培養した。また、対照2については、アカモクを添加せず、かつ、インスリンを添加しない培養液を用いて前駆脂肪細胞を培養した。
図1から明らかなとおり、アカモクの水抽出物を添加した培養液においては、形成される脂肪細胞数が、濃度依存的に有意に減少することが確認され、特に10、25、50μg/培養液mLの各濃度で添加された場合、対照1と比較して脂肪細胞の形成が有意に抑制された。また、25、50μg/培養液mLの各濃度で添加された場合、細胞分化促進因子類を添加しない場合と同程度、又はそれ以下の脂肪細胞数となった。また、図2から明らかなとおり、アカモクの水抽出物を添加した培養液においては、濃度依存的にオイルレッドが特異的に吸収する490nmにおける吸光度が対照1と比較して減少し、特に10、25、50μg/培養液mLの各濃度で添加した場合に、対照1と比較して有意に減少することが確認された。これらの結果により、アカモク水抽出物が、骨髄間葉系幹細胞からの脂肪細胞への分化や脂肪細胞の形成を有意に抑制することが確認された。
[アカモク水抽出物の骨髄間葉系幹細胞から前駆脂肪細胞への分化抑制作用についての検討]
実施例1において調製されたアカモク水抽出物が、骨髄間葉系幹細胞から前駆脂肪細胞への分化を抑制するか否かを検証した。
実施例1において調製されたマウス骨髄間葉系幹細胞は、上記「骨髄間葉系幹細胞から前駆脂肪細胞への培養1」と同様の手順で、各培養液において、48時間の培養がされた。対照2についても同様に調製した。
上記各培養液において48時間培養した細胞について、アカモク水抽出物が添加されていない脂肪細胞分化用培養液に交換したことの他は、上記「前駆脂肪細胞から脂肪細胞への培養1」と同様の手順で、4日間の培養がされた。
図3から明らかなとおり、前駆脂肪細胞へ分化させるために、アカモクの水抽出物を添加した培養液においては、濃度依存的にオイルレッドが特異的に吸収する490nmにおける吸光度が対照1と比較して減少し、特に10、25、50μg/培養液mLの各濃度で添加した場合に、対照1と比較して有意に減少することが確認された。これらの結果により、アカモク水抽出物が、骨髄間葉系幹細胞からの前駆脂肪細胞への分化や脂肪細胞の形成を有意に抑制することが確認された。
[アカモク水抽出物の前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化抑制作用についての検討]
実施例1において調製されたアカモク水抽出物が、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化を抑制するか否かを検証した。
実施例1において調製されたマウス骨髄間葉系幹細胞は、アカモク水抽出物が添加されていない前駆脂肪細胞分化用培養液中で培養されたことの他は、上記「骨髄間葉系幹細胞から前駆脂肪細胞への培養1」と同様の手順で、各培養液において48時間の培養がされた。
上記48時間培養した細胞について、実施例1の「前駆脂肪細胞から脂肪細胞への培養1」と同様の手順で、細胞を4日間培養した。
図4から明らかなとおり、脂肪細胞分化形成期に、アカモクの水抽出物を添加した培養液においては、濃度依存的に、特に10、25、50μg/培養液mLの各濃度で添加した場合に、オイルレッドが特異的に吸収する490nmにおける吸光度が対照と比較して有意に減少することが確認された。これらの結果により、アカモク水抽出物が、前駆脂肪細胞からの脂肪細胞への分化や脂肪細胞の形成を有意に抑制することが確認された。
以上の結果より、アカモク抽出物は、骨髄間葉系幹細胞からの前駆脂肪細胞への分化の過程と、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化の過程との両方に作用し、脂肪細胞の形成を抑制する作用、脂肪蓄積抑制作用、肥満防止作用、セルライト抑制作用、脂肪合成抑制作用を発揮する可能性を示唆している。
Claims (5)
- アカモク(Sargassum horneri)の水抽出物を含む、脂肪細胞への分化抑制剤。
- アカモクの水抽出物が、3000以下の分子量からなるアカモク水抽出物であることを特徴とする請求項1に記載の脂肪細胞への分化抑制剤。
- 骨髄細胞から前駆脂肪細胞への分化抑制剤であることを特徴とする請求項1又は2に記載の脂肪細胞への分化抑制剤。
- 前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化抑制剤であることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の脂肪細胞への分化抑制剤。
- マウス、ラット、トリ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ネコ、イヌ、霊長類、ヒトから選ばれる一種又は二種以上に投与することを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の脂肪細胞への分化抑制剤。
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