WO2020203079A1

WO2020203079A1 - 筋肉増強剤

Info

Publication number: WO2020203079A1
Application number: PCT/JP2020/010058
Authority: WO
Inventors: 愛弓山本; 真一本田
Original assignee: 株式会社カネカ
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-03-09
Publication date: 2020-10-08
Also published as: US20220151987A1; JPWO2020203079A1

Abstract

本発明は、筋衛星細胞を活性化することにより、効果的に筋肉量や筋力を増加または維持でき、且つ筋肉量や筋力の低下を予防または抑制できる比較的安全な筋肉増強剤を提供することを目的とする。本発明に係る筋肉増強剤は、特定のエラジタンニンを有効成分として含有することを特徴とする。

Description

筋肉増強剤

　本発明は、筋肉量や筋力を増加または維持できるか、或いは筋肉量や筋力の低下を予防または抑制できる筋肉増強剤に関するものである。

　近年、交通手段の発達などによる運動不足や高齢化の進行に伴い、筋肉量や筋力の低下（筋萎縮）が大きな問題となっている。一般的に、４０歳前後から筋肉量や筋力は低下するといわれており、高齢者の多くはサルコペニア（加齢性筋肉減少症）の状態にあるといわれている。サルコペニアは、主に加齢による筋肉量や筋力の低下をいい、ロコモティブシンドローム（運動器症候群：筋肉や骨、関節、軟骨、椎間板といった運動器の障害によって移動機能の低下をきたした状態）やフレイル（筋力や心身の活力が低下した状態）の重要な要因であり、要介護の原因となることが指摘されている。このように、筋肉量や筋力の低下は、生活の質（ＱＯＬ：Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｏｆ　Ｌｉｆｅ）の低下のみならず、日常生活動作（ＡＤＬ：Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｄａｉｌｙ　Ｌｉｖｉｎｇ）の低下、合併症の発生、介護負担の増加にも密接に関連している。

　筋肉の増強、すなわち、筋肉量や筋力の増加および維持、さらには筋肉量や筋力の低下を予防または抑制するためには、適切な栄養摂取と運動の両方が必要であるとされている。しかし、特に高齢者では、食欲の減退による摂食量の低下に加え、摂取したタンパク質やアミノ酸から筋タンパク質へ変換する生体機能効率も低下している。さらに、体力や身体機能の低下した高齢者では、運動を継続的に行うことが難しい上に、運動による筋肉量の増加効率も低下している。よって、例えば高齢者の活動量が怪我や病気などにより減少すると、それに伴って筋肉量や筋力がさらに低下し、さらなる活動量の低下と筋萎縮の悪化という負のサイクルに陥ることがある。このように、高齢者では栄養摂取と運動による筋肉の増強は不十分であり、より効果的な筋肉増強手段が望まれている。

　また、健康維持や運動能力の向上、肥満やメタボリックシンドロームの予防または改善、痩身などの目的に、また、ヒト以外の動物においても成育促進、肉量増加、肉質改善などの目的に、筋肉の増強が望まれている。

　筋肉を増強するためには、筋肉を構成する筋線維を大きくする、またはその大きさを維持する必要がある。筋線維は多核の細胞であり、その核の数が細胞の大きさを制御している。このため、筋線維を大きくする、または維持するためには、核の数を増加する必要がある。しかしながら、筋線維に取り込まれた核（筋核）は増殖することはないため、細胞外より筋線維に新たに核を供給することが不可欠である。筋線維への核の供給は、筋線維の基底膜と細胞膜の間に存在している筋衛星細胞（サテライト細胞ともいう）が担っている。通常、筋衛星細胞は、細胞周期が停止した「休止状態」にあり、未分化な状態であるが、運動負荷や筋肉の損傷、成長の際に活性化され、細胞周期が進行した「活性化状態」に移行する。活性化状態の筋衛星細胞は、増殖、分化、筋線維との融合といった一連の過程により、筋線維に新たな核を供給し、その結果、筋線維が肥大する。このため、筋衛星細胞を活性化することは筋肉の増強に寄与する。

　筋肉を増強するための成分としては、成長ホルモンが知られている。しかしながら、成長ホルモンには、ドーピングの問題や、高血圧、発がん性、肝臓障害、精巣萎縮、無月経、妄想やパラノイア等の副作用の問題があり、日々、長期的に継続摂取するのには好ましくない。

　そこで、安全な成分から筋肉増強作用のあるものが探索されている。例えば特許文献１には、茶飲料に含まれるカテキン類を有効成分とする筋機能低下抑制剤が開示されている。特許文献２には、インド、スリランカ、東南アジア諸国に自生しているニシキギ科のサラシア属植物またはその抽出物を含む筋肉増強剤が記載されている。また、非特許文献１には、分岐鎖アミノ酸であるロイシンの筋タンパク質合成作用が報告されている。また、特許文献３には、ザクロの抽出物と、これに含まれるプニカラジンおよびエラグ酸と、これらの代謝産物であるウロリチンによる骨格筋由来細胞におけるミトコンドリアの活性化、並びにプニカラジン、エラグ酸、ウロリチンを摂取することによる筋肉量の増加が記載されている。特許文献１～３にはそれぞれ筋肉に対する作用が記載されているが、いずれも筋衛星細胞を活性化するものではない。また、特許文献４には、キョウチクトウ科の植物であるラフマまたはその抽出物を有効成分とするサテライト細胞分化促進剤が開示されているが、骨格筋由来細胞に対する分化誘導効果を示しているにすぎず、筋衛星細胞を活性化するものではない。それに対して特許文献５には、レモンマートルの抽出物が筋衛星細胞活性化作用を示すことが記載されている。

特開２００８－１３４７３号公報特開２０１０－２３５５４２号公報特表２０１４－５０１７６４号公報特開２０１２－７７０１０号公報国際公開第２０１７／０６５０７７号パンフレット

Ｃｒｏｚｉｅｒ　ＳＪ　ｅｔ　ａｌ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，ｖｏｌ．１３５，Ｎｏ．３，３７６－８２，２００５

　上述したように、近年、超高齢社会を迎えて筋肉量や筋力の低下は深刻な問題になってきており、その対策が求められている。筋肉量や筋力を増加、維持するための研究も為されてはいるが、実際の対策としては適切な栄養摂取と運動が薦められているのみである。筋肉量や筋力の低下を予防したり抑制したりするための薬剤などは流通しつつあるが、安全で且つ十分な筋肉増強効果を示す薬剤などは未だ流通していない。
　そこで本発明は、筋衛星細胞を活性化することにより、効果的に筋肉量や筋力を増加または維持でき、且つ筋肉量や筋力の低下を予防または抑制できる比較的安全な筋肉増強剤を提供することを目的とする。

　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、ポリフェノールの一種である特定のエラジタンニンが、筋肉量や筋力の増加や維持に重要な役割を果たす筋衛星細胞を活性化することを見出して、本発明を完成した。
　以下、本発明を示す。

　［１］　下記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として含有することを特徴とする筋肉増強剤。

　［２］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである上記［１］に記載の筋肉増強剤。
　［３］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである上記［１］に記載の筋肉増強剤。
　［４］　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防または抑制するためのものである上記［１］～［３］のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　［５］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与するためのものである上記［１］～［４］のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　［６］　飲食品用組成物である上記［１］～［５］のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　［７］　機能性表示食品である上記［６］に記載の筋肉増強剤。
　［８］　筋肉を増強するための上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンの使用。
　［９］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである上記［８］に記載の使用。
　［１０］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである上記［８］に記載の使用。
　［１１］　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制するための上記［８］～［１０］のいずれかに記載の使用。
　［１２］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンをヒトに投与する上記［８］～［１１］のいずれかに記載の使用。
　［１３］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有するヒト、または高齢者に投与する上記［８］～［１１］のいずれかに記載の使用。
　［１４］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する上記［８］～［１３］のいずれかに記載の使用。
　［１５］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを飲食品用組成物の成分として投与する上記［８］～［１４］のいずれかに記載の使用。
　［１６］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として対象者に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
　［１７］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである上記［１６］に記載の筋肉増強方法。
　［１８］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである上記［１６］に記載の筋肉増強方法。
　［１９］　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制する上記［１６］～［１８］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　［２０］　上記対象者がヒトである上記［１６］～［１９］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　［２１］　上記対象者が、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有するヒト、または高齢者である上記［１６］～［１９］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　［２２］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する上記［１６］～［２１］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　［２３］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを飲食品用組成物の成分として投与する上記［１６］～［２２］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　［２４］　上記［１］～［７］のいずれかに記載の筋肉増強剤を投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
　［２５］　投与対象が、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有する者、または高齢者である上記［２４］に記載の筋肉増強方法。
　［２６］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として含有することを特徴とする筋衛星細胞活性化剤。
　［２７］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである上記［２６］に記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［２８］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである上記［２６］に記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［２９］　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防または抑制するためのものである上記［２６］～［２８］のいずれかに記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［３０］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与するためのものである上記［２６］～［２９］のいずれかに記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［３１］　飲食品用組成物である上記［２６］～［３０］のいずれかに記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［３２］　機能性表示食品である上記［３１］に記載の筋衛星細胞活性化剤。
　［３３］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として対象者に投与する工程を含むことを特徴とする筋衛星細胞の活性化方法。
　［３４］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである上記［３３］に記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［３５］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである上記［３３］に記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［３６］　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制する上記［３３］～［３５］のいずれかに記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［３７］　上記対象者がヒトである上記［３３］～［３６］のいずれかに記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［３８］　上記対象者が、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有するヒト、または高齢者である上記［３３］～［３７］のいずれかに記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［３９］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する上記［３３］～［３８］のいずれかに記載の筋衛星細胞の活性化方法。
　［４０］　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを飲食品用組成物の成分として投与する上記［３３］～［３９］のいずれかに記載の筋衛星細胞の活性化方法。

　本発明に係る筋肉増強剤は、ポリフェノールの一種である特定のエラジタンニンを有効成分とすることから比較的安全であり、運動と同様に筋衛星細胞を活性化する作用を示し、筋肉量や筋力の増加または維持、さらには筋肉量や筋力の低下の予防または抑制に利用できる。

図１は、エラジタンニンであるカスアリニンの筋衛星細胞活性化効果を評価した結果を示すグラフである。図２は、エラジタンニンであるスタキウリンの筋衛星細胞活性化効果を評価した結果を示すグラフである。図３は、エラジタンニン以外のポリフェノールの筋衛星細胞活性化効果を評価した結果を示すグラフである。図４は、カスアリニンおよびスタキウリン以外のエラジタンニン、並びにカスアリニンおよびスタキウリンの部分構造体の筋衛星細胞活性化効果を評価した結果を示すグラフである。

　本発明に係る筋肉増強剤は、式（Ｉ）で表されるエラジタンニン（以下、「エラジタンニン（Ｉ）」という。）を有効成分として含有する。本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉増強作用を有するものである。

　本発明において「筋肉増強」とは、筋肉量や筋力を増加または維持することに加え、筋肉量や筋力の低下を予防または抑制することをいうものとする。したがって、本発明の「筋肉増強剤」は、筋肉量や筋力を増加または維持、さらには筋肉量や筋力の低下を予防または抑制するために用いることができる。「筋肉量」とは筋肉の量をいい、「筋力」とは筋肉が発揮する力をいう。また、本発明の筋肉増強剤は、筋衛星細胞を活性化する作用を有することから、本発明の筋肉増強剤の摂取により増殖・分化した筋衛星細胞が筋線維に融合し、新しい筋核となることで筋肉量が増加する、すなわち、筋衛星細胞数の増加による筋肉増強剤でもあり、筋衛星細胞活性化剤でもある。本発明の筋肉増強剤は、筋肉の増強を必要とする健常者およびアスリート、体重の増加など身体の発達が必要な小児および若者に対して、筋肉の増強を促すために用いることができる。さらに、本発明の筋肉増強剤は、加齢によるサルコペニア、運動不足や長期安静臥床、ギブス固定、無重力などによる不活動、低栄養、侵襲、悪液質（カヘキシア）等による二次性サルコペニア、筋原性の疾患（筋ジストロフィー、先天性ミオパチー等）、神経原性の疾患（筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症など）等による筋肉量や筋力の低下に対して、その予防や改善に用いることもできる。また、ロコモティブシンドロームやフレイル等の筋肉量や筋力の低下に起因する状態や疾患に対しても、その予防や改善に用いることもできる。すなわち、本発明の筋肉増強剤は、筋肉量や筋力の低下している者、例えば高齢者の、筋肉量や筋力の維持または増強に用いることもできる。ここで高齢者とは、例えば６０歳以上の者、より好ましくは７０歳以上の者である。また、本発明の筋肉増強剤は、成育促進または肉量増加や肉質改善が所望される家畜などの動物に対しても用いることもできる。なお、本発明の筋肉増強剤は、筋肉の増強が可能であることから、肥満やメタボリックシンドロームの予防または改善、痩身などの目的のためにも用いることもできる。

　筋衛星細胞とは、筋線維の基底膜と細胞膜の間に存在している未分化の筋幹細胞である。本発明における「筋衛星細胞活性化」とは、休止状態にある筋衛星細胞が増殖期に移行し、分化と筋線維への融合を経て筋線維へ核を供給することをいう。筋衛星細胞の活性化は、筋線維の大きさを制御する核の数を増加させることから、筋線維の肥大、ひいては筋肉の増強に繋がるものである。筋衛星細胞の活性化は、細胞数、核酸量、ブロモデオキシウリジンといったＤＮＡ類似物質の取り込み量などを測定することで評価することができる。

　エラジタンニンは、カシの皮など植物界に広く存在するポリフェノールの一種で、グルコースなどの多価アルコールと、ヘキサヒドロキシジフェン酸や没食子酸などの多価フェノール酸とがエステル結合した構造を持つ化合物群の総称である。エラジタンニンの分子内におけるヘキサヒドロキシジフェン酸構造部分はヘキサヒドロキシジフェノイル基、没食子酸構造部分はガロイル基と呼ばれる。エラジタンニンは安定性の高い化合物であるが、酸やアルカリ、酵素によって加水分解される。加水分解により母骨格から遊離したヘキサヒドロキシジフェン酸は、下記式の通り速やかに分子内脱水縮合し、安定なエラグ酸を生成する。エラジタンニンを含む植物は生薬として使用されているものも多く、抗酸化作用、抗がん活性などの生理活性を持つエラジタンニンが知られている。

　エラジタンニン（Ｉ）は、グルコースに、２つのヘキサヒドロキシジフェノイル基と１つのガロイル基がエステル結合した化合物である。エラジタンニン（Ｉ）におけるグルコースは開環して直鎖状の構造を取り、グルコースの２位及び３位の水酸基と４位及び６位の水酸基に対して、２つのヘキサヒドロキシジフェノイル基がそれぞれエステル結合しており、５位の水酸基に対してガロイル基がエステル結合している。さらに、グルコースの１位の炭素原子（アノマー炭素原子）は、２位及び３位と結合したヘキサヒドロキシジフェノイル基とＣ－グリコシド結合を形成している。エラジタンニン（Ｉ）としては、カスアリニン（Ｃａｓｕａｒｉｎｉｎ）とスタキウリン（Ｓｔａｃｈｙｕｒｉｎ）が挙げられる。カスアリニンとスタキウリンはグルコースの１位の立体配置が異なっており、カスアリニンはα－グルコース構造、スタキウリンはβ－グルコース構造を持つ。

　エラジタンニン（Ｉ）の取得方法は特に限定されず、公知化合物から化学合成することができる。或いは、エラジタンニン（Ｉ）は、植物から精製してもよい。例えばカスアリニンおよび／またはスタキウリンは、モクマオウ科モクマオウ属のモクマオウ（Ｃａｓｕａｒｉｎａ　ｓｔｒｉｃｔａ）；キブシ科キブシ属のキブシ（Ｓｔａｃｈｙｕｒｕｓ　ｐｒａｅｃｏｘ）；フトモモ科バンジロウ属のバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍ　ｇｕａｊａｖａ）、キバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍ　ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）；フトモモ科フトモモ属のフトモモ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ　ｊａｍｂｏｓ）、ジャワフトモモ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ　ｓａｍａｒａｎｇｅｎｓｅ）、ミズレンブ（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ　ａｑｕｅｕｍ）；フトモモ科フェイジョア属のフェイジョア（Ｆｅｉｊｏａ　ｓｅｌｌｏｗｉａｎａ）；フトモモ科ユーカリノキ属のユーカリビミナリス（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｖｉｍｉｎａｌｉｓ）；フトモモ科オールスパイス属のオールスパイス（Ｐｉｍｅｎｔａ　ｄｉｏｉｃａ）に含まれている。また、本発明者らは、カスアリニンおよびスタキウリンがフトモモ科バクホウシア属のレモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ　ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）にも含まれていることを独自に見出している。

　エラジタンニン（Ｉ）の植物からの精製方法は特に限定されない。エラジタンニン（Ｉ）は多数の水酸基を有することから水溶性であるために、エラジタンニン（Ｉ）を含む植物の葉、茎、根、枝、花などの部位から、水、水混和性有機溶媒、これらの混合溶媒などの水系溶媒を使い、抽出することができる。得られた抽出液をそのまま、または減圧乾燥、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥などにより乾燥した後、さらにクロマトグラフィー等により目的のエラジタンニン（Ｉ）を精製すればよい。

　エラジタンニン（Ｉ）は、筋肉増強剤中で塩を形成していてもよく、本発明の技術的範囲には、エラジタンニン（Ｉ）の塩を含む筋肉増強剤も含まれる。かかる塩としては、例えば、ナトリウム塩やカリウム塩が考えられる。

　本発明に係る筋肉増強剤の剤形は特に制限されず、例えば、エラジタンニン（Ｉ）自体であってもよいし、他の成分と組み合わせた組成物であってもよいし、これらの溶液または懸濁液であってもよい。また、エラジタンニン（Ｉ）を含有する植物や、植物から抽出、精製した分画物についても、本発明の有効成分として利用することができる。筋肉増強剤の剤形としては、特に制限されないが、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、糖衣錠、顆粒剤、液剤、外用剤などを挙げることができる。本発明に係る筋肉増強剤には、剤形に合わせ、薬学上許容される添加剤を用いてもよい。かかる添加剤としては、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料、凝集防止剤、有効成分の溶解補助剤、安定化剤などを挙げることができる。上記賦形剤としては特に制限されないが、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、デキストリン、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどを挙げることができる。上記崩壊剤としては特に制限されないが、例えば、でんぷん、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガントなどを挙げることができる。上記滑沢剤としては特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などを挙げることができる。上記結合剤としては特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトールなどを挙げることができる。上記酸化防止剤としては、特に制限されないが、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などを挙げることができる。上記着色剤としては特に制限されないが、例えば、医薬品、食品に添加することが許可されているものなどを挙げることができる。上記甘味料としては特に制限されないが、例えば、医薬品や食品に添加することが許可されているものなどを挙げることができる。上記凝集防止剤としては特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などを挙げることができる。上記有効成分の溶解補助剤としては特に限定されないが、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸などの有機酸などが挙げられる。上記安定化剤としては特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル、プロピレングリコールなどが挙げられる。

　本発明に係る筋肉増強剤は、例えば、飲食品用組成物、医薬品、医薬部外品、飼料、ペットフードまたは動物用医薬品として用いることもできる。

　本発明に係る筋肉増強剤は、そのまま、筋肉増強作用を示す特定保健用食品や機能性表示食品などの飲食品用組成物、医薬品、医薬部外品、サプリメント、飼料、ペットフードまたは動物用医薬品として使用や摂取させてもよく、飲食品用組成物、医薬品、医薬部外品、飼料、ペットフード、動物用医薬品などに含有させて使用してもよい。また本発明の筋肉増強剤は、経口摂取用製剤の形態であってもよい。経口摂取用製剤としては、カプセル剤（ハードカプセル、マイクロカプセル、ソフトカプセル）、錠剤、散剤、チュアブル製剤、シロップ、液剤などの、経口的に摂取出来る形態が挙げられる。カプセル剤とする場合のカプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮などを由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材、例えば、食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸などの海藻由来品やローカストビーンガムやグアーガムなどの植物種子由来品、プルラン、カードランなどの微生物由来品やセルロース類を含む製造用剤も使用することができる。

　また、本発明に係る筋肉増強剤は、一般的な飲食品に添加することもできる。本発明に係る筋肉増強剤を添加する飲食品は特に限定されないが、例えば、乳飲料、清涼飲料、スポーツドリンク、栄養ドリンク、美容ドリンク、液体栄養剤などの飲料；チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ケーキ、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；パン、ハム、雑炊、米飯、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品などに適宜添加して用いることができる。本発明に係る筋肉増強剤を含有する飲食品は、いわゆる健康食品、サプリメント、機能性食品、機能性表示食品、栄養補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、介護食品、スマイルケア食、咀嚼・嚥下補助食品、濃厚流動食品、病者用食品などの用途に用いることができる。言うまでもなく、他の食品形態として利用することもできる。さらにはペットフードや家畜飼料などへも利用することができる。

　本発明の筋肉増強剤は、非経口剤の形態であってもよい。例えば皮膚に塗布する形態とすることもできる。この場合、剤形は、特に限定されるものではなく、例えば、本発明に係る筋肉増強剤を基剤中に溶解または混合分散させて、クリーム状、ペースト状、ゼリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの（軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、スプレー剤など）、基剤中にエラジタンニン（Ｉ）を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記組成物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）が挙げられる。

　本発明の筋肉増強剤を医薬部外品として使用する場合の医薬部外品とは、薬事法に定められた医薬部外品を指し、経口剤（エキス剤、エリキシル剤、シロップ剤、チンキ剤、リモナーデ剤等の液剤とカプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、錠剤などの固形剤）などが挙げられる。

　本発明の筋肉増強剤は、式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として含有する。筋肉増強剤における当該エラジタンニンの割合は剤形などにもよるが、例えば、０．０００１質量％以上とすることができる。当該割合としては、０．００１質量％以上または０．００３質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上または０．０３質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上または０．３質量％以上がより更に好ましい。当該割合の上限については１００質量％以下でもよいが、５０質量％以下または４０質量％以下が好ましく、２０質量％以下または１０質量％以下がより好ましく、７質量％以下または５質量％以下がより更に好ましい。

　本発明に係る筋肉増強剤は、筋衛星細胞の活性化作用など、優れた筋肉増強作用を示す。かかる筋衛星細胞活性化作用は、例えば、以下のｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験により評価することができる。具体的には、動物より単離した筋衛星細胞の培養液に被検物質を添加して２４時間培養した後、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を終濃度が１０μＭになるよう添加し、２時間インキュベートする。次いで、筋衛星細胞を氷冷した０．１％Ｈ₂Ｏ₂添加メタノールを使って４℃で１０分間固定し、さらに２Ｎ塩酸を使って３７℃で１時間ＤＮＡ変性処理を行った後、一次抗体として抗ＢｒｄＵ抗体、二次抗体としてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体を用い、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）にて発色させ、ＢｒｄＵ陽性細胞を検出する。総細胞数に占めるＢｒｄＵ陽性細胞の割合を求め、筋衛星細胞活性化率とすることができる。本発明に係る筋肉増強剤の筋衛星細胞活性化率としては、溶媒対照と比較して、被験物質処理により筋衛星細胞活性化率が上昇すれば、筋衛星細胞は活性化したとみなすが、溶媒対照に対する上昇幅としては２％以上が好ましく、３％以上がより好ましく、５％以上がよりさらに好ましい。

　本発明に係る筋肉増強方法は、本発明に係る筋肉増強剤を投与する工程を含む。本発明に係る筋肉増強剤を投与すべき患者としては、例えば、筋肉量や筋力を増強すべき患者や、筋肉量や筋力の低下を予防すべき患者が挙げられる。より具体的には、投与対象として、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有する者、または高齢者が挙げられる。

　本発明に係る筋肉増強剤は、ヒトに限らず、ヒト以外の動物にも投与可能である。即ち、本発明は、本発明に係る筋肉増強剤を動物に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法にも関する。投与対象動物としては、例えば、養殖動物、愛玩動物、競技動物などが挙げられる。養殖動物としては特に限定されないが、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物、ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽、魚類、甲殻類または貝類が例示される。愛玩動物としては特に限定されないが、イヌ、ネコなどが例示される。競技動物としては特に限定されないが、競走馬などが例示される。

　本発明に係る筋肉増強剤の投与頻度や投与量は、投与対象、年齢、性別、状態などに応じて適宜調整すればよく、筋肉増強効果を発揮できる量を投与対象へ投与する。例えばヒトに対する投与量の下限は特に限定されないが、１日当たりのエラジタンニン（Ｉ）の投与量としては０．１ｍｇ／ｋｇ体重以上または０．５ｍｇ／ｋｇ体重以上が好ましく、１ｍｇ／ｋｇ体重以上または２ｍｇ／ｋｇ体重以上がより好ましく、５ｍｇ／ｋｇ体重以上がさらにより更に好ましい。また、例えばヒトに対する投与量の上限も特に限定されないが、１日当たりのエラジタンニン（Ｉ）の投与量としては１０００ｍｇ／ｋｇ体重以下が好ましく、５００ｍｇ／ｋｇ体重以下がより好ましく、１００ｍｇ／ｋｇ体重以下がさらに好ましい。また、１日当たりの投与回数は、特に限定されず、所望の投与範囲内において、単回、または数回に分けて投与すればよい。

　本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉量や筋力を増加または維持する効果の向上を目的に、適宜、レジスタンス運動などの運動、理学療法、リハビリテーションなどと併用することができる。また、本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉量や筋力を増加または維持する効果の向上を目的に、他の医薬品や筋肉増強作用を有する食品等と併用して使用することも可能である。上記筋肉増強作用を有する食品としては特に制限されないが、ホエイタンパク、ホエイペプチド、カゼイン、カゼインペプチド、大豆タンパク、大豆ペプチド、小麦タンパク、小麦ペプチド、バリン、ロイシン、イソロイシン、アルギニン、シトルリン、オルニチンなどのアミノ酸、クレアチン、β－ヒドロキシ－β－メチル酪酸などが挙げられる。

　本願は、２０１９年３月２９日に出願された日本国特許出願第２０１９－６７３２１号に基づく優先権の利益を主張するものである。２０１９年３月２９日に出願された日本国特許出願第２０１９－６７３２１号の明細書の全内容が、本願に参考のため援用される。

　以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。

　実施例１：　カスアリニンの調製
　フトモモ科植物であるレモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ　ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）の乾燥葉（１００ｇ）を水（５００ｍＬ）に浸漬し、５０℃で２時間撹拌しつつ抽出を行った。ろ過により固形分を分離し、抽出液を得た。得られた抽出液を減圧濃縮および凍結乾燥して溶媒を除去し、レモンマートル抽出物（１６．１ｇ）を得た。得られた抽出物（１２０ｍｇ）を水（１ｍＬ）に溶解し、下記条件の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付して分画した。分画を繰り返すことにより、カスアリニン（４０ｍｇ）を得た。化合物の構造は、ＮＭＲ分析と質量分析により確認した。
　［ＨＰＬＣ条件］
　　カラム：　「ＹＭＣ－Ｐａｃｋ　ＯＤＳ－Ａ」ＹＭＣ社製，φ１０ｍｍ×１５０ｍｍ
　　溶離液：　アセトニトリル－メタノール混液と０．１％ギ酸水溶液とのグラジェント

　実施例２：　スタキウリンの調製
　実施例１と同様にして、レモンマートルからスタキウリンを調製した。

　実施例３：　筋衛星細胞活性化能評価
　（１）筋衛星細胞の単離
　６月齢の雄性ＳＤラット（日本エスエルシー社）の大腿部、臀部、および背部より筋組織を摘出し、脂肪および結合組織などを除去・ミンスした後、３７℃で１時間、１．２５ｍｇ／ｍＬのプロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ社）を含むＰＢＳで処理した。遠心分離にて筋線維断片などを除去した後、ポリリジン（Ｓｉｇｍａ社）およびフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ社）をコーティングしたプレートに播種し、５％ＣＯ₂雰囲気中、３７℃で２４時間前培養後、ＰＢＳで洗浄することで筋衛星細胞を単離した。培地としては、１０％ウマ血清（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加したＤＭＥＭ（「Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ」Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いた。以下、当該培地を「１０％ＨＳ－ＤＭＥＭ」と略記する。

　（２）カスアリニンまたはスタキウリンによる処理
　実施例１で調製したカスアリニン、または実施例２で調製したスタキウリンを水に溶解した後、１０％ＨＳ－ＤＭＥＭに添加し、カスアリニンまたはスタキウリンを含む１０％ＨＳ－ＤＭＥＭを調製した。単離筋衛星細胞の培地を、カスアリニンまたはスタキウリンを含む１０％ＨＳ－ＤＭＥＭに交換し、２４時間培養した。なお、カスアリニンの処理濃度は０．０１～１．１μＭ（１３～１０００ｎｇ／ｍＬ）とし、スタキウリンの処理濃度は０．０９～０．４μＭ（８３～３３３ｎｇ／ｍＬ）とし、また、溶媒対照として１０％ＨＳ－ＤＭＥＭを用いた。

　（３）筋衛星細胞活性化能評価
　培養終了から２時間前に、培地にブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ，Ｓｉｇｍａ社）を終濃度が１０μＭになるよう添加した。培養終了後、被検物質で処理した筋衛星細胞を、氷冷した０．１％Ｈ₂Ｏ₂添加メタノールを使って４℃で１０分間固定した。さらに、２Ｎ塩酸を使って３７℃で１時間ＤＮＡ変性処理を行った後、一次抗体として抗ＢｒｄＵ抗体（Ｓｉｇｍａ社）、二次抗体としてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ社）を用い、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ，Ｓｉｇｍａ社）にて発色させ、ＢｒｄＵ陽性細胞を検出した。総細胞数に占めるＢｒｄＵ陽性細胞の割合を求め、筋衛星細胞活性化率とした。溶媒対照の場合は１２例、カスアリニンまたはスタキウリンの場合は各濃度につき３例ずつ実験を行い、平均値と標準偏差を算出した。結果を表１と図１，２に示す。図１，２中、「＊」はダネットの検定において溶媒対照に対してｐ＜０．０５で有意差があることを示す。

　表１と図１，２に示す結果の通り、カスアリニンとスタキウリンには、有意な筋衛星細胞活性化効果が認められた。

　比較例１：　ポリフェノールの筋衛星細胞活性化能評価
　カスアリニンとスタキウリンの筋衛星細胞活性化効果が、これら化合物に特異的な効果であるかを確認するため、エラジタンニン以外のポリフェノールであるカテキン（和光純薬工業社製）、ミリシトリン（Ａｄｏｏｑ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、ヒペリン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ社製）、およびケルシトリン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ社製）について、実施例３と同様にして筋衛星細胞活性化能を評価した。各化合物の処理濃度は１００ｎｇ／ｍＬとした。結果を表２と図３に示す。

　表２と図３に示される結果の通り、上記のエラジタンニン以外のポリフェノールは、溶媒対照と比較して、明確な筋衛星細胞活性化効果を示さなかった。

　比較例２：　他のエラジタンニンと部分構造体の筋衛星細胞活性化能評価
　カスアリニンやスタキウリンと同様の筋衛星細胞活性化効果が、他のエラジタンニンや部分構造体にも認められるか確認するため、カスアリニンのグルコース部分が閉環した構造を有するカスアリクチン（長良サイエンス社製）、カスアリニンにおいて２，３－ヘキサヒドロキシジフェノイル基と５－ガロイル基が結合した構造を有するカスタラジン（Ｓｉｇｍａ社製）、カスアリニンとスタキウリンの部分構造体である没食子酸（和光純薬工業社製）、カスアリニンとスタキウリンのヘキサヒドロキシジフェノイル基が分子内脱水縮合したエラグ酸（和光純薬工業社製）について、実施例３と同様にして筋衛星細胞活性化能を評価した。各化合物の処理濃度は１００ｎｇ／ｍＬとした。結果を表３と図４に示す。

　表３と図４に示される結果の通り、カスアリニンおよびスタキウリン以外のエラジタンニンや、カスアリニンおよびスタキウリンの部分構造体には、溶媒対照と比較して、明確な筋衛星細胞活性化効果は認められなかった。

　以上の結果より、優れた筋衛星細胞活性化効果は、カスアリニンおよびスタキウリンに特異的なものであることが明らかにされた。

Claims

　下記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として含有することを特徴とする筋肉増強剤。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである請求項１に記載の筋肉増強剤。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである請求項１に記載の筋肉増強剤。
　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制するためのものである請求項１～３のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与するためのものである請求項１～４のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　飲食品用組成物である請求項１～５のいずれかに記載の筋肉増強剤。
　機能性表示食品である請求項６に記載の筋肉増強剤。
　筋肉を増強するための下記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンの使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである請求項８に記載の使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである請求項８に記載の使用。
　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制するための請求項８～１０のいずれかに記載の使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンをヒトに投与する請求項８～１１のいずれかに記載の使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有するヒト、または高齢者に投与する請求項８～１１のいずれかに記載の使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する請求項８～１３のいずれかに記載の使用。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを飲食品用組成物の成分として投与する請求項８～１４のいずれかに記載の使用。
　下記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを有効成分として対象者に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがカスアリニンである請求項１６に記載の筋肉増強方法。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンがスタキウリンである請求項１６に記載の筋肉増強方法。
　筋肉量および／または筋力を増加および／または維持するか、或いは筋肉量および／または筋力の低下を予防および／または抑制する請求項１６～１８のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　上記対象者がヒトである請求項１６～１９のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　上記対象者が、サルコペニア、ロコモティブシンドローム、フレイルからなる群より選択される１つ以上の疾患を有する若しくはその可能性を有するヒト、または高齢者である請求項１６～１９のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する請求項１６～２１のいずれかに記載の筋肉増強方法。
　上記式（Ｉ）で表されるエラジタンニンを飲食品用組成物の成分として投与する請求項１６～２２のいずれかに記載の筋肉増強方法。