KR101970353B1

KR101970353B1 - 몰루긴 및 bmp-2를 포함하는 골 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101970353B1
Application number: KR1020170101663A
Authority: KR
Inventors: 김성환
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2017-08-10
Filing date: 2017-08-10
Publication date: 2019-04-18
Also published as: KR20190017206A

Abstract

본 발명은 몰루긴 (mollugin) 및 BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2)를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 치료용 조성물 등에 관한 것으로, 본 발명의 상기 조성물은 p38 및 Smad1/5/8의 인산화를 촉진시킬 뿐만 아니라, BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, 및 BMP-9의 발현 및 활성을 상승적으로 증가시켜, 결과적으로 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 골 질환의 예방 또는 치료용 조성물 {Composition for preventing or treating bone disease comprising mollugin and BMP-2}

본 발명은 몰루긴의 BMP-2 매개 조골세포 분화 촉진 용도, 및 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 몰루긴을 포함하는, BMP-2 매개 조골세포 분화 촉진용 조성물, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 골 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물, 건강기능식품 조성물, 사료 조성물, 상기 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 골 질환의 예방 또는 치료방법, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 치과용 수복물 등에 관한 것이다.

골 (bone)은 인체의 연조직과 체중을 지탱해주고 내부기관을 둘러싸서 내부 장기를 외부의 충격으로부터 보호한다. 또한, 근육이나 장기를 구조적으로 지탱할 뿐만 아니라 체내의 칼슘이나 다른 필수 무기질, 즉 인이나 마그네슘과 같은 물질을 저장하는 인체의 중요한 부분 중 하나이다. 따라서 성장이 끝난 성인의 뼈는 멈추지 않고 죽는 날까지 오래된 뼈는 제거하고 새로운 뼈로 대체하는 생성과 흡수 과정을 매우 역동적, 지속적으로 반복재생 하면서 균형을 유지하게 된다. 이를 골재형성 (bone remodeling)이라고 한다. 오래된 뼈는 제거하고 새로운 뼈로 대체하는 뼈의 순환은 성장과 스트레스에 의해서 일어나는 뼈의 미세한 손상을 회복시키고 적절히 뼈의 기능을 유지하는데 필수적이다.

골 조직의 대사는 골 형성을 담당하는 조골세포와 골 흡수를 담당하는 파골세포의 작용으로 이루어져 있으며, 이들 세포의 기능이 균형을 이루어 항상성을 유지한다. 그러나, 조골세포 활성이 저하되거나 파골세포 활성이 증가되면 골밀도가 감소하여 골다공증이 유발될 수 있다. 골다공증은 동일 연령과 성별의 정상인에 비하여 골밀도가 현저하게 감소하는 증상을 나타내는 질환을 의미하는데, 그의 발병 원인으로는 내분비학적, 영양학적, 유전학적 인자들이 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 특히, 여성의 경우 폐경과 함께 골밀도의 감소 현상이 더욱 심하여 골다공증의 발병률이 남성보다 현저히 높다고 보고되었다. 그 외에도, 갑상선 기능항진, 당뇨병, 스트레스, 흡연, 운동 부족, 신체적 노화, 글루코코르티코이드 (glucocorticoid) 계열 약물의 복용 등이 발병원인으로 보고되었다.

한편, 뼈 형성 단백질 (Bone morphogenetic proteins (BMPs))은 골형성 (osteogenesis)을 촉진시키는 가장 강력한 성장인자이다 (Cheng et al. 2003). 여러 BMP 중에서도 통상적으로 활용되고 있는 BMP-2는 척추 손상 (spinal injuries), 골 이식 (bone grafts) 및 다른 정형외과적 수술에 있어, 환자의 골 재생을 촉진시키기 위한 치료제로서 이용되고 있다.

다양한 골-관련 건강 관리 제품에 대한 수요가 높은 노년층 비율은 세계적으로 점점 증가하고 있다. 이에, '투명성 시장 연구 (Transparency Market Research)'에서는 보고서를 통해, 최근 BMP 세계 시장이 2022까지 약 5억 8천 7백만 달러까지 성장할 것으로 예상하였다. 그러나, 고농도의 BMP-2를 임상적으로 적용할 경우, 경추가 붓거나, 심지어 종양이 발생되는 등 생명을 위협할 수 있는 부작용이 발생될 수 있기 때문에, BMP-2를 고농도로 사용하는 것은 실질적으로 불가능한 실정이다 (James et al. Tissue Eng Part B Rev. (2016) 22:284-97).

때문에, BMP-2의 골 형성 반응을 촉진시킬 수 있는 소분자 (small molecules)에 대한 연구가 진행되고 있다. 즉, BMP-2와 상기 소분자를 조합하여 사용할 경우 BMP-2의 투여량을 낮추고, BMP-2 투여로 인한 부작용 발생의 위험을 낮출 수 있기 때문이다 (Cao et al., Sci Rep. (2014) 14:4965, 2014; Fan et al., Tissue Eng Part A. (2016) 22: 195-207). 특히, 천연물 유래 물질 군에서 BMP-2 활성을 촉진시킬 수 있는 소분자를 규명하려는 연구가 진행되고 있는데, 이는 천연물에서 유래한 물질은 부작용이 발생할 가능성이 낮기 때문이다.

골생물학 (bone biology) 분야에서는 많은 생리활성 천연물질이 발견되고 있으며, 그 중 여러 식물 화학물질 (phytochemicals)이 BMP-2의 골형성 반응을 촉진하는 것으로 보고되고 있다. 예컨대, 리코칼콘 A (licochalcone A) 및 탄시논 IIA (tanshinone IIA)과 같은 여러 식물 화학물질은 파골세포 형성을 억제하는 활성을 나타내는 것으로 알려져 있다.

한편, 몰루긴 (mollugin; naphthohydroquinone)은 Rubia tinctorum 등의 뿌리로부터 분리될 수 있는 물질로서, 돌연변이를 유발하지 않는 물질로 알려져 있다. 상기 몰루긴은 신경보호 효과, 항바이러스 활성, 항염증 활성, 지방생성 억제 활성 및 항암 활성과 같은 다양한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 알려져 있다.

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 BMP-2의 활성을 촉진하는 소분자에 대해 연구한 결과, 상기 몰루긴이 p38-Smad1/5/8 신호전달 경로의 인산화를 촉진시킴으로써 BMP-2의 발현 및 활성을 촉진하므로, 결과적으로 몰루긴 및 BMP-2가 다양한 골 질환에 대한 예방 및 치료제로서 사용될 수 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은, 몰루긴 (mollugin)을 포함하는, BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2) 매개 조골세포 분화 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 상기 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 골 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물에서 골 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은, 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 치과용 수복물을 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 (mollugin)을 포함하는, BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2) 매개 조골세포 분화 촉진용 조성물을 제공한다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 (mollugin) 및 BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2)를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "몰루긴 (mollugin)"은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물로서, 화학식 C₁₇H₁₆O₄, 분자량 284.311 g/mol을 갖는 물질이다. 상기 몰루긴은 신경보호 효과, 항바이러스 활성, 항염증 활성, 지방생성 억제 활성, 및 항암 활성과 같은 다양한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 알려져 있으나, 골 형성 촉진 효과, 특히 BMP-2의 조골세포 형성을 시너지적으로 향상시키는 효과에 대해서는 알려진 바가 없다.

[화학식 1]

본 발명에서 "BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2)"는 골형성 (osteogenesis)를 촉진시키는 성장인자인 뼈 형성 단백질 중 하나로서, 척추 손상(spinal injuries), 골 이식 (bone grafts) 등에서 골 재생 촉진을 위해 사용되고 있으나, 고농도로 사용할 경우 심한 부작용을 일으키는 것으로 알려져 있다.

이에, 본 발명에서는 BMP-2와 몰루긴을 복합적으로 사용함으로써, 골 형성 촉진에 있어 BMP-2 단독 사용에 비한 현저한 시너지 효과가 나타남을 확인하였으며, 나아가 부작용 발생 우려가 있는 BMP-2를 고농도로 사용하지 않더라도 우수한 골 형성 촉진 효과를 유도할 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 용어 "골 질환"이란, 조골세포 및 파골세포의 불균형으로 인해 유발되어 골조직의 장애를 초래하거나 또는 골조직을 파괴하는 질환을 의미하는데, 상기 골 관련 질환은 특별히 이에 제한되지 않으나, 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병, 전이성 골암 등을 들 수 있다.

본 발명의 용어 "골다공증"이란, 남아 있는 뼈에는 구조상으로 아무런 이상이 없으면서 뼈를 형성하는 무기질과 기질의 양이 과도하게 감소되어 뼈에 스펀지 처럼 작은 구멍이 많이 나서 무르고 쉽게 부러지는 증상을 나타내는 질환을 의미하는데, 골조소증 또는 골소공증이라고도 한다.

본 발명의 용어 "골질환의 예방 또는 치료"란 상기 골 관련 질환의 발병을 예방하거나 또는 상기 질환의 발병에 의한 증세를 호전하거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미하는데, 골질환 증상의 예방, 감소, 개선, 그 증상의 고통 경감, 골질환 발생율 감소 또는 치료결과를 증가시키는 환자의 어떠한 다른 변화를 모두 포함한다.

상기 골 질환의 예방 또는 치료는 몰루긴의 BMP-2 매개 조골세포 분화 촉진에 의해 달성되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 골아세포 분화의 대표적 마커인 ALP의 발현 및 활성에 대한 몰루긴 단독, 또는 몰루긴 및 BMP-2 복합 사용의 효과를 확인한 결과, 몰루긴 자체만으로는 ALP의 발현 및 활성을 증가시키지 못하였으나, BMP-2는 ALP의 발현 및 활성을 상당히 촉진시켰으며, 특히 이와 함께 포함되는 몰루긴이 농도 의존적으로 BMP-2에 의한 ALP 발현 및 활성 촉진 효과를 상승적으로 증가시킴을 확인하여 (도 2 및 도 3), 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 조성물은 골 질환의 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 조성물에서 상기 몰루긴 및 BMP-2는 BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, 및/또는 BMP-9의 발현 및 활성을 촉진시키는 것일 수 있으며, p38 및 Smad1/5/8의 인산화를 촉진시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 여러 BMP들의 mRNA 발현에 대한 몰루긴 및 BMP-2의 효과를 확인한 결과, BMP-2는 C2C12 세포 내 BMP-2, 4, 6, 7, 또는 9의 mRNA 발현량을 상당히 증가시켰으며, 이러한 증가 양상은 몰루긴의 첨가로 인해 급격히 상승하였음을 알 수 있다 (도 5). 또한, 몰루긴은 C2C12 세포에서 BMP-2의 존재 하에 농도 의존적으로 p38 및 Smad1/5/8의 인산화를 촉진하였음을 확인하였다 (도 6).

한편, 본 발명의 골 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 포함된 상기 몰루긴 및 BMP-2의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 최종 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 함량으로 포함될 수 있다.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.

본 발명의 약학조성물의 투여량은 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물을 사람을 포함하는 포유동물에 하루 동안 1 내지 20 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 1 내지 10 ㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

상기 몰루긴, BMP-2, 골 질환, 예방에 대해서는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명의 용어 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 골 질환이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미하며, 구체적으로 피부 외용제 또는 개인위생용품일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

몰루긴 및 BMP-2를 골 질환 예방 또는 개선을 목적으로 의약외품 조성물에 첨가할 경우, 상기 몰루긴 및 BMP-2를 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.

상기 피부 외용제는 특별히 이에 제한되지 않으나, 예를 들어 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 개인위생용품에는 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로는 비누, 화장품, 물티슈, 휴지, 샴푸, 피부 크림, 얼굴 크림, 메이크업, 파운데이션, 볼터치, 선스크린 로션, 모발 손질 제품, 에어프레쉬너 겔 또는 세정 겔일 수 있다. 또한, 본 발명의 의약외품 조성물의 또 다른 예로 소독청결제, 샤워폼, 물티슈, 세제비누, 마스크 또는 연고제가 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 몰루긴, BMP-2, 골 질환, 예방, 개선에 대해서는 상기 설명한 바와 같다.

상기 몰루긴은 세포 독성을 유발하지 않으며 (도 4), BMP-2는 생체 내에서 생물학적으로 합성되는 천연 물질인바, 몰루긴 및 BMP-2는 골질환의 예방 또는 개선을 도모할 수 있는 식품의 형태로 제조되어 섭취할 수 있다. 이때, 상기 식품에 포함되는 상기 몰루긴 및 BMP-2의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있다. 식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 30g, 바람직하게는 3 내지 20g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.

구체적인 예로, 상기 식품 조성물을 이용하여 골질환을 예방 또는 개선시킬 수 있는 가공식품을 제조할 수 있다. 이런 가공식품에는 예들 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육륙가공식품, 국수 등을 포함한다. 과자는 비스킷, 파이, 케익, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 음용수, 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예들 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토 쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주, 양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예들 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파일애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지. 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.

또한, 상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 "기능성 식품(functional food)"이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 골질환의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 골아세포 분화의 대표적 마커인 ALP의 발현 및 활성에 대한 몰루긴 단독, 또는 몰루긴 및 BMP-2 복합 사용의 효과를 확인한 결과, 몰루긴 자체만으로는 ALP의 발현 및 활성을 증가시키지 못하였으나, BMP-2는 ALP의 발현 및 활성을 상당히 촉진시켰으며, 특히 이와 함께 포함되는 몰루긴이 농도 의존적으로 BMP-2에 의한 ALP 발현 및 활성 촉진 효과를 상승적으로 증가시킴을 확인하여 (도 2 및 도 3), 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 조성물은 골 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 골 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 개체에 투여하는 단계를 포함하는 골 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.

상술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 몰루긴 및 BMP-2은 골 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로서 사용할 수 있으므로, 상기 조성물은 골 질환을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명에서 용어 "개체"란 골 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물을 제한 없이 포함한다.

본 발명의 골 질환을 치료하는 방법에 있어서, 상기 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있다. 다만, 경구 투여시에는 위산에 의하여 상기 몰루긴 및 BMP-2가 변성될 수 있기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 사료 조성물 내 몰루긴 및 BMP-2의 함량은 적용 가축의 종류 및 연령, 적용 형태, 목적하는 효과 등에 따라서 적절하게 조절 가능하며, 예컨대 1 내지 99 중량%, 바람직하게는 10 내지 90 중량%, 더욱 바람직하게는 20 내지 80 중량%로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 사료 조성물은 투여를 위해서 몰루긴 및 BMP-2 이외에 추가로 구연산, 푸마르산, 아디프산, 젖산 등의 유기산; 인산칼륨, 인산나트륨, 중합 인산염 등의 인산염; 폴리페놀, 카테친, 토코페롤, 비타민 C, 녹차 추출물, 키토산, 탄니산 등의 천연 항산화제 중 1종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항인플루엔자제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 또는 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

또한, 본 발명의 사료 조성물은 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항산화제, 항진균제, 항균제 등과 같은 각종 보조제 및 분쇄 또는 파쇄된 밀, 보리, 옥수수 등의 식물성 단백질 사료, 혈분, 육분, 생선분 등의 동물성 단백질 사료, 동물성 지방 및 식물성 지방 같은 주성분 이외에도 영양 보충제, 성장 촉진제, 소화 흡수 촉진제, 질병 예방제와 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 사료 조성물을 사료 첨가물로 사용할 경우, 상기 사료 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 사료 조성물의 투여 형태는 비독성 제약상 허용 가능한 담체와 조합하여 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 옥수수 전분, 락토스, 수크로스, 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체형 담체의 경우에는 정제, 산제, 토로키제 등의 투여 형태일 수 있으며 액체형 담체의 경우에는 시럽제, 액체 현탁액제, 에멀젼제, 용액제 등의 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여제는 보존제, 윤화제, 용액 촉진제, 안정화제를 함유할 수 있으며 다른 염증 질환 개선제 및 바이러스 예방상 유용한 물질을 함유할 수도 있다.

본 발명의 사료 조성물은 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다. 상업용으로 중요한 돼지, 소, 염소 등의 포유류, 코끼리, 낙타 등의 동물원 동물, 개, 고양이 등의 가축에게 사용할 수 있다. 상업적으로 중요한 가금류에는 닭, 오리, 거위 등이 포함되며, 송어와 새우와 같은 상업적으로 사육되는 어류 및 갑각류를 포함 할 수 있다.

본 발명에 따른 사료 조성물은 가축사료에 건조 중량 기준으로 1 ㎏ 당 약 10 내지 500 g, 바람직하기로는 10 내지 100 g의 양으로 혼합될 수 있고, 완전히 혼합한 후 매쉬로 공급하거나, 추가 가공 공정을 통하여 팰렛화, 팽창화, 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 치과용 수복물을 제공한다.

상기 몰루긴, BMP-2에 대해서는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명에서 "치과용 수복물"이란 치과 진료 또는 치료로 인해 손상되거나 결손된 치아, 치아 주변부를 수복하는 물질을 의미한다.

구체적으로, 상기 치과용 수복물은 임플란트로 인한 골 결손을 수복하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 조성물의 우수한 골 형성 촉진 효과를 확인하였는바, 이를 포함하는 조성물은 결손된 치아를 수복하는 치과용 수복물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 몰루긴 및 BMP-2를 포함하는 조성물은 p38 및 Smad1/5/8의 인산화를 촉진시킬 뿐만 아니라, BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, 및 BMP-9의 발현 및 활성을 상승적으로 증가시켜, 결과적으로 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은, ALP 활성에 대한 몰루긴 단독 사용의 효과를 확인한 도이다.
도 2는, ALP 발현에 대한 몰루긴 및 BMP-2 복합 사용의 상승 효과를 확인한 사진이다.
도 3은, ALP 활성에 대한 몰루긴 및 BMP-2 복합 사용의 상승 효과를 확인한 그래프이다.
도 4는, 몰루긴의 세포 독성 유발 여부를 확인한 그래프이다.
도 5는, ALP, BMP-2, 4, 6, 7, 및 9의 mRNA 발현에 대한 몰루긴 및 BMP-2 복합 사용의 상승 효과를 확인한 그래프이다.
도 6은, p38 및 Smad1/5/8의 인산화에 대한 BMP-2 및 몰루긴의 효과를 확인한 전기영동 사진이다.
도 7은, p38 특이적 억제제인 SB202190을 처리할 경우의 p38 및 Smad1/5/8의 인산화, ALP 활성 변화를 나타낸 것이다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 실험 재료 및 방법

1-1. 실험 재료 준비

몰루긴은 공지된 논문 (Lee et al., 2007)에 기재된 방법으로 합성하였다. 재조합 인간 BMP-2 (rhBMP-2) 및 SB202190 (p38 억제제)는 각각 R&D (MN, USA) 및 Calbiochem (CA, USA)에서 구매하였다. 모든 배지 재료는 HyClone (UT, USA)에서 구매하였다. phospho(p)-p38, p38, p-c-Jun N-terminal kinase (p-JNK), JNK, p-extracellular-signal-regulated kinase (p-ERK), ERK, p-Sma 및 Mad 연관 단백질 1/5/8 (p-Smad1/5/8) 및 Smad에 대한 항체는 Cell signaling (MA, USA)에서 구매하였다. 액틴에 대한 항체와 2차 항체 (secondary antibodies)는 Santa Cruz Biotechnology Inc. (CA, USA)에서 구매하였다.

1-2. 세포 배양 및 분화

American Type Culture Collection (VA, USA)에서 구매한 근원세포 세포주인 C2C12 세포를 성장배지 (GM; 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin, 및 100 μg/ml streptomycin을 포함하는 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM))에서 유지하였다. 세포를 분주 (seed)하고, 1일 후, 배지를 분화 배지 (DM; 5% FBS 및 50 ng/ml rhBMP-2를 포함하는 DMEM)로 교체하여 세포를 분화시켰다.

1-3. 알칼리포스파타제 (Alkaline phosphatase; ALP) 염색 및 활성 분석

공개된 문헌 (Kim and Kim., 2010)에 서술된 방법을 통해, 골아세포 형성 (osteoblastogenesis)의 초기 바이오마커인 ALP를 분석하였다. C2C12 세포 (4 x10³ cells/well)를 96-웰 플레이트에 분주하였고, 24시간 후, 몰루긴을 포함하거나 포함하지 않는 분화 배지로 교체하였다. 3일 후, 상기 세포를 인산완충식염수(phosphate-buffered saline)로 2회 세척하고, 30초 동안 PBS에서 10% 포르말린으로 고정시켰으며, 탈염수 (deionized water)로 헹구고, 알칼리포스파타제 키트 (Alkaline Phosphatase Kit) (Sigma, MO, USA)를 이용해 염색하였다.

ATP 활성을 분석하기 위해, 세포를 PBS로 2회 세척한 후, 각각의 웰에 100 μl의 1-Step PNPP (p-nitrophenyl phosphate) 기질 용액 (Thermo Fisher Scientific, MA, USA)을 첨가하였다. 이후, 세포를 상온에서 15분 동안 배양하고, 2N 농도의 NaOH 50 μl를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 그 후, 마이크로플레이트 리더 (Wallac EnVision, PerkinElmer, MA, USA)를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.

1-4. 세포 생존률 분석

몰루긴을 첨가한 배지에서 세포를 배양하여 세포 독성을 확인하였다.

구체적으로,C2C12 세포를 4 x 10³ cells/well 농도로 96-웰 플레이트에 분주하였다. 24시간 후, 세포에 몰루긴을 첨가하여 3일간 배양하였으며, Cell Counting Kit-8 (Dojindo Molecular Technologies, ML, USA)를 이용하여, 제조사의 프로토콜에 따라 세포 생존률을 3회 측정하였다. 마이크로플레이트 리더 (Wallac EnVision, PerkinElmer, Finland)를 이용해 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

1-5. mRNA 발현 평가

mRNA 발현량은 상기 공개된 문헌 (Kim and Kim., 2010)에 서술된 방법으로 측정하였다. 구체적으로, 온라인 프라이머 디자인 프로그램 (Rozen and Skaletsky, 2000)을 이용하여 본 실시예의 프라이머를 디자인 하였다. TRIzol reagent (Life Technologies, MD, USA)를 이용하여 전체 RNA를 분리하였고, 전체 RNA의 1 μg, oligo-dT₁₈ 프라이머 1 μM, RNase 억제제 10 units, RNasin (Promega, WI, USA), 및 Omniscript Reverse Transcriptase (Qiagen, CA, USA)을 이용하여, 제조사의 지침에 따라 cDNA의 첫 번째 가닥을 합성하였다.

이후, Stratagene Mx3000P Real-Time PCR system 및 Brilliant SYBR Green Master Mix (Stratagene, CA, USA)를 이용하여, 10 ml의 TOPreal qPCR 2x PreMIX (Enzynomics, Korea), 2 pmol의 정방향 프라이머, 2 pmol의 역방향 프라이머, 및 2 ml 의 1:10로 희석된 1 mg의 첫 번째 가닥의 cDNA를 포함하는 20 ml의 반응 혼합액에서, SYBR green-based qPCR (quantitative polymer chain reaction)을 수행하였다. 증폭 파라미터로서, 95℃에서 10분 동안 초기 변성을 거치며, 3단계 PCR (94℃에서 40초 변성, 53℃에서 40초 동안 어닐링, 72℃에서 1분 동안 증폭)을 40회 반복하였다. 모든 반응은 3회 반복하였으며, 2^-DDCT 방법 (Livak and Schmittgen, 2001)을 이용하여 데이터를 분석하였다. GAPDH를 대조군 유전자로 사용하였다. GAPDH-normalized 2^-DDCT 값으로 유의성을 결정하였다.

1-6. 웨스턴 블랏 분석

1 x 프로테아제 및 포스파타아제 억제제 (Pierce Biotechnology, IL, USA)를 포함하는 차가운 용해 버퍼 (0.2 M Tris-HCl, pH 7.5, 1.5 M NaCl, 1% deoxycholic acid, 1% NP-40 and 1 mM EDTA)를 이용하여 C2C12 세포를 용해하였다. 이후, 세포 용해물을 4℃에서 20분 동안 배양하고, 15분 동안 14,000x g로 원심분리 하였다. 단백질 분리 키트 (Bio-Rad, CA, USA)를 이용하여 상층액의 단백질 농도를 결정하였다. 샘플 버퍼 (100 nM Tris-HCl, 2% sodium dodecyl sulfate (SDS), 1% 2-mercaptoethanol, 2% glycerol, 0.01% bromophenol blue, pH 7.6)에서 95℃ 및 15분 동안 변성된 단백질 샘플들 (20 mg)을 10% 폴리아크릴아마이드겔에 로딩하였다. Mini Protean 3 Cell (Bio-Rad, CA, USA)로 전기영동 하였으며, 분리된 단백질은 일렉트로블로팅(electroblotting)을 통해 polyvinylidene difluoride (PVDF) 막 (membrane) (Millipore, CA, USA)으로 옮겼다. 5% 탈지분유가 포함된 TBST 버퍼 (10 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1% Tween 20)에서 상기 막을 인큐베이션하였고, 희석된 1차 항체 (1:1,000)를 처리하여 4℃에서 밤새 배양하였다. 상기 막을 상온에서 TBST로 세척한 후, 희석된 2차 항체 (1:5,000)와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이를 TBST를 이용하여 3회 (각각 15분 동안) 세척한 후, 상기 막을 uperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Pierce Biotechnology)에서 현상한 후, LAS-3000 발광 이미지 분석계 (Fuji Photo Film Co., Ltd., Japan)를 통해 평가하였다.

1-7. 통계 분석

모든 정량적 수치는 평균± SD로 표시되었다. 각각의 실험은 3회 반복되었으며, 본 실시예에는 대표적인 일 실험에 의한 결과를 기재하였다. 통계적 차이는 Student's t-test로 분석되었으며, P<0.05인 경우 유의성이 있는 것으로 판단하였다.

실시예 2: 실험 결과 분석

2-1. BMP-2로 유도된 ALP에 대한 몰루긴의 효과 확인

골 형성 과정에 대한 몰루긴의 생물학적 활성을 분석하기 위하여, BMP-2로 유도된 C2C12 세포의 분화에 대한 몰루긴의 효과를 ALP 염색 및 ALP 활성 분석을 통해 확인하였다.

그 결과, 도 1에서 알 수 있듯이 몰루긴 단독으로는 ALP의 발현 및 활성을 증가시키지 못하였으나, 도 2 및 도 3과 같이 BMP-2는 골아세포 분화의 대표적 마커인 ALP의 발현 및 활성을 상당히 촉진시켰으며, 특히 이와 함께 포함되는 몰루긴이 농도 의존적으로 BMP-2에 의한 ALP 발현 및 활성 촉진 효과를 상승적으로 증가시킴을 확인하였다.

따라서, 몰루긴만을 사용할 경우 실질적으로 골 형성 효과가 낮으나, BMP-2 및 몰루긴을 혼합하여 사용할 경우 몰루긴 단독 또는 BMP-2 단독 사용에 비해 골 형성 촉진 효과가 매우 상승적으로 증가하여, 골 질환 치료제 등으로 더욱 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

한편, 도 4에서 알 수 있듯이, 몰루긴은 성장 배지 조건에서 10 μM 농도 까지도 어떠한 세포 독성도 나타내지 않아, 약학적 조성물, 식품 조성물, 치과용 수복물 등으로 사용하더라도 안전한 물질임을 알 수 있다.

2-2. 골형성 BMP의 mRNA 발현을 유도하는 BMP-2의 효과에 대한 몰루긴의 촉진 효과 확인

나아가, 여러 BMP들의 mRNA 발현에 대한 몰루긴 및 BMP-2의 효과를 확인하고자, real-time PCR 분석을 실시하였다.

그 결과, 도 5에서 알 수 있듯이, BMP-2는 C2C12 세포 내 BMP-2, 4, 6, 7, 및 9의 mRNA 발현량을 상당히 증가시켰으며, 이러한 증가 양상은 몰루긴의 첨가로 인해 급격히 상승하였다.

특히, 10 μM의 몰루긴이 첨가된 경우 모든 종류의 BMP의 mRNA 발현에 대한 BMP-2의 유도 효과가 매우 상승적으로 증가되었음을 알 수 있다.

2-3. p38 및 Smad1/5/8의 인산화에 대한 BMP-2 및 몰루긴의 효과 확인

몰루긴의 골 형성 촉진 효과에 대한 세포 메커니즘을 분석하기 위해, 상기 실시예 1에서 설명한 웨스턴 블럿을 실시하여 미토겐 활성화 단백질 (MAP) 키나아제 (mitogen-activated protein kinase)의 활성에 대한 영향을 평가하였다.

그 결과, 도 6에서 알 수 있듯이, 몰루긴은 C2C12 세포에서 BMP-2의 존재 하에 농도 의존적으로 p38의 인산화를 촉진하였으나, JNK 및 ERK에 대해서는 그러하지 않았다. 또한, Smad1/5/8의 인산화 또한 몰루긴에 의해 유도됨을 확인하였다.

2-4. SB202190을 이용한, p-38-Smad 신호 전달 경로의 관련성 확인

p-38-Smad 신호 전달 경로가 관련되었는지 여부를 약학적 억제 연구를 통해 확인하고자 하였다.

그 결과, 도 7에서 알 수 있듯이, 몰루긴은 C2C12 세포에서 BMP-2의 존재 하에 p38 및 Smad1/5/8 모두의 인산화를 촉진하였으나, 이러한 효과는 p38 특이적 억제제 중 하나인 SB202190을 전처리함에 따라 농도 의존적으로 억제됨을 확인하였다.

또한, C2C12 세포에서 BMP-2의 존재 하에 몰루긴으로 유도된 ALP 활성 또한 SB202190에 의해 농도 의존적으로 억제됨을 확인하였다.

따라서, 몰루긴 및 BMP-2가 골 형성 반응을 촉진함에 있어, p-38-Smad 신호 전달 경로가 관련되어 작용함을 알 수 있다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

몰루긴 (mollugin)을 포함하는, 생체외에서 BMP-2 (Bone morphogenetic protein-2) 매개 조골세포 분화 촉진용 조성물.
몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서,
상기 골 질환은 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인, 약학 조성물.
제2항에 있어서, 상기 골 질환의 예방 또는 치료는 몰루긴의 BMP-2 매개 조골세포 분화 촉진에 의해 달성되는 것인, 약학 조성물.
제2항에 있어서, 상기 조성물은 BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, 또는 BMP-9의 발현 및 활성을 촉진시키는 것인, 약학 조성물.
제2항에 있어서, 상기 조성물은 p38 및 Smad1/5/8의 인산화를 촉진시키는 것인, 약학 조성물.
삭제
몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물로서,
상기 골 질환은 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인, 의약외품 조성물.
몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물로서,
상기 골 질환은 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인, 건강기능식품 조성물.
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 골 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물에서 골 질환을 예방 또는 치료하는 방법으로서,
상기 골 질환은 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인, 방법.
몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 골 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물로서,
상기 골 질환은 성장기 발육부진, 골절, 골다공증, 류마티스 관절염, 치주질환, 파제트병 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인, 사료 조성물.
몰루긴 및 BMP-2를 포함하는, 치아 또는 이의 주변부의 골 결손을 수복하기 위한 치과용 수복물.
제11항에 있어서, 상기 수복물은 임플란트로 인한 골 결손을 수복하는 것인, 치과용 수복물.