JP6189595B2 - 低アディポネクチン血症治療剤 - Google Patents
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Description
ボタンボウフウの葉(0.5g)を乾燥させ、粉末化したものを、50%エタノール20mLに、60℃で0.5時間浸漬した。その後室温で4時間振盪し、抽出処理を行った。抽出処理後、フィルターろ過(CHROMAFIL O−20/25、フィルターサイズ0.20μm、Macherey−Nagel社製)を行い、抽出液を得た。この抽出液3mLをドライアップし、114.3mgの抽出物を得た。この抽出物を、2mLのジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解した。このDMSO溶解液をフィルター滅菌(MN Sterilizer PES、フィルターサイズ0.22μm、Macherey−Nagel社製)し、サンプルBを得た。
インフォームドコンセントが得られた被験者(メタボリックシンドロームを合併した大腸癌患者、65歳男性)の、手術時に摘出した残余組織から、脂肪組織を採取した。この脂肪組織をPBS(リン酸緩衝生理食塩水)で数回洗浄して血管を取り除いた後、細断した。これに、0.1%タイプ2コラゲナーゼ溶液(シグマ−アルドリッチ社製)10mLを加え、37℃でよく攪拌しながら1時間インキュベートした。その後、メッシュフィルター(BDファルコン社製)でろ過し、10分間、780×gで遠心分離した。遠心分離により得られたペレットを脂肪前駆細胞培養用培地(PM−1,Zen−Bio社製)に懸濁し、37℃、5%CO2下でコンフルエントまで増殖させた。この細胞を脂肪細胞に分化させるために、37℃、5%CO2下、脂肪細胞分化培地(DM−2、Zen−bio社製)で処理した。DM−2処理8日後、DMSO添加AM−1培地、又はサンプルB添加AM−1培地(培地中ボタンボウフウ抽出物濃度:6.2mg/mL)(AM−1:脂肪細胞培養用培地、Zen−Bio社製)に交換し、48時間後の上清アディポネクチン濃度を測定した。上清アディポネクチン濃度は、ヒトアディポネクチンELISAキット(大塚製薬株式会社製)を用いて、該キットに添付のプロトコールに従い測定した。
結果を図1Aに示す。サンプルBを添加した場合では、DMSOのみを添加した場合に比して、脂肪細胞によるアディポネクチン産生作用が3倍以上高いことが認められた。このことから、抽出溶媒として50%エタノールを用いたボタンボウフウ抽出物は、優れたアディポネクチン産生促進作用を有することが明らかとなった。
ボタンボウフウの葉(0.5g)を乾燥させ、粉末化したものを、水20mLに、60℃で0.5時間浸漬した。その後室温で4時間振盪し、抽出処理を行った。抽出処理後、フィルターろ過(ADVANTEC Filter Paper Qualitative No.2,90mm、ADVANTEC社製)を行い、抽出液を3mL得た。この抽出液をドライアップし、59mgの抽出物を得た。この抽出物を、1mLのDMSOに溶解した。このDMSO溶解液をフィルター滅菌(MN Sterilizer PES、フィルターサイズ0.22μm、Macherey−Nagel社製)し、サンプルAを得た。
インフォームドコンセントが得られた被験者(糖尿病及び低アディポネクチン血症を合併した重症肥満患者、20歳代女性)の、手術時に摘出した残余組織から、脂肪組織を採取した。この脂肪組織を実施例1と同様に処理した。DM−2処理8日後、DMSO添加AM−1培地、又はサンプルA添加AM−1培地(培地中ボタンボウフウ抽出物濃度:5.6mg/mL)に交換し、48時間後の上清アディポネクチン濃度を、実施例1と同様に測定した。
結果を図1Bに示す。サンプルAを添加した場合では、DMSOのみを添加した場合に比して、脂肪細胞によるアディポネクチン産生作用が2倍程度高いことが認められた。このことから、抽出溶媒として水を用いたボタンボウフウ抽出物は、抽出溶媒として50%エタノールを用いた場合と同様、優れたアディポネクチン産生促進作用を有することが明らかとなった。
ボタンボウフウの葉(0.5g)を乾燥させ、粉末化したものを、100%エタノール20mLに、60℃で0.5時間浸漬した。その後室温で4時間振盪し、抽出処理を行った。抽出処理後、フィルターろ過(CHROMAFIL O−20/25、フィルターサイズ0.20μm、Macherey−Nagel社製)を行い、抽出液を得た。この抽出液3mLをドライアップし、24.7mgの抽出物を得た。この抽出物を、1mLのDMSOに溶解した。このDMSO溶解液をフィルター滅菌(MN Sterilizer PES、フィルターサイズ0.22μm、Macherey−Nagel社製)し、サンプルCを得た。
インフォームドコンセントが得られた被験者8名(重症肥満3名、脂肪肉腫1名、膵臓癌1名、前立腺癌1名、大腸癌2名)の、手術時に摘出した残余組織から、それぞれ脂肪組織を採取した。この脂肪組織を実施例1と同様に処理した。DM−2処理8日後、DMSO添加AM−1培地、又はサンプルA添加AM−1培地(培地中ボタンボウフウ抽出物濃度:5.6mg/mL)、サンプルB添加AM−1培地(培地中ボタンボウフウ抽出物濃度:6.2mg/mL)、サンプルC添加AM−1培地(培地中ボタンボウフウ抽出物濃度:1.8mg/mL)に交換し、48時間後の上清アディポネクチン濃度(以下、48時間値という)、及び96時間後の上清アディポネクチン濃度(以下、96時間値という)を、実施例1と同様に、被験者8名由来の細胞各々について測定した。細胞間のばらつきを是正するため、96時間値で48時間値を除して、APR(Adiponectin Production Ratio;アディポネクチン分泌促進指標)を算出した。
インフォームドコンセントが得られた被験者(肥満、心不全患者、20歳代女性)に、約5カ月間、ボタンボウフウの葉を乾燥させ粉末化したものを1日あたり10g経口投与した。投与方法は、1日2回(朝晩)、食後投与とした。摂取開始時及び摂取開始約5カ月後の血清中アディポネクチン濃度を、ヒトアディポネクチンELISAキット(大塚製薬株式会社製)を用いて、該キットに添付のプロトコールに従い測定した。結果を図3Aに示す。血清中アディポネクチン濃度は、摂取開始時5.3μg/mLだったのに対し、摂取開始約5カ月後には10.1μg/mLに上昇した。
インフォームドコンセントが得られた被験者(肥満、糖尿病患者、41歳女性)に、約5カ月間、ボタンボウフウの葉を乾燥させ粉末化したものを、前述と同様に経口投与した。摂取開始時及び摂取開始約5カ月後の血清中アディポネクチン濃度を、前述と同様に測定した。結果を図3Bに示す。血清中アディポネクチン濃度は、摂取開始時1.45μg/mLだったのに対し、摂取開始約5カ月後には4.05μg/mLに上昇した。
インフォームドコンセントが得られた被験者(重症肥満の糖尿病患者、41歳女性)の、手術時に摘出した残余組織から脂肪組織を採取した。この脂肪組織を実施例1と同様に処理し、機能性食品素材(サンプル1〜71)のアディポネクチン産生促進作用に関するスクリーニングに用いた。
ウェイトマネジメント外来患者でインフォームドコンセントが得られた被験者8名(肥満外科手術後4症例を含む、平均BMI:32、男性2名、女性6名)を対象に、ボタンボウフウの葉を乾燥させ粉末化したものを1日あたり10g経口投与(1日2回(朝晩)、食後投与)した。平均投与期間は1.4カ月であった。結果を図5に示す。ほとんどの症例でボタンボウフウ乾燥粉末投与後に血清中アディポネクチン濃度(濃度測定方法は前述と同様)の上昇が認められた。
Claims (3)
- ボタンボウフウを有効成分とする低アディポネクチン血症治療剤。
- 低アディポネクチン血症に、肥満、糖尿病、心不全及び癌からなる群より少なくとも1種選択される疾患が合併している、
ことを特徴とする請求項1に記載の低アディポネクチン血症治療剤。 - 低アディポネクチン血症に、癌が合併している、
ことを特徴とする請求項1又は2に記載の低アディポネクチン血症治療剤。
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