JP6937366B2 - 黒麹種菌の連続培養及びそれを用いたクエン酸製造方法 - Google Patents
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Description
(1)黒麹菌胞子の調製は手間がかかり、周期も長く、効率も低い:黒麹菌菌種は、賦活、平板によるスクリーニング及びステージ3拡大培養を経る必要があり、調製周期が30日を超え;手作業が煩雑で、雑菌汚染リスクも大きい。
(2)菌種の安定性や一致性が悪い:現在胞子調製の機械化程度が低く、麩麹培養容器が小さく、異なる容器内の一致性が比較的悪いため、種菌培養の品質と発酵結果が不安定となる。
(3)種菌培養の効率が低い:胞子接種から種菌培養までは、8〜12時間の発芽時間が必要で、種菌タンクの利用効率が下がる。
(4)種菌の回分培養が不安定である:回分培養において、菌体の生育環境(例えば糖濃度、pH等)が絶え間なく変化し、菌体の生育は長期的に最適な環境にあることができない。
(1)開始段階:黒麹菌の胞子を種菌培地に接種し、16〜36時間培養して液体種菌を得るステップ、
(2)種菌の連続培養段階:ステップ(1)で得られた液体種菌に対し連続分散処理を施し、分散で得られた液体種菌を連続培養し、培養過程中の液体種菌を発酵培地に連続して流入させて発酵培養し、同時に流出した液体種菌と同一の速度で新鮮流加培地を補給するステップ、及び、
(3)停止段階:新鮮流加培地の補給及び分散処理を停止し、継続培養して液体種菌を得てから液体種菌を発酵培地に移して発酵培養するステップ、
を含む。
葡萄糖と大豆粕粉末で各々種菌培地(全糖80g/L、全窒素1.5g/L)及び発酵培地(全糖が160g/L、全窒素が1.5g/L)を調合し;移植後、胞子濃度が55万個/mLで接種し;20時間培養して成熟した液体種菌を得、液体種菌の菌糸を分散器で分散し、処理後の菌体の平均直径を100μmとし、各々次のステージの種菌培地及び発酵培地に移し;次のステージの発酵培地に移し、発酵培地内の還元糖濃度が5g/L以下に下がった時、発酵を終了させた。このように繰り返し、種菌の活力が明らかに低下した時に停止した。各バッチの発酵における酸度、残糖を測定し、また転化率、発酵効率等の指標を計算した。
発酵培地の全糖は、180g/L、全窒素が1.5g/Lであり;他の条件は、比較例1と同じである。
トウモロコシ粉の液化液とトウモロコシの糖化液の調製は、実施例1と同じである。トウモロコシの液化液と硫酸アンモニウムで種菌培地(全糖120g/L、全窒素2g/L)と発酵培地(全糖160g/L、全窒素1.0g/L)を調合する。黒麹菌の胞子を種菌培地に接種し、胞子の最終濃度が4×105個/mLで、20時間培養して、ステージ1の成熟液体種菌を得た。70%の成熟液体種菌を1バッチ目の発酵培地内に移して培養し、還元糖濃度が5g/Lを下回った時、発酵を終了させた。残りの30%の液体種菌を分散器で処理して得られた菌糸体或いは菌塊の平均直径は62μmであり、種菌培地に移し、16時間培養して改めてステージ2の成熟液体種菌を再び得た。このように繰り返し、種菌の活力が明らかに低下した時に停止した。各バッチの発酵における酸度、残糖を測定し、また転化率、発酵効率等の指標を計算した。
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種菌の連続培養段階において、新鮮種菌流加培地の連続補給速度は、滞留時間4時間で制御され、他の条件が実施例1と同じである。
<比較例6>
実施例1と比較例1、3、4の技術的効果を比較し、その結果を表1に整理した。
実施例2と比較例2の技術的効果を比較し、その結果を表2に整理した。
本発明の実施例1と比較例5、6の性能を比較し、その結果を表3に整理した。
Claims (9)
- 黒麹種菌の連続培養方法であって、
(1)開始段階:黒麹菌の胞子を種菌培地に接種し、16〜36時間培養して液体種菌を得るステップ、
(2)種菌の連続培養段階:ステップ(1)で得られた液体種菌に対し連続分散処理を施し、分散で得られた液体種菌を連続培養し、培養過程中の液体種菌を発酵培地に連続して流入させて発酵培養し、同時に流出した液体種菌と同一の速度で新鮮流加培地を補給するステップ、及び、
(3)停止段階:新鮮流加培地の補給及び分散処理を停止し、継続培養して液体種菌を得てから液体種菌を発酵培地に移して発酵培養するステップ、
を含み、
前記ステップ(3)において継続培養の培養条件は、温度35〜39℃、風量0.3〜0.6vvm、タンク内圧0.05〜0.1Mpa、撹拌回転数150〜200rpmであることを特徴とする、方法。 - 前記ステップ(1)において黒麹菌の胞子を接種した後の最終濃度は、1〜9×105個/mLであり;前記ステップ(1)において種菌培地の全糖は、100〜180g/L、C/Nが20〜40であり;前記ステップ(1)において種菌培養条件は、温度35〜39℃、風量0.2〜0.4vvm、タンク内圧0.05〜0.1Mpa、撹拌回転数100〜200rpmであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ(2)において補給する新鮮流加培地の全糖は、150〜200g/L、C/Nが15−30であり;前記ステップ(2)内の連続培養条件は、温度35〜37℃、風量0.3〜0.6vvm、タンク内圧0.05〜0.07Mpa、撹拌回転数が150〜200rpmであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ(2)において、前記液体種菌の連続分散処理の方法は、分散器で液体種菌内の菌糸体を10〜80μmの綿状菌糸に分散することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ(2)において、新鮮流加培地の補給速度と液体種菌流出の速度F=V/tであり、ここでVは種菌タンク内の液体種菌体積であり、サイズの異なるタンクで液体種菌体積を確認し;tは、液体種菌の滞留時間であり、綿状菌糸の細胞濃度に基づきフィードバック調節を行い、通常は6〜24時間をとることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ(2)、前記ステップ(3)において、発酵接種の割合は、5〜25%(v/v)であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ(2)、前記ステップ(3)において、発酵培地の全糖は、160〜200g/Lで、C/Nが50−90であり;前記ステップ(2)、前記ステップ(3)において、温度35〜39℃、風量0.1〜0.4vvm、タンク内圧0.05〜0.1Mpa、撹拌回転数100〜200rpmの条件で発酵培養し、還元糖濃度が5g/Lを下回った時、発酵を終了することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記種菌培地、新鮮流加培地、発酵培地は、各々澱粉質原料の液化液と窒素源を調合してから成り;前記澱粉質原料は、トウモロコシ粉、キャッサバ粉、モロコシ粉、小麦澱粉のうちの少なくとも1種を含み;前記窒素源は、硫酸アンモニウム、尿素、大豆粕粉末、
コーンスティープリカーのうちの少なくとも1種を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。 - 請求項1に記載の黒麹種菌の連続培養方法によって黒麹菌を得る第1ステップと、
前記第1ステップで得られた黒麹菌を発酵させてクエン酸の製造に用いる第2ステップとを含むことを特徴とする、クエン酸の製造方法。
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