JP6859102B2 - 8角柱の細胞培養用容器 - Google Patents
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Description
また、本発明が解決しようとする課題は、疾患治療に用いる付着性細胞又は付着性細胞により産生される因子を得るために、細胞状態を培養中に確認しながら、疾患治療に必要な量が得られるまで大量培養し、該細胞又は該因子を均質、安価、かつ効率よく回収することである。
本発明が解決しようとするさらなる課題は、培養規模の拡大に伴い必要量が増大する、培養細胞を回収するためのピペットや遠心チューブの使用量増大によるコストの飛躍的増大を解消し、安価な大量培養手段を提供することである。
また、大量培養時の培養面のコーティング処理や、培養面に付着させる細胞の種類を様々に組み合わせるなどの、幅広い培養条件の設定要求に応えることが可能な大量培養用容器を提供することも、本発明が解決しようとする課題である。
本発明の細胞培養容器及び蓋の部材を形成するために用いる材料は特に限定されないが、細胞培養において一般的に用いられる材料を使用することができる。
本発明の8角柱の細胞培養用容器1は、閉塞した下端部2および相対向する上端部に液体用開口3を有する8角柱の細胞培養用容器の構造を有している。そして、上記8角柱を形成する各面が平面状であり、8角柱を形成する各面のうち相対向する2面は、ほぼ水平となっている構造を有している。
本発明の細胞培養容器は、上記8角柱の細胞培養用容器1の形状に成型できるように調製した金型を用いて製造し、上記樹脂材料を用いる場合には、吹き込み成形により一体成形されたものとすることができる。
さらに、本発明の8角柱の細胞培養用容器1の培養面への細胞の付着性を高めるために培養面を修飾するための成分として、ゼラチン、細胞外基質又はポリカチオン類を、培養面の表面に塗布されたものとしても良い。ゼラチン、細胞外基質又はポリカチオン類は、細胞培養に用いられているものであればその種類を特に限定しない。細胞外基質としては、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンなど、ポリカチオン類としては、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリオルチニンなどを用いることができる。
また、上記の各成分は、培養面へのより高い付着性を発揮させることを望む部位に塗布することができ、本発明の8角柱の細胞培養用容器1に8面ある培養面全てに塗布しても良く、1面おきに4面塗布しても良く、所望の面のみに塗布しても良く、また、面によって異なる成分を塗布したものとしても良い。
本発明の8角柱の細胞培養用容器1は、培養面が8面存在することから、各々の培養面を外部から視認もしくは機器にて認識し、区別することが可能となるようにするため、容器の外側に、各面を区別するための印を付したものとすることができる。印は、文字、記号、バーコード、模様などの任意のものを選択して用いることができ、インクを用いて印刷するか、レーザーやエッチングで刻入することで付すことができる。また、該容器金型に予め所望の印をつけ、細胞培養用容器表面に印が付されたものとして製造されるようにしても良い。
本発明の8角柱の細胞培養容器1は、滅菌されたものとして提供され得る。細胞培養容器を滅菌する方法は特に限定されないが、細胞培養容器を滅菌する方法として一般に用いられる方法を用いることができる。該滅菌方法としては、例えば、γ線照射滅菌、電子線滅菌、放射線滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌、紫外線照射滅菌、過酸化水素滅菌、エタノール滅菌の方法を用いることができる。そして、製造の容易性やコスト低減を考慮し、細胞培養容器を大量かつ簡便に製造するため、該滅菌方法として、好ましくは、電子線滅菌又はγ線照射滅菌を用いる。電子線滅菌は細胞培養容器を劣化させない程度にて行い、また、γ線照射滅菌におけるγ線の照射エネルギーは、細胞培養容器を劣化させない程度にて滅菌することができるよう、5kGy〜30kGy程度の範囲までとすることが好ましいが、使用する細胞に合わせて、好適な滅菌方法を選択し用いることができる。
本発明の8角柱の細胞培養用容器1を製造した。8角柱の細胞培養用容器1及びそれに合わせて用いる蓋5を成形するための金型を作製した。該金型には、培養面が平滑となるよう、鏡面処理を施し、また、成形後の8角柱の細胞培養用容器1の下部の8角錐部位の外側に目盛りが付されたものとなるようにした。
色素入りの2%ゼラチン溶液を調製した。
さらに、上記のように、1面おきに容易に処理できたことから、本発明の8角柱の細胞培養用容器1は、所望の面のみに、培養させることを希望する細胞を付着させる作業も、容易になし得ることが明らかとなった。
イヌ皮下脂肪組織から脂肪由来間葉系幹細胞を分離培養した。全ての実験及び術式は、研究施設内委員会が定めた指針に基づき実施された。
そして、更に遠心分離処理を行い、該容器を斜めに傾けて、脂肪由来間葉系幹細胞のペレットを残し、不要な培養上清を、該容器上端部に配した液体用開口3よりデカンテーションにより捨てた。その後、脂肪由来間葉系幹細胞のペレットを回収した。
比較例として、従来のローラーボトルに上記脂肪由来間葉系幹細胞を懸濁した培養液を加え、回転培養を行った。ローラーボトルは培養面が曲面状となっているため、顕微鏡による培養面全体の観察は上手くできなかった。そこで、細胞を剥離させた後、細胞数を計測し、細胞懸濁液を遠心チューブに移して遠心分離処理を行い、脂肪由来間葉系幹細胞をペレットとして回収した。その結果、本発明の8角柱の細胞培養用容器より、細胞数増加率は低かった。
また、培養容器の培養面が平面状であることから、細胞密度の均一性を保ち、疾患治療に用いられる間葉系幹細胞のような未分化状態を維持するなど、特定の細胞性状を維持する必要がある付着性細胞を、均質、大量かつ安価に培養し増殖できるものとなった。
さらに、各培養面毎に、コーティング処理や、付着させる細胞を換えることが可能となり、幅広い培養条件の設定要求に応えることが可能な大量培養用容器を提供することができるようになった。
2 下端部
3 液体用開口
4 首部
5 内周ねじ付きの蓋
6 外周ねじ山
7 凸状部
8 細胞を懸濁した培養液
Claims (8)
- 閉塞した下端部および相対向する上端部に液体用開口を有する8角柱の細胞培養用容器であって、該8角柱を形成する各面が平面状であり、該8角柱を形成する各面のうち相対向する2面が水平であり、該8角柱を形成する各面の内側が培養面であり、
上記細胞培養用容器の該8角柱を形成する各面の内側の培養面が、ゼラチン、細胞外基質又はポリカチオン類で修飾され、細胞接着性が高められているものである、
細胞培養用容器。 - 上記上端部に開口する液体用開口からはさらに首部が延在し、該首部には、内周ねじ付きの蓋を受けるための外周ねじ山を有する、請求項1に記載の細胞培養用容器。
- 上記首部の液体用開口側の根元部の外周には、上記細胞培養用容器を保持するための把手部材もしくは穴空き部材を固定するための凸状部を有している、請求項1又は請求項2のいずれか1項に記載の細胞培養用容器。
- 上記閉塞した下端部が円錐状又は8角錐を呈する、請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載の細胞培養用容器。
- 上記細胞培養用容器の外側面に目盛りが付されている、請求項1〜請求項4のいずれか1項に記載の細胞培養用容器。
- 上記細胞培養用容器の8角柱を形成する各面の、任意の面の外側に印が付されている、請求項1〜請求項5のいずれか1項に記載の細胞培養用容器。
- 上記細胞培養用容器の8角柱を形成する各面が、透明性を有する、樹脂材料、ガラス又は石英からなる、請求項1〜請求項6のいずれか1項に記載の細胞培養用容器。
- 請求項1から請求項7のいずれか1項に記載された8角柱の細胞培養用容器を用いて、
前記容器内に培養液を入れた状態で前記8角柱の1面が底面となるように前記容器を戴置することで前記底面に前記培養液中の少なくとも一部の細胞を付着させ、かつ、
前記8角柱の軸線回りに前記容器を回転させることで前記培養面のそれぞれに前記培養液中の少なくとも一部の細胞を付着させて細胞培養を行う工程を含む、
培養細胞の製造方法。
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