JP6626437B2 - ヒストンデアセチラーゼ阻害剤とＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの組み合わせ - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年１０月８日に出願されたＵ．Ｓ． Ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．６１／８８８，２０７号に対し優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。

背景
エストロゲン受容体（ＥＲ）及び過剰発現するＨｅｒ２は、ホルモン陽性乳癌における２つの主要な発癌性タンパク質である。ＥＲまたはＨｅｒ２を遮断する現在の治療は、効率的に腫瘍成長を遅らせることが示された。しかし、生ずる薬物耐性を克服する必要から、新たな治療的アプローチとして組み合わせ及び補助薬物の開発に至っている。

ホスファチジルイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ ３−キナーゼ、ＰＩ３Ｋｓ、ＰＩ（３）Ｋｓ、ＰＩ−３Ｋｓ、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼまたはホスホイノシチド３−キナーゼ）は、細胞成長、増殖、分化、運動性、生存及び細胞内輸送などの細胞の機能において含まれる酵素のファミリーであり、それらは次々に癌に関与する。ＰＩ３Ｋｓは、ホスファチジルイノシトールのイノシトール環の３つの位置のヒドロキシル基をリン酸化することができる、関連する細胞内シグナルトランスデューサー酵素のファミリーである。

ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害は、乳癌細胞成長停止を生じさせることがあり、ＥＲ及びＨｅｒ２転写を抑制することが報告されている。しかし、クラスＩ ＨＤＡＣ阻害は、有意な有害作用をまねき、特にその他の治療上の薬剤と組み合わせた、代わりのＨＤＡＣ阻害プロフィールが望ましい。

ＨＤＡＣ６はクラスＩＩｂ ＨＤＡＣであり、α−チューブリン及びＨＳＰ９０を含む多くの細胞のタンパク質からアセチル基を除去することが知られている。ＨＳＰ９０ハイパーアセチル化は、ＥＲ及びＥＧＦＲを含むその標的タンパク質を不安定にすることが報告されている。ＨＤＡＣ６の阻害剤は、Ｈｅｒ２^＋乳癌を含む種々の癌タイプにおける抗癌増殖性活性が証明された。ＨＤＡＣ６を遮断する活性は、Ｈｅｒ２ ｍＲＮＡ及びタンパク質の不安定化を含む種々の機構を介してＨｅｒ２^＋乳癌細胞増殖阻害を生じさせることが示されている。

非選択的ＨＤＡＣ阻害剤の用量制限毒性のため、乳癌治療のためのより効果的でより毒性が低い組成物及び方法に対して、当該技術分野において持続的な需要がある。これらの需要を満たすために、本明細書において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかを含む薬学的な組み合わせ、並びに乳癌治療のための方法が提供される。本発明の組み合わせ及び方法は、十分に許容され、及び以前の治療法の用量制限毒性を示さない。

本発明の概要
その必要のある被験体における乳癌治療のための薬学的組み合わせが、本明細書において提供される。その必要のある被験体における乳癌を治療するための方法もまた、本明細書において提供される。

いくつかの実施形態において、その必要のある被験体における乳癌治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせが提供される。他の実施形態において、その必要のある被験体における乳癌治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせが提供される。他の実施形態において、その必要のある被験体における乳癌治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びドキソルビシンを含む組み合わせが提供される。

いくつかの実施形態において、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせの有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療するための方法が提供される。他の実施形態において、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせの有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療するための方法が提供される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤である。具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ_１は、アリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及び
Ｒは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルである。

好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は：

またはその薬学的に許容される塩である。

さらに他の実施形態において、式Ｉの化合物は：

またはその薬学的に許容される塩である。

他の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；
それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及び
ｍは、０、１または２である。

好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物は：

またはその薬学的に許容される塩である。

他の好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物は：

またはその薬学的に許容される塩である。

具体的実施形態において、Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

具体的実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１もしくはＣＡＬ−１０１またはそれらの薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤は、薬学的に許容される担体と共に投与される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、薬学的に許容される担体と共に投与される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤は、別々の剤形で投与される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤は、単一の剤形で投与される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、別々の剤形で投与される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、単一の剤形で投与される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤は、異なる時間に投与される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤は、実質的に同時に投与される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、異なる時間に投与される。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、実質的に同時に投与される。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤の組み合わせは、その必要のある被験体の治療において相乗効果を達成する。他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤の組み合わせは、その必要のある被験体の治療において相乗効果を達成する。

組み合わせ及び／または方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ_１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及び
Ｒは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルであり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；
それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及び
ｍは、０、１または２であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ_１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及び
Ｒは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルであり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；
それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及び
ｍは、０、１または２であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

組み合わせ及び／または方法の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は：

またはその薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態において、ヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）特異的阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌細胞の遊走及び／または浸潤を阻害するための方法が提供される。ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ及び化合物Ｄからなる群から選択される任意の化合物でもよい。

他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。詳細な説明及び特異的な実施例は、例証のためにのみ与えられ、本発明の精神及び範囲の中での種々の変更及び修飾は、この詳細な説明から当業者にとって明らかとなるだろう。さらに、実施例は、本発明の原理を証明する。

ＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−０９４１がＨＤＡＣ６特異的な（選択的な）阻害剤によって強化されることを示す４つのグラフのセットである。図１Ａは、化合物Ａの０．０５、０．１６、０．５、１．６、５及び１６μＭでのＧＤＣ−０９４１のためのＩＣ_５０値を示す。図１Ｂは、化合物Ａの１．３、４及び１２μＭでのＧＤＣ−０９４１のためのＩＣ_５０値を示す。図１Ｃは、化合物Ｃの１．３、４及び１２μＭでのＧＤＣ−０９４１のためのＩＣ_５０値を示す。図１Ｄは、化合物Ｃの０．５、１．６及び５μＭでのＧＤＣ−０９４１のためのＩＣ_５０値を示す。 Ａ５４９細胞（肺癌細胞）（図２Ａ）及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（乳癌細胞）（図２Ｂ）における遊走アッセイの結果を示す一対のグラフであり、癌細胞遊走を刺激するためにＥＧＦを使用しなかった。両方のアッセイにおいて、ＨＤＡＣ６阻害剤による前処理をしなかった。両方のアッセイにおいて、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ Ａ、化合物Ｃ及び化合物Ａは、薬物がＨＤＡＣ６選択的な阻害剤である濃度において与えられた。ゲフィチニブは、ＥＧＦＲ阻害剤である。^＊＊は、Ｐ＜０．０１を意味する。 Ａ５４９細胞（肺癌細胞）（図３Ａ）及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（乳癌細胞）（図３Ｂ）における遊走アッセイの結果を示す一対のグラフであり、癌細胞遊走を刺激するためにＥＧＦを使用した。図３Ａにおいて、ＨＤＡＣ６阻害剤で前処理をしなかった。一方、図３Ｂにおいて、ＨＤＡＣ６阻害剤が作用するまで時間がかかるため、ＨＤＡＣ阻害剤で前処理した。両方のアッセイ法において、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ Ａ、化合物Ｃ及び化合物Ａは、薬物がＨＤＡＣ６選択的な阻害剤である濃度において与えられた。ゲフィチニブは、ＥＧＦＲ阻害剤である。等分散二標本両側ｔ検定は、ＤＭＳＯ ＋ ＥＧＦ群に対して標準化した。^＊＊は、Ｐ＜０．０１を意味し、^＊は、Ｐ＜０．０５を意味する。 ＤＭＳＯ（図４Ａ）、１μＭゲフィチニブ（図４Ｂ）、５μＭ 化合物Ｃ（図４Ｃ）、５μＭ Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ Ａ（図４Ｄ）及び０．５μＭ 化合物Ａ（図４Ｅ）におけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１遊走を示す写真のセットである。ゲフィチニブは、ＥＧＦＲ阻害剤である。 Ａ５４９細胞（肺癌細胞）（図５Ａ）及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（乳癌細胞）（図５Ｂ）における浸潤アッセイの結果を示す一対のグラフであり、癌細胞遊走を刺激するためにＥＧＦを使用した。両方のアッセイにおいて、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ Ａ、化合物Ｃ及び化合物Ａは、薬物がＨＤＡＣ６選択的な阻害剤である濃度において与えられた。ゲフィチニブは、ＥＧＦＲ阻害剤である。図５Ａにおいて、^＊＊＊はＰ＜０．００１を意味し、^＊＊はＰ＜０．０１を意味し、及び^＊はＰ＜０．０５を意味する。図５Ｂにおいて、^＊は、Ｐ＜０．０５を意味する。

詳細な説明
本出願は、一般に、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせ及び乳癌治療のための方法に関する。本出願はまた、一般に、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせ、並びに乳癌治療のための方法に関する。

定義
本発明を記述するために使用される種々の用語の定義を以下に収載してある。個々にまたはより大きなグループの一部として、特定の例において制限されない限り、これらの定義は、この明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって使用されるとき、該用語に適用される。

用語「約」は、一般に、値の１０％、５％または１％に過ぎない変化の可能性を示す。たとえば、「約２５ｍｇ／ｋｇ」は、その最も広い意味において、２２．５〜２７．５ｍｇ／ｋｇ、すなわち、２５±２．５ｍｇ／ｋｇの値を一般に示すだろう。

用語「アルキル」は、一定の実施形態において、それぞれ１〜６または１〜８の間の炭素原子を含む飽和した、直鎖または分枝鎖炭化水素部分をいう。Ｃ_１−６−アルキル部分の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル部分を含むが、限定されない；Ｃ_１−８−アルキル部分の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ヘプチル及びオクチル部分を含むが、限定されない。

アルキル置換基における炭素原子数は、接頭辞「Ｃ_ｘ−ｙ」によって示されることができ、ｘは置換基における炭素原子の最小数、ｙは最大数である。同様に、Ｃ_ｘ鎖は、ｘ個の炭素原子を含むアルキル鎖を意味する。

用語「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル部分をいう。

用語「シクロアルキル」または「シクロアルキレン」は、単環式または多環式の飽和または部分的に不飽和の炭素環式化合物から由来される一価の基を意味する。Ｃ_３−８−シクロアルキルの例は、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びシクロオクチルを含む；Ｃ_３−１２−シクロアルキルの例は、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル及びビシクロ［２．２．２］オクチルを含む。また、１つの水素原子の除去によって少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、単環式または多環式の炭素環式化合物から由来される一価の基が想定される。このような基の例は、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル及び同様のものを含むが、限定されない。

用語「アリール」は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル及び同様のものを含むが、限定されない縮合または非縮合の１つまたは複数の芳香族環を有する単または多環式炭素環式環構造をいう。

用語「組み合わせ」は、本開示において記述される治療上の状態または障害を治療するための２個以上の治療上の薬剤をいう。治療上の薬剤のこのような組み合わせは、単一の丸剤、カプセルまたは静脈注射溶液の形態であってもよい。しかし、用語「組み合わせ」はまた、２個以上の治療上の薬剤が別々の丸剤、カプセルまたは静脈注射溶液である状況を包含する。同様に、用語「組み合わせ療法」は、本開示において記述される治療上の状態または障害を治療するための２個以上の治療上の薬剤の投与をいう。このような投与は、活性成分の固定比率を有する単一のカプセル、またはそれぞれの活性成分のための複数の、または別々の容器（たとえば、カプセル）などにおける、実質的に同時の様式でのこれらの治療上の薬剤の同時投与を包含する。加えて、このような投与はまた、ほぼ同時に、または異なる時間のいずれかにて、経時的な様式における治療薬のそれぞれのタイプの使用を包含する。いずれかの場合において、治療処方計画は、本明細書において記述される状態または障害を治療することにおいて薬剤の組み合わせの有益な効果を提供するだろう。

用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族環を有する、単環式または多環式（たとえば二環式または三環系またはそれ以上）の縮合される、または縮合されない部分または環系をいい、５〜１０個の環原子を有し、１つの環原子がＳ、Ｏ及びＮから選択される；０、１つまたは２つの環原子は、独立してＳ、Ｏ及びＮから選択されるさらなるヘテロ原子であり；及び残りの環原子は、炭素である。ヘテロアリールは、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル及び同様のものを含むが、これに限定されない。

用語「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素などのハロゲンをいう。

用語「ＨＤＡＣ」は、ヒストンデアセチラーゼをいい、コアヒストンにおけるリジン残基からアセチル基を除去する酵素であり、凝集され、転写的に静止したクロマチンの形成をまねく。現在、１８個の公知のヒストンデアセチラーゼがあり、それらは４つのグループに分類される。クラスＩ ＨＤＡＣｓは、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３及びＨＤＡＣ８を含み、酵母ＲＰＤ３遺伝子に関連がある。クラスＩＩ ＨＤＡＣｓは、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９及びＨＤＡＣ１０を含み、酵母Ｈｄａ１遺伝子に関連がある。クラスＩＩＩ ＨＤＡＣｓは、サーチュイン（ｓｉｒｔｕｉｎｓ）としても公知であり、Ｓｉｒ２遺伝子に関連があり、ＳＩＲＴ１−７を含む。クラスＩＶ ＨＤＡＣｓは、ＨＤＡＣ１１のみを含み、クラスＩ及びＩＩ ＨＤＡＣｓの両方の特徴を有する。特に明記しない限り、用語「ＨＤＡＣ」は、１８個の公知のヒストンデアセチラーゼの任意の１つまたは複数をいう。

用語「ＨＤＡＣ６特異的」は、化合物が、ＨＤＡＣ１またはＨＤＡＣ２などのＨＤＡＣ酵素の任意のその他のタイプより、５Ｘ、１０Ｘ、１５Ｘ、２０Ｘまたはそれ以上大きいなど、実質的に大きい程度でＨＤＡＣ６に結合することを意味する。すなわち、化合物は、ＨＤＡＣ酵素の任意のその他のタイプを超えて、ＨＤＡＣ６に対し選択的である。たとえば、１０ｎＭのＩＣ_５０でＨＤＡＣ６に結合し、５０ｎＭのＩＣ_５０でＨＤＡＣ１に結合する化合物は、ＨＤＡＣ６特異的である。一方、５０ｎＭのＩＣ_５０でＨＤＡＣ６に結合し、６０ｎＭのＩＣ_５０でＨＤＡＣ１に結合する化合物は、ＨＤＡＣ６特異的ではない。

用語「阻害剤」は、用語アンタゴニストと同義である。

ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤
その必要のある被験体における乳癌治療のための薬学的組み合わせが、本明細書において提供される。その必要のある被験体における乳癌を治療するための方法もまた、本明細書において提供される。

本発明の組み合わせ及び方法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む。ＨＤＡＣ阻害剤は、任意のＨＤＡＣ阻害剤でもよい。したがって、ＨＤＡＣ阻害剤は、特定のタイプのヒストンデアセチラーゼ酵素に選択的でもよく、または選択的でなくてもよい。好ましくは、ＨＤＡＣ阻害剤は、選択的なＨＤＡＣ阻害剤である。より好ましくは、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤である。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ_１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及び
Ｒは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルである。

式Ｉの代表的化合物は、以下を含むが、限定されない：

または、その薬学的に許容される塩。

式Ｉに従った選択的なＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び特性は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号において提供され、その全内容が参照により本明細書に援用される。

他の実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

または、その薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；
それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及び
ｍは、０、１または２である。

式ＩＩの代表化合物は、以下を含むが、限定されない：

または、その薬学的に許容される塩。

式ＩＩに従った選択的なＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び特性は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１において提供され、その全内容は参照により本明細書に援用される。

いくつかの実施形態において、本明細書において記述される化合物は、非溶媒和である。他の実施形態において、化合物の１つまたは複数は、溶媒和した形態である。当該技術分野で公知のように、溶媒和化合物は、水、エタノール及び同様のものなどの薬学的に許容される溶媒のいずれかとすることができる。

Ｈｅｒ２阻害剤
本発明の組み合わせ及び方法のいくつかの実施形態は、Ｈｅｒ２阻害剤を含む。Ｈｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤でもよい。Ｈｅｒ２阻害剤の例は、ラパチニブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＮｅｕＶａｘ、セツキシマブ及びチロシンキナーゼ阻害剤を含むが、限定されない。好ましくは、Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態において、本明細書において記述される化合物は、非溶媒和である。他の実施形態において、化合物の１つまたは複数は、溶媒和した形態である。当該技術分野で公知のように、溶媒和化合物は、水、エタノール及び同様のものなどの薬学的に許容される溶媒のいずれかでとすることができる。

ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤
本発明の組み合わせ及び方法のいくつかの実施形態は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。ＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤でもよい。ＰＩ３Ｋ阻害剤の例は、ワートマニン、デメトキシビリジン、ＬＹ２９４００２、ペリホシン、ＣＡＬ−１０１、ＰＸ−８６６、ＩＰＩ−１４５、ＢＡＹ ８０−６９４６、ＢＥＺ−２３５、ＲＰ−６５０３、ＴＧＲ １２０２、ＳＦ−１１２６、ＩＮＫ−１１１７、ＧＤＣ−０９４１、ＢＫＭ−１２０、ＸＬ−１４７、ＸＬ−７６５、Ｐａｌｏｍｉｄ ５２９、ＧＳＫ−１０５９６１５、ＺＳＴＫ−４７４、ＰＷＴ−３３５９７、ＩＣ−８７１１４、ＴＧ１００−１１５、ＣＡＬ−２６３、ＲＰ−６５３０、ＰＩ−１０３、ＧＮＥ−４７７、ＣＵＤＣ−９０７及びＡＥＺＳ−１３６を含むが、限定されない。好ましくは、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。

いくつかの実施形態において、本明細書において記述される化合物は、非溶媒和である。他の実施形態において、化合物の１つまたは複数は、溶媒和した形態である。当該技術分野で公知のように、溶媒和化合物は、水、エタノール及び同様のものなどの薬学的に許容される溶媒のいずれかとすることができる。

組み合わせ／医薬品の組み合わせ
その必要のある被験体における乳癌治療のための組み合わせが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、その必要のある被験体における乳癌治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせが提供される。他の実施形態において、その必要のある被験体における乳癌治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせが提供される。

組み合わせのいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤である。具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩である。

好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は、下記式：

またはその薬学的に許容される塩である。

さらに他の実施形態において、式Ｉの化合物は、下記式：

またはその薬学的に許容される塩である。

他の具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩である。

好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物は、下記式：

またはその薬学的に許容される塩である。

他の好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物は、下記式：

またはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせのいくつかの実施形態において、Ｈｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態において、Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

組み合わせの他の実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

１つの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせ療法が本明細書において提供され、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ_１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及び
Ｒは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルであり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤である。

組み合わせの具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、下記式：

またはそれらの薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

別の実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせ療法が本明細書において提供され、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；
それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及び
ｍは、０、１または２であり；
及びＨｅｒ２阻害剤は、任意のＨｅｒ２阻害剤である。

組み合わせの具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、下記式：

または、それらの薬学的に許容される塩であり；及び
Ｈｅｒ２阻害剤は、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩である。

１つの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせ療法が本明細書において提供され、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ_１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれはＯＨ、ハロまたはＣ_１−６−アルキルによって任意に置換されてもよく；及びＲは、ＨまたはＣ_１−６−アルキルであり；及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤である。

組み合わせの具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、下記式：

またはそれらの薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

別の実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせ療法が本明細書において提供され、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、式ＩＩの化合物：

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒ_ｘ及びＲ_ｙは、各々が付着される炭素とともに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルを形成し；それぞれのＲ_Ａは、独立してＣ_１−６−アルキル、Ｃ_１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ_２、−ＣＮまたは−ＮＨ_２であり；及びｍは、０、１または２であり；及びＰＩ３Ｋ阻害剤は、任意のＰＩ３Ｋ阻害剤である。

組み合わせの具体的実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的な阻害剤は、下記式：

またはそれらの薬学的に許容される塩であり；及び
ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

式Ｉ及びＩＩの化合物は、これらの中性形態において示されるが、いくつかの実施形態において、これらの化合物は薬学的に許容される塩形態において使用される。本明細書に使用される「薬学的に許容される塩」は、親化合物が既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することにより修飾されている、開示された化合物の誘導体をいう。薬学的に許容される塩の例は、アミンなどの塩基性残基におけるミネラルまたは有機酸の塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩；及び同様のものを含むが、限定されない。本発明の薬学的に許容される塩は、たとえば、無毒性の無機または有機酸から形成される親化合物の従来の無毒性の塩を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性の部分を含む親化合物から合成されることができる。通常、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水において、または有機溶媒において、または２つの混合物において、適切な塩基または酸の理論量と反応させることによって調製することができる；一般に、エーテル、エチルアセテート、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水溶媒が好ましい。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈ ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．、１９８５、ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、２（１９７７）において見いだされ、これらのそれぞれはその全体において参照により本明細書に援用される。

投与／用量
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤（式ＩまたはＩＩの化合物）は、Ｈｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかと同時に投与される。同時の投与は、両方の化合物が正確に同時に患者に入ることを典型的には意味する。しかし、同時の投与はまた、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかが異なる時間に患者に入る可能性を含むが、時間における相違は、十分に小さく、第２の投与化合物が入る前に、第１の投与化合物が患者に効果をもたらす時間は与えられない。このような時間の遅れは、典型的には１分より少なく、より典型的には３０秒より少ない時間に相当する。１つの実施例において、化合物が溶液にあり、化合物の組み合わせを含む溶液を投与することによって同時の投与を達成することができる。別の実施例において、１つはＨＤＡＣ阻害剤を含み、もう一方はＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかを含む、別々の溶液の同時の投与を使用することができる。化合物が固体形態である１つの実施例において、化合物の組み合わせを含む組成物を投与することによって、同時の投与を達成することができる。あるいは、同時の投与は、２つの別々の組成物を投与することによって達成することができ、１つがＨＤＡＣ阻害剤を含み、もう一方がＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかを含む。

他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかは、同時に投与されない。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、Ｈｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの前に投与される。他の実施形態において、Ｈｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかは、ＨＤＡＣ阻害剤の前に投与される。同時でない投与における時間差は、１分、５分、１０分、１５分、３０分、４５分、６０分、２時間、３時間、６時間、９時間、１２時間、２４時間、３６時間または４８時間を上回ることができる。他の実施形態において、第２の投与化合物が投与される前に、第１の投与化合物が患者に効果をもたらす時間が与えられる。一般に、時間差は、第１の投与化合物が患者においてその効果を完了する時間を越えて、または第１の投与化合物が患者において完全にもしくは実質的に除去されるかまたは非活性化される時間を越えて、拡大しない。

いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの１つまたは両方は、治療上有効な量または投薬量で投与される。「治療上有効な量」は、それ自体が患者に投与されるときに、乳癌を効率的に治療する、ＨＤＡＣ６阻害剤（式ＩまたはＩＩの化合物）またはＨｅｒ２阻害剤もしくはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの量である。所与の例において、特定の被験体のために「治療上有効な量」であると判明する量は、このような投薬量が熟練した開業医による「治療上有効な量」とみなされる場合であっても、考慮中に疾患または状態のために同じように治療される１００％の被験体に有効でなくてもよい。治療上有効な量に相当する化合物の量は、癌のタイプ、癌のステージ、治療される患者の年齢及びその他の事実に強く依存する。一般に、これらの化合物の治療上有効な量は、当該技術分野において公知であり、上で引用した支持参照文献において提供される。

他の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの１つまたは両方は、治療量以下の有効な量または投薬量で投与される。治療量以下の有効な量は、それ自体が患者に投与されるときに、長い間意図された標的の生物学的活性を完全に阻害しない、ＨＤＡＣ阻害剤（式ＩまたはＩＩの化合物）またはＨｅｒ２阻害剤もしくはＰＩ３Ｋ阻害剤の量である。

治療上の、または治療量以下の量で投与されようと、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの組み合わせは、乳癌を治療することにおいて有効であるべきである。たとえば、式ＩまたはＩＩの化合物（ＨＤＡＣ阻害剤）と組み合わせられるときに、組み合わせが乳癌治療において有効である場合、Ｈｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤の化合物の治療量以下の量は有効量とすることができる。

いくつかの実施形態において、化合物の組み合わせは、乳癌の治療において相乗効果（すなわち、相加効果より大きい）を示す。用語「相乗効果」は、たとえば、投与されるそれぞれの薬物のそれら自体による効果の単純な加算より大きい、癌またはその症候の症候性の進行を遅らせる効果を生み出す２つの薬剤、たとえばＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかなどの作用をいう。相乗効果は、たとえばＳｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ方程式（Ｈｏｌｆｏｒｄ， Ｎ． Ｈ． Ｇ． ａｎｄ Ｓｃｈｅｉｎｅｒ， Ｌ． Ｂ．， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ． ６： ４２９−４５３（１９８１））、Ｌｏｅｗｅ加算性の方程式（Ｌｏｅｗｅ， Ｓ． ａｎｄ Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ， Ｈ．， Ａｒｃｈ． Ｅｘｐ． Ｐａｔｈｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １１４： ３１３−３２６（１９２６））及び半有効方程式 （Ｃｈｏｕ， Ｔ． Ｃ． ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ， Ｐ．， Ａｄｖ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ． ２２： ２７−５５（１９８４））などの適切な方法を使用して算出することができる。上述したそれぞれの方程式は、実験データに適用されて、対応するグラフを生成し、薬物の組み合わせの効果を評価することを助けることができる。上述した方程式に関連する対応するグラフは、それぞれ、濃度効果曲線、イソボログラム曲線及び組み合わせインデックス曲線である。

本発明の好ましい実施形態において、組み合わせ及び方法は、式ＩＩのＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかを含む。したがって、１つの実施形態において、組み合わせ及び方法は、化合物Ｃ及びＨｅｒ２阻害剤を含む。別の実施形態において、組み合わせ及び方法は、化合物Ｃ及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。別の実施形態において、組み合わせ及び方法は、化合物Ｄ及びＨｅｒ２阻害剤を含む。別の実施形態において、組み合わせ及び方法は、化合物Ｄ及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。これらの実施形態は相乗作用（実施例において、増強作用とも呼ばれる）を示すため、式ＩＩのＨＤＡＣ阻害剤の治療量以下の量が使用されてもよい。

異なる実施形態において、使用される組み合わせ及び有効量に応じて、化合物の組み合わせは、乳癌増殖を阻害すること、乳癌停滞を達成すること、または実質的にもしくは完全に乳癌退行を達成することさえできる。

ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの量が、有効な乳癌治療をもたらすべきであると共に、その量は、組み合わせるときに、患者に対し、好ましくは過剰に毒性でない（すなわち、その量は、好ましくは医学的な指針によって確立される毒性限度の範囲内である）。いくつかの実施形態において、過剰な毒性を防止すること及び／またはより効果的な乳癌治療を提供することのいずれかのために、総投与量上の限度が提供される。典型的には、本明細書において考慮される量は、１日当たりであり；しかし、半日及び２日または３日のサイクルもまた、本明細書において考慮される。

別の投薬量処方計画は、乳癌を治療するために使用されてもよい。いくつかの実施形態において、上述される例示的な投薬量のいずれかなどの１日投与量は、３、４、５、６、７、８、９または１０日間、１日１回、２回、３回または４回投与される。癌のステージ及び重症度に応じて、より短い治療時間（たとえば、５日まで）は高投薬量で使用されてもよく、またはより長い治療時間（たとえば１０日以上、または数週または１ヶ月またはそれ以上）は低投薬量で使用されてもよい。いくつかの実施形態において、１日１回の、または１日２回の投薬量は、１日おきに投与される。いくつかの実施形態において、それぞれの投薬量は、単一の投薬量として送達されるＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの両方を含むが、他の実施形態において、それぞれの投薬量は、分離した投薬量として送達されるＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかを含む。

式Ｉ及びＩＩの化合物またはこれらの薬学的に許容される塩もしくは溶媒和形態は、純粋な形態において、または適切な医薬組成物において、当該技術分野において公知の投与または薬剤の認められた様式のいずれかを介して投与することができる。化合物は、たとえば、経口的、経鼻的、非経口的（静脈内、筋肉内、または皮下）、局所的、経皮的、膣内、膀胱内、大槽内または直腸に投与されることができる。剤形は、たとえば固体、半固体、凍結乾燥粉末または液体の剤形、たとえば錠剤、丸剤、軟弾力性または硬ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、坐薬、エアロゾルまたは同様のものなど、好ましくは正確な投薬量の単純な投与のために適切な単位剤形とすることができる。特定の投与経路は、経口であり、特に便利な１日投与量処方計画を治療される疾患の重症度の程度に従って調整することができるものである。

上で議論したように、薬学的組み合わせにおけるＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかは、単一の単位投与または分離した剤形で投与することができる。したがって、語句「薬学的組み合わせ」は、単一の剤形または別々の剤形のいずれかにおける２つの薬物の組み合わせを含み、すなわち、本出願の全体にわたって記述される薬学的に許容される担体及び賦形剤は、単一の単位投与におけるＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかと組み合わせることができ、並びにこれらの化合物が別々に投与されるとき、個々にＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかと組み合わせることができる。

補助剤及び補助薬剤は、たとえば保存料、湿潤剤、懸濁剤、甘味料、香味料、芳香剤、乳化剤及び予製薬剤を含んでもよい。微生物の作用の予防は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸及び同様のものなどの種々の抗菌薬及び抗真菌薬剤によって一般に提供される。糖、塩化ナトリウム及び同様のものなどの等張性薬剤もまた含まれてもよい。注射可能な剤型の長期にわたる吸収は、吸収を遅延させる薬剤、たとえばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によってもたらすことができる。補助薬剤はまた、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝薬及び抗酸化剤、たとえば、クエン酸、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、ブチル化水酸化トルエン及び同様のものなどを含むことができる。

固体の剤形は、腸溶コーティング及び当該技術分野において公知のその他のものなどのコーティング及びシェルで調整することができる。これらは、鎮静薬を含むことができ、及び遅発性様式で腸管の一定の部分において活性化合物または化合物を放出するような組成物とすることができる。使用することができる包埋組成物の例は、重合性物質及びろうである。活性化合物はまた、適切な場合、前述した賦形剤の１つまたは複数とともに、マイクロカプセルに入れられた形態とすることができる。

経口投与のための液体の剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤及びエリキシルを含む。このような剤形は、たとえば、以下を溶解すること、分散することなどによって調製される：本明細書において記述されるＨＤＡＣ阻害剤またはＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤、またはそれらの薬学的に許容される塩、及び担体、たとえば水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール及び同様のものにおける任意の配合剤；可溶化剤及び乳化剤、たとえば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカルボナート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド；オイル、特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル；または、これらの物質の混合物及び同様のもの、これらにより溶液または懸濁液を形成する。

一般に、投与の意図された様式に応じて、薬学的に許容される組成物は、本明細書において記述される化合物またはその薬学的に許容される塩の重量による約１％〜約９９％、及び薬学的に許容される賦形剤の重量による９９％〜１％を含むだろう。一例において、組成物は、本明細書において記述される化合物またはその薬学的に許容される塩が重量による約５％〜約７５％であり、残りは適切な薬学的賦形剤である。

このような剤形を調製する実際の方法は、当業者に公知または明らかだろう。たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ Ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９９０）を参照する。

本発明の方法
本発明は、本発明の薬学的組み合わせを被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法に関する。したがって、ＨＤＡＣ阻害剤及びＨｅｒ２阻害剤を含む組み合わせの治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法が、本明細書において提供される。また、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＩ３Ｋ阻害剤を含む組み合わせの治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法が、本明細書において提供される。さらに、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びドキソルビシンを含む組み合わせの治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法が、本明細書において提供される。

本明細書において考慮される被験体は、典型的にはヒトである。しかし、被験体は、治療が望まれる任意の哺乳動物とすることができる。したがって、本明細書において記述される方法は、ヒト及び獣医学的用途の両方に適用することができる。

用語「治療すること」または「治療」は、本方法が少なくとも異常な細胞の増殖を緩和したことを示す。たとえば、本方法は、患者における乳癌成長の速度を減少させること、または乳癌の継続した成長または伝播を予防すること、または乳癌の全体の領域を減少させることさえできる。

したがって、１つの実施形態において、化合物Ａ及びラパチニブまたはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法が、本明細書において提供される。

別の実施形態において、化合物Ｂ及びラパチニブまたはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。

別の実施形態において、化合物Ｃ及びラパチニブまたはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。この実施形態は、相乗作用（実施例において、増強作用とも呼ばれる）を示すため、本方法において化合物Ｃの治療量以下の量が使用されてもよい。

別の実施形態において、化合物Ｄ及びラパチニブまたはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。この実施形態は、相乗作用（実施例において増強作用とも呼ばれる）を示すため、本方法において化合物Ｄの治療量以下の量が使用されてもよい。

別の実施形態において、化合物Ａ及びＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるＰＩ３Ｋ阻害剤またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。

別の実施形態において、化合物Ｂ及びＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるＰＩ３Ｋ阻害剤またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。

別の実施形態において、化合物Ｃ及びＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるＰＩ３Ｋ阻害剤またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。これらの実施形態は、相乗作用（実施例において増強作用とも呼ばれる）を示すため、本方法において化合物Ｃの治療量以下の量が使用されてもよい。

別の実施形態において、化合物Ｄ及びＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１からなる群から選択されるＰＩ３Ｋ阻害剤またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌を治療する方法である。これらの実施形態は相乗作用（実施例において増強作用とも呼ばれる）を示すため、本方法において化合物Ｄの治療量以下の量が使用されてもよい。

本発明はまた、乳癌細胞の遊走及び／または浸潤を阻害する方法に関する。特に、本発明は、その必要のある被験体における乳癌細胞の遊走及び／または浸潤を阻害する方法に関する。具体的には、本発明は、式ＩまたはＩＩのＨＤＡＣ阻害剤の治療上有効な量を被験体に投与することを含む、その必要のある被験体における乳癌細胞の遊走及び／または浸潤を阻害する方法に関する。

キット
他の実施形態において、キットが提供される。本発明によるキットは、本発明の化合物または組成物を含むパッケージを含む。いくつかの実施形態において、キットは、ＨＤＡＣ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、及びＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかまたはそれらの薬学的に許容される塩を含む。

語句「パッケージ」は、本明細書において示された化合物または組成物を含む任意の容器（ｖｅｓｓｅｌ）を意味する。いくつかの実施形態において、パッケージは、箱または包装であることができる。薬学的製品をパッケージすることに使用するためのパッケージング材料は、当業者に周知である。薬学的なパッケージング材料の例は、瓶、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器（ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ）、注射器、瓶、及び選択された製剤及び意図された投与及び治療の様式のために適切な任意のパッケージング材料を含むが、限定されない。

キットはまた、パッケージ内に含まれないが、パッケージの外側に付着される品目、たとえばピペットを含むことができる。

キットは、本発明の化合物または組成物を患者に投与するための説明書をさらに含むことができる。キットはまた、米国食品医薬品局などの規制機関による、本明細書における化合物の承認された使用のための説明書を含むことができる。キットはまた、化合物のためにラベリングまたは添付文書を含むことができる。パッケージまたは任意の添付文書（類）は、それ自体規制機関によって承認されてもよい。キットは、パッケージにおいて固体の相または液体の相（提供される緩衝液など）において化合物を含むことができる。キットはまた、本方法を行うための溶液を調製するための緩衝液及び１つの容器からもう一方へ液体を移すためのピペットを含むことができる。

実施例は、例証の目的で、及び本発明の一定の具体的実施形態を記述するために、以下に記載した。しかし、特許請求の範囲は、本明細書において記載される実施例によって決して限定されない。開示された実施形態に対する種々の変更及び修飾は当業者にとって明らかであり、このような変更及び修飾は、限定されないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、製剤及び／または方法に関するものを含み、本発明の精神及び添付の特許請求の範囲を逸脱しない範囲でなされてもよい。本明細書のスキームにおける構造の変数の定義は、本明細書において提示される式における対応する位置のものと相応する。

式Ｉの化合物（化合物Ａ及びＢ）の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２において提供され、それはその全体において参照により本明細書に援用される。式ＩＩの化合物（化合物Ｃ及びＤ）の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１において提供され、それはその全体において参照により本明細書に援用される。

実施例１：２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成

中間体２の合成：ＤＭＦ（１００ｍｌ）におけるアニリン（３．７ｇ、４０ｍｍｏｌ）、化合物１（７．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（１１ｇ、８０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、一晩Ｎ_２下で１２０℃にて撹拌した。反応混合物を室温（ｒ．ｔ．）に冷却して、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈し、次いで飽和ブライン（２００ｍｌ×３）で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固して、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ＝ １０／１）によって精製して、白色固体（６．２ｇ、６４％）として所望の生成物を与えた。

中間体３の合成：ＴＥＯＳ（２００ｍｌ）中の化合物２（６．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）、ヨードベンゼン（６．１２ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（９５５ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１６．３ｇ、５０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、窒素でパージした。生じる混合物を１４時間１４０℃で撹拌した。室温に冷却した後、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈した。９５％ＥｔＯＨ（２００ｍｌ）及びシリカゲル上のＮＨ_４Ｆ−Ｈ_２Ｏ［５０ｇ、水（１５００ｍｌ）におけるＮＨ_４Ｆ（１００ｇ）をシリカゲル（５００ｇ、１００−２００メッシュ）に添加することによってプレ調製した）］を添加して、生じる混合物を２時間室温にて保持した。凝固した材料は、濾過して、ＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ液は蒸発乾固し、残渣はシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ＝ １０／１）によって精製して、黄色固体（３ｇ、３８％）を得た。

中間体４の合成：２Ｎ ＮａＯＨ（２００ｍｌ）をＥｔＯＨ（２００ｍｌ）中の化合物３（３．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を３０分間６０℃にて撹拌した。溶媒を蒸発させた後、溶液を２Ｎ ＨＣｌで中和して、白色沈殿を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出して有機層を分離し、水（２×１００ｍｌ）、鹹水（２×１００ｍｌ）で洗浄して、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた。溶媒を除去し、茶色固体（２．５ｇ、９２％）を得た。

中間体６の合成：化合物４（２．５ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、化合物５（２．５２ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．９１ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４．４３ｇ、３４．３２ｍｍｏｌ）の混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濾過した後、ろ液を蒸発乾固し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ＝ ２／１）によって精製して茶色固体（２ｇ、５４％）を得た。

２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成：化合物６（２．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）における水酸化ナトリウム（２Ｎ、２０ｍＬ）及びＤＣＭ（２５ｍｌ）の混合物を１０分間０℃にて撹拌した。ヒドロキシルアミン（５０％）（１０ｍｌ）を０℃に冷却して、混合物に添加した。生じる混合物を室温にて２０分間撹拌した。溶媒を除去した後、混合物を１ＭのＨＣｌで中和して、白色沈殿を得た。粗生成物を濾過し、プレＨＰＬＣによって精製して、白色固体（９５０ｍｇ、４８％）を得た。

実施例２：２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成

中間体２の合成：実施例１における中間体２の合成を参照されたい。

中間体３の合成：ＤＭＳＯ（６９０ｍｌ）中の化合物２（６９．２ｇ、１当量）、１−クロロ−２−ヨードベンゼン（１３５．７ｇ、２当量）、Ｌｉ_２ＣＯ_３（４２．０４ｇ、２当量）、Ｋ_２ＣＯ_３（３９．３２ｇ、１当量）、Ｃｕ（１当量４５μｍ）の混合物を脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を１４０℃にて撹拌した。反応の後処理は、収率９３％にて化合物３を与えた。

中間体４の合成：実施例１における中間体４の合成を参照されたい。

中間体６の合成：実施例１における中間体６の合成を参照されたい。

２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成：実施例１における化合物Ａの合成を参照されたい。

実施例３：２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成

中間体２の合成：乾燥ＤＭＦ（１０００ｍｌ）中の化合物１（１００ｇ、０．７４ｍｏｌ）の溶液に、１，５−ジブロモペンタン（１７０ｇ、０．７４ｍｏｌ）を添加した。反応を氷浴において冷却しながら、ＮａＨ（６５ｇ、２．２ｅｑ）を滴状に添加した。生じる混合物を一晩５０℃にて激しく撹拌した。懸濁液を慎重に氷水で急冷し、エチルアセテート（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮して粗生成物を得て、それをフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して青色色の固体（１００ｇ、６７％）として化合物２を得た。

中間体３の合成：ＰＰＡ（５００ｍｌ）中の化合物２（１００ｇ、０．４９ｍｏｌ）の溶液は、約５〜６時間１１０℃にて加熱した。完了後、生じる混合物は、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で約８〜９のｐＨに慎重に調整した。生じる沈殿物を収集して、水（１０００ｍｌ）で洗浄し、白色固体（９５ｇ、８７％）として化合物３を得た。

中間体４の合成：ｎ−ＢｕＯＨ（８００ｍｌ）中の化合物３（９５ｇ、０．４３ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＣｌＯ（２６０ｍｌ、１．４ｅｑ）を添加した。３Ｎ ＮａＯＨ（４００ｍｌ、２．８当量）を０℃にて次いで添加して、反応を一晩室温にて撹拌した。生じる混合物はＥＡ（２×５００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層を鹹水で洗浄した。溶媒を真空下において除去して粗生成物を得て、ＨＣｌ塩処理によってさらに精製して、白色粉末（７２ｇ、７３％）として化合物４を得た。

中間体６の合成：ジオキサン（５０ｍｌ）中の化合物４（２．２９ｇ １０ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５（１．８７ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５８ｇ、２．０当量）を添加した。混合物を１１０〜１２０℃にて一晩加熱した。生じる混合物をシリカゲルカラム上で直接精製して、白色固体（１．３７ｇ、４０％）として、連結した生成物である化合物６を得た。

２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍｌ、１：１）中の化合物６（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２ｍｌ、過剰）における５０％ＮＨ_２ＯＨを添加した。飽和ＭｅＯＨ（２ｍｌ、過剰）におけるＮａＯＨを０℃にて次いで添加し、反応を３〜４時間撹拌した。完了後、生じる混合物を濃縮し、４〜５のｐＨに到達するために、２Ｎ ＨＣｌで酸性化した。沈殿物を収集して、水（１０ｍｌ）で洗浄し、過剰なＮＨ_２ＯＨを除去した。沈殿物を乾燥させて、白色粉末（７０ｍｇ、７３％）として、２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミドを得た。

実施例４：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成

中間体２の合成：ＭＢＴＥ（３７５０ｍｌ）中の化合物１、ベンゾニトリル（２５０ｇ、１．０当量）及びＴｉ（ＯｉＰｒ）_４（１３３０ｍｌ、１．５当量）の溶液を窒素雰囲気下で約−１０〜−５℃に冷却した。ＥｔＭｇＢｒ（１６１０ｍｌ、３．０Ｍ、２．３当量）を６０分間にわたって滴状に添加して、その間、反応の内部の温度を５℃より低く保持した。反応混合物は、１時間１５〜２０℃に温めた。ＢＦ_３−エーテル（１３００ｍｌ、２．０当量）を６０分間にわたって滴状に添加し、その一方で、内部温度を１５℃より低く維持した。反応混合物を１〜２時間１５〜２０℃にて撹拌し、ベンゾニトリルの低レベルが残っているときに止めた。３０℃より低く内部温度を維持しながら、１Ｎ ＨＣｌ（２５００ｍｌ）を滴状に添加した。ＮａＯＨ（２０％、３０００ｍｌ）を滴状に添加して、ｐＨを約９．０とし、その一方で、温度を３０℃より低くさらに維持した。反応混合物をＭＴＢＥ（３Ｌ×２）及びＥｔＯＡｃ（３Ｌ×２）で抽出し、合わせた有機層を無水のＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下（４５℃より低く）で濃縮してレッドオイルを得た。ＭＴＢＥ（２５００ｍｌ）をオイルに添加して透明な溶液を与え、乾燥ＨＣｌガスによるバブリング下で、固体を沈殿させた。この固体を濾過して真空において乾燥させ、１４３ｇの化合物２を得た。

中間体４の合成：化合物２（６２０ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（１０８０ｇ、２．２当量）をＮＭＰ（３１００ｍｌ）において溶解して、２０分間撹拌した。化合物３（６８０ｇ、１．０２当量）を添加して、反応混合物を４時間約８５〜９５℃に加熱した。溶液を室温にゆっくり冷却させた。この溶液をＨ_２Ｏ（２０Ｌ）上へ注いで、強く攪拌して固体の多くを溶液から沈殿させた。混合物を濾過し、固まりを２４時間５０℃にて減圧下で乾燥させ、８９６ｇの化合物４（固体、８６．８％）を得た。

Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成：ＭｅＯＨ（１０００ｍｌ）の溶液を撹拌しながら約０〜５℃に冷却した。ＮＨ_２ＯＨ ＨＣｌ（１１０７ｇ、１０当量）を添加し、続いてＮａＯＣＨ_３（１０００ｇ、１２．０当量）を慎重に添加した。生じる混合物は、１時間０〜５℃にて撹拌し、濾過して固体を除去した。一部分における反応混合物に化合物４（４５０ｇ、１．０当量）を添加し、化合物４が消費されるまで、２時間１０℃にて撹拌した。反応混合物は、ＨＣｌ（６Ｎ）の添加を介して約８．５〜９のｐＨに調整し、沈澱を生じた。混合物は、減圧下で濃縮した。強く撹拌しながら水（３０００ｍｌ）を残渣に添加し、沈殿を濾過によって収集した。生成物を４５℃にて一晩オーブンにおいて乾燥した（３４０ｇ、７９％収率）。

実施例５：ＨＤＡＣ酵素アッセイ
試験のための化合物をＤＭＳＯにおいて５０倍の終濃度に希釈し、１０点の３倍希釈系列を作製した。化合物をアッセイ緩衝液（５０ｍＭ ＨＯＰＥＳ、ｐＨ ７．４、１００ｍＭ Ｋｉｌｌ、０．００１％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．０５％ＢＡＳＥ、２０μＭ ＴＥＣ）において６倍のこれらの終濃度に希釈した。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）は、アッセイ緩衝液において１．５倍のこれらの終濃度に希釈した。０．０５μＭ終濃度のジペプチド基質及びトリプシンは、アッセイ緩衝液において６倍のこれらの終濃度に希釈した。これらのアッセイ法において使用した最終的な酵素濃度は、３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）及び２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）であった。使用した最終基質濃度は、１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）及び１４μＭ（ＨＤＡＣ６）であった。５μｌの化合物及び２０μｌの酵素は、黒い不透明な３８４ウェルプレートのウェルに重複して添加した。酵素及び化合物は、１０分間室温にて共にインキュベートした。５μｌの基質をそれぞれのウェルに添加し、プレートを６０秒間振盪して、Ｖｉｃｔｏｒ ２マイクロリットルプレートリーダーに入れた。蛍光発光を６０分間モニターし、線状の反応速度を算出した。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して４つのパラメーターカーブフィットによりＩＣ_５０を決定した。

実施例６：乳癌細胞における化合物Ａの細胞毒性及び薬物組み合わせによる相乗活性
１６個の乳癌細胞系統のパネルは、４８時間、化合物Ａ、ドキソルビシン、ＧＤＣ−０９４１またはラパチニブ及び薬物組み合わせで処理し、細胞生存度をＭＴＡアッセイによって測定した。化合物Ａとパートナー化合物間の相乗作用は、ＣａｌｃｕＳｙｎを使用して算出した。細胞生存度は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法を使用して「Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ａｆｆｅｃｔｅｄ」（Ｆａ）及び「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ」（ＣＩ）値を算出するために使用した。０．２５〜０．７５のＦａ値にてＣＩ値＜０．７０である任意の組み合わせは、陽性相乗作用として定義した。

実験の結果を下記表に示す。

実施例７：ＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−０９４１は、ＨＤＡＣ６選択的な阻害剤によって増強される
この実施例において、ＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−０９４１との化合物Ａ及び化合物Ｃの増強効果を調べた。化合物Ａまたは化合物Ｃの無細胞毒性濃度にて、ＧＤＣ−０９４１はより強力になる（ＩＣ_５０値における減少）。化合物Ａ及び化合物Ｃはともに、それぞれ、クラスＩ ＨＤＡＣｓに対し１３倍及び１，５００倍のＨＤＡＣ６の選択性を有する、同様の低ｎＭの作用強度を有するＨＤＡＣ６選択的な阻害剤である。

この実験の結果を図１に示す。

実施例８：Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞系統に対するＨＤＡＣ６阻害剤及び試験化合物の増強効果
ＨＤＡＣ６阻害剤の増強効果を調査するために、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞系統ＭＤＡ−ＭＢ−４５３またはＢＴ−４７４は、ＨＤＡＣ６阻害剤、化合物Ａまたは化合物Ｃ及びその他の抗乳癌化合物、ラパチニブ、ＧＤＣ−０９４１、ＣＡＬ−１０１またはＩＰＩ−１４５の１つの組み合わせとインキュベートした。これらの４つの抗乳癌化合物のＩＣ_５０値（細胞の５０％が生存可能である阻害性の濃度）を、ＨＤＡＣ６阻害剤の濃度増大の存在において算出した。化合物Ａまたは化合物Ｃ単独は、試験した濃度にてこれらの乳癌細胞に対して細胞毒性でないため、任意のＨＤＡＣ６阻害剤濃度依存的なＩＣ_５０値の減少は、試験した化合物に対するＨＤＡＣ６阻害剤の増強効果を示唆する。

実施例９：ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）６阻害は、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞系統においてラパチニブ及びＰＩ３Ｋ阻害剤の細胞毒性を増強する
この実施例において、ＨＤＡＣ６阻害の影響は、ＨＤＡＣ６阻害剤単独を使用して、またはＨｅｒ２阻害剤（ラパチニブ）またはＰＩ３Ｋ阻害剤（ＧＤＣ−０９４１、ＩＰＩ−１４５及びＣＡＬ−１０１）と組み合わせて、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞成長及び細胞遊走において調査した。

主要な癌型から由来されるほぼ１００のヒト腫瘍細胞系統のパネルを使用して、化合物Ａの抗腫瘍活性を調査し、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞は化合物Ａに対する最大感受性細胞の一つだった。Ｈｅｒ２阻害剤ラパチニブまたはＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−０９４１と化合物Ａの組み合わせは、これらの癌細胞に対して相乗的細胞毒性を示した。効果がＨＤＡＣ６阻害によることを示すため、高度に選択的なＨＤＡＣ６阻害剤である化合物Ｃを使用した、それはクラスＩ ＨＤＡＣｓ（ＨＤＡＣ１、２及び３）を超える、ＨＤＡＣ６に対する１，５００倍より高い選択性を有する。化合物Ｃは、ラパチニブ及びＰＩ３Ｋ阻害剤（ＩＰＩ−１４５、ＧＤＣ−０９４１及びＣＡＬ−１０１）に対してＨｅｒ２^＋乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−４５３及びＢＴ−４７４を感作することができた。化合物Ｃはまた、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）の有無において癌細胞遊走を遮断した。ＨＤＡＣ６によって媒介されるＨｅｒ２^＋乳癌細胞死の提唱された機構に一致して、化合物Ａ処理は、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞系統ＭＤＡ−ＭＢ−４５３におけるＨｅｒ２タンパク質、ｐ−ＥＧＦＲ及びｐ−ＡＫＴの減少と相関した。

高度に選択的なＨＤＡＣ６阻害剤である化合物Ｃの利点を取ることによって、Ｈｅｒ２^＋乳癌細胞におけるＨＤＡＣ６阻害による成長及び遊走の抑制活性が示された。

実施例１０：癌細胞系統に対するＨＤＡＣ６阻害剤の抗遊走効果
多くの培養癌細胞は、膜を横断して移動することができ、この活性は癌細胞の転移潜在性を示す。２つの癌細胞、Ａ５４９及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１の遊走を、ＨＤＡＣ６阻害剤の有無において比較した。癌細胞を播種して、膜表面上で成長させ、膜のもう一方の側の上の細胞数を１２時間後に顕微鏡下で計数した。ＨＤＡＣ６阻害剤による遊走した細胞の数の減少は、ＨＤＡＣ６阻害剤の遊走抑制活性を示唆する。研究において、遊走が測定された２時間前または測定されたときのいずれかに、ＨＤＡＣ阻害剤を細胞に添加した。癌細胞遊走を刺激する上皮成長因子（ＥＧＦ）に対するＨＤＡＣ６阻害剤の効果を、アッセイにおいてＥＧＦの２０ｎｇ／ｍｌを使用して調査した。

遊走アッセイのためのプロトコルは、以下の通りだった。化合物は、最終的な必要濃度の４００×ストックにて、ＤＭＳＯにおいて調製した。

温かい基礎ＲＰＭＩ１６４０培地の２００μｌをインサートの内部に添加し、５％のＣＯ_２雰囲気で３７℃にて加湿された組織培養インキュベーターにおいて２時間再水和させた。再水和の間、細胞をトリプシンで収集し、３回洗浄し、次いで５００，０００細胞／ｍｌまたは２５０，０００細胞／ｍｌを含む予熱した基礎ＲＰＭＩ１６４０培地で再懸濁した。化合物は、基礎ＲＰＭＩ１６４０培地で２０×まで希釈した。２０×化合物の２５μｌを５００μｌの細胞懸濁液に添加して、化合物を有する最終的な細胞懸濁液を作製した。２０×化合物の１００μｌを、１０％ＦＢＳを有する１，９００μｌのＲＰＭＩ１６４０培地に添加して最終培地を得、最終培地の５００μｌを新たな２４ウェルプレートのウェルに添加した。再水和の後、培地をインサートから除去し、次いで１００μｌの最終細胞懸濁液をチャンバーに添加した。チャンバーを、最終培地を含むウェルへ移した。最終細胞懸濁液（１／２の密度に最終培地で希釈）の１００μｌ／ウェルを９６ウェルプレート（３通り）に添加した。３７℃にて８時間のインキュベーションの後、侵入していない細胞は、ワタ綿で膜の上面から除去した。膜のより低い表面上の細胞は、室温にて１５分間４％のパラホルムアルデヒドで固定し、次いで３０分間クリスタルバイオレットで染色した。染色の後、細胞を除いて膜の上にクリスタルバイオレットを確実になくすために、インサートは、数回ＰＢＳにおいて洗浄した。遊走した細胞の数は、１００×倍率にて５つの領域において顕微鏡下で計数した。生存可能な細胞を、遊走アッセイと同じ処理により９６ウェルプレートに播種して、ＣＴＧ（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ）を使用して測定した。

これらの実験の結果を、図２、３及び４に示す。

実施例１１：癌細胞系統に対するＨＤＡＣ６阻害剤の浸潤効果
Ａ５４９癌細胞の浸潤は、ＨＤＡＣ６阻害剤の有無において比較した。癌細胞を播種して、膜表面上で成長させ、膜のもう一方の側の上の細胞数を１２時間後に顕微鏡下で計数した。遊走に加えて（実施例１０）、細胞はまた、コラーゲンバリアを横切らなければならなかった。ＨＤＡＣ６阻害剤による遊走した細胞の数の減少は、ＨＤＡＣ６阻害剤の浸潤抑制活性を示唆する。癌細胞遊走を刺激する上皮成長因子（ＥＧＦ）に対するＨＤＡＣ６阻害剤の効果を、アッセイにおいてＥＧＦの２０ｎｇ／ｍｌを使用して調査した。

浸潤アッセイのためのプロトコルは、以下の通りだった。化合物は、最終的な必要濃度の４００×ストックにてＤＭＳＯ中に調製した。

温かい基礎ＲＰＭＩ１６４０培地の２００μｌをインサートの内部に添加し、５％のＣＯ_２雰囲気で３７℃にて加湿された組織培養インキュベーターにおいて２時間再水和させた。再水和の間、細胞をトリプシンで収集し、３回洗浄し、次いで５００，０００細胞／ｍｌまたは２５０，０００細胞／ｍｌを含む予熱した基礎ＲＰＭＩ１６４０培地で再懸濁した。化合物は、基礎ＲＰＭＩ１６４０培地で２０×まで希釈した。２０×化合物の２５μｌを５００μｌの細胞懸濁液に添加して、化合物を有する最終的な細胞懸濁液を作製した。２０×化合物の１００μｌを、１０％ＦＢＳを有する１，９００μｌのＲＰＭＩ１６４０培地に添加して最終培地を得、最終培地の５００μｌを新たな２４ウェルプレートのウェルに添加した。再水和の後、培地をインサートから除去し、次いで１００μｌの最終細胞懸濁液をチャンバーに添加した。チャンバーを、最終培地を含むウェルへ移した。最終細胞懸濁液（１／２の密度に最終培地で希釈）の１００μｌ／ウェルを９６ウェルプレート（３通り）に添加した。３７℃にて１８時間のインキュベーションの後、侵入していない細胞は、ワタ綿で膜の上面から除去した。膜のより低い表面上の細胞を室温にて１５分間４％のパラホルムアルデヒドで固定し、次いで３０分間クリスタルバイオレットで染色した。染色の後、細胞を除いて膜の上にクリスタルバイオレットを確実になくすために、インサートは、数回ＰＢＳにおいて洗浄した。浸潤した細胞の数は、１００×倍率にて５つの領域において顕微鏡下で計数した。生存可能な細胞を浸潤アッセイと同じ処理により９６ウェルプレートに播種して、ＣＴＧ（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ）を使用して測定した。

これらの実験の結果を図５に示す。

参照による援用
本出願の全体にわたって引用される全ての参照（文献参照、発行された特許、公開された特許出願及び同時係属特許出願を含む）の内容は、これによりこれらの全体において本明細書に明白に組み込まれる。定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術的及び科学的な用語は、一般に当業者に公知の意味に一致する。

均等物
当業者は、本明細書において記述される発明の具体的実施形態の多くの均等物を認識し、または通常の実験しか使用せずに確認することができるだろう。このような均等物は、以下の請求項によって包含されることが意図される。

Claims (10)

1. ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療上有効な量を含む医薬組成物と、Ｈｅｒ２阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物とから構成される、乳癌を治療するための薬学的組み合わせ物であって、
   前記Ｈｅｒ２阻害剤がラパチニブであり、かつ
   前記ＨＤＡＣ阻害剤が下記式：
   

   

   又は、下記式：
   

   

   の化合物である、薬学的組み合わせ物。
2. ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療上有効な量、及びＨｅｒ２阻害剤またはその薬学的に許容される塩を組み合わせて含む、乳癌を治療するための医薬組成物であって、
   前記Ｈｅｒ２阻害剤がラパチニブであり、かつ
   前記ＨＤＡＣ阻害剤が下記式：
   

   

   又は、下記式：
   

   

   の化合物である、医薬組成物。
3. 前記ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、下記式：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の薬学的組み合わせ物。
4. 前記ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、下記式：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
5. 前記ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、下記式：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の薬学的組み合わせ物。
6. 前記ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩が、下記式：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
7. ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療上有効な量を含む医薬組成物と、Ｈｅｒ２阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物のそれぞれが、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組み合わせ物。
8. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項２に記載の医薬組成物。
9. 乳癌を治療するのに用いるための、治療上有効な量のヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）特異的阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物であって、
   前記ヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）特異的阻害剤が下記式：
   

   

   又は、下記式：
   

   

   の化合物であり、かつ、ラパチニブまたはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物と組み合わせて用いられる医薬組成物。
10. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項９に記載の医薬組成物。

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