JP6538081B2 - 刺激を受けた幹細胞の馴化培地の発毛促進能およびそれらの使用 - Google Patents
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Description
本出願は、参照によって開示の全体が本明細書に組み込まれる、2014年7月7日に申請された米国特許出願第62/021,366号の優先権および利益を主張する。
2.韓国特許出願第10−1422559(2014年7月17日)
3.韓国特許出願公開第10−2013−0009117(2013年1月23日)
4.韓国特許出願公開第10−2014−0125735(2014年10月29日)
5.韓国特許出願公開第10−2008−0097593(2008年11月6日)
6.韓国特許出願第10−1218101(2013年1月3日)
2.Park BS, Kim WS, Choi JS, Kim HK, Won JH, Ohkubo F, Fukuoka H.; Hair growth stimulated by conditioned medium of adipose-derived stem cells is enhanced by hypoxia: evidence of increased growth factor secretion. ; Biomed Res. 2010 Feb; 31(1):27-34.
3.Jeong YM, Sung YK, Kim WK, Kim JH, Kwack MH, Yoon I, Kim DD, Sung JH.; Ultraviolet B preconditioning enhances the hair growth-promoting effects of adipose-derived stem cells via generation of reactive oxygen species.; Stem Cells Dev. 2013 Jan 1;22(1):158-68. doi: 10.1089/scd.2012.0167. Epub 2012 Aug 13.
(i)毛周期の間の休止期から成長期への転換時間を短縮する。
[医薬組成物]
[化粧品組成物]
[材料および方法]
1.幹細胞の馴化培地の調製
(1)幹細胞の単離および培養 本発明では、Medipost Co., Ltd.(韓国)によって提供されたヒト臍帯血由来間充織幹細胞を使用した。細胞は、臍帯血を採取する段階、および、間充織幹細胞を臍帯血から単離して、それを培養する段階から取得され得る。各段階の詳細は本明細書の以下に記載されている。臍帯血を採取する段階において、自然経膣分娩(NSVD)の場合、乳児の分娩後、胎盤がまだ子宮内に残っている状態で、排出された臍帯血管から臍帯血が採取される。あるいは、帝王切開の場合、乳児の分娩後、胎盤も子宮から排出された状態で、臍帯血管から臍帯血が採取される。
(2)馴化培地サンプルの調製
(3)刺激を受けたCMの調製
2.発毛を観察するためのC3Hマウスの準備
3.本発明に係る幹細胞の馴化培地の局所適用
4.MTT分析
5.Primary hDPCおよびPrimary ORSを一次細胞として分離する
6.パッチアッセイ
7.一次毛髪器官の培養
例1:臍帯血由来の間充織幹細胞(hUCB−MSC)培地の発毛効果の確認
1−1 in vitro実験
1−2 ウエスタンブロット
1−3 ex vivo実験
例2:パッチアッセイ
例3:マウスへの局所適用
[産業上の利用可能性]
[項目1]
TGF−β、IFN−γ、FGF−5、IL−1β、TNF−α、K17、NT−3、NT−4、BDNF、BMP2/4からなる群から選択された少なくとも1つの毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた幹細胞の馴化培地を有効成分として備える、脱毛防止および発毛促進のための組成物。
[項目2]
上記毛髪退行期誘導因子は、TGF−βを含む少なくとも1つの因子である、項目1に記載の組成物。
[項目3]
上記幹細胞は、骨髄、臍帯血、脂肪、血液、肝臓および腸、皮膚、消化管、胎盤、神経、副腎、上皮、子宮に由来するヒト組織成体幹細胞、および、胚性幹細胞からなる群から選択された少なくとも1つである、項目1または2に記載の組成物。
[項目4]
上記幹細胞は、臍帯血、骨髄または脂肪に由来する、項目3に記載の組成物。
[項目5]
上記幹細胞は、臍帯血に由来する、項目4に記載の組成物。
[項目6]
上記毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた上記馴化培地は、上記毛髪退行期誘導因子を上記幹細胞に加えた後で上記幹細胞を22〜26時間刺激し、その後、1日間から3日間までの選択された期間培養することで得られる、項目1から3のいずれか一項に記載の組成物。
[項目7]
上記毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた上記馴化培地は、Wnt3a、Bcl−2、CyclinD−1からなる群から選択された少なくとも1つのタンパク質を含む、項目1から3、または6のいずれか一項に記載の組成物。
[項目8]
上記毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた上記馴化培地は10%〜30%の最終濃度を有する、項目1から3、6、または7のいずれか一項に記載の組成物。
[項目9]
上記毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた上記馴化培地は、
(i)毛周期の間の休止期から成長期への転換時間を短縮し、
(ii)真皮乳頭細胞を発生させ、長さの伸長を促進し、
(iii)毛包の数および大きさを増大させ、
(iV)頭皮の皮膚の厚さを増大させる
作用を有する、項目1から3、または6から8のいずれか一項に記載の組成物。
[項目10]
上記組成物は、医薬組成物または化粧品組成物である、項目1から3、または6から9のいずれか一項に記載の組成物。
[項目11]
TGF−β、IFN−γ、FGF−5、IL−1β、TNF−α、K17、NT−3、NT−4、BDNF、BMP2/4からなる群から選択された少なくとも1つの毛髪退行期誘導因子で幹細胞を刺激することによって、脱毛を防止し、発毛を促進する幹細胞の馴化培地を製造する方法。
[項目12]
上記毛髪退行期誘導因子がTGF−βを含む、項目11に記載の方法。
[項目13]
上記幹細胞は、臍帯血、骨髄または脂肪に由来する、項目11または12に記載の方法。
[項目14]
局所的な塗布または注射によって、項目1または2に記載の上記組成物の経皮投与を含む、脱毛の防止および発毛の促進のために組成物を使用する方法。
[項目15]
TGF−β、IFN−γ、FGF−5、IL−1β、TNF−α、K17、NT−3、NT−4、BDNF、BMP2/4からなる群から選択された少なくとも1つの毛髪退行期誘導因子によって刺激を受けた幹細胞の馴化培地を使用して脱毛を処置する方法。
[項目16]
上記毛髪退行期誘導因子は、TGF−βを含む、少なくとも1つの因子である、項目15に記載の方法。
[項目17]
上記幹細胞は、臍帯血、骨髄または脂肪に由来する、項目15または16に記載の方法。
[項目18]
刺激を受けた幹細胞の上記馴化培地は、Wnt3a、Bcl−2、CyclinD−1からなる群から選択された少なくとも1つのタンパク質を含む、項目15から17のいれか一項に記載の方法。
Claims (11)
- TGF−βによって刺激を受けた幹細胞の馴化培地を有効成分として備え、
前記幹細胞は、臍帯血に由来する間充織幹細胞である、
脱毛防止および発毛促進のための組成物。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、
Wnt3a、P−GSK3β、Dep−p−β−catenin、β−catenin、CyclinD−1、Bcl−2、Baxからなる群から選択された少なくとも1つのタンパク質を含む、
請求項1に記載の組成物。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、前記組成物に対し、10%〜50%の最終濃度を有する、
請求項1または2に記載の組成物。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、
(i)毛周期の間の休止期から成長期への転換時間を短縮し、
(ii)真皮乳頭細胞を発生させ、毛髪の長さの伸長を促進し、
(iii)毛包の数および大きさを増大させる、
作用を有する、
請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記組成物は、医薬組成物または化粧品組成物である、
請求項1から4のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記組成物は、注射または塗布のためのものである、
請求項1から5のいずれか一項に記載の組成物。 - TGF−βで幹細胞を刺激する段階によって、
脱毛を防止し、発毛を促進する幹細胞の馴化培地を製造する方法であって、
前記幹細胞は、臍帯血に由来する間充織幹細胞である、
方法。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、
Wnt3a、P−GSK3β、Dep−p−β−catenin、β−catenin、CyclinD−1、Bcl−2、Baxからなる群から選択された少なくとも1つのタンパク質を含む、
請求項7に記載の方法。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、
前記TGF−βを前記幹細胞に加えた後で前記幹細胞を22から26時間刺激し、
その後、1日間から3日間までの選択された期間培養することで得られる、
請求項7または8に記載の方法。 - 前記馴化培地を、10%〜50%の濃度まで希釈する段階をさらに含む、
請求項7から9のいずれか一項に記載の方法。 - 前記TGF−βによって刺激を受けた前記馴化培地は、
(i)毛周期の間の休止期から成長期への転換時間を短縮し、
(ii)真皮乳頭細胞を発生させ、毛髪の長さの伸長を促進し、
(iii)毛包の数および大きさを増大させる、
作用を有する、
請求項7から10のいずれか一項に記載の方法。
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