KR20180126283A - 테프레논을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 테프레논(Teprenone)을 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 테프레논을 포함하는 화장료 조성물 및 피부외용제와, (a) 줄기세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계의 줄기세포에 테프레논을 포함하는 조성물을 첨가하는 단계를 포함하는 줄기세포에서 지방세포로 분화 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 테프레논은 지방분화의 핵심 조절자인 C/ebp α의 발현을 촉진함으로써 지방 조직 유래 줄기세포의 성숙한 지방세포로의 분화를 촉진하여, 지방 조직 퇴축으로 인한 부피 감소와 기능 저하로 유발되는 현대인들의 미적, 건강적 문제를 개선할 수 있는 새로운 가능성을 제시할 수 있다.

Description

테프레논을 포함하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition comprising teprenone}

본 발명은 테프레논(teprenone)을 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 테프레논을 포함하는 화장료 조성물 및 피부외용제와, 상기 테프레논을 포함하는 조성물을 이용한 줄기세포에서 지방세포로의 분화를 유도하는 방법에 관한 것이다.

피하조직은 진피와 근막 사이에 위치하여, 체내 지방을 저장하는 지방세포, 지방전구세포, 지방 유래 줄기세포, 혈관 및 신경망을 포함하는 결합조직이다. 피하지방은 기본적으로 에너지 저장, 외부 추위 및 열로부터 체온보호, 완충작용 등의 기능을 한다. 뿐만 아니라, 다양한 호르몬, 성장인자와 사이토카인을 분비하여 면역, 체온 조절, 피부조직의 성장 및 노화를 조절함으로써, 피부의 재생, 주름 형성 억제 등을 통해 피부의 외관을 개선하는 역할을 할 수 있다. 또한, 피부에 탄력성 및 견고성을 제공하여, 개인의 외형적 상태를 형성하는 데 막대한 영향을 끼친다.

이러한 피하지방은 노화함에 따라 조직이 전반적으로 현저히 부피가 감소하고, 그 기능이 저하하는 것으로 잘 알려져 있다. 그러나 현대에는 과도한 다이어트로 인한 영향불균형으로 인해 비교적 젊은 나이일 지라도 지방조직이 퇴축되는 경향을 보이고 있다. 이는, 지방 조직 부피 저하로 인한 피부 탄력 감소 및 강도 하락으로 인한 구조적 붕괴뿐만 아니라, 피부 조직 및 전신적인 대사를 조절하는 내분비기관으로서의 기능의 저하로 인한 노화 촉진, 면역 및 재생 감소 등의 문제를 야기한다.

이러한 문제를 해결하기 위해, 현재 침습적인 방법을 이용한 자가 지방이식 수술 등의 방법이 시행되고 있다. 비교적 지방이 풍부한 복부 및 허벅지 부위의 지방을 채취하여 이동시키는 방법으로 화상, 수술, 흉터로 인해 함몰된 피부나, 노화로 인한 피하지방 감소를 일부 개선할 수 있다. 하지만, 비교적 고가의 비용을 들여야 하며, 수술 후 자가 지방 조직의 생착률이 일정하지 않고, 수술적인 방법을 이용해야만 하는 침습적인 방식이라는 단점이 있다. 따라서, 이러한 단점을 보완하면서, 피하지방층의 퇴축을 복구시킬 수 있는 비침습적인 방식에 대한 요구가 커지고 있다.

최근 많은 연구를 통해 피하지방에 중간엽 계열의 다능성 줄기세포가 존재하는 것이 증명되었다. 이 줄기세포는 지방 조직 유래 줄기세포(ADSC)라고 하며, 환경적인 신호에 따라, 성숙한 지방세포로 분화한다. 뿐만 아니라 다양한 호르몬 및 사이토카인을 분비함으로서 지방 및 피부조직의 항상성을 유지한다. 또한, 자가 지방이식 수술 이후 지방조직의 생착은 지방 조직 유래 줄기세포의 함유량에 의해 조절된다. 즉, 지방 조직 유래 줄기세포가 피하 지방으로 분화하도록 유도함으로써 자가 지방이식 수술과 같은 효과를 갖는, 비침습적이고 안전한 지방 재생을 기대할 수 있다.

또한, 피부의 최외각에 위치하고 있는 표피(epidermis)는 외부의 다양한 물리적, 화학적 및 기계적 자극에 대한 방어와 피부를 통한 체내 수분의 과도한 발산을 막는 보호 기능을 수행하고 있다. 이러한 보호 기능은 각질형성 세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되고 유지됨으로써 가능하다. 각질형성세포는 표피최하층(stratum basale)에서 지속적으로 증식하던 기저세포(basal cell)가 각질층(stratum corneum)으로 이동하면서, 단계적으로 형태 및 기능상의 변화를 거치며 형성된 세포이며, 일정 기간이 지나면 오래된 각질형성세포는 피부에서 탈락되고, 표피 최하층으로부터 올라온 새로운 각질형성세포가 그 기능을 대신하는 표피 분화(epidermis differentiation) 또는 각화(keratinization)의 과정을 반복하게 된다. 이러한 각화과정에서 각질형성세포는 천연보습인자(Natural Moisturizing Factor; NMF)와 세라마이드, 콜레스테롤 및 지방산과 같은 세포 간 지질을 생성하여, 각질층이 외부와의 차단층 역할을 하게 됨으로써 피부장벽(skin barrier)로서의 기능을 보유하게 된다.

또한, 현대 사회의 주요 질환의 하나로 여겨지는 피부 건조증은 피부 장벽 기능 이상에 의해 야기되는 증상의 하나로, 최근, 환경 오염, 아파트, 고층 건물과 같은 건조한 환경의 증가, 사회적 스트레스의 증가, 우리나라 특유의 과도한 목욕 문화, 피부 노화 등과 같은 여러 가지 요인에 의해 점점 더 증가하고 있으며, 증세가 심하여 치료를 필요로 하는 경우 또한 지속적으로 증가하고 있다. 최근 소아의 10%에서 발병하는 아토피성 피부염 역시 피부 건조증, 보다 근본적으로는 피부 장벽 기능의 이상을 주요 원인으로 하는 것으로 알려져 있다. 이러한 아토피성 피부염을 치료하기 위하여, 종래에는 피부 내 적절한 수분 유지에 중점을 두어 외부로부터 수분을 공급하거나 체내로부터의 수분 손실을 최소화하기 위한 연구가 많이 진행되어 왔으며, 실제로 수분 보유 능력이 있는 세라마이드(ceramide) 또는 그의 유도체와 같은 보습제가 개발되어 제약 또는 화장품 영역에서 많이 사용되고 있다.

그러나 이와 같은 보습제의 사용은 그 대부분이 근본적인 치료이기보다는 일시적인 증상의 완화에 불과하여, 아토피성 피부염을 포함하는 피부 건조증 및 피부 장벽 기능 이상의 치료에 대한 충분한 효과를 나타내지 못하고 있다. 이에, 손상된 피부 장벽을 근원적으로 재생시켜주는 물질의 개발이 시급한 실정이다.

한편, 테프레논은 하기 화학식 1의 구조를 가지는 화합물로, 제라닐제라닐아세톤(geranylgeranylacetone)이라고도 불리며, 화학식은 C₂₃H₃₈O이고 분자량은 330.55인 화합물이다. 현재 테프레논은 주로 위점막 병변(미란, 출혈, 발적, 부종)을 개선시키거나 급성위염, 만성위염을 개선시키기 위한 용도로 많이 알려져 있다.

[화학식 1]

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 테프레논이 지방분화의 핵심 조절자인 C/ebp α의 발현을 촉진함으로써 지방 조직 유래 줄기세포의 성숙한 지방세포로의 분화를 촉진함을 발견하고, 기존에 알려지지 않았던 테프레논의 지방 세포 분화 조절 기능을 최초로 밝힘으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 테프레논 화합물 또는 이의 허용가능한 염을 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 테프레논 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 피부외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 (a) 줄기세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계의 줄기세포에 상기 테프레논을 포함하는 조성물을 첨가하는 단계를 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로 분화 유도하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기와 같은 과제들을 해결하고, 본 발명의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, "테프레논(Teprenone)"은 하기 화학식 1의 구조로 표시되는 화합물로, 분자식은 C₂₃H₃₈O이고 분자량은 330.55인 화합물이다. 테프레논은 상기 용어 외에도 제라닐제라닐아세톤(geranylgeranylacetone)이라고도 불리기도 한다.

[화학식 1]

본 발명은 테프레논의 획득 방법에 특별히 한정되지 않으며, 당업계에 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나, 시판되는 물질을 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 테프레논은 용매화된 형태뿐만 아니라 비-용매화된(unsolvated) 형태로 존재할 수도 있다. 본 발명의 테프레논은 결정형 또는 무정형 형태로 존재할 수 있으며, 이러한 모든 물리적 형태는 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명에 따른 조성물에 있어, 상기 테프레논의 함량은 조성물 전체 중량 대비 본 발명의 화장료 조성물은 총 조성물의 중량 대비 테프레논을 0.0001 내지 50 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로 0.01 중량% 내지 10 중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서 우수한 리포필링(lipofilling), 지방충전 또는 피부 재생 효과를 나타내며, 동시에 조성물의 제형이 안정화되는 이점이 있다.

본 발명에서, 용어 "전구세포"는 위탁줄기세포라고 하며, 자손에 해당되는 세포(X)가 특정한 분화형성 발현이 밝혀진 경우, 분화형질을 발현하지 않은 미분화 친(親)세포를 X의 전구세포라고 부른다. 또한, "지방전구세포"는 지방세포로의 분화형성 발현이 밝혀진 전구세포를 의미한다.

본 발명에서, 용어 "줄기세포"는 동물의 미분화된 세포로서 모든 다세포 생물에 존재하며, 무한 증식이 가능한 자가 재생산 능력과 정상 염색체 유지 및 다양한 세포로의 분화 능력을 가지고 있는 세포를 말한다. 1960년대에 캐나다 Ontario Cancer Institute의 Ernest A. McCulloch와 James E. Till에 의해 발견된 이후, 특히 신체 210여개의 장기를 구성하는 조직의 어떠한 세포로도 분화할 수 있다는 만능(Totipotent) 잠재력으로 인해 인체의 마스터 세포(Master cell)로 알려져 있다. 이러한 줄기세포는 이에 제한은 없으나, 구체적인 예로 유래에 따라 배아줄기세포, 성체줄기세포, 제대혈 줄기세포, 중간엽 줄기세포 또는 인간 지방조직 유래 줄기세포일 수 있다. 보다 구체적으로는 중간엽 줄기세포이거나, 보다 더 구체적으로는 지방조직 유래 중간엽 줄기세포일 수 있다.

본 발명에서 용어, "동물"은 인간 및 영장류들뿐만 아니라 소, 돼지, 양, 말, 개, 쥐, 래트 또는 고양이 등의 가축을 포함하며, 구체적으로는 인간이다.

본 발명에서 용어, "배아줄기세포(Embryonic Stem Cell, ESC)"는 배아의 초기 발생 단계 중 하나인 배반포(blastocyst) 단계의 내부세포괴(inner cell mass,ICM)에서 유래하는 줄기세포로, 수정된 후 4~5일 정도 된 상태로, 50~150 여개의 세포들을 가지고 있으며, 이 세포들은 더 많은 줄기세포로 분열하거나 삼배엽 세포로 분화할 수 있는 만능성(pluripotent) 분화 능력을 가진 줄기세포들이다.

본 발명에서 용어, "제대혈 줄기세포"는 태반과 태아의 제대로부터 나온 혈액에 존재하는 줄기세포를 말하며, 골수 유래 줄기세포에 비해 증식이 더 강한 특성이 있다.

본 발명에서 용어, "중간엽 줄기세포"는 근육, 뼈, 지방 등의 중간엽 조직으로 분화되는 중간엽 줄기세포로 골수에 존재하며 신경, 피부와 같은 세포로 분화될 수 있는 능력을 가진 성체 줄기세포(Adult stem cell, AS) 중 하나를 말한다. 이러한 성체 줄기세포는 지속적인 세포 교체를 반복하는 기관에서 발견되며, 이러한 기관들에는 피부의 표피층, 소장의 내막, 골수, 뇌, 힘줄 등이 있다.

본 발명에서 용어, "지방조직 유래 줄기세포"는 지방조직에 분포하는 다분화성을 지닌 세포를 말한다. 이들은 골수 중간엽줄기세포와 동등한 수준의 분화 잠재력을 가지고 있으며, 콜로니 형성능과 세포 배양에서의 증식능 유지에 골수 중간엽 줄기세포 보다 우수한 것으로 보고되어 있다. 지방조직 유래 줄기세포는 N-acetyl-L-cystein, ascorbic acid-2-phosphate와 같은 항산화제가 첨가되고, 칼슘 농도가 낮을 때 성장률과 세포주기가 증가된다. 또한 지방조직 유래 줄기세포의 증식은 FGF-2(fibroblast growth factor)에 의해 자극받을 수 있고, 지방세포 유래 줄기세포가 혈관 내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor, HGF), 인슐린 유사 성장 인자(insulin like growth factor, IGF)와 같은 잠재적 성장 인자들을 분비하는 것으로 알려져 있다. 지방조직 유래 줄기세포는 골수나 제대혈에서 분리한 줄기세포와는 다르게 여러 번 반복해서 채취가 가능하며 골수처럼 채취할 때 환자에게 고통을 주지도 않는 장점이 있고, 대부분 자가 유래(autologous)이기 때문에 면역학적 거부반응이 없다는 장점을 가진다. 또한, 골수 유래 중간엽 줄기세포에 비해 배양이 용이하며, 골수에 비해 분리되는 중간엽 줄기세포의 양이 100~1000배나 더 많고, 자가 재생(self-renewal) 능력 및 다분화성(multipotent) 능력도 뛰어난 것으로 알려져 있다.

본 발명에서 용어, "지방세포로의 분화"는 동물, 구체적으로는 포유동물의 지방전구세포 또는 줄기세포가 지방세포로 분화하는 것을 의미한다. 본 발명에서 용어, "분화 유도용 조성물"은 초기 단계의 세포가 각 조직으로서의 특성을 갖게 되는 과정을 유도할 수 있는 조성물을 의미하며, 본 발명의 목적상 상기 지방전구세포 또는 줄기세포를 지방세포로 분화 유도할 수 있는 조성물을 의미한다. 구체적으로는, 상기 분화유도용 조성물은 C/ebp α의 발현을 촉진하여 지방세포의 분화를 유도할 수 있다.

본 발명에서 용어, "C/ebp α(CCAAT-enhancer0binding protein α)"는 C/EBPs(CCAAT-enhancer0binding proteins)에 속한 단백질로 전사인자이다. 상기 단백질은 그들의 프로모터와 결합함으로써 특정 유전자의 발현을 촉진한다고 알려져 있다. 본 발명에서는 상기 C/ebp α의 발현량을 측정함으로써 지방 조직 유래 줄기세포가 지방세포 분화가 유도되는지에 대해 확인하는 지방세포 분화 마커로 사용할 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 테프레논을 첨가한 다음 지방조직 유래 줄기세포의 지방세포로의 분화를 유도한 경우에는 첨가하지 않은 경우보다 지방세포의 분화가 더 효과적으로 일어남을 확인하였으며, 또한, 지방 세포 분화를 측정하는 마커인 C/ebp α의 발현을 촉진하여, 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화 촉진 효과가 우수함을 확인하였다(도 1 내지 3). 이러한 결과는 본 발명의 테프레논 화합물을 포함하는 조성물이 지방세포 분화 조절 기능을 가지고 있어, 지방 조직 퇴축으로 인한 부피 감소와 기능 저하로 유발되는 현대인들의 미적, 건강적 문제를 개선할 수 있는 새로운 가능성을 제시하는 결과이다.

다른 하나의 실시 양태로서, 본 발명은 테프레논 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 구체적으로, 본 발명은 테프레논 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전용, 또는 피부재생용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 용어, "테프레논"은 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에 있어서, "리포필링(lipofilling) 또는 지방충전"이란 피부 내의 지방조직이 퇴축되어 지방 조직의 부피가 저하된 정도를 완화, 개선 또는 충전시켜주는 것을 의미하는 것으로, 지방이 충전됨으로써 피부의 볼륨이 개선되는 것을 의미한다.

본 발명에서 용어, "피부재생"이란 심하게 손상된 피부가 원래의 기능을 회복하도록 하는 것을 의미하고, 이에 제한된 것은 아니나, 피부 재생은 피부가 쳐지거나 늘어지는 정도를 완화시켜주거나, 피부 지방충전 또는 지방 조직 부피 저하로 인하여 감소된 피부 탄력과 강도 하락으로 인한 구조적인 붕괴를 지방을 충전함으로써 피부 탄력이 유지되는 것을 포함할 수 있다. 또한, 그 외에도 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는, 테프레논 화합물이 지방분화의 핵심 조절자인 C/ebp α의 발현을 촉진하여, 지방조직 유래 줄기세포, 보다 구체적으로는 지방조직 유래 중간엽줄기세포의 성숙한 지방세포로의 분화를 유도하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 줄기세포를 성숙한 지방세포로의 분화를 유도함으로써, 피부 지방조직의 부피가 저하된 정도를 완화, 개선 또는 충전시킬 수 있음을 시사하는 것이므로, 본 발명의 테프레논 화합물을 포함하는 화장료 조성물이 리포필링 또는 지방충전 용도로 사용될 수 있음을 나타내는 것이다.

또한, 상기 결과는 퇴축된 지방조직의 부피를 완화 또는 개선시킴으로써, 피부의 탄력 및 주름을 증진 또는 개선시키며, 더 나아가 손상된 피부가 원래의 기능을 회복할 수 있도록 도울 수 있음을 시사하는 것이므로, 본 발명의 테프레논화합물을 포함하는 화장료 조성물이 피부재생 용도로 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

상기 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한된 것은 아니다.

또한, 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.

상기 화장료 조성물의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알콜, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.

다른 구체적인 하나의 실시 양태로서, 본 발명의 테프레논 화합물을 포함하는 조성물은 식품 조성물로 사용할 수 있다.

상기 식품 조성물은 테프레논 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전용, 또는 피부재생용일 수 있다.

상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 식품 조성물에 포함된 테프레논 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염은 테프레논을 포함하는 동식물, 이의 추출물, 이의 분획물 또는 이의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.

상기 본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 상기 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 상기 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

상기 본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다. 아울러, 상기 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함한다.

다른 구체적인 하나의 실시 양태로서, 본 발명의 상기 테프레논을 포함하는 조성물은 의약외품 조성물로 사용할 수 있다.

또한, 구체적으로, 상기 의약외품 조성물은 상기 테프레논 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전용, 또는 피부재생용 의약외품 조성물을 제공할 수 있다.

상기 의약외품 조성물에는 상기 성분 외에 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 해하지 않는 한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

상기 의약외품 조성물의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제의 대표적인 예로는, 락토즈, 덱스트로스, 슈크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 글리세린, 아카시아 고무, 알지네이트, 칼슘포스페이트, 칼슘카보네이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 식물성 오일, 주사가능한 에스테르, 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우리지 등을 들 수 있다.

또한, 상기 의약외품 조성물의 테프레논을 의약외품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생 성분을 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생 성분을 포함하게 되면 본 발명의 의약외품 조성물의 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생 개선 효과는 더욱 증가될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.

상기 본 발명의 의약외품 조성물은 소독 청결제, 샤워폼, 연고액, 물티슈, 코팅제 등을 예시할 수 있으나 이에 제한되는 것이 아니며, 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 적절히 선택될 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 테프레논은 개체의 피부에 도포하는 단계를 포함하는, 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생 방법에 사용될 수 있다. 상기 개체는 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물을 제한 없이 포함한다.

또 다른 하나의 실시 양태로서, 본 발명은 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 피부 외용제를 제공한다.

또한, 구체적으로, 본 발명은 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 리포필링 또는 지방충전용, 또는 피부 재생용 피부 외용제를 제공할 수 있다.

본 발명에서 용어, "테프레논", "리포필링 또는 지방충전용", 및 "피부 재생용"은 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서 용어, "외용제"는 외용으로 제공되는 제제로 외용산제, 외용정제, 외용액제, 연고제, 경고제, 좌제 등이 있다. 외용제제란 아연화(亞鉛華)전분 등, 피부점막의 미란, 궤양 등에 산포하는 것을 의미하고, 외용정제는 용해정 또는 질정을 의미하며, 외용액제는 물, 에탄올, 유류 등을 용매로 하는 액상제제이고, 양치질, 습포, 세척, 점안, 점비(点鼻) 등에 사용한다. 또한, 연고제는 피부에 바르는 적당한 조도의 반고형제, 경고는 상온고형, 체온으로 연화하는 피부적용제이고, 좌제는 항문, 질, 요도에 적용하는 제제이다.

상기 "피부 외용제"는 외용제 중에서도 피부 외용에 작용하는 제제를 의미하는 것으로 본 발명에서는 상기 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제를 의미한다. 구체적으로, 피부 외용제에는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 의약품 또는 의약외품으로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또 다른 하나의 실시 양태로서, 본 발명은 (a) 줄기세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계의 줄기세포에 테프레논 화합물을 포함하는 조성물을 첨가하는 단계를 포함하는, 줄기세포에서 지방세포로 분화 유도하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에서 용어, "테프레논", "줄기세포" 및 "분화유도"는 상기에서 설명한 바와 같다.

상기 단계 (a)는 미분화세포인 줄기세포를 배양하는 단계로 당업계에 알려진 통상적인 배양방법에 따라 전분화능을 가진 미분화세포인 줄기세포를 배양할 수 있으며, 구체적으로 본 발명에서는 중간엽줄기세포, 보다 더 구체적으로는 지방조직 유래 중간엽줄기세포일 수 있다.

상기 단계 (b)는 상기 단계 (a)에서 배양된 줄기세포에 본 발명의 에테프레논을 포함하는 조성물을 처리하여 지방세포로의 분화를 유도하는 단계이다. 분화를 유도하기 위해 배양 배지에 첨가되는 사이토카인은 당업계에 알려진 지방세포 분화용 사이토카인을 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있으며, 분화를 유도하기 위한 유효농도를 배지에 첨가하여 사용가능하며, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 본 발명의 지방세포 분화 유도 방법은 상기에서 설명한 바와 같이, C/ebp α의 발현을 촉진할 수 있으며, 본 발명에서 생산되는 줄기세포로부터 분화된 지방세포를 화장료, 식품, 의약외품, 또는 피부 외용제로 사용될 수 있으며, 특히, 상기 화장료, 식품, 의약외품, 또는 피부 외용제는 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전, 또는 피부재생을 위해 사용될 수 있다.

또한, 그 외에도 희귀난치병 및 지방세포 이식 관련 질환의 치료를 위한 세포 치료제 등의 세포 조성물로 이용될 수 있다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 테프레논은 지방분화의 핵심 조절자인 C/ebp α의 발현을 촉진함으로써 지방 조직 유래 줄기세포의 성숙한 지방세포로의 분화를 촉진하여, 지방 조직 퇴축으로 인한 부피 감소와 기능 저하로 유발되는 현대인들의 미적, 건강적 문제를 개선할 수 있는 새로운 가능성을 제시할 수 있다.

도 1은 인도메타신(Indomethacin), 덱사메타손(Dexamethason), 이소부틸메틸크산틴(isobutyl methyl xanthine, IBMX), 인슐린(Insulin)을 함유한 지방 세포 분화 조건 하에서, 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 후에 Oil Red O 염색 시약을 통해 지방을 염색한 후 현미경으로 관찰한 사진이다. 비분화군은 분화를 유도하지 않은 배양조건의 대조군, 무처리 대조군은 지방 세포 분화 배지만 첨가한 대조군, 양성대조군은 로시글리타존(Rosiglitazone)을 지방 세포 분화 배지에 첨가하여 실시한 것, 실험군은 지방세포 분화 배지에 테프레논을 첨가하여 실시한 것이다.
도 2는 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포에 테프레논을 함유한 지방 세포 분화 배지를 처리한 후 무처리 대조군 대비 상대적 지방분화 수치를 나타낸 그래프이다.
도 3은 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포에 테프레논을 함유한 지방 세포 분화 배지를 처리한 후, 대조군 대비 지방 세포 분화의 유전자 마커인 C/ebp α의 발현량을 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

참조예 1 : 테프레논 ( teprenone ) 물질 정보

[화학식 1]

물질명 : teprenone

CAS No. : 6809-52-5

분자식 : C₂₃H₃₈O

분자량 : 330.55

구입처 : Sigma-Aldrich社

실시예 1: 인간의 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포로의 분화 촉진 효능의 확인

인간 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포(human Adipose-derived stem cells, hADSCs)를 론자사(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하여 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 지방세포 분화는 론자사에서 권장하는 방법을 사용하여 달성하였다. 구체적으로, 지방 조직 유래 줄기세포 배양액에 인슐린 0.5㎍/ml, 덱사메타손 (Dexamethasone, DEXA) 0.5μM, 이소부틸메틸크산틴(isobutyl methyl xanthine, IBMX) 0.25mM, 인도메타신(Indomethacin) 50μM을 넣고 배양하여 줄기세포를 지방세포로 분화시켰으며, 지방세포 분화 유도 시에 동일 조건하에서 테프레논 10ppm을 배지에 첨가하였다. 양성 대조군으로는 로지글리타존(Rosiglitazone; ROSI) 0.5μM을 사용하여, IDX 배지와 같이 처치하였다. 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화를 시작한 지 14일 후, 세포 배양액을 제거하고, 10ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 10% 포르말린 용액을 사용하여 세포를 30분간 고정시켰다. 고정된 세포를 60% 이소프로판올 용액으로 1회 세척하고, 오일레드오(Oil Red O)를 60% 이소프로판올에 녹인 염색액으로 10분간 지방세포 내의 지질체를 염색하였다. 이어서, 현미경으로 관찰하였고, 결과를 도 1에 나타내었다.

그 결과 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 테프레논을 첨가한 다음 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 경우에는 미첨가시의 조건 하에서 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 경우보다 지방세포의 분화가 더 효과적으로 일어남을 확인할 수 있었다(도 1).

이러한 결과는 테프레논을 포함하는 조성물이 지방조직 유래 줄기세포를 지방세포로의 분화를 촉진함으로써, 지방분해 용도를 가지고 있음을 나타내는 것이며, 나아가 테프레논을 포함하는 조성물이 리포필링 또는 지방충전, 또는 피부재생용도로 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

실시예 2: 인간 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화 촉진 효과 정량적 확인

상기 실시예 1과 동일한 방법으로 지방 조직 유래 줄기세포로부터 지방세포의 분화를 유도한 후, 지방세포를 Nile Red 시약(AdipoRed™, Lonza)으로 염색하였다. 염색 방법은 론자사에서 권장하는 방법을 따랐다. 염색된 지방세포를 500nm의 485nm/575nm에서 형광을 측정하였으며, 그 결과를 표 1과 도 2에 나타내었다.

그 결과, 상기 표 1 및 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포에 테프레논을 처리한 결과, 테프레논을 미첨가한 조건 하에서 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화를 유도한 경우보다, 지방세포의 분화가 더 효과적으로 일어남을 확인할 수 있었다(표 1 및 도 2).

이러한 결과 또한, 테프레논을 포함하는 조성물이 지방조직 유래 줄기세포를 지방세포로의 분화를 촉진함으로써, 지방분해 용도를 가지고 있음을 나타내는 것이며, 나아가 테프레논을 포함하는 조성물이 리포필링 또는 지방충전, 또는 피부재생용도로 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

실시예 3: 인간 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 특이적 유전자 발현량 확인

상기 실시예 1과 동일한 방법으로 지방 조직 유래 줄기세포로부터 지방세포의 분화를 유도한 후, 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화 정도를 확인하기 위해 지방 세포 분화의 마커인 C/ebp α의 발현 정도를 평가하였다. 세포의 RNA를 분리하여 cDNA를 합성한 다음, Taqman 염색액으로 실시간-PCR을 수행하여 C/ebp α의 발현 정도를 측정하였다. 본 실험에서 RNA의 농도는 S16 리보솜 RNA로 표준화하였고, 그 결과는 표 2 및 도 3에 나타내었다.

그 결과, 표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 테프레논을 처리한 배지 조건은 C/ebp α의 발현을 촉진하여, 테프레논을 미첨가한 경우보다 지방 조직 유래 줄기세포의 지방세포 분화 촉진 효과가 우수함을 확인할 수 있었다(표 2 및 도 3).

이러한 결과는 테프레논을 포함하는 조성물이 지방조직 유래 줄기세포를 지방세포로의 분화를 촉진함으로써, 지방분해 용도를 가지고 있음을 나타내는 것이며, 나아가 테프레논을 포함하는 조성물이 리포필링 또는 지방충전, 또는 피부재생용도로 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (17)

1. 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 줄기세포는 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell, MSC)인 것인, 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 줄기세포는 인간 지방조직 유래 줄기세포인 것인, 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 C/ebp α의 발현을 촉진하는 것인, 조성물.
   
5. 테프레논 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 화장료 조성물.
   
6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전용인 것인, 화장료 조성물.
   
7. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 피부재생용인 것인, 화장료 조성물.
   
8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 리포필링 또는 지방충전, 또는 피부재생은 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화에 의한 것인, 화장료 조성물.
   
9. 제8항에 있어서, 상기 줄기세포는 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell, MSC)인 것인, 화장료 조성물.
   
10. 제8항에 있어서, 상기 줄기세포는 인간 지방조직 유래 줄기세포인 것인, 화장료 조성물.
    
11. 제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
    
12. 테프레논 화합물 또는 이의 허용 가능한 염을 포함하는 피부 외용제.
    
13. 제12항에 있어서, 상기 피부 외용제는 리포필링(lipofilling) 또는 지방충전용, 또는 피부재생용인 것인, 피부 외용제.
    
14. 제13항에 있어서, 상기 리포필링 또는 지방충전, 또는 피부재생은 지방전구세포 또는 줄기세포에서 지방세포로의 분화에 의한 것인, 피부 외용제.
    
15. (a) 줄기세포를 배양하는 단계; 및
    (b) 상기 (a) 단계의 줄기세포에 제1항의 조성물을 첨가하는 단계를 포함하는, 줄기세포에서 지방세포로의 분화 유도방법.
    
16. 제15항에 있어서, 상기 줄기세포는 중간엽줄기세포인 것인, 방법.
    
17. 제15항에 있어서, 상기 줄기세포는 인간 지방조직에서 유래된 것인, 방법.

Images