JP6200714B2 - 幹細胞由来成長因子産生促進剤 - Google Patents
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Description
(1) ロサ・アルバ・セミプレナ、ロサ・ウィクライアナ、及びロサ・フェティダから選ばれる少なくとも1種のバラ科バラ属植物の抽出物を有効成分として含有する、幹細胞由来成長因子産生促進剤。
(2) (1)に記載の幹細胞由来成長因子産生促進剤を含む、皮膚外用組成物。
(3) 皮膚外用組成物が医薬品または医薬部外品である、(2)に記載の皮膚外用組成物。
(4) 皮膚外用組成物が化粧品である、(2)に記載の皮膚外用組成物。
(5) ロサ・アルバ・セミプレナ、ロサ・ウィクライアナ、及びロサ・フェティダから選ばれる少なくとも1種のバラ科バラ属植物の抽出物の存在下で幹細胞を培養する工程を含む、幹細胞培養物の製造方法。
(6)幹細胞培養物から成長因子を単離する工程をさらに含む、(5)に記載の方法。
(7)(5)に記載の方法により得られる幹細胞培養物。
ロサ・アルバ・セミプレナの地上部の乾燥物25gに精製水500mLを加え、90〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してロサ・アルバ・セミプレナの熱水抽出物を1.5g得た。
ロサ・ウィクライアナの地上部の乾燥物25gに精製水500mLを加え、90〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してロサ・ウィクライアナの熱水抽出物を0.6g得た。
ロサ・フェティダの地上部の乾燥物25gに精製水500mLを加え、90〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してロサ・フェティダの熱水抽出物を2.1g得た。
ロサ・アルバ・セミプレナの地上部の乾燥物25gに50(v/v)%エタノール水溶液500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・アルバ・セミプレナの50%エタノール抽出物を1.4g得た。
ロサ・ウィクライアナの地上部の乾燥物25gに50(v/v)%エタノール水溶液500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・ウィクライアナの50%エタノール抽出物を0.7g得た。
ロサ・フェティダの地上部の乾燥物25gに50(v/v)%エタノール水溶液500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・フェティダの50%エタノール抽出物を1.8g得た。
ロサ・アルバ・セミプレナの地上部の乾燥物25gにエタノール500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・アルバ・セミプレナのエタノール抽出物を0.8g得た。
ロサ・ウィクライアナの地上部の乾燥物25gにエタノール500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・ウィクライアナのエタノール抽出物を0.4g得た。
ロサ・フェティダの地上部の乾燥物25gにエタノール500mLを加え、常温で3日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロサ・フェティダのエタノール抽出物を0.8g得た
間葉系幹細胞増殖培地(MF培地)(TOYOBO社製)を用いて培養したヒト成体幹細胞(皮下脂肪細胞由来)(DSファーマバイオメディカル社製)を6cmディッシュに1x106個播種し、評価試料としてロサ・アルバ・セミプレナ、ロサ・ウィクライアナ、またはロサ・フェティダの抽出物(製造例1〜9)を最終濃度が0.001%になるように添加し、3日間培養を続けた。培養3日後に、細胞を回収し、PBS(-)にて2回洗浄し、Trizol Reagent(Invitrogen社製)によって細胞からRNAを抽出した。その後、2−STEPリアルタイムPCRキット(Applied Biosystems社製)を用いて、RNAをcDNAに逆転写後、ABI7300(Applied Biosystems社製)により、下記成長因子(bFGF、IGF−1、TGF−β1、PDGFA及びVEGFA)増幅用プライマーセットを用いてリアルタイムPCR(95℃:15秒間、60℃:30秒間、40サイクル)を実施し、各遺伝子の遺伝子発現を確認した。その他の操作は定められた方法に従って実施した。
フォワードプライマー:TGGTATGTGGCACTGAAACGAA(配列番号1)
リバースプライマー:TTCTGCCCAGGTCCTGTTTT(配列番号2)
IGF−1用プライマーセット:
フォワードプライマー:AAGGAGGCTGGAGATGTATTGC(配列番号3)
リバースプライマー:CGGACAGAGCGAGCTGACTT(配列番号4)
TGF−β1用プライマーセット:
フォワードプライマー:CGCGTGCTAATGGTGGAAA(配列番号5)
リバースプライマー:ATGCTGTGTGTACTCTGCTTGAACTT(配列番号6)
PDGFA用プライマーセット:
フォワードプライマー:TCAGGAAGAAGCCAAAATTAAAAGA(配列番号7)
リバースプライマー:GCAGGCGCACTCCAAATG(配列番号8)
VEGFA用プライマーセット:
フォワードプライマー:CTCTCTCCCTGATCGGTGACA(配列番号9)
リバースプライマー:GGAGGGCAGAGCTGAGTGTT(配列番号10)
GAPDH用のプライマーセット:
フォワードプライマー:TGCACCACCAACTGCTTAGC(配列番号11)
リバースプライマー:TCTTCTGGGTGGCAGTGATG(配列番号12)
以下に示す処方例に従い、製造例1〜9で製造したロサ・アルバ・セミプレナ、ロサ・ウィクライアナ、またはロサ・フェティダの抽出物を配合したローション、クリームを常法により調製した。
処方 成分 配合量(部)
1 製造例1〜9のバラ科バラ属植物抽出物 0.05
2 1,3−ブチレングリコール 8.0
3 グリセリン 2.0
4 キサンタンガム 0.02
5 クエン酸 0.01
6 クエン酸ナトリウム 0.1
7 エタノール 5.0
8 パラオキシ安息香酸メチル 0.1
9 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.1
(40E.0.)
10 香料 0.1
11 精製水 84.52
処方 成分 配合量(部)
1 製造例1〜9のバラ科バラ属植物抽出物 0.03
2 スクワラン 5.5
3 オリーブ油 3.0
4 ステアリン酸 2.0
5 ミツロウ 2.0
6 ミリスチン酸オクチルドデシル 3.5
7 ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E. 3.0
0.)
8 ベヘニルアルコール 1.5
9 モノステアリン酸グリセリン 2.5
10 香料 0.1
11 パラオキシ安息香酸メチル 0.2
12 パラオキシ安息香酸エチル 0.05
13 1,3-ブチレングリコール 8.5
14 精製水 68.12
Claims (2)
- ロサ・アルバ・セミプレナ、ロサ・ウィクライアナ、及びロサ・フェティダから選ばれる少なくとも1種のバラ科バラ属植物の地上部の抽出物を有効成分として含有する、幹細胞由来成長因子遺伝子発現促進剤。
- ロサ・アルバ・セミプレナの地上部の抽出物を有効成分として含有する、幹細胞由来成長因子遺伝子発現促進用の皮膚外用組成物。
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