JP2014508160A - スキンクリーム - Google Patents
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Abstract
Description
発明の分野
本発明は、一般にスキンケア組成物に関し、より具体的には二次元培養において成長させた包皮由来の線維芽細胞によって調整される細胞培地を含む、スキンクリームを含む局所塗布用の薬用化粧品および医薬品に関する。
現在のところ、皮膚の老化の治療法はなく、皮膚の老化および/またはしわの治療は、一時的なものであって欠点および副作用がある。皮層に存在するコラーゲンおよび弾性タンパク質が失われることにより、時間とともに回復力および皮膚厚みの破壊が起こり、小じわおよびしわを引起し得る。顔のしわの治療に利用可能な最も一般的な外科的介入としては、顔のしわ取り、レーザ手術、スキンピール、およびボトックス(登録商標)などの注射療法がある。しかし、外科的方法は、有害な合併症を引起す恐れがあり、多くの場合痛みを伴い、時間が経つにつれて繰返さなければならない。非侵襲性の処置としては、α/βヒドロキシ、レチノイン酸、アルジルリンおよびビタミンからなる局所製剤がある。しかし、これらの方法はいずれも、しわを完全に無くすことはなく、複数回の、多くの場合高価な治療が必要である。いくつかの局所製剤は、皮膚に対する刺激物となり得て創傷治癒反応を引き出すが、加齢に関連した欠損の治療および/または予防に十分なタンパク質を、薄くなった皮膚にうまく補給しない。
本発明は、薬用化粧品を含む局所塗布用のスキンケア組成物、および、二次元培養において成長させた細胞によって調整される細胞培地を含むスキンクリームに関する。本発明は、また、皮膚疾患の治療のためのこのような組成物の使用方法についても開示する。
本発明の組成物、方法および方法論を説明する前に、記載の特定の組成物、方法および実験条件は変動し得るので本発明はこのような組成物、方法および条件に限定されないということを理解すべきである。また、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲のみに限定されるので、本明細書において使用される用語が特定の実施の形態のみを説明することを目的としており、限定的であることを意図したものではないということも理解すべきである。
皮膚の皮層は、皮膚厚み、弾力性および活力を維持するのに必要な構造要素を含む。加齢に伴って、これらのタンパク質の生成速度が遅くなり、皮膚のたるみおよびしわが生じる。成長因子、サイトカイン、ペプチド、構造的および細胞外マトリックスタンパク質および前駆体などを含む馴化培地への細胞外タンパク質の分泌は、加齢に関連した皮膚活力の喪失の治療および/または予防を含む多種多様な分野で用いられる生成物の調製に新たな可能性をもたらす。成長因子は、成長を促進させ、組織の構造および機能を維持するための自己分泌経路を高め、創傷治癒を促進させる重要な役割を果たすことが知られている。細胞サイトカインおよび成長因子は、細胞増殖、接着、形態的外観、分化、移動、炎症反応、血管形成および細胞死を含むいくつかの不可欠な細胞過程に関与する。調査によって、細胞に対する低酸素ストレスおよび外傷が、とりわけ血小板由来成長因子(PDGF)、血管内皮成長因子(VEGF)、線維芽細胞成長因子1および2(FGF)、インスリン様成長因子1および2(IGF)および形質転換成長因子‐β(TGF‐β)を含む成長因子に対応するmRNAおよびタンパク質のレベルの増加を含む反応を引起すことが実証された。
予め調整された細胞培地は、培養されている細胞の栄養必要量に十分に対処するいかなる細胞培地であってもよい。細胞培地の例としては、Methods For Preparation of Media, Supplements and Substrate For Serum-Free Animal Cell Culture Alan R. Liss, New York (1984)およびCell & Tissue Culture: Laboratory Procedures, John Wiley & Sons Ltd., Chichester, England 1996(両方とも引用によって全文が本明細書に援用される)に見られるものを含む、ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)、ハムのF12、RPMI1640、イスコブ培地、マッコイ培地、および当業者にとって容易に明らかな他の培地製剤があるが、それらに限定されない。一実施の形態においては、フェノールレッドを持たないDMEMが細胞培地として用いられる。培地は、所望の細胞または組織培養物をサポートするのに必要な任意の成分が補充されてもよい。関連の局面においては、培地は、抗生物質‐抗真菌剤およびL‐グルタミン酸が補充される。一実施の形態においては、抗生物質‐抗真菌剤およびL‐グルタミン酸は各々培地の1%を構成し、抗生物質‐抗真菌剤はペニシリン、硫酸ストレプトマイシンおよびアムホテリシンBを含む。さらに、アルブミン、グロブリンの複合溶液であるウシ血清などの血清、成長促進剤および成長阻害剤が必要に応じて添加されてもよい。血清は、病原体フリーであるべきであり、マイコプラズマ細菌汚染、真菌汚染およびウイルス汚染を注意深くスクリーニングすべきである。また、血清は、一般に、アメリカ合衆国から得るべきであり、土着の家畜が伝染性物質を媒介する国々からは得るべきでない。培地へのホルモン添加は、望ましい場合もあればそうでない場合もある。一実施の形態においては、ウシ胎仔血清が細胞培地に添加される。関連の局面においては、ウシ胎仔血清は培地の約5〜20%を構成する。
皮膚の老化の影響を低減して顔のしわを無くすための新規なアプローチが、米国特許第6,372,494号(引用によって全文が本明細書に援用される)においてノートン等によって提案された。ここで、出願人は、ノートンの方法を改良して、不可欠な構造タンパク質および関連の成長因子を皮膚に直接送達することによって発生期の皮膚の自然環境を再構築する。これは、高度に制御された単一層(二次元)培養条件下で独立して成長させた1つ以上の細胞型からの成長因子強化馴化培地を、例えばクリーム、軟膏、ゲル、ローション、スプレー、セラムなどといった調合薬用化粧調製品と組合わせることによって達成され得る。馴化培地に加えて、薬用化粧調製品は、好ましくは当該技術分野において有効に用いられるさまざまな他の有用な活性成分および不活性成分のうちの1つ以上を含む。
特定の実施の形態においては、成長因子強化馴化培地は、しわ、眉間のしわ、瘢痕を減少または無くし、他の皮膚状態を修復するために、クリーム、ローション、セラムまたはヒドロゲルなどの局所製剤(以下に詳述)の形態で用いられてもよい。他の実施の形態においては、ボトックス(登録商標)の用途と類似の化粧品用途において、成長因子強化馴化培地を含む注射用製剤が用いられてもよい。実際、成長因子強化馴化培地は、皮膚の老化の治療を向上させるために、他の注射用薬剤と組合わせて用いられてもよい。他の実施の形態においては、馴化培地は、また、アイシャドー、ケーキ状おしろい、コンパクトまたは他の化粧品に添加されてもよい。他の好ましい実施の形態においては、本発明の組成物は、頭部およびまつげの毛髪成長を刺激するための局所塗布用に調合されてもよい。
また、添加され得る生成物としては、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、ステロイド、鎮痛剤、抗がん剤、試験研究中の薬、または馴化培地内の因子との補完的もしくは相乗的組合せをもたらすであろう任意の化合物があるが、それらに限定されない。
・上皮成長因子(EGF):間葉細胞、グリア細胞および上皮細胞の増殖を促進させる
・血小板由来成長因子(PDGF):結合組織、グリア細胞および平滑筋細胞の増殖を促進させる
・線維芽細胞成長因子(FGF):多くの細胞の増殖を促進させ、いくつかの幹細胞を抑制し、初期胚の中に生じるように中胚葉を誘導する
・形質転換成長因子‐β(TGF‐β):
・形質転換成長因子‐α‐(TGF‐α):正常な創傷治癒にとって重要であり得る
・神経成長因子(NGF):神経突起の伸長および神経細胞の生存を促進させる
・エリスロポエチン(Epo):赤血球の増殖および分化を促進させる
・インスリン様成長因子‐I(IGF‐I):多くの細胞型の増殖を促進させる、および
・インスリン様成長因子‐II(IGF‐II):主に胎児由来の多くの細胞型の増殖を促進させる。
・IL1‐αおよびβ:APCおよびT細胞の副刺激、炎症
・IL‐2:B細胞および活性化T細胞の増殖、NK機能
・IL‐3:造血前駆細胞の成長
・IL‐4:B細胞の増殖、好酸球および肥満細胞の成長および機能、B細胞でのIgEおよびクラスII MHCの発現、モノカイン生成の抑制
・IL‐5:好酸球の成長および機能
・IL‐6:急性期反応、B細胞の増殖、血小板産生、T細胞でのM‐1およびTNFとの相乗作用
・IL‐7:TおよびBリンパ球産生
・IL‐8:好中球およびT細胞のための化学誘導性物質
・IL‐9:造血効果および胸腺細胞増殖効果
・IL‐10:サイトカイン生成の抑制、B細胞の増殖および抗体の生成の促進、細胞性免疫の抑制、肥満細胞の成長
・IL‐11:相乗的な造血効果および血小板産生効果
・IL‐12:NK細胞の増殖、INF‐γの生成、細胞媒介免疫機能の促進、および
・IL‐13:IL‐4様作用。
・INF‐αおよびINF‐β:抗ウイルス効果、すべての体細胞でのクラスI MHCの誘導、NK細胞およびマクロファージの活性化
・INF‐γ:すべての体細胞でのクラスI MHCの誘導、APCおよび体細胞でのクラスII MHCの誘導、マクロファージ、好中球、NK細胞の活性化、細胞媒介免疫の促進、抗ウイルス効果
・腫瘍壊死因子‐α(TNF‐α):他の自己分泌成長因子の発現の誘導、成長因子に対する細胞反応性の増大、増殖につながるシグナル伝達経路の誘導
・腫瘍壊死因子‐β(TNF‐β):(リンホトキシンとも呼ばれる)いくつかの異なる細胞型を殺すことができる能力および他の細胞型において末端分化を誘導することができる能力。TNF‐βに対する1つの重要な非増殖反応は、血管内皮細胞の表面に存在するリポタンパク質リパーゼの抑制である
・コロニー刺激因子(CSF):成人の骨髄の特定の多能性幹細胞の増殖の刺激。顆粒球マクロファージ‐CSF、EpoおよびIL‐3もCSFであると考えられる。
馴化培地は、手術、注射剤、シリコーンまたは他の製品に加えてまたはそれらの代替物として、老化に関連するしわ、眉間のしわ、瘢痕および他の皮膚状態を予防、低減および/または無くすように構築されてもよい。皮膚の老化は、コラーゲン合成の減少およびコラーゲン分解の増加を特徴とする。いくつかの成長因子はコラーゲンの生成を刺激する。馴化培地は、例えばPDGF、IGF、FGF、TGF、EGF、VEGF、HGF、IL‐6、G‐SCFおよびKGFなどの成長因子および炎症メディエータ、ならびに、I型コラーゲンおよびIII型コラーゲン、フィブロネクチン、テラシン、グリコサミノグリカン、ベルシカン、デコリンおよびさまざまな他の分泌されたヒト皮膚マトリックスタンパク質などの細胞外マトリックスタンパク質を含み、これらは身体的異常および表面的な欠損の修復に有用であり得る。馴化培地に加えて、コラーゲン合成を促進させるKTTKS(配列番号:1)およびPal‐KTTKS(配列番号:2)、アルジルリン、筋肉によって引起される皮膚のしわを抑制する合成ペプチドなどのペプチドも、局所製剤における他の活性薬剤として含まれていてもよい。
・植物油、鉱油、シアバター、ココアバター、ワセリン、コレステロール、シリコーンまたは動物油(エミュー、ミンクおよびラノリンを含む)の形態の皮膚軟化剤。これらの潤滑成分は、水分の保持を助けながら皮膚を軟化させて滑らかにする。いくつかの実施の形態においては、ホホバ、スクアレンおよびラノリンが、記載の皮膚軟化剤の代表例である。なぜなら、それらは、皮脂(皮膚の天然の保湿剤)と最大の類似性を有しており、最も毛穴を詰まらせず(毛穴詰まり)、皮膚の生化学と最も適合するためである。トリグリセリド、パルミチン酸塩、ミリスチン酸塩およびステアリン酸塩のような増粘剤は、ろう状であるが、保湿製剤の基本ベースおよび質感にとって必要である。
・約0.01〜100ng/mL、約0.1〜10ng/mLまたは約1〜3ng/mLのTGF β‐1
・約0.1〜1000pg/mL、約1〜1000pg/mLまたは約100〜160pg/mLのTGF β‐2
・約0.1〜1000pg/mL、約1〜1000pg/mLまたは約50〜100pg/mLのTGF β‐3
・約0.1〜1000pg/mL、約1〜1000pg/mLまたは約60pg/mLのIL‐3
・約0.1〜1000ng/mL、約1〜100ng/mLまたは約11ng/mLのIL‐6
・約0.1〜1000pg/mL、約1〜100pg/mLまたは約〜50pg/mLのIL‐7
・約0.1〜1000ng/mL、約1〜100ng/mLまたは約4〜10ng/mLのIL‐8。
1.ヒト包皮線維芽細胞の単離
I.材料
・100mm滅菌組織培養皿
・150mm滅菌組織培養皿
・滅菌した手術用メス刃
・滅菌したフルカーブ鉗子
・滅菌したハーフカーブはさみ
・50ml遠心分離管
・1ml、5mlおよび10mlピペット先端部
・ピペット
・ダルベッコ変法イーグル培地(DME/高修飾)
・ウシ胎仔血清(FBS)
・抗生物質‐抗真菌剤(ABAM)
・L‐グルタミン(L‐GLU)
・リン酸緩衝食塩水(PBS)
・トリプシン‐EDTA 1X(0.25%トリプシン 1mM EDTA‐4Na。CaおよびMg++を持たない1リットルのHBSSにおいて2.5gのトリプシン(250)および0.38gのEDTA‐4Naと調製する)
輸送培地:
DMEMの500mlボトルに添加
FBS 50ml
ABAM 5ml
成長培地(GM):
DMEMの500mlボトルに添加:最終濃度
FBS 50ml 10%
ABAM 5ml 1%
L‐glu 5ml 292μg/ml
II.単離技術
陰核切除後の新生児から包皮を得たが、これは新生児の親が提供したものである。5ml輸送培地を用いて室温で滅菌遠心分離管に試料を輸送した。滅菌ピペットを用いて当該試料を管から取出し、100mm組織培養皿に配置した。PBS‐CMF/1%ABAMを用いて細胞を3回洗浄した。湾曲したはさみおよび鉗子を用いて皮下脂肪組織をトリミングした。
このプロトコルは、Nunc MicroHexマイクロキャリア(ナルジェ・ヌンク・インターナショナル社(デンマーク))を有するウェーブバイオリアクタを使用するためのものである。Nunc MicroHexは、辺長が125ミクロンの二次元の平坦な六角形ポリスチレンキャリアである。
空気および10%CO2を用いて堅くなるまでセルバッグ(Cellbag)(ウェーブ・バイオテック社)を膨らませた。培地を添加し、吸込および排出フィルタを固定した。次いで、1分当たりの揺動(rpm)が約15回かつ約7°の角度でセルバッグを揺動させた。温度およびpHは平衡を保っていた。当初の体積は最終培養物体積の約50%であった。次いで、マイクロキャリアおよび細胞懸濁液を添加した。一般に、当初の細胞密度が1mL当たり約0.1〜0.5×106の細胞を添加した。吸込および排出フィルタを固定したままにして、約20rpmの速度かつ約7°の角度で揺動を続けた。数時間または一晩にわたって接着プロセスを続けた。
一旦細胞を接着させると、培地の残量を添加して培養物を最終体積にした。細胞を成長させながら、細胞密度、生存率および代謝をモニタリングした。酸素レベルをモニタリングし、培養物の酸素要求に応答してrpmおよび角度を調整した。十分な酸素を維持してマイクロキャリア/細胞を懸濁させたままにしながら低rpmおよび角度を維持することが最も良い。細胞が成長し続けると、培地は最終的に使用済みになった。揺動を停止させることによって培地交換が達成された。台を前方に傾けると、数分以内にマイクロキャリア/細胞複合体がセルバッグの底縁に沈殿した。次いで、マイクロキャリアをいずれも除去することなく培地を汲み出した。この態様で培養物体積の90%までを除去した。予め温めた未使用の培地を添加し、以前の設定でセルバッグの揺動を再開した。
揺動速度は、培養物体積、細胞密度、およびセルバッグサイズ細胞または培養フラスコまたはペトリ皿に左右された。2Lおよび10Lのセルバッグでは、速度は最初は約15〜20rpmに設定した。細胞密度が大きくなるにつれて、速度を約20〜25rpmに上げた。
2Lおよび10Lのセルバッグでは、6°の初期角度で十分であった。最大細胞密度が達成されると、約7〜8°の角度が好ましかった。
セルバッグを堅く膨らんだ状態に保った。セルバッグが膨らんでいる間は、1分当たり約0.5L(lpm)までの流量を用いた。一旦力強い成長を観察すると、2Lのバッグでは流量を約0.1lpmに設定し、10Lのセルバッグでは流量を約0.2lpmに設定した。
哺乳類細胞の一般的な動作温度は、36〜37℃である。
pH制御は極めて重要である。ウェーブバイオリアクタの気体輸送容量が高いために、pHは急速にドリフトする(drift)可能性がある。以下の手順が用いられた。
c.pH、グルコース濃度および細胞密度をモニタリングした。一旦pHおよびグルコースレベルが降下し始めると、ヘッドスペースを通る連続空気流を5%CO2/空気に切替えた。これは24〜60時間以内に行われた。一旦力強い細胞成長が起こると、培地pHは上方にドリフトせず、スイープガス内のCO2濃度がpHを制御するように機能した。
e.使用済みの培地を交換する際には注意を払った。pHをモニタリングし、細胞が未使用の培地に順応するにつれてCO2濃度を調整した。
Nuncマイクロキャリア上での細胞株の一般的なスケールアップは、以下の通り行われる。
製剤
細胞が約80〜95%の密集度に達した時に、以下に記載されているように馴化培地をさまざまな組成物に添加した。
スキンコンディショニング剤(すなわち馴化培地)濃度を変化させる(すなわち、42%、30%および20%(wt%))という条件で、上述のようにスキンクリーム組成物(AQスキンソリューションアクティブセラム)を調合した。人間の被験者の肌に当該組成物を局所投与し、スタッフRNまたはスタッフ医師によって物理的評価が行われた。
25歳〜72歳の20人の被験者(女性13人、男性7人)を用いて調査を行なった。有志が包括的インフォームドコンセント文書にサインした。
図2に示されるように、AQ製品は、TNS、BIO‐GELおよびReVive製品と比較して、各々の時点で少なくとも2倍優れた結果をもたらすことが分かった。図3は、肌の質感、しわ、小じわ、堅さおよび全体的な改善の平均改善率スコアを示す。
スキンクリーム組成物(AQスキンソリューションアクティブセラム)を上述のように調合した。人間の被験者の肌に当該組成物を局所投与し、スタッフRNまたはスタッフ医師によって物理的評価が行われた。
25歳〜72歳の20人の被験者(女性13人、男性7人)を用いて調査を行なった。有志が包括的インフォームドコンセント文書にサインした。
治療前および治療後の図(すなわち図9および図10)に示されるように、AQ製品は被験者の肌から座瘡瘢痕を減らすか、または完全に取除いた。
この調査の目標は、アンドロゲン性脱毛症(AGA)の治療において自然発生的な成長因子、特にAQアクティブヘアセラムの成分を試験することであった。
25歳〜65歳の健康な、軽度から中程度のAGAを患う72人の被験者(男性および女性)がこの調査に含まれていた。有志が包括的インフォームドコンセント文書にサインした。被験者は、15週間にわたってAQアクティブヘアセラムによる治療を受けた。
ベースライン時に効能測定を行ない、次いで最終来院時に効能測定を行なった。測定は、1)調査スタッフによる頭髪成長の評価ならびに2)治療効果および外観に対する満足感の患者による自己評価であった。
この分析において調査被験者によって評価されたパラメータは、以下の質問であった。すなわち、a)脱毛箇所のサイズ、b)頭髪の外観、c)頭髪の成長、d)頭髪喪失の速度およびe)頭髪の外観に対する満足感であった。他の尺度としては、頭髪の太さ、長さ、強度(張力)、頭髪喪失対策、頭皮の若返りおよび全体的な成長があった。
この調査は、頭髪喪失の治療における自然発生的な成長因子の有効性を確立し、ヘアセラムが正常な成体哺乳類において完全に新しい毛包を発生させることを実証している。
調査のために選ばれた被験者
30歳〜78歳の全体的に健康な、授乳中または妊娠中でない81人の男性および女性であって、両眼の周囲を含む顔に確認できる小じわおよび深いしわがあり、少なくとも辛うじて見える暗い領域があり、少なくともわずかに粗く滑らかでない下まぶたを持つ男性および女性であった。有志が包括的インフォームドコンセント文書にサインした。
顔面領域または眼の下に影響を及ぼす皮膚疾患を患っている最中の被験者またはそのような皮膚疾患の履歴がある被験者は含まれなかった。また、被験者は、皮膚状態を向上させてしわの減少を助け得る製品を用いる現在使用中の療法を止めるよう求められた。化粧および日焼け止めは許可された。6ヶ月以内に顔面皮膚に影響を及ぼす美容整形を受けた被験者も調査から除外した。
6週間(42日間)にわたって、眼窩周囲皮膚領域を含む顔面皮膚にAQアクティブセラムを朝と夜塗布した。被験者は、AQアクティブセラムの毎回の塗布を記録に残すよう求められた。
被験者は以下によって評価された:
1.臨床的評価:
・標準的な条件下での臨床写真
・VISIA‐CR画像化(カンフィールド・サイエンティフィック社(ニュージャージー州フェアフィールド))
・表1に示される1ポイント〜10ポイント視覚スコアリングシステムを用いた、眼窩周囲皮膚を含む皮膚の質の臨床的評価
2.自己評価:
・与えられたアンケートを用いた、被験者による眼窩周囲皮膚を含む顔面皮膚の質。
登録した81人の被験者のうち、平均して52±9歳(30歳〜78歳)の79人の被験者が調査を完了した。製品とは無関係の理由で、2人の被験者が調査から脱落した。臨床的評価(表1)および被験者アンケートによって生成されたスコアを用いて結果を表にした。
1.肌タイプおよび皮膚損傷
2.年齢および性別
3.改善の程度。
当該調査によって、酸化防止剤因子と組合わせられた、ヒト成長因子とサイトカインとの独占所有権のある混合物を含むスキンセラム(AQアクティブセラム)が安全であり、軽度から中程度の皮膚損傷/老化の場合に顔面皮膚の若返りに有効であることが実証された。なぜ大多数(98%)がAQアクティブセラムの定期的使用を続けるかということは、セラムの効能、デリケートな眼窩周囲皮膚領域を含む優れた耐性、ならびに製品の使いやすさおよび心地よい感覚的特性によって説明される。
Claims (35)
- 培養された実質的に均質な包皮由来の線維芽細胞からの馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物を含む、皮膚欠損を治療および/または予防するためのスキンクリームであって、前記馴化培地は、栄養培地への少なくとも1つの成長因子の分泌を促進させるように適合された条件下で二次元培養において前記細胞を有する当該栄養培地を培養することによって生成され、前記少なくとも1つの成長因子は、当該皮膚欠損を治療または予防するのに十分な量で前記馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物に存在している、スキンクリーム。
- 当該条件は、二次元ポリスチレンマイクロキャリアによる前記細胞の培養を含む、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 前記細胞は、ATCC受入番号PTA‐11681と表わされる細胞株からのものである、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 前記細胞は、SV40ラージT抗原で形質転換される、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 前記細胞は、ATCC受入番号PTA‐11680と表わされる細胞株からのものである、請求項4に記載のスキンクリーム。
- 当該スキンクリームは、1つ以上の溶媒、ベース溶媒、1つ以上の植物成分および1つ以上の皮膚軟化剤をさらに含む、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 当該少なくとも1つの成長因子は、EGF、PDGF、FGF、TGF‐β、TGF‐α、NGF、Epo、IGF‐I、IGF‐II、IL‐1‐α、IL‐1‐β、IL‐2、IL‐3、IL‐4、IL‐5、IL‐6、IL‐7、IL‐8、IL‐9、IL‐10、IL‐11、IL‐12、IL‐13、INF‐α、INF‐β、INF‐γ、TNF‐α、TNF‐β、GM‐CSFおよびM‐CSF、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 当該組合せは、TGF β‐1、TGF β‐2、TGF β‐3、IL‐3、IL‐6、IL‐7およびIL‐8を含み、前記馴化培地は、少なくとも約5〜20%(wt%)の濃度で存在する、請求項7に記載のスキンクリーム。
- 当該組合せは、約1〜3ng/mLのTGF β‐1、約100〜160pg/mLのTGF β‐2、約50〜100pg/mLのTGF β‐3、約60pg/mLのIL‐3、約11pg/mLのIL‐6、約50pg/mLのIL‐7および約4〜10pg/mLのIL‐8を含み、前記馴化培地は、約30〜42%(wt%)で存在する、請求項8に記載のスキンクリーム。
- 増粘剤をさらに含む、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 前記増粘剤は、ポリエチレングリコール(PEG)、植物ベースの脂肪アルコールおよび共重合体の組合せを含む、請求項10に記載のスキンクリーム。
- 前記植物ベースの脂肪アルコールは、デシルアルコール、オクチル‐デシルアルコール、ラウリルアルコール、ラウリル‐ミリスチルアルコール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール、セチルアルコールおよびステアリルアルコールからなる群から選択される、請求項11に記載のスキンクリーム。
- 当該増粘剤は、PEG‐150、デシルアルコールおよびSMDI共重合体を含む、請求項11に記載のスキンクリーム。
- 保湿剤をさらに含む、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 前記保湿剤は、PCAナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、ヒアルロン酸、尿素および乳酸からなる群から選択される、請求項14に記載のスキンクリーム。
- アラントインをさらに含む、請求項2に記載のスキンクリーム。
- ベースは精製水である、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 少なくとも1つの防腐剤をさらに含む、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 前記少なくとも1つの防腐剤は、メチルパラベン、プロピルパラベン、ジアゾリジニル尿素、フェノキシエタノール、DMDMヒダントイン、ソルビン酸、ベンジルアルコール、ホルムアルデヒドおよびトリクロサンからなる群から選択される、請求項18に記載のスキンクリーム。
- 前記少なくとも1つの防腐剤は、メチルイソチアゾリノン、メチルクロロイソチアゾリノンおよびカフェインからなる群から選択される複素環化合物である、請求項18に記載のスキンクリーム。
- PEG‐150、デシルアルコール、SMDI共重合体、PCAナトリウム、アラントイン、精製水、メチルイソチアゾリノンおよびメチルパラベンをさらに含む、請求項2に記載のスキンクリーム。
- 追加の薬剤をさらに含む、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 前記追加の薬剤は、Pal‐KTTKS(配列番号:2)またはアルジルリンを含む、請求項22に記載のスキンクリーム。
- 第2の馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物をさらに含み、当該第2の馴化培地は、少なくとも1つの第2の成長因子または1つ以上の細胞外マトリックスタンパク質の分泌を促進させるように適合された条件下で二次元培養において第2の実質的に均質な真核細胞型を有する栄養培地を培養することによって生成され、前記成長因子または細胞外マトリックスタンパク質は、当該皮膚欠損を治療または予防するのに十分な量で前記馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物に存在している、請求項1に記載のスキンクリーム。
- 皮膚欠損を治療および/または予防する方法であって、
培養された実質的に均質な包皮由来の線維芽細胞からの馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物を含むスキンクリームを、必要としている被験者の皮膚に投与するステップを含み、前記馴化培地は、栄養培地への少なくとも1つの成長因子の分泌を促進させるように適合された条件下で二次元培養において前記細胞を有する当該栄養培地を培養することによって生成され、前記少なくとも1つの成長因子は、当該皮膚欠損を治療または予防するのに十分な量で前記馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物に存在している、方法。 - 当該スキンクリームは、局所投与により塗布される、請求項25に記載の方法。
- 局所投与は、経皮皮膚スタンプ、無線周波数マイクロニードル装置または分別レーザによる、請求項26に記載の方法。
- 当該皮膚欠損は、皮膚の老化、皮膚のしわ、アンドロゲン性脱毛症(AGA)、まつげの喪失、日焼け、火傷、手術瘢痕、裂傷、ストレッチマーク、座瘡瘢痕、糖尿病性潰瘍、創傷および膣乾燥からなる群から選択される、請求項25に記載の方法。
- 当該スキンクリームは、1つ以上の溶媒、ベース溶媒、1つ以上の植物成分および1つ以上の皮膚軟化剤をさらに含む、請求項25に記載の方法。
- 当該少なくとも1つの成長因子は、EGF、PDGF、FGF、TGF‐β、TGF‐α、NGF、Epo、IGF‐I、IGF‐II、IL‐1‐α、IL‐1‐β、IL‐2、IL‐3、IL‐4、IL‐5、IL‐6、IL‐7、IL‐8、IL‐9、IL‐10、IL‐11、IL‐12、IL‐13、INF‐α、INF‐β、INF‐γ、TNF‐α、TNF‐β、GM‐CSFおよびM‐CSF、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項29に記載の方法。
- 当該組合せは、TGF β‐1、TGF β‐2、TGF β‐3、IL‐3、IL‐6、IL‐7およびIL‐8を含み、前記馴化培地は、少なくとも約5〜20%(wt%)の濃度で存在する、請求項30に記載の方法。
- 当該組合せは、約1〜3ng/mLのTGF β‐1、約100〜160pg/mLのTGF β‐2、約50〜100pg/mLのTGF β‐3、約60pg/mLのIL‐3、約11pg/mLのIL‐6、約50pg/mLのIL‐7および約4〜10pg/mLのIL‐8を含み、前記馴化培地は、約30〜42%(wt%)で存在する、請求項31に記載の方法。
- 当該スキンクリームは、第2の馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物をさらに含み、当該第2の馴化培地は、少なくとも1つの第2の成長因子または1つ以上の細胞外マトリックスタンパク質の分泌を促進させるように適合された条件下で二次元培養において第2の実質的に均質な真核細胞型を有する栄養培地を培養することによって生成され、前記成長因子または細胞外マトリックスタンパク質は、当該皮膚欠損を治療または予防するのに十分な量で前記馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物に存在している、請求項25に記載の方法。
- 線維芽細胞株であって、当該株は、ATCC受入番号PTA‐11680またはATCC受入番号PTA‐11681である、線維芽細胞株。
- キットであって、
a)培養された実質的に均質な包皮由来の線維芽細胞からの馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物を含むスキンクリームを含み、前記馴化培地は、栄養培地への少なくとも1つの成長因子の分泌を促進させるように適合された条件下で二次元培養において前記細胞を有する当該栄養培地を培養することによって生成され、前記少なくとも1つの成長因子は、皮膚欠損を治療または予防するのに十分な量で前記馴化培地またはその抽出物もしくは濃縮物に存在しており、前記キットはさらに、
b)容器と、
c)ラベルと、
d)当該スキンクリームの塗布方法を提供する取扱説明書とを含む、キット。
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