KR102114993B1 - 폴리펩타이드 및/또는 세포 배양 여액을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 포함하는 화장제 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 폴리펩타이드 또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 펩타이드, 올리고 펩타이드를 포함하는 다양한 폴리펩타이드 또는 세포 배양여액 성분들을 함유하는, 딱딱하고 각이진 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 비수계 화장제 조성물에 대한 것이다. 또한 본 발명의 화장제 조성물은 유효성분을 포함하지 아니하지만 스크럽 효과 유지 또는 향상과 점도 또는 부피 조절을 위한 아스코빅산, 희알루론산, 모노사카라이드를 포함하는 수용성 부형제 입자를 포함하는 비수계 화장제 조성물을 제공하는 것이다.

Description

폴리펩타이드 및/또는 세포 배양 여액을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 포함하는 화장제 조성물{Cosmetic composition comprising water soluble scrub particle containing polypeptide and/or cell culture conditioned media}
본 발명은 폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 포함하는 화장제 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 폴리펩타이드 또는 올리고 펩타이드와 같은 다수의 아미노산이 축합된 중합체 및/또는 세포 배양여액에 포함된 성분들을 함유하는, 딱딱하고 날카롭게 각진 수용성 스크럽 입자를 총량 대비 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 화장제 조성물에 대한 것이다.
최근, 고령화 사회가 급격히 진행됨에 따라 항노화 화장제들이 각광을 받고 있으며, 성장인자를 함유하거나 줄기세포 배양 여액을 함유한 바이오 화장제들이 개발되고 있다.
성장인자를 함유하는 화장제 관련 선행기술로서 대한민국 등록특허 제10-0433373호, 대한민국 등록특허 제10-1289062호, 대한민국 등록특허 제10-2013-0024316호 등이 공개되어 있다.
또한 줄기세포 배양 여액을 함유한 화장제 관련 선행기술로서 대한민국 등록특허 제10-1063299호, 대한민국 등록특허 제10-1047873호, 대한민국 특허출원공개 제10-2010-0098298호 등이 있다.
그러나 재조합 성장인자나 줄기세포 배양 여액에 포함된 성장인자들은 단백질이고 이러한 단백질은 물리적 또는 화학적 환경의 변화에 따라 불안정하며, 특히 물이 있는 상태에서는 가수분해가 되기 쉽기 때문에, 화장제 조성물에 첨가되는 경우 생물학적 활성을 유지하는 것이 용이하지 아니하다
가수분해가 되기 쉬운 단백질의 아마이드 결합을 보호하여 각종 펩타이드들의 활성을 보관 유통 및 사용 기간 동안 장기간 유지하기 위해서는, 만니톨 등과 같은 당류를 포함하는 조성물과 함께 동결건조하여 안정화를 도모하거나, 고순도로 정제 후 액상에서 첨가제를 사용하여 생물학적 활성을 안정화시키는 방법들이 시도되어 왔다. 그러나 이러한 기술들은 화장제에 적용하기가 용이하지 아니하다.
특히, 상피세포 성장인자 (Epidermal Growth Factor, rh-oligopeptide-1 또는 sh-oligopeptide-1 또는 oligopeptide-1)는 장기 보관 시, 실온에서뿐만 아니라 심지어 냉장 보관 상태에서도 물리적, 화학적 변화가 일어나 생물학적 활성이 감소하기 때문에 보관 유통기간이 소요되는 상용화를 위한 제제화에 여러가지 문제점이 있다.
유럽특허공개 제205,051호는 이러한 상피세포 성장인자 EGF의 활성 감소를 막기 위한 피부 및 안과용 크림의 조성물로 EGF와 1 내지 10%의 계면활성제, 5내지 45%의 지방질 및 0.3 내지 0.8%의 방부제로 된 조성물을 개시하고 있다.
유럽 특허공개 제267,015호 및 미국 특허 제4,717,717호에는 EGF에 물에 녹는 셀룰로스 중합체를 첨가한 EGF 함유 안정화 조성물을 개시하고 있다. 또한 유럽특허공개 제398,619호에는 EGF에 아연 등의 금속 양이온을 첨가한 EGF함유 안정화 조성물을 개시하고 있다.
대한민국 특허공고 제10-1996-0013439호는 페놀, 폴리에틸렌글리콜, 지방산염, 계면활성제, 수크로스, 지방산 에스테르, 황산나트륨, 아미노산, 타우린, 만니톨, 젤라틴, 휘브로넥틴, 히알루론산 및 유기산 완충용액으로 구성된 그룹으로부터 선택된 1 또는 2 이상의 물질을 함유한 안정한 EGF 조성물을 개시하고 있다.
그 밖에 EGF를 안정화시키기 위한 특허로서 대한민국 등록특허 제10-0570358호는 상피세포 성장인자와 셀레늄을 함유한 나노 벡터 조성물 및 이를 이용한 화장제를 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 제10-0752990호는 나노리포좀 및 천연 추출물을 포함하는 피부 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 개시하고 있다.
이러한 종래의 기술들을 이용하더라도, 실온 유통 조건, 비멸균적 조건, 수성 조건인 화장제에서 상피세포 성장인자의 활성을 유지하기가 용이하지 아니하다. 특히, 화장제에서 허용하고 있는 수준의 매우 낮은 농도로 상피세포 성장인자를 화장제에 첨가하는 경우에는 보관, 유통, 사용에 소요되는 기간 동안 EGF 활성유지가 거의 불가능하다.
또한 단백질은 분자량이 크기 때문에 화장제에 첨가하더라도 피부 침투가 잘되지 아니하여 그 효과를 보기가 어렵기 때문에, 성장인자가 포함된 바이오화장제들은 단백질 전달 도메인 (Protein Transduction Domain (PTD))을 이용한 펩타이드 융합기술을 사용하거나, 성장인자를 지질로 싸서 피부 침투를 도와주는 리포좀 (Liposome) 기술을 적용하거나, 미세니들 치료 시스템 (Miconeedle Therapy System; MTS)을 결합한 방법들을 주로 활용되고 있다.
본 발명자는 폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분이 포함된 날카롭고 딱딱한 각이진 입자 형태의 수용성 스크럽 입자를 비수계 화장제 조성물에 함유시킴으로써, 가수분해되기 쉬운 펩타이드들의 활성을 장기간 안정하게 유지시킬 수 있었다.
또한 이러한 수용성 입자가 함유된 비수계 화장제 조성물을 피부에 도포한 후 스킨 에멀전과 같은 수성계 화장제를 사용하여 스크럽 입자를 용해시킴으로써, 스크럽 입자에 함유된 각종 펩타이드 성장인자 및/또는 세포배양여액의 유효성분들이 각질층 내부로 피부 깊숙이 침투되는 효과가 있다는 사실을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 명세서에서의 펩타이드라는 용어는, 두개 이상 수십만개의 아미노산이 축합 중합된 물질을 의미하며, 다이 펩타이드, 트리 펩타이드, 올리고 펩타이드 단백질등을 포함하는 천연 또는 재조합 또는 화학적으로 합성된 모든 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명자는 상기의 폴리펩타이드나 세포 배양여액과 같은 유효성분이 함유되지 아니한 수용성 스크럽 입자를, 상기의 유효성분이 함유된 수용성 스크럽입자와 함께 섞어서 비수계 화장제에 첨가함으로써, 스크럽 효과를 감소시키지 아니하면서도 폴리펩타이드 및/또는 세포배양여액이 함유된 수용성 스크럽 입자의 함량을 조절할 수 있는, 비수계 화장제 조성물을 제조하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
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따라서 본 발명의 기본적인 목적은, 폴리펩타이드를 함유하는 날카롭고 딱딱하며 각이진 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 화장제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 세포 배양여액 성분들을 함유하는 날카롭고 딱딱하며 각이진 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 화장제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 폴리펩타이드와 세포배양여액을 모두 함유하는 날카롭고 딱딱하며 각이진 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량% 포함하는 화장제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 전술한 폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분들을 함유하는 수용성 스크럽 입자와, 상기 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분들이 함유되지 아니하면서 증량 또는 점도 조절을 위한 수용성 부형제 스크럽 입자를 0.01 중량 % 내지 15 중량% 포함하는 비수계 화장제 조성물을 제공하는 것이다.
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전술한 본 발명의 기본적인 목적은, 폴리펩타이드를 함유하는 날카롭고 딱딱하며 각이진 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 화장제 조성물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
상기 수용성 스크럽 입자는 0.0001 중량% 내지 1 중량%의 폴리펩타이드를 함유하는 것일 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드는 2개 이상 수십만개의 아미노산이 축합 중합된 물질이며, 아미노산의 갯수가 통상 2개 이상 수십만개의 범위이고, 바람직하게는 2개 이상 1000개의 범위이며, 보다 바람직하게는 2개이상 100개, 가장 바람직 하게는 2개 이상 80개의 범위이다. 또한 상기 수용성 스크럽 입자는 딱딱하고 날카롭게 각이진 형태의 것이 바람직하며, 크기는 0.01 mm 내지 2 mm 일 수 있다.
상기 입자의 크기가 0.01 mm 미만인 경우에는 스크러빙 (scrubbing) 효과가 약화될 우려가 있고, 2 mm 이상일 경우에는 외부에서 이물감이 심해져 피부에 사용하기에 바람직하지 아니하다. 보다 바람직하게는, 상기 스크럽 입자의 크기는 0.1 mm 내지 1 mm이다.
폴리펩타이드를 함유하는 본 발명의 수용성 스크럽 입자는 여러가지 종류의 펩타이드 물질들을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에 사용되는 펩타이드는 성장인자일 수 있으며, 그중에서도 상피세포 성장인자 (EGF) 일 수 있다.
또한, 폴리펩타이드가 함유된 본 발명의 수용성 스크럽 입자가 들어있는 화장제 조성물은, 이와 다른 폴리펩타이드가 함유된 수용성 스크럽 입자를 추가로 포함할 수 있다. 또한 폴리펩타이드가 함유된 본 발명의 수용성 스크럽 입자가 함유된 화장제 조성물은 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분과 같은 유효성분이 포함되지 아니한 수용성 스크럽 입자를 증량이나 점도 조절을 위하여 추가로 포함할 수 있다.
폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 입자를 포함한 본 발명의 비수계 화장제 조성물은 에센스, 크림 또는 로션의 제형 형태로 제조될 수 있다. 폴리펩타이드를 함유하는 수용성 스크럽 입자를 함유한 본 발명의 비수계 화장제 조성물은, 주름 개선 등에 탁월한 효과가 있다.
본 명세서에서 "성장인자"란 세포의 분화 및 성장에 관여하는 펩타이드를 지칭한다. 성장인자 (Growth Factor)는 세포가 상호 교신을 위해 분비한 비교적 저분자량의 단백질로서 여러 가지 생리작용을 하는데, 특정 성장인자는 특정 세포의 분열을 촉진시키는 역할을 한다.
본 발명에서 사용되는 성장인자는 상피세포 성장인자 (Epidermal Growth Factor, EGF)일 수 있다. 상피 세포 성장인자 (EGF)는 외배엽 및 중배엽에서 기원하는 다양한 상피세포의 강력한 세포분열 촉진인자로서, 신체의 체액 중에 널리 분포되어 있고, 53개의 아미노산 잔기를 갖는 펩타이드 (분자량 6,200 Da)이다.
이러한 펩타이드 EGF는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 세포증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에, 상처 치유 효과가 우수하고 주름개선 효과도 좋아서, 화장제 원료로서 사용되고 있다.
본 발명의 하나의 실시 형태에 따르면, EGF는 재조합 대장균 또는 식물로부터 제조되고 순도 90% 이상으로 정제된 것일 수 있다. EGF는 3T3 섬유아세포를 이용한 활성 측정에서 영국 NIBSC의 EGF 표준품으로서 보정시 mg당 1백만 IU (International Unit) 이상의 활성을 보여준다.
EGF의 화장제 배합 한도는 국내에서는 10 ppm (0.001 중량%)으로 규제되고 있고, 가격이 비교적 고가이기 때문에 특수한 화장제를 제외하고는 일반적으로 미량의 함량으로 사용되고 있다. 가수분해에 취약한 펩타이드 EGF의 특성상 미량으로 사용되어야만 하는 화장제에서는 활성을 나타내지 못하는 경우가 대부분이다.
화장제에 첨가된 후 펩타이드 EGF의 활성이 그대로 유지하는 것을 가정하면, 1kg의 화장제에 0.1 mg의 EGF를 첨가하여도 (0.1 ppm), 1 g의 화장제에 100 IU의 EGF가 함유되므로 인체 피부에 적용 시에도 충분한 활성을 보여줄 수 있다.
따라서 본 발명에서는 펩타이드 EGF가 1 내지 10,000 ppm (0.0001 내지 1 중량%에 해당) 함유된 수용성 스크럽 입자를 사용하고, 화장제 최종 펩타이드 EGF 함량이 항상 10 ppm 이하가 되도록, 상기 농도의 EGF 함유 수용성 스크럽 입자의 화장제 조성물에서의 중량%를 0.01 내지 15 중량% 사이로 조절하였다.
또한, 펩타이드 EGF 함유 수용성 스크럽 입자를 적게 사용하는 경우 스크럽 효과가 감소되는 것을 방지하기 위해 유효성분이 함유되지 아니한 수용성 스크럽 입자를 스크럽 효과 유지와 증량, 점도 조절을 위해 추가하여, 수용성 입자의 총량이 화장제에서의 중량%는 15 중량% 이하가 되도록 하였다.
본 명세서에서 수용성 스크럽 입자는, 딱딱하고 날카롭게 각이진 형태의 것이 바람직하다. 상기 본 발명의 날카롭게 각이진 수용성 스크럽 입자는 다각뿔 형태일 수 있다. 또는, 상기 각진 스크럽 입자는 사면체 또는 피라미드 형태의 마이크로구조체 (Micro-structure)인 침상체(Micro-spicule)일 수도 있다.
또한, 상기 침상체의 각 면은 평평하거나, 요철이 있을 수 있으며, 속이 비어 있을 수도 있다. 또한 상기 침상체의 모서리나 꼭지점의 일부가 깨지는 등의 결함이 있을 수 있다. 또한 상기 미세침에서 하나 이상의 면에 함몰부가 형성될 수 있고, 상기 함몰부의 깊이는 상기 침상체의 높이의 1/2이내일 수 있다.
전술한 본 발명의 또 다른 목적은, 세포 배양여액 성분들을 함유하는, 수용성 스크럽 입자를 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 비수계 화장제 조성물을 제공함으로써도 달성될 수 있다.
상기 수용성 스크럽 입자는 0.0001 중량% 내지 10 중량%의 세포 배양여액 건조물을 함유하는 것일 수 있다. 또한 상기 수용성 스크럽 입자는 각이진 날카로운 입자 형태이며, 크기는 0.01 mm 내지 2 mm 일 수 있다. 만약 상기 입자의 크기가 0.01 mm 미만인 경우 스크러빙 (scrubbing) 효과가 약화될 우려가 있고, 2 mm 이상일 경우에는 피부에 이물감이 심해져 바람직하지 아니하다.
보다 바람직하게는 상기 입자의 크기는 0.1 mm 내지 1mm이다.
상기 세포 배양여액 건조물을 함유하는 수용성 스크럽 입자는 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 상기 펩타이드는 성장인자일 수 있으며 그중에서도 상피세포 성장인자 EGF 일 수 있다.
또한, 상기 세포 배양여액 건조물이 함유된 수용성 스크럽 입자가 들어있는 본 발명의 비수계 화장제 조성물은, 펩타이드가 함유된 본 발명의 수용성 스크럽 입자를 추가로 포함할 수 있다. 상기 펩타이드는 성장인자일 수 있으며 그 중에서도 상피세포 성장인자 (EGF) 일 수 있다. 또한 폴리펩타이드가 함유된 본 발명의 수용성 스크럽 입자가 함유된 화장제 조성물은 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분과 같은 유효성분이 포함되지 아니한 수용성 스크럽 입자를 증량이나 점도 조절을 위하여 추가로 포함할 수 있다.
세포 배양여액 건조물을 함유하는 본 발명의 입자를 포함한 비수계 화장제 조성물은 에센스, 크림 또는 로션의 제형으로 제조될 수 있다. 세포 배양여액 건조물을 함유하는 본 발명의 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제 조성물은 주름 개선 또는 미백 등의 효과가 있다.
펩타이드 및/또는 세포 배양여액 건조물을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 함유하는 본 발명의 비수계 화장제 조성물에는, 15 중량% 내지 25 중량%의 고급 알코올, 40 중량% 내지 65 중량%의 오일, 2 중량% 내지 3 중량%의 왁스 및 5 중량% 내지 20 중량%의 토코페릴아세테이트를 함유하는 유상 성분이 포함될 수 있다. 상기 고급 알코올은 세틸알코올, 세토스테아릴알코올, 이소스테아릴알코올, 스테아릴알코올 중에서 1종 이상 선택이 가능하고 병용할 수 있다.
상기 오일은 천연 식물 오일인 호호바유, 경화야자유, 아보타드유, 올리브유, 아몬드유, 마카더미아넛유, 메도우폼유, 팜유, 야자유, 피마자유 중에서 선택된 1종 이상을 혼합 사용하는 것이 가능하다.
또한 상기 왁스는 합성왁스, 마이크로크리스탈린 왁스 중 1 종 이상 선택이 가능하고 병용할 수 있다.
본 발명의 화장제 조성물은 상기 고급 알코올, 오일, 왁스, 및 토코페릴아세테이트를 포함하는 유상 성분을 85 중량% 내지 90 중량%, 바람직하게는 87 중량% 내지 88 중량% 만큼 포함하는 것이 화장제의 경도를 조절하여 용기에 충진하기 용이하다.
펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 본 발명의 수용성 스크럽 입자를 함유한 본 발명의 비수계 화장제 조성물에는, 0.5 중량% 내지 1.9 중량%의 히알루론산, 1.5 중량% 내지 10 중량%의 모노사카라이드 및/또는 0.0001 중량% 내지 0.01 중량%의 트로메타민 또는 아스코빅산을 포함하지만 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분은 함유되지 아니하는 수용성 스크럽 입자를 스크럽 효과 유지 향상 또는 점도나 부피 조절을 위한 입자로서 추가로 포함할 수 있다.
상기 히알루론산은 소듐 히알루로네이트 또는 가수분해된 히알루론산(hydrolyzed hyaluronic acid) 중에서 1종 이상의 선택이 가능하고 병용할 수 있다.
상기 모노사카라이드는 소르비톨 또는 아스코르브산 중에서 1종 이상의 선택이 가능하고 병용할 수 있다.
이러한 스크럽 효과의 유지 또는 향상과 화장제 조성물 전체의 점도나 부피 조절을 위한 부형용 스크럽 입자 즉, 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분이 함유되지 아니한 스크럽 수용성 입자들은, 화장제가 지나치게 미끈거리는 것을 방지하고, 화장제의 경도가 용기에 충진하기 적합하게 조절하는 역할을 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 이러한 부형용 또는 증점 증량용 수용성 스크럽 입자를 본 발명의 유효성분이 함유된 스크럽 입자들에 추가로 혼입시킨 비수계 화장제 조성물을 제공함으로서 달성 될 수 있다. 증량용 수용성 스크럽 입자를 추가 사용함으로써 펩타이드 또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 고 중량%에서부터 저 중량% 범위로 줄여주는 경우라도 피부에는 일정한 수준의 스크럽 자극 효과를 유지시켜 줄 수 있는 기술적 수단을 제공하는 것이다.
따라서 본 발명은, 펩타이드 및/또는 세포 배양여액을 성분을 함유하는 수용성 스크럽 입자와 유효성분이 함유되지 아니한 수용성 스크럽 입자의 혼합물을 0.01 중량% 내지 15 중량%를 포함하는 비수계 화장제 조성물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
상기 증량용 수용성 스크럽 입자는 아스코빅산이나 히알루론산이나 모노사카라이드를 포함하는 것일 수 있다. 본 발명의 증량용 수용성 스크럽 입자는 2 mm 이상의 것은 사용하지 아니한다. 증량용 수용성 스크럽 입자의 크기가 2 mm 이상일 경우에는 이물감이 심해져 바람직하지 아니하다.
본 발명의 펩타이드 및/또는 세포 배양여액 건조물을 함유하는 수용성 스크럽 입자를 함유한 비수계 화장제 조성물을 피부 위에 바르고 손으로 두드리거나 문지르면 딱딱하고 각진 형상의 수용성 스크럽 입자의 꼭짓점이나 모서리 등이 물리적인 압력을 피부에 가해 각질층을 제거한다 (도 1 및 도 6 참조). 이어서 스킨 에멀전과 같은 수성계 화장제를 사용하여 도포된 각진 수용성 스크럽 입자를 용해시킴으로써 본 발명의 수용성 스크럽 입자에 함유된 폴리펩타이드나 세포 배양여액 성분과 같은 유효성분들이 각질이 제거된 피부에 흡수된다.
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폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분들이 함유된 딱딱하고 각이진 입자 형상의 수용성 스크럽 입자를 비수계 화장제에 함유시킨 본 발명의 화장제 조성물은, 가수분해되기 쉬운 펩타이드 유효성분 또는 세포 배양여액에 함유된 유효성분들의 활성을 보관 유통기간 또는 화장제를 사용하기 전까지, 상온에서 안정하게 유지시켜 줄 수 있다.
또한 본 발명에 따른 수용성 스크럽 입자를 피부에 문지르면, 각질 등 피부 장벽이 일부 제거되는 효과가 있기 때문에 (도 6 참조) 유효성분이 함유된 수용성 스크럽 입자가 함유된 비수계 화장제 조성물을 피부에 도포한 후 스킨 에멀전과 같은 수성계 화장제를 사용하여 수용성 스크럽 입자를 용해시키면, 본 발명의 스크럽 입자에 함유된 펩타이드 성장인자 또는 세포 배양여액과 같은 유효성분들의 각질층이 제거된 피부에 침투 전달되어 탁월한 피부 개선 효과를 나타낸다 (도 7, 도 8, 도 9 참조).
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도 1은 각진 형태의 수용성 스크럽 입자를 함유한 본 발명의 비수계 화장제 조성물을 피부에 적용하는 것을 나타내는 개념도이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1에서 제조된 펩타이드 성장인자가 함유된 0.5 mm 크기의 각진 형태의 수용성 스크럽 입자를 나타내는 현미경 사진이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1에서 제조된 세포 배양여액 건조물이 함유된 0.5 mm 크기의 각진 형태의 수용성 스크럽 입자에 대한 현미경 사진이다.
도 4는 본 발명의 실시예 6에서 제조된 증량용 수용성 스크럽 입자에 대한 사진이다.
도 5는 본 발명의 유효 성분을 함유한 수용성 스크럽 입자와 증량용 수용성 스크럽 입자가 함께 함유된 비수계 화장제 조성물에 대한 현미경사진이다.
도 6은 펩타이드인 상피세포성장인자 (EGF)가 함유된 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 돼지피부에 스크럽 한 후 상피세포성장인자가 돼지피부에 침투된 정도를 EGF 항체로 염색하여 단면을 촬영한 사진이다.
도 7은 펩타이드인 상피세포성장인자 (EGF)가 함유된 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 인체에 적용하여 피부의 두께와 밀도 변화에 대한 효과를 스크럽 하지 않은 대조군과 통계처리하여 비교한 결과이다.
도 8은 펩타이드인 상피세포성장인자 (EGF)가 함유된 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 인체에 적용하여 주름의 개선에 대한 효과를 스크럽 하지 않은 대조군과 통계처리하여 비교한 결과이다.
도 9은 펩타이드인 상피세포성장인자 (EGF)가 함유된 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 인체에 적용하여 20명 피험자의 만족도를 평가한 결과이다.
이하, 다음의 실시예 또는 도면을 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 그러나 다음의 실시예 또는 도면에 대한 설명은 본 발명의 구체적인 실시 태양을 특정하여 설명하고자 하는 것일 뿐이며, 본 발명의 권리 범위를 이들에 기재된 구체적 내용으로만 한정하거나 제한 해석하고자 의도하는 것은 아니다.
실시예 1. 상피세포 성장인자 또는 세포 배양여액 성분을 함유하는 수용성 스크럽 입자의 제조
2g의 히알루론산, 4g의 물 및 200 ug의 상피세포 성장인자를 배합한 혼합용액, 또는 2g의 히알루론산 및 4g의 세포 배양 여액을 배합한 혼합용액을 모서리가 뾰족하게 각이진 피라미드 형태의 작은 구멍이 형성된 판에 로딩하여 건조시킴으로써, 상피세포 성장인자 또는 세포 배양 여액 성분을 함유하는 날카롭게 각이진 형태의 수용성 스크럽 입자를 제조하였다 (도 2 또는 도 3 참조). 본 실시예에서 사용된 세포 배양여액은 대한민국 특허출원 공개 제 10-2010-0098298호에 기재된 세포 배양여액으로서, 다수의 성장인자들을 함유하고 있으며, 피부재생 효과가 우수하여 화장제 원료로 사용되고 있다.
실시예 2~5
하기 표 1에 나타낸 조성에 따라 유상 성분, 폴리펩타이드 및/또는 세포 배양여액 성분들과 같은 유효성분을 함유한 수용성 스크럽 입자, 증점 증량용 부형 스크럽 입자 또는 성분을 각각 계량한 다음, 60℃로 가열한 상태에서 교반기에서 천천히 5시간 정도 균일하게 혼합하였다. 이후 상기 혼합물을 30℃까지 냉각시켜 본 발명의 각진 수용성 스크럽 입자가 함유된 비수계 화장제 조성물을 제조하였다. 표 1 실시예 4의 조성으로 제조된 각진 수용성 스크럽 입자가 함유된 비수계 화장제 조성물의 형상은 현미경으로 관찰 시 끝이 뾰족한 각진 입자가 보이는 오일 크림 형태이다.
조성 (중량 %) 실시예
2 3 4 5
유상
성분		 고급 알코올 스테아릴알코올 12 13 14 13
세틸알코올 13 3 1 3
오일 호호바유 20 0 55 30
올리브유 20 55 0 35
왁스 마이크로크리스탈린왁스 2 1 1 1
합성왁스 1 1 1 1
토코페릴아세테이트 20 15 15 15
유효성분 스크럽 입자 (펩타이드 또는 세포 배양여액 성분 함유) 0.1 1 5 10
유효성분없는부형제
스크럽
입자		 히알루론산 소듐 히알루로네이트 1 1 1 0.5
가수분해된 히알루론산 0.89 0 0 0
모노사카라이드 소르비톨 9.5 0.5 4.499 1
아스코르브산 0.5 9.499 0.5 0.49
트로메타민 0.01 0.001 0.001 0.01

실험예 1. 피부발림성/피부자극성/피부유연성 평가실시예 2 내지 5의 화장제 조성물에 대하여 사용 테스트를 실시하여, 그 결과를 표 2에 나타내었다. 여성 10명에 대해 세정 후 얼굴에 상기 실시예의 샘플을 골고루 마사지하고 수성계 스킨 에멀전을 바른 후 피부발림성, 피부자극성, 피부유연성을 5점 척도로 평가토록 한 후 평균 값을 구하였다.
상기 5점 척도는 다음과 같다 ;
1점: 매우 불만족
2점: 불만족
3점: 보통
4점: 만족
5점: 매우 만족
평가항목 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
피부발림성 3.5 4.1 4.0 3.8
피부자극성 4.0 3.9 3.7 3.5
피부유연성 3.7 3.9 4.2 3.8

상기 표2를 참조하면, 본 발명의 실시예 2 내지 5에서 제조된 화장제 조성물들은 각 항목에서 모두 보통 이상의 높은 만족도를 보였다. 각진 스크럽 입자에 대한 피부자극성에 대한 반응은 스크럽 입자의 함량에 따른 다른 경향성을 나타내었다. 실험예 2. 경시 안정성의 평가
실시예 2 내지 5의 조성에 따라 제조된 조성물들의 경시 안정성을 평가하기 위하여, 각각 불투명 플라스틱 주사기 용기에 담아 저온(4℃), 실온(25℃) 및 고온(55℃)에서 3개월간 방치 후, 내용물을 짜서 경시 안정성을 평가하였고 그 결과를 표2에 나타내었다.
온도
조건		 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
저온
(4℃)		 · 상 분리되지 않음
· 스크럽 입자 느낌 확인
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자 유지
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 색 변화 없음
실온
(25℃)		 · 상 분리되지 않음
· 스크럽 입자 느낌 확인
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 색 변화 없음		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 색 변화 없음
고온
(55℃)		 · 상 분리되지 않음
· 스크럽 입자 느낌 감소
· 옅은 노란색으로 변함		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 노란색으로
변함		 · 상 분리되지
않음
· 스크럽 입자
유지
· 옅은 노란색으로 변함		 · 상 분리가 조금 일어남
· 스크럽 입자
유지
· 옅은 노란색으로 변함

상기 표 3에서 보듯이, 본 발명의 화장제 조성물들은 경시 안정성이 우수한 것으로 나타났으나, 고온에서는 아스코르브산에 의한 색 변화가 있었으며, 수용성 스크럽 입자가 많이 함유된 실시예 5의 조성물의 경우 고온에서 상 분리가 약간 일어났다. 실험예 3. 활성 안정성의 평가
실시예 4의 조성에 따라 제조된 조성물을 사용하여 상피 성장인자 (EGF) 활성 안정성 평가를 수행하였다. 안정성을 평가하기 위하여, 상기 조성물을 불투명한 플라스틱 주사기 용기에 담아 실온(25℃) 및 고온(55℃)에서 3개월간 방치 후, 내용물을 아래와 같은 방법으로 EGF의 활성을 특정하였다. 수성계 화장제인 스킨 에멀젼에 실시예 4의 조성과 동량의 각진 수용성 스크럽 입자를 넣어 활성 측정 시험대조군으로 사용하였다.
실험재료
상피세포 성장인자 (EGF)에 대한 세포 증식 활성 측정은 Balb/c 3T3 섬유아세포 세포주 (ATCC #CCL-163)를 사용하였고, 세포주 계대용 배양배지는 10% 우혈청이 포함된 DMEM 배지를 사용하였으며, 분석용 배지로서 UltraMEM 무혈청배지를 사용하였다. EGF 활성 측정 표준품은 영국 NIBSC에서 hEGF (Epidermal Growth Factor Human, rDNA derived, 91/530, 4000 IU/4ug/mL)를 구매하여 활성 측정에 사용하였다. EGF에 의한 세포증식 측정은 MTS 시약을 사용하였다.
활성 측정 방법
제조 시점 이후 3개월 경과 후, 본 발명의 화장제의 무게를 측정하여 상피세포 성장인자 활성 측정용 배지인 UltraMEM 무혈청 배지에 넣고 (스크럽 입자 함량으로부터 계산하여 EGF의 최종 농도가 1 ug/mL이 되도록 조절함) 매우 강하게 교반한 후 원심분리에 의해 수용액을 취하여 활성 분석에 사용하였다. 활성을 측정할 추출물 및 EGF 활성 표준품을 96-웰 플레이트에서 2배수 연속 희석하여 각 웰 당 100 uL씩 들어가도록 한 후에 Balb/c 3T3 섬유아 세포를 웰당 3x103 마리씩 넣은 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 72시간 동안 배양하였다. 이 후 각 웰에 40 uL의 MTS 시약을 넣고 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 동안 인큐베이션한 후 마이크로 리더기로 490 nm에서 흡광도를 측정하였고 PLA 2.0 프로그램을 이용하여 평행선 분석법으로 EGF 표준품과 추출물간의 값을 비교함으로써 추출물의 EGF 활성을 계산하였고, 추출 회수율 60%를 고려하여 수용성 스크럽 입자가 함유된 화장제 조성물 1 g당 EGF 활성을 계산하였다.
온도 실시예 4 대조군
실온(25℃) 3.60 x 103 IU/g 0 IU/g
고온(55℃) 2.05 x 103 IU/g 0 IU/g

상기 표 4에서 보듯이, 상피세포성장인자 EGF의 활성은, 실시예 4의 비수계 화장제 조성물에 첨가된 경우가 수성계 화장제에 첨가된 경우(대조군)보다 월등히 더 안정하였으며, 실온에서는 실시예 4의 화장제 조성물의 초기 EGF의 활성 평균값인 5.0x103 IU/g에 비해 약 72%의 활성을 유지하였고, 고온에서도 약 41%의 활성을 유지하였다. 따라서 본 발명의 화장제 조성물에서 상피세포 성장인자 (EGF)의 활성 안정성이 매우 우수하게 나타남을 알 수 있었다.
실시예 6 증량용 수용성 스크럽 입자의 제조
히알루론산과 물을 1:2로 배합한 혼합용액을 평평한 판이나 트레이에 얇게 로딩하여 건조 한 후 분쇄기를 이용하여 각이진 수용성 스크럽 입자와 유사한 크기로 분쇄하였다. 이후 메쉬 또는 체를 이용하여 크기가 2 mm 이하인 펩타이드 성장인자 또는 세포 배양여액 건조물을 포함하지 아니하는 수용성 증량용 부형제 입자를 얻었다.
아스코빅산의 경우 분쇄기를 이용하여 각진 스크럽 입자와 유사한 크기로 분쇄하였다. 메쉬 또는 체를 이용하여 크기가 2 mm 이하인 폴리펩타이드나 성장인자, 세포 배양여액을 포함하지 아니하는 증량용 수용성 스크럽 입자를 제조하였다.
실시예 7 증량용 수용성 스크럽 입자를 포함한 비수계 화장제 제조
하기 표 5에 나타낸, 유효성분을 함유하는 본 발명의 각진 수용성 스크럽 입자와, 증량용 수용성 부형제 입자를 제외한 모든 조성물의 성분은 실시예 4에 따라 제조하였다.
조성 (중량 %) 실시예
7 8 9 10 11
유효성분 함유 스크럽 입자 5 3.75 2.5 2.25 0
증량용 스크럽 입자 0 2.25 2.5 3.75 5

실험예 1 실시예 7 내지 11의 화장제 조성물에 대하여, 폴리펩타이드나, EGF, 또는 세포 배양여액 성분과 같은 유효성분 함유 수용성 스크럽 입자와 유효성분 비함유 수용성 부형제 입자의 혼합 비율에 따른 피부 자극성 비교 테스트를 실시하여 그 결과를 표 6에 나타내었다. 상기 유효성분 함유 수용성 스크럽 입자와 유효성분 비함유 수용성 부형제 입자가 첨가된 화장제에 대하여 피부자극성을 판단 근거로 하여 차이를 평가하고자 하였다. 여성 10명에 대해, 세정 후 얼굴에 상기 실시예의 샘플을 골고루 마사지하고 수성계 스킨 에멀전을 바른 후 5점 척도로 평가토록 한 후 평균값을 구하였다.
상기 5점 척도는 다음과 같다.
1점: 매우 차이가 있다
2점: 차이가 있다
3점: 모르겠다
4점: 차이가 없다
5점: 매우 차이가 없다
평가는 맹검 테스트로 수행하였으며, 상기 유효성분들이 함유된 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 대조군으로 사용하고, 유효성분 비함유 수용성 부형제 입자가 포함된 비수계 화장제를 시험군으로 하여 각각 차이를 비교하였다.
평가항목 실시예 7과 8 실시예 7과 9 실시예 7과 10 실시예 7과 11
피부자극성 4.2 4.2 4.2 4.1

표 6에서 보는 바와 같이 대조군과 시험군에서 피부자극성에서 확연한 차이를 구별할 수 없는 결과를 얻었다. 이러한 결과는 유효성분 비함유 수용성 부형제 입자의 중량% 조절에 의해 유효성분이 함유된 각진 수용성 스크럽 입자의 투여 효과를 감소시키지 않으면서도 다양한 농도의 펩타이드 성장인자 또는 세포배양여액 건조물을 함유하는 수용성 입자를 포함하는 비수계 화장제 조성물을 본 발명이 제공할 수 있음을 보여 주는 것이다.
실시예 12 돼지피부 침투 실험
상피세포 성장인자 EGF가 함유된 본 발명의 수용성 스크럽 입자를 포함하는 비수계 화장제를 시험군으로 하고, 내용물 및 함량은 동일하나 수용성 스크럽 입자를 사용하지 않은 EGF 화장제를 대조군 (대조군은 시험군에 증류수를 60% 첨가하여 스크럽 입자를 용해시켜 동일한 조성 및 조건에서 실험을 수행) 으로 하여 돼지 피부 침투 실험을 실시하였다..
시험군의 경우 돼지 피부 표면에 0.1 g을 취하여 도포하여 20초 동안 스크럽 한 후 증류수 0.06g을 첨가하여 스크럽 입자를 녹여 추가로 20초 동안 도포하였다. 대조군은 0.16 g (증류수를 첨가하여 녹인 EGF)을 취하여 40초 동안 도포하였다.
돼지 피부는 도포 후 4℃에서 12시간 동안 배양하고 10% 고정액을 이용하여 고정시켜 파라핀 블록을 만들어 4mm 두께로 절편을 만들었다. 슬라이드 위에 조직을 마운팅(mounting)한 다음 파라핀을 제거하고 수화 과정을 거친 다음 조직 절편을 30분간 블로킹하였다. 블로킹이 끝난 조직에 anti-EGF antibody를 처리하여 4℃에서 18시간 반응시켰다. 다음날 PBS로 씻어준 다음 2차 항체를 처리하고 DAB 시약으로 반응시키고 현미경으로 관찰하였다.
도 6에서 보는 바와 같이 대조군(도 6B)에 비해 시험군(도 6C)은 스크럽에 의한 각질의 제거의 효과를 확인할 수 있었으며, 또한 스크럽에 의하여 펩타이드 성장인자 EGF가 대조군에 비해 진피 부분까지 더 깊숙이 침투하는 본 발명의 효과를 확인할 수 있다.
실시예 13 임상시험
피부 질환이 없는 건강한 성인 남녀 20명을 대상으로 피부 주름 개선에 대한 임상 시험을 실시하였으며, 정확하게는 눈가 주위의 주름에 대하여 시험을 진행하였다. 피험자의 왼쪽 눈가에는 대조군을 도포하고 오른쪽 눈가에는 시험군을 도포하였다. 대조군은 시험군에 60% 증류수를 첨가하여 수용성 스크럽 입자를 녹인 것을 사용하였다. 각각의 시료를 매일 1회씩 눈 주위 피부에 도포하고 8주간 관찰 측정하여 본 임상시험을 진행하였다. 대조군의 경우 적용부위를 깨끗하고 하고 대조물질 0.16 g을 40초 정도 도포하였으며, 시험군의 경우 적용부위를 깨끗하게 하고 시험물질 0.1 g을 도포하고 20초 정도 스크럽 후 60 uL 정도의 증류수를 가하여 20 초 정도 추가 스크럽 하였다. 측정은 시험 물질 도포 후 1주, 2주, 3주, 4주, 8주간 관찰 측정하였다.
임상평가지표는 A-one pro 안면진단 장비와 Ultrascan UC22 피부 초음파 장비, 관찰자 평가 및 피험자 평가를 이용하였다. 관찰자 평가(IGA, Investigator global assessment)로는 WSRS(Wrinkle severity rating scale, 5 point scale)를 기준으로 피부과 의사 2인의 육안 평가로 주름 정도에 따라 점수를 매겨 수치화 하였다. 피험자 평가(PGA, Patient global assessment)는 피험자 만족도를 4-point scale로 수치화 하여 나타내었다.
임상시험 결과 시험군은 대조군에 비해서 진피의 두께와 밀도가 높아지는 것을 확인 할 수 있으며 (도 7 참조), 펩타이드 EGF 함유 입자의 스크럽에 의한 피부의 주름 개선 효과를 확인하였다 (도 8 참조). 또한 피험자의 만족도 조사 결과에서 대조군의 50%에 비해 시험군은 70%의 높은 만족도를 보여 스크럽에 의한 거부감은 적은 것으로 조사되었다 (도 9 참조).

Claims (26)

  1. 0.01mm 내지 2mm 크기이며 각지고 수용성인 스크럽 입자로서 폴리펩타이드를 함유하는 스크럽 입자와;
    0.01mm 내지 2 mm 크기이며 각지고 수용성인 스크럽 입자로서 폴리펩타이드를 함유하지 아니하는 부형제 스크럽 입자를 동시에 함유하는 것을 특징으로 하며;
    상기 스크럽 입자들의 총 함량이 화장제 조성물 전체의 0.01 중량% 내지 15중량% 인 것을 특징으로 하는, 비수계 화장제 조성물.
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  6. 삭제
  7. 제1항의 비수계 화장제 조성물에 있어서, 상기 폴리펩타이드를 함유하는 스크럽 입자에서의 폴리펩타이드 함유량이, 0.0001중량% 내지 1중량%인 것을 특징으로 하는, 비수계 화장제 조성물.

  8. 삭제
  9. 제1항 또는 제7항의 비수계 화장제 조성물에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 상피세포 성장인자인 것을 특징으로 하는, 비수계 화장제 조성물.

  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 제1항 또는 제7항의 비수계 화장제 조성물에 있어서, 상기 비수계 화장제 조성물이 에센스, 크림 그리고 로션으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는, 비수계 화장제 조성물.
  13. 제1항의 비수계 화장제 조성물에 있어서, 폴리펩타이드를 함유하지 아니하는 상기 부형제 스크럽 입자가 아스코빅산, 히알루론산 또는 모노사카라이드를 함유하는 것임을 특징으로 하는, 비수계 화장제 조성물.

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