JP6411778B2 - 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤 - Google Patents
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Description
(1)レモンの抽出物を有効成分として含有する幹細胞の未分化状態維持剤。
(2)レモンの抽出物を有効成分として含有する幹細胞の増殖促進剤。
(3)幹細胞を、レモンの抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の製造方法。
(4)幹細胞を、レモンの抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の未分化状態維持方法。
(5)幹細胞を、レモンの抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の増殖促進方法。
(6)(1)または(2)に記載の剤を含む、化粧品、医薬品、または医薬部外品。
(7)(1)または(2)に記載の剤を含む、飲食品。
本発明に係る幹細胞の未分化状態維持剤又は増殖促進剤は、レモンの抽出物を有効成分として含有する。
以下に、レモンを用いた溶媒抽出物の製造例を示す。
レモン乾燥葉100gに、精製水2Lを加え、95〜100℃で5分抽出した。濾過した後、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してレモン葉の熱水抽出物15.6gを得た。
レモン乾燥葉100gに、50%エタノール水溶液を2L加え、一昼夜抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン葉の50%エタノール抽出物20.8gを得た。
レモン乾燥葉100gに、エタノール水溶液を2L加え、一昼夜抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン葉のエタノール抽出物2.8gを得た。
レモン種子100gの粉砕物に、精製水1Lを加え、3時間振とう抽出した。濾過した後、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してレモン種子の水抽出物3.4gを得た。
レモン種子100gの粉砕物に、50%エタノール水溶液を1L加え、一昼夜抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン種子の50%エタノール抽出物5.8gを得た。
レモン種子100gの粉砕物に、エタノールを1L加え、一昼夜抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン種子のエタノール抽出物2.2gを得た。
レモン乾燥果皮100gの粉砕物に、精製水1Lを加え、95〜100℃で2時間抽出した。濾過した後、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してレモン果皮の熱水抽出物33.2gを得た。
レモン乾燥果皮100gに、50%エタノール水溶液を1L加え、室温で1週間抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン果皮の50%エタノール抽出物28.6gを得た。
レモン乾燥果皮100gに、エタノールを1L加え、室温で1週間抽出した。濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、レモン果皮のエタノール抽出物19.5gを得た。
以下に、実施例1において製造した製造例1〜9のレモンの抽出物を用いた、幹細胞に対する未分化状態維持効果及び増殖促進効果の実験例とその結果を示す。
Dulbecco’s Modified Eagle Medium培養液(Gibco社製)に、ウシ胎児血清(FBS、15%、Sigma社製)、ヌクレオシド液(100倍希釈、大日本製薬社製)、非必須アミノ酸液(100倍希釈、大日本製薬社製)、β2−メルカプトエタノール液(100倍希釈、大日本製薬社製)、L−グルタミン液(100倍希釈、大日本製薬社製)、ペニシリン(100unit/mL、Sigma社製)とストレプトマイシン(100μg/mL、Sigma社製)を加えて調製した培地を用いて、マウス胚性幹細胞(マウスES細胞:コスモバイオ社製)を、ゼラチン(Sigma社製)でコートした6cmディッシュに5x105個播種し、各抽出物(製造例1〜9)を最終濃度が0.01%になるように培地に添加し、3日間培養を続けた。
Nanog(未分化マーカー)用プライマーセット:
ATGCCTGCAGTTTTTCATCC(配列番号1)
GAGGCAGGTCTTCAGAGGAA(配列番号2)
Gapdh(内部標準)用のプライマーセット:
TGCACCACCAACTGCTTAGC(配列番号3)
TCTTCTGGGTGGCAGTGATG(配列番号4)
ヒト幹細胞培養液(TOYOBO社製)を用いて培養したヒト体性幹細胞(DSファーマバイオメディカル社製)を、6cmディッシュに3x105個播種し、レモンの抽出物(製造例1〜9)を最終濃度が0.01%になるように添加し、3日間培養を続けた。
製造例1〜9で製造したレモンの抽出物を配合した製品の処方例を以下に示す。
(処方例1)ローション
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.1,3−ブチレングリコール 8.0
3.グリセリン 2.0
4.キサンタンガム 0.02
5.クエン酸 0.01
6.クエン酸ナトリウム 0.1
7.エタノール 5.0
8.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
9.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(40E.O.) 0.1
10.香料 0.1
11.精製水 残量
成分1〜6及び11と、成分7〜10をそれぞれ均一に溶解した後、両者を混合し濾過しローションを調製する。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.スクワラン 5.5
3.オリーブ油 3.0
4.ステアリン酸 2.0
5.ミツロウ 2.0
6.ミリスチン酸オクチルドデシル 3.5
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ベヘニルアルコール 1.5
9.モノステアリン酸グリセリン 2.5
10.香料 0.1
11.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
12.パラオキシ安息香酸エチル 0.05
13.1,3−ブチレングリコール 8.5
14.精製水 残量
成分2〜9を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び11〜14を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。次いで、油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分10を加え、さらに30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.スクワラン 5.0
3.オリーブ油 5.0
4.ホホバ油 5.0
5.セタノール 1.5
6.モノステアリン酸グリセリン 2.0
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(20E.O.) 2.0
9.香料 0.1
10.プロピレングリコール 1.0
11.グリセリン 2.0
12.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
13.精製水 残量
成分2〜8を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び10〜13を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分9を加え、さらに30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.エタノール 5.0
3.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
4.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.1
5.香料 適量
6.1,3−ブチレングリコール 5.0
7.グリセリン 5.0
8.キサンタンガム 0.1
9.カルボキシビニルポリマー 0.2
10.水酸化カリウム 0.2
11.精製水 残量
成分2〜5と、成分1及び6〜11をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 2.0
2.ポリオキシエチレンセチルエーテル(30E.O.) 2.0
3.モノステアリン酸グリセリン 10.0
4.流動パラフィン 5.0
5.セタノール 6.0
6.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
7.プロピレングリコール 10.0
8.精製水 残量
成分2〜5を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び6〜8を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.ポリビニルアルコール 12.0
3.エタノール 5.0
4.1,3−ブチレングリコール 8.0
5.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
6.パラオキシエチレン硬化ヒマシ油(20E.O.) 0.5
7.クエン酸 0.1
8.クエン酸ナトリウム 0.3
9.香料 適量
10.精製水 残量
成分1〜10を均一に溶解し製品とする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 5.0
2.乾燥コーンスターチ 25.0
3.カルボキシメチルセルロースカルシウム 20.0
4.微結晶セルロース 40.0
5.ポリビニルピロリドン 7.0
6.タルク 3.0
成分1〜5を混合し、次いで10%の水を結合剤として加えて、押出し造粒後乾燥する。成形した顆粒に成分6を加えて混合し打錠する。1錠0.52gとする。
処方 配合量(重量%)
1.レモンの抽出物 0.1
2.ステビア 0.05
3.リンゴ酸 5.0
4.香料 0.1
5.精製水 残量
成分1〜4を成分5の一部の精製水に撹拌溶解する。次いで、成分5の残りの精製水を加えて混合し、90℃に加熱して50mLのガラス瓶に充填する。
Claims (7)
- レモンの葉、種子、または果皮の熱水もしくは水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物を有効成分として含有する胚性または体性幹細胞の未分化状態維持剤。
- レモンの葉、種子、または果皮の熱水もしくは水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物を有効成分として含有する胚性または体性幹細胞の増殖促進剤。
- 胚性または体性幹細胞を、レモンの葉、種子、または果皮の熱水もしくは水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、胚性または体性幹細胞の製造方法。
- 胚性または体性幹細胞を、レモンの葉、種子、または果皮の熱水もしくは水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、胚性または体性幹細胞の未分化状態維持方法。
- 胚性または体性幹細胞を、レモンの葉、種子、または果皮の熱水もしくは水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、胚性または体性幹細胞の増殖促進方法。
- 請求項1または2に記載の剤を含む、体性幹細胞の未分化状態維持用または増殖促進用化粧品、医薬品、または医薬部外品。
- 請求項1または2に記載の剤を含む、体性幹細胞の未分化状態維持用または増殖促進用飲食品。
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