JP7287653B2 - 幹細胞の増殖促進剤 - Google Patents
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Description
(1)マンネンタケ胞子の超臨界抽出物、又は、マンネンタケ胞子の水及び/又は有機溶媒抽出物を有効成分として含有する幹細胞の増殖促進剤。
(2)幹細胞を、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物、又は、マンネンタケ胞子の水及び/又は有機溶媒抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の増殖促進方法。
(3)幹細胞を、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物、又は、マンネンタケ胞子の水及び/又は有機溶媒抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の製造方法。
(4)(1)に記載の幹細胞の増殖促進剤を含む、幹細胞増殖促進用組成物。
本発明に係る幹細胞の増殖促進剤は、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物、又は、マンネンタケ胞子の水及び/又は有機溶媒抽出物(以下、これらを総称して「マンネンタケ胞子の抽出物」と記載する場合がある)を有効成分として含有する。
マンネンタケの抽出物を以下のとおり製造した。
マンネンタケの胞子100gに、蒸留水1Lを加え、100℃で2時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して、マンネンタケ胞子の熱水抽出物を11g得た。
内容積5Lの抽出槽にマンネンタケの胞子1kgを仕込み、これに超臨界二酸化炭素(温度60℃、圧力25MPa、二酸化炭素供給量15m3)を約4.5時間供給し、抽出槽に接続した分離槽(温度40℃、圧力4MPa)に導いて炭酸ガスと抽出物を分離し、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物を15.9g得た。
マンネンタケ子実体の粉砕物20gに蒸留水1Lを加え、100℃にて1時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して、マンネンタケ子実体の熱水抽出物を1.4g得た。
内容積5Lの抽出槽にマンネンタケ子実体の粉砕物1kgを仕込み、これに超臨界二酸化炭素(温度60℃、圧力25MPa、二酸化炭素供給量15m3)を約4.5時間供給し、抽出槽に接続した分離槽(温度40℃、圧力4MPa)に導いて炭酸ガスと抽出物を分離し、マンネンタケ子実体の超臨界抽出物を10.1g得た。
以下に、実施例1において製造したマンネンタケの抽出物を用いた、幹細胞に対する増殖促進効果の実験例とその結果を示す。
表皮由来細胞として市販の正常ヒト成人表皮角化細胞(クラボウ社製)を用い、特開2017-055721号公報に記載の方法に準じて、NGFR(nerve growth factor receptor:GenBank number: Nucleotide NM_002507.3; Protein NP_002498.1)を指標として表皮幹細胞を分離した。HuMedia-KG2培地(クラボウ社製)で維持した上記表皮幹細胞を、細胞数が5×103個となるように96ウェルプレート(Falcon社製)に播種した。次に、被験物質(実施例1で製造したマンネンタケの各抽出物)の最終濃度が100μg/mL となるように添加し、24時間培養した。培養終了後、細胞をPBS(-)にて3回洗浄し、細胞数をカウントした。被験物質未添加時の総細胞数をコントロールとし、コントロールを100(%)とした場合の、被験物質添加時の細胞数の増減(%)を算出し、幹細胞増殖促進効果の評価を行った。
真皮由来細胞として市販のヒト皮膚線維芽細胞(東洋紡株式会社製)を用い、特開2017-093383号公報に記載の方法に準じて、NGFR(nerve growth factor receptor:GenBank number: Nucleotide NM_002507.3; Protein NP_002498.1)を指標として真皮幹細胞を分離した。1%FBS Minimum Essential Media alpha培地(Gibco社製)で維持した上記真皮幹細胞を、細胞数が5×103個となるように96ウェルプレート(Falcon社製)に播種した。次に、被験物質(実施例1で製造したマンネンタケの各抽出物)の最終濃度が100μg/mL となるように添加し、24時間培養した。培養終了後、細胞をPBS(-)にて3回洗浄し、細胞数をカウントした。被験物質未添加時の総細胞数をコントロールとし、コントロールを100(%)とした場合の、被験物質添加時の細胞数の増減(%)を算出し、幹細胞増殖促進効果の評価を行った。
造血幹細胞としてA6細胞(RIKEN BRC Cell Bank)を用いた。20%FBS DMEM/F12 (10μg/mL bovine insulin, 10μg/mL bovine Transferrin, 10ng/mL bFGF)培地(Gibco社製)で維持した上記造血幹細胞を、細胞数が2×104個となるように96ウェルプレート(Falcon社製)に播種した。次に、被験物質(実施例1で製造したマンネンタケの各抽出物)の最終濃度が100μg/mlとなるように添加し、36時間培養した。培養終了後、細胞をPBS(-)にて3回洗浄し、細胞数をカウントした。被験物質未添加時の総細胞数をコントロールとし、コントロールを100(%)とした場合の、被験物質添加時の細胞数の増減(%)を算出し、幹細胞増殖促進効果の評価を行った。
神経幹細胞としてMEB5細胞(JCRB細胞バンク)を使用した。Dulbecco's Modified Eagle's Medium-high glucose(5μg/mL insulin, 10ng/mL EGF, 50μg/mL holo-transferrin, 10ng/mL biotin, 30nM Na-selenite)培地(Sigma社製)で維持した上記神経幹細胞を、細胞数が1×104個となるように96ウェルプレート(Falcon社製)に播種した。次に、被験物質(実施例1で製造したマンネンタケの各抽出物)の最終濃度が100μg/ml となるように添加し、24時間培養した。培養終了後、細胞をPBS(-)にて3回洗浄し、細胞数をカウントした。被験物質未添加時の総細胞数をコントロールとし、コントロールを100(%)とした場合の、被験物質添加時の細胞数の増減(%)を算出し、幹細胞増殖促進効果の評価を行った。
マンネンタケの超臨界抽出物の効果が顕著であった(製造例2)。なお、本実験例で用いた幹細胞以外に、胚性の幹細胞(ES細胞)についても同様な試験を行ったところ、顕著な幹細胞増殖促進効果が認められた。
Claims (4)
- マンネンタケ胞子の超臨界抽出物を有効成分として含有する幹細胞の増殖促進剤であって、前記幹細胞が、表皮幹細胞、真皮幹細胞、造血幹細胞、及び神経幹細胞から選択されるいずれかの幹細胞である、幹細胞の増殖促進剤。
- 幹細胞を、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の増殖促進方法であって、前記幹細胞が、表皮幹細胞、真皮幹細胞、造血幹細胞、及び神経幹細胞から選択されるいずれかの幹細胞である、幹細胞の増殖促進方法。
- 幹細胞を、マンネンタケ胞子の超臨界抽出物を含有する培地で培養する工程を含む、幹細胞の製造方法であって、前記幹細胞が、表皮幹細胞、真皮幹細胞、造血幹細胞、及び神経幹細胞から選択されるいずれかの幹細胞である、幹細胞の製造方法。
- 請求項1に記載の幹細胞の増殖促進剤を含む、表皮幹細胞、真皮幹細胞、造血幹細胞、及び神経幹細胞から選択されるいずれかの幹細胞増殖促進用組成物。
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JP2015137244A (ja) | 2014-01-21 | 2015-07-30 | 日本メナード化粧品株式会社 | 腸管免疫賦活剤 |
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Biotechnol. Prog.,2013年,Vol.29, No.3,pp.738-744 |
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