JP6495869B2 - ヒアルロン酸産生促進能を有する乳酸菌 - Google Patents
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Description
本発明は、高いヒアルロン酸産生促進能を有する乳児腸内由来の乳酸菌の菌株及び当該乳酸菌の処理物を含有する飲料、食品に関するものである。
近年、皮膚の老化防止に関する研究が広く行われている。皮膚老化の原因は、加齢が重要な因子であるが、それに加えて乾燥、酸化、紫外線等による影響も皮膚老化に関わる直接的な因子として挙げられる。皮膚老化の具体的な現象としては、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類の減少、コラーゲンの架橋反応、紫外線による細胞の損傷などが知られている。
ここで、ヒアルロン酸は皮膚、関節、靭帯、肺、腎臓、脳などの臓器・組織に広く存在しており、保湿性の高さから皮膚の潤いを保つ重要な因子である（非特許文献１）。また、皮膚には体全体の５０％を占める量のヒアルロン酸が存在していることが知られている（非特許文献２）。
Papakonstantinou E.,:Hyaluronic acid : A Keymoleculein skin aging, Dermatoendocrinol, 4 (3), 253-8, 2012
T. C. Laurent and J. R. Fraser, "Hyaluronan,"FASEB J, Vol.6, pp.2397-2402, 1992
本発明者らは、肌機能の改善にはヒアルロン酸が必要不可欠である点に着目し、複数の乳酸菌についてスクリーニングを行った結果、高いヒアルロン酸産生促進能を有する乳酸菌あることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本願第一の発明は、ヒアルロン酸産生促進能を有するラクトバチルス属に属する乳酸菌であり、本願第二の発明は、本願第一の発明に記載の乳酸菌が、ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）である。
さらに、本願出願人は、当該乳酸菌を含む飲食品も意図している。すなわち、本願第三の発明は、本願第二の発明に記載の乳酸菌を含有する飲食品である。
本発明の乳酸菌はヒアルロン酸産生促進能を有する。
以下、本発明を詳細に説明する。
１．ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）
本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス・ガセリ（lactobacillus gasseri）である。特にラクトバチルス・ガセリに属する乳酸菌のうち、ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）である。本発明にいうN320の記号は日清食品ホールディングス株式会社で独自に菌株に付与した番号であり、本ラクトバチルス・ガセリN320株は本発明者によって初めて分離されたものである。
１．ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）
本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス・ガセリ（lactobacillus gasseri）である。特にラクトバチルス・ガセリに属する乳酸菌のうち、ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）である。本発明にいうN320の記号は日清食品ホールディングス株式会社で独自に菌株に付与した番号であり、本ラクトバチルス・ガセリN320株は本発明者によって初めて分離されたものである。
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株は、下記の条件で寄託されている。
（１）寄託機関名：独立行政法人製品技術基盤機構 特許微生物寄託センター
（２）連絡先：〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室
（３）受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２２８７
（４）識別のための表示：Ｎ３２０
（５）原寄託日：２０１６年６月１４日
（６）ブダペスト条約に基づく寄託への移管日：２０１７年４月１０日
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株の菌学的性質は、以下の表１及び表２に示す通りである。本菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法による。表１は本菌株に関する形状等を、表２はアピ50CH及びアピCHL（ビオメリュー製）により、糖資化性を試験した結果を示す。表２において、「＋」が発酵性あり、「−」は発酵性なしを示す。
（１）寄託機関名：独立行政法人製品技術基盤機構 特許微生物寄託センター
（２）連絡先：〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室
（３）受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２２８７
（４）識別のための表示：Ｎ３２０
（５）原寄託日：２０１６年６月１４日
（６）ブダペスト条約に基づく寄託への移管日：２０１７年４月１０日
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株の菌学的性質は、以下の表１及び表２に示す通りである。本菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法による。表１は本菌株に関する形状等を、表２はアピ50CH及びアピCHL（ビオメリュー製）により、糖資化性を試験した結果を示す。表２において、「＋」が発酵性あり、「−」は発酵性なしを示す。
２．ヒアルロン酸産生試験
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株は、後述する実験例に示すように、高いヒアルロン酸産生促進能を有する。ヒアルロン酸産生促進能の確認については以下の試験方法によって行った。
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株は、後述する実験例に示すように、高いヒアルロン酸産生促進能を有する。ヒアルロン酸産生促進能の確認については以下の試験方法によって行った。
＜ヒアルロン酸産生促進能評価に用いた被験体（培養液）の調製＞
ヒアルロン酸産生促進能評価に用いた被験体（培養液）は、乳酸菌を表３に示すMRS培地（Difco Lactobacilli MRS Broth）で37℃ ・24時間培養し95℃20分加熱殺菌後、水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH7.0にすることにより得た。
ヒアルロン酸産生促進能評価に用いた被験体（培養液）は、乳酸菌を表３に示すMRS培地（Difco Lactobacilli MRS Broth）で37℃ ・24時間培養し95℃20分加熱殺菌後、水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH7.0にすることにより得た。
＜ヒアルロン酸産生促進能評価＞
上記で得た試料のヒアルロン酸産生促進作用を評価した。すなわち、24ウェルプレートに、５．０×１０4細胞／ウェルの濃度で正常ヒト成人表皮角化細胞を播種し、コンフルエント状態にしたところで、各試料群（最終濃度１％）を含む５００μＬのHuMedia-KG2培養液を添加した。添加後、７２時間インキュベーションした後、ＥＬＩＳＡ法にてヒアルロン酸産生量を測定した。ヒアルロン酸産生量の測定単位はｎｇ／ｍｌとし、測定にはHyaluronan assay kit（生化学バイオビジネス社製）を使用した。なお、対照例（コントロール）として乳酸菌増殖培地（MRS）を使用した。
上記で得た試料のヒアルロン酸産生促進作用を評価した。すなわち、24ウェルプレートに、５．０×１０4細胞／ウェルの濃度で正常ヒト成人表皮角化細胞を播種し、コンフルエント状態にしたところで、各試料群（最終濃度１％）を含む５００μＬのHuMedia-KG2培養液を添加した。添加後、７２時間インキュベーションした後、ＥＬＩＳＡ法にてヒアルロン酸産生量を測定した。ヒアルロン酸産生量の測定単位はｎｇ／ｍｌとし、測定にはHyaluronan assay kit（生化学バイオビジネス社製）を使用した。なお、対照例（コントロール）として乳酸菌増殖培地（MRS）を使用した。
３．スキムミルク培地での増殖性試験
＜スキムミルク培地増殖性試験＞
前培養液を10％SM（スキムミルク）培地に接種し、これを37℃ ・24時間培養した上で、乳酸菌数によってミルク培地での増殖性を評価した。
＜スキムミルク培地増殖性試験＞
前培養液を10％SM（スキムミルク）培地に接種し、これを37℃ ・24時間培養した上で、乳酸菌数によってミルク培地での増殖性を評価した。
４．飲食品
本発明の乳酸菌は飲食品に含有せしめて使用することができる。本発明の乳酸菌は特に乳製品に好適に用いることができるが、例えば、乳酸菌入り発酵乳及び乳酸菌入り乳酸菌飲料が考えられる。現行の乳及び乳製品の成分規格等に関する省令では、成分規格として乳酸菌数は特に規定はされていないが、発酵乳（無脂乳固形分8.0％以上のもの）や乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％以上のもの）であれば1.0×10７cfu/ml以上、乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％未満のもの）であれば1.0×10６cfu/ml以上が好ましく、乳などの発酵液中で増殖させたり、最終製品の形態で増殖させたりすることによって上記の菌数を実現することができる。また、乳酸菌入り発酵乳及び乳酸菌入り乳酸菌飲料以外にも、バター等の乳製品、マヨネーズ等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等にも利用することができる。また、即席麺やクッキー等の加工食品にも好適に利用することができる。上記の他、本発明の食品は、前記乳酸菌と共に、必要に応じて適当な担体及び添加剤を添加して製剤化された形態（例えば、粉末、顆粒、カプセル、錠剤等）であってもよい。
本発明の乳酸菌は飲食品に含有せしめて使用することができる。本発明の乳酸菌は特に乳製品に好適に用いることができるが、例えば、乳酸菌入り発酵乳及び乳酸菌入り乳酸菌飲料が考えられる。現行の乳及び乳製品の成分規格等に関する省令では、成分規格として乳酸菌数は特に規定はされていないが、発酵乳（無脂乳固形分8.0％以上のもの）や乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％以上のもの）であれば1.0×10７cfu/ml以上、乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％未満のもの）であれば1.0×10６cfu/ml以上が好ましく、乳などの発酵液中で増殖させたり、最終製品の形態で増殖させたりすることによって上記の菌数を実現することができる。また、乳酸菌入り発酵乳及び乳酸菌入り乳酸菌飲料以外にも、バター等の乳製品、マヨネーズ等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等にも利用することができる。また、即席麺やクッキー等の加工食品にも好適に利用することができる。上記の他、本発明の食品は、前記乳酸菌と共に、必要に応じて適当な担体及び添加剤を添加して製剤化された形態（例えば、粉末、顆粒、カプセル、錠剤等）であってもよい。
本発明の乳酸菌は、一般の飲料や食品以外にも特定保健用食品、栄養補助食品等に含有させることも有用である。
また、本発明の乳酸菌は、食品以外にも化粧水等の化粧品分野、整腸剤等の医薬品分野、歯磨き粉等の日用品分野、サイレージ、動物用餌、植物液体肥料等の動物飼料・植物肥料分野においても応用可能である。
本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・ガセリN320株）は、高いヒアルロン酸産生促進能を有する。
以下、本発明の実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
＜試験例１＞ヒアルロン酸産生促進能評価
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株と、自社保有の3つのラクトバチルス・ガセリ比較菌株（N219、N220、N313）についてヒアルロン酸産生促進能評価を実施した。
＜試験例１＞ヒアルロン酸産生促進能評価
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株と、自社保有の3つのラクトバチルス・ガセリ比較菌株（N219、N220、N313）についてヒアルロン酸産生促進能評価を実施した。
ヒアルロン酸産生促進能力評価は次の手順により行った。本発明の菌株と比較菌株のそれぞれについて、表３に示すMRS培地（Difco Lactobacilli MRS Broth）で37℃ ・24時間培養し95℃20分加熱殺菌後、水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH7.0にすることにより被験体（培養液）を得た。
別途、24ウェルプレートに、５．０×１０4細胞／ウェルの濃度で正常ヒト成人表皮角化細胞を播種し、コンフルエント状態にしたところで、各試料群（最終濃度１％）を含む５００μＬのHuMedia -KG2培養液を添加した。添加後、７２時間インキュベーションした後、ＥＬＩＳＡ法にてヒアルロン酸産生量を測定した。なお対照例（コントロール）としては、乳酸菌増殖培地（MRS）を用いた。測定にはHyaluronan assay kit（生化学バイオビジネス社製）を用いた。測定値の単位はヒアルロン酸産生量（ｎｇ／ｍｌ）を示す。
乳酸菌増殖培地（MRS培地）を0とした各菌株のヒアルロン酸産生量を表４及び図１に示す。
表４及び図１からも明らかなように、本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・ガセリN320株）のヒアルロン酸産生促進能力は非常に強く、他の自社保有の乳酸菌と比べても高いヒアルロン酸産生促進能力を有していることが確認された。
＜試験例２＞スキムミルク培地増殖性試験
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株と、自社保有の3つのラクトバチルス・ガセリ比較菌株（N219、N220、N313）について、スキムミルク培地増殖性試験を実施した。
本発明のラクトバチルス・ガセリN320株と、自社保有の3つのラクトバチルス・ガセリ比較菌株（N219、N220、N313）について、スキムミルク培地増殖性試験を実施した。
10％SM（スキムミルク）培地に各菌株を植菌し、これを37℃ ・24時間培養した上で、乳酸菌数によってスキムミルク培地での増殖性を評価した。
増殖性の評価結果を表５及び図２に示す。
本発明の菌株（ラクトバチルス・ガセリN320株）の菌数は22×107cfu/mlであり、他の比較菌株と比べて増殖性が高く、乳酸菌入り発酵乳及び乳酸菌入り乳酸菌飲料を生産する上で問題のないレベルであった。
Claims (3)
- ラクトバチルス・ガセリN320株（NITE BP-02287）。
- 請求項１に記載の菌株を含有する飲食品。
- 請求項１に記載の菌株を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤。
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