JP2015073483A - 消化管粘膜付着性を有する乳酸菌 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ラクトース資化能を有し、かつ高い乳中生育能及びラクトバチルス・ラムノーサスGG株と同等又はそれ以上の消化管粘膜付着性を有する、非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌、並びに非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌を、グルコースと比較して胃ムチン付着性を増加させる糖を炭素源として培養することを含む、非腸管系乳酸菌の消化管粘膜付着性を増強する方法。
【選択図】なし
Description
[1] ラクトース資化能を有し、かつ高い乳中生育能及びラクトバチルス・ラムノーサスGG株と同等又はそれ以上の消化管粘膜付着性を有する、非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌。
[2] 消化管粘膜付着性が、胃ムチン付着性を指標として測定される、上記[1]に記載の乳酸菌。
[3] フルクトース存在下での培養により消化管粘膜付着性がさらに増強される、上記[1]又は[2]に記載の乳酸菌。
[4] ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)に属する、上記[1]〜[3]に記載の乳酸菌。
[5] ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)No.7-1株(受託番号NITE P-01665)である、上記[4]に記載の乳酸菌。
[6] ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)に属する、上記[1]又は[2]に記載の乳酸菌。
[7] ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)No.6-8株(受託番号NITE P-01664)又はNo.8-1株(受託番号NITE P-01666)である、上記[6]に記載の乳酸菌。
[8] 上記[1]〜[7]に記載の乳酸菌を含む、飲食品。
[9] 発酵食品である、上記[8]に記載の飲食品。
[10] 発酵乳である、上記[8]又は[9]に記載の飲食品。
[11] 上記[1]〜[7]に記載の乳酸菌を用いて発酵を行うことを含む、飲食品の製造方法。
[12] 乳酸菌を用いて乳を発酵させる、上記[11]に記載の方法。
[13] フルクトースの存在下で発酵を行う、上記[11]又は[12]に記載の方法。
[14] フルクトース及び1.5%以下の酢酸ナトリウム存在下で発酵を行う、上記[13]に記載の方法。
[15] 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌を、グルコースと比較して胃ムチン付着性を増加させる糖を炭素源として培養することを含む、非腸管系乳酸菌の消化管粘膜付着性を増強する方法。
[16] 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)であり、グルコースと比較して胃ムチン付着性を増加させる糖がフルクトースである、上記[15]に記載の方法。
[17] 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)No.7-1株(受託番号NITE P-01665)である、上記[15]又は[16]に記載の方法。
[18] 培地が、1.5%以下の酢酸ナトリウムをさらに含む、上記[16]又は[17]に記載の方法。
付着性試験による乳酸菌のスクリーニング
付着性試験には、22株の乳製品(発酵乳、バター状製品、及び馬乳酒)由来の非腸管系乳酸菌(ラクトコッカス属、ペディオコッカス属、ロイコノストック属、ラクトバチルス属、及びストレプトコッカス属乳酸菌;図1)を用いた。また、公知のラクトバチルス・ラムノーサスGG株(Lactobacillus rhamnosus GG)をAmerican Type Culture Collection(ATCC)(Manassas, VA, USA)(アクセッション番号ATCC 53103)より購入し、陽性対照株として用いた。ラクトバチルス・ラムノーサスGG株はブタ胃ムチンへの強い付着性を有することが知られている(Styriak et al., (2003) Lett. Appl. Microbiol., 37: 329-333)。
これらの使用菌株は、付着性試験の前に、MRS培地(1% プロテオースペプトンNo.3、1% ビーフエキス、0.5% 酵母エキス、2%グルコース、0.1% Tween 80、0.2% クエン酸アンモニウム、0.5% 酢酸ナトリウム、0.01% 硫酸マグネシウム、0.005% 硫酸マンガン、及び0.2% リン酸二カリウム(pH6.5))で一昼夜にわたり前培養を行った。前培養の培養温度はラクトコッカス属、ペディオコッカス属、及びロイコノストック属乳酸菌は30℃、ラクトバチルス属乳酸菌及びストレプトコッカス属乳酸菌は37℃とした。
乳酸菌株 受託番号
No.6-8株 … NITE P-01664
No.7-1株 … NITE P-01665
No.8-1株 … NITE P-01666
付着性への炭素源の影響
付着性が優れていた上記選抜3株(No.6-8株、No.8-1株及びNo.7-1株)について、培地中の炭素源が胃ムチンへの付着性に及ぼす影響を調べた。対照菌株としてはラクトバチルス・ラムノーサスGG株を用いた。炭水化物(グルコース)を含まないMRS培地(C free MRS)を調製した。この培地には、1% プロテオースペプトン、0.5% 酵母エキス、0.1% Tween 80、0.2% クエン酸アンモニウム、0.5% 酢酸ナトリウム、0.01% 硫酸マグネシウム、0.005% 硫酸マンガン、及び0.2% リン酸二カリウムが含まれている(pH6.5)。グルコース、フルクトース、ラクトース、ガラクトース、及びキシロースの10%溶液(糖液)をそれぞれ作製し、フィルター(0.2 μm, Advantec, Tokyo)で濾過滅菌した。滅菌済の糖液をC free MRS 培地に最終濃度が2%になるように添加した。それぞれの培地に、実施例1と同様にして前培養した乳酸菌体を1%濃度で接種し、一昼夜(18〜24時間)培養した。培養後の菌体は0.85%塩化ナトリウム溶液にて2回洗浄し、実施例1と同様の手順で付着性試験を行った。
菌体処理の付着性への影響
上記選抜3株について、菌体に物理的処理又は化学的処理を施し、菌体の付着性への影響を調べた。試験群として、加熱処理群、UV照射群、塩化リチウム(LiCl)処理群、塩酸グアニジン(GHCl)処理群、過ヨウ素酸処理群、及びトリプシン処理群を用意した。
・対照群(非処理群): 水
・加熱処理群、UV照射群、及び対照群(物理的非処理群): 0.85% NaCl水溶液
・塩化リチウム処理群: 5.0 M 塩化リチウム(LiCl)水溶液
・塩酸グアニジン処理群: 4 M 塩酸グアニジン(GHCl)水溶液
・対照群(過ヨウ素酸非処理群): 0.1 M クエン酸-リン酸-0.1 M NaCl水溶液(pH 4.5)(バッファーA)
・過ヨウ素酸処理群: 0.05 M 過ヨウ素酸ナトリウム含有バッファーA
・対照群(トリプシン非処理群): 0.05 M Tris-HCl-0.1 M NaCl水溶液(pH 8.0)(バッファーB)
・トリプシン処理群: 5.0 mg/ml トリプシン(Nacalai tesque, Kyoto, Japan)含有バッファーB(Greene and Klaenhammer 1994; Kinoshita et al., 2007)
酢酸ナトリウムの付着性への影響
炭水化物と酢酸ナトリウムを除いたMRS培地にフルクトース、グルコース、又はガラクトースを2.0%になるように添加し、さらに、酢酸ナトリウムを0%、0.5%、1.0%、2%濃度で添加した。これらの培地にNo.7-1株を1%濃度で接種し、30℃で一昼夜培養した。得られた培養菌体を実施例1と同様にして洗浄し、付着性試験に供した。
酢酸ナトリウム存在下での菌体の疎水性変化の分析
炭水化物と酢酸ナトリウムを除いたMRS培地にフルクトースを2.0%になるように添加し、さらに、酢酸ナトリウムを0%、0.5%濃度で添加した。これらの培地にNo.7-1株を1%濃度で接種し、30℃で一昼夜(18時間)培養した。菌体を水で3回洗浄した後、既報の方法(Kimoto et al., (2010) Int. J. Food Microbiol., 143: 226-229)に従って細胞の疎水性を測定した。
乳中生育能の評価
各種乳酸菌の乳中生育能を評価した。まず用いた乳酸菌株は、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスNo.2-5株、No.6-8株、No.8-1株、及びNo.5-10株、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスNo.7-1株、並びにラクトバチルス・ガセリJCM 1025株及びJCM 1130株である。なおJCM 1025株及びJCM 1130株は、それぞれヒト腸管、ヒト糞便由来の菌株であり、理化学研究所バイオリソースセンター(RIKEN BRC)微生物材料開発室(Japan Collection of Microorganisms)(茨城県つくば市高野台3-1-1)から入手できる。
Claims (18)
- ラクトース資化能を有し、かつ高い乳中生育能及びラクトバチルス・ラムノーサスGG株と同等又はそれ以上の消化管粘膜付着性を有する、非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌。
- 消化管粘膜付着性が、胃ムチン付着性を指標として測定される、請求項1に記載の乳酸菌。
- フルクトース存在下での培養により消化管粘膜付着性がさらに増強される、請求項1又は2に記載の乳酸菌。
- ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)に属する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の乳酸菌。
- ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)No.7-1株(受託番号NITE P-01665)である、請求項4に記載の乳酸菌。
- ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)に属する、請求項1又は2に記載の乳酸菌。
- ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)No.6-8株(受託番号NITE P-01664)又はNo.8-1株(受託番号NITE P-01666)である、請求項6に記載の乳酸菌。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の乳酸菌を含む、飲食品。
- 発酵食品である、請求項8に記載の飲食品。
- 発酵乳である、請求項8又は9に記載の飲食品。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の乳酸菌を用いて発酵を行うことを含む、飲食品の製造方法。
- 乳酸菌を用いて乳を発酵させる、請求項11に記載の方法。
- フルクトースの存在下で発酵を行う、請求項11又は12に記載の方法。
- フルクトース及び1.5%以下の酢酸ナトリウム存在下で発酵を行う、請求項13に記載の方法。
- 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌を、グルコースと比較して胃ムチン付着性を増加させる糖を炭素源として培養することを含む、非腸管系乳酸菌の消化管粘膜付着性を増強する方法。
- 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)であり、グルコースと比較して胃ムチン付着性を増加させる糖がフルクトースである、請求項15に記載の方法。
- 非腸管系ラクトコッカス属又はラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)No.7-1株(受託番号NITE P-01665)である、請求項15又は16に記載の方法。
- 培地が、1.5%以下の酢酸ナトリウムをさらに含む、請求項16又は17に記載の方法。
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