JP6353478B2 - セロトニン分泌促進能力を有するビフィズス菌 - Google Patents
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Description
1.ビフィドバクテリウム・ロンガムN61株(NITE BP-02214)
本発明のビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)である。特にビフィドバクテリウム・ロンガムに属するビフィズス菌のうち、ビフィドバクテリウム・ロンガムN61株(NITE BP-02214)である。本発明にいうN61の記号は日清食品ホールディングス株式会社で独自に菌株に付与した番号であり、本ビフィドバクテリウム・ロンガムN61株は本発明者によって初めて分離されたものである。
(1)寄託機関名:独立行政法人製品技術基盤機構 特許微生物寄託センター
(2)連絡先:〒292−0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 122号室
(3)受託番号:NITE BP−02214
(4)識別のための表示:N61
(5)原寄託日:2016年3月3日
(6)ブダペスト条約に基づく寄託への移管日:2017年1月5日
本発明のビフィドバクテリウム・ロンガムN61株の菌学的性質は、以下の表1及び2に示す通りである。本菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法による。表1は本菌株に関する形状等を、表2はアピ50CH及びアピCHL(ビオメリュー製)により、糖資化性を試験した結果を示す。表2において、「+」は発酵性あり、「−」は発酵性なしを示す。
本発明のビフィドバクテリウム・ロンガムN61株は、後述する実験例に示すように、高いセロトニン分泌促進能力を有する。セロトニン分泌促進能力の確認については以下の試験方法によって行った。
セロトニン分泌促進能力評価に用いた被験体(培養液)は、ビフィズス菌を表3に示すGAM培地(GAM Broth“Nissui”)で37℃ ・24時間培養することにより得た。
セロトニン分泌促進能力評価では、細胞としてラットすい臓がん由来のエンテロクロマフィン様細胞であるRIN14B細胞(ATCC)使用した。はじめに、10%ウシ胎児血清(Invitrogen)と100 U/mLペニシリン(Sigma)、100 μg/mLストレプトマイシン、25ug/mlアムホテリシンB(Sigma)、0.2% NaHCO3(gibco)、1mM L-Glutamine(gibco)、4.5g/L D-Glucose(gibco)、2.383g/L HEPES Buffer(gibco)、110mg/L Sodium Pyruvate(gibco)を加えたRPMI1640培地(gibco)を用いて、RIN14B細胞を37℃、5% CO2条件下で培養した。アッセイ時にはシャーレ内で培養したRIN14B細胞をAccutase(Innova Cell Technologies)を用いて剥がした後(37℃・10分インキュベート)、24ウェルプレートに2×105Cell/mlのRIN14B細胞を500μlずつ播種し、37℃、5%CO2で1時間インキュベーションした。細胞数カウントにはセルカウンターであるCountess(invitrogen)を用いた。上記で得た被験体(ビフィズス菌培養液)を濁度Optical Density(OD)の値にて一定に調整後、RIN14B細胞培養用培地で20倍に希釈し、RIN14B細胞播種及びインキュベートしたウェルに対して終濃度10%になるように添加し、37℃、5% CO2条件下で24時間培養した。培養後、被験体を添加したRIN14B細胞の培養上清を回収し、上清中のセロトニン含量を市販のセロトニンイムノアッセイキット(Enzo社)で測定した。
<スキムミルク培地増殖性試験>
前培養液を10%SM(スキムミルク)培地に植菌し、これを37℃ ・24時間培養し、ビフィズス菌数によってミルク培地での増殖性を評価した。
本発明のビフィズス菌は飲食品に含有せしめて使用することができる。本発明のビフィズス菌は特に乳製品に好適に用いることができるが、例えば、ビフィズス菌入り発酵乳及びビフィズス菌入り乳酸菌飲料が考えられる。現行の乳及び乳製品の成分規格等に関する省令では、成分規格としてビフィズス菌数は特に規定はされていないが、発酵乳(無脂乳固形分8.0%以上のもの)や乳酸菌飲料(無脂乳固形分3.0%以上のもの)であれば1.0×107cfu/ml以上、乳酸菌飲料(無脂乳固形分3.0%未満のもの)であれば1.0×106cfu/ml以上が好ましく、乳などのはっ酵液中で増殖させたり、最終製品の形態で増殖させたりすることによって上記の菌数を実現することができる。また、ビフィズス菌入り発酵乳及びビフィズス菌入り乳酸菌飲料以外にも、バター等の乳製品、マヨネーズ等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等にも利用することができる。また、即席麺やクッキー等の加工食品にも好適に利用することができる。上記の他、本発明の食品は、前記ビフィズス菌と共に、必要に応じて適当な担体及び添加剤を添加して製剤化された形態(例えば、粉末、顆粒、カプセル、錠剤等)であってもよい。
<試験例1>セロトニン分泌促進能力評価
本発明のビフィドバクテリウム・ロンガムN61株と、自社保有の2つのビフィドバクテリウム・ロンガム比較菌株(BL1、BL2)及び基準株のビフィドバクテリウム・ロンガム(JCM1217)についてセロトニン分泌促進能力評価を実施した。
本発明のビフィドバクテリウム・ロンガムN61株と、自社保有の2つのビフィドバクテリウム・ロンガム比較菌株(BL1、BL2)及び基準株のビフィドバクテリウム・ロンガム(JCM1217)について、スキムミルク培地増殖性試験を実施した。
Claims (3)
- ビフィドバクテリウム・ロンガムN61株(NITE BP−02214)。
- 請求項1に記載のビフィズス菌を含有する飲食品。
- 請求項1に記載のビフィズス菌を有効成分とするセロトニン分泌促進剤。
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