KR102332867B1

KR102332867B1 - 유산균, 그 유산균 유래의 자연 면역 활성화제, 감염증 예방 치료제 및 음식품

Info

Publication number: KR102332867B1
Application number: KR1020177018233A
Authority: KR
Inventors: 가즈히사 세키미즈
Original assignee: 가부시키가이샤 게놈소야쿠겡큐쇼; 가부시키가이샤 안테나; 고쿠리츠다이가쿠호우진 도쿄다이가쿠
Priority date: 2015-02-06
Filing date: 2016-02-04
Publication date: 2021-11-29
Also published as: US20180243352A1; CN107208040B; EP3255140A4; US10265352B2; WO2016125861A1; EP3255140A1; JP6594911B2; CN107208040A; KR20170110076A; JPWO2016125861A1

Abstract

높은 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균을 제공하는 것이고, 또한 그 유산균 또는 그 유산균에서 유래하는 것을 함유하는 자연 면역 활성화제, 감염증 예방 치료제, 그것들을 함유하는 음식품을 제공하는 것을 과제로 하며, NITE 의 NPMD 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 유산균, 그 유산균 또는 그 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균으로서 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균, 배열 번호 1 로 나타내는 16S rDNA 영역의 염기 배열을 갖는 유산균, 그 유산균, 그 유산균의 사균 또는 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 그 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 감염증 예방 치료제, 그것들을 함유하는 음식품에 의해 상기 과제를 해결하였다.

Description

유산균, 그 유산균 유래의 자연 면역 활성화제, 감염증 예방 치료제 및 음식품{LACTIC ACID BACTERIA, NATURAL IMMUNOACTIVATOR AND INFECTION PREVENTATIVE/THERAPEUTIC DERIVED FROM SAID LACTIC ACID BACTERIA, AND FOOD/BEVERAGE}

본 발명은, 신규 유산균, 그 신규 유산균의 생균, 사균 혹은 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 그 신규 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로 하는 감염증 예방 치료제, 및, 그것들을 함유하는 음식품에 관한 것이다.

유산균은 예전부터 발효 식품에 이용되어, 음식품, 의약품, 프로바이오틱스 등의 생산에 이용되고 있다. 유산균은, 그람 양성, 카탈라아제 음성, 내생포자를 형성하지 않거나, 운동성이 없거나 한다는 특징이 있다.

락토바실러스 파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum, L. paraplantarum) 은 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum, L. plantarum) 에 유연 (類緣) 한 유산균이고, L. 파라플란타룸 (L. paraplantarum), L. 플란타룸 (L. plantarum) 은 모두 비병원성의 그람 양성의 유산균으로, 헤테로유산 발효를 하는 것이 알려져 있다 (비특허문헌 6).

또, 일부 종이나 아종에서는 전체 게놈이 해독되어 있는 것 외에 (비특허문헌 1, 2), 최근에는 재조합 L. 플란타룸 (L. plantarum) 이 동물의 장표피를 통한 특이적 항원의 제시에 이용되고, 경구 섭취할 수 있는 산 감염증 예방제로서 주목받고 있다 (비특허문헌 3, 4).

한편, 자연 면역 반응에서는, 수상 세포나 매크로파지와 같은 면역 세포가 세균이나 바이러스에서 유래하는 자연 면역 활성화 물질에 응답하여 사이토카인을 산생하고, 그 후의 면역 반응이 일어나는 것이 알려져 있다. 자연 면역 기구는, 생물이 공통적으로 갖는 감염 방어 기구로, 일반적으로는 비특이적이기 때문에, 반응이 재빠르고, 또 많은 감염원에 대해 유효하게 기능하는 것이 특징이다.

지금까지 본 발명자들에 의해 자연 면역 기구밖에 없는 누에에게 있어서 자연 면역 활성화 반응을 간편하게 측정할 수 있는 평가 방법 (스크리닝 방법) 이 개발되어 있다 (특허문헌 1, 비특허문헌 5). 또한, 그 방법으로 인간 등의 척추 동물에 대해 자연 면역 활성화 작용을 갖는 자연 면역 활성화제의 평가 (스크리닝 방법) 를 할 수 있는 것이 확인되어 있다 (특허문헌 1 등).

또, 누에가 미생물 감염증에 대한 저항성 평가의 모델 동물로서 유용한 것은 본 발명자들에 의해 확인되어 있다 (특허문헌 2, 3 등).

면역 기구의 이상은 다양한 질환을 일으키는 원인이 된다. 따라서, 이와 같은 면역 기구를 원하는 바에 따라 조절하는 것이 가능한, 우수한 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제가 요망되고 있다. 또, 유산균 유래물 또는 상기 제를 함유하는 음식품이나, 상기 성능에 우수한 유산균을 이용한 음식품의 개발도 요망되고 있다.

국제 공개 WO2008/126905호 일본 공개특허공보 2007-327964호 일본 공개특허공보 2012-006917호

비특허문헌 1 : Kleerebezem M, Boekhorst J, van Kranenburg R, Molenaar D, Kuipers OP, Leer R, Tarchini R, Peters SA, Sandbrink HM, Fiers MW, Stiekema W, Lankhorst RM, Bron PA, Hoffer SM, Groot MN, Kerkhoven R, de Vries M, Ursing B, de Vos WM, Siezen RJ. Complete genome sequence of Lactobacillus plantarum WCFS1. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Feb 18 ; 100(4) : 1990-5 비특허문헌 2 : Siezen RJ, Francke C, Renckens B, Boekhorst J, Wels M, Kleerebezem M, van Hijum SA. Complete resequencing and reannotation of the Lactobacillus plantarum WCFS1 genome. J Bacteriol. 2012 Jan ; 194(1) : 195-6. 비특허문헌 3 : Grangette C, Muller-Alouf H, Goudercourt D, Geoffroy MC, Turneer M, Mercenier A. Mucosal immune responses and protection against tetanus toxin after intranasal immunization with recombinant Lactobacillus plantarum. Infect Immun. 2001 Mar ; 69(3) : 1547-53. 비특허문헌 4 : Seegers JF. Lactobacilli as live vaccine delivery vectors: progress and prospects. Trends Biotechnol. 2002 Dec ; 20(12) : 508-15. 비특허문헌 5 : Ishii K, Hamamoto H, Kamimura M, Sekimizu K. Activation of the silkworm cytokine by bacterial and fungal cell wall components via a reactive oxygen species-triggered mechanism. J Biol Chem. 2008 Jan 25 ; 283(4) : 2185-91. 비특허문헌 6 : Curk MC, Hubert JC, Bringel F. Lactobacillus paraplantarum sp. now., a new species related to Lactobacillus plantarum. Int J Syst Bacteriol. 1996 Apr ; 46(2) : 595-8.

본 발명의 과제는, 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 신규한 유산균을 제공하는 것이고, 나아가 그 유산균 또는 그 유산균의 사균 혹은 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제나, 그 유산균 또는 그 유산균에서 유래하는 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품을 제공하는 것에 있다.

또, 신규한 유산균에서 유래하는 물질을 유효 성분으로 하는 감염증 예방 치료제나 음식품을 제공하는 것에 있다.

본 발명자는, 상기의 과제를 해결하기 위하여 예의 검토를 거듭한 결과, 특정 (아종) 유산균주에, 일반적으로 자연 면역 활성화능이 있다고 일컬어지고 있는 여러 가지 것이나, 락토바실러스속 등에 속하는 다른 유산균으로서 지금까지 알려져 있는 유산균보다 높은 자연 면역 활성화능이 있는 것을 알아냈다.

또한, 상기의 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균은, 그 성상의 분석이나 16S rDNA 의 염기 배열 등의 해석 결과, 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 신규 유산균주 (이하, 「＃11-1」로 약기하는 경우가 있다) 인 것도 판명되었다.

또, 그 유산균의 펩티드글리칸 획분을 먹은 누에는, 획득 면역 기구를 갖고 있지 않음에도 불구하고 의외로 녹농균 감염 후의 생존 시간이 연장되어, 녹농균 감염에 대한 저항성이 부여되는 것을 알아내어 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 유산균을 제공하는 것이다.

또한, 상기 유산균의 단리 또는 정제된 유산균을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 유산균 또는 그 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균으로서, 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 배열표의 배열 번호 1 로 나타내는 16S rDNA 영역의 염기 배열을 갖는 상기의 유산균을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제로서,

상기 유산균의 처리물은, 유산균의 배양물 ; 농축물 ; 페이스트화물 ; 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등의 건조물 ; 액상화물 ; 희석물 ; 파쇄물 ; 살균 가공물 ; 및 ; 그 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 처리물인 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 감염증 예방 치료제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 자연 면역 활성화제를 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 감염증 예방 치료제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 유산균, 상기의 자연 면역 활성화제 또는 상기의 감염증 예방 치료제를 함유하는 음식품을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은, 상기의 유산균을 사용하여 발효하는 공정을 이용하여 제조된 음식품을 제공하는 것이고, 상기 음식품이 발효유인 음식품을 제공하는 것이다.

본 발명에 의하면, 매우 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 신규한 유산균을 제공할 수 있다.

나아가서는, 그 신규한 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 매우 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 신규한 자연 면역 활성화제를 제공하고, 그 유산균 또는 그 자연 면역 활성화제를 함유하는 (에서 유래하는) 자연 면역 활성화능이 우수한 음식품을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명에 의하면, 그 신규한 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 감염증 예방 치료제를 제공할 수 있고, 그 감염증 예방 치료제는, 경구 투여로 세균 등에 의한 감염증을 예방할 수 있다. 따라서, 그 감염증 예방 치료제를 함유하는 음식품은 감염증 예방에 효과적이다.

본 발명의 신규한 유산균이나 신규한 자연 면역 활성화제를 알아낸 스크리닝 방법은, 자연 면역 활성화 물질에 응답하여 누에 표본의 근수축이 일어나는 것을 이용하는 것으로, LPS 에 의한 의양성 (擬陽性) 의 자연 면역 활성화능 검출이 억제되어 있고, 또, 누에 개체를 사용한 측정이므로, 샘플의 ADME (absorption, distribution, metabolism, and excretion) 나, PK (pharmacokinetics) 를 가미한 측정 결과가 얻어지고, 또, 독성이 있는 화합물을 제외할 수 있다.

따라서, 본 발명의 자연 면역 활성화제, 감염증 예방 치료제 및 음식품은, 상기 테스트를 통과한 것이라는 우수한 효과가 있다.

본 발명의 유산균은, 일반 음식품, 건강 식품, 약제, 발효 음식품, 프로바이오틱스의 생산 등에 이용할 수 있을 뿐만 아니라, 자연 면역 활성화에 의한 병의 예방·치료에 이용된다. 발효 음식품으로는, 발효유, 유산균 음료, 요구르트, 채소 절임, 채소 절임 제조용 유산균 스타터 등으로서의 용도에 특히 바람직하다. 또, 산에 강하기 때문에 위에서 분해되지 않고 소장에까지 도달한다는 특징도 있다.

도 1 은, 본 발명의 유산균 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 의 16S rDNA 와 근연한 락토바실러스·파라플란타룸 DSM10667 의 16S rDNA (NR-025447.1) 의 BLAST 를 사용한 상동성 해석의 결과를 나타내는 도면이다.
도 2 는, 도 1 에 계속되는 도면이다.
도 3 은, 유산균 락토바실러스·플란타룸 PGN 의 펩티드글리칸 획분을 먹은 누에와 먹지 않는 누에의, 녹농균 감염 후의 생존 기간을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명에 대해 설명하지만, 본 발명은 이하의 구체적 양태에 한정되는 것은 아니고, 기술적 사상의 범위 내에서 임의로 변형할 수 있다.

＜유산균＞

본 발명은, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 유산균이다.

이하, 이 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 신규 유산균주 (＃11-1) 에 대해 상세히 서술한다.

형태 : 본 발명의 ＃11-1 은, 쌀겨 절임을 분리원으로 하여 비로소 분리되었다.

배지에 있어서의 생육 상황 :

(1) GAM 및 MRS 한천 배지 상에서는 백색의 콜로니를 형성한다. 확산성의 색소는 관찰되지 않는다.

(2) 탄산칼슘이 든 MRS 한천 배지 상에서는 유산의 생성에 수반되는 투명대의 형성이 관찰된다.

생리학적 성질 : 본 발명의 ＃11-1 의 생리학적, 화학 분류학적 성질은 이하와 같다.

(1) 산소에 대한 태도 : 혐기적

(2) 카탈라아제 : －

(3) 알칼리포스파타아제 : －

(4) 에스테라아제 : －

(5) 에스테라아제리파아제 : －

(6) 리파아제 : －

(7) 류신알릴아미다아제 : ＋

(8) 발린알릴아미다아제 : ＋

(9) 시스틴알릴아미다아제 : －

(10) 트립신 : －

(11) α-키모트립신 : －

(12) 산성 포스파타아제 : ＋

(13) 나프톨-AS-BI-포스포하이드로라아제 : ＋

(14) α-갈락토시다아제 : －

(15) β-갈락토시다아제 : －

(16) β-글루쿠로니다아제 : －

(17) α-글루코시다아제 : －

(18) β-글루코시다아제 : －

(19) N-아세틸-β-글루코사미니다아제 : －

(20) α-만노시다아제 : －

(21) α-푸코시다아제 : －

(22) 하기의 당류 등으로부터의 산 및 가스의 생성능

글리세롤 (Glycerol) : －

에리트리톨 (Erythritol) : －

D-아라비노오스 (D-Arabinose) : －

L-아라비노오스 (L-Arabinose) : －

D-리보오스 (D-Ribose) : ±

D-자일로오스 (D-Xylose) : －

L-자일로오스 (L-Xylose) : －

D-아도니톨 (D-Adonitol) : －

메틸-β-D-자일로피라노사이드 (methyl-β-D-xylopyranoside) : －

D-갈락토오스 (D-Galactose) : ＋

D-글루코오스 (D-Glucose) : ＋

D-프룩토오스 (D-Fructose) : ＋

D-만노오스 (D-Mannose) : ＋

L-소르보오스 (L-Sorbose) : －

L-람노오스 (L-Rhamnose) : －

둘시톨 (Dulcitol) : －

이노시톨 (Inositol) : －

D-만니톨 (D-Mannitol) : ＋

D-소르비톨 (D-Sorbitol) : －

메틸-α-D-만노피라노사이드 (methyl-α-D-mannopyranoside) : －

메틸-α-D-글루코피라노사이드 (methyl-α-D-glucopyranoside) : ＋

N-아세틸글루코사민 (N-Acetyl glucosamine) : ＋

아미그달린 (Amygdalin) : ±

알부틴 (Arbutin) : ＋

에스쿨린 (Esculin) : ＋

살리신 (Salicin) : ＋

D-셀로비오스 (D-Cellobiose) : ＋

D-말토오스 (D-Maltose) : ＋

D-락토오스 (D-Lactose) : －

D-멜리비오스 (D-Melibiose) : －

D-수크로오스 (D-Sucrose) : ＋

D-트레할로오스 (D-Trehalose) : ＋

인슐린 (Insulin) : －

D-멜레지토오스 (D-Melezitose) : －

D-라피노오스 (D-Raffinose) : －

스타치 (Starch) : －

글리코겐 (Glycogen) : －

자일리톨 (Xylitol) : －

겐티오비오스 (Gentiobiose) : ＋

D-투라노오스 (D-Turanose) : －

D-릭소오스 (D-Lyxose) : －

D-타가토오스 (D-Tagatose) : －

D-푸코오스 (D-Fucose) : －

L-푸코오스 (L-Fucose) : －

D-아라비톨 (D-Arabitol) : －

L-아라비톨 (L-Arabitol) : －

글루코네이트 (Gluconate) : ±

2-케토-글루코네이트 (2-Keto-gluconate) : －

5-케토-글루코네이트 (5-Keto-gluconate) : －

분자 생물학적 해석 결과 : 분자 생물학적인 계통 분류의 지표로서 사용되고 있는 16S rDNA 에 관한 ＃11-1 의 해석 결과는 이하와 같다.

즉, ＃11-1 의 게놈 DNA 로부터, PCR 에 의해, 16S rDNA 영역의 염기 배열을 증폭시키고, 시퀸서에 의한 해석을 실시한 결과, 16S rDNA 의 거의 전체 길이에 해당되는 염기 배열이 발견되었다.

이 염기 배열을 NCBI 의 BLAST 해석으로 상동성 검색을 실시한 결과, ＃11-1 의 16S rDNA 영역의 염기 배열은, 락토바실러스속인 락토바실러스 파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum) DSM10667 주의 염기 배열 (등록 번호 : NR_025447.1) 과 상동률 98 ％ 를 나타냈으므로, ＃11-1 은 L. 플란타룸 파라플란타룸 (L. plantarum paraplantarum) 종에 속하는 것이다.

그러나, 완전히는 일치하지 않았기 때문에, 본 발명의 ＃11-1 은 상기의 주와는 상이한 유산균주 (아종) 이다.

상기의 ＃11-1 의 생리학적·화학 분류학적 성질을, 버지스·매뉴얼·오브·시스테마틱 박테리올로지 (Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, vol.3 1989) 에 의한 분류 및 그 밖의 문헌의 기재 내용과 대조하고, 또한, 상기 16S rDNA 해석의 결과를 고려하여 판단한 결과, 본 발명의 ＃11-1 은 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 신규한 미생물이다.

락토바실러스속에 속하는 이미 알려진 주들과 비교하여, 가장 높은 자연 면역 활성화능을 나타내는 것들을 포함하여 종합적으로 검토한 결과, ＃11-1 은 단리된 신규 미생물주인 것으로 판단하였다.

＃11-1 은, 치바켄 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8 122호실, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (Natural Institute of Technology and Evaluation ; 이하, 「NITE」로 약기한다) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 국내 기탁되고, 수탁 번호 : NITE P-02005 (기탁일 : 2015년 2월 5일) 로서 수탁된 미생물이다.

＃11-1 은, 그 후, 치바켄 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8 122호실, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 원기탁 신청서를 제출하여, 국내 기탁 (원기탁일 : 2015년 2월 5일) 으로부터 부다페스트 조약에 기초하는 기탁으로의 이관 신청을 실시하였고 (이관일 (국제 기탁일) : 2016년 1월 28일), 생존이 증명되어 부다페스트 조약에 기초하는 기탁 (국제 기탁) 으로의 이관 신청이 수령된 결과, 수탁 번호 「NITE BP-02005」를 받은 것이다.

세균의 일반적인 성상으로서, 그 균주로서의 성질은 변이되기 쉽기 때문에, ＃11-1 은, 앞서 나타낸 생리학적 성상의 범위 내에 머물지 않을 가능성도 가지고 있다. 또, 이러한 「변이」에는, 자연적인 변이와 인공적인 변이 양방을 포함하는 것은 말할 필요도 없다.

이하에, ＃11-1 의 배양 방법에 대해 기재한다. ＃11-1 의 배양 방법은, 락토바실러스속의 미생물에 대해 실시되는 일반적인 배양 방법에 준하여 실시하면 된다.

배양은 혐기 조건하에서 실시하는 것이 바람직하다. 배지 중의 탄소원으로는, 예를 들어, D-리보오스, D-갈락토오스, D-글루코오스, D-프룩토오스, D-만노오스, D-만니톨, N-아세틸글루코사민, 아미그달린, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, D-셀로비오스, D-말토오스, 수크로오스, D-트레할로스, 겐티오비오스, 당밀, 물엿, 유지류 등의 유기 탄소 화합물이 사용되고, 질소원으로는, 고기 엑기스, 카세인, 펩톤, 효모 엑기스, 건조 효모, 배아, 대두분, 우레아, 아미노산, 암모늄염 등의 유기·무기 질소 화합물을 사용할 수 있다.

또, 염류는, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 인산염, 철염, 구리염, 아연염, 코발트염 등의 무기 염류를 필요에 따라 적절히 첨가한다. 또한, 비오틴, 비타민 B1, 시스틴, 올레산메틸, 라드유 등의 생육 촉진 물질을 첨가하는 것이 목적물의 산생량을 증가시키는 점에서 바람직하다.

또, 실리콘유, 계면 활성제 등의 소포제를 첨가해도 된다. 조제가 완료된 배지로는, 예를 들어, MRS 배지, GAM 배지 등을 사용하는 것이 바람직하다.

배양 조건은, 앞서 기재한 바와 같이 락토바실러스속의 미생물에 대해 실시되는 일반적인 배양 조건에 준하여 실시하면 된다. 액체 배양법이면 정치 (靜置) 배양이 바람직하다. 소규모이면 뚜껑이 달린 유리병에 의한 정치 배양법을 이용해도 된다.

배양 온도는 25 ℃ ∼ 37 ℃ 사이로 유지하는 것이 바람직하고, 32 ℃ ∼ 37 ℃ 에서 실시하는 것이 보다 바람직하다. 배양 pH 는 7 부근에서 실시하는 것이 바람직하다. 배양 기간은 사용한 배지 조성, 배양 온도 등에 따라 변동되는 팩터이지만, ＃11-1 의 경우, 바람직하게는 12 ∼ 72 시간, 보다 바람직하게는 24 ∼ 48 시간에서 충분한 양의 목적물을 확보할 수 있다.

배양하여 얻어진 콜로니를 픽업하고, 다시 배지 상에서 싱글 콜로니 형성을 실시하는 것도 바람직하다.

＜자연 면역 활성화제＞

본 발명의 신규 유산균 「＃11-1」은, 그 유산균 자체로서, 또, 그 유산균의 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균으로서 자연 면역 활성화능을 갖는다.

즉, 본 발명은, 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 유산균 또는 그 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균으로서, 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균이다.

자연 면역 활성화능의 측정은, 실시예에 구체적으로 기재한 방법, 즉, Ishii K., Hamamoto H., Kamimura M., Sekimizu K., J.Biol.Chem. Jan.25 ; 283(4) : 2185-91 (2008) 에도 상세히 서술되어 있는, 누에의 완행성 근수축에 의해 측정되었다.

「＃11-1 또는 그 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균」, 「그 유산균의 사균」, 「그 유산균의 처리물」은 모두 자연 면역 활성화능을 갖는다.

여기서, 「유산균의 처리물」로는, 유산균의, 배양물, 농축물, 페이스트화물, 건조물, 액상화물, 희석물, 파쇄물, 살균 가공물, 및, 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 처리물을 들 수 있다. 여기서, 「건조물」로는, 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등을 들 수 있다.

본 발명의 다른 양태는, 「상기한 본 발명의 유산균 (＃11-1 또는 그 자연적 혹은 인공적으로 변이된 유산균), 그 유산균의 사균 또는 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제로서, 상기 유산균의 처리물은, 유산균의, 배양물, 농축물, 페이스트화물, 건조물, 액상화물, 희석물, 파쇄물, 살균 가공물, 및, 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 처리물인 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제」이다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 상기의 본 발명의 유산균, 그 유산균의 사균 또는 그 유산균의 처리물을 다양한 상태에서 포함할 수 있다. 예를 들어, 현탁액, 유산균체, 배양 상청액, 배지 성분을 포함하는 상태 등을 들 수 있다.

유산균으로는, 생균체, 습윤균, 건조균 등이 적절히 사용 가능하다. 또, 살균, 즉, 가열 살균 처리, 방사선 살균 처리, 파쇄 처리 등을 실시한 사균이어도 된다.

본 발명의 자연 면역 활성화제 중의 유효 성분인, 유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물의, 자연 면역 활성화제 전체에 대한 함유량은, 특별히 제한이 없고 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 자연 면역 활성화제 전체를 100 질량부로 하였을 때에, 「유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물의 합계량」으로서, 0.001 ∼ 100 질량부로 함유되는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 99 질량부, 특히 바람직하게는 0.1 ∼ 95 질량부, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 90 질량부로 함유된다.

또, 상기 유효 성분은, 모두 1 종을 단독으로 사용해도 되고, 2 종 이상을 병용해도 된다. 2 종 이상을 병용하는 경우의, 상기 자연 면역 활성화제 중의 각각의 유효 성분의 함유비에 대해서는, 특별히 제한은 없고 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 상기 유산균, 상기 유산균의 사균 또는 상기 유산균의 처리물을 유효 성분으로서 함유하지만, 그것들 유효 성분에 더하여 「그 밖의 성분」을 함유할 수 있다.

상기 자연 면역 활성화제에 있어서의, 상기 「그 밖의 성분」으로는, 특별히 제한은 없고, 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 약학적으로 허용될 수 있는 담체 등을 들 수 있다.

이러한 담체로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 후술하는 제형 등에 따라 적절히 선택된다. 또, 자연 면역 활성화제 중의 「그 밖의 성분」의 함유량으로서도 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

＜감염증 예방 치료제＞

상기한 본 발명의 유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물은, 자연 면역 활성화능을 가짐과 함께 또는 갖기 때문에 감염증 예방 치료제로서 유용하고, 특히, 경구 투여용의 감염증 예방 치료제로서 유용하다.

본 발명자는, 본 발명의 유산균의 펩티드글리칸의 경구 투여가, 녹농균에 감염된 누에에 대해 연명 효과를 발휘하는 것을 확인하였다. 또한, 세균 등에 감염된 누에의 저항성이, 인간 등의 포유류에게 있어서의 저항성과 상관이 있는 것은 이미 확인되어 있다 (예를 들어, 특허문헌 2, 3 등).

구체적으로는, 락토바실러스·플란타룸 유산균의 펩티드글리칸이 누에의 녹농균 감염에 대해 저항성을 부여하는 것이 확인되었다.

누에에게는 획득 면역 기구가 없어 항원에 대해 항체를 산생할 수 없다. 따라서, 경구 투여된 락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸이 장내 등에서 누에의 자연 면역 기구를 활성화시키고, 그 결과, 감염 제어에 대해 효과를 발휘하였기 때문인 것으로 생각된다.

마우스 등의 획득 면역 기구를 갖는 동물에 대해서는, 세균의 펩티드글리칸을 경구 투여하면 면역력이 부여되는 것은 알려져 있다.

그러나, 본 발명에 있어서는, 획득 면역 기구를 갖지 않고 자연 면역 기구만 갖는 누에에게 있어서, 유산균의 펩티드글리칸이 녹농균 감염에 대해 저항성을 부여하였다. 펩티드글리칸이 누에의 자연 면역 기구를 활성화시켜 감염에 저항한 것으로 생각되고, 이것은, 마찬가지로 자연 면역 기구를 갖는 포유류 등의 동물에 대해, 본 발명의 유산균, 그 유산균의 사균 또는 그 유산균의 처리물을 함유하는 자연 면역 활성화제에, 감염증 예방 치료제로서의 효과가 있음을 나타내고 있다.

락토바실러스·플란타룸, 락토바실러스·파라플란타룸 등의 락토바실러스속의 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 제 (劑) 는, 인간 등의 포유류에 대해서도 감염증 예방 치료제로서 유용하다.

따라서, 본 발명의 다른 양태는, 상기의 자연 면역 활성화제를 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 감염증 예방 치료제이고, 나아가서는, 상기의 유산균의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 감염증 예방 치료제이다.

＜의약품 ; 음식품 ; 건강 식품 등＞

본 발명의 유산균이나 그 유산균에서 유래하는 본 발명의 자연 면역 활성화제는, 의약품, 의약 부외품, 일반 음식품, 건강 식품, 분유 등의 규격을 갖는 음식품 등에 배합하는 것이 가능하고, 그것들의 형태에 상관없이 다양한 의약품, 음식품 등에 응용할 수 있다.

그 중에서도, 상기한 본 발명의 유산균을 사용하여 발효시키는 공정을 이용하여 제조된 음식품, 나아가 그 중에서도 발효유는 유산균의 통상적인 효과나, 본 발명에 특유의 상기 효과를 발휘하기 쉽기 때문에 바람직하다.

본 발명의 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제의 제형으로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 후술하는 바와 같은 원하는 투여 방법에 따라 적절히 선택할 수 있다.

구체적으로는, 예를 들어, 경구 고형제 (정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 하드 캡슐제, 소프트 캡슐제 등), 경구 액제 (내복액제, 시럽제, 엘릭시르제 등), 주사제 (용제, 현탁제 등), 연고제, 첩부제, 겔제, 크림제, 외용 산제, 스프레이제, 흡입 산포제 등을 들 수 있다.

상기 경구 고형제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, 부형제, 나아가서는 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미·교취제 등의 첨가제를 첨가하여 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.

그 부형제로는, 예를 들어, 유당, 백당, 염화나트륨, 포도당, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 미결정 셀룰로오스, 규산 등을 들 수 있다.

상기 결합제로는, 예를 들어, 물, 에탄올, 프로판올, 단 (單) 시럽, 포도당액, 전분액, 젤라틴액, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필스타치, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셸락, 인산칼슘, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있다.

그 붕괴제로는, 예를 들어, 건조 전분, 알긴산나트륨, 한천 분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 라우릴황산나트륨, 스테아르산모노글리세리드, 유당 등을 들 수 있다.

그 활택제로는, 예를 들어, 정제 탤크, 스테아르산염, 붕사, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

그 착색제로는, 예를 들어, 산화티탄, 산화철 등을 들 수 있다.

상기 교미·교취제로는, 예를 들어, 백당, 등피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다.

상기 경구 액제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, 교미·교취제, 완충제, 안정화제 등의 첨가제를 첨가하여 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.

그 교미·교취제로는, 예를 들어, 백당, 등피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다. 상기 완충제로는, 예를 들어, 시트르산나트륨 등을 들 수 있다. 상기 안정화제로는, 예를 들어, 트래거캔스, 아라비아고무, 젤라틴 등을 들 수 있다.

상기 주사제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, pH 조절제, 완충제, 안정화제, 등장화제, 국소 마취제 등을 첨가하여 통상적인 방법에 의해 피하용, 근육내용, 정맥내용 등의 주사제를 제조할 수 있다.

그 pH 조절제 및 그 완충제로는, 예를 들어, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 인산나트륨 등을 들 수 있다. 상기 안정화제로는, 예를 들어, 피로아황산나트륨, EDTA, 티오글리콜산, 티오락트산 등을 들 수 있다. 상기 등장화제로는, 예를 들어, 염화나트륨, 포도당 등을 들 수 있다. 상기 국소 마취제로는, 예를 들어, 염산프로카인, 염산리도카인 등을 들 수 있다.

상기 연고제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, 공지된 기제, 안정제, 습윤제, 보존제 등을 배합하고, 통상적인 방법에 의해 혼합하여 제조할 수 있다.

그 기제로는, 예를 들어, 유동 파라핀, 백색 바셀린, 백납, 옥틸도데실알코올, 파라핀 등을 들 수 있다. 상기 보존제로는, 예를 들어, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 등을 들 수 있다.

상기 첩부제로는, 예를 들어, 공지된 지지체에 상기 연고제로서의 크림제, 겔제, 페이스트제 등을 통상적인 방법에 의해 도포하여 제조할 수 있다. 상기 지지체로는, 예를 들어, 면, 스테이플 파이버, 화학 섬유로 이루어지는 직포, 부직포, 연질 염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리우레탄 등의 필름, 발포체 시트 등을 들 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제는, 예를 들어, 자연 면역 기구의 활성화를 필요로 하는 개체, 세균 등에 대해 마침 획득 면역을 얻고자 하는 개체 등에 바람직하게 사용할 수 있다.

구체적으로는, 예를 들어, 건강 유지나 피로 회복을 필요로 하는 개체 ; 암이나 생활 습관병의 예방이나 치료를 필요로 하는 개체 ; 세균, 진균류, 바이러스 등에 감염된 개체 ; 등에 투여함으로써 사용할 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제의 투여 대상 동물로는 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 인간 ; 마우스, 래트 등의 실험 동물 ; 원숭이 ; 말 ; 소, 돼지, 염소, 닭 등의 가축 ; 고양이, 개 등의 펫 ; 등을 들 수 있다.

또, 상기 자연 면역 활성화제의 투여 방법으로는 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 상기한 제형 등에 따라 적절히 선택할 수 있고, 경구 투여, 복강 내 투여, 혈액 중에 대한 주사, 장내에 대한 주입 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 경구 투여가 간편하고 상기 효과를 발휘하는 점에서 바람직하다.

상기 자연 면역 활성화제 또는 상기 감염증 예방 치료제의 투여량으로는 특별히 제한은 없고, 투여 대상인 개체의 연령, 체중, 원하는 효과의 정도 등에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들어, 성인에 대한 1 일의 투여량은, 유효 성분의 양으로서 1 ㎎ ∼ 30 g 이 바람직하고, 10 ㎎ ∼ 10 g 이 보다 바람직하며, 100 ㎎ ∼ 3 g 이 특히 바람직하다.

또, 투여 시기로서도 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 예방적으로 투여되어도 되고, 치료적으로 투여되어도 된다.

본 발명의 상기 유산균, 그 유산균의 사균 혹은 처리물, 자연 면역 활성화제, 또는, 감염증 예방 치료제를 함유하는 음식품 (이하, 「본 발명의 음식품」으로 약기하는 경우가 있다) 중의, 유산균, 자연 면역 활성화제 또는 감염증 예방 치료제의 함유량은 특별히 제한이 없고, 목적이나 음식품의 양태 (종류) 에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 음식품 전체를 100 질량부로 하였을 때에, 상기의 합계량으로 0.001 ∼ 100 질량부로 함유하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 100 질량부, 특히 바람직하게는 0.1 ∼ 100 질량부의 함량이다.

또, 상기의 어느 1 종을 단독으로 사용해도 되고, 2 종 이상을 병용해도 된다. 2 종 이상을 병용하는 경우의, 상기 음식품 중의 각각의 물질의 함유량비에는 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 음식품은, 자연 면역 활성화능 및/또는 감염증 예방 치료능을 갖는다.

본 발명의 음식품은, 상기한 본 발명의 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제에 더하여, 추가로 「그 밖의 성분」을 함유할 수 있다.

상기 「그 밖의 성분」으로는 특별히 제한은 없고, 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 각종 식품 원료 등을 들 수 있다. 또, 「그 밖의 성분」의 함유량은 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 유산균은, 일반 음식품, 건강 식품, 약제, 발효 음식품, 프로바이오틱스의 생산 등에 이용할 수 있다. 발효 음식품으로는, 발효유, 유산균음료, 요구르트, 채소 절임, 채소 절임 제조용 유산균 스타터 등으로서의 용도에 특히 바람직하다.

상기 식품의 종류로는 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 젤리, 캔디, 초콜릿, 비스킷, 젤리 등의 과자류 ; 녹차, 홍차, 커피, 청량 음료 등의 기호 음료 ; 발효유, 요구르트, 아이스크림, 락토아이스 등의 유제품 ; 야채 음료, 과실 음료, 잼류 등의 야채·과실 가공물 ; 스프 등의 액체 식품 ; 빵류, 면류 등의 곡물 가공물 ; 각종 조미료 ; 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 요구르트, 발효유 등의 유제품이 바람직하다.

이들 식품의 제조 방법으로는 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 통상적인 각종 식품의 제조 방법에 따라 적절히 제조할 수 있다.

또, 상기 식품은, 예를 들어, 정제, 과립제, 캡슐제 등의 경구 고형제나, 내복액제, 시럽제 등의 경구 액제로서 제조된 것이어도 된다. 상기 경구 고형제, 경구 액제의 제조 방법은 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 상기한 약제의 경구 고형제, 경구 액제의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

본 발명의 음식품은, 자연 면역 기구의 활성화나 감염증에 대해 저항력을 북돋우는 것 등을 목적으로 한, 기능성 식품, 건강 식품 등으로서 특히 유용하다.

본 발명의 유산균, 그 사균 혹은 처리물 등을 음식품의 제조에 사용하는 경우, 제조 방법은 당업자에게 주지된 방법에 의해 실시할 수 있다. 당업자이면, 본 발명의 유산균의 (사)균체 또는 처리물을 다른 성분과 혼합하는 공정, 성형 공정, 살균 공정, 발효 공정, 소성 공정, 건조 공정, 냉각 공정, 조립 (造粒) 공정, 포장 공정 등을 적절히 조합하여, 목적으로 하는 음식품을 만드는 것이 가능하다.

또, 본 발명의 유산균을 각종 발효유의 제조에 사용하는 경우, 당업자에게 주지된 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 유산균을 발효유에 사균으로서 소요량 첨가하는 공정을 이용하여 제조된 음식품이나, 유산균 스타터로서 본 발명의 유산균을 사용하여 발효하는 공정을 이용하여 제조된 음식품을 들 수 있다.

유산균 스타터로서 본 발명의 유산균을 사용하여 발효를 실시하는 경우, 본 발명의 유산균의 배양 조건과 동일한 조건 등에서 실시할 수 있다.

실시예

이하, 실시예 및 검토예에 기초하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이하의 실시예 등의 구체적 범위에 한정되는 것은 아니다.

＜재료＞

＜＜배지 및 배양 조건＞＞

GAM 배지, MRS 한천 배지는, 각각, Nissui 사, BD (Becton Dickinson) 사로부터 입수하고, 필요한 경우에는 탄산칼슘 (CaCO₃) 을 첨가하였다.

혐기 배양에는, AnaeroPak (등록 상표) (Mitsubishi gas chemicals 사 제조) 을 사용하였다.

＜＜유산균의 분리＞＞

발효 식품으로서 쌀겨 절임을 사용하였다. 생리 식염수 (0.9 질량％ 의 NaCl) 중에서 현탁한 액을 MRS 배지에 펴 바르고 37 ℃ 에서 2 일간 혐기 배양하였다.

콜로니를 픽업하고, CaCO₃-MRS 배지 상에서의 싱글 콜로니 형성을 실시하였다.

그 중에서, 후기하는 방법으로 자연 면역 활성화능을 측정하고, 자연 면역 활성화능이 우수한 유산균주 (＃11-1) 를 얻었다. 유산균주 (＃11-1) 를 단리하였다.

CaCO₃-MRS 배지 상에서의 백색 콜로니 형성과 투명대의 형성에 의해 유산 발효를 확인하고, ＃11-1 이 유산균인 것을 확인하였다. 또, 콜로니를 그람 염색하여, ＃11-1 의 그람 양성을 확인하였다.

＜＜유산균의 동정＞＞

PCR 효소 KOD FX Neo (Toyobo), 프라이머 (primers) 9F, 1541R 을 사용한 콜로니 PCR 에 의해 16S rDNA 단편 (斷片) 을 얻었다.

BigDye (등록 상표) Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit, ABI PRISM (등록 상표) 3100 Genetic Analyzer 를 이용한 다이렉트 시퀀싱 (Direct sequencing) 에 의해 배열을 결정하였다.

배열 정보는, NCBI BLASTN 2.2.27+ (8) 을 사용하여 16 S 리보조멀 RNA 시퀀스 데이터베이스 (16 S ribosomal RNA sequences databese, Bacteria and Archaea, 7,545 sequences) 로부터 해석하였다.

＃11-1 의 16S rDNA 영역의 염기 배열을, 배열표의 배열 번호 1 에 나타냈다.

16S rDNA의 염기 배열을 결정하고, BLAST 해석에 의해 상동성을 검색한 결과, 도 1 과 도 2 에 나타내는 바와 같은 유산균과 상동성이 높은 것임이 분명해졌다.

이 염기 배열은, 도 1 과 도 2 에 나타낸 바와 같이, L. 파라플란타룸 (L. paraplantarum) DSM10667 주 (염기 배열 : NR_025447.1) 에 근연하지만, 완전히는 일치하지 않기 때문에 신규한 「L. paraplantarum」인 것을 알 수 있었다.

＜＜기탁＞＞

실시예에 있어서 사용하는 본 발명의 「＃11-1」은, 상기 서술한 바와 같이, 쌀겨 절임으로부터 분리된 것이고, 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 유산균 ＃11-1 로서, 특허법 시행 규칙에 기초하는 기탁 기관으로서, 또, 특허 수속상의 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약에 기초하는 국제 기탁 당국으로서 인정되고 있는, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) (치바켄 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8 122호실) 에 기탁되어 있다 (수탁 번호 : NITEP-02005, 기탁일 2015년 2월 5일).

실시예 1

＜자연 면역 활성화능의 측정＞

MRS 배지에서 하룻밤 배양한 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 (L. paraplantarum ＃11-1) 주를, 121 ℃ , 20 분 동안 멸균 처리 후, 50 ㎕ 를 5 세 누에의 단두 근육 표본에 주사하고, 완행성 근수축에 의해 자연 면역 활성화능을 측정하였다.

완행성 근수축에 의한 자연 면역 활성화능의 측정은, Ishii K., Hamamoto H., Kamimura M., Sekimizu K., J.Biol.Chem. Jan.25 ; 283(4) : 2185-91 (2008) 에 기재된 방법에 따라 실시하였다.

즉, 5 세 누에의 단두 근육 표본에, 측정 물질의 농도를 복수 단계로 나눈 시료 0.05 ㎖ 를 각각 혈액 내 투여하고, 수축된 길이가 최대가 되었을 때 (약 10 분 후) 에 체장을 각각 측정하였다.

주사 전의 체장으로부터 주사 후의 체장을 뺄셈하고, 그 값을 주사 전의 체장으로 나눗셈한 값을 「C 값 (Contraction Value)」으로 하고, C 값 ＝ 0.15 를 1 U (unit (유닛)) 으로 정의하였다.

0.9 ％ 생리 식염액으로 시료를 1/1, 1/4, 1/16, 1/64, 1/256 로 계열 단계 희석한 액에서 각각 C 값을 측정하고, 가로축을 측정 물질의 농도, 세로축을 C 값으로서 플롯한 그래프로부터, 1 U (C 값 ＝ 0.15) 을 부여하는 「측정 물질의 누에에 대한 투여 질량 (㎎)」을 구하고, 단위 질량 (㎎) 당 몇 U (유닛) 을 나타내는지를 구하여, 측정 물질의 자연 면역 활성화능의 크기를 평가하였다.

또, 생리 식염액 0.05 ㎖ 를 네거티브 컨트롤 (C 값 0.05 이하를 허용), 공기 0.2 ㎖ 를 포지티브 컨트롤 (C 값이 0.2 ∼ 0.4 내에 들어가는 경우를 허용) 로 하여 동시에 측정하였다.

비교예 1 ∼ 3

실시예 1 에 있어서, 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 (L. paraplantarum ＃11-1) 주 대신에, 표 1 에 나타낸 그람 양성 세균, ＃4, ＃11-2 및 A 를 사용한 것 이외에는 실시예 1 과 동일하게 하여, 누에의 근수축에 의해 자연 면역 활성화능을 측정하였다.

실시예 1 및 비교예 1 ∼ 3 의 유래·성상을 이하의 표 1 에 나타낸다. 또, 참고로서, 근연한 주의 명칭과 「측정 균주와 그 주의 상동성 측정 결과」를 함께 표 1 에 나타낸다.

자연 면역 활성화능의 측정 결과를 이하의 표 2 에 나타낸다.

본 발명의 유산균의 자연 면역 활성화능을 측정한 결과, 표 2 에 나타내는 바와 같이, 실시예 1 의 L. 파라플란타룸 (L. paraplantarum) ＃11-1 은, 165 U/㎎ 으로 매우 자연 면역 활성화능이 높은 것이었다.

또, 표 2 에 있어서의, 실시예 1 및 비교예 1, 2 의 「자연 면역 활성화능 (U/㎎)」의 측정 결과의 비교로부터도 알 수 있는 바와 같이, 쌀겨 절임으로부터 얻어진 별주와 비교해도, 본 발명의 L. 파라플란타룸 (L. paraplantarum) ＃11-1 이 매우 높은 자연 면역 활성화능을 나타내는 것을 알 수 있었다.

또, 이른바 「식물성 유산균」으로서 알려져 있는 류코노스톡 시트리움 (Leuconostoc citreum) KM20 의 자연 면역 활성화능은 43 U/㎎ 으로, 본 발명의 L. 파라플란타룸 (L. paraplantarum) ＃11-1 보다 낮은 것이었다 (비교예 3).

비교예 4

실시예 1 에 있어서, 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 (L. paraplantarum ＃11-1) 주 대신에, 락토바실러스·불가리쿠스 OLL1073 주를 사용한 것 이외에는 실시예 1 과 동일하게 하여, 누에의 근수축에 의해 자연 면역 활성화능을 측정하였다.

비교예 5

실시예 1 에 있어서, 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 (L. paraplantarum ＃11-1) 주 대신에, 락토바실러스·카제이 YIT9029 주를 사용한 것 이외에는 실시예 1 과 동일하게 하여, 누에의 근수축에 의해 자연 면역 활성화능을 측정하였다.

비교예 6

실시예 1 에 있어서, 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 (L. paraplantarum ＃11-1) 주 대신에, 락토코커스·락티스 JCM5805 주를 사용한 것 이외에는 실시예 1 과 동일하게 하여, 누에의 근수축에 의해 자연 면역 활성화능을 측정하였다.

비교예 4 ∼ 6 의 결과를 표 3 에 나타낸다.

비교예 4 ∼ 6 의 유산균은, 실제로 시판되는 발효유의 제조에 사용되고 있는 유산균이다.

표 3 에 나타나는 바와 같이, 실시예 1 의 본 발명의 유산균 ＃11-1 은, 비교예 4 ∼ 6 의 유산균에 비해서도 보다 높은 자연 면역 활성화능을 가짐을 알 수 있었다.

본 발명의 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 의 멸균 처리물을 측정 물질로 하였을 때 자연 면역 활성화능이 매우 높은 점에서, 본 발명의 유산균, 본 발명의 유산균의 사균, 또는, 본 발명의 유산균의 처리물 (배양물 ; 농축물 ; 페이스트화물 ; 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등의 건조물 ; 액상화물 ; 희석물 ; 파쇄물 ; 살균 가공물 ; 배양물로부터의 추출물 ; 등) 은 자연 면역 활성화제로서 우수한 것이다.

또, 락토바실러스·파라플란타룸은, 속, 종으로서 이미 발효 식품으로서의 안전성이 확인되어 있다.

본 발명의 락토바실러스·파라플란타룸 ＃11-1 을 사용하여 젖을 발효시켜 얻어지는 음식품은 자연 면역 활성화능을 갖는다.

실시예 2

＜세균 감염에 대한 효과 실험＞

독립 행정 법인 이화학 연구소로부터 입수한, 락토바실러스·플란타룸에 속하는 「Lactobacillus plantarum subsp. plantarum JCM 1057」(이하, 도 3 에서도 「L. plantarum PGN」으로 약기한다) 로부터, 통상적인 방법에 따라 펩티드글리칸 획분을 조제하고, 그것을 누에의 인공 사료에 2.7 질량％ 혼합하여 2 일간 계속 주었다. 주사 전에 총량으로 0.041 g 준 것이 된다.

그 후, 이하와 같이, 녹농균 감염에 대한 락토바실러스·플란타룸 유산균의 펩티드글리칸의 효과를 조사하였다.

녹농균 (PAO1) 을 30 ℃ 에서 밤새 배양하였다. 그 균액을 생리 식염수로 1000 배로 희석하고, 그 희석액 50 ㎕ 를 누에의 체액 중에 주사하였다.

주사 후에는 누에에 대한 펩티드글리칸의 식이를 중지하고, 27 ℃ 에서 사육하여 시간 경과적으로 생존 수 (생존 비율) 를 계측하였다.

도 3 에 나타내는 바와 같이, 락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸 획분을 먹은 누에는 먹지 않는 누에에 비해 녹농균 감염 후의 생존 시간이 연장되는 것이 판명되었다.

락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸 획분에 의해 누에의 녹농균 감염에 대한 저항성이 부여된 것을 알 수 있었다.

이 결과는, 경구 투여된 락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸이 장내에서 누에의 자연 면역을 활성화시키고, 그 결과, 감염 제어에 대해 효과를 나타냈기 때문인 것으로 생각된다.

유산균 락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 제는, 인간 등의 포유류에 대해서도 감염증 예방 치료제로서 유용함을 알 수 있었다.

또, 락토바실러스·플란타룸은 이미 발효 식품으로서의 안전성이 확인되어 있다. 따라서, 유산균 락토바실러스·플란타룸의 펩티드글리칸을 유효 성분으로서 함유하는 감염증 예방 치료제는, 인간 등의 포유류의 음식품으로서 유용하다.

실시예 3

＜자연 면역 활성화제 및 감염증 예방 치료제의 제조＞

＜＜정제＞＞

배양한 ＃11-1 을 121 ℃, 20 분 동안 멸균 처리 후, 농축시켰다. 그 농축시킨 ＃11-1 의 배양액 20.0 ㎎, 락토오스 40 ㎎, 전분 20 ㎎, 및, 저 (低) 치환도 하이드록시프로필셀룰로오스 5 ㎎ 을 균일하게 혼합한 후, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 8 질량％ 수용액을 결합제로 하여 습식 조립법으로 타정용 과립을 제조하였다. 이것에 활택성을 부여하는 데에 필요한 스테아르산마그네슘을 0.5 ㎎ ∼ 1 ㎎ 첨가하고 나서 타정기를 사용하여 타정하여 정제로 하였다.

＜＜액제＞＞

상기 농축시킨 ＃11-1 의 배양액 10.0 ㎎ 을 2 질량％ 의 2-하이드록시프로필-β-시클로덱스트린 수용액 10 ㎖ 에 용해시켜 주사용 액제로 하였다.

산업상 이용가능성

본 발명의 신규 유산균이나 그 처리물은, 높은 자연 면역 활성화능을 갖고, 나아가서는 감염증 예방 치료 효과도 있다. 따라서, 본 발명의 유산균을 이용한, 자연 면역을 활성화시키는 자연 면역 활성화제나 감염증 예방 치료제를 함유하는 약제나 음식품을 제공할 수 있어, 의약품 업계, 식품 업계 등에서 널리 이용 가능하다.

본원은, 2015년 2월 6일에 출원한 일본의 특허 출원인 일본 특허출원 2015-022567에 기초하는 것이고, 그 출원의 모든 내용은 여기에 인용되어, 본 발명의 명세서의 개시로서 받아들여지는 것이다.

[수탁번호]

NITE BP-02005

배열표 프리텍스트

배열 번호 1 은, 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 미지의 균주의, 16S rDNA 의 거의 전체 길이에 해당하는 염기 배열이다.

SEQUENCE LISTING <110> Genome Pharmaceuticals Institute Co., Ltd. Antenna Co., Ltd. The University of Tokyo <120> Lactic acid bacterium, innate immunity activator derived therefrom, agent for preventing or treating infection, and food and drink <130> PF-061059-WO <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1480 <212> DNA <213> Lactobacillus paraplantarum <220> <221> misc_feature <222> (4)..(6) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (1473)..(1473) <223> n is a, c, g, or t <400> 1 ctannntgca agtcgaacga actctggtta atgattgaag gtgcttgcac ctgattgatt 60 taacatttga gtgagtggcg aactggtgag taacacgtgg gaaacctgcc cagaagtggg 120 ggataacacc tggaaacaga tgctaatacc gcataacaac tcggaccgca tggtctgagt 180 ttaaaagatg gcttcggcta tcacttttgg atggtcccgc ggcgtattag ctagatggtg 240 aggtaacggc tcaccatggc aatgatacgt agccgacctg agagggtaat cggccacatt 300 gggactgaga cacggcccaa actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg 360 acgaaagtct gatggagcaa cgccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaaactct 420 gttgttaaag aagaacatat ctgagagtaa ctgttcaggt attgacggta tttaaccaga 480 aagccacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttatccg 540 gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg 600 ctcaaccgaa gaagtgcatc ggaaactggg aaacttgagt gcagaaaagg acagtggaac 660 tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg 720 tctggtctgt aactgacgct gaggctcgaa agtatgggta gcaaacagga ttagataccc 780 tggtagtcca taccgtaaac gatgaatgct aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc 840 tgcagctaac gcattaagca ttccgcctgg ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag 900 gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag 960 aaccttacca ggtcttgaca tactatgcaa atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga 1020 catggataca ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc 1080 ccgcaacgag cgcaaccctt attattagtt gccagcatta agttgggcac tctagtgaga 1140 ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac 1200 ctgggctaca cacgtgctac aatggatggt acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc 1260 taatctctta aagccattct cagttcggat tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg 1320 gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1380 accgcccgtc acaccatgag agtttgtaac acccaaagtc ggtggggtaa ccttcgggga 1440 ccagccgcct aaggtgggac agatgattag ggngaagtcg 1480

Claims

독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스ㆍ파라플란타룸 (Lactobacilus Paraplantarum) ＃11-1 균주.
제 1 항에 기재된 균주 또는 그 균주의 사균의 처리물로서,
배양물, 농축물, 페이스트화물, 건조물, 액상화물, 희석물, 파쇄물, 살균 가공물 및 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 처리물.
제 1 항에 기재된 균주를 함유하는 음식품.
제 2 항에 기재된 처리물을 함유하는 음식품.
제 1 항에 기재된 균주를 사용하여 발효하는 공정을 이용하여 제조되고, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스ㆍ파라플란타룸 (Lactobacilus Paraplantarum) ＃11-1 균주를 함유하는 음식품.
제 3 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
자연 면역 활성화를 위한 음식품.
제 1 항에 기재된 균주를 함유하는 건강 식품.
제 2 항에 기재된 처리물을 함유하는 건강 식품.
제 1 항에 기재된 균주를 사용하여 발효하는 공정을 이용하여 제조되고, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-02005 인 락토바실러스ㆍ파라플란타룸 (Lactobacilus Paraplantarum) ＃11-1 균주를 함유하는 건강 식품.
제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
자연 면역 활성화를 위한 건강 식품.