KR102267879B1

KR102267879B1 - 신규 유산균, 신규 유산균을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 및 신규 유산균을 함유하는 음식품

Info

Publication number: KR102267879B1
Application number: KR1020167009994A
Authority: KR
Inventors: 가즈히사 세키미즈; 사토시 니시다
Original assignee: 가부시키가이샤 게놈소야쿠겡큐쇼; 가부시키가이샤 나츄레 호루딩구스; 고쿠리츠다이가쿠호우진 도쿄다이가쿠
Priority date: 2013-10-17
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2021-06-21
Also published as: CN105637084B; JP6505018B2; CN105637084A; WO2015056770A1; KR20160060676A; JPWO2015056770A1; HK1219501A1

Abstract

본 발명은, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-01694 인 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 유산균, 그 유산균을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 그 유산균 또는 그 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품, 그리고, 유산균을 함유하는 발효유이고, 그 발효유는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 저항성을 갖는 발효유에 관한 것이다.

Description

신규 유산균, 신규 유산균을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 및 신규 유산균을 함유하는 음식품 {NEW LACTIC ACID BACTERIUM, NATURAL IMMUNOSTIMULANT HAVING NEW LACTIC ACID BACTERIUM AS ACTIVE INGREDIENT, AND FOOD OR DRINK CONTAINING NEW LACTIC ACID BACTERIUM}

본 발명은, 신규 유산균, 신규 유산균을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 및 신규 유산균을 함유하는 음식품에 관한 것이다.

유산균은 예로부터 발효 식품에 이용되고, 식품이나 의약품, 프로바이오틱스의 생산에 산업적으로 이용되고 있다. 유산균은 그람 양성, 카탈라아제 음성, 내생 포자를 형성하지 않거나, 운동성이 없다는 특징이 있다.

Lactococcus lactis (L.lactis) 는, 비병원성의 그람 양성의 유산균으로, 인간의 장 내 플로라에 속하지 않고, 구강이나 장관에서 콜로니 형성을 하지 않는 것이 알려져 있다. 또, 전체 게놈이 해독되어 있는 것 외에 유전학, 벡터계, 유전자 발현계의 해석이 이루어지고 있다. 최근에는, 재조합 L.lactis 가 동물의 장표피를 통한 사이토카인이나 특이적 항원의 in situ 합성, in vivo 딜리버리에 이용되고 있는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 1 ∼ 4).

자연 면역 반응에서는, 수상 세포나 매크로 파지와 같은 면역 세포가 세균이나 바이러스에서 유래하는 자연 면역 활성화 물질에 응답하여 사이토카인을 산생하고, 그 후의 면역 반응이 일어나는 것이 알려져 있다. 자연 면역 기구는, 생물이 공통적으로 갖는 감염 방어 기구이고, 비특이적이기 때문에 반응이 재빠르고, 많은 감염원에 대해 유효하게 기능하는 것이 특징이다.

인간 등의 고등한 척추 동물에 있어서도, 감염 초기의 저항성, 암이나 생활 습관병의 예방, 조직 수복 등의 관점에서는, 감염원에 특이적인 획득 면역보다, 비특이적인 자연 면역 쪽이 보다 중요한 위치를 차지하고 있는 것으로 생각된다.

지금까지, 본 발명자에 의해 누에에 있어서, 자연 면역 활성화 반응을 간편하게 측정할 수 있는 방법이 개발되어 있다 (특허문헌 1). 또, 본 발명자에 의해, 자연 면역 기구만을 갖는 생물을 이용한, 획득 면역 기구를 갖는 생물에 대한 병원 미생물 감염의 모델이 개발되어 있다 (특허문헌 2).

자연 면역 기구의 이상은, 여러가지 질환을 일으키는 원인이 되고, 따라서, 이와 같은 자연 면역 기구를 원하는 대로 조절하는 것이 가능한, 우수한 자연 면역 활성화제나 자연 면역을 활성화시키는 음식품의 개발이 요망되고 있다.

또, 식품으로서의 락토바실루스속이나 비피도박테리움속을 사용한 요구르트에 대해서는 정장 (整腸) 효과가 보고되어 왔지만, 요구르트로서 식용했을 때의 자연 면역의 활성화에 대해서는 확인되지 않았다. 유산균 L.burgalitics 가 분비하는 다당에 자연 면역의 활성화 작용이 있다는 보고가 있지만, 요구르트를 식용하는 실험은 아니다 (비특허문헌 5).

또, 자연 면역 활성화의 메커니즘 연구로서 유산균이 갖는 2 개 사슬 RNA 가 TLR3 경로를 통하여 수상 세포의 IFNβ 산생을 촉진하고 있는 것이 언급되어 있다 (비특허문헌 6). 2 개 사슬 RNA 는 CRISPR-Cas9 경로로 형성되어 있는 것으로 생각되고 있지만, L.lactis 의 게놈 염기 배열로부터는 CRISPR-Cas9 가 발견되지 않는다. 그러나, L.lactis 에서는 CpGDNA 가 TLR9 경로를 통하여 수상 세포의 IFNβ 산생을 활성화하고 있다는 보고가 있다 (비특허문헌 7).

국제 공개 2008/126905호 일본 공개특허공보 2007-327964호

Robinson K, Chamberlain LM, Schofield KM, Wells JM, Le Page RW. Nat Biotechnol. 1997 Jul ; 15(7)653-7 Steidler L, Robinson K, Chamberlain L, Schofield KM, Remaut E, Le Page RW, Wells JM. Infect Immun. 1998 Jul ; 66(7)3183-9 Steidler L, Hans W, Schotte L, Neirynck S, Obermeier F, Falk W, Fiers W, Remaut E. Science. 2000 Aug 25 ; 289(5483)1352-5 Steidler L, Neirynck S, Huyghebaert N, Snoeck V, Vermeire A, Goddeeris B, Cox E, Remon JP, Remaut E. Nat Biotechnol. 2003 Jul ; 21(7)785-9 Makino S, Ikegami S, Kano H, Sashihara T, Sugano H, Horiuchi H, Saito T, Oda M. J Dairy Sci. 2006 Aug ; 89(8) : 2873-81 Kawashima T, Kosaka A, Yan H, Guo Z, Uchiyama R, Fukui R, Kaneko D, Kumagai Y, You DJ, Carreras J, Uematsu S, JangMH, Takeuchi O, Kaisho T, Akira S, Miyake K, Tsutsui H, SaitoT, Nishimura I, Tsuji NM. Immunity. 2013 Jun 27 ; 38(6) : 1187-97 Jounai K, Ikado K, Sugimura T, Ano Y, Braun J, Fujiwara D. PLoS One. 2012 ; 7(4) : e32588

본 발명의 과제는, 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균을 제공하는 것이고, 또, 그 유산균, 그 유산균의 사균 혹은 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 및 그 유산균 혹은 그 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품을 제공하는 것에 있다.

본 발명자는, 상기의 과제를 해결하기 위하여 예의 검토를 거듭한 결과, 키위 프루트로부터 신규의 유산균을 분리하였다. 그리고, 특허문헌 1 에 개시되어 있는, 자연 면역 활성화 반응을 간편하게 측정할 수 있는 방법을 사용하여 검토한 결과, 지금까지 알려져 있는 유산균보다 높은 자연 면역 활성화능을 갖고 있는 것이 확인되었다.

상기의 자연 면역 활성화능을 갖는 유산균은, 그 성상의 분석이나 16S rRNA 의 염기 배열 등의 해석 결과, 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 신규 락트산 균주 (이하,「11/19-B1 주」로 약기하는 경우가 있다) 인 것이 판명되었다.

또, 상기의 유산균을 함유하는 요구르트를 식용한 누에에게, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 또는, 엔테로코쿠스·먼디티를 주사한 결과, 그 균에 감염된 누에는, 높은 저항성을 나타내는 것을 알아내어, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-01694 인 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 유산균을 제공하는 것이다.

이하, 이 발명의 양태를「양태 1」이라고 한다.

또, 본 발명은, 수탁 번호 NITE BP-01694 로 기탁되어 있는 락토코쿠스속에 속하는 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제로서, 상기 유산균의 처리물은, 유산균의 배양물 ; 농축물 ; 페이스트화물 ; 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등의 건조물 ; 액상화물 ; 희석물 ; 파쇄물 ; 살균 가공물, 및 그 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 처리물인 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제를 제공하는 것이다.

이하, 이 발명의 양태를「양태 2」라고 한다.

또, 본 발명은, 수탁 번호 NITE BP-01694 로 기탁되어 있는 락토코쿠스속에 속하는 유산균을 함유하는 음식품을 제공하는 것이고, 또, 상기 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품을 제공하는 것이다. 또, 그 유산균을 사용하여 발효 하는 공정을 사용하여 제조된 음식품을 제공하는 것이다.

이하, 이 발명의 양태를「양태 3」이라고 한다.

또, 본 발명은, 수탁 번호 NITE BP-01694 로 기탁되어 있는 락토코쿠스속에 속하는 유산균을 함유하는 발효유이고, 그 발효유는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 저항성을 갖는 발효유를 제공하는 것이다.

이하, 이 발명의 양태를「양태 4」라고 한다.

본 발명에 의하면, 지금까지 알려져 있는 유산균보다 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 신규의 유산균을 제공할 수 있다.

나아가서는, 그 유산균을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제, 및 그 유산균 또는 그 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품을 제공할 수 있다.

또, 본 발명의 유산균 또는 유산균을 함유하는 발효유를 식용함으로써, 메티실린 감수성 황색 포도구균 (MSSA), 메티실린 내성 황색 포도구균 (MRSA), 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 높은 저항성을 얻을 수 있다.

이들의 균은 원내 감염을 야기시키는 원인균이고, 그 발효유를 식용함으로써, 이들의 균에 의한 감염을 예방 또는 치료할 수 있다.

도 1 의 (A) 는 녹농균, 및 (B) 는 메티실린 감수성 황색 포도구균을 누에에게 감염시켰을 때의 11/19-B1 요구르트의 프로바이오틱스 효과를 검증한 그래프이다. ■ 이 11/19-B1 요구르트를 함유시킨 먹이를 식용시킨 결과, ◆ 가 통상적인 먹이를 식용시킨 결과를 나타낸다.
도 2 의 (A) 는 메티실린 감수성 황색 포도구균, (B) 는 메티실린 내성 황색 포도구균, 및 (C) 는 엔테로코쿠스·먼디티를 누에에게 감염시켰을 때의 11/19-B1 요구르트의 프로바이오틱스 효과를 검증한 그래프이다. ■ 이 11/19-B1 요구르트를 함유시킨 먹이를 식용시킨 결과, ◆ 가 통상적인 먹이를 식용시킨 결과를 나타낸다.
도 3 의 (A) 는 11/19-B1 요구르트, 및 (B) 는 11/19-B1 생균 분말을 함유하는 먹이를 누에에게 식용시킨 후, 녹농균을 감염시켰을 때의 프로바이오틱스 효과를 검증한 그래프이다. ■ 이 11/19-B1 요구르트 (A) 또는 11/19-B1 생균 분말 (B) 를 함유시킨 먹이를 식용시킨 결과, ◆ 가 통상적인 먹이를 식용시킨 결과를 나타낸다.
도 4 의 (A) 는 먹이에 함유시키는 11/19-B1 요구르트의 양을 변화시킴로써 프로바이오틱스 효과의 변화를 나타낸 그래프이다. (B) 는 요구르트 섭취량 및 녹농균의 LD₅₀ 의 상관성을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명에 대해 설명하지만, 본 발명은, 이하의 구체적 양태에 한정되는 것이 아니며, 기술적 사상의 범위 내에서 임의로 변형시킬 수 있다.

＜양태 1＞

본 발명의 양태 1 은, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-01694 인 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 유산균이다.

이하, 이 신규 락트산 균주 (11/19-B1 주) 에 대해 상세히 서술한다.

형태 : 본 11/19-B1 주는, 그람 양성의 간균이고, 편모는 관찰되지 않고, 운동성이 없다. 본 주는, 과실을 분리원으로 하여 분리되었다.

배지에 있어서의 생육 상황 :

(1) GAM 및 MRS 한천 배지 상에서는 백색의 콜로니를 형성한다. 확산성의 색소는 관찰되지 않는다.

(2) 탄산칼슘 함유 MRS 한천 배지 상에서는 락트산의 생성에 수반되는 투명대의 형성이 관찰된다.

생리학적 성질 : 본 11/19-B1 주의 생리학적, 화학 분류학적 성질은 이하와 같다.

(1) 산소에 대한 태도 : 혐기적

(2) 카탈라아제 : -

(3) 알칼리포스파타아제 : -

(4) 에스테라아제 : -

(5) 에스테라아제리파아제 : -

(6) 리파아제 : -

(7) 류신알릴아미다아제 : -

(8) 발린알릴아미다아제 : -

(9) 시스틴알릴아미다아제 : -

(10) 트립신 : -

(11) α-키모트립신 : -

(12) 산성 포스파타아제 : ＋

(13) 나프톨-AS-BI-포스포하이드롤라아제 : ＋

(14) α-갈락토시다아제 : -

(15) β-갈락토시다아제 : -

(16) β-글루쿠로니다아제 : -

(17) α-글루코시다아제 : -

(18) β-글루코시다아제 : -

(19) N-아세틸-β-글루코사미니다아제 : -

(20) α-만노시다아제 : -

(21) α-푸코시다아제 : -

(22) 하기의 당류 등으로부터의 산 및 가스의 생성능

글리세롤 (Glycerol) : -

에리트리톨 (Erythritol) : -

D-아라비노오스 (D-Arabinose) : -

L-아라비노오스 (L-Arabinose) : ＋

D-리보오스 (D-Ribose) : ＋

D-자일로오스 (D-Xylose) : ＋

L-자일로오스 (L-Xylose) : -

D-아도니톨 (D-Adonitol) : -

메틸-β-D-자일로피라노사이드 (methyl-β-D-xylopyranoside) : -

D-갈락토오스 (D-Galactose) : ±

D-글루코오스 (D-Glucose) : ＋

D-프룩토오스 (D-Fructose) : ＋

D-만노오스 (D-Mannose) : ＋

L-소르보오스 (D-Sorbose) : -

L-람노오스 (L-Rhamnose) : -

덜시톨 (Dulcitol) : -

이노시톨 (Inositol) : -

D-만니톨 (D-Mannitol) : ＋

D-소르비톨 (D-Sorbitol) : -

메틸-α-D-만노피라노사이드 (methyl-α-D-mannopyranoside) : -

메틸-α-D-글루코피라노사이드 (methyl-α-D-glucopyranoside) : -

N-아세틸글루코사민 (N-Acetyl glucosamine) : ＋

아미그달린 (Amygdalin) : ±

알부틴 (Arbutin) : ＋

에스쿨린 (Esculin) : ＋

살리신 (Salicin) : ＋

D-셀로비오스 (D-Cellobiose) : -

D-말토오스 (D-Maltose) : ＋

D-락토오스 (D-Lactose) : ＋

D-멜리비오스 (D-Melibiose) : -

D-수크로오스 (D-Sucrose) : ＋

D-트레할로오스 (D-Trehalose) : ＋

인슐린 (Insulin) : -

D-멜레지토오스 (D-Melezitose) : -

D-라피노오스 (D-Raffinose) : -

스타치 (Starch) : -

글리코겐 (Glycogen) : -

자일리톨 (Xylitol) : -

겐티오비오스 (Gentiobiose) : ＋

D-투라노오스 (D-Turanose) : -

D-릭소오스 (D-Lyxose) : -

D-타가토오스 (D-Tagatose) : -

D-푸코오스 (D-Fucose) : -

L-푸코오스 (L-Fucose) : -

D-아라비톨 (D-Arabitol) : -

L-아라비톨 (L-Arabitol) : -

글루코네이트 (Gluconate) : ±

2-케토-글루코네이트 (2-Keto-gluconate) : -

5-케토-글루코네이트 (5-Keto-gluconate) : -

분자 생물학적 해석 결과 : 분자 생물학적인 계통 분류의 지표로서 사용되고 있는 16S rRNA 에 관한 11/19-B1 주의 해석 결과는 이하와 같다.

11/19-B1 주의 게놈 DNA 로부터, PCR 에 의해, 16S rRNA 영역의 염기 배열을 증폭하고, 시퀸서에 의한 해석을 실시한 결과, 5' 말단측, 3' 말단측의 몇 개의 염기를 제외한 16S rRNA 의 거의 전체 길이에 해당되는 염기 배열을 알아내었다. 이 염기 배열을 배열표의 배열 번호 1 에 나타낸다. 배열표의 배열 번호 1 의 염기 배열은, 16S rRNA 의 전체 길이가 아니기 때문에, 16S rRNA「영역」으로 하였다.

이 염기 배열을 NCBI 의 BLAST 로 상동성 검색을 실시한 결과, 11/19-B1 주의 16S rRNA 영역의 염기 배열은, 락토코쿠스속인 Lactococcus lactis subsp. lactis IL1403, Lactococcus lactis subsp. hordniae NCDO 2181, Lactococcus lactis subsp. lactis NCDO9604 주의 염기 배열 (NR_103918, NR_040956, NR_040955) 과 상동률 99 ％ 를 나타냈다. 그러나, 완전히는 일치하고 있지 않기 때문에, 11/19-B1 주와는 상이한 것이다.

이상의 11/19-B1 주의 성질을, 버지스·매뉴얼·오브·시스테마틱 박테리올로지 (Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, vol.3 1989) 에 의한 분류 및 그 밖의 문헌의 기재 내용에 대조하고, 또한, 16S rRNA 해석의 결과를 고려하여 종합적으로 판단한 결과, 11/19-B1 주는, 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 미생물인 것으로 판단하였다.

또, 11/19-B1 주의 16S rRNA 영역의 염기 배열에 일치하는 16S rRNA 영역의 염기 배열을 갖는 미생물이 존재하지 않는 것, 락토코쿠스·락티스에 속하는 이미 알려진 주와 비교하여, 높은 자연 면역 활성화능을 나타내는 것 등을 포함하여 종합적으로 판단한 결과, 11/19-B1 주는, 신규 미생물주인 것으로 판단하였다.

11/19-B1 주는, 치바현 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (Natural Institute of Technology and Evaluation, 이하,「NITE」라고 약기한다) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 일본 내 기탁되고, 수탁 번호 : NITE BP-01694 (기탁일 : 2013년 8월 20일) 로서 수탁된 미생물이다.

「11/19-B1」는, 그 후, 치바현 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 원기탁 신청서를 제출하여, 일본 내 기탁 (원기탁일 : 2013년 8월 20일) 으로부터, 부다페스트 조약에 기초하는 기탁으로의 이관 신청을 실시하였다 (수령일 : 2014년 10월 15일, 수탁 번호「NITE BP-01694」).

박테리아의 일반적인 성상으로서, 그 균주로서의 성질은 변이하기 쉽기 때문에, 11/19-B1 주는, 앞서 나타낸 생리학적 성상의 범위 내에 머물지 않을 가능성도 갖고 있다. 또, 이러한「변이」에는, 자연적인 변이와 인공적인 변이의 양방을 포함하는 것은 말할 필요도 없다.

이하에 11/19-B1 주의 배양 방법에 대해 기재한다. 11/19-B1 주의 배양 방법은, 락토코쿠스속의 미생물에 대해 실시되는 일반적인 배양 방법에 준하여 실시하면 된다.

배양은 혐기 조건 하에서 실시하는 것이 바람직하다. 배지 중의 탄소원으로는, 예를 들어, L-아라비노오스, D-리보오스, D-자일로오스, D-갈락토오스, D-만노오스, D-만니톨, N-아세틸글루코사민, 아미그달린, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, D-셀로비오스, D-말토오스, D-락토오스, D-트레할로오스, 겐티오비오스, 글루코네이트, D-글루코오스, D-프룩토오스, 수크로오스, 당밀, 물엿, 유지류 등의 유기 탄소화합물이 사용되고, 질소원으로는, 고기즙, 카세인, 펩톤, 효모 엑기스, 건조 효모, 배아, 대두분, 우레아, 아미노산, 암모늄염 등의 유기·무기 질소 화합물을 사용할 수 있다.

또, 염류는, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 인산염, 철염, 구리염, 아연염, 코발트염 등의 무기 염류를 필요에 따라 적절히 첨가한다. 또한, 비오틴, 비타민 B1, 시스틴, 올레산메틸, 라드유 등의 생육 촉진 물질을 첨가하는 것이, 목적물의 산생량을 증가시키는 점에서 바람직하다.

또, 실리콘유, 계면활성제 등의 소포제를 첨가해도 된다. 조제가 완료된 배지로는, 예를 들어, MRS 배지, GAM 배지 등을 사용하는 것이 바람직하다.

배양 조건은, 앞서 기재한 바와 같이 락토코쿠스속의 미생물에 대해 실시되는 일반적인 배양 조건에 준하여 실시하면 된다. 액체 배양법이면 정치 (靜置) 배양이 바람직하다. 소규모이면 뚜껑이 장착된 유리병에 의한 정치 배양법을 사용해도 된다. 배양 온도는, 25 ℃ ∼ 37 ℃ 사이로 유지하는 것이 바람직하고, 37 ℃ 부근에서 실시하는 것이 보다 바람직하다. 배양 pH 는, 7 부근에서 실시하는 것이 바람직하다. 배양 기간은, 사용한 배지 조성, 배양 온도 등에 따라 변동되는 팩터이지만, 11/19-B1 주의 경우, 통상적으로는 12 ∼ 48 시간 정도, 바람직하게는 12 ∼ 24 시간 정도의 단기간에 충분한 양의 목적물을 확보할 수 있다.

＜양태 2＞

본 발명의 양태 2 는, 양태 1 의 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제로서,

상기 유산균의 처리물은, 유산균의 배양물, 농축물, 페이스트화물, 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등의 건조물, 액상화물, 희석물, 파쇄물, 살균 가공물 및 그 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 처리물인 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제이다.

즉, 본 발명의 양태 2 는, 양태 1 의 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제이다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 양태 1 의 유산균을 여러 가지 상태에서 함유할 수 있고, 예를 들어, 유산균 현탁액, 유산균 배양물 (균체, 배양 상청 액 (배지 성분을 함유한다)) 을 들 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 양태 1 의 유산균을 그대로 함유해도 되고, 또는, 양태 1 의 유산균에 어떠한 처리를 실시한 유산균 처리물로서 함유해도 된다.

본 발명의 자연 면역 활성화제에 사용되는 유산균의 처리물로는, 구체적으로는, 예를 들어, 유산균의 배양물 ; 농축물 ; 페이스트화물 ; 분무 건조물, 동결 건조물, 진공 건조물, 드럼 건조물 등의 건조물 ; 액상화물 ; 희석물 ; 파쇄물 ; 살균 가공물 ; 그 배양물로부터의 추출물 ; 등을 들 수 있다.

유산균으로는, 생균체, 습윤균, 건조균 등이 적절히 사용 가능하다.

또, 살균, 즉, 가열 살균 처리, 방사선 살균 처리, 파쇄 처리 등을 실시한 사균이어도 된다.

본 발명의 자연 면역 활성화제 중의 유효 성분인, 유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물의 자연 면역 활성화제 전체에 대한 함유량은, 특별히 제한이 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있는데, 자연 면역 활성화제 전체를 100 질량부로 했을 때에, 유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물의 합계량으로서, 0.001 ∼ 100 질량부의 함량으로 배합하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 99 질량부, 특히 바람직하게는 0.1 ∼ 95 질량부, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 90 질량부의 함량으로 배합할 수 있다.

또, 상기 유효 성분은, 어느 1 종을 단독으로 사용해도 되고, 2 종 이상을 병용해도 된다. 2 종 이상을 병용하는 경우의 상기 자연 면역 활성화제 중의 각각의 유효 성분의 함유비에 대해서도, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 분유 등, 생물학적 규격을 갖는 의약품 및/또는 음식품에 있어서도 첨가하는 것도 가능하고, 의약품 및/또는 음식품의 형태등에 상관없이 여러 가지 의약품 및/또는 음식품에 응용할 수 있다.

또, 본 발명의 자연 면역 활성화제는, 유효 성분인 유산균, 그 유산균의 사균, 그 유산균의 처리물에 더하여,「그 밖의 성분」을 함유할 수 있다.

상기 자연 면역 활성화제에 있어서의 상기「그 밖의 성분」으로는, 특별히 제한은 없고, 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 약학적으로 허용될 수 있는 담체 등을 들 수 있다.

이러한 담체로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 후술하는 제형 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 또, 상기 자연 면역 활성화제 중의 상기「그 밖의 성분」의 함유량으로서도, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제의 제형으로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 후술하는 바와 같은 원하는 투여 방법에 따라 적절히 선택할 수 있다.

구체적으로는, 예를 들어, 경구 고형제 (정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등), 경구 액제 (내복액제, 시럽제, 엘릭시르제 등), 주사제 (용제, 현탁제 등), 연고제, 첩부제 (貼付劑), 겔제, 크림제, 외용 산제, 스프레이제, 흡입 산포 제 등을 들 수 있다.

상기 경구 고형제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에 부형제, 나아가서는 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미 (矯味)·교취제 (矯臭劑) 등의 첨가제를 첨가하여 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.

상기 부형제로는, 예를 들어, 젖당, 백당, 염화나트륨, 포도당, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 미결정 셀룰로오스, 규산 등을 들 수 있다.

상기 결합제로는, 예를 들어, 물, 에탄올, 프로판올, 단 (單) 시럽, 포도당액, 전분액, 젤라틴액, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필스타치, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셸락, 인산칼슘, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있다.

상기 붕괴제로는, 예를 들어, 건조 전분, 알긴산나트륨, 분말 한천, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 라우릴황산나트륨, 스테아르산모노글리세라이드, 젖당 등을 들 수 있다.

상기 활택제로는, 예를 들어, 정제 탤크, 스테아르산염, 붕사, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

상기 착색제로는, 예를 들어, 산화티탄, 산화철 등을 들 수 있다.

상기 교미·교취제로는, 예를 들어, 백당, 등피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다.

상기 경구 액제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, 교미·교취제, 완충제, 안정화제 등의 첨가제를 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.

상기 교미·교취제로는, 예를 들어, 백당, 등피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다. 상기 완충제로는, 예를 들어, 시트르산나트륨 등을 들 수 있다. 상기 안정화제로는, 예를 들어, 크래거캔스, 아라비아고무, 젤라틴 등을 들 수 있다.

상기 주사제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, pH 조절제, 완충제, 안정화제, 등장화제, 국소 마취제 등을 첨가하고, 통상적인 방법에 따라 피하용, 근육 내용, 정맥 내용 등의 주사제를 제조할 수 있다.

상기 pH 조절제 및 상기 완충제로는, 예를 들어, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 인산나트륨 등을 들 수 있다. 상기 안정화제로는, 예를 들어, 피로아황산나트륨, EDTA, 티오글리콜산, 티오락트산 등을 들 수 있다. 상기 등장화제로는, 예를 들어, 염화나트륨, 포도당 등을 들 수 있다. 상기 국소 마취제로는, 예를 들어, 염산프로카인, 염산리도카인 등을 들 수 있다.

상기 연고제로는, 예를 들어, 상기 유효 성분에, 공지된 기제, 안정제, 습윤제, 보존제 등을 배합하고, 통상적인 방법에 따라 혼합하여, 제조할 수 있다.

상기 기제로는, 예를 들어, 유동 파라핀, 백색 바셀린, 표백 밀랍, 옥틸도데실알코올, 파라핀 등을 들 수 있다. 상기 보존제로는, 예를 들어, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 등을 들 수 있다.

상기 첩부제로는, 예를 들어, 공지된 지지체에 상기 연고제로서의 크림제, 겔제, 페이스트제 등을 통상적인 방법에 따라 도포하여, 제조할 수 있다. 상기 지지체로는, 예를 들어, 면, 스테이플 파이버, 화학 섬유로 이루어지는 직포, 부직포, 연질 염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리우레탄 등의 필름, 발포체 시트 등을 들 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제는, 예를 들어, 자연 면역 기구의 활성화를 필요로 하는 개체 (예를 들어, 건강 유지나 피로 회복을 필요로 하는 개체 ; 암이나 생활 습관병의 예방이나 치료를 필요로 하는 개체 ; 세균, 진균, 바이러스 등에 감염된 개체 ; 등) 에 투여함으로써 사용할 수 있다.

본 발명의 자연 면역 활성화제의 투여 대상 동물로는, 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 인간 ; 마우스 ; 래트 ; 원숭이 ; 말 ; 소, 돼지, 염소, 닭 등의 가축 ; 고양이, 개 등의 애완 동물 ; 등을 들 수 있다.

또, 상기 자연 면역 활성화제의 투여 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 상기 자연 면역 활성화제의 제형 등에 따라 적절히 선택할 수 있고, 경구 투여, 복강 내 투여, 혈액 중으로의 주사, 장 내로의 주입 등을 들 수 있다.

또, 상기 자연 면역 활성화제의 투여량으로는, 특별히 제한은 없고, 투여 대상인 개체의 연령, 체중, 원하는 효과의 정도 등에 따라 적절히 선택할 수 있는데, 예를 들어, 성인에 대한 1 일의 투여량은, 유효 성분의 양으로서, 1 ㎎ ∼ 30 g 이 바람직하고, 10 ㎎ ∼ 10 g 이 보다 바람직하고, 100 ㎎ ∼ 3 g 이 특히 바람직하다.

또, 상기 자연 면역 활성화제의 투여 시기로서도, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들어, 예방적으로 투여되어도 되고, 치료적으로 투여되어도 된다.

＜양태 3＞

본 발명의 양태 3 은, 상기 본 발명의 유산균 또는 상기 본 발명의 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품이다.

상기 유산균 또는 상기 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품 (이하,「본 발명의 음식품」이라고 약기하는 경우가 있다) 중의 유산균 또는 자연 면역 활성화제의 함유량은, 특별히 제한이 없고, 목적이나 음식품의 양태 (종류) 에 따라, 적절히 선택할 수 있는데, 음식품 전체를 100 질량부로 했을 때에, 상기 자연 면역 활성화제의 합계량으로, 0.001 ∼ 100 질량부로 함유하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 100 질량부, 특히 바람직하게는 0.1 ∼ 100 질량부의 함량이다.

또, 유산균 또는 자연 면역 활성화제 중 어느 1 종을 단독으로 사용해도 되고, 2 종 이상을 병용해도 된다. 2 종 이상을 병용하는 경우의 상기 음식품 중의 각각의 물질의 함유량비에는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 양태 3 의 음식품은, 자연 면역 활성화 작용을 갖는다.

본 발명의 음식품은, 본 발명의 양태 2 의 자연 면역 활성화제에 더하여, 추가로,「그 밖의 성분」을 함유할 수 있다.

이러한 자연 면역 활성화 작용을 갖는 본 발명의 음식품에 있어서의 상기「그 밖의 성분」으로는, 특별히 제한은 없고, 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 각종 식품 원료 등을 들 수 있다. 또,「그 밖의 성분」의 함유량은, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.

상기 음식품의 종류로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 젤리, 캔디, 초콜릿, 비스킷 등의 과자류 ; 녹차, 홍차, 커피, 청량 음료 등의 기호 음료 ; 발효유, 요구르트, 아이스크림 등의 유제품 ; 야채 음료, 과실 음료, 잼류 등의 야채·과실 가공품 ; 스프 등의 액체 식품 ; 빵류, 면류 등의 곡물 가공품 ; 각종 조미료 ; 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 요구르트, 발효유 등의 유제품이 바람직하다.

이들의 음식품의 제조 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 예를 들어, 통상적인 각종 음식품의 제조 방법에 따라, 적절히 제조할 수 있다.

또, 상기 음식품은, 예를 들어, 정제, 과립제, 캡슐제 등의 경구 고형제나, 내복액제, 시럽제 등의 경구 액제로서 제조된 것이어도 된다. 상기 경구 고형제, 경구 액제의 제조 방법은, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어, 상기한 약제의 경구 고형제, 경구 액제의 제조 방법에 따라, 제조할 수 있다.

상기 음식품은, 자연 면역 기구의 활성화를 목적으로 한, 기능성 식품, 건강식품 등으로서 특히 유용한 것으로 생각된다.

상기 11/19-B1 주는, 키위 프루트로부터 인위적으로 분리된 신규의 유산균이다. 키위 프루트 이외에는, 자연계에 있어서, 11/19-B1 주는 단리된 형으로는 존재하지 않는다. 따라서, 인위적으로 분리된 11/19-B1 주는 자연계에 존재하는 물질 그 자체가 아니다. 따라서, 그 11/19-B1 주를 함유하는 자연 면역 활성화제도, 그 11/19-B1 주를 함유하는 음식품도, 모두 자연산물에는 해당 하지 않는다.

하물며, 자연계에서는, 상기 11/19-B1 주와 젖이 접촉하는 경우는 없고, 상기 균주가 음식품으로서 존재하는 경우도 없기 때문에, 본 발명의 발효유와 음식품은 자연계에 존재하였던 경우는 없고, 따라서 이들은 모두 자연산물에는 해당하지 않는다.

본 발명의 유산균 또는 자연 면역 활성화제를 음식품의 제조에 사용하는 경우, 제조 방법은 당업자에게 주지된 방법에 의해 실시할 수 있다. 당업자라면, 본 발명의 유산균의 균체 또는 처리물을 다른 성분과 혼합하는 공정, 성형 공정, 살균 공정, 발효 공정, 소성 공정, 건조 공정, 냉각 공정, 조립 공정, 포장 공정 등을 적절히 조합하여, 목적의 음식품을 만드는 것이 가능하다.

또, 본 발명의 유산균을 각종 발효유의 제조에 사용하는 경우, 당업자에게 주지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 유산균을 발효유에 사균으로서 소요량 첨가하는 공정을 사용하여 제조된 음식품이나, 유산균 스타터로서 본 발명의 유산균을 사용하여 발효하는 공정을 사용하여 제조된 음식품을 들 수 있다.

유산균 스타터로서 본 발명의 유산균을 사용하여 발효를 실시하는 경우, 본 발명의 유산균의 배양 조건과 동일한 조건 등으로 실시할 수 있다.

＜양태 4＞

본 발명의 양태 4 는, 상기 본 발명의 유산균을 함유하는 발효유이고, 그 발효유는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 저항성을 갖는 것을 특징으로 하는 발효유이다.

발효유란, 소 등의 젖을, 유산균이나 효모로 발효시킨 유제품으로서, 예를 들어, 요구르트 등을 들 수 있다.

상기 본 발명의 유산균을 함유하는 발효유가, 메티실린 감수성 황색 포도구균 (Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus (MSSA)), 메티실린 내성 황색 포도구균 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)), 녹농균 (Pseudomonas aeruginosa), 및 엔테로코쿠스·먼디티 (Enterococcus mundtii) 의 어느 균에 대해서도 저항성을 갖는 것은, 실시예 4 ∼ 6 의 결과에 나타내고 있다.

상기 발효유의 접종 대상자는, 정상인도 여러 가지 감염증에 대한 저항력을 높인다는 의미로도 물론 섭취 대상자이고, 각종 감염증을 갖는 자도 자연 면역 기능의 저하에 수반하는 질환자에 한정하지 않고, 전신의 자연 면역 기능의 활성화를 목적으로 하여 대부분의 질환을 갖는 자에게 사용할 수 있다. 또한 동물에 대해서도 사료나 동물용 약품 등 여러 가지 형태로 적용할 수 있다.

상기 발효유는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티에 의한 감염의 예방 또는 치료에 사용되는 것이 바람직하고, 특히 녹농균 감염의 예방 또는 치료에 사용되는 것이 바람직하다.

실시예

이하, 실시예 및 검토예에 기초하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명은 이하의 실시예 등의 구체적 범위에 한정되는 것은 아니다.

실시예에 있어서 사용하는「11/19-B1 주」는, 상기 서술한 바와 같이, 키위 프루트로부터 분리된 것이다. 락토코쿠스·락티스 (Lactococcus lactis) 에 속하는 유산균 11/19-B1 주로서 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) (치바현 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8) 에 기탁되어 있다 (수탁 번호 : NITE BP-01694, 기탁일 : 2013년 8월 20일).

「11/19-B1」는, 그 후, 치바현 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에, 원기탁 신청서를 제출하여, 일본 내 기탁 (원기탁일 : 2013년 8월 20일) 으로부터, 부다페스트 조약에 기초하는 기탁으로의 이관 신청을 실시하였다 (수령일 : 2014년 10월 15일, 수탁 번호「NITE BP-01694」).

실시예 1

＜자연 면역 활성화 활성의 측정＞

GAM 배지에서 하룻밤 배양한 11/19-B1 주를, 121 ℃, 20 분으로 멸균 처리 후, 50 ㎕ 를 5 령 누에의 단두 (斷頭) 근육 표본에 주사하고, 완행성 근수축에 의해 자연 면역 활성화 활성을 측정하였다.

완행성 근수축에 의한 자연 면역 활성화 활성의 측정은, Ishii K., Hamamoto H., Kamimura M., Sekimizu K., J.Biol.Chem. Jan.25 ; 283(4) : 2185-91 (2008) 에 기재된 방법에 따라 실시하였다.

즉, 5 령 누에의 단두 근육 표본에, 상기 시료 0.05 ㎖ 를 혈액 내 투여하고, C 값이 최대가 되었을 때 (약 10 분 후) 에 몸 길이를 측정하여, 주사 전의 몸 길이로부터 주사 후의 몸 길이를 빼고, 그 값을 주사 전의 몸 길이로 나눈 값인 C 값 (Contraction Value) 을 측정하였다.

비교예 1

GAM 배지에서 하룻밤 배양한 락토바실루스·불가리쿠스 OLL1073 주를, 121 ℃, 20 분으로 멸균 처리 후, 50 ㎕ 를 단두 누에에게 주사하고, 근수축에 의해 자연 면역 활성화 활성을 측정하였다.

비교예 2

GAM 배지에서 하룻밤 배양한 락토바실루스·카제이 YIT9029 주를, 121 ℃, 20 분으로 멸균 처리 후, 50 ㎕ 를 단두 누에에게 주사하고, 근수축에 의해 자연 면역 활성화 활성을 측정하였다.

비교예 3

GAM 배지에서 하룻밤 배양한 락토코쿠스·락티스 JCM5805 주를, 121 ℃, 20 분으로 멸균 처리 후, 50 ㎕ 를 단두 누에에게 주사하고, 근수축에 의해 자연 면역 활성화 활성을 측정하였다.

실시예 1 및 비교예 1 ∼ 3 의 결과를 표 1 에 나타낸다. C 값 ＝ 0.15 를, 1 (U) 유닛으로 정의한다.

비교예 1 ∼ 3 의 유산균은, 실제로 시판되는 발효유의 제조에 사용되고 있는 유산균이다.

표 1 에 나타내는 바와 같이, 실시예 1 의 유산균은, 비교예 1 ∼ 3 에 비하여 보다 높은 자연 면역 활성화능을 갖는 것을 알 수 있었다.

11/19-B1 주, 및 그 사균은, 자연 면역 활성화능이 높은 점에서, 11/19-B1 주는, 자연 면역을 활성화시키는「발효유 등의 음식품」의 생산균으로서 유망한 것이 시사되었다.

검토예 1

＜16S rRNA 해석＞

11/19-B1 주의 16S rDNA 의 염기를 게놈 DNA 로부터 PCR 법에 의해 증폭하고, 증폭할 수 있었던 DNA 단편에 대해 시퀸서에 의해 해석하고, 5' 말단측, 3' 말단측의 몇 개의 염기를 제외한 배열 번호 1 에 나타내는 거의 16S rRNA 영역 전체 길이에 상당하는 염기 배열을 결정하였다.

이 염기 배열을 기초로, NCBI 의 BLAST 를 사용하여 기존의 균주와의 상동성 검색을 실시하였다. 그 결과, 11/19-B1 주는, 기존의 Lactococcus lactis IL1403 주와 99 ％ 의 상동성을 나타낸 점에서, 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 미생물인 것으로 생각되었다.

＜11/19-B1 주의 신규성에 대해＞

11/19-B1 주는, 당의 발효능과 화학적 성질에 대해 기존의 Lactococcus lactis 에 상사 (相似) 한 점이 많고, 세균 944 주의 api web v5.1 database (시스멕스·비오메리으) 에 의한 해석에서는, Lactococcus lactis ssp lactis 1 과 77.2 ％ 의 동일성을 나타내고, Lactobacillus brevis 1 과 21.9 ％ 의 동일성을 나타낸 점에서 완전히 상이하다. 이 점은, 기존의 균주와의 큰 차이점이다. 또한, Lactobacillus brevis 일 가능성은 11/19-B1 주의 그람 염색 이미지가 그람 양성 구균인 점에서 배제된다. 따라서, 이상의 결과로부터, 11/19-B1 주는, 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 신규 미생물인 것으로 판정되었다.

실시예 2

＜자연 면역 활성화제의 제조＞

＜＜정제＞＞

배양한 11/19-B1 주를, 121 ℃, 20 분으로 멸균 처리 후, 농축하였다. 그 농축시킨 11/19-B1 주의 배양액 20.0 ㎎, 락토오스 40 ㎎, 전분 20 ㎎, 및 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스 5 ㎎ 을 균일하게 혼합한 후, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 8 질량％ 수용액을 결합제로 하여 습식 조립법 (造粒法) 으로 타정 용 과립을 제조하였다. 이것에, 활택성을 부여하는 데에 필요한 스테아르산마그네슘을 0.5 ㎎ ∼ 1 ㎎ 첨가한 후 타정기를 사용하여 타정하고, 정제로 하였다.

＜＜액제＞＞

상기 농축시킨 11/19-B1 주의 배양액 10.0 ㎎ 을, 2 질량％ 의 2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린 수용액 10 ㎖ 에 용해시켜, 주사용 액제로 하였다.

실시예 3

＜발효유의 제조＞

우유를 95 ℃ 에서 5 분간 살균한 후, 40 ℃ 로 냉각시키고, 11/19-B1 주를 0.001 질량부 첨가하였다. 그리고, 37 ℃, 72 시간으로 발효하여, 발효유를 얻었다. 그 발효유를 10 ℃ 이하에서 냉각시킨 후, 풍미와 물성을 확인하였다.

그 결과, 풍미와 물성은 모두 매우 양호하였다.

실시예 4

＜11/19-B1 요구르트의 프로바이오틱스 효과＞

생체 외의 실험에서는, 11/19-B1 주의 배양액, 배양 상청, 및 11/19-B1 주를 사용하여 제조된 요구르트에는 항균 활성이 보이지 않았다 (도시 생략).

11/19-B1 주를 사용하여 제조된 요구르트의 프로바이오틱스 효과 (생균을 이용하여 장 내 밸런스를 개선하고, 저항력이나 면역력을 높이는 효과) 를 검증하였다.

＜＜누에균 감염 모델의 제작＞＞

LB 배지에서 하룻밤 배양한 녹농균 (Pseudomonas aeruginosa PAO1) 또는 메티실린 감수성 황색 포도구균 (Staphylococcus aureus MSSA1) 의 배양액을, 멸균한 0.9 질량％ NaCl 용액으로 희석하여, 5 령 2 일째의 누에 유충 (평균 체중 2 g) 에게 50 ㎕ 씩 혈액 내 주사하였다.

＜＜요구르트의 제작＞＞

유산균 (11/19-B1 주) 분말 50 ㎎ 을 생리 식염수 (멸균이 완료된 0.9 질량％ NaCl 용액) 1 ㎖ 에 현탁하고, 현탁액 50 ㎕ 를 0.267 질량％ 글루코오스 및 0.025 질량％ 카사미노산을 함유하는 우유 200 ㎖ 중에 혼합하고, 멸균한 유리병 중에서, 37 ℃, 3 일간 보온하였다. 이하, 제작한 요구르트를「11/19-B1 요구르트」로 약기한다.

＜＜검증 방법＞＞

11/19-B1 요구르트를 함유하는 먹이, 또는, 대조로서 통상적인 먹이를 누에에게 하룻밤 준 후, 누에에게 균을 감염시켰다. 통상적인 먹이로서, 인공 사료 실크메이트 2S (니혼 농산 공업) 를 사용하였다. 여기서,「11/19-B1 요구르트를 함유하는 먹이」란, 통상적인 먹이에 11/19-B1 요구르트를 혼합시킨 먹이이다.

1 군당 누에의 총 수는 7 마리로 하고, 녹농균 또는 메티실린 감수성 황색 포도구균의 접종 2 일 후에 생사를 판정하고, 생존 곡선으로부터 LD₅₀ (50 ％ 반수 치사량) 을 산출하였다. 네거티브 컨트롤에는 0.9 질량％ NaCl 용액을 사용하였다. 결과를 도 1 에 나타낸다.

도 1 중, 종축은 생존율 (Survival％), 횡축은 감염 2 일 후의 생존율에 있어서의 균의 용량 의존성을 나타낸다 (OD₆₀₀).

또, 동일한 수법을 사용하여, 그람 양성 세균인 메티실린 감수성 황색 포도구균 (S. aureus MSSA1), 메티실린 내성 황색 포도구균 (S. aureus MRSA4), 또는, 엔테로코쿠스·먼디티 (Enterococcus mundtii 12/5-1) 를 누에에게 감염시켜, 프로바이오틱스 효과를 검증하였다. 결과를 도 2 에 나타낸다.

도 1 및 도 2 의 결과로부터, 누에에게 감염시킨 P. aeruginosa PAO1, S. aureus MSSA1, S. aureus MRSA4 및 엔테로코쿠스·먼디티에 대해, 11/19-B1 요구르트를 함유시킨 먹이를 식용시킴으로써, 누에는 어느 균에 대해서도 높은 저항성을 나타냈다.

이상의 결과로부터, 11/19-B1 요구르트의 프로바이오틱스 효과가 확인되었다. 특히, 녹농균을 감염시켰을 때 (도 1(A)) 에 강한 효과가 확인됨으로써, 녹농균 감염의 예방의 가능성이 시사되었다.

실시예 5

＜누에 녹농균 감염 모델에서의 11/19-B1 요구르트 및 11/19-B1 생균 분말의 효과의 비교＞

다음으로, 녹농균을 감염시켰을 때에 강한 효과를 나타낸 요인을 검증하였다.

10 리터 스케일로 11/19-B1 주를 배양하고, 생균 분말을 제작하였다. 이하, 제작한 생균 분말을「11/19-B1 생균 분말」로 약기한다.

실시예 4 에서 동일한 수법에 의해, 11/19-B1 요구르트 (8 × 10⁷ cfu/g, 0.5 g/개체) 를 함유하는 먹이, 11/19-B1 생균 분말 (4 × 10⁸ cfu/g, 0.1 g/개체) 을 함유하는 먹이, 또는, 통상적인 먹이를 누에에게 하룻밤 준 후, 누에에게 녹농균 (P. aeruginosa PAO1) 을 감염시켰다.

결과를 도 3 및 표 2 에 나타낸다.

또, 도 3 및 표 2 의 결과로부터, 누에에게 감염시킨 녹농균 (P. aeruginosa PAO1) 에 대해, 11/19-B1 생균 분말에 의한 프로바이오틱스 효과가 확인되었다.

또, 11/19-B1 요구르트 및 11/19-B1 생균 분말은 동등한 효과였기 때문에, 11/19-B1 에 의한 녹농균 감염사의 예방 효과는, 균 자체에 함유되는 성분에 의한 프로바이오틱스 효과인 것이 아닐까 시사되었다.

실시예 6

＜누에 녹농균 감염 모델에서의 11/19-B1 요구르트 섭취량과 LD₅₀ 의 상관성＞

실시예 4 과 동일한 수법에 의해, 먹이 전체에 대해, 11/19-B1 요구르트를 6 질량％, 11 질량％, 20 질량％, 33 질량％ 를 각각 함유하는 먹이, 또는, 대조로서 통상적인 먹이를 누에에게 하룻밤 준 후, 누에에게 녹농균 (P. aeruginosa PAO1) 을 감염시켰다.

결과를 도 4 에 나타낸다. 도 4B 는, 요구르트 섭식량과 녹농균 (P. aeruginosa PAO1) 의 LD₅₀ 의 상관성을 나타낸 그래프이다. 도 4B 중, 종축은, LD₅₀ 비 ((11/19-B1 요구르트를 함유하는 먹이를 준 경우의 LD₅₀ 값)/(11/19-B1 요구르트를 함유하고 있지 않은 통상적인 먹이를 준 경우의 LD₅₀ 값)) 이고, 횡축은, 먹이 전체에 대한 요구르트의 비율 (질량％) 이다.

도 4 의 결과, 요구르트 섭식량과 LD₅₀ 은 상관성이 있는 것을 알 수 있었다.

산업상 이용가능성

본 발명의 신규 유산균은, 높은 자연 면역 활성화능을 갖는다. 따라서, 본 발명의 유산균을 이용한, 자연 면역을 활성화시키는 자연 면역 활성화제 또는 음식품을 제공할 수 있고, 식품 업계나 의약품 업계 등에서 널리 이용 가능하다.

본원은, 2013년 10월 17일에 출원한 일본의 특허 출원인 일본 특허출원 2013-216517호에 기초하는 것으로, 그 출원의 모든 내용은 여기에 인용하고, 본 발명의 명세서의 개시로서 받아들여지는 것이다.

수탁 번호

NITE BP-01694

배열표 프리 텍스트

배열 번호 1 은 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 미지의 균주의 16S rRNA 의 거의 전체 길이에 해당하는 염기 배열이다.

NITE Patent Microorganisms Depositary National Institute of Technology and Evaluation

NITEBP-01694

20130820

SEQUENCE LISTING <110> Genome Pharmaceuticals Institute Co., Ltd. Nature Holdings Co., Ltd. The University of Tokyo Tohoku Kyodo Milk Industry Co., Ltd. <120> Novel lactic acid bacterium, innate immunity activator comprising the lactic acid bacterium as active component, and food and drink comprising the lactic acid bacterium <130> PF-061049-WO <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1434 <212> DNA <213> Lactococcus lactis <400> 1 agttgagcgc tgaggttggt acttgtacca actggatgag cagcgaacgg gtgagtaacg 60 cgtggggaat ctgcctttga gcgggggaca acatttggaa acgaatgcta ataccgcata 120 aaaactttaa acacaagttt taagtttgaa agatgcaatt gcatcactca aagatgatcc 180 cgcgttgtat tagctagttg gtgaggtaaa ggctcaccaa ggcgatgata catagccgac 240 ctgagagggt gatcggccac attgggactg agacacggcc caaactccta cgggaggcag 300 cagtagggaa tcttcggcaa tggacgaaag tctgaccgag caacgccgcg tgagtgaaga 360 aggttttcgg atcgtaaaac tctgttggta gagaagaacg ttggtgagag tggaaagctc 420 atcaagtgac ggtaactacc cagaaaggga cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa 480 tacgtaggtc ccgagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggtggtttat 540 taagtctggt gtaaaaggca gtggctcaac cattgtatgc attggaaact ggtagacttg 600 agtgcaggag aggagagtgg aattccatgt gtagcggtga aatgcgtaga tatatggagg 660 aacaccggtg gcgaaagcgg ctctctggcc tgtaactgac actgaggctc gaaagcgtgg 720 ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctagatgta 780 gggagctata agttctctgt atcgcagcta acgcaataag cactccgcct ggggagtacg 840 accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg 900 tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga catactcgtg ctattcctag 960 agataggaag ttccttcggg acacgggata caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg 1020 tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ctattgttag ttgccatcat 1080 taagttgggc actctaacga gactgccggt gataaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc 1140 aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggatg gtacaacgag 1200 tcgcgagaca gtgatgttta gctaatctct taaaaccatt ctcagttcgg attgtaggct 1260 gcaactcgcc tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcacg ccgcggtgaa 1320 tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg ggagttggga gtacccgaag 1380 taggttgcct aaccgcaagg agggcgcttc ctaaggtaag accgatgact gggg 1434

Claims

독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 (NITE) 의 특허 미생물 기탁 센터 (NPMD) 에 있어서의 수탁 번호가 NITE BP-01694 인 락토코쿠스 (Lactococcus) 속에 속하는 유산균.
제 1 항에 있어서,
배열표의 배열 번호 1 로 나타내는 16S rRNA 영역의 염기 배열을 갖는 유산균.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 유산균, 그 유산균의 사균, 또는, 그 유산균의 처리물을 유효 성분으로 하는 자연 면역 활성화제로서,
상기 유산균의 처리물은, 유산균의 배양물, 농축물, 페이스트화물, 건조물, 액상화물, 희석물, 파쇄물, 살균 가공물, 및 그 배양물로부터의 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 처리물인 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 유산균을 함유하는 음식품.
제 3 항에 기재된 자연 면역 활성화제를 함유하는 음식품.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 유산균을 사용하여 발효시키는 공정을 사용하여 제조된 음식품.
제 6 항에 있어서,
상기 음식품이 발효유인 음식품.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 유산균을 함유하는 발효유이고,
그 발효유는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 저항성을 갖는 것을 특징으로 하는 발효유.
제 3 항에 있어서,
그 자연 면역 활성화제는, 메티실린 감수성 황색 포도구균, 메티실린 내성 황색 포도구균, 녹농균, 및 엔테로코쿠스·먼디티로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 개의 균에 대해 저항성을 갖는 것을 특징으로 하는 자연 면역 활성화제.
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