JP5620319B2 - 顕微鏡 - Google Patents
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Description
本発明は、レーザ光である第1の照明光と、標本のカメラ観察画像を取得するための照明光である第2の照明光とを前記標本に照射する照射光学系と、該照射光学系により前記標本に照射される前記第1の照明光を2次元走査する走査手段を備え、該走査手段により前記第1の照明光が前記標本上で2次元走査されることで前記標本から発せられる第1の観察光を検出する第1の検出光学系と、前記照射光学系により前記第2の照明光が照射されることで前記標本から戻る第2の観察光を撮像して前記標本のカメラ観察画像を取得する第2の検出光学系と、前記第1の観察光と前記第2の観察光とを分岐する複数の光学素子と、複数の前記光学素子を択一的に切り替える切替手段と、該切替手段による前記光学素子の切り替えによって発生する前記第1の観察光と前記第2の観察光との相対的な位置ずれに関する補正情報を記憶する記憶手段と、該記憶手段に記憶された前記補正情報に基づいて、前記第1の検出光学系により前記第1の観察光を検出して得られる走査画像と前記第2の検出光学系により前記第2の観察光を撮像して得られる前記カメラ観察画像との相対的な位置ずれを補正する補正手段とを備える顕微鏡を採用する。
このようにすることで、記憶手段に記憶された補正情報に基づいて走査手段を動作させることによって、第1の観察光による2次元走査画像と第2の観察光による画像との相対的な位置ずれを補正することができる。
走査手段に共振型ガルバノミラーを用いることで、標本の2次元走査画像を高速に取得することができる。但し、共振型ガルバノミラーでは、第1の観察光の光軸の微調整を行うことができない。そこで、共振型ガルバノミラーを回転させることで、第1の観察光の光軸の微調整を行うことができ、第1の観察光による2次元走査画像と第2の観察光による画像との相対的な位置ずれを補正することができる。
このようにすることで、ミラーを共振型ガルバノミラーの走査方向と同一方向に角度変更させることによって、第1の観察光の光軸の微調整を行うことができ、第1の観察光による2次元走査画像と第2の観察光による画像との相対的な位置ずれを補正することができる。また、走査手段に共振型ガルバノミラーを用いることで、標本の2次元走査画像を高速に取得することができる。
このようにすることで、記憶手段に記憶された補正情報に基づいてカメラの取得画像の視野中心位置を調節することによって、第1の観察光による画像と第2の観察光による画像との相対的な位置ずれを補正することができる。また、第2の検出光学系の検出手段をCCDとすることで、標本の2次元画像を高速に取得することができる。
本発明の第1の実施形態に係る顕微鏡1について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る顕微鏡1は、図1に示されるように、レーザ光(第1の照明光)を発するレーザ光源11と、白色光(第2の照明光)を発する光源21と、レーザ光および光源21からの光を標本Aに照射する対物レンズ(照射光学系)31と、レーザ光を標本Aに照射することで発生する蛍光(第1の観察光)を検出する第1の検出光学系10と、光源21による照明光を標本Aに照射した際の蛍光を含む戻り光(第2の観察光)を検出する第2の検出光学系20と、後述する補正情報を記憶する記憶部(記憶手段)32と、記憶部32に記憶された補正情報に基づいてガルバノスキャナ15を制御する制御部(補正手段)33とを備えている。第1の観察光としての蛍光と第2の観察光としての蛍光は、波長が同じでも異なっていてもよい。
光源21は、標本Aのカメラ観察画像を取得するための照明光として白色光を発する光源である。
第2の検出光学系20は、対物レンズ31により光源21からの照明光が照射された際の標本Aからの戻り光を検出するようになっている。
ミラー14は、励起フィルタユニット12により反射されたレーザ光をガルバノスキャナ15に向けて反射するようになっている。
第2の検出光学系20において、光源21の射出光軸上には、第2のビームスプリッタ22が配置されている。第2のビームスプリッタ22の反射光路上には、第1のビームスプリッタ18と、対物レンズ31とが配置されている。第2のビームスプリッタ22の透過光路上には、レンズ23と、光路へ挿脱可能なミラー24と、CCD25と、ミラー26とが配置されている。
CCD25は、ミラー24により反射された標本Aからの戻り光を検出するようになっている。
ミラー26は、標本Aからの戻り光を接眼レンズ(図示略)に導くようになっている。
本実施形態に係る顕微鏡1において、レーザ光源11から発せられたレーザ光は、励起フィルタユニット12により反射され、ミラー14、ガルバノスキャナ15、瞳投影レンズ16、結像レンズ17、第1のビームスプリッタ18を介して、対物レンズ31により標本Aの焦点位置に集光される。この場合において、ガルバノスキャナ15により、ガルバノミラー15a,15bの揺動角度が変化させられることで、レーザ光源11からのレーザ光が標本A上を2次元走査させられる。
以下に、第2の実施形態に係る顕微鏡2について、図面を参照して説明する。以降では、本実施形態および各変形例に係る顕微鏡について、第1の実施形態に係る顕微鏡1と共通する点については同一の符号を付して説明を省略し、第1の実施形態に係る顕微鏡1と異なる点について主に説明する。
本実施形態に係る顕微鏡2において、レーザ光源11から発せられたレーザ光は、励起フィルタユニット12により反射され、ミラー14、共振型ガルバノスキャナ35、瞳投影レンズ16、結像レンズ17、第1のビームスプリッタ18を介して、対物レンズ31により標本Aの焦点位置に集光される。この場合において、共振型ガルバノスキャナ35において、共振型ガルバノミラー35aを共振周波数で振動させるとともに、制御型ガルバノミラー35bの揺動角度を変化させることで、レーザ光源11からのレーザ光が標本A上を2次元走査させられる。
また、走査手段として共振型ガルバノスキャナ35を用いることで、標本Aの2次元走査画像を高速に取得することができる。
以下に、第2の実施形態に係る顕微鏡2の第1の変形例について説明する。
本変形例に係る顕微鏡3は、図5に示すように、第2の実施形態に係る顕微鏡2の共振型ガルバノスキャナ35(図3参照)に代えて、回転ミラー41と、共振型ガルバノスキャナ42とを備えている。
以下に、第2の実施形態に係る顕微鏡2の第2の変形例について説明する。
本変形例に係る顕微鏡4は、図7に示すように、第2の実施形態に係る顕微鏡2の共振型ガルバノスキャナ35(図3参照)に代えて、回転ミラー45と、共振型ガルバノスキャナ46と、回転ミラー47とを備えている。
回転ミラー47は、X方向の軸線を中心として角度調節可能な回転ミラーであり、その揺動角度を変化させることで、レーザ光源11からのレーザ光の走査中心位置をY方向に変化させるようになっている。
以下に、第2の実施形態に係る顕微鏡2の第3の変形例について説明する。
本変形例に係る顕微鏡5は、図9に示すように、第1の実施形態に係る顕微鏡1(図1参照)と第2の実施形態に係る顕微鏡2(図3参照)とを組み合わせた構成であり、レーザ光(蛍光)の光路上に挿脱されるガルバノ切替装置51を有している。
すなわち、ミラー51a,51bをレーザ光(蛍光)の光路上に挿脱することで、レーザ光源11からのレーザ光の走査手段を、ガルバノスキャナ15と共振型ガルバノスキャナ35のいずれかに切り替えることができる。
以下に、第2の実施形態に係る顕微鏡2の第4の変形例について説明する。
本変形例に係る顕微鏡6は、図10に示すように、第1の実施形態に係る顕微鏡1(図1参照)と第1の変形例に係る顕微鏡3(図5参照)とを組み合わせた構成であり、レーザ光(第1の観察光)の光路上に挿脱されるガルバノ切替装置53を有している。
すなわち、ミラー53a,53bをレーザ光(蛍光)の光路上に挿脱することで、レーザ光源11からのレーザ光の走査手段を、ガルバノスキャナ15と共振型ガルバノスキャナ42のいずれかに切り替えることができる。
以下に、第3の実施形態に係る顕微鏡7について、図面を参照して説明する。以降では、本実施形態に係る顕微鏡7について、前述の各実施形態および各変形例に係る顕微鏡と共通する点については同一の符号を付して説明を省略し、異なる点について主に説明する。
図12に示すように、第1の検出光学系10により取得されたレーザ走査画像(図12において「LSM」と表示)と、第2の検出光学系20により取得されたカメラ観察画像(図12において「CCD1」と表示)とにおいて位置ずれが生じている。
具体的には、レーザ走査画像の視野数(図12に示す例では視野数18)はカメラ観察画像の視野数(図12に示す例では視野数11)よりも大きいため、カメラ観察画像の中心位置P2がレーザ走査画像の中心位置P1と一致するようにCCD25の実効視野数を小さくする(図12に示す例では視野数10)。
なお、レーザ走査画像の中心位置の調整方法として、CCD25の画像取得範囲自体は変化させずに、取得した1フレームの画像から中心位置をずらした画像データを切り出すこととしてもよい。
1,2,3,4,5,6,7 顕微鏡
10 第1の検出光学系
11 レーザ光源
12 励起フィルタユニット
12a ダイクロイックフィルタ
12b 回転ターレット
13 検出器
15 ガルバノスキャナ(走査手段)
15a,15b 制御型ガルバノミラー
18 第1のビームスプリッタ
18a 光学素子
18b 回転ターレット(切替手段)
20 第2の検出光学系
21 光源
22 第2のビームスプリッタ
22a 光学素子
22b 回転ターレット(切替手段)
25 CCD
31 対物レンズ(照射光学系)
32 記憶部(記憶手段)
33 制御部(補正手段)
35 共振型ガルバノスキャナ
35a 共振型ガルバノミラー
35b 制御型ガルバノミラー
35d 回転機構
41 ガルバノミラー
42 共振型ガルバノスキャナ
45 ガルバノミラー
46 共振型ガルバノスキャナ
47 ガルバノミラー
51 ガルバノ切替装置
53 ガルバノ切替装置
Claims (5)
- レーザ光である第1の照明光と、標本のカメラ観察画像を取得するための照明光である第2の照明光とを前記標本に照射する照射光学系と、
該照射光学系により前記標本に照射される前記第1の照明光を2次元走査する走査手段を備え、該走査手段により前記第1の照明光が前記標本上で2次元走査されることで該標本から発せられる第1の観察光を検出する第1の検出光学系と、
前記照射光学系により前記第2の照明光が照射されることで前記標本から戻る第2の観察光を撮像して前記標本のカメラ観察画像を取得する第2の検出光学系と、
前記第1の観察光と前記第2の観察光とを分岐する複数の光学素子と、
複数の前記光学素子を択一的に切り替える切替手段と、
該切替手段による前記光学素子の切り替えによって発生する前記第1の観察光と前記第2の観察光との相対的な位置ずれに関する補正情報を記憶する記憶手段と、
該記憶手段に記憶された前記補正情報に基づいて、前記第1の検出光学系により前記第1の観察光を検出して得られる2次元走査画像と前記第2の検出光学系により前記第2の観察光を撮像して得られる前記カメラ観察画像との相対的な位置ずれを補正する補正手段とを備える顕微鏡。 - 前記補正手段が、前記記憶手段に記憶された前記補正情報に基づいて前記走査手段を動作させる請求項1に記載の顕微鏡。
- 前記走査手段が、共振型ガルバノミラーを有し、
前記補正手段が、前記共振型ガルバノミラーを回転させる請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記走査手段が、共振型ガルバノミラーを有し、
前記補正手段が、前記共振型ガルバノミラーの走査方向と同一方向に角度変更可能で該共振型ガルバノミラーとは独立して配置されたミラーを動作させる請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記補正手段が、前記記憶手段に記憶された前記補正情報に基づいて、前記第2の検出光学系により前記第2の観察光を撮像するカメラの実効視野数を小さくするか、または取得する前記カメラ観察画像の一部を切り出すことで前記相対的な位置ずれを補正する請求項1に記載の顕微鏡。
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