JP5542143B2 - Ａ．ｉｎｄｉｃａおよびｍ．ｃｈａｒａｎｔｉａまたはｓ．ｉｎｄｉｃｕｍの抽出物を含む外用組成物 - Google Patents

Description

本発明は、皮膚のニキビの発生を抑制または予防する外用組成物およびその方法に関する。

Ａｃｎｅ ｖｕｌｇａｒｉｓ（尋常性ざ瘡）としても知られたニキビは、ほぼすべての若者および大人が生涯のある時期に経験するありふれた皮膚の異常である。ニキビは、異常な角質形成、過剰な皮脂産生、男性ホルモンの作用、細菌の増殖および免疫過敏症などが関与する複合的病因を有している。上記作用の１つ以上がニキビに相関関係を有してはいるが、引き金となるひとつの要因およびニキビ病巣形成に導くイベントの正確な連鎖は完全には解明されていない。ニキビに関連付けられてきた他の要因はフリーラジカルの存在およびその結果として生じ細胞損傷につながる酸化性ストレスである。ニキビは通常は顔、首および背中のような皮脂腺の多い領域に発生することが観察されてきた。Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ（Ｐ．ａｃｎｅｓ）という細菌もニキビの発生に関与している。

最も初期のニキビ病巣は微小面疱として知られている。これらは開放面疱（“黒色”）または閉鎖面疱（“白色”）に発達する。ニキビの様々な段階は、面疱、丘疹、膿疱および嚢胞として分類されている。

ニキビは多くの方法で治療されてきた。たいていの治療では顕著な変化が見られるまでに数週間から数ヶ月を要する。抗菌効果を有している過酸化ベンゾイルは軽症の面疱に使用されており、また他の面疱の形成を予防すると考えられている。ビタミンＡの誘導体であるトレチノインは白色面疱および黒色面疱の治療に使用されており、閉鎖面疱を開放面疱に変換すると考えられている。イソトレチノインは重症の嚢胞性ニキビに使用されている。アゼライン酸はニキビの治療に使用されており、Ｐ．Ａｃｎｅｓの増殖を阻害し管の角質化亢進を抑制することによって作用すると考えられている。極めて重症のニキビにはテトラサイクリン、エリスロマイシンおよびクリンダマイシンのような抗生物質が使用されている。抗生物質はいくつかのメカニズムによって作用すると考えられており、小胞の内部および周囲の細菌の数を減少させることが最も重要である。抗生物質はまた、皮脂中の白血球による刺激性化学物質の産生を抑制し、これによって炎症応答を抑制すると考えられている。

たいていの治療は合成化学薬品の使用を含む。多くの人々が合成化学薬品は人体に有害であると考えてその使用を好まない。合成化学薬品が副作用を生じると考える人々もある程度存在する。したがって、“自然の”材料、たとえば、薬草系に基づく有効成分の使用を好む人々が次第に多くなっている。Ｊａｉｎ，ＡおよびＢａｓａｌ，Ｅは、かれらの論文“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｄｉａｎ ｈｅｒｂ”，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１０：３４−３８において、Ｒｕｂｉａ Ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ、Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ、Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓおよびＡｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａのような薬草がＰ．Ａｃｎｅｓ誘発炎症メディエイターを抑制する能力を有することを示した。

本発明の発明者らもまたニキビの問題を解決するためにこのような“自然な”解決方法を提供する研究を続けてきた。発明者らは薬草抽出物の膨大な数の組合せを試験し、特定の２種類の薬草の組合せが相乗的に相互作用してニキビの問題の解決を助けることを知見した。

皮膚有益効果を与えるこれらの薬草のいくつかの使用は以下の文献に記載されている。

ＷＯ ２００１００５４１７は、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ Ｌ．の抽出物を含有する組成物をニキビまたはフルンケルのできた皮膚の領域に塗布する段階を含むニキビまたはフルンケルのできた皮膚の治療方法を特許請求の範囲に記載している。

ＪＰ ２００２２１２０５０は、外用調製物として皮膚に直接塗布したときに美増進効果を示し、皮膚を傷めることなく皮膚の代謝を促進し、皮膚を滑らかにし、さらに、ニキビ、肌荒れおよび皮膚老化を予防する化粧品を特許請求の範囲に記載している。該化粧品は、ツルレイシ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ科；科学名はＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）の抽出物または果実の搾り液を皮膚または毛髪用化粧品の基剤に配合することによって調製される。

ＵＳ ２００７００１４７４９は、とびひ、ニキビ（顔、額、頭皮および体幹の背中）のような痒いおよび／または感染性の皮膚疾患ならびに皮膚および爪の真菌感染を治療するための組成物の製造および使用に関する。皮膚用組成物は、Ｃａｓｓｉａ ｔｏｒａ、Ｍｅｌｉａ ａｚａｄｉｒａｃｈｔａおよびＣｅｎｔｒａｔｈｅｒｕｍ ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃｕｍの凍結乾燥水抽出物を含む。

ＪＰ １０２７９４２８Ａは、（Ａ）０．０１から２０．０重量％のＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ Ｌ．の水溶性抽出物を含み、また必要に応じて、（Ｂ）水性成分、粉末、界面活性剤、滑沢剤、湿潤剤、アルコール（類）、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、抗酸化剤、紫外光吸収剤、増粘剤、香料、皮膚美化成分などを含有させることによって皮膚美白効果を有するようにした安定かつ極めて安全な化粧品を特許請求の範囲に記載している。成分Ａは、水不溶性有機溶媒を使用してＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ Ｌ．の根、葉、茎、蕾、花、発芽物質もしくは種子またはそれらの乾燥産物（類）および／または粉砕産物（類）から脂質成分を除去し、次いで水または含水性および／または非水性の低級アルコールによる抽出を行うことによって得られる。

このように、個々の薬草は皮膚用調製物に使用されてはきたが、上記に引用の従来技術のいずれにおいても、ニキビ治療に有益効果を与えるために本発明の発明者らが見出した薬草抽出物の相乗的組み合わせは開示または示唆されていない。

国際公開第２００１／００５４１７号 特開２００２−２１２０５０号公報 米国特許出願公開第２００７／００１４７４９号明細書 特開平１０−２７９４２８号公報

Ｊａｉｎ，Ａ ＆ Ｂａｓａｌ，Ｅ，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｄｉａｎ ｈｅｒｂ"，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１０：３４−３８

従って、本発明の目的は、ニキビを予防、抑制または治療する化粧組成物を提供するために相乗的に相互作用する薬草抽出物の組合せを提案することである。

本発明は
（ｉ）Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ（インドセンダン）である第一有効成分の抽出物、および
（ｉｉ）Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ（ツルレイシ）またはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ（ゴマ）から選択された第二有効成分の抽出物、
を含む外用組成物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、ニキビの予防、抑制または治療に使用するための、
（ｉ）Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａである第一有効成分の抽出物、および
（ｉｉ）Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された第二有効成分の抽出物、
を含む外用組成物を提供する。

これらのおよびその他の態様、特徴および利点は以下の詳細な記載および添付の特許請求の範囲の記載を読了することによって平均的な当業者に明らかになるであろう。疑いの余地なく、本発明の１つの態様のいずれかの特徴は本発明の別のいずれかの態様にも利用されるであろう。“含む”という用語は“包含する”を含意するものであり、必ずしも、“から成る”、または“から構成された”を意味しない。言い換えると、列挙した段階または選択肢は網羅的でなくてもよい。以下の記載に与えた実施例は発明を明確にするためのものであり発明を実施例自体に限定する意図はないことに留意されたい。また、他の指示がなければすべてのパーセンテージは重量／重量パーセンテージである。

処理実施例および比較実施例を除いて、または、他の明白な指示がある場合を除いて、材料の量または反応条件、材料の物性および／または使用量を指示するこの明細書中のすべての数値は“約”という語で修飾されていると理解されたい。“ｘからｙ”という形式で表されたすべての数値範囲はｘおよびｙを含むことを理解されたい。具体的な特徴について、“ｘからｙ”という形式で複数の好ましい範囲が記載されているときは、異なる端点をつなぐすべての範囲が考察されていると理解されたい。

本発明は２種類の薬草有効成分の抽出物の混合物を含む外用組成物を提供する。第一有効成分は薬草Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａである。第二有効成分はＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された薬草である。抽出物が水抽出物であるのが特に好ましい。

Ｍｅｌｉａ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａとしても知られたＡｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａは樹高１８メートルに成長し幹周囲２．４ｍに達し得る常緑高木である。インドの全領土および同様の熱帯性気候の国々に野生している。またインドでは広範囲に栽培されている。この樹木はインド文明に深いつながりがあり、インドの様々な言語でＮｅｅｍ、Ｎｉｍ、Ｎｉｍｂａ、Ｎｉｍｂ、Ｖｅｐｐａ、Ｂｅｖｉｎａｍａｒａ、Ｌｉｍｂａ、Ｖｅｍｂｕなどとして知られている。インド国外でこの樹木はＩｎｄｉａｎ Ｌｉｌａｃ（タイワンセンダン）、Ｍａｒｇｏｓａ（マルゴーサ）またはＮｅｅｍ Ｔｒｅｅ（ニームツリー）として知られている。本発明に使用するためのニームの抽出物は好ましくはニームツリーの葉から抽出される。ニームの葉はアーユルヴェーダとして知られたインドの伝承医学体系で様々な疾患を治療するために使用されてきた。ニームの葉は様々な皮膚疾患の治療および創傷感染症の予防に使用されていると報告されてきた。葉の煮出し液は皮膚の問題を除去するために浴用水に添加される。また、葉の湿布は創傷関連の炎症に使用されている。葉はまた昆虫忌避剤としても使用されている。ニームの葉は内部殺虫剤として使用されている。

ニームの葉はスティグマステロール、ニンボシノン、ニンボシノリド、イソニンボシノリド、ニモシノール、イソニモノシリドおよびイソアザジロリドのような様々な生理活性化合物を含有すると報告されている。新鮮な緑葉はメルデニンジオール、ビラシニン、アザジラクタニン、マルゴシノリド、イソマルゴシノリドおよびデスアセチルジヒドロニンビン酸のような化合物を産出する。

第一有効成分の抽出物すなわちＡｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａの抽出物は好ましくは組成物の０．０１から２重量％、好適には組成物の０．１から１重量％の量で存在する。

第二の有効成分はＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された薬草である。

インドでは一般的にｋａｒｅｌａ（ニガウリ）として知られたＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａはウリ科の蔓性植物であり、地球上の熱帯性気候の地域で栽培されている。この薬草はまた、様々な言語でｂｉｔｔｅｒ ｍｅｌｏｎ、ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ、ｂａｌｓａｍｐｅａｒ、ｋａｉｐｐａｖａｌｌｉ、ｐａｖａｋｋａと呼ばれている。未熟な果実はありふれた苦い野菜である。これもまたインド伝承医学で主として糖尿病の管理に使用されている。

インドの伝承医学体系であるアーユルヴェーダはニガウリの果実を緩下剤、解熱剤および食欲増進剤として使用する。アーユルヴェーダではこの果実が肝機能を改善するためおよび血液を浄化するために使用されている。果実は食物として摂取され、また、関節炎、痛風、肝臓および脾臓の肥大の治療に使用される。

シャランチン、モモルジシン、モモルジン、モモルジコシドおよびポリペプチドを含む生理的に活性の新規なファイトケミカルがニガウリの果実から同定された。しかしながら、治療活性を有していると考えられるのはポリペプチド−ｐ、シャランチンおよびモモルジンである。ビシンのようないくつかの他の化合物もある程度の血糖低下作用を有していると報告された。

本発明のとおり、ニガウリ植物の果実が抽出物を調製するために好ましく使用される。

Ｓｅｓａｍｕｍ ＩｎｄｉｃｕｍはＳｅｓａｍｕｍ ｏｒｉｅｎｔａｌｅとしても知られている。通称はゴマである。これは高さ約６０から１８０ｃｍに成長する直立の分枝性植物である。ゴマは一年生植物である。ゴマはインドの平野および緯度約１２００メートルまでの丘陵地帯で栽培されている。また、インドの熱帯平野のような気候条件を有している他の国々でも主として油種子の資源として栽培されている。また調味用香辛料として使用されている。ゴマはインドの様々な地方でＴｉｌａ、Ｔｉｌｌ、ＴｉｌまたはＧｉｎｇｅｌｌｉとして知られている。インドで栽培されているゴマには多くの品種がある。品種は白から黒までの種皮の色に基づく。中間色の品種も数多く存在する。しかしながら、インドでは黒ゴマおよび白ゴマが二大栽培品種である。

これらの２つの品種のうちでも本発明に使用するためには白ゴマのほうが好ましい。

第二有効成分の抽出物は好ましくは組成物の０．０１から２重量％、好適には組成物の０．１から１．０重量％の量で存在する。

本発明の組成物は好ましくは化粧品に許容されるビヒクルを含む。化粧品に許容されるビヒクルはスキンケア組成物を公知の化粧品形態のいずれかで提供するように適宜選択される。このような形態はリーブオン外用組成物またはウォッシュオフ製品であろう。公知のリーブオン形態はクリーム、ジェル、ローション、軟膏、粉末、ムースまたはスプレーを含む。より好ましい形態は、クリームまたはローションのような水中油型エマルジョンであり、クリームが最も好ましい。クリームのうちでもバニシングクリーム基剤が最も好ましい。バニシングクリーム基剤とは、外用組成物の５から２５重量％のＣ_１２−Ｃ_２０脂肪酸と０．１から１０重量％の脂肪酸セッケンとを含有する基剤を意味する。バニシングクリーム基剤は極めて好感されるつや消しの印象を皮膚に与える。本発明にはＣ_１２からＣ_２０の脂肪酸が特に好ましいが、Ｃ_１４からＣ_１８の脂肪酸がより好ましい。最も好ましい脂肪酸はステアリン酸である。脂肪酸はより好ましくは組成物の５から２０重量％の量で存在する。バニシングクリーム基剤中のセッケンはナトリウム塩またはカリウム塩のような脂肪酸のアルカリ金属塩を含み、ステアリン酸カリウムが最も好ましい。バニシングクリーム基剤中のセッケンは一般には組成物の０．１から１０重量％、より好ましくは０．１から３重量％の量で存在している。一般的に化粧組成物中のバニシングクリーム基剤は、所望量の全脂肪質を用意し所望量の水酸化カリウムと混合することによって調製される。セッケンは混合中にその場で形成されるのが普通である。

化粧品に許容される他の好ましいビヒクルは洗浄組成物である。洗浄組成物は好ましくは５から８５％の脂肪酸塩または２から２０％の合成界面活性剤またはその混合物を含む。

外用組成物は皮膚明色化剤のような任意成分を含み得る。皮膚明色化剤は好ましくは、ビタミンＢ３化合物またはその誘導体たとえばナイアシン、ニコチン酸、ナイアシンアミド、または、他の公知の皮膚明色化剤たとえばアロエエキス、乳酸アンモニウム、アルブチン、アゼライン酸、コウジ酸、ブチルヒドロキシトルエン、クエン酸エステル、２，５−ジヒドロキシ安息香酸とその誘導体、エラグ酸、ウイキョウエキス、グルコン酸、グリコール酸、緑茶エキス、ヒドロキノン、４−ヒドロキシアニソールとその誘導体、４−ヒドロキシ安息香酸誘導体、コウジ酸、乳酸、レモンエキス、リノール酸、アスコルビルリン酸マグネシウム、２，４レゾルシノール誘導体、３，５レゾルシノール誘導体、サリチル酸、ならびに、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＡのようなビタミン類、ジカルボン酸、植物すなわちｒｕｂｉａ（アカネ）およびｓｙｍｐｌｏｃｏｓ（ハイノキ）のエキス、乳酸のようなヒドロキシカルボン酸とそれらの塩たとえば乳酸ナトリウム、ならびに、それらの混合物の一種以上から選択される。本発明の組成物に使用するための好ましい皮膚明色化剤はビタミンＢ３化合物である。使用されるとき、皮膚明色化剤は好ましくは組成物の０．１から１０重量％、より好ましくは０．２から５重量％の範囲の量で使用される。

外用組成物中の別の任意成分は紫外線遮蔽剤である。紫外線遮蔽剤は無機または有機でよい。適当な有機日光遮蔽剤は、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル−ｐ−アミノ安息香酸、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート、２−エチルヘキシルサリチレート、２−エチルヘキシル−ｐ−ジメチル−アミノ−ベンゾエート、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル−ｐ−アミノ安息香酸およびそれらの混合物を含む。最も適切な有機日光遮蔽剤は２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメートまたはブチルメトキシジベンゾイルメタンである。組成物は好ましくは、組成物の約０．１から約１０重量％、より好ましくは約０．１から約５重量％の日光遮蔽剤を含む。

無機紫外線遮蔽剤はサンブロックと呼ぶこともできる。好ましいサンブロックは酸化亜鉛、酸化鉄、ヒュームドシリカのようなシリカ、および、二酸化チタンを含む。最も好適なサンブロックは酸化亜鉛または二酸化チタンである。サンブロックは好ましくは組成物の０．１から５重量％の量で組込まれる。

本発明組成物は他の希釈剤も含み得る。希釈剤は組成物中に存在する他の材料の分散剤または担体として作用し、組成物を皮膚に塗布したときにそれらの分布を促進する。

水以外の希釈剤は液体または固体の皮膚緩和剤、溶媒、保湿剤、増粘剤および粉末を含み得る。

化粧品に許容されるビヒクルは組成物の１０から９９．９重量％、好ましくは５０から９９重量％の量で存在するのが好ましく、他の化粧品添加剤が存在しないとき組成物の残分を形成できる。

本発明の組成物は多様な範囲の他の任意成分を含むことができる。このような任意成分の例は、抗酸化剤、結合剤、生物学的添加剤、緩衝剤、着色剤、増粘剤、ポリマー、収斂剤、着香料、保湿剤、乳白剤、状態調整剤、皮膚剥脱剤、ｐＨ調整剤、保存剤、天然抽出物、精油、皮膚感触改善剤、皮膚鎮静剤および皮膚回復剤を含む。

本発明の別の態様によれば、本発明の組成物を皮膚に塗布する段階を含むニキビの発生を予防もしくは抑制するかまたはニキビを治療する方法が提供される。

本発明のまた別の目的によれば、ニキビの発生を予防もしくは抑制するかまたはニキビを治療するために、Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａである第一有効成分の抽出物と、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された第二有効成分の抽出物とを含む組成物の使用が提供される。本発明の組成物の使用は好ましくは非治療的有益効果のためである。

次に、以下の非限定実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。

ニキビを治療／予防する有効成分の抽出物の効力を、インボルクリンｍＲＮＡの発現を測定するアッセイを使用して試験した。ニキビ中では増殖および分化の異常が存在する。スクリーニング試験用にインボルクリンマーカーを使用した。使用した手順を以下に示す。

細胞培養
ＨａＣａｔヒト角質細胞はＤｒ Ｆｕｓｅｎｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手した。１０Ｕ／ｍｌのペニシリンＧ、０．１ｍｇ／ｍｌの硫酸ストレプトマイシン、１０ｍＭのヘペスバッファおよび１０％の熱失活ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）を補充したダルベッコの改質イーグル培地（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ）中の細胞を、５％ＣＯ_２雰囲気の湿潤恒温室に入れ、３７℃で培養した。

試薬
すべての化学試薬はＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡから入手した。レチノイン酸、１３−シスレチノイン酸およびテストステロンの予製液はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で調製した。

有効成分の抽出物の調製
粉末にした１ｇｍの各有効成分を６０ｍｌの水に一夜浸漬させた。翌日、容量が１０ｍｌに減少するまでサンプルを合計４時間煮沸した（最終濃度は１ｇｍ／１０ｍｌに等価）。この抽出物を濾過し、冷却し、最終濃度０．０１％でインビトロアッセイに使用した。

ＲＴ−ＰＣＲ
５×１０^５の角質細胞を３５ｍｍのプレートに平板培養し、５％ＣＯ_２中、３７℃で２４時間温置した。翌日、有効成分を添加し、１８から２４時間後に細胞を採集した。次に、ＴＲＩ試薬（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ）を供給業者の指示通りに使用してこれらの細胞から全部の細胞性ＲＮＡを抽出した。オリゴ（ｄＴ）１８プライマーを使用してｃＤＮＡ合成を行った。次に、以下の表に示した特異的な順方向プライマーおよび逆方向プライマーを使用して半定量的ＲＴ−ＰＣＲを行った。ＰＣＲはＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＰＣＲシステム２４００においてどの場合にも３０サイクル行った。ＰＣＲ産物を１−２％のアガロースゲルで分析し、臭化エチジウム染色によって検出した。ＤＮＡゲル図を捕捉し、ＰｈｏｔｏＣａｐ像解析ソフトウェア（Ｖｉｌｂｅｒ Ｌｏｕｒｍａｔ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用してＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントの強度を解析した。

ＰＣＲ増幅に以下のプライマーを使用した。

インボルクリンの発現は以下の手順を使用し対照のパーセンテージとして算出した。

（対照−有効成分）×１００／対照
有効成分の抽出物の様々なサンプルに関するデータを表１にまとめる。アッセイ中の有効成分の合計濃度は０．０１％であった。対照サンプルは水であった。

表１のデータは、Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａである第一有効成分の抽出物とＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された第二有効成分の抽出物との組合せがニキビの予防、抑制または治療用の組成物を提供するように相乗的に相互作用することを示す。

Claims (9)

1. ニキビの予防、抑制または治療に使用するための
   （ｉ）Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａである第一有効成分の抽出物、および
   （ｉｉ）Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍＩｎｄｉｃｕｍから選択された第二有効成分の抽出物、
   を含む外用組成物。
2. 抽出物が前記有効成分の水抽出物である請求項１に記載の組成物。
3. 第一有効成分の抽出物が組成物の０．０１から２重量％の量で存在する請求項１または２に記載の組成物。
4. 第二有効成分の抽出物が組成物の０．０１から２重量％の量で存在する請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 化粧品に許容されるビヒクルを含む請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 化粧品に許容されるビヒクルが油中水型エマルジョンまたは洗浄組成物である請求項５に記載の組成物。
7. エマルジョンが外用組成物の（ｉ）５から２５重量％のＣ_１２−Ｃ_２０脂肪酸、および（ｉｉ）０．１から１０重量％の脂肪酸セッケンを含む請求項６に記載の組成物。
8. 洗浄組成物が５から８５％の脂肪酸塩または２から２０％の合成界面活性剤またはその混合物を含む請求項６に記載の組成物。
9. ニキビの発生を予防もしくは抑制するかまたはニキビを治療するための医薬の製造のための、Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａである第一有効成分の抽出物、およびＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａまたはＳｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍから選択された第二有効成分の抽出物を含む組成物の使用。