KR101676503B1

KR101676503B1 - 에이. 인디카 및 엠. 카란티아 또는 에스. 인디쿰의 추출물을 포함하는 국소 조성물

Info

Publication number: KR101676503B1
Application number: KR1020117009182A
Authority: KR
Inventors: 아미트 샤크라보르티; 라젠드라 모한 도브리얄; 비둘라 이예르; 니르말라 나이르; 쉴파 보라
Original assignee: 유니레버 엔.브이.
Priority date: 2008-10-24
Filing date: 2009-10-16
Publication date: 2016-11-15
Also published as: CA2740213A1; AU2009306492A1; CN102196813B; AU2009306492B2; WO2010046316A3; BRPI0914462A2; KR20110085999A; BRPI0914462B1; EP2341917B1; ES2398493T3; US8545901B2; JP2012506400A; ZA201102641B; WO2010046316A2; CN103893270A; EP2341917A2; CN102196813A; JP5542143B2; MX2011004149A; US20110236509A1

Abstract

본 발명은 피부 상의 여드름의 발생을 감소 또는 예방하기 위한 국소 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 목적은 여드름의 예방, 감소 또는 치료를 위한 화장품 조성물을 제공하기 위해 상승작용적으로 상호작용하는 허브 추출물의 조합을 제공하는 것이다. 본 발명은 (i) 아자디라크타 인디카인 제1 활성물질의 추출물; 및 (ii) 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택된 제2 활성물질의 추출물을 포함하는 국소 조성물을 제공한다.

Description

에이. 인디카 및 엠. 카란티아 또는 에스. 인디쿰의 추출물을 포함하는 국소 조성물 {A TOPICAL COMPOSITION COMPRISING EXTRACTS OF A. INDICA AND M. CHARANTIA OR S. INDICUM}

본 발명은 피부 상의 여드름 발생을 감소 또는 예방하는 국소 조성물 및 방법에 관한 것이다.

여드름 (심상성 여드름으로도 공지됨)은 인생 중 어떤 시기에서 거의 모든 청소년 및 성인에게 영향을 미치는 공통의 피부 상태이다. 이것은, 비정상적 각질화, 과량의 피지 생산, 안드로겐 기능, 박테리아 성장 및 면역 과민반응을 비롯한 복합적인 병인을 갖는다. 상기 과정 중 하나 이상이 여드름과 관련되어 있지만, 여드름 병변의 형성을 야기하는 하나의 유발 인자 및 정확한 사건 순서는 완전히 이해되지 않았다. 여드름과 관련되어 있는 다른 인자는 세포 손상을 유발하는, 후속적인 산화 스트레스로 인한 유리 라디칼의 존재이다. 여드름이 통상적으로 피지선이 풍부한 영역, 예컨대 얼굴, 목 및 등에서 발생하는 것으로 관찰되었다. 박테리아 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) (피. 아크네스(P. acnes))가 또한 여드름의 발생과 관련되어 있다.

가장 초기의 여드름 병변은 미세면포로 공지된다. 이들은 또한 개방 ("블랙헤드") 또는 폐쇄 ("화이트헤드")될 수 있는 면포로 발전한다. 여드름의 다양한 단계는 면포, 구진, 농포 및 낭포로서 분류되었다.

여드름은 많은 방식으로 치료되어 왔다. 대부분의 치료는 수주 내지 수개월을 소요한 후에야 주목할 만한 변화를 보인다. 항박테리아 효과를 갖는 벤조일 퍼옥시드는 면포의 경증 케이스에 사용되어 왔고, 또한 다른 면포의 형성을 예방하는 것으로 여겨진다. 비타민 A의 유도체인 트레티노인은 화이트헤드 및 블랙헤드의 치료에 사용되어 왔고, 폐쇄 면포를 개방 면포로 전환시키는 것으로 여겨진다. 이소트레티노인은 중증 낭포성 여드름을 치료하는데 사용되어 왔다. 아젤라산은 여드름을 치료하는데 사용되어 왔고, 피. 아크네스의 성장을 억제함으로써 및 도관 과각질화를 감소시킴으로써 작용하는 것으로 여겨진다. 매우 중증의 여드름 케이스에서는, 테트라시클린, 에리트로마이신 및 클린다마이신과 같은 항생제가 사용되어 왔다. 항생제는 여러 메카니즘에 의해 작용하는 것으로 여겨지고, 가장 중요한 것은 소낭 내 및 소낭 주변의 박테리아 수를 감소시키는 것이다. 이들은 또한 피지에서 백혈구에 의해 생산되는 자극성 화학물질을 감소시켜, 이에 따라 염증 반응을 감소시키는 것으로 여겨진다.

대부분의 치료가 합성 화학물질의 사용을 포함한다. 합성 화학물질이 인간 신체에 해를 끼치는 것으로 여겨지기 때문에, 많은 사람들은 상기 합성 화학물질의 사용을 선호하지 않는다. 일부의 사람들은 합성 화학물질이 부작용을 일으킨다고 믿는다. 따라서, 점점 더 많은 사람들이 예를 들어 허브 기원의 "천연" 활성물질의 사용을 선호한다. 문헌 [Jain, A and Basal, E., "Inhibition of Propionibacterium acnes - induced mediators of inflammation by Indian herb", in the Journal Phytomedicine, 2003, 10:34-38]은 루비아 코르디폴리아(Rubia Cordifolia), 쿠르쿠마 롱가(Curcuma longa), 헤미데스무스 인디코스(Hemidesmus indicus) 및 아자디라크타 인디카(Azadirachta indica)와 같은 허브가 피. 아크네스 유도성 염증성 매개자를 억제하는 능력을 가짐을 나타냈다.

본 발명자들은 또한 여드름 문제를 해결하기 위해 이러한 "천연" 용액을 제공하기 위해 노력해 왔다. 그들은 허브 추출물의 수많은 조합을 시도했고, 허브의 두 특정 조합이 상승작용적으로 상호작용하여 여드름 문제를 해결하는 것을 보조한함을 밝혀냈다.

피부 유익을 위한 일부 이러한 허브의 용도는 하기에 기재되어 있다.

WO2001005417은 여드름 또는 종기를 갖는 피부의 영역에 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) L.의 추출물을 함유하는 조성물을 도포하는 것을 포함하는, 여드름 또는 종기를 갖는 피부의 치료 방법을 청구하고 있다.

JP2002212050은 외용제로서 피부에 직접 도포될 때 미용 촉진 효과, 피부 손상 없는 피부 신진대사 촉진, 피부 유연화, 및 또한 여드름, 피부 균열 및 피부 노화의 예방 제공을 나타내는 화장품을 청구하고 있다. 상기 화장품은 여주 (쿠쿠르비타세아에(Cucurbitaceae) 과; 학명이 모모르디카 카란티아(Momordica charantia)임)의 열매로부터의 추출물 또는 스퀴징한 액체를 피부 또는 모발을 위한 화장품의 베이스로 제제화함으로써 제조된다.

US20070014749는 가렵고/가렵거나 감염된 피부의 피부 장애, 예컨대 농가진, (얼굴, 이마 두피 및 신체의 등에 있는) 여드름, 및 피부 및 손톱의 진균 감염의 치료를 위한 조성물의 제조법 및 용도에 관한 것이다. 피부 조성물은 카시아 토라(Cassia tora), 멜리아 아자디라크타(Melia azadirachta) 및 센트라테룸 안텔민티쿰(Centratherum anthelminticum)의 동결 건조된 수 추출물을 포함한다.

JP10279428A는 (A) 세사뭄 인디쿰(Sesamum indicum) L.로부터의 수용성 추출물 0.01-20.0 wt％, 및 (B) 필요에 따라, 수성 성분, 분말, 계면활성제, 윤활제, 보습제, 알콜(들), pH 조절제, 방부제, 착색제, 항산화제, 자외선 광 흡수제, 증점제, 향료, 피부-미용 성분 등을 포함함으로써 피부 미백 효과를 갖는, 안정한 고안전성 화장품을 청구하고 있다. 성분 A는, 수불용성 유기 용매를 사용한 다음 물 또는 함수 및/또는 무수 저급 알콜로 추출을 수행함으로써, 세사뭄 인디쿰 L.의 뿌리, 잎, 줄기, 눈, 꽃, 발아된 물질 또는 종자, 또는 그의 건조된 생성물(들) 및/또는 접지 생성물(들)로부터 지질 성분을 필요에 따라 제거함으로써 수득하였다.

따라서, 각각의 허브가 피부 제제에 사용되었을지라도, 상기 인용된 어떠한 선행 기술도 여드름 치료에 이점을 제공하는, 본 발명자들에 의해 밝혀진 허브 추출물의 상승작용적 조합을 기술하거나 제안하지는 않는다.

따라서, 본 발명의 목적은 상승작용적으로 상호작용하는 허브 추출물의 조합을 제공하여 여드름의 예방, 감소 또는 치료를 위한 화장품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은

(i) 아자디라크타 인디카인 제1 활성물질의 추출물; 및

(ii) 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택되는 제2 활성물질의 추출물

을 포함하는 국소 조성물을 제공한다.

추가 실시양태에서,

(i) 아자디라크타 인디카인 제1 활성물질의 추출물; 및

을 포함하는, 여드름의 예방, 감소 또는 치료에 사용하기 위한 조성물이 제공된다.

이들 및 다른 측면에서, 특징 및 장점은 하기의 상세한 설명 및 첨부된 특허청구범위를 읽음으로써 당업자에게 명백해질 것이다. 의문점을 피하기 위해, 본 발명의 한 측면의 임의의 특징은 본 발명의 임의의 다른 측면에서 활용될 수 있다. 단어 "포함하는"은 "비롯한"을 의미하지만, 반드시 "이루어진" 또는 "구성된"을 의미하지는 않는다. 다시 말하면, 열거된 단계 또는 선택이 배타적일 필요는 없다. 하기의 상세한 설명에서 주어진 예는 본 발명을 명확하게 하려는 것이고, 그 자체로 본 발명을 제한하려는 것이 아님을 주목한다. 유사하게, 달리 나타내지 않는 한, 모든 백분율은 중량/중량％이다.

작업 실시예 및 비교 실시예에서 또는 달리 명백하게 명시되어 있는 곳을 제외하고는, 물질의 양 또는 반응 조건, 물질의 물리적 특성 및/또는 사용을 나타내는 본 기재에서의 모든 숫자는 "약"이란 단어로 변형된 것과 같이 이해하여야 한다. "x 내지 y"의 포맷으로 표현된 수치 범위는 x 및 y를 포함하는 것으로 이해된다. 특정 특징에 대하여 다수의 바람직한 범위를 "x 내지 y"의 포맷으로 기재한 경우, 상이한 종점들을 조합한 모든 범위가 또한 고려된다는 것을 이해한다.

본 발명은 2가지 허브 활성물질의 추출물의 혼합물을 포함하는 국소 조성물을 제공한다. 제1 활성물질은 허브 아자디라크타 인디카이다. 제2 활성물질은 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택된 허브이다. 특히, 추출물이 수 추출물인 것이 바람직하다.

아자디라크타 인디카 (또한 멜리아 아자디라크타로도 공지됨)는 최고 18 미터의 높이로 성장할 수 있고, 최대 2.4 미터의 둘레를 가질 수 있는 대형 상록수이다. 이것은 인도 전역에서 및 유사한 열대 기후 국가에서 야생으로 성장한다. 이것은 또한 인도에서 광범위하게 배양되고 있다. 상기 나무는 인도 문화와 깊이 관련이 있고, 인도의 다양한 언어로 니임, 님, 님바, 님브, 베파, 베비나마라, 림바, 벰부 등으로 공지되어 있다. 인도 외부에서, 상기 나무는 인도 라일락, 마르고사 또는 니임 나무로서 공지되어 있다. 본 발명에 사용하기 위한 니임의 추출물은 바람직하게는 니임 나무의 잎으로부터의 추출물이다. 니임의 잎은 다양한 장애의 치료를 위해 아유르베다(Ayurveda)로 공지된 전통 인도 의약 시스템에 사용되어 왔다. 이것은 다양한 피부 장애의 치료 및 상처 감염의 예방에 사용되는 것으로 보고되었다. 잎의 데콕션(decoction)을 물 중탕을 위해 첨가하여 피부 문제를 제거한다. 잎의 파프제는 또한 상처와 관련된 염증에 사용된다. 잎은 또한 방충제로서도 사용된다. 니임 잎은 내적으로 구충제로서 사용된다.

니임 잎은 다양한 생리학적으로 활성인 화합물, 예컨대 스티그마스테롤, 님보시논, 님보시놀리드, 이소님보시놀리드, 니모시놀, 이소니모시놀리드 및 이소아자디롤리드를 함유하는 것으로 보고되었다. 신선한 녹색 잎은 멜데닌디올, 빌라시닌, 아자디라크타닌, 마르고시놀릴드, 이소마르고시놀리드 및 데스아세틸디히드로님브산과 같은 화합물을 산출한다.

제1 활성물질의 추출물, 즉, 아자디라크타 인디카의 추출물은 바람직하게는 조성물의 0.01 내지 2 중량％, 편리하게는 조성물의 0.1 내지 1 중량％로 존재한다.

제2 활성물질은 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택된 허브이다.

모모르디카 카란티아 (인도에서 보통 카렐라로서 공지됨)는 세겨적으로 열대성 기후 전체에 걸쳐 배양된 박과 덩굴식물이다. 상기 허브는 또한 다양한 언어로 비터 멜론, 비터 고드, 여주, 카이파발리, 파바카로도 불린다. 덜 익은 열매는 대중적인 쓴 채소이다. 이것은 또한 주로 당뇨병의 관리를 위해 전통 인도 의약에 사용된다.

아유르베다 (전통 인도 의약 형태)에서는 설사제, 해열제 및 식욕촉진제로서 카렐라 열매를 사용한다. 이것은 아유르베다에서 간 기능을 개선하고 혈액을 맑게 위해 사용된다. 상기 열매는 식품으로서 먹게 되고, 관절염, 통풍, 간 및 비장 비대의 치료에서 사용된다.

카란틴, 모모르디신, 모모르딘, 모모르디코시드 및 폴리펩티드를 비롯한 수많은 신규의 생물학적으로 활성인 식물 화학물질이 카렐라 열매로부터 확인되었다. 그러나, 치료 활성에 기여하는 것들은 폴리펩티드-p, 카란틴 및 모모르딘을 포함한다. 비신과 같은 일부 다른 화합물은 또한 약간의 저혈당 활성을 보유하는 것으로 보고되었다.

본 발명에 따라서, 카렐라 식물의 열매가 바람직하게는 추출물을 제조하기 위해 사용된다.

세사뭄 인디쿰은 또한 세사뭄 오리엔탈레(Sesamum orientale)로 공지되어 있다. 일반명은 참깨이다. 이것은 약 60-180 cm의 높이로 성장하는 직배치 분지 식물이다. 이것은 한해살이 식물이다. 이것은 인도의 평원 전체에 걸쳐서 및 또한 고도 약 1200 미터 이하의 언덕에서도 배양된다. 이것은 또한 대부분 오일 종자의 공급원으로서 인도의 열대 평원과 같은 기후 조건을 갖는 다른 국가에서도 성장한다. 이것은 또한 양념을 위한 향신료로서도 사용된다. 참깨는 인도의 여러 지역에서 틸라, 틸르, 틸 또는 징겔리(Gingelli)로서 공지되어 있다. 인도에서 길러진 많은 품종의 참깨가 존재한다. 품종은 백색에서 흑색까지 이르는 종자 외피의 색상을 기초로 한다. 또한 많은 중간 품종이 존재한다. 그러나, 흑색 및 백색 참깨가 주로 인도에서 배양되는 2가지 품종이다.

이러한 2가지 품종 중 백색 참깨가 본 발명에 사용하기에 더 바람직하다.

제2 활성물질의 추출물은 바람직하게는 조성물의 0.01 내지 2 중량％, 편리하게는 조성물의 0.1 내지 1.0 중량％로 존재한다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 화장품용으로 허용되는 비히클을 포함한다. 화장품용으로 허용되는 비히클을 적합하게 선택하여, 피부 관리 조성물이 잘 알려진 화장품 포맷 중 임의의 하나로 제공되도록 한다. 이러한 포맷은 리브-온(leave-on) 국소 조성물 또는 워시-오프(wash-off) 제품일 수 있다. 잘 알려져 있는 리브-온 포맷은 크림, 겔, 로션, 연고, 분말, 무스 또는 스프레이를 포함한다. 더 바람직한 포맷은 크림 또는 로션과 같은 수중유 에멀젼이고, 크림이 가장 바람직하다. 크림 중에서도, 배니싱(vanishing) 크림 베이스가 가장 바람직하다. 배니싱 크림 베이스는 국소 조성물 중량을 기준으로 C₁₂-C₂₀ 지방산 5 내지 25 중량％ 및 지방산 비누 0.1-10 중량％를 갖는 염기를 의미한다. 배니싱 크림 베이스는 고평가된 매트한 촉감을 피부에 제공한다. C₁₂ 내지 C₂₀ 지방산이 본 발명에 특히 바람직하지만, C₁₄ 내지 C₁₈ 지방산이 더 바람직하다. 가장 바람직한 지방산은 스테아르산이다. 지방산은 보다 바람직하게는 조성물의 5 내지 20 중량％로 존재한다. 배니싱 크림 베이스 중의 비누는 지방산의 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 염을 포함하고, 칼륨 스테아레이트가 가장 바람직하다. 배니싱 크림 베이스 중의 비누는 일반적으로 조성물의 0.1 내지 10 중량％, 보다 바람직하게는 0.1 내지 3 중량％ 범위의 양으로 존재한다. 일반적으로, 화장품 조성물 중의 배니싱 크림 베이스는 바람직한 양의 전체 지방 물질을 취하고 바람직한 양의 수산화칼륨과 혼합함으로써 제조된다. 비누는 통상적으로 혼합 동안 계내에서 형성된다.

다른 바람직한 화장품용으로 허용되는 비히클은 세제 조성물이다. 세제 조성물은 바람직하게는 지방산의 염 5 내지 85％ 또는 합성 계면활성제 2 내지 20％ 또는 그의 혼합물을 포함한다.

국소 조성물은 피부 미백제와 같은 임의의 성분을 포함할 수 있다. 피부 미백제는 바람직하게는 하나 이상의 비타민 B3 화합물 또는 그의 유도체, 예를 들어 니아신, 니코틴산, 니아신아미드 또는 다른 잘 알려져 있는 피부 미백제, 예를 들어 알로에 추출물, 암모늄 락테이트, 알부틴, 아젤라산, 코지산, 부틸 히드록시 톨루엔, 시트레이트 에스테르, 2,5 디히드록시벤조산 및 그의 유도체, 엘라그산, 회향 추출물, 글루콘산, 글리콜산, 녹차 추출물, 히드로퀴논, 4 히드록시아니솔 및 그의 유도체, 4-히드록시 벤조산 유도체, 코지산, 락트산, 레몬 추출물, 리놀레산, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, 2,4 레조르시놀 유도체, 3,5 레조르시놀 유도체, 살리실산 및 비타민, 예컨대 비타민 B6, 비타민 B12, 비타민 C, 비타민 A, 디카르복실산, 식물 추출물, 즉 루비아(rubia) 및 심플로코스(symplocos), 히드록시카르복실산, 예컨대 락트산 및 그의 염, 예를 들어 락트산나트륨, 및 그의 혼합물로부터 선택된다. 본 발명의 조성물에 사용하기 위한 바람직한 피부 미백제는 비타민 B3 화합물이다. 피부 미백제는, 사용되는 경우, 바람직하게는 조성물의 0.1 내지 10 중량％, 보다 바람직하게는 0.2 내지 5 중량％ 범위의 양으로 존재한다.

국소 조성물 중의 또 다른 임의의 성분은 UV 선스크린제이다. UV 선스크린제는 무기 또는 유기일 수 있다. 적합한 유기 선스크린제는 2-히드록시-4-메톡시벤조페논, 옥틸디메틸-p-아미노벤조산, 2,2-디히드록시-4-메톡시벤조페논, 2-에틸헥실-2-시아노-3,3-디페닐아크릴레이트, 2-에틸헥실살리실레이트, 2-에틸헥실-p-디메틸-아미노-벤조에이트, 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트, 부틸메톡시디벤조일메탄, 2-히드록시-4-메톡시벤조페논, 옥틸디메틸-p-아미노벤조산 및 그의 혼합물을 포함한다. 가장 적합한 유기 선스크린제는 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트 또는 부틸메톡시디벤조일메탄이다. 조성물은 바람직하게는 조성물의 약 0.1 중량％ 내지 약 10 중량％, 보다 바람직하게는 약 0.1 중량％ 내지 약 5 중량％의 선스크린제를 포함한다.

무기 UV 선스크린제는 선블록으로 불릴 수 있다. 바람직한 선블록은 산화아연, 산화철, 실리카, 예컨대 훈증 실리카 및 이산화티탄을 포함한다. 가장 적합한 선블록은 산화아연 또는 이산화티탄이다. 선 블록은 바람직하게는 조성물의 0.1 내지 5 중량％로 혼입된다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 다른 희석제를 포함할 수 있다. 희석제는 조성물 중에 존재하여 상기 조성물을 피부에 도포할 때 그의 분포를 용이하게 하는, 다른 물질을 위한 분산제 또는 담체로서 작용한다.

물 이외의 희석제는 액체 또는 고체 피부완화제, 용매, 보습제, 증점제 및 분말을 포함할 수 있다.

화장품용으로 허용되는 비히클은 조성물의 10 내지 99.9 중량％, 바람직하게는 50 내지 99 중량％로 존재하고, 다른 화장품 부가물의 부재시에는 조성물의 나머지를 형성할 수 있다.

본 발명의 조성물은 광범위한 다른 임의의 성분을 포함한다. 이러한 임의의 성분의 예는 항산화제, 결합제, 생물학적 첨가제, 완충제, 착색제, 증점제, 중합체, 수렴제, 방향제, 습윤제, 유백화제, 컨디셔너, 박리제, pH 조절제, 보존제, 천연 추출물, 정유, 피부 감각제, 피부 진정제 및 피부 치유제를 포함한다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명의 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는, 여드름 발생을 예방 또는 감소시키거나 또는 여드름을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 여드름의 발생을 예방 또는 감소시키거나 또는 여드름을 치료하기 위한, 아자디라크타 인디카인 제1 활성물질의 추출물; 및 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택된 제2 활성물질의 추출물을 포함하는 조성물의 용도가 제공된다. 본 발명의 조성물의 용도는 바람직하게는 비-치유적 이점에 대한 것이다.

본 발명은 이제 하기 비제한적 실시예에 의해 추가로 설명된다.

실시예:

여드름의 치료/예방을 위한 활성물질의 추출물의 효능은 인볼루크린 mRNA의 발현을 측정하는 검정을 이용하여 시험하였다. 여드름에서, 증식 및 분화의 비정상성이 존재한다. 인볼루크린 마커는 스크리닝 연구에 사용되었다. 이용된 절차는 다음과 같았다:

세포 배양

HaCaT 인간 각질세포를 독일의 닥터 푸세니크(Dr Fusenig)로부터 입수하였다. 5％ CO₂ 대기를 갖는 가습 인큐베이터 내 37℃에서 10 U/ml 페니실린 G, 0.1 mg/ml 스트렙토마이신 술페이트, 10 mM HEPES 완충액 및 10％ 열 비활성화 소 태아 혈청 (깁코, USA)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (시그마 케미칼 캄파니, USA) 중에서 상기 세포를 배양하였다.

시약

모든 화학 시약은 시그마 케미칼 캄파니 (USA)로부터 입수하였다. 레티노산, 13-시스 레티노산과 테스토스테론 원액은 디메틸 술폭시드 (DMSO) 중에서 제조하였다.

활성물질의 추출물의 제조

각각의 분말 활성물질 1 gm을 물 60 ml 중에 밤새 침지시켰다. 다음날, 부피가 전체적으로 10 ml로 감소될 때까지 4 시간 동안 샘플을 비등시켰다 (최종 농도가 1 gm/10 ml와 등가임). 이 추출물을 여과하고 냉각시켜, 0.01％의 최종 농도로 시험관내 검정에 사용하였다.

RT-PCR

5×10⁵개의 각질세포를 35 mm 플레이트에 플레이팅하고, 24 시간 동안 5％ CO₂ 및 37℃에서 인큐베이션하였다. 다음날 활성물질을 첨가하고, 18-24 시간 후에 세포를 수확하였다. 이어서, 전체 세포 RNA를 공급자에 의해 권장되는 바와 같이 TRI 시약 (시그마 케미칼 캄파니, USA)을 사용하여 상기 세포로부터 추출하였다. 올리고 (dT)18 프라이머를 사용하여 cDNA 합성을 수행하였다. 이어서, 하기 열거된 바와 같은 구체적인 정방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 반-정량적 RT-PCR을 수행하였다. PCR은 모든 경우에 30회 사이클 동안 퍼킨 엘머 진 Amp PCR 시스템 2400에서 수행하였다. PCR 생성물을 1-2％ 아가로스 겔에서 분석하여, 브롬화에티듐 염색에 의해 검출하였다. DNA 겔 그림을 캡쳐하고, PCR 증폭된 DNA 단편의 강도를 포토캡(PhotoCap) 영상 분석 소프트웨어 (빌버 라우마, 프랑스)를 이용하여 분석하였다.

하기 프라이머를 PCR 증폭에 사용하였다:

대조군 백분율로서의 인볼루크린 발현은 하기 절차를 이용하여 계산하였다:

(대조군 - 활성물질)_x 100/대조군

활성물질의 추출물의 다양한 샘플에 대한 데이터는 표 1에 요약하였다. 활성물질의 총 농도는 검정에서 0.01％였다. 대조 샘플은 물이었다.

[표 1]

표 1에서의 데이터는 아자디라크타 인디카인 제1 활성물질의 추출물과 모모르디카 카란티아 또는 세사뭄 인디쿰으로부터 선택된 제2 활성물질의 추출물과의 조합물이 상승작용적으로 상호작용하여 여드름의 예방, 감소 또는 치료를 제공한다는 것을 나타낸다.

Claims

(i) 아자디라크타 인디카(Azadirachta indica)인 제1 활성물질의 추출물; 및
(ii) 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 또는 세사뭄 인디쿰(Sesamum indicum)으로부터 선택된 제2 활성물질의 추출물
을 포함하는, 여드름의 예방 또는 감소에 사용하기 위한 국소 조성물.
제1항에 있어서, 추출물이 상기 활성물질의 수 추출물인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 활성물질의 추출물이 조성물의 0.01 내지 2중량％로 존재하는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 활성물질의 추출물이 조성물의 0.01 내지 2 중량％로 존재하는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 화장품용으로 허용되는 비히클을 포함하는 조성물.
제5항에 있어서, 화장품용으로 허용되는 비히클이 유중수 에멀젼 또는 세제 조성물인 조성물.
제6항에 있어서, 에멀젼이 국소 조성물의 중량을 기준으로 (i) C₁₂-C₂₀ 지방산 5-25 중량％ 및 (ii) 지방산 비누 0.1-10 중량％를 포함하는 것인 조성물.
제6항에 있어서, 세제 조성물이 조성물을 기준으로 지방산의 염 5 내지 85중량％ 또는 합성 계면활성제 2 내지 20중량％ 또는 그의 혼합물을 포함하는 것인 조성물.
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