KR101679480B1 - 천연 추출물을 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항염 및 항균 효과를 가지며, 나아가 피부의 자극을 억제하여 여드름의 치료 및 예방에 효과가 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.
나아가 본 발명에 의한 화장료 조성물은 에센스 등 제품 중에서 선택되는 제형을 갖는 것이다.

Description

천연 추출물을 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Compositions Including a Natural Extract for Improvement of Acne}

본 발명은 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 염증 및 항균작용이 우수할 뿐만 아니라 피부 자극이 감소되어 여드름 예방 및 치료 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 여드름은 사춘기의 청소년들에게 발생하는 심상성좌창(尋常性挫創)을 일컫는데, 치유가 된 후에도 상처를 남기기 때문에 외모에 관심이 많은 청소년들에게 정신적 스트레스를 가중시켜 병변을 일으키는 악순환을 유발하므로 발생한 즉시 조치를 취하여 회복시켜야 한다.

여드름은 주로 사춘기에 접어들면서 피지선의 증대 및 활성화가 일어나 피지가 과다 분비되고, 각화과정의 이상이 생겨나 각질형성 세포의 이각화증 또는 과각화증이 발생하는 것이 일차적인 원인으로 작용하게 되므로 피지가 자연스럽게 분비되지 못하고 케라틴, 세포 데브리스(cell debris)와 함께 모낭 내에 저류하게 되면, 여드름의 특징적 병변인 면포가 생겨나게 된다. 여기에 propionibacterium acnes 등의 세균이 증식하면서 영향을 미치면 염증성 병변을 만들어 내어 육안으로 보이는 붉거나 곪은 여드름 병변, 즉, 구진, 농포, 결절 등을 만들어내게 된다.

지금까지 알려진 여드름에 대한 치료약물은 결국 피지 분비의 조절, 각화과정 이상의 교정, propionibacterium acnes로 대표되는 세균에 대한 억제 기능, 이 세 가지 중에서 적어도 한 가지 이상의 역할을 하여야만 여드름 치료에 유용한 약물이 될 수 있는 것이다. 구체적으로는, 피지 과분비 억제를 위해 비정상적인 남성 호르몬의 분비를 제어하는 항안드로겐제 등의 여성호르몬의 사용, 여드름균의 생장을 억제하는 항균제 및 항생제의 사용, 항염증 작용을 하는 비스테로이드계 소염제를 사용하는 방법이 이용되고 있다.

이와 관련한 종래기술로서, 특허문헌 1에는 “황금, 감초, 연교, 승마, 백지, 작약의 혼합 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름 예방 및 개선용 화장료 조성물”이 개시되어 있는데, 상기 조성물은 항염증 효과를 가지나, 피지분비 억제 효과를 가져 스트레스 시 발생하는 피지생성 및 염증성 사이토카인의 생성을 억제하는 것으로 항균 및 피부 자극을 완화하는 것과는 차이가 있다.

또한 특허문헌 2에는 “황련, 어성초, 은행 추출물 및 마데카소사이드를 유효성분으로 포함하며, 상기 황련, 어성초 및 은행 추출물은 각 원료를 발효시키고 초음파 추출하여 얻어지는 것임을 특징으로 하는, 여드름 개선용 화장료 조성물”이 개시되어 있는데, 상기 조성물을 얻기 위한 공정이 복잡하고, 항균 기능이 현저히 증진되고, 피부 자극이 거의 없다고 하나, 그 효과가 만족할 만한 수준으로 볼 수 없는 것이다.

계속하여 특허문헌 3에는 “용담, 토복령, 황백, 연교 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 항 여드름 조성물”이 개시되어 있는데, 상기 조성물은 항염 및 항균 활성이 우수하다고 하나, 피부 자극의 완화와 상이한 것이다.

나아가 여드름에 대한 전형적인 항염 및 항균제로서는 살리실산(salicylic acid), 트리클로산(triclosan) 등을 들 수 있는데, 살리실산은 면포성 여드름이나 감염되지 않은 여드름 치료에 쓰이며, 트리클로산은 여드름 균이 세포벽에 부착하는 것을 막아주는 역할을 한다. 그러나 사용 시에 둘 다 피부 작열감과 따가움을 유발시키는 물질로서 피부 건조나 피부 박피 등을 유발하는 문제점이 있고, 특히 이들을 임산부나 수유부가 사용 시에는 의사 처방이 필요한 것이다.

본 발명자는 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 연구를 거듭한 결과 염증과 항균 작용이 우수할 뿐만 아니라 피부자극이 적은 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물을 완성하게 되었다.

등록특허공보 10-1211754호(2012. 12. 06. 등록) 등록특허공보 10-1064904호(2011. 9. 07. 등록) 등록특허공보 10-0593511호(2006. 6. 19. 등록)

본 발명은 상기 문제점을 해결하고자 안출된 것으로서, 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항염 및 항균 작용이 우수할 뿐만 아니라 항산화 활성이 우수하고, 피부 자극이 없는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물 을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 화장료 조성물이 수렴화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지, 크림, 에센스, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 샴푸, 린스, 팩 등의 기초 화장료; 수중유형 또는 유중수형 메이크 업베이스, 파운데이션, 스킨커버 등 메이크업 제품, 헤어팩, 헤어에센스 등 헤어 제품 중에서 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명에 의한 그 밖의 구체적인 과제의 해결수단은 발명의 상세한 설명에 기재되어 있다.

상기한 바와 같이 본 발명에 의한 화장료 조성물은 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 뛰어난 항염 및 항균 효과를 가지며, 나아가 피부의 자극을 억제하여 여드름의 개선에 효과가 우수하다. 또한 플라보노이드 함량이 높고, DPPH 라디칼 소거능이 우수하므로 항산화 기능을 통한 피부노화 예방에도 도움을 줄 수 있다.

이하 본원 발명의 바람직한 실시예 및 실험예를 구체적으로 설명한다.

먼저 본원 발명에 의한 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물의 구성 물질 중에 대하여 상세히 설명한다.

황련(黃連)은 미나리아제비과 다년생 초본식물의 뿌리줄기를 약재로 사용하는데, 오래전부터 한방에서 사용해 오던 재료로서 피부 및 점막에 대한 자극이 없는 안전한 식물이다. 황련은 베르베린(berberine)이 주성분이고 그 외에 팔마틴(palmatine)을 함유하고 콥티신(coptisine), 워레닌(worenine), 콜룸바민(columbamaine) 등의 알칼로이드를 함유하며, 항염 작용 및 동맥경화 예방 효과가 공지되어 있다.

황백(黃柏)은 운향과에 속한 낙엽교목식물인 황벽과 황피수(천황백, 관황백)의 전피를 제거한 수건피를 황백(Phellodendri Cortex)이라 하며, 수피와 과실을 약재로 사용하여 왔다. 전남, 충북을 제외한 전국에 야생하며 일본, 중국, 만주에 분포한다. 수피에 베르베린(Berberin), 자트로진(jatrorrhi-zine), 팔마틴(palmatine), 메니스퍼민(menispermine), 마그노플로린(magnofl-orine), 베타시토스테롤(β-sitosterol) 등을 함유하며 과실에 펠로덴드론스테롤(phellodendronsterol)을 함유한다. 황백은 오래 전부터 청열조습, 사화제증, 해독정창, 습열사리, 황달, 대하, 열림, 각기, 골증노열, 도한, 유정, 창양종독, 방광 습열, 뇨도염, 하초열, 고미건위, 정장, 특히 수렴, 방부약, 소염약, 안약 원료로 한방에서 사용해오던 것으로서 체내 섭취에 따른 인체 안정성이 이미 확인되었다.

황금(黃芩)은 꿀풀과 다년생 초본식물로서 플라보노이드, 우고닌(Wogonin), 바이칼린(Baicalin) 등의 생리활성 성분을 함유하며, 약리 효과로는 심장 및 폐의 열을 내리게 하거나 기침 및 피를 멈추게 하는 효과를 갖고 있으며, 피부에는 항알레르기, 항산화, 항염증 효과를 갖고 있고 유해 산소 제거 효과가 우수하고 알려져 있다.

황기(

)는 콩과에 속하는 다년생 초본으로 우리나라의 중북부 지역에 자생하며 약용을 목적으로 널리 재배되고 있는바, 한방에서는 그 뿌리를 주로 약재로 사용하고 있으며 간장보호작용, 면역촉진작용, 항암작용, 강장작용, 이뇨작용 등의 효능이 있고, 항균활성, 항산화능, 다량의 폴리페놀물질 및 이소플라보노이드(Isoflavonoid) 함유에 따른 생리활성이 보고되었다.

당귀(當歸)는 산형과(미나리과, Umbelliferae)에 속하는 2~3년생 초본식물로서, 강원도와 경상도의 고냉지대에서 주로 재배되고 있는데, 보혈강장 및 진통 작용을 목적으로 냉증, 빈혈, 혈행장애 및 정신증상 등의 부인과 질환에 주로 보혈청혈약으로 널리 사용되어 왔다.

적작약(赤芍藥)은 미나리아제비과인 붉은 색 또는 가지 색 꽃이 피는 작약의 뿌리로서, 단백질, 당질, 지질 등과 함께 나이아신, 비타민 A, B군, K, Ca, Fe 등 다양한 성분이 함유되어 있어 영양부족으로 인한 도한을 완화하는 수렴작용을 한다. Paeonifolrin의 혈관 운동능력 강화작용이 신나믹 알데하이드의 혈관확장 작용에 힘입어 말초혈관과 소화관 점막에 분포된 혈관의 혈액순환을 원활히 하고 소화관 운동능력을 항진시켜 소화, 흡수를 촉진한다. Paeoniflorin이 중추신경 흥분을 억제해 진정, 진경, 진통을 하며 위산분비억제 작용이 있다.

금은화(金銀花)는 인동과(Capriofoliaceae)에 속하는 반상록덩굴성 관목식물로서, 인동초라고도 불리며, 억균작용, 면역 부활작용, 소염작용, 진통작용, 이뇨작용, 항암작용, 항바이러스 작용 등이 있다고 알려져 있는 전통적인 한약재로서 주요 성분으로는 루리세린, 후라보노이드, 탄닌, 알칼로이드, 루테루닌, 이노시톨, 사포닌, 로니세린 및 루테오린 성분 등이 있다. 본 발명에 적용되는 부위는 꽃 부위이다.

본 발명에 따른 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 작약, 금은화의 복합 추출물은 다음과 같이 단계를 거쳐 제조될 수 있다.

먼저, 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 작약, 금은화를 물로 깨끗이 세척한 후에 그늘에서 충분히 건조하고, 건조된 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화를 분쇄하여 사용한다. 이들 분쇄물을 황련 30중량부, 황백 20중량부, 황금 10중량부, 황기 10중량부, 당귀 10중량부, 적작약 10중량부, 금은화 10중량부를 순환추출장치에 넣은 다음 추출용매로서 에틸알코올 또는 물을 넣고 침적(沈積)시킨 후에 50~80℃ 온도에서 2~4시간 동안 추출한다. 상기 추출방법과 달리 황련 30중량부, 황백 20중량부, 황금 10중량부, 황기 10중량부, 당귀 10중량부, 적작약 10중량부, 금은화 10중량부를 각각 계량한 후에 순환추출장치에 넣어 추출한 후에 얻어진 추출물을 혼합하여 복합 추출물을 얻을 수도 있다.

이어서 상기에서 얻은 복합 추출물을 원심분리기(VS24SMT, Vision Sci. Co., Korea)에서 8000rpm x 20min(4℃)으로 원심분리하였으며, 이를 종이필터로 여과한 후에 진공회전 증발기로 100㎖로 농축하여 복합 추출물을 제조할 수 있다.

상기에서 추출용매로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 추출에서 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화는 용매에 대해 5~30중량부가 되게 하는 바람직하며, 이 때 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화가 5중량부 미만의 경우는 과량의 용매를 사용하게 되어 경제성 및 농축의 어려움이 있고, 30중량부를 초과하는 경우 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화가 용매에 충분히 함침되기 어려워 추출이 잘되지 않는다.

상기 침적온도는 50 내지 80℃이며, 보다 바람직하게는 70℃인데, 이 온도범위에서 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이며, 50℃ 미만에서는 추출시간이 오래 걸리게 되고, 80℃를 초과하면 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 변색 및 변취의 문제가 발생된다. 상기 침적시간은 3시간이 바람직한데, 2시간 미만에서는 원하는 성분의 추출이 미흡하며, 4시간이 넘게 되면 추출 성분의 변화가 없고 추출물이 변색된다.

상기의 방법으로 수득한 추출여액을 300mesh 여과포로 고형분을 제거하고, 0.5~0.1㎛ 필터로써 여과하여 상층액을 감압 농축하여 에탄올추출물을 얻을 수 있다.

상기와 같이 얻어진 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물은 항산화 및 항염증 활성이 우수하며, 또한 세포독성인 MTT Assay, NO 분비억제 효능 등 생리활성이 우수한 것으로 나타났다.

본원 발명의 시료는 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화 복합추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.05∼30.0중량%를 유효성분으로 함유하는 여드름치료용 화장료 조성물을 제공하는데, 이 때 추출물의 함량이 조성물 총 중량에 대하여 0.05중량% 미만인 경우에는 기대하는 항염 및 항균 작용이 취약할 뿐만 아니라 피부 자극의 완화 효과기 미흡하고, 30.0중량%를 초과한 경우에는 제형화에 어려움이 있고 변색, 변취 등의 화장료로서 갖추어야 할 제형의 조건을 충족시키기 어렵게 된다.

마지막으로 본 발명의 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 화장품, 의약품, 식품, 섬유, 생활용품 등 다양한 제품에 포함될 수 있고, 특히, 화장품, 의약품 등으로 사용이 바람직하다. 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고 형태로 제공될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 더 구체적으로 피부에 사용되는 것으로서, 수렴 화장수, 유연 화장수, 크림, 영양 에센스, 화운데이션, 선크림, 비비크림, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액 중에서 선택된 등의 제형을 가질 수 있다.

이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

복합 추출물의 제조

복합 추출물의 원료로 사용되는 황련, 황백, 황금, 황기, 당귀, 적작약, 금은화는 국내에서 채취한 것을 사용하였으며, 채취한 상기 약초를 각각 깨끗이 씻고 이물질을 제거하여 건조한 후에 분쇄하여 10mesh로 여과하여 사용한다. 건조된 황련 30g, 황백 20g, 황금 10g, 황기 10g, 당귀 10g, 적작약 10g, 금은화 10g을 얻어 잘 혼합한 후에 각각 용매(에탄올 : 증류수 = 70 : 30) 1ℓ에 침지시켜 70℃ 순환추출장치에서 3시간 동안 추출시켰다. 이어서 얻어진 추출액을 원심분리기(VS24SMT, Vision Sci. Co., Korea)에서 8000rpm x 20min(4℃)으로 원심분리하였으며, 이를 실온으로 냉각시키고 종이필터로 여과하여 여과액을 취한 후에 얻어진 여과액을 진공회전증발기로 농축시켜 복합 추출물 100㎖을 수득하였다. 농축한 복합 추출물은 실험실용 동결건조기(Ilshin lab. co., Ltd, korea)를 사용하여 분말로 제조할 수 있었는데, 그 결과 복합 추출물 분말 23.8g을 회수 할 수 있었으며, 이를 사용하여 샘플을 제조하였다.

실시예 1에서 추출용매로서 70% 에틸알콜을 사용하는 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 동일한 방법으로 하여 복합 추출물을 얻었다.

<비교예>

잘 건조된 황련, 어성초, 은행을 각각 100g씩 분쇄한 후, 70% 에틸 알코올 1ℓ에 넣어 상온에서 5일 동안 침적시키고, 300 메쉬에서 여과하여 1주일간 방치한 다음 침전물을 와트만 5번 여과지로 여과하였다. 이어서 진공 감압 농축기를 이용하여 80℃에서 농축건조하여 분말 형태의 복합 추출물을 얻었다.

상기 실시예 1, 2에서 얻은 복합 추출물에 대하여 총당, 환원당, 단백질 함량, 플라보이드 화합물의 함량 등에 관한 성분을 분석하였다.

<실험예 1> 총 당량

상기 복합 추출물의 총 당량을 측정하기 위해서 Dubois, M. 등(1956)이 사용한 페놀-황산법을 사용하였다. 실시예 1, 2에서 얻은 복합 추출물 용액 0.2ml를 시험관에 넣고 5%(v/v) 페놀 용액 0.2㎖를 첨가한 후, 황산 1.0㎖를 반응액에 서서히 적하시킨 후에 혼합하여 실온에서 20분간 방치한 다음 490㎚에서 흡광도를 측정하며, 표준당으로는 D(+)-glucose(glucose 10㎎+DW 20㎖)를 사용하여 검량곡선을 작성한 후 비교하여 총 당량을 계산하였고, 그 결과를 [표 1]에 나타내었다.

상기 [표 1]로부터 총 당함량은 주로 열수 추출물인 실시예 2가 알코올 추출물인 실시예 1보다 높은 것으로 확인되었다.

<실험예 2> 환원 당량

실시예 1, 2 추출물의 환원 당량을 측정하기 위해 福井(1969)이 사용한 DNS(3,5-Dinitrosalicylic acid)법을 사용하였다. DNS 용액은 1) DNS 0.75 g/100㎖, 2) NaOH 1.4g/100㎖, 3) Potassium sodium tartrate tetrahydrate 21.62g/100㎖, 4) 페놀 0.54 g/100㎖, 5) Na2S2O5 0.59g/100㎖을 조제하여 사용하였으며, 540nm 흡광도값을 측정하였고, 그 결과를 [표 2]에 나타내었다.

상기 [표 2]로부터 실시예 2가 실시예 1보다 환원당량이 높은 것으로 확인 되었다.

<실험예 3> 단백질 정량

상기 실시예 1, 2에서 제조된 복합 추출물의 단백질 정량을 위하여 브래포드(Bradford)법을 사용하였는데, Bradford 시약은 0.1g briliant blue G-250 in 50㎖ 메탄올(고순도) 100㎖, 85% 인산 50㎖ 증류수에 녹인 후 여과하여 냉장 보관하며, 595㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 [표 3]에 나타내었다.

상기 [표 3]으로부터 실시예 2가 실시예 1보다 단백질 함량이 높은 것으로 확인되었다.

<실험예 4> 플라보노이드 화합물분석

실시예 1, 2의 복합 추출물의 총 플라보노이드 분석을 위하여 Woisky, R. G. 등(1998)이 사용한 플라보노이드-AlCl3+ 법을 사용하였다. 이것은 플라보노이드류와 AlCl3+가 반응하여 생성 된 노랑색의 착체를 측정하는 방법으로, 0.5㎖ 탕약(1㎎/㎖)에 0.5㎖ 2% AlCl3(in EtOH)를 넣고 반응시켜 1시간 동안 실온에 방치한 후에 420㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 표준물질로는 루틴(Rutin)을 사용하였다. 표준물질은 에탄올 1㎖에 루틴 1㎎을 넣고 용해시킨 후에 희석하여 검량곡선을 만들어 총 플라보노이드 화합물의 함량을 분석하였으며, 그 결과를 [표 4]에 나타내었다.

상기 [표 4]로부터 실시예 1이 실시예 2보다 총 플라보노이드 함량이 높은 것으로 확인되었다.

<실험예 5> 항 여드름균 MIC 분석

1) MIC 방법

실시예 1, 2 및 비교예의 복합 추출물에 대한 표준균주 4종의 최소발육억제농도(MIC)는 배양기에서 24시간 배양한 배양액의 탁도를 플레이트 리더(Plate Reader)로 측정, 균을 접종하지 않은 배지와 오차 범위(5%)내에서 균이 생장하지 않는 것을 기준으로 결정하였다. 대조군으로는 1,2-헥산디올(hexanediol)을 사용하였으며, 사용균주는 Propionibacterium acnes KACC 11946, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Staphylococcus aureus KCTC 3881,Candida albicans KCTC 7965를 사용하였으며, 배지는 항균실험에 사용했던것과 동일한 배지를 사용하였고, 그 결과를 [표 5-1] 내지 [표 5-4]에 각각 나타내었다.

상기 [표 5-1]로부터 각 시료별 Propionibacterium acnes KACC 11946 균에 대한 MIC농도는 실시예 1은 2%, 실시예 2는 4%로 확인되었으나, 비교예의 경우 이보다 훨씬 높은 수치를 나타내었다. Propionibacterium acnes KACC 11946는 혐기성 균주로서 주로 모낭 속에 상주하면서 여드름 및 염증을 유발하는데, 연구결과 실시예 1, 2의 복합 추출물의 최적 농도는 각각 2%, 4%인 것으로 확인되었다.

상기 [표 5-2]로부터 Staphylococcus epidermidis KCTC 1917 균주는 혐기성 균주로서 외모낭 모낭 중간에 상주하는 균으로서 여드름과 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다. 연구결과 최적 MIC농도는 실시예 1은 2%, 실시예 2는 5%로 각각 확인되었으며, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 보였고, 항균에센스의 경우 실시예 1이 실시예 2보다 전반적으로 항균활성이 높았으며, 실시예 1의 MIC가 2%로 가장 적합하였다.

상기 [표 5-3]으로부터 Staphylococcus aureus KCTC 3881은 호기성으로 피부표면에 상주하는 균으로서 여드름과 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다. 연구결과 최적 MIC농도는 실시예1은 1%, 실시예 2는 2%로 확인되었으며, 대조군에 비해 항균활성이 높았고, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 보였으며, 실시예 1의 최적 MIC는 1%로 대조군과 유사한 농도의 MIC 값을 가지는 것으로 확인되었다.

상기 [표 5-4]로부터 Candida albicans KCTC 7965는 호기성으로 피부표면에 상주하는 균으로서 여드름과 염증을 유발하는 것으로 알려져 있다. 연구결과 최적 MIC농도는 실시예 1에서만 4%로 확인되었으며, 실시예 2의 경우 10% 이하에서는 MIC값이 확인되지 않았고, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 나타내었다.

<실험예 6> 생리활성분석

상기 실시예 1, 2 및 비교예의 복합 추출물에 대하여 항산화활성, 항염증활성, 세포독성 등에 관한 성분을 분석하였다.

1) 항산화(DPPH method) 활성

전자공여능(EDA: electron donating ability) 측정법으로 Blois의 방법을 변형하여 측정하였고, DPPH radical 제거 효과는 추출물의 DPPH에 대한 전자공여효과로 시료의 환원력을 측정하는 방법에 의하여 측정하였다. 시료 용액 10㎕(control : 99.5% ethanol)에 0.1mM DPPH (in 99.5% ethanol) 용액을 190㎕를 가하고, vortex mixer로 10초간 진탕하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후에 Microplate Reader(Bio-Tek, USA)를 이용하여 517㎚에서 흡광도를 측정하였다. 음성대조군으로는 시료 대신 메탄올을 10㎕ 첨가하여 반응시키고, 양성대조군으로는 L-ascorbic acid, caffeic acid를 사용하여 같은 방법으로 측정하였다. 각 시료의 항산화작용은 대조군에 비하여 감소된 흡광도로부터 radical 제거율을 계산하였고, 그 결과를 [표 6]에 나타내었다.

Sample O.D. : 시료를 가한 시험액의 흡광도

Control O.D. : 시료를 가하지 않은 시험액의 흡광도

상기 [표 6]으로부터 각 추출물에 대한 항산화효능 분석결과 실시예 1은 68.24%, 실시예 2는 34.52%의 항산화 효능이 있는 것으로 확인되었으며, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 보였다. 실시예 1은 대조군인 BHA의 78.23%와 동등한 정도의 효능을 가져 항산화 기능을 통한 피부노화 예방에 도움을 줄 수 있을 것으로 판단된다.

2) 항염증활성

실시예 1, 2에 대한 항염증효능 분석을 COX-2(Cyclooxygenase-2)의 저해활성으로 측정하였다. 96 well plate의 2 well에 10㎕ heme, 10㎕ assay buffer(100mM Tris-HCl, pH 8.0) 그리고 10㎕ 용매(inhibitor를 녹였던 용매)를 첨가하였다. Background well에는 2 well에 10㎕ heme, 10㎕ assay buffer 그리고 10㎕의 용매를 첨가하고, 100% initial activity 측정을 위해 2 well 에 10㎕ heme, 10㎕ 효소(COX-2) 그리고 10㎕의 용매를 첨가하였다. 샘플(inhibitor)의 COX 저해활성 측정을 위해 2 well에 10㎕ heme, 10㎕ 효소 (COX-2), 그리고 10㎕의 샘플을 첨가하였다. Standard inhibitor로는 인도메타신(Indomethacin)을 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide)에 녹여 처리하였고, 샘플은 100mM Tris-HCl(pH 8.0)에 녹여 농도별로 처리하며, 모든 well에 200㎕의 assay buffer를 첨가하여 실온에서 반응시킨 후에 발광분석기(Spectra Max L, Molecular devices, USA)에 부착되어 있는 2개의 dispenser를 이용하여 하나의 dispenser로 모든 well에 10㎕의 chemiluminescent substrate를 첨가하고, 즉시 다른 하나의 dispenser를 이용하여 50㎕의 아라키돈산을 첨가한 후 Relative Luminescent Units(RLU)를 발광측정기로 측정하였으며, 그 결과를 [표 7]에 나타내었다(Vane, J.(1987), Dawson, W.(1985), Seibert, K.(1994), Flattery, M.P(2005), Kortz, F.(2005), Linton, M.F.(2004)).

상기 [표 7]로부터 추출물에 대한 COX-2저해 활성을 분석한 결과, 실시예는 99.87%, 실시예 2는 92.45% 확인되었으며, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 나타내었다. 이는 대조군인 인도메타신의 90.89%보다 높은 것으로 실시예 1, 2 모두 고른 항염증 활성을 가지는 것으로 확인되었다.

3) 세포독성분석

실시예 1, 2 및 비교예의 복합 추출물에 대한 세포독성과 항염증과 관련성이 있는 NO 억제 효능을 Raw 264.7 세포를 사용하여 분석하였다.

① 세포독성분석(MTT assay)

Raw 264.7 세포를 사용하여, 시료를 농도별로 처리하고 세포배양 20시간이 지난 후에 5㎎/㎖의 MTT 시약을 이용하여 0.1㎎ MTT/(200㎕) well에 넣고 2시간 동안 배양하였다. 각 실험군당 well 수는 3으로 하고, 배양 후에 상등액을 제거하고, 200㎕의 PBS로 세척한 다음, 100㎕의 DMSO를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 formazan을 용해시킨 후에, ELISA microplate reader(Model: MQX200R, BioTek, USA)를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존률은 control cell에 대한 백분율로 표시하였고, 그 결과를 [표 8]에 나타내었다[i.e. viability (% of control) = 100×(absorbance of treated sample)/(absorbance of control)].

시료의 농도가 1.0㎎/㎖에서 Raw 264.7 세포에 대한 독성을 분석한 결과, 실시예 1, 2 모두 80% 이상이 생존하는 것으로 확인되어 세포독성이 없는 것으로 확인되었으며, 비교예는 이보다 훨씬 나쁜 결과를 나타내었다.

② NO 분비 억제 효능 측정

Raw 264.7 세포로부터 생성된 NO의 양을 LPS 처리한 후, 20시간에 있어서 측정하며, 각 실험군당 well 수는 3으로 한다. 96 well plate에 세포 배양상등액 100㎕와 Griess시약(1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid + 1% α-naphthylamide in H2O) 150㎕를 혼합한 후에, 5분 동안 반응시켜 ELISA microplate reader(Model: MQX200R, BioTek, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 [표 9]에 나타내었다.

상기 [표 9]로부터 NO 분비 억제효율을 분석한 결과 실시예 1, 2 모두 NO 분비 억제효율이 90% 이상으로 그 효능이 우수한 것으로 확인되었으며, 비교예는 이보다 훨씬 저조하였다.

상기 실시예 1에서 제조한 복합 추출물을 함유한 화장료를 여러 가지 제형으로 하여 하기와 같이 제조하였다.

<제조 실시예 1> 에센스

실시예 1, 2의 복합 추출물을 이용한 항균 에센스 제조는 물에 녹는 수상과 점증제 원료, 미생물발효 천연계면활성제(BEF)를 넣고 70℃에서 가온 용해한 후에 60℃에서 유상원료를 넣어 45℃로 서냉시킨 다음 중화제로 중화하고 나서 2,000rpm으로 5~10분간 분산시켰다. 이어서 복합 추출물과 향을 넣어 3,300rpm으로 10분간 교반하여 최종적으로 35℃로 냉각시켜 에센스를 제조하였다(표 10 참조).

<제조 실시예 2> 스킨 세럼

스킨 세럼의 제조는 물에 녹는 수상과 점증제 원료, 미생물발효 천연계면활성제(BEF)를 넣고 65℃에서 가온 용해한 후에 45℃로 냉각하고, 중화제로 중화한 다음 2,000rpm으로 5~10분간 분산시킨 후에 마지막으로 복합 추출물과 향을 넣어 3,300rpm으로 10분간 교반하여 최종적으로 35℃로 냉각시켜 제조하였다(표 11 참조).

<제조 실시예 3> 크림

크림 제조는 물에 녹는 수상과 점증제 원료, 미생물발효 천연계면활성제(BEF)를 넣고 70℃에서 가온 용해한 다음에 60℃에서 유상원료를 넣어 45℃로 서냉시킨 후에 중화제로 중화하고 나서 2,000rpm으로 5~10분간 분산시켰다. 이어서 복합 추출물과 향을 넣어 3,300 rpm으로 10분간 교반하여 최종적으로 35℃로 냉각시켜 제조하였다(표 12 참조).

본 발명은 상기와 같은 실시예에 한하여 설명하였으나, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 아니하는 범위 내에서는 얼마든지 다양하게 변경하여 실시할 수 있음은 물론이다.

Claims (6)

1. 황련 30중량부, 황백 20중량부, 황금 10중량부, 황기 10중량부, 당귀 10중량부, 적작약 10중량부, 금은화 10중량부의 비율로 혼합한 후에 용매로서 70% 에틸알코올 을 사용하고, 50~80℃에서 2~4시간 동안 순환추출장치로 추출되는 복합 추출물을 유효성분으로 0.05 ~ 20.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 제 1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 수렴화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지, 크림, 에센스, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 샴푸, 린스, 팩의 기초 화장료; 수중유형 또는 유중수형 메이크업 베이스, 파운데이션, 스킨커버의 메이크업 제품; 헤어 팩, 헤어 에센스의 헤어 제품; 중에서 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.