JP5452937B2 - 発酵乳製品に改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を提供する乳酸菌 - Google Patents
発酵乳製品に改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を提供する乳酸菌 Download PDFInfo
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Description
本発明の分野
本発明は、例えば、発酵乳製品に改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与する新規ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ））菌に関する。
本発明は、例えば、発酵乳製品に改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与する新規ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ））菌に関する。
背景技術
ストレプトコッカス・サーモフィラスの多くの株は、細胞外多糖（ＥＰＳ）を合成する。これらの分子は、細胞と固く会合したカプセルとして製造されうるし、又はそれらは、遊離したスライムとして培地中に放出されうる（すなわち、粘着性の（ｒｏｐｙ）多糖）。細胞外多糖の存在は、乳中でのＳ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの成長又は生存に対し明らかな利点を付与しないけれども、これらの種又は他の乳製品用乳酸菌によるその場での製造は、典型的には、発酵乳製品に所望の粘着性の又は粘性の舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与する。細胞外多糖産生Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓがモッツァレラチーズの機能特性を高めることができるということも研究により示された。さらなる細目については、Ｂｒｏａｄｂｅｎｔ ｅｔ ａｌ．の論文（Ｊ．ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８６：４０７−４２３）を参照のこと。
ストレプトコッカス・サーモフィラスの多くの株は、細胞外多糖（ＥＰＳ）を合成する。これらの分子は、細胞と固く会合したカプセルとして製造されうるし、又はそれらは、遊離したスライムとして培地中に放出されうる（すなわち、粘着性の（ｒｏｐｙ）多糖）。細胞外多糖の存在は、乳中でのＳ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの成長又は生存に対し明らかな利点を付与しないけれども、これらの種又は他の乳製品用乳酸菌によるその場での製造は、典型的には、発酵乳製品に所望の粘着性の又は粘性の舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与する。細胞外多糖産生Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓがモッツァレラチーズの機能特性を高めることができるということも研究により示された。さらなる細目については、Ｂｒｏａｄｂｅｎｔ ｅｔ ａｌ．の論文（Ｊ．ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８６：４０７−４２３）を参照のこと。
ＷＯ ２００４／０８５６０７Ａ２（Ｒｈｏｄｉａ Ｃｈｉｍｉｅ）は、ＥＰＳの生合成に関係するいくつかの特別な具体的な遺伝子（「ｅｓｐ」遺伝子という）を含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）株を記載する。
Ｈａｓｓａｎ ｅｔ ａｌ．（２００３；Ｊ．ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８６：１６３２−１６３８）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ の２つの粘着性株、ＣＨＣＣ３５３４とＣＨＣＣ３５４１を記載する。これらの株の両者が、ファージに対して感受性である。
本発明の概要
本発明が解決しようとする課題は、特に、発酵乳製品、例えば、ヨーグルトに改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与することができるという点で改良された特性をもち、かつ、ファージの攻撃が問題となる今日の高く工業化された乳製品の製造において有用である、新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株を提供することである。
本発明が解決しようとする課題は、特に、発酵乳製品、例えば、ヨーグルトに改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与することができるという点で改良された特性をもち、かつ、ファージの攻撃が問題となる今日の高く工業化された乳製品の製造において有用である、新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株を提供することである。
以下実施例中に示すように、本明細書中に記載する寄託番号ＤＳＭ１７８７６をもつ新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）株（ＣＨＣＣ８８３３ともいう）は、高いｔｅｘｔｕｒｉｎｇ株と考えられ、かつ、乳製品産業において現在使用されている関連のある商業的に入手可能なＳＴ株に比較して、（剪断応力として計測したとき）改良された舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を付与する。本明細書中に記載する新規ＤＳＭ１７８７６ＳＴ株は、ＷＯ ２００４／０８５６０７Ａ２（Ｒｈｏｄｉａ Ｃｈｉｍｉｅ）中に記載される特別の具体的なｅｓｐ遺伝子を含まない（ＰＣＲ分析により測定、データは示さず）。さらに、実施例２に示すように、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＣＨＣＣ８８３３は、乳業において発生する多数のファージに対して耐性であるという利点をもつ。
したがって、本発明の第１の側面は、寄託番号ＤＳＭ１７８７６をもつ乳酸菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）又はその突然変異体に関し、ここで、当該突然変異株は、出発材料として当該寄託された株を用いて得られ、そして当該突然変異体は、ＤＳＭ１７８７６の舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ）特性を保持するか又はさらに改良する。
本発明の第２の側面は、上記第１の側面のバクテリアを含む初期培養組成物に関する。
本発明の第３の側面は、上記第２の側面に従う初期培養組成物を食品又は飼料出発材料に添加し、そして前記バクテリアが代謝的に活性である条件下でこのように接種された出発材料を保持することを含む食品又は飼料製品の製造方法に関する。
本発明の態様を、以下の非制限的実施例を用いて詳細に説明する。
本発明の態様を、以下の非制限的実施例を用いて詳細に説明する。
本発明の詳細な説明
新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株
新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）株ＣＨＣＣ８８３３の試料は、２００６年１月１１日の寄託日をもって寄託番号ＤＳＭ１７８７６の下ＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ａｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｗ ＧｍｂＨ）に寄託された。この寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条件下で行われた。
新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株
新規Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ）株ＣＨＣＣ８８３３の試料は、２００６年１月１１日の寄託日をもって寄託番号ＤＳＭ１７８７６の下ＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ａｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｗ ＧｍｂＨ）に寄託された。この寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条件下で行われた。
本発明の第１の側面は、本明細書中に記載する新規株又は「その突然変異体」に関する。
出発材料として上記の寄託された株を用いて、慣用の突然変異誘発又は再単離技術により、当業者は、日常的に、本明細書中に記載された関連の特徴及び利点を保持するさらなるその突然変異体又は誘導体を取得することができるということは、当業者にとって明らかであります。したがって、第１の側面の用語「その突然変異体」は、出発材料として上記の寄託された株を用いて得られた突然変異株に関するものである。
出発材料として上記の寄託された株を用いて、慣用の突然変異誘発又は再単離技術により、当業者は、日常的に、本明細書中に記載された関連の特徴及び利点を保持するさらなるその突然変異体又は誘導体を取得することができるということは、当業者にとって明らかであります。したがって、第１の側面の用語「その突然変異体」は、出発材料として上記の寄託された株を用いて得られた突然変異株に関するものである。
乳業における乳及び条件は、一般に無菌ではないので、バクテリオファージは、乳製品の生産において重大な脅威となる。バクテリオファージは、乳酸菌に感染し、対数増殖で増殖し、細胞の死と、その結果としての、欠陥のある酸性化及び生産の失敗を導く。特に、ひじょうに大きなサイズの槽を適用する現代の乳産業においては、ファージの攻撃は、ひじょうに大きな金銭的損失に関連する。したがって、乳産業は、新規のファージ耐性培養の開発を一貫して検索している。実施例１と２に示すように、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＣＨＣＣ８８３３（ＤＳＭ１７８７６）は、驚くべき高い舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）を提供するだけでなく、予想外に、ＣＨＣＣ８８３３は、他の高いｔｅｘｔｕｒｉｎｇ株とは対照的に、試験された全ファージに耐性であった。
本明細書中に記載するＬＡＢを含む初期培養物（ｓｔａｒｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ）
本明細書中に記載する乳酸菌（ＬＡＢ）は、食品又は飼料製品の生産における初期培養物として有用である。
本明細書中に記載する乳酸菌（ＬＡＢ）は、食品又は飼料製品の生産における初期培養物として有用である。
典型的には、このような初期培養物は、典型的には、一定濃度の生きた細胞をもつ凍結、乾燥、又は凍結乾燥濃縮物を含む濃縮形態にあるバクテリアを含み、これは、組成物１ｇ当り１０4〜１０12ｃｆｕ（コロニ−形成単位）の範囲内にあり、これは少なくとも１０4ｃｆｕ／組成物１ｇ、例えば、少なくとも１０5ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０6ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０7ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０8ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０9ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０10ｃｆｕ／ｇ、例えば少なくとも１０11ｃｆｕ／ｇを含む。
上記組成物は、さらなる成分として、冷凍保護剤、及び／又は慣用の添付物であって栄養素、例えば酵母エキス、糖、及びビタミンを含むものを含みうる。
乳酸菌発酵プロセスの生産において乳酸菌の混合培養を適用することは通常であるので、ある態様においては、上記組成物は、同一の種又は異なる種に属する多数の株を含むであろう。初期培養物中の乳酸菌のこのような有用な組合せの典型的な例は、ロイコノストック（Ｌｅｕｉｏｎｏｓｔｏｃ）種と、１以上のラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）亜種、例えば、ラクトコッカス・ラクティス亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・ラクティス亜種クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）又はラクトコッカス・ラクティス亜種ラクティス・ビオバール・ジアセチラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ ｂｉｏｖａｒ．ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）との混合物である。
食品又は飼料製品の製造方法
前記したように、本発明の１の側面は、本明細書中に記載する初期培養物を食品又は飼料製品出発材料に添加し、そして乳酸菌が代謝的に活性である条件下でこのように接種された出発材料を保持することを含む食品又は飼料の製造方法に関する。
前記したように、本発明の１の側面は、本明細書中に記載する初期培養物を食品又は飼料製品出発材料に添加し、そして乳酸菌が代謝的に活性である条件下でこのように接種された出発材料を保持することを含む食品又は飼料の製造方法に関する。
有用な食品出発材料は、乳酸菌発酵ステップに慣用されるいずれかの材料、例えば、乳、野菜材料、肉製品、果汁、マスト、生パン（ドー）、及びバターを含む。
上記方法により得られる発酵製品は、典型的な例として、乳製品、例えば発酵乳、ヨーグルト、チーズであって、フレッシュチーズ製品又はモッツァレラを含むもの、及びバターミルクを含む。
本明細書中の関連の発酵製品のさらなる例及び細目については、Ｂｒｏａｄｂｅｎｔ ｅｔ ａｌ．の論文（Ｊ．ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８６：４０７−４２３）を参照のこと。当該論文中、関連の発酵食品は、標題「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｙｏｇｕｒｔ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ Ｍｉｌｋｓ」及び「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｚｚａｒｅｌｌａ Ｃｈｅｅｓｅ」の節中に記載されている。
さらなる態様においては、基質材料は、動物飼料、例えばサイレージ用の出発材料、例えば、牧草、穀物、エンドウ、アルファルファ又はテンサイの葉であり、ここでバクテリア培養物は、保存品を得るためにサイロに貯蔵されるべき飼料穀物中に接種されるか、又は動物飼料目的のためのごみ（ｏｆｆａｌ）を保存する目的をも、もって、屠殺くず肉や魚くずの如きタンパク質に富む動物残滓製品中に接種される。
実施例
実施例１：ＣＨＣＣ８８３３−発酵乳中での高められた舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）
株：
ＣＨＣＣ８８３３：本明細書中に記載する新規ＤＳＭ１７８７６ＳＴ株
参照株：実施例２を参照のこと
全ての株は、高ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ株であると一般に考えられる商業的な株である。
実施例１：ＣＨＣＣ８８３３−発酵乳中での高められた舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）
株：
ＣＨＣＣ８８３３：本明細書中に記載する新規ＤＳＭ１７８７６ＳＴ株
参照株：実施例２を参照のこと
全ての株は、高ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ株であると一般に考えられる商業的な株である。
乳の発酵
上記ＳＴ株の冷凍濃縮物を、９．５％の乾燥物含有量をもつ２００ｍＬの還元乳を接種するために使用し、これを、バッチプロセスにおいて１５分間９９℃に加熱処理した。ＣＨＣＣ８８３３の冷凍濃縮物は、典型的には、１×１０9〜１×１０10ｃｆｕ／ｇの間の細胞カウント数を示す。接種率は、１０Ｌ乳当り１ｇ濃縮物、すなわち、１×１０5〜１×１０6の間のｃｆｕ／ｍＬ乳であった。接種は、ｐＨ４．５５に達するまで３７℃で行い、この時点で、乳の凝固が生じた。次いで発酵乳を５℃に冷却した。
上記ＳＴ株の冷凍濃縮物を、９．５％の乾燥物含有量をもつ２００ｍＬの還元乳を接種するために使用し、これを、バッチプロセスにおいて１５分間９９℃に加熱処理した。ＣＨＣＣ８８３３の冷凍濃縮物は、典型的には、１×１０9〜１×１０10ｃｆｕ／ｇの間の細胞カウント数を示す。接種率は、１０Ｌ乳当り１ｇ濃縮物、すなわち、１×１０5〜１×１０6の間のｃｆｕ／ｍＬ乳であった。接種は、ｐＨ４．５５に達するまで３７℃で行い、この時点で、乳の凝固が生じた。次いで発酵乳を５℃に冷却した。
発酵乳中の舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｅ）の分析
接種翌日、発酵乳を１３℃までもっていき、そしてサンプルが均質になるまで穴があいたディスクを備えたスティックを用いて穏やかに撹拌した。このサンプルのレオロジー特性を、Ｃ２５同軸計測システムを具備したレオメーター（ＳｔｒｅｓｓＴｅｃｈ，Ｒｅｏｌｏｇｉｃａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｗｅｄｅｎ）上で評価した。
接種翌日、発酵乳を１３℃までもっていき、そしてサンプルが均質になるまで穴があいたディスクを備えたスティックを用いて穏やかに撹拌した。このサンプルのレオロジー特性を、Ｃ２５同軸計測システムを具備したレオメーター（ＳｔｒｅｓｓＴｅｃｈ，Ｒｅｏｌｏｇｉｃａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｗｅｄｅｎ）上で評価した。
粘度計測試験を、２１段階で０．２７から３００ｓ-1まで剪断速度を変化させて行った。剪断速度を上昇させ、そしてその後低下させ、剪断応力（Ｐａｓｃａｌ，Ｐａ）の上昇及び下降曲線と見掛け粘度（Ｐａ＊ｓ）を記録した。遅れ時間と積分時間は、それぞれ５ｓと１０ｓであった。さらなる分析のために、３００ｓ-1における剪断応力を選択した。
結果及び結論
乳製品産業において現在使用されているＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株（参照株）の濃縮物とともにインキュベートされた発酵乳は、ＣＨＣＣ８８３３を用いて製造されたサンプルに比較して、より低い粘度（より小さな剪断応力）であることを示した。
乳製品産業において現在使用されているＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株（参照株）の濃縮物とともにインキュベートされた発酵乳は、ＣＨＣＣ８８３３を用いて製造されたサンプルに比較して、より低い粘度（より小さな剪断応力）であることを示した。
実施例２：ＣＨＣＣ８８３３ファージ耐性特性
バクテリア株：
ＣＨＣＣ２３８９：Ｆ−ＤＶＳ ＳＴ１４３、材料番号２００１４４としてＣｈｒ．Ｈ
ａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ１４３．ＣＨＣＣ２３８
９とＣＨＣＣ３５３４（Ｈａｓｓａｎ ｅｔ ａｌ．２００３）は
、同一株からの異なる単離物である。
バクテリア株：
ＣＨＣＣ２３８９：Ｆ−ＤＶＳ ＳＴ１４３、材料番号２００１４４としてＣｈｒ．Ｈ
ａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ１４３．ＣＨＣＣ２３８
９とＣＨＣＣ３５３４（Ｈａｓｓａｎ ｅｔ ａｌ．２００３）は
、同一株からの異なる単離物である。
ＣＨＣＣ３０２１：Ｆ−ＤＶＳ ＳＴ−ＢＯＤＹ−２、材料番号６２３１５５としてＣ
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ１０２５５。
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ１０２５５。
ＣＨＣＣ３５４１：Ｆ−ＤＶＳ ＳＴ２０Ｘ、材料番号５０１６９６としてＣｈｒ．Ｈ
ａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ２０。
ａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ２０。
ＣＨＣＣ４２３９：混合培養物Ｆ−ＤＶＳ ＡＢＹ−４、材料番号６７５１７５中、Ｃ
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ４２３９。
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＳＴ４２３９。
ＣＨＣＣ５０８６：混合培養物Ｆ−ＤＶＳ ＹＦ−ＬＸ７０１、材料番号６６０６５６
中、Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株５０８６。
中、Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株５０８６。
ＣＨＣＣ５３８９：混合培養物Ｆ−ＤＶＳ ＡＢＹ−４、材料番号６７５１７５中、Ｃ
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株５３８９。
ｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株５３８９。
ＣＨＣＣ５５８１：Ｄａｎｉｓｃｏ Ａ／Ｓから商業的に入手可能なＳｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＴＡ４０。
ｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＴＡ４０。
ＣＨＣＣ８８３３：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ株ＤＳＭ
１７８７６。
１７８７６。
ファージ試験
上記の高ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ商業株のファージ感受性を、４３個の別個のファージ単離物を含むファージのテストパネルを用いたスポット試験により比較した。
スポット試験は、サンプル中のバクテリオファージの数を計数するための寒天重層法である。この方法は、寒天プレート（底面寒天）の表面上に、柔かな上面寒天の助けをかりて、試験されるべきバクテリア株をプレーティングすることを含む。次いで、細胞フリーなファージ単離物の異なる希釈物を、上面寒天上にスポットする。単一のファージが、バクテリア細胞を攻撃し、そしてファージ粒子を放出して複製して、それらの近傍のバクテリアを攻撃し、かつ溶解する。これは、不透明な培養物増殖により取り囲まれた透明な領域（プラーク）をもたらす。Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｈ．（１９５９）．Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ．Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
上記の高ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ商業株のファージ感受性を、４３個の別個のファージ単離物を含むファージのテストパネルを用いたスポット試験により比較した。
スポット試験は、サンプル中のバクテリオファージの数を計数するための寒天重層法である。この方法は、寒天プレート（底面寒天）の表面上に、柔かな上面寒天の助けをかりて、試験されるべきバクテリア株をプレーティングすることを含む。次いで、細胞フリーなファージ単離物の異なる希釈物を、上面寒天上にスポットする。単一のファージが、バクテリア細胞を攻撃し、そしてファージ粒子を放出して複製して、それらの近傍のバクテリアを攻撃し、かつ溶解する。これは、不透明な培養物増殖により取り囲まれた透明な領域（プラーク）をもたらす。Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｈ．（１９５９）．Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ．Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
方法
簡単に言えば、１０μｌのファージ溶解産物（プラーク形成単位（ＰＦＵ）約１０9／ｍｌ）を、試験されるべきバクテリア株上に未希釈、及び１：１００希釈でスポットし、そして一夜３７℃でインキュベートした。
簡単に言えば、１０μｌのファージ溶解産物（プラーク形成単位（ＰＦＵ）約１０9／ｍｌ）を、試験されるべきバクテリア株上に未希釈、及び１：１００希釈でスポットし、そして一夜３７℃でインキュベートした。
使用した寒天は、供給者（Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ．，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，ＨａｍｐＳｈｉｒｅ，ＵＫ）により推奨されるように本質的に調製した、Ｍ１７寒天（Ｏｘｏｉｄ ＣＭ７８５）＋２％ラクトースであった。
１：１００希釈又は単一プラークにおける透明ゾーンを、ファージ攻撃により引き起こされ、そしてそれを指標するものであると考えた。
１：１００希釈又は単一プラークにおける透明ゾーンを、ファージ攻撃により引き起こされ、そしてそれを指標するものであると考えた。
結果及び結論
上記スポット試験の結果は、ＣＨＣＣ２３８９，ＣＨＣＣ３０２１，ＣＨＣＣ３５３４，ＣＨＣＣ３５４１，ＣＨＣＣ４２３９、及びＣＨＣＣ５０８６は、ファージに対して感受性であることが分かったというものであった。ＣＨＣＣ５３８１は、ファージに対して感受性であることが先に判明していた。面白いことに、ファージは、ＣＨＣＣ８８３３を攻撃しなかった。
上記スポット試験の結果は、ＣＨＣＣ２３８９，ＣＨＣＣ３０２１，ＣＨＣＣ３５３４，ＣＨＣＣ３５４１，ＣＨＣＣ４２３９、及びＣＨＣＣ５０８６は、ファージに対して感受性であることが分かったというものであった。ＣＨＣＣ５３８１は、ファージに対して感受性であることが先に判明していた。面白いことに、ファージは、ＣＨＣＣ８８３３を攻撃しなかった。
寄託された微生物〔ＥＸＰＥＲＴ ＳＯＬＵＴＩＯＮ〕
規則１３ｂｉｓ．６（ＰＣＴ）に関し、出願人は、本特許に言及される微生物のサンプルに関して「専門家の解決（ｅｘｐｅｒｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」を、そのような解決が適用されうる全ての領域において要求する。
特に、以下に関してそれは要求される：
規則１３ｂｉｓ．６（ＰＣＴ）に関し、出願人は、本特許に言及される微生物のサンプルに関して「専門家の解決（ｅｘｐｅｒｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」を、そのような解決が適用されうる全ての領域において要求する。
特に、以下に関してそれは要求される：
ヨーロッパ
ヨーロッパ特許が求められる指定国に関して、ヨーロッパ特許の付与を言及する公表まで、又は出願が拒絶され又は取り下げられ又は取り下げられたとみなされる日まで、当該サンプルを要求する者により指名され、かつ、ｉ）出願人及び／又はii）ヨーロッパ特許庁のいずれかにより許可された専門家に当該サンプルを交付することによってのみ（規則２８１４）及び２８（５）ＥＰＣ、寄託された微生物のサンプルは入手可能となる。
ヨーロッパ特許が求められる指定国に関して、ヨーロッパ特許の付与を言及する公表まで、又は出願が拒絶され又は取り下げられ又は取り下げられたとみなされる日まで、当該サンプルを要求する者により指名され、かつ、ｉ）出願人及び／又はii）ヨーロッパ特許庁のいずれかにより許可された専門家に当該サンプルを交付することによってのみ（規則２８１４）及び２８（５）ＥＰＣ、寄託された微生物のサンプルは入手可能となる。
カナダ
出願人は、本願に基づきカナダ特許が付与され又は本願が拒絶され、又は放棄されるか又はもはや回復されなくなり、又は取り下げられるまで、特許庁長官のみが、本願中に言及する寄託された生物学的材料のサンプルを、長官により指名された独立した専門家に、交付する権原を有し、それゆえ、出願人は、表面により、国際出願の公表のための技術的準備の完了前に、国際事務局に通知しなければならないということを要求する。
出願人は、本願に基づきカナダ特許が付与され又は本願が拒絶され、又は放棄されるか又はもはや回復されなくなり、又は取り下げられるまで、特許庁長官のみが、本願中に言及する寄託された生物学的材料のサンプルを、長官により指名された独立した専門家に、交付する権原を有し、それゆえ、出願人は、表面により、国際出願の公表のための技術的準備の完了前に、国際事務局に通知しなければならないということを要求する。
ノルウェー
出願人は、ここに、本願が（ノルウェー特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにノルウェー特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、ノルウェー特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりノルウェー特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、ノルウェー特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
出願人は、ここに、本願が（ノルウェー特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにノルウェー特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、ノルウェー特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりノルウェー特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、ノルウェー特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
オーストラリア
出願人は、ここに、特許付与前、又は出願の期間徒過、拒絶又は取り下げ前に、本発明に利害関係のない専門家だけに、微生物のサンプルの提供がなされるということを通知する（オーストラリア特許規則、規則３．２５（３））。
出願人は、ここに、特許付与前、又は出願の期間徒過、拒絶又は取り下げ前に、本発明に利害関係のない専門家だけに、微生物のサンプルの提供がなされるということを通知する（オーストラリア特許規則、規則３．２５（３））。
フィンランド
出願人は、ここに、出願が（特許及び規則の国家委員会により）公衆の閲覧のために公開されるまで、又は公衆の閲覧のために公開されずに特許及び規則の国家委員会により最終決定されるまで、サンプルの提供が本分野の専門家にのみ行われることを、要求する。
出願人は、ここに、出願が（特許及び規則の国家委員会により）公衆の閲覧のために公開されるまで、又は公衆の閲覧のために公開されずに特許及び規則の国家委員会により最終決定されるまで、サンプルの提供が本分野の専門家にのみ行われることを、要求する。
英国
出願人は、ここに、微生物のサンプルの提供が専門家のみになされることを要求する。この要求は、この趣旨で、本願の国際公開のための技術的な準備が完了する前に国際事務局に、出願人により提出されなければならない。
出願人は、ここに、微生物のサンプルの提供が専門家のみになされることを要求する。この要求は、この趣旨で、本願の国際公開のための技術的な準備が完了する前に国際事務局に、出願人により提出されなければならない。
デンマーク
出願人は、ここに、本願が（デンマーク特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにデンマーク特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、デンマーク特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりデンマーク特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、デンマーク特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
出願人は、ここに、本願が（デンマーク特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにデンマーク特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、デンマーク特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりデンマーク特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、デンマーク特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
スウェーデン
出願人は、ここに、本願が（スウェーデン特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにスウェーデン特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が本分野の専門家のみになされることを、要求する。かかる要求は、この趣旨で、（好ましくは、ＰＣＴ出願人ガイドのボリュームＩのアネックスＺにおいて再現されたフォームＰＣＴ／ＲＯ／１３４上で）優先日から１６ヵ月が経過する前に出願人により国際事務局に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供を求めて第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を示さなければならない。かかる専門家は、スウェーデン特許庁により示された認められた専門家のリスト上に記載された者又は個々に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
出願人は、ここに、本願が（スウェーデン特許庁により）公衆の閲覧のために公開され、又は公衆に閲覧されずにスウェーデン特許庁により最終決定されるまで、サンプルの提供が本分野の専門家のみになされることを、要求する。かかる要求は、この趣旨で、（好ましくは、ＰＣＴ出願人ガイドのボリュームＩのアネックスＺにおいて再現されたフォームＰＣＴ／ＲＯ／１３４上で）優先日から１６ヵ月が経過する前に出願人により国際事務局に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供を求めて第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を示さなければならない。かかる専門家は、スウェーデン特許庁により示された認められた専門家のリスト上に記載された者又は個々に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
オランダ
出願人は、ここに、オランダ特許の付与の日まで、又は出願が拒絶され又は取り下げられ又は期間徒過した日までに、微生物が、専門家にサンプルを交付することによってのみ、特許規則の３ＩＦ（１）に従って入手可能となることを要求する。かかる要求は、この趣旨で、オランダ王国特許法のセクション２２Ｃ又はセクション２５の下で公衆に利用可能になった日のいずれか早い日の前に、出願人により、オランダ産業権庁に提出されなければならない。
出願人は、ここに、オランダ特許の付与の日まで、又は出願が拒絶され又は取り下げられ又は期間徒過した日までに、微生物が、専門家にサンプルを交付することによってのみ、特許規則の３ＩＦ（１）に従って入手可能となることを要求する。かかる要求は、この趣旨で、オランダ王国特許法のセクション２２Ｃ又はセクション２５の下で公衆に利用可能になった日のいずれか早い日の前に、出願人により、オランダ産業権庁に提出されなければならない。
アイスランド
出願人は、ここに、特許が付与され又はアイスランド特許庁により出願に関する最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、アイスランド特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりアイスランド特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、アイスランド特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
出願人は、ここに、特許が付与され又はアイスランド特許庁により出願に関する最終決定されるまで、サンプルの提供が、本分野の専門家にのみ行われることを要求する。この趣旨で、かかる要求は、アイスランド特許法のセクション２２及び３３（３）の下、本願が公開が公衆に利用可能になる時よりも前に、出願人によりアイスランド特許庁に提出されなければならない。かかる要求が出願人により提出された場合、サンプルの提供のために第三者によりなされた要求は、使用されるべき専門家を明示しなければならない。かかる専門家は、アイスランド特許庁により示された認められた専門家のリストに記載された者又は個別に出願人により許可された者のいずれかであることができる。
シンガポール
出願人は、ここに、微生物のサンプルの提供が専門家のみに利用可能となることを要求する。
出願人は、ここに、微生物のサンプルの提供が専門家のみに利用可能となることを要求する。
スロベニア
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が以下の条件に従うことを要求する：第三者は、（ａ）微生物のサンプルが入手可能であることを要求する権利を存する；（ｂ）出願人は、特許が有効である所定期間の満了前に寄託された微生物のサンプルへのアクセスを第三者に許可しないということを保証することを企てた。
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が以下の条件に従うことを要求する：第三者は、（ａ）微生物のサンプルが入手可能であることを要求する権利を存する；（ｂ）出願人は、特許が有効である所定期間の満了前に寄託された微生物のサンプルへのアクセスを第三者に許可しないということを保証することを企てた。
スイス
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が、以下の条件に従うことを要求する：第三者は、寄託者の情報を目的としてその名称及び住所を寄託機関に示し、そして（ａ）寄託培養物又はそれから得られる培養物を新たな第三者に利用可能とはせず；（ｂ）法目的以外に培養物を使用せず；（ｃ）争いがある場合に、上記条件（ａ）と（ｂ）の下での義務を違反しない証拠を作成する。
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が、以下の条件に従うことを要求する：第三者は、寄託者の情報を目的としてその名称及び住所を寄託機関に示し、そして（ａ）寄託培養物又はそれから得られる培養物を新たな第三者に利用可能とはせず；（ｂ）法目的以外に培養物を使用せず；（ｃ）争いがある場合に、上記条件（ａ）と（ｂ）の下での義務を違反しない証拠を作成する。
マケドニアの旧ユーゴスラビア共和国
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が以下の条件に従うことを要求する：第三者は、（ａ）微生物のサンプルが入手可能であることを要求する権利を存する；（ｂ）出願人は、特許が有効である所定期間の満了前に寄託された微生物のサンプルへのアクセスを第三者に許可しないということを保証することを企てた。
出願人は、ここに、第三者へのサンプルの提供が以下の条件に従うことを要求する：第三者は、（ａ）微生物のサンプルが入手可能であることを要求する権利を存する；（ｂ）出願人は、特許が有効である所定期間の満了前に寄託された微生物のサンプルへのアクセスを第三者に許可しないということを保証することを企てた。
Claims (5)
- 寄託番号ＤＳＭ１７８７６をもつ乳酸菌ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＳＴ））、又は出発材料として当該寄託された株を用いて得られ、かつＤＳＭ１７８７６の舌ざわり（ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ）特性を保持しているか又はさらに改良されているＤＳＭ１７８７６の突然変異株。
- 当該組成物１ｇ当り１０4〜１０12ｃｆｕの範囲内の生きた細胞の濃度をもつ、請求項１に記載の乳酸菌を含む初期培養組成物。
- 請求項２に記載の初期培養組成物を、食品又は飼料出発材料に添加し、そして前記乳酸菌が代謝的に活性である条件下でかかる接種された出発材料を保持することを含む、食品又は飼料の製造方法。
- 前記発酵した食品が発酵乳製品である、請求項３に記載の方法。
- 前記発酵乳製品が、発酵乳、ヨーグルト、チーズであってフレッシュチーズ製品又はモッツァレラを含むもの、及びバターミルクから成る群から選ばれる発酵乳製品である、請求項４に記載の方法。
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