JP5395063B2 - イソプロパノール生産能を有するコリネ型細菌の形質転換体 - Google Patents
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Description
しかし、これらの製品は何れも、化石原油資源由来のものである。
地球温暖化問題、化石資源枯渇問題、さらには、近年の原油価格の高騰問題等、地球環境的にも、また、重要な化学製品原料資源の海外依存度の低下の観点からも、ほぼ全量を輸入している原油資源とは異なる再生可能資源からのエネルギー及び化学製品の製造法の開発が強く望まれている。バイオマス等再生可能資源からイソプロパノールへの高効率製造技術は、これらの諸問題を解決することが出来る方策の一つとなる。
(1)Clostridium属細菌によるイソプロパノール・ブタノール発酵は、ブタノールが主要発酵代謝産物であり、イソプロパノールの生産性が低い(イソプロパノール/ブタノール生成比はおよそ1/5〜1/10である)。
(2)Clostridium属細菌は、増殖、及びイソプロパノールの生産において絶対嫌気性条件を必要とする。従って、嫌気条件下での培養、すなわち、培養装置内を窒素ガスなどの不活性ガスで置換するなどの煩雑な培養操作が必要であり、かつ増殖速度が極端に遅いために、それに伴うイソプロパノール生産速度が低い。これらの問題点を解決するには、高増殖速度の好気性微生物の利用が考えられるが、イソプロパノールを高効率に生産する能力を有し、好気条件下で増殖可能な微生物(好気性細菌又は通気嫌気性細菌)は未だ知られていない。
(3)イソプロパノール・ブタノール発酵では、細胞増殖期において酢酸及び酪酸が生成され、細胞増殖が停止した定常期に発酵培養液のpHの酸性化が溶媒(イソプロパノール、ブタノール)生成期への移行の引き金となり代謝系が大幅に変化(代謝シフト)して、イソプロパノール及びブタノールが生成される。このように、発酵プロセスの厳密な制御が必要であり、発酵開始してからイソプロパノール及びタノールが生成されるまでに時間を要する。また、これらのクロストリジウム菌は、胞子形成期への移行によりイソプロパノール及びブタノール生成が停止し、長時間生成が持続しない等の課題がある。
これらの課題を解決する新規イソプロパノール生産微生物の創製及びプロセスの開発が望まれていた。
非特許文献1では、クロストリジウム ベージェリンキー(Clostridium beijerinckii)が、ブタノールに加えてイソプロパノールを、クロストリジウム オウランティブチィリカム(Clostridium aurantibutyricum)が、ブタノール及びアセトンに加えてイソプロパノールを生成することが開示されている。
特許文献1では、胞子形成に関わる遺伝子を制御することにより、胞子形成期を遅らせ、結果としてブタノール生産を向上させる技術、特許文献2及び非特許文献6では、連続発酵法において、gas-stripping法により、連続的にブタノールを抽出する技術、非特許文献7及び非特許文献8では、Clostridium属細菌を固定化してブタノールを生産する技術、非特許文献9では、Clostridium属細菌を連続発酵法において高濃度菌体を用い、菌体をリサイクルする技術が、それぞれ開示されている。これらの技術は、Clostridium属細菌を用いたイソプロパノール・ブタノール発酵にも適応可能と考えられるが、いずれもClostridium属細菌を用いる嫌気条件下での生産技術である点では何ら変わりなく、上記の課題については何ら根本的な解決となっていない。
本発明者らは、すでに、宿主としてエシェリヒア コリ(Escherichia coli)を用いるイソプロパノールの生産技術を提案している(特許文献3及び非特許文献10)。非特許文献11は、クロストリジウム アセトブチリカム(Clostridium acetobutylicum)、エシェリヒア コリ(Escherichia coli)、クロストリジウム ベージェリンキー(Clostridium beijerinckii)、及びサーモアナエロバクター ブロッキー(Thermoanaerobacter brockii)から選ばれる微生物に由来するアセチル-CoA アセチルトランスフェラーゼ、アセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ、アセトアセテート デカルボキシラーゼ、及びイソプロパノール デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を、宿主としてエシェリヒア コリ(Escherichia coli)内で発現させ、イソプロパノールを生産する技術を開示している。
しかしながら、上記技術においては、微生物を用いてより効率よくイソプロパノールを生産できるようにする改善の余地があった。
エシェリヒア コリ(Escherichia coli)は3.5%のイソプロパノール存在下では増殖できないのに対して、コリネ型細菌は5%のイソプロパノール存在下においても増殖が可能であり、コリネ型細菌はエシェリヒア コリ(Escherichia coli)と比較して、よりイソプロパノールに対する耐性が高い(後記する実施例を参照)。これは、高濃度のイソプロパノール生産を行う際の宿主としてエシェリヒア コリ(Escherichia coli)よりもコリネ型細菌が優れていることを示している。つまり、高濃度でイソプロパノールの生産が出来ることは、発酵液からイソプロパノールを回収精製する所要エネルギーが少なくて済み、工業的製造方法として優位性が高いことを意味している。
今回本発明者らは、本発明による遺伝子組み換え型コリネ型細菌が、増殖抑制条件下で効率良くイソプロパノールを生産することを見出した(後記する実施例を参照)。
このことは、物質生産に使用される炭素質の流れが目的生産物に専ら向けられ、増殖には使用されないことを意味する。そして、増殖分裂に伴う分泌物の実質的な抑制が実現されていることも意味する。このことも本発明の組み換え型コリネ型細菌によるイソプロパノールの生産技術が、高効率、低エネルギー消費型回収精製方法になることに結びついている。
(1) 以下の(a)〜(d)の遺伝子をコリネ型細菌に導入したことを特徴とする、イソプロパノール生産能を有する形質転換体。
(a)アセチル-CoA アセチルトランスフェラーゼ(Acetyl-CoA acetyltransferase)活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(b)アセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ(Acetoacetyl CoA:acetate CoA transferase)活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(c)アセトアセテート デカルボキシラーゼ(Acetoacetate decarboxylase)活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(d)イソプロパノール デヒドロゲナーゼ(Isopropanol dehydrogenase)活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(b)アセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号14の塩基配列からなるDNA、又は配列番号14の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用い;
(c)アセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号15の塩基配列からなるDNA、又は配列番号15の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用い;
(d)イソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号16の塩基配列からなるDNA、又は配列番号16の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつイソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用いる上記(1)に記載の形質転換体。
(6) コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ISO1(受託番号 NITE BP−561)、又は、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ISO2(受託番号 NITE BP−562)形質転換体。
(7) 上記(1)〜(6)のいずれかに記載の形質転換体を、糖類を含有する培地中で培養する工程と、培養物からイソプロパノールを回収する工程とを含むイソプロパノールの製造方法。
本発明により、再生可能資源を原料とした効率的なイソプロパノール生産が可能となり、石油資源原料に依存しないイソプロパノール工業生産プロセスの新規な構築が可能となる。
(I)イソプロパノール生産能を有する形質転換体
本発明のイソプロパノール生産能を有する形質転換体は、以下の(a)〜(d)の遺伝子をコリネ型細菌に導入した形質転換体である。
(a)アセチル-CoA アセチルトランスフェラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(b)アセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(c)アセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
(d)イソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子
本発明において形質転換の対象となる宿主は、イソプロパノール生産関連遺伝子群を含む組換えベクターにより形質転換され、これらの遺伝子がコードするイソプロパノール生産関連酵素が発現し、結果としてイソプロパノールを生産することができるコリネ型細菌であれば特に限定されない。
マイコバクテリウム属菌としては、マイコバクテリウム ボビス(Mycobacterium bovis)ATCC19210又はATCC27289等が挙げられる。
本発明における宿主となるコリネ型細菌としては、コリネバクテリウム属菌が好ましく、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)R(FERM P-18976)が特に好ましい。
上記(a)〜(d)のイソプロパノール生産関連遺伝子としては、これらの遺伝子を含むDNA断片の塩基配列が既知であれば、その配列に従って合成したDNA断片を使用することが出来る。DNA配列が不明の場合であっても、イソプロパノール生産関連酵素タンパク質間で保存されているアミノ酸配列をもとにハイブリダイゼーション法、PCR法により断片を取得することが可能である。さらに他の既知のイソプロパノール生産関連遺伝子配列を基に設計したミックスプライマーを用い、ディジェネレートPCRによって断片を取得することが可能である。
本発明では該代謝系を用いる。また、イソプロパノール生成機能を有する限り、上記(a)〜(d)の遺伝子の由来微生物の種類、組み合わせ、及び順番等は限定されない。
クロストリディウム属細菌には、イソプロパノールは生産しないが、ブタノール・アセトン発酵を行うクロストリジウム アセトブチィリカム(Clostridium acetobutylicum)、クロストリジウム サッカロペルブチルアセトニカム(Clostridium saccharoperbutylacetonicum)、クロストリジウム サッカロアセトブチィリカム(Clostridium saccharoacetobutylicum)、クロストリジウム パスツーリアウム(Clostridium pasteurianum)、クロストリジウム スポロゲンズ(Clostridium sporogenes)、クロストリジウム カダベリス(Clostridium cadaveris)、クロストリジウム テタノモルフュウム(Clostridium tetanomorphum)などが報告されている〔Geprge, H.A. et al., Acetone, Isopropanol, and Butanol Production by Clostridium beijerinckii (syn. Clostridium butylicum) and Clostridium aurantibutyricum. Appl. Environ. Microbiol. 45:1160-1163 (1983)〕。これらのブタノール・アセトン発酵を行うクロストリジウム属細菌は、アセトンを生成するため、アセチル-CoAからアセトンまでの3ステップの酵素(THL、CTF及びADC)をコードする遺伝子を有することが報告されている 〔Nolling, J. et al., Genome sequence and comparative analysis of the solvent-producing bacterium Clostridium acetobutylicum. J. Bacteriol. 183:4823-4838〕。従って、ブタノール・イソプロパノール発酵行うクロストリジウム ベージェリンキー(Clostridium beijerinckii)、クロストリジウム オウランティブチィリカム(Clostridium aurantibutyricum)等由来のTHLをコードする遺伝子、CTFをコードする遺伝子及びADCをコードする遺伝子の代わりに、又はこれらのうちの1種又は2種以上と共に、それぞれ、上述のブタノール・アセトン発酵を行うクロストリジウム細菌由来のTHLをコードする遺伝子、CTFをコードする遺伝子及びADCをコードする遺伝子を用いてもよい。
(b)アセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号14の塩基配列からなるDNA、又は配列番号14の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用い;
(c)アセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号15の塩基配列からなるDNA、又は配列番号15の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用い;
(d)イソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有する酵素をコードする外来性遺伝子として、配列番号16の塩基配列からなるDNA、又は配列番号16の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつイソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを用いるのが好ましい。
本発明において、塩基配列間の相同性は、計算ソフトGENETYX(登録商標)Ver.8(ジェネティックス社製)を用いて計算した値である。
次いで、PCR法で得られた遺伝子を含むクローニングベクターを、微生物、例えばエシェリヒア コリ(Escherichia coli)JM109菌株などに導入し、該菌株を形質転換する。この形質転換された菌株を適当な抗生物質(例えばアンピシリン、クロラムフェニコールなど)を含む培地で培養し、培養物から菌体を回収する。回収された菌体からプラスミドDNAを抽出する。プラスミドDNAの抽出は、公知の技術によって行なうことができ、また市販のプラスミド抽出キットを用いて簡便に抽出することもできる。市販のプラスミド抽出キットとしては、キアクイックプラスミド精製キット(商品名:Qiaquick plasmid purification kit、キアゲン社製)などが挙げられる。この抽出されたプラスミドDNAの塩基配列を決定することにより、THLをコードする遺伝子、CTFをコードする遺伝子、ADCをコードする遺伝子、及びADHをコードする遺伝子の各配列を確認することができる。DNAの塩基配列の決定は、公知の方法、例えばジオキシヌクレオチド酵素法などにより決定することができる。また、キャピラリー電気泳動システムを用いて、検出には多蛍光技術を使用して塩基配列を決定することもできる。また、DNAシーケンサー、例えばABI PRISM 3730xl DNA Analyzer(アプライドバイオシステム社製)などを使用して決定することもできる。
広範囲の種類のプロモーターが本発明に使用するのに適している。そのようなプロモーターは、酵母、細菌及び他の細胞供給源を含む多くの公知の供給源から得られ、コリネ型細菌において目的遺伝子の転写を開始させる機能を有する塩基配列であればいかなるものであってもよい。そのようなプロモーターの適当な例は、例えば、コリネ型細菌においてはlac、trc、tacプロモーター等を用いることができる。本発明に使用されるプロモーターは、必要に応じて、修飾して、その調節機構を変更することができる。また、目的遺伝子の下流に配置される制御配列下のターミネーターについても、コリネ型細菌においてその遺伝子の転写を終了させる機能を有する塩基配列であれば、いかなるものであってもよい。
目的遺伝子を含むプラスミドベクターのエシェリヒア コリ(Escherichia coli)及びコリネ型細菌への導入方法としては、例えば電気穿孔法、塩化カルシウム/塩化ルビジウム法、リン酸カルシウム法、DEAE−デキストラン介在トランスフェクション、などの公知の方法で行うことができる。具体的には、例えば大腸菌の場合、塩化カルシウム法や電気穿孔法〔例えば、Sambrook, J. & Russel, D. W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual(3rd Edition)CSHL Press(2001)、又はAusubel, F. et al. Current protocols in molecular biology. Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)等〕などやエシェリヒア・コリ JM109のコンピテントセル(宝酒造株式会社製)を用いる方法を同社プロトコールに従い行うことができ、コリネ型細菌の場合、電気パルス法を、公知の方法〔Kurusu, Y. et al., Electroporation-transformation system for Coryneform bacteria by auxotrophic complementation. Agric. Biol. Chem. 54:443-447 (1990)〕及び〔Vertes A.A. et al., Presence of mrr- and mcr-like restriction systems in Coryneform bacteria. Res. Microbiol. 144:181-185 (1993)〕により行うことができる。
培地のpHは約5〜8が好ましい。
培養温度は、通常約15〜45℃、好ましくは約25〜35℃とすればよく、培養時間は、約1〜7日間とすればよい。
上記の如くして得られる培養物から回収分離された形質転換体の培養菌体又はその菌体処理物は、通常、好気条件下又は嫌気条件下の反応培地でのイソプロパノール生成反応に供せられる。上記の形質転換体を糖類を含有する培地(反応培地)中で培養する工程と、培養物からイソプロパノールを回収する工程とを含むイソプロパノールの製造方法も、本発明の1つである。
反応培地(反応液)には、イソプロパノールの原料となる有機炭素源(例えば、糖類等)が含まれていればよい。有機炭素源としては、本発明の形質転換体が生化学反応に利用できる物質であればよい。
培地のpHは、通常約6〜8が好ましい。
本発明はまた、前記の条件下における反応により糖類等よりイソプロパノールを生産するのに著しい改善を有する組換えイソプロパノール生産形質転換体を提供する。
(1)イソプロパノール生産遺伝子群のクローニング
イソプロパノール生合成経路(アセチル-CoAからイソプロパノール)は、アセチル-CoA アセチルトランスフェラーゼ(Acetyl-CoA acetyltransferase)、アセトアセチル-CoA:アセテートCoA-トランスフェラーゼ(Acetoacetyl CoA:acetate CoA transferase)、アセトアセテート デカルボキシラーゼ(Acetoacetate decarboxylase)、及びイソプロパノール デヒドロゲナーゼ(Isopropanol dehydrogenase)の4ステップ(4つの酵素)により構成される。これらの4種の酵素をコードする遺伝子を以下のPCR法により増幅した。
上記(1)項で取得したtac promoterを連結していないthl遺伝子を含む約1.2 kb EcoRI-BamHI DNA断片、tac promoterを連結したPtac-atoAD遺伝子を含む約1.5 kb BamHI-SphI DNA断片及びPtac-adc遺伝子を含む約0.9 kb SphI-SmaI DNA断片を、それぞれ100 ngと、予めEcoRI及びSmaIにより消化したpCRC200〔Applied Microbiology and Biotechnology. 77:853-860 (2007)〕10ngとをすべて混合し、DNA ligation kitによりライゲーション反応を行った。なお、pCRC200は、クローニングサイトの上流にtac promoterを含んでいるため、結果としてthl遺伝子にもtac promoterが連結されることになる。このライゲーション液を用いて塩化カルシウムの方法によりエシェリヒア コリ(Escherichia coli)JM109を形質転換し、目的の遺伝子断片を含むプラスミドDNAを保持した大腸菌株をクロラムフェニコール耐性により選抜することで、プラスミドpCRC203を得た(図1、配列番号17)。
鋳型DNAには、コリネバクテリウム グルタミカム Rの染色体DNAを用いた。染色体DNAの抽出は、Isoplant II (ニッポンジーン社製)を用い、付属のプロトコールに従って行った。PCRは、LA Taq HS DNA polymerase (TAKARA社製)を使用し、PCR反応3(94 ℃ 30秒、55 ℃ 30秒、72 ℃ 3分、30サイクル)の条件で行なった。PCR反応液の組成を以下に示す。
上記で生成した反応液を用いて0.8%アガロースゲルにより電気泳動を行ない、SSI11領域を含む、約2.0 kbのDNA断片が検出できた。
上記実施例1(2)で創製したコリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO1及びコリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO2を、それぞれ、クロラムフェニコール 5μg/mL及びカナマイシン 50μg/mLを含むA寒天培地に塗布し、30℃、20時間暗所に静置した。
上記実施例1(2)で創製したコリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO1及びコリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO2を、それぞれ、クロラムフェニコール 5μg/mL及びカナマイシン 50μg/mLを含むA寒天培地に塗布し、30℃、20時間暗所に静置した。
イソプロパノール生産株であるエシェリヒア コリ (Escherichia coli) JM109/pCRC202(特願2007-222633; 受託番号FERM P-21340)及び実施例1で作製したコリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum) ISO2を用い、エシェリヒア コリ (Escherichia coli) JM109/pCRC202をクロラムフェニコール50μg/mLを含む3 mLのLB(Luria−Bertani)培地(1% トリプトン、0.5% 酵母エキス、0.5% 塩化ナトリウム)に、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum) ISO2をクロラムフェニコール 5μg/mL及びカナマイシン 50μg/mLを含むA液体培地 [(NH2)2CO 2g、(NH4)2SO4 7g、KH2PO4 0.5 g、K2HPO4 0.5 g、MgSO4.7H2O 0.5 g、0.06% (w/v) Fe2 SO4.7H2O + 0.042% (w/v) MnSO4.2H2O 1 mL、0.02% (w/v) biotin solution 1 mL、0.01% (w/v) thiamin solution 2 mL、yeast extract 2 g、vitamin assay casamino acid 7 g、glucose 40 g、1Lの蒸留水に溶解] に植菌し、エシェリヒア コリ (Escherichia coli) JM109/pCRC202は37℃にて、コリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO2は33℃にて、16時間、振とう培養した。
エシェリヒア コリ (Escherichia coli) JM109/pCRC202の増殖曲線(図3(a))において、黒丸(●)はイソプロパノール0%、四角(■)はイソプロパノール1%、菱型(◆)はイソプロパノール2%、バツ(×)はイソプロパノール3.5%(いずれも、クロラムフェニコール50μg/mL含有LB培地中)における増殖曲線である。コリネバクテリウム グルタミカム (Corynebacterium glutamicum) ISO2の増殖曲線(図3(b))において、黒丸(●)はイソプロパノール0%、四角(■)はイソプロパノール1%、菱型(◆)はイソプロパノール2%、三角(▲)はイソプロパノール5%(いずれも、クロラムフェニコール 5μg/mL及びカナマイシン 50μg/mL含有A液体培地中)における増殖曲線である。
本発明により、再生可能資源を原料とした効率的なイソプロパノール生産が可能となり、石油資源原料に依存しないイソプロパノール工業生産プロセスの新規な構築が可能となる。
Claims (5)
- 以下の(a)〜(d)の遺伝子をコリネ型細菌に導入したことを特徴とする、イソプロパノール生産能を有する形質転換体。
(a)配列番号13の塩基配列からなるDNA、又は配列番号13の塩基配列からなるDNAと95%以上の配列相同性を有し、かつアセチル-CoA アセチルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA
(b)配列番号14の塩基配列からなるDNA、又は配列番号14の塩基配列からなるDNAと95%以上の配列相同性を有し、かつアセトアセチル-CoA:アセテート CoA-トランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA
(c)配列番号15の塩基配列からなるDNA、又は配列番号15の塩基配列からなるDNAと95%以上の配列相同性を有し、かつアセトアセテート デカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA
(d)配列番号16の塩基配列からなるDNA、又は配列番号16の塩基配列からなるDNAと95%以上の配列相同性を有し、かつイソプロパノール デヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA - コリネ型細菌が、コリネバクテリウム属菌、ブレビバクテリウム属菌及びアースロバクター属菌からなる群より選択されるものであることを特徴とする請求項1に記載の形質転換体。
- コリネ型細菌が、コリネバクテリウム属菌であることを特徴とする請求項1又は2に記載の形質転換体。
- コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ISO1(受託番号 NITE BP−561)、又は、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ISO2(受託番号 NITE BP−562)形質転換体。
- 請求項1〜4のいずれかに記載の形質転換体を、糖類を含有する培地中で培養する工程と、培養物からイソプロパノールを回収する工程とを含むイソプロパノールの製造方法。
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